一、大豆甙元对小鼠B16黑色素瘤细胞的分化诱导作用（论文文献综述）
闫桂溪[1]（2020）在《赤小豆当归散对皮肤癌的防治作用研究》文中进行了进一步梳理日益严重的环境污染与人口老龄化问题使得我国皮肤癌发病率逐年上升,通常认为皮肤癌的发生与日积月累的接触有毒物质或紫外线照射有关。现代医学对皮肤癌治疗以手术切除、放化疗干预为主,但复发率较高,且治疗副作用多、费用较高。皮肤癌在中医中属于“反花疮”、“恶疮”等,也是症瘕积聚的一种,中医药按疮疡论治。气血凝滞、郁而化火、火毒伤肌是疮疡发病的共同点,赤小豆当归散载于《金匮要略》,具清热利湿,解毒排脓,去瘀生新的功效,与中医疮疡治疗病机相符,本文的目的是观察赤小豆当归散对皮肤癌的防治作用。本研究分体内、体外及机制研究三部分。体外研究中,使用不同浓度的赤小豆当归散醇提物处理A431、B16-f10细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响;激光全息检测赤小豆当归散醇提物对细胞形态、体积的影响;划痕实验检测赤小豆当归散醇提物对细胞迁移能力的影响。体内研究中,首先采用二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型,建模同时小鼠灌胃给药赤小豆当归散,记录实验小鼠背部肿瘤发生率及肿瘤结节数变化;HE染色观察小鼠背部皮肤组织与肝组织病理变化;免疫组化检测小鼠背部皮肤组织EMT相关蛋白表达。继而采用黑色素瘤同种异体移植模型,肿瘤接种同时小鼠灌胃给药当归赤小豆散,记录荷瘤小鼠瘤体积变化;免疫组化检测荷瘤鼠肿瘤组织EMT相关蛋白表达。机制研究中,首先运用网络药理学预测赤小豆当归散防治皮肤癌作用的分子机制,将机制锁定在细胞呼吸、凋亡、免疫清除和细胞增殖上。体外,AO染色检测赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞自噬的影响;ROS试剂盒、线粒体膜电位试剂盒检测赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞ROS、线粒体功能的影响;免疫荧光检测赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞Ras、Bcl-2表达的影响。体内,二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型中,ROS试剂盒、线粒体膜电位试剂盒检测背部皮肤组织的ROS、线粒体功能;免疫组化检测背部皮肤组织CD8、PD-1、TGF-β1、VEGF表达;免疫荧光检测皮肤组织CD4、Caspas3、P16、Ras、Bcl-2表达;Western blot检测皮肤组织Jak-2、Akt、Stata3、AMPKα1表达。在黑色素瘤同种异体移植模型中,ROS试剂盒、线粒体膜电位试剂盒检测瘤组织ROS、线粒体功能;免疫组化检测瘤组织TGF-β1、PD-1、CD8、VEGF表达;免疫荧光检测瘤组织CD4、Caspas3、P16、Ras、Bcl-2表达;Western blot检测瘤组织Jak-2、Akt、Ctata3、AMPKα1表达。体外结果显示,赤小豆当归散醇提物在一定浓度下能改变A431细胞、B16-f10细胞形态,赤小豆当归散能降低细胞增殖能力和迁移能力。体内结果显示,在二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型中,赤小豆当归散能降低小鼠背部皮肤肿瘤发生率及明显减少肿瘤结节数,改善造模过程中致癌剂产生的皮肤损伤和肝脏损伤;免疫组化结果显示赤小豆当归散可阻止小鼠背部皮肤肿瘤的EMT进程。在黑色素瘤同种异体移植模型中,赤小豆当归散也能减缓黑色素瘤生长速度,减慢瘤组织EMT进程。机制研究中,网络药理学分析指示赤小豆当归散能通过调节细胞呼吸、凋亡、免疫清除和细胞增殖等生物过程,以及调节AMPK通路、PI3K-Akt等信号通路防治皮肤癌。体外,赤小豆当归散能改善A431、B16-f10细胞线粒体功能,降低细胞ROS水平,促进细胞自噬,降低Ras和Bcl-2表达。在二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型中,赤小豆当归散能降低背部皮肤组织ROS水平,改善线粒体功能,降低皮肤组织中TGF-β1、Collagen-1、VEGF、PD-1、Ras、Bcl-2、Jak-2、Akt、Stata3、AMPKα1表达,增加CD8、CD4、Caspas3、P16表达,维持皮肤组织稳态。黑色素瘤同种异体移植模型中,赤小豆当归散能降低肿瘤组织ROS水平,改善线粒体功能,降低TGF-β、PD-1、VEGF、Ras、Bcl-2、Jak-2、Akt、Stata3、AMPKα1表达,增加CD8、CD4、Caspas3、P16表达,降低癌细胞恶性。综上所述,赤小豆当归散能通过改变癌细胞形态、促进细胞自噬、抑制细胞增殖与迁移等降低细胞恶性祛除毒源,同时通过调节细胞线粒体功能、调节细胞信号传导和机体免疫等增加机体排异能力,维持皮肤细胞稳态,从而防治皮肤癌。
苟娜[2]（2020）在《基于WNT通路筛选具有胃黏膜修复和黑色素瘤抑制活性的植物多酚》文中进行了进一步梳理异常的WNT信号传导与胃溃疡和黑色素瘤等多种疾病密切相关,因此寻找WNT通路调节剂则成为治疗WNT信号相关疾病的重要手段。植物多酚具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗肿瘤和增强免疫力等多种生理活性,多酚类物质已经成为开发WNT信号调节小分子化合物的研究热点。本论文从26种植物中筛选出具有良好WNT信号抑制活性的枳实和桂枝两种原料。其中,枳实是国家食品药品监督管理总局批准使用的保健食品原料,桂枝则为日常饮食中常用的香料,枳实和桂枝中都含有丰富的多酚类物质,可作为保健食品原料进行研究。利用体积分数为75%乙醇从高良姜、茯苓、白扁豆、黄芪、吴茱萸、豆蔻、桂枝、郁金、白芷、枳实、白术、佛手、姜半夏、石斛、广藿香、甘草、人参、当归、麦冬、木香、柴胡、砂仁、陈皮、党参、白芍、干姜26种植物原料中提取出多酚粗提物,并通过Folin–Ciocalteu测定其多酚含量。HEK293-TOPflash双荧光素酶报告基因细胞模型可表征WNT信号处于激活或抑制状态。首先通过MTT法,测定不同植物多酚提取物对于HEK293-TOPflash细胞的最大无毒性作用浓度。HEK293-TOPflash细胞中添加WNT3A条件培养基进行刺激,导致WNT信号强度增加,其荧光素酶反应强度值为123.33±21.72;然而添加含有5.00μg/m L枳实和25.00μg/m L桂枝多酚提取物的WNT3A条件培养基刺激,其荧光素酶反应强度值分别降低至39.56±14.42（p<0.01）和2.41±1.03（p<0.001）,说明枳实和桂枝多酚提取物具有较好的体外WNT信号抑制活性。其余24种植物多酚提取物无明显的WNT信号抑制活性。采用无水乙醇灌胃构建急性胃溃疡大鼠模型,胃部直观图和HE染色结果都显示,与正常组相比无水乙醇造模组大鼠胃黏膜严重受损,表明WNT通路激活的胃黏膜损伤大鼠模型构建成功。通过比较胃部直观图发现,枳实、桂枝多酚提取物预处理对于受损伤胃黏膜的保护效果好,具体表现为出血点减少,与阳性对照药物处理效果无明显差异（p>0.05）,表明枳实、桂枝多酚提取物在无水乙醇诱导的大鼠胃溃疡模型中具有良好的保护作用。胃部HE染色图损伤抑制率的统计显示,提前灌胃阳性对照、枳实和桂枝多酚提取物能够分别提高的大鼠损伤抑制率为35.29±22.01%（p<0.05）、23.53±35.29%（p<0.05）和15.77±26.64%（p<0.05）。结果表明枳实多酚提取物和桂枝多酚提取物预处理能保护无水乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤,但是枳实多酚提取物的保护效果优于桂枝多酚提取物。采用腹股沟皮下注射B16细胞构建C57BL/6黑色素瘤小鼠模型,一周后于注射部位长出原位黑色素瘤,未接受B16细胞注射的正常对照组小鼠则无肿瘤出现,表明WNT通路激活的黑色素瘤小鼠模型构建成功。通过比较不同组别小鼠肿瘤尺寸,发现模型组小鼠肿瘤尺寸平均值为1614.89±170.08mm3,注射达卡巴嗪组小鼠肿瘤尺寸平均值为977.92±18.61mm3（p<0.05）,枳实多酚Ⅱ组小鼠能够达到与每天注射达卡巴嗪相似的结果,其肿瘤平均尺寸为881.52±35.94mm3（p<0.05）,桂枝多酚Ⅱ组小鼠肿瘤平均尺寸为1147.41±66.60mm3,与模型组相比不显着（p>0.05）,肿瘤尺寸数据表明枳实多酚提取物对肿瘤抑制效果优于桂枝多酚提取物。肿瘤HE染色结果显示:枳实多酚提取物联合达卡巴嗪作为抗黑色素瘤辅助物,能够抑制黑色素瘤的生长,具体表现为肿瘤细胞出现核固缩,黑色素沉积等。结果表明枳实多酚提取物联合达卡巴嗪给药对肿瘤的抑制效果显着,与阳性药物抑制效果相比无显着性差异（p>0.05）,然而桂枝多酚提取物联合达卡巴嗪用药则对肿瘤的抑制效果不显着,说明在B16黑色素瘤小鼠模型中,枳实多酚提取物具有更好的体内生物活性。通过比较四种大孔树脂对枳实多酚的静态吸附与解吸效果,筛选出吸附与解吸效果均较好的弱极性树脂AB-8。本实验采用单因素优化实验考察不同料液比、乙醇浓度、时间和温度对枳实多酚提取率的影响。筛选出枳实多酚提取参数为:料液比1:10,乙醇体积分数75%,提取时间90min,提取温度为35℃。采用柱层析法纯化枳实多酚时,利用体积分数为40%和60%乙醇洗脱分别得到组分ZS-1和ZS-2。125.00μg/m L ZS-1能够使HCT116细胞增殖率从73.99±8.06%降低至44.21±11.15%（p<0.01）。通过UHPLC-Q-TOF/MS分析,从ZS-1中鉴定出68种化合物,其中命名为Unkown1-6的6种化合物是文献和数据库中未找到对比的未知化合物,值得进一步解析其具体结构。综上所述,从26种植物原料中筛选出的枳实、桂枝多酚提取物能在体外抑制WNT3A条件培养基激活的WNT信号;然后通过乙醇诱导的胃溃疡大鼠和B16黑色素瘤小鼠,两种WNT信号通路激活的动物模型对枳实和桂枝多酚提取物进行体内生物活性评价,发现枳实多酚提取物胃黏膜保护效果和抗肿瘤效果皆优于桂枝多酚提取物。通过单因素实验筛选出纯化多酚的最适条件参数和大孔树脂种类,探究纯化枳实和桂枝多酚的体外WNT信号抑制活性及对WNT依赖的HCT116肿瘤细胞的增殖抑制效果,结果表明纯化后的枳实多酚比桂枝多酚具有更好的肿瘤增殖抑制活性,随后利用UHPLC-Q-TOF/MS分析枳实纯化多酚组分ZS-1,解析出枳实多酚中具有体内外WNT信号通路抑制活性的具体化合物组成。上述结果揭示枳实多酚因其良好的体内外WNT信号抑制活性有望作为胃黏膜保护和辅助抑制黑色素瘤功能食品或特殊医用食品配料,在WNT信号通路相关疾病保护方面具有良好的应用前景。
徐小净[3]（2019）在《荸荠皮和浒苔的化学成分及其抗肿瘤、抗菌活性研究》文中研究指明具有优良药用价值的可食用植物是一类重要的生物资源,在我国的应用历史悠久。对其化学成分和营养成分的研究对充分开发利用这些宝贵资源具有重要的意义。本文选取莎草科荸荠属植物荸荠（HHeleocharis dulcis（Burm.f.）Trin）皮和绿藻门石莼科植物浒苔（Enteromorpha prolifera）作为研究对象,采用多种分离手段从荸荠果皮和浒苔两种植物中分离得到了 28个化合物,通过现代波谱学手段（红外光谱、质谱、核磁共振等）结合它们的理化性质,鉴定了全部28个化合物的结构。其中从荸荠皮中分离得到了 20个化合物:β-谷甾醇（B1）、16-三十一酮（B2）、白桦酯酸（B3）、β-胡萝卜苷（B4）、pheno1,2,4-bis（1,1-dimethylethyl）-,1,1’,1"-phosphite（B5）、（3ββ）-Lup-20（29）-ene-3,30-diol（B6）、肉桂酸（B7）、桦木醇（B8）、阿魏酸（B9）、n-tetratriacont-20,23-dienoic acid（B10）、对香豆酸（B11）、山奈酚（B12）、槲皮素（B13）、绿原酸（B14）、17-33 ketones（B15）、咖啡酸（B16）、芦丁（B17）、香豆素（B18）、对羟基苯甲酸（B19）、正丁基-β-D-呋喃果糖苷（B20）。从浒苔中分离得到了 8个化合物:β-谷甾醇（H1）、α-生育酚（H2）、对羟基苯甲酸乙酯（H3）、2’-脱氧尿嘧啶核苷（H4）、腺嘌呤（H5）、棕榈酸（H6）、balansenateⅡ（H7）、反式植醇（H8）。其中 B2、B5、B6、B8、B10、B15、B20、H3、H4、H6、H7、H8为首次从这两种植物中分离得到。MTT法肿瘤细胞增殖实验结果表明化合物B15对MGC-803、SKOV3、T24细胞均显示出良好的抑制能力,其IC50值分别达到20.02、25.65、10.20 μM,抑制能力均强于阳性对照5-Fu。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、Hoechst 33258荧光染色、AO/EB染色、线粒体跨膜电位ΔΨm检测、Western blot蛋白印记分析和ROS测定等一系列生化实验结果证明B15可以特异性诱导T24凋亡,提高细胞内ROS的水平,引起线粒体跨膜电位下降,并确定凋亡通路为线粒体途径。本文通过微量肉汤稀释法同时研究了部分化合物的抗菌能力,结果表明,受试化合物对大肠杆菌均有抑制作用,其MIC（μg/mL）值在32～128之间;B12、B16对金黄色葡萄球菌抑制作用较强,其MIC（μg/mL）值分别为16、32;B14、B16、B19、H2、H4、H8对枯草芽孢杆菌抑制作用较强,其MIC（μg/mL）值分别为32、32、32、32、16、32;对绿脓杆菌抑制作用较强的有B3、B9、B12、B16、H2、H3,其MIC（μg/mL）值分别为 32、32、32、16、16、32。论文还研究了荸荠皮的营养成分,研究发现荸荠皮含有丰富的粗纤维、多种矿物元素以及多种氨基酸。论文对荸荠皮和浒苔的化学成分研究,丰富了可食用植物在天然药物研究中的范畴,减少了资源浪费与生态环境污染,研究结果为进一步开发利用可食用植物的药用价值与保健作用提供了一定的理论指导。
王堡煊[4]（2019）在《灰星鲨鱼皮多肽的提取及生物活性的研究》文中研究表明鲨鱼皮中含有丰富的蛋白,本研究通过现代酶学生物技术,以灰星鲨（Mustelus griseus）鱼皮为原料,木瓜蛋白酶为水解酶,抗氧化能力为指标,采用渐变式优化法对加酶量、pH、温度与酶解时间进行单因素实验。在此基础上,利用响应曲面法优化制备抗氧化混合多肽的最佳工艺,并对其理化性质及功效进行探究。结果表明,在加酶量4%,pH 4.5,温度50.5℃,酶解3.3 h的条件下提取的鲨鱼皮混合多肽抗氧化能力最强。该混合多肽的紫外最大吸收峰在220 nm和280 nm处,具有良好的的保湿效果。在室温相对湿度为43%的情况下,测得96h的吸湿率为（44.6±0.35）%,保湿率为（70.10.68）%。对DPPH自由基和ABTS自由基的IC50分别为0.55 mg/ml和0.28 mg/ml。10 mg/ml的鲨鱼皮多肽能够清除自由基,保护DNA的氧化损伤。利用MALDI-TOF-MS技术测定了鲨鱼皮多肽的分子量。结果显示,多肽的分子量多分布于1500-1900 Da,易被吸收。利用体外蘑菇酪氨酸酶模型初步探究多肽对黑色素生成的抑制作用,并测得其半抑制浓度IC50为0.4 mg/ml。进一步研究了多肽对小鼠黑色素瘤细胞B16F10黑色素形成的影响。发现,多肽在0～1280 μg/ml范围内,对正常的肝LO2细胞和B16F10细胞的增殖均没有显着影响,无明显的细胞毒性。随着多肽浓度的增加,B16F10细胞内黑色素含量减少,酪氨酸酶（TYR）活性降低。进一步采用Western blot和RT-qCR检测黑色素形成相关蛋白及mRNA表达的水平。结果表明多肽可以有效下调MITF、TYR和TRP-1 mRNA的表达,对MC1R、α-MSH、MITF、TYR、TRP-1黑色素合成相关蛋白有抑制作用,且具有浓度依赖关系。研究了多肽与黑色素抑制相关通路的关系。细胞内cAMP含量和CREB的磷酸化水平,均呈现下降趋势。因此,推测多肽可能通过cAMP-CREB通路影响黑色素的生成。以斑马鱼为模型,发现500μg/ml的多肽能够有效抑制斑马鱼体内黑色素的生成。上述结果为鲨鱼皮多肽应用于化妆品美白添加剂提供了理论依据。
陈艳梅[5]（2019）在《酪氨酸酶新型抑制剂曲酸衍生物的合成及其抑制黑色素形成的作用机理》文中进行了进一步梳理酪氨酸酶（tyrosinase,简称TYR）,别名多酚氧化酶（Polyphenol oxidase,简称PPO）,是含二价铜离子的金属氧化还原酶,在各种植物、微生物、动物及人体内广泛分布,是黑色素合成的关键限速酶,果蔬的褐变、昆虫的伤口愈合与发育、人的衰老与健康都受其影响。TYR的异常表达和许多疾病相关,尤其是一些皮肤疾病,如高表达会增加恶性黑色素瘤的潜在可能性、会引起皮肤色素沉积而导致雀斑和黄褐斑等疾病的产生,而低表达会导致白化病、白癜风等一些疾病。因此TYR的表达水平和活性具有重要的生理学意义。本文以曲酸、肉桂醛和三氮唑为原料,合成并鉴定了三种新的化合物。以蘑菇酪氨酸酶（mTYR）为模型,研究测定了合成的三种曲酸衍生物（KADI、KAD2和KAD3）以及中间产物对单酚酶和二酚酶的抑制作用。结果显示三种化合物都表现出显着的抑制效果,其单酚酶IC50依次为21.58,20.51和19.20 μmol/L,二酚酶ICso依次为8.33,7.50和10.00 μmol/L。其次研究了三种化合物的抑制机理,三种化合物均为混合型可逆抑制,其抑制常数（KG）分别为4.95、6.30和7.50 μmol/L,抑制解离常数KIs分别为45.50、9.18和15.80 μμmol/L。在mTYR的基础上,研究了化合物对小鼠B16F10细胞黑色素合成的影响。结果表明,三种化合物均能有效抑制黑色素的形成,以及胞内粗酪氨酸酶的活力。为此进一步研究了KAD2抑制黑色素形成的作用机制。Western blot结果表明,KAD2能够通过激活Akt信号通路协同抑制CREB信号通路从而调控MITF的表达,进而下调TYR家族蛋白的表达,最终抑制黑色素的合成。进一步,我们研究了化合物KAD2对斑马鱼胚胎黑色素形成的抑制作用。结果表明,KAD2能够有效抑制斑马鱼MITF和TYR的表达从而抑制黑色素的形成。特别地,对于化合物KAD2还检测了小鼠急性毒理,结果表明无毒。除此之外,三个化合物的结构中都有氢供体基团使其具有抗氧化性。三者都体现出较好的自由基清除能力,效果均显着优于曲酸。以上结果说明三种曲酸衍生物可作为潜在的美白剂以及抗氧化剂。
林子青[6]（2017）在《重组人可溶性CD80乳酸菌的构建及其对小鼠移植瘤的治疗作用》文中提出一、研究背景肿瘤细胞之所以能逃避免疫监视,其重要原因是缺乏免疫共刺激信号[1]。CD80是一种重要的免疫共刺激分子,参与机体免疫反应,刺激初始T细胞活化分化为辅助T细胞（Th）,并且能调节免疫调节细胞（Treg）、免疫记忆细胞（Tm）、免疫效应细胞（Te）的作用,提供共刺激信号介导肿瘤免疫[2]。霍乱毒素B亚基（CTB）是霍乱毒素与肠上皮细胞识别并结合的调节亚基,与神经节苷脂M1受体（GM1）特异性结合,没有肠毒性,是提高口服疫苗粘膜免疫的主要手段之一[3]。乳酸菌是人和动物肠道中重要益生菌,具有多种功能,在下消化道存留时间较长,数量多,并有累计效应,利于肽类药物表达及吸收利用,适合做肠道内表达和给药的载体。二、研究目的以食品级的乳酸菌作为宿主菌表达重组人可溶性CD80融合蛋白,并分析对肿瘤的免疫治疗作用。三、研究方法用分子克隆技术构建hsCD80-CTB融合基因表达载体pLAB-hsCD80-CTB和hsCD80表达载体pLAB-hsCD80作为实验对照,分析CTB的介导作用。用电穿孔法转化乳球菌,筛选、鉴定、保种。体外实验:选择转化菌最佳诱导条件,分析融合蛋白的细胞内吞转化及小鼠脾脏淋巴细胞活化水平的刺激作用。体内实验:分析转化菌在肠道内的诱导表达及内吞转化规律,治疗小鼠结肠腺癌细胞（CT26）移植瘤和小鼠黑色素瘤细胞（B16F10）移植瘤模型,观察瘤体的病理变化及分析脾脏T淋巴细胞的活化水平,明确hsCD80-CTB转化菌的治疗作用。四、研究结果（1）成功构建含 hsCD80-CTB 和 hsCD80 基因的 pLZ-hsCD80-CTB 和pLZ-hsCD80表达载体。（2）成功将其转入乳酸乳球菌LZ3900,获得LZ-hsCD80-CTB和LZ-hsCD80。（3）体外转化菌融合蛋白最佳诱导时间为6h,低聚糖诱导剂最佳诱导浓度为0.2%（w/v）。（4）体外LZ-hsCD80-CTB表达融合蛋白,在CTB介导下能被肠上皮细胞内吞和释放具有免疫活性的的hsCD80,能活化T细胞、促进IFN-γ表达。（5）LZ-hsCD80-CTB喂饲小鼠后能在肠道内诱导表达,并能被肠上皮细胞吸收和转化,hsCD80能释放入血液循环。（6）体内治疗试验,LZ-hsCD80-CTB肠道内表达及转化融合蛋白对结肠癌移植瘤和黑色素癌移植瘤有显着的治疗效果,能够延长荷瘤小鼠的生存期、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成,并且能够诱导肿瘤细胞凋亡。（7）肠道表达及转化的hsCD80-CTB融合蛋白对脾脏淋巴细胞有较好的免疫刺激作用。五、结论成功构建表达重组人可溶性CD80的重组乳酸菌。该转化菌在肠道内能可控分泌hsCD80-CTB融合蛋白,被肠上皮细胞内吞转化,提高T淋巴细胞活化水平并刺激IFN-γ分泌,提高小鼠机体免疫,延长生存期,抑制肿瘤生长并诱导肿瘤凋亡,对肿瘤具有显着的治疗效果。
于向艳,崔雯萱,孙士萍,赵连梅,张超,单保恩[7]（2016）在《木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究》文中认为目的探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛（p-hydroxycinnamaldehyde,PHD）对黑素瘤B16细胞体内生长的抑制作用。方法应用MTS法检测PHD对B16细胞增殖的影响,倒置相差显微镜下观察形态变化。构建黑素瘤B16细胞小鼠皮下移植瘤模型,分为2组:治疗组小鼠ip 2 mg/kg PHD,模型组注射相同体积的生理盐水。观察2组小鼠成瘤情况,并测量肿瘤体积和质量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中酪氨酸酶（Tyr）、S-100B、MMP-9、p-P38和p-ERK蛋白的表达变化;苏木精-伊红染色法（HE）分析小鼠肝和肺组织的形态学变化。结果 PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的生长抑制作用（P<0.01）。20μmol/L PHD处理B16细胞48 h后,细胞数量减少,呈典型分化形态。PHD治疗组的肿瘤体积和质量均明显低于模型组（P<0.01）。与模型组相比,治疗组小鼠肿瘤组织中Tyr和p-P38蛋白的表达水平升高,MMP-9、S-100B和p-ERK蛋白表达水平则明显降低。治疗组小鼠肝和肺无明显组织形态学改变,模型组小鼠肺部有肿瘤转移。结论 PHD对小鼠体内黑素移植瘤的生长具有显着抑制作用。
王玥[8]（2014）在《表皮葡萄球菌来源的脂肽衍生物调节黑色素瘤细胞增殖、分化与迁移的功能机制》文中研究指明黑色素瘤起源于黑色素细胞,是发病率最低然而致死率却最高的皮肤癌。由于传统的治疗方法如手术、化疗和放射治疗等不能解决黑色素瘤转移和复发问题,因此靶向治疗和免疫治疗成为主要研究方向。目前,临床应用的治疗黑色素瘤药物多为针对原癌基因如BRAF、MEK的抑制剂。但是长期服用抑制剂导致肿瘤的耐药性和机体副作用使得黑色素瘤治疗仍然存在局限性。因此,人们越来越关注从自然界寻找一些天然化合物应用于肿瘤治疗中。脂肽是微生物的次生代谢产物,具有广泛的生物活性,如消炎、杀菌、抗肿瘤等。表皮葡萄球菌是一类皮肤共生菌,我们实验室从其发酵液中提取出一种脂肽,能够诱导角质形成细胞分泌抗菌肽,具有杀菌活性,而且其同分异构体具有抑制皮肤伤口过度炎症,调节皮肤先天免疫应答的活性。本研究通过细胞周期流式分析和体外克隆形成实验证明了表皮葡萄球菌来源的脂肽衍生物LP79能够诱导黑色素瘤细胞B16F10停滞在细胞周期G1期,进而抑制其增殖。Transwell和伤口实验表明LP79能够显着性抑制B16F10细胞的迁移。而且,我们通过构建实验性肿瘤转移模型,发现LP79抑制小鼠黑色素瘤的肺部迁移。进一步研究表明,脂肽LP79能通过调节双重特异性磷酸酶MKP1进而抑制肿瘤细胞在上皮样细胞转化过程中的两个重要蛋白——N-钙黏蛋白和波形蛋白——的表达,从而抑制小鼠黑色素瘤的转移。另外,脂肽LP79能够通过诱导酪氨酸酶相关蛋白TRP1进而促进小鼠黑色素瘤细胞的分化。然而当TRP1基因沉默之后,LP79依然能够抑制B16F10细胞的迁移,表明二者并无直接相关性。此外,TLR2作为脂肽的受体,并不参与脂肽LP79对黑色素瘤细胞B16F10的抑制迁移功能。综上所述,本研究证明了表皮葡萄球菌来源的脂肽衍生物具有抑制黑色素瘤迁移的生物学活性。本研究进一步揭示了皮肤共生菌对宿主的益处,为治疗黑色素瘤的新药研发提出了独特的视角,也为治疗肿瘤提供了新的思路。
耿艺漫[9]（2013）在《木鳖子对羟基桂皮醛诱导黑色素瘤细胞分化的实验研究》文中研究表明目的：研究从中药木鳖子中提取的九种单体化合物对小鼠黑色素瘤细胞生长的影响，筛选出作用效果最显着的单体化合物；从形态及功能方面观察对羟基桂皮醛诱导B16细胞分化的作用；并从基因及蛋白水平探讨其作用机制，为其作为抗肿瘤新药开发提供参考依据。方法：1从不鳖子中提取对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol等九种单体化合物；采用SRB法检测九种单体化合物对B16细胞生长的影响，计算生长抑制率，并在光镜下观察细胞形态变化。2SRB法检测不同浓度对羟基桂皮醛（2、4、6μg/ml）作用24h、48h、72h后，对B16细胞增殖的抑制作用。3采用瑞-姬染色法观察不同浓度对羟基桂皮醛（2、4、6μg/ml）作用于B16细胞72h后，对细胞形态的影响。4比色法检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性的影响。5采用生长曲线的方法检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞增殖能力的影响。6采用克隆集落形成试验检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞克隆增殖能力的影响。7采用划痕试验检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞48h后，对细胞迁徙能力的影响。8采用流式细胞（Flow cytometry, FCM）检测6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞6h、12h、24h和48h后，对细胞凋亡率以及细胞周期分布的影响。9采用免疫印迹技术（Western blot）检测MAPK信号转导通路中p-P38、p-JNK和p-ERK1/2在对羟基桂皮醛诱导B16细胞分化过程中的作用。10通过Real time方法检测6μg/ml的对羟基桂皮醛分别作用于B16细胞6h、12h、24h后，分化相关基因c-myc、Tyr、Trp1和Trp2表达的变化。结果：1对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol等九种单体化合物对B16细胞的生长有不同程度的抑制作用，其中对羟基桂皮醛的效果最明显，与各组比较，差异具有统计学意义（P<0.05）。2对羟基桂皮醛（2、4、6μg/ml）对B16细胞的增殖有较强的抑制作用，且具有浓度和时间相关性，与对照组相比差异具有统计学意义（P <0.05）。3Giemsa染色结果显示，2μg/ml对羟基桂皮醛作用72h后，细胞体积增大变成梭形，排列有序，成纤维状生长。随着对羟基桂皮醛药物浓度的增大，细胞出现树突状结构，为典型的细胞分化形态；而对照组细胞大小均匀，生长密集。4B16细胞经2、4、6μg/ml的对羟基桂皮醛分别作用48时后，随着药物作用浓度的增大，黑色素含量和酪氨酸酶活性增加，且明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.01）。5B16细胞经6μg/ml的对羟基桂皮醛作用48时后，生长增殖能力降低，且明显低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.01）。6B16细胞经6μg/ml的对羟基桂皮醛作用48时后，克隆集落形成能力降低，且明显低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.01）。7B16细胞经6μg/ml的对羟基桂皮醛作用48时后，迁徙力降低，且明显低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.01）。8FCM分析结果显示，6μg/ml对羟基桂皮醛作用于B16细胞6、12、24、48h后，细胞凋亡率无明显改变，但处于S期、G2/M期细胞减少，G0/G1期细胞明显增加，与对照组相比有显着差异。组间比较差异有显着性（P<0.05），各实验组与对照组比较差异有显着性（P<0.01）。9Western blot结果显示，对羟基桂皮醛还可以上调MAPK信号通路中p-P38和下调p-JNK和p-ERK的蛋白表达水平（P<0.05）。10Real time检测结果显示，对羟基桂皮醛可以上调Tyr、Trp1和Trp2和下调c-myc基因的表达水平（P<0.05），进一步证实对羟基桂皮醛是通过上调酪氨酸酶的表达而诱导黑色素瘤细胞黑色素含量的增加，同时下调肿瘤形成相关基因c-myc的表达水平而促进B16细胞的分化。结论：1木鳖子九种单体化合物中，第一种单体化合物对羟基桂皮醛的抗肿瘤作用最强，诱导小鼠黑色素瘤B16细胞形态方面的分化。2对羟基桂皮醛不仅在功能及形态上诱导黑色素瘤细胞的分化，而且可以使细胞的增殖能力、迁徙力降低，诱导黑色素瘤细胞向正常方向逆转。3对羟基桂皮醛是通过上调MAPK信号通路中p-P38和p-JNK蛋白的表达而诱导B16细胞的分化。
刘茜英[10]（2012）在《地西他滨抗肿瘤作用及其长循环温度敏感脂质体的研究》文中研究表明地西他滨（Decitabine,DAC）,化学名称为5-氮杂胞嘧啶脱氧核苷,是一种去甲基化药物,具有独特的甲基化转移酶抑制剂的治疗机制。地西他滨能诱导细胞死亡,阻止DNA合成,特别是它能有效地去除DNA甲基化,从而使许多失活的基因重新表达。地西他滨于2006年5月由美国FDA批准上市,用于原发性和继发性骨髓增生异常综合征（MDS）的治疗药物,现今,治疗急性髓性白血病的研究已进入Ⅲ期临床。本文对地西他滨体外抑制黑色素瘤细胞增殖及其分子机制进行探讨,在此基础上进行了地西他滨长循环温度敏感脂质体剂型的实验研究。研究的主要内容包括:（1）地西他滨体外抗黑色素瘤作用及其机理研究;（2）地西他滨长循环温度敏感脂质体处方前研究;（3）地西他滨长循环温度敏感脂质体制备及其理化性质研究;（4）地西他滨长循环温度敏感脂质体的药动学研究;（5）地西他滨长循环温度敏感脂质体体内外抗肿瘤作用研究五个部分。本文采用四甲基偶氮唑盐染色（MTT）法测定地西他滨体外抑制黑色素瘤细胞生长增殖,抑制作用具有浓度和时间依赖关系,流式细胞测定结果表明地西他滨可将黑色素瘤K1735M2细胞阻断于G2/M期;地西他滨能诱导黑色素瘤K1735M2细胞形态分化,形成长的树突状结构,并且细胞这种形态的改变是不可逆的,地西他滨可以抑制K1735M2黑色素瘤细胞恶性表型;虽然地西他滨在一定程度上可以引起K1735M2黑色素瘤细胞凋亡,但凋亡率保持在一个较低水平;Werstern blot试验结果表明,K1735M2黑色素瘤细胞经地西他滨处理后,未能上调p53和p21蛋白表达量。因此,地西他滨能够诱导细胞分化和细胞周期阻滞而非细胞凋亡是其抑制鼠K1735M2黑色素瘤细胞体外增殖可能的重要机制。本文建立了地西他滨长循环温度敏感脂质体含量测定的HPLC方法,灵敏度高,重现性强,同时,建立了微柱离心法用于测定地西他滨脂质体包封率。地西他滨化学性质不稳定,易水解,有机溶剂甲醇的加入,可以延缓地西他滨溶液长时间放置过程中地西他滨的水解,有助于溶液稳定性;同时较低的温度,可以延缓地西他滨水解的时间。测定地西他滨在PBS缓冲液中的表观溶解度为19.19mg/ml,地西他滨正辛醇/水表观分配系数为-0.81,该数据为地西他滨脂质体的制备奠定基础。采用逆向蒸发法制备地西他滨长循环温度敏感脂质体（DAC-LTSL）,在单因素考察的基础上,采用正交试验法优化处方及制备工艺,脂质体药物平均包封率为44.5%,脂质体的平均粒径为140.2±2.4nm。采用Delsa 440 SX Zeta电位仪测定DAC-LTSL电位值,测得结果为-8.34 mV;采用透析法考察脂质体体外释放规律,结果表明,DAC-LTSL在高于42℃条件下可释放绝大部分药物,地西他滨长循环温度敏感脂质体的相变温度在42～43 ℃之间,略高于DPPC磷脂的相变温度。以冻干制剂的外观、水化复溶情况及水化后脂质体粒径为指标,筛选冻干保护剂,制备了地西他滨长循环温敏脂质体冻干粉剂,并以包封率及粒径为指标,优化了地西他滨长循环温度敏感脂质体冻干曲线,冻干脂质体重建后的平均包封率在40%左右,平均粒径在150±15nm范围内,略大于冻干前脂质体粒径。此外,对冻干脂质体进行了影响因素及1个月的稳定性考察,地西他滨脂质体对高温及光照敏感,在遮光、密闭凉暗处（避光不超过20℃）放置30天,外观色泽未有明显变化,药物包封率略有下降,粒径略有增加,与未冻干脂质体相比较,可以增加其制剂贮存稳定性。本文建立了 LC/MS/MS联用法测定地西他滨和地西他滨长循环温度敏感脂质体经静脉注射给药后在大鼠体内的血药浓度,并绘制出血药浓度-时间曲线。根据血药浓度-时间数据,采用梯形法计算AUC0-t值,以半对数作图法,由消除相末端的浓度点计算t1/2,用DAS 2.0药代动力学软件对主要药动学参数进行平行设计实验的差异分析。本文考察地西他滨长循环温度敏感脂质体体外抑制黑色素瘤K1735M2细胞增殖的作用。结果表明,地西他滨温度敏感脂质体能体外抑制肿瘤细胞生长增殖,具有浓度和时间依赖关系,不加热情况下作用强度与地西他滨相比未出现明显差异;DAC-LTSL可将黑色素瘤K1735M2细胞阻断于G2/M期,并能诱导细胞形态分化,形成长的树突状结构。动物实验研究结果表明,地西他滨长循环温度敏感脂质体结合热疗有较好的抑瘤作用,其作用效果强于地西他滨溶液,显示DAC-LTSL具有良好的热靶向性。
二、大豆甙元对小鼠B16黑色素瘤细胞的分化诱导作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大豆甙元对小鼠B16黑色素瘤细胞的分化诱导作用（论文提纲范文）
（1）赤小豆当归散对皮肤癌的防治作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| ABBREVIATION |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 皮肤癌研究现状 |
| 1.2 肿瘤的能量代谢与中医药防治 |
| 第二章 赤小豆当归散防治皮肤癌的体外研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验药品与试剂 |
| 2.2.2 实验试剂配制 |
| 2.2.3 实验细胞 |
| 2.2.4 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 MTT法检测赤小豆当归散对A431 细胞、B16-f10 细胞增殖能力的影响 |
| 2.3.2 激光全息检测赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞形态、体积的影响.. |
| 2.3.3 划痕法检测赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞迁移能力的影响 |
| 2.3.4 数据分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 赤小豆当归散对A431、B16-f10细胞增殖能力的影响 |
| 2.4.2 赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞形态、体积的影响 |
| 2.4.3 赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞迁移能力的影响 |
| 2.5 实验小结 |
| 第三章 赤小豆当归散防治皮肤癌的体内研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验药品与试剂 |
| 3.2.2 实验试剂配制 |
| 3.2.3 实验细胞和动物 |
| 3.2.4 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型的影响 |
| 3.3.2 赤小豆当归散对黑色素瘤同种异体移植模型小鼠的影响 |
| 3.3.3 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导小鼠皮肤癌模型的影响 |
| 3.4.2 赤小豆当归散对黑色素瘤同种异体移植模型小鼠的影响 |
| 3.5 实验小结 |
| 第四章 赤小豆当归散防治皮肤癌的机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验药品与试剂 |
| 4.2.2 实验试剂配制 |
| 4.2.3 实验细胞和动物 |
| 4.2.4 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 网络药理学预测赤小豆当归散防治皮肤癌的分子机制 |
| 4.3.2 AO染色法检测赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞自噬能力的影响.. |
| 4.3.3 线粒体膜电位试剂盒检测赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞线粒体功能的影响 |
| 4.3.4 ROS试剂盒检测赤小豆当归散对A431 细胞、B16-f10 细胞ROS的影响 |
| 4.3.5 免疫荧光检测赤小豆当归散对A431 细胞、B16-f10 细胞Ras、Bcl-2 表达的影响 |
| 4.3.6 ROS试剂盒检测赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型小鼠及黑色素瘤同种异体移植模型小鼠ROS的影响 |
| 4.3.7 线粒体膜电位试剂盒检测赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型小鼠及黑色素瘤同种异体移植模型小鼠线粒体功能的影响 |
| 4.3.8 免疫组化法、免疫荧光法和Western blot检测赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型小鼠及黑色素瘤同种异体移植模型小鼠相关蛋白表达影响 |
| 4.3.9 数据分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 赤小豆当归散防治皮肤癌的分子机制响 |
| 4.4.2 赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞自噬能力的影响 |
| 4.4.3 赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞线粒体功能的影响 |
| 4.4.4 赤小豆当归散对A431 细胞、B16-f10 细胞ROS的影响 |
| 4.4.5 赤小豆当归散对A431细胞、B16-f10细胞癌基因表达的影响 |
| 4.4.6 赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型小鼠及黑色素瘤同种异体移植模型小鼠ROS的影响 |
| 4.4.7 赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型小鼠及黑色素瘤同种异体移植模型小鼠线粒体膜电位的影响 |
| 4.4.8 赤小豆当归散对二甲基苯蒽诱导皮肤癌模型小鼠及黑色素瘤同种异体移植模型小鼠相关蛋白表达影响 |
| 4.5 实验小结 |
| 第五章 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 创新性总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（2）基于WNT通路筛选具有胃黏膜修复和黑色素瘤抑制活性的植物多酚（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 WNT信号研究进展 |
| 1.1.1 WNT信号简介 |
| 1.1.2 WNT信号研究主要方法 |
| 1.2 WNT信号通路与人类健康的理论研究 |
| 1.2.1 WNT信号通路与胃黏膜损伤、胃癌 |
| 1.2.2 WNT信号通路与结直肠癌 |
| 1.2.3 WNT信号通路与黑色素瘤 |
| 1.2.4 WNT信号通路与乳腺癌 |
| 1.2.5 WNT信号通路与骨质疏松 |
| 1.2.6 WNT信号通路与自身免疫病 |
| 1.3 WNT信号通路药物的研究进展 |
| 1.4 植物多酚调节WNT的研究进展 |
| 1.4.1 植物多酚靶向WNT信号的上游蛋白 |
| 1.4.2 植物多酚靶向WNT信号中β-catenin降解复合体 |
| 1.4.3 植物多酚靶向WNT信号中β-catenin/TCF |
| 1.5 本论文的主要研究内容及立题依据 |
| 第二章 筛选具有WNT信号抑制活性的植物多酚 |
| 引言 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2 主要仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 植物多酚的制备 |
| 2.3.2 多酚含量的测定 |
| 2.3.3 植物多酚对HEK293-TOPflash细胞活力的影响 |
| 2.3.3.1 细胞培养 |
| 2.3.3.2 细胞活力测定 |
| 2.3.4 筛选抑制WNT信号的植物多酚提取物 |
| 2.3.4.1 WNT3A条件培养基的制备 |
| 2.3.4.2 HEK293-TOPflash细胞WNT信号值测定 |
| 2.3.5 统计分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 不同植物多酚提取物中多酚含量 |
| 2.4.2 植物多酚提取物对HEK293-TOPflash细胞存活率的影响 |
| 2.4.3 植物多酚提取物对WNT3A条件培养基激活WNT信号的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 植物多酚提取物对WNT信号通路依赖的胃溃疡大鼠保护作用活性评价 |
| 引言 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.2 主要仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 急性胃溃疡大鼠模型的建立 |
| 3.3.2 宏观胃黏膜病变评估 |
| 3.3.3 胃溃疡大鼠胃组织HE染色 |
| 3.3.4 统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 无水乙醇诱导大鼠胃溃疡损伤模型 |
| 3.4.2 枳实、桂枝多酚提取物对大鼠胃溃疡指数的影响 |
| 3.4.3 枳实、桂枝多酚提取物对大鼠胃溃疡组织的影响 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 植物多酚提取物对WNT信号通路依赖的黑色素瘤小鼠的防治作用 |
| 引言 |
| 4.1 实验材料与试剂 |
| 4.2 主要仪器与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 黑色素肿瘤小鼠模型的建立及分组 |
| 4.3.2 枳实、桂枝多酚提取物干预黑色素瘤小鼠 |
| 4.3.3 黑色素瘤小鼠肿瘤体积及体重比测定 |
| 4.3.4 黑色素瘤小鼠组织HE染色 |
| 4.3.5 统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 枳实、桂枝多酚提取物对小鼠黑色素瘤的影响 |
| 4.4.2 枳实、桂枝多酚提取物对黑色素瘤小鼠肝肾组织的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 枳实多酚分离纯化结构鉴定 |
| 引言 |
| 5.1 实验材料与试剂 |
| 5.2 主要仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 大孔树脂的筛选 |
| 5.3.2 大孔树脂静态吸附实验 |
| 5.3.3 RKO细胞存活率的测定 |
| 5.3.4 纯化多酚组分WNT信号抑制活性测定 |
| 5.3.5 多酚提取单因素优化实验 |
| 5.3.5.1 乙醇浓度单因素实验 |
| 5.3.5.2 料液比单因素实验 |
| 5.3.5.3 提取时间单因素实验 |
| 5.3.5.4 吸附等温线测定实验 |
| 5.3.6 大孔树脂动态吸附解吸实验 |
| 5.3.7 Ed U法检测WNT依赖肠癌细胞增殖率 |
| 5.3.8 超高效液相色谱-质谱分析纯化组分多酚组成 |
| 5.3.9 统计分析 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 大孔树脂的筛选 |
| 5.4.2 大孔树脂静态吸附解吸动力学曲线 |
| 5.4.3 吸附等温线 |
| 5.4.4 枳实和桂枝多酚对RKO细胞活力及WNT信号的影响 |
| 5.4.5 大孔树脂动态吸附解吸 |
| 5.4.6 多酚纯化组分对HCT116细胞增殖率的影响 |
| 5.4.7 纯化枳实多酚组分的组成分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、本论文的创新 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（3）荸荠皮和浒苔的化学成分及其抗肿瘤、抗菌活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词一览 |
| 鉴别反应一览 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 可食用植物中具有抗肿瘤作用的活性成分研究进展 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 可食用植物中具有抗肿瘤作用的活性成分 |
| 2.2.1 多糖类 |
| 2.2.2 黄酮类 |
| 2.2.2.1 黄酮类单体化合物 |
| 2.2.2.2 黄酮类混合物 |
| 2.2.3 萜类 |
| 2.2.3.1 单萜 |
| 2.2.3.2 倍半萜 |
| 2.2.3.3 二萜 |
| 2.2.3.4 三萜 |
| 2.2.4 生物碱类 |
| 2.2.5 其他 |
| 2.3 展望 |
| 第三章 荸荠皮化学成分及营养成分研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 荸荠皮的化学成分 |
| 3.2.1 化合物名称 |
| 3.2.2 化合物结构 |
| 3.2.3 化合物结构鉴定 |
| 3.3 干燥荸荠皮的营养成分 |
| 3.3.1 一般营养成分 |
| 3.3.2 矿物元素含量 |
| 3.3.3 氨基酸含量 |
| 3.4 实验部分 |
| 3.4.1 仪器及试剂 |
| 3.4.2 药材 |
| 3.4.3 化合物的提取与分离 |
| 3.4.4 营养成分测定 |
| 3.4.4.1 一般营养成分测定 |
| 3.4.4.2 矿物元素含量测定 |
| 3.4.4.3 氨基酸含量测定 |
| 3.5 化合物的物理常数及光谱数据 |
| 第四章 浒苔的化学成分研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 浒苔的化学成分研究结果 |
| 4.2.1 化合物名称 |
| 4.2.2 化合物结构 |
| 4.2.3 化合物结构鉴定 |
| 4.3 实验部分 |
| 4.3.1 仪器及试剂 |
| 4.3.2 药材 |
| 4.3.3 化合物的提取与分离 |
| 4.4 化合物的物理常数及光谱数据 |
| 第五章 抗菌活性研究 |
| 5.1 荸荠皮中部分化合物抗菌活性结果 |
| 5.2 浒苔中部分化合物抗菌活性结果 |
| 5.3 实验部分 |
| 5.3.1 实验仪器与药品 |
| 5.3.2 实验步骤 |
| 5.4 总结及讨论 |
| 第六章 抗肿瘤活性研究 |
| 6.1 荸荠皮中部分化合物体外抗肿瘤活性研究结果 |
| 6.1.1 抗肿瘤活性评价 |
| 6.1.2 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况 |
| 6.1.3 Hoechst 33258荧光染色检测T24细胞凋亡情况 |
| 6.1.4 吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色检测T24细胞凋亡情况 |
| 6.1.5 线粒体跨膜电位ΔΨm检测结果分析 |
| 6.1.6 Western blot蛋白印记结果分析 |
| 6.1.7 细胞内ROS检测结果分析 |
| 6.2 浒苔中部分化合物体外抗肿瘤活性研究结果 |
| 6.3 实验部分 |
| 6.3.1 实验仪器与药品 |
| 6.3.2 MTT法测定抗肿瘤活性 |
| 6.3.3 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡 |
| 6.3.4 Hoechst 33258染色 |
| 6.3.5 吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色 |
| 6.3.6 线粒体跨膜电位ΔΨm检测 |
| 6.3.7 Western blot蛋白印记分析 |
| 6.3.8 细胞内ROS检测 |
| 6.4 总结及讨论 |
| 第七章 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 硕士学位期间主要科研成果 |
| 附录 部分化合物图谱 |
（4）灰星鲨鱼皮多肽的提取及生物活性的研究（论文提纲范文）
| 主要缩略词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 鲨鱼的概述 |
| 1.2 肽的研究概况 |
| 1.3 黑色素的研究概况 |
| 1.3.1 黑色素 |
| 1.3.2 黑色素形成的机制 |
| 1.3.3 抗氧化剂与黑色素 |
| 1.4 黑色素抑制剂及美白化妆品的研究概况 |
| 1.5 B16F10 |
| 1.6 斑马鱼模型的研究 |
| 1.7 本论文研究的内容和意义 |
| 1.7.1 研究内容 |
| 1.7.2 研究意义 |
| 2 实验材料与仪器 |
| 2.1 主要材料与试剂 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 实验试剂配制 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 灰星鲨鱼皮多肽的提取 |
| 3.1.1 提取方法 |
| 3.1.2 提取工艺的优化 |
| 3.2 灰星鲨鱼皮多肽分子量的测定 |
| 3.3 灰星鲨鱼皮多肽的紫外分析 |
| 3.4 灰星鲨鱼皮多肽的体外吸湿、保湿效果研究 |
| 3.5 灰星鲨鱼皮多肽的抗氧化能力 |
| 3.5.1 灰星鲨鱼皮多肽对DPPH自由基的清除能力 |
| 3.5.2 灰星鲨鱼皮多肽对ABTS自由基的清除能力 |
| 3.5.3 灰星鲨鱼皮多肽对Fe~(3+)还原能力的影响 |
| 3.6 灰星鲨鱼皮多肽对体外DNA损伤的保护作用 |
| 3.7 灰星鲨鱼皮多肽对蘑菇酪氨酸酶活性的影响 |
| 3.7.1 灰星鲨鱼皮多肽对单酚酶的抑制作用 |
| 3.7.2 灰星鲨鱼皮多肽对单酚酶的抑制机理 |
| 3.7.3 灰星鲨鱼皮多肽对单酚酶活力的分析 |
| 3.8 灰星鲨鱼皮多肽对细胞增殖及形态的影响 |
| 3.8.1 灰星鲨鱼皮多肽对正常的肝LO2细胞增殖的影响 |
| 3.8.2 灰星鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10细胞增殖的影响 |
| 3.8.3 灰星鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10细胞形态的影响 |
| 3.9 灰星鲨鱼皮多肽对B16F10黑色素含量的影响 |
| 3.10 灰星鲨鱼皮多肽对B16F10细胞内ROS含量的影响 |
| 3.11 灰星鲨鱼皮多肽对B16F10酪氨酸酶活性的影响 |
| 3.11.1 吸光值测定酶活力 |
| 3.11.2 活性胶测定酶活力 |
| 3.12 灰星鲨鱼皮多肽对B16F10黑色素相关蛋白表达的影响 |
| 3.12.1 细胞总蛋白的提取及浓度的测定 |
| 3.12.2 配胶 |
| 3.12.3 电泳 |
| 3.13 B16F10细胞内cAMP浓度的测定 |
| 3.14 灰星鲨鱼皮多肽对B16F10黑色素相关基因表达的影响 |
| 3.14.1 细胞RNA的提取及纯度、浓度的检测 |
| 3.14.2 RNA结构的鉴定 |
| 3.14.3 第一链cDNA合成及gDNA去除 |
| 3.14.4 实时荧光定量PCR |
| 3.15 灰星鲨鱼皮多肽对斑马鱼黑色素形成的影响 |
| 3.15.1 斑马鱼模型的建立 |
| 3.15.2 多肽浓度的确定 |
| 3.15.3 胚胎暴露实验 |
| 3.15.4 斑马鱼体内黑色素的提取及含量测定 |
| 3.16 灰星鲨皮多肽对斑马鱼黑色素相关蛋白表达的影响 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 鲨鱼皮多肽提取工艺的优化 |
| 4.1.1 单因素实验结果 |
| 4.1.2 响应曲面法优化 |
| 4.2 鲨鱼皮多肽的分子量大小 |
| 4.3 鲨鱼皮多肽理化性质及功能的分析 |
| 4.3.1 鲨鱼皮多肽水解液的紫外分析 |
| 4.3.2 鲨鱼皮多肽的吸湿性和保湿性 |
| 4.3.3 鲨鱼皮多肽的抗氧化能力测定 |
| 4.3.4 鲨鱼皮多肽对DNA体外损伤的保护作用 |
| 4.3.5 鲨鱼皮多肽对蘑菇酪氨酸酶活力的影响 |
| 4.4 鲨鱼皮多肽列对细胞黑色素生成的影响 |
| 4.4.1 灰星鲨鱼皮多肽对细胞增殖及形态的影响 |
| 4.4.2 鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10黑色素瘤细胞黑色素含量的影响 |
| 4.4.3 鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10黑色素瘤细胞内ROS含量的影响 |
| 4.4.4 鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10细胞酪氨酸酶活性的影响 |
| 4.4.5 鲨鱼皮多肽与α-MSH对小鼠B16F10细胞黑色素含量的影响 |
| 4.5 鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10细胞黑色素相关蛋白的影响 |
| 4.5.1 鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10细胞黑色素相关蛋白表达的影响 |
| 4.5.2 鲨鱼皮多肽对小鼠B16F10细胞黑色素相关基因表达的影响 |
| 4.6 鲨鱼皮多肽对细胞黑色素生成相关信号通路的影响 |
| 4.7 鲨鱼皮多肽对斑马鱼黑色素生成的影响 |
| 4.7.1 斑马鱼模型的建立及鲨鱼皮多肽浓度的确定 |
| 4.7.2 鲨鱼皮多肽对斑马鱼胚胎黑色素沉着的影响 |
| 4.7.3 鲨鱼皮多肽对斑马鱼胚胎黑色素相关蛋白的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 鲨鱼皮多肽提取工艺的优化 |
| 5.2 鲨鱼皮多肽理化性质的分析 |
| 5.3 鲨鱼皮多肽体外生理活性的研究 |
| 5.3.1 鲨鱼皮多肽体外保湿、抗氧化及抗DNA损伤的作用 |
| 5.3.2 鲨鱼皮多肽对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用及机理研究 |
| 5.4 鲨鱼皮多肽对细胞生长的影响 |
| 5.5 鲨鱼皮多肽对B16F10细胞黑色素含量及酪氨酸酶活性的影响 |
| 5.6 鲨鱼皮多肽抑制B16F10细胞黑色素的作用机制 |
| 5.7 鲨鱼皮多肽对斑马鱼黑色素形成的影响 |
| 6 结论 |
| 7 展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表论文 |
| 致谢 |
（5）酪氨酸酶新型抑制剂曲酸衍生物的合成及其抑制黑色素形成的作用机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 酪氨酸酶结构特点及其生物活性 |
| 1.1.1 酪氨酸酶结构特点 |
| 1.1.2 酪氨酸酶生物活性 |
| 1.2 酪氨酸酶抑制剂 |
| 1.2.1 白藜芦醇衍生物和类似物 |
| 1.2.2 肽和模拟肽 |
| 1.2.3 联苯衍生物 |
| 1.2.4 吲哚衍生物 |
| 1.2.5 硫脲和氨基硫脲衍生物 |
| 1.2.6 肉桂酸衍生物 |
| 1.2.7 查尔酮和黄酮类似物 |
| 1.2.8 曲酸及其衍生物 |
| 1.3 黑色素合成信号通路 |
| 1.4 本课题研究内容及意义 |
| 2 主要实验试剂材料和仪器 |
| 2.1 主要实验材料 |
| 2.2 购买的主要试剂 |
| 2.3 主要实验仪器 |
| 2.4 主要实验试剂配制 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 曲酸衍生物的合成 |
| 3.2 结构鉴定 |
| 3.2.1 质谱鉴定 |
| 3.2.2 红外光谱检测 |
| 3.2.3 核磁鉴定 |
| 3.3 酶学实验 |
| 3.3.1 化合物对蘑菇酪氨酸酶的抑制性 |
| 3.3.1.1 化合物对单酚酶的抑制效果 |
| 3.3.1.2 化合物对二酚酶的抑制效应 |
| 3.3.1.3 化合物抑制机理的研究 |
| 3.3.1.4 抑制类型以及抑制常数的测定 |
| 3.3.2 全波长扫描 |
| 3.3.3 曲酸衍生物对mTYR活性抑制机理的研究 |
| 3.3.3.1 荧光淬灭实验 |
| 3.3.3.2 与铜离子的相互作用关系 |
| 3.3.3.3 Moe分子对接 |
| 3.4 化合物对人正常肝脏细胞L02和黑色素瘤细胞B16F10增殖的影响 |
| 3.5 化合物对小鼠B16F10细胞黑色素合成的抑制作用 |
| 3.5.1 对胞内TYR的抑制作用 |
| 3.5.2 对黑色素合成的影响 |
| 3.5.3 LV29400处理B16F10细胞 |
| 3.5.4 western blot检测酪氨酸酶相关蛋白表达量的影响 |
| 3.6 化合物对斑马鱼胚胎黑色素合成的影响 |
| 3.6.1 胚胎收集及培养 |
| 3.6.2 KAD2对斑马鱼胞内酪氨酸酶活力及黑色素合成的抑制作用 |
| 3.6.3 KAD2对斑马鱼MITF和TYR蛋白表达量的影响 |
| 3.7 抗氧化实验性 |
| 3.8 小鼠急性毒理实验检测KAD2的毒性 |
| 3.9 数据处理方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 曲酸衍生物的合成及结构鉴定 |
| 4.1.1 KAD1的合成及鉴定 |
| 4.1.2 KAD2的合成及鉴定 |
| 4.1.3 KAD3的合成及鉴定 |
| 4.2 曲酸衍生物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用 |
| 4.2.1 化合物对单酚酶活性的抑制作用 |
| 4.2.2 化合物对二酚酶活性的抑制作用 |
| 4.2.3 化合物对二酚酶活性的抑制机理 |
| 4.2.4 抑制类型以及常数的测定 |
| 4.2.5 全波长扫描 |
| 4.2.6 化合物与酶的相互作用 |
| 4.2.6.1 荧光淬灭 |
| 4.2.6.2 ANS荧光染料法检测 |
| 4.2.6.3 Moe分子对接 |
| 4.2.6.4 铜离子相互作用的关系 |
| 4.3 化合物对小鼠B16F10细胞黑色素合成的抑制作用 |
| 4.3.1 化合物对胞内酪氨酸酶活力的影响 |
| 4.3.2 化合物有效抑制B16F10细胞黑色素的合成 |
| 4.3.3 化合物对细胞黑色素合成相关蛋白的影响 |
| 4.3.4 KAD2对细胞黑色素合成相关信号通路的调控 |
| 4.4 KAD2对斑马鱼黑色素合成的影响 |
| 4.4.1 KAD2对斑马鱼体内酪氨酸酶活力和黑色素合成的抑制作用 |
| 4.4.2 KAD2对斑马鱼体内MITF和TYR表达量的影响 |
| 4.5 化合物的抗氧化作用 |
| 4.6 KAD2对小鼠急性毒理的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 化合物对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用 |
| 5.2 化合物对B16F10细胞黑色素合成的抑制作用 |
| 5.3 化合物对斑马鱼黑色素合成的抑制作用 |
| 5.4 化合物的抗氧化作用 |
| 6. 结论 |
| 7. 展望 |
| 参考文献 |
| 发表的论文以及所获荣誉 |
| 致谢 |
（6）重组人可溶性CD80乳酸菌的构建及其对小鼠移植瘤的治疗作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 前言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 试剂与材料 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.1.4 实验动物饲料垫料 |
| 2.1.5 菌株 |
| 2.1.6 质粒载体 |
| 2.1.7 细胞系 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 |
| 2.2.2 pLAB-hsCD80-CTB和pLAB-hsCD80表达载体构建方法 |
| 2.2.3 hsCD80-CTB和hsCD80基因转化及转化子鉴定方法 |
| 2.2.4 体外分析转化菌表达融合蛋白最佳诱导条件筛选 |
| 2.2.5 体外分析转化菌表达融合蛋白被正常结肠上皮细胞、结肠癌细胞内吞 |
| 2.2.6 体外分析转化菌融合蛋白经结肠上皮细胞内吞对小鼠脾脏淋巴细胞的活化及IFNγ分泌的刺激作用 |
| 2.2.7 体内分析转化菌融合蛋白在肠道内诱导表达及内吞转化效果 |
| 2.2.8 体内治疗试验分析转化菌融合蛋白对小鼠移植瘤的免疫治疗效果 |
| 2.2.9 肿瘤病理学分析 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 基因转化及转化子鉴定 |
| 3.1.1 挑选阳性克隆菌落 |
| 3.1.2 革兰氏染色鉴定 |
| 3.1.3 质粒PCR鉴定 |
| 3.1.4 Western blot免疫印迹法鉴定 |
| 3.2 体外转化菌融合蛋白最佳诱导条件筛选 |
| 3.2.1 体外转化菌融合蛋白最佳诱导时间选择 |
| 3.2.2 体外转化菌融合蛋白最佳诱导浓度选择 |
| 3.3 体外肠上皮胞内吞转化菌融合蛋白 |
| 3.4 体外转化菌融合蛋白活化小鼠脾脏淋巴细胞及刺激IFN-γ分泌 |
| 3.4.1 体外转化菌融合蛋白显着提高淋巴细胞CD3~+CD4~+和CD3~+CD8α~+细胞比例 |
| 3.4.2 体外转化菌融合蛋白促进活化T淋巴细胞刺激IFN-γ~+分泌 |
| 3.5 体内转化菌融合蛋白小鼠肠道内吞进入血液循环 |
| 3.6 体内治疗试验证实肠道内表达及转化hsCD80-CTB融合蛋白对小鼠移植瘤的治疗效果 |
| 3.6.1 体内转化菌融合蛋白促进脾脏淋巴细胞活化 |
| 3.6.2 肠道内转化菌融合蛋白对结肠癌、黑色素癌移植瘤的治疗效果 |
| 3.6.3 肿瘤病理学分析 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 乳酸乳球菌表达重组人可溶性CD80融合蛋白肿瘤治疗设计思路 |
| 4.2 重组人可溶性CD80乳酸菌的构建及转化子鉴定 |
| 4.3 重组人可溶性CD80融合蛋白乳酸菌表达及表达效果 |
| 4.4 肠上皮细胞对重组人可溶性CD80融合蛋白内吞转化 |
| 4.5 淋巴细胞转化实验中重组人可溶性CD80融合蛋白生物活性 |
| 4.6 肠道内表达及转化重组人可溶性CD80融合蛋白对小鼠移植瘤的免疫治疗有显着的治疗效果 |
| 全文主要结论 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略词对照表 |
| 硕士研究生期间研宄成果 |
| 致谢 |
（7）木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 药品与试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 细胞 |
| 1.4 实验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 PHD对细胞增殖的影响 |
| 2.2 PHD对B16细胞形态的影响 |
| 2.3 PHD对黑素瘤B16移植性肿瘤小鼠的影响 |
| 2.3.1 模型制备、分组及给药 |
| 2.3.2 免疫组织化学法检测Tyr、MMP-9、S-100B、p-P38和p-ERK蛋白表达 |
| 2.3.3 苏木精-伊红(HE)染色法检测肝和肺组织的细胞形态变化 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 PHD对B16细胞增殖和形态的影响 |
| 3.2 PHD对小鼠体内移植瘤形成的抑制作用 |
| 3.3 PHD对小鼠体内Tyr、MMP-9、S-100B、p-P38和p-ERK蛋白表达的影响 |
| 3.4 PHD对移植瘤小鼠肝和肺组织形态的影响 |
| 4 讨论 |
（8）表皮葡萄球菌来源的脂肽衍生物调节黑色素瘤细胞增殖、分化与迁移的功能机制（论文提纲范文）
| 论文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1. 癌症 |
| 2. 黑色素瘤 |
| 3. 脂肽 |
| 第二章 脂肽LP79抑制小鼠黑色素瘤细胞的增殖 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 结果与分析 |
| 5. 讨论 |
| 第三章 脂肽LP79抑制小鼠黑色素瘤细胞B16F10的迁移 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 结果与分析 |
| 5. 讨论 |
| 第四章 脂肽抑制小鼠黑色素瘤细胞B16F10迁移的分子机制 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 结果与分析 |
| 5. 讨论 |
| 第五章 脂肽LP79促进小鼠黑色素瘤细胞的分化 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与试剂 |
| 3. 实验方法 |
| 4. 结果与分析 |
| 5. 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 研究生期间发表文章 |
| 致谢 |
（9）木鳖子对羟基桂皮醛诱导黑色素瘤细胞分化的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 木鳖子提取的九种单体化合物体外抗肿瘤活性的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 木鳖子对羟基桂皮醛体外诱导 B16 细胞分化及其机制的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 诱导黑素瘤细胞分化的药物及其分化机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）地西他滨抗肿瘤作用及其长循环温度敏感脂质体的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1 DNA甲基化抑制剂国内外概况 |
| 2 地西他滨的研究进展 |
| 3 脂质体研究进展 |
| 4 恶性黑色素瘤简介 |
| 5 研究内容及技术关键 |
| 参考文献 |
| 第二章 地西他滨体外抗黑色素瘤作用及其机理研究 |
| 1 仪器和材料 |
| 2 地西他滨对小鼠黑色素瘤K1735M2细胞体外增殖的实验研究 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞生长抑制率的检测 |
| 2.3.1 细胞生长抑制作用的检测步骤 |
| 2.3.2 DAC对K1735M2细胞生长抑制作用的量效曲线 |
| 2.3.3 DAC对K1735M2细胞生长抑制作用的时效曲线 |
| 2.4 DAC对K1735M2细胞的作用机制研究 |
| 2.4.1 DAC对K1735M2细胞周期的影响 |
| 2.4.2 DAC对K1735M2细胞形态的作用 |
| 2.4.3 DAC对K1735M2细胞凋亡的影响 |
| 2.4.4 免疫印迹 |
| 3 讨论与小结 |
| 3.1 讨论 |
| 3.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 地西他滨长循环温度敏感脂质体制备处方前研究 |
| 1 仪器与材料 |
| 2 地西他滨长循环温度敏感脂质体体外分析方法的建立 |
| 2.1 检测波长的选择 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 方法专属性考察 |
| 2.4 标准曲线的制备 |
| 2.5 精密度考察 |
| 2.6 回收率考察 |
| 3 脂质体包封率的测定 |
| 3.1 微型凝胶柱的制备 |
| 3.2 微型凝胶柱对空白脂质体和药物的吸附 |
| 3.3 微型凝胶柱对空白脂质体及地西他滨水溶液物理混合物的分离 |
| 3.4 包封率的测定方法 |
| 4 地西他滨理化性质研究 |
| 4.1 地西他滨在不同溶剂中的稳定性 |
| 4.2 地西他滨磷酸盐缓冲液在不同温度下的稳定性 |
| 4.3 地西他滨PBS溶液中表观溶解度的测定 |
| 4.4 地西他滨正辛醇/水表观分配系数的测定 |
| 5 讨论与小结 |
| 5.1 讨论 |
| 5.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 地西他滨长循环温度敏感脂质体制备及理化性质研究 |
| 1 仪器与材料 |
| 2 地西他滨长循环温敏脂质体处方研究 |
| 2.1 不同磷脂性质考察 |
| 2.2 不同磷脂浓度对脂质体包封率的影响 |
| 2.3 磷脂与胆固醇的比例对脂质体包封率的影响 |
| 2.4 不同药脂比对脂质体包封率的影响 |
| 2.5 DSPE-PEG2000量对脂质体包封率的影响 |
| 2.6 水化介质对脂质体包封率的影响 |
| 2.7 正交设计优化DAC-LTSL处方 |
| 2.7.1 因素水平的选择 |
| 2.7.2 正交试验结果 |
| 3 地西他滨长循环温敏脂质体制备工艺优化 |
| 3.1 超声对地西他滨长循环温敏脂质体的影响 |
| 3.1.1 超声功率 |
| 3.1.2 超声时间 |
| 3.2 地西他滨长循环温度敏感脂质体冻干工艺考察 |
| 3.2.1 预冻模式 |
| 3.2.2 冻干保护剂选择 |
| 3.2.3 冻干曲线优化 |
| 4 地西他滨长循环温度敏感脂质体理化性质研究 |
| 4.1 电位和粒径测定 |
| 4.2 体外释放度考察 |
| 4.3 冻干工艺对地西他滨长循环温敏脂质体粒径的影响 |
| 4.4 地西他滨长循环温度敏感脂质体冻干制剂稳定性考察 |
| 4.4.1 不同温度条件下脂质体外观形态的考察 |
| 4.4.2 光照条件下脂质体外观形态的考察 |
| 4.4.3 脂质体稳定性考察 |
| 5 讨论与小结 |
| 5.1 讨论 |
| 5.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 地西他滨及其长循环温度敏感脂质体药动学研究 |
| 1 仪器、动物和试剂 |
| 2 地西他滨体内分析方法的建立 |
| 2.1 血浆样品处理 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 质谱条件 |
| 2.4 分析方法确证 |
| 2.4.1 方法的专属性 |
| 2.4.2 标准曲线的制备 |
| 2.4.3 方法的精密度 |
| 2.4.4 血浆样品提取回收率考察 |
| 2.4.5 方法回收率实验 |
| 2.4.6 基质效应 |
| 2.4.7 血浆样品处理后及预处理前稳定性考察 |
| 3 地西他滨长循环温度敏感脂质体药动学实验设计 |
| 3.1 给药方案 |
| 3.2 样品采集与处理 |
| 3.3 药物动力学数据分析 |
| 4 讨论与小结 |
| 4.1 讨论 |
| 4.2 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 地西他滨长循环温度敏感脂质体体内外抗肿瘤作用研究 |
| 1 仪器、动物和材料 |
| 2 DAC-LTSL对小鼠黑色素瘤K1735M2细胞体外增殖的实验研究 |
| 2.1 试剂配制 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞生长抑制率的检测 |
| 2.3.1 细胞生长抑制作用的检测步骤 |
| 2.3.2 DAC-LTSL对K1735M2细胞生长抑制作用的量效曲线 |
| 2.3.3 DAC-LTSL对K1735M2细胞生长抑制作用的时效曲线 |
| 2.4 DAC-LTSL对K1735M2细胞周期的作用 |
| 2.4.1 DAC-LTSL对K1735M2细胞形态的作用 |
| 2.4.2 DAC-LTSL对K1735M2细胞周期的作用 |
| 3 DAC-LTSL对小鼠黑色素瘤体内抑制实验研究 |
| 3.1 B16细胞的培养 |
| 3.2 小鼠移植瘤模型的建立 |
| 3.3 实验动物分组与给药 |
| 3.4 检测指标及方法 |
| 3.4.1 对小鼠一般状况及体重的影响 |
| 3.4.2 抑瘤率的计算 |
| 3.4.3 统计学处理 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 对小鼠一般状况及体重的影响 |
| 3.5.2 体重及肿瘤抑制作用 |
| 4 小结与讨论 |
| 4.1 讨论 |
| 4.2 小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新点及其展望 |
| 致谢 |
| 发表学术论文 |
| 附件 |
四、大豆甙元对小鼠B16黑色素瘤细胞的分化诱导作用（论文参考文献）
- [1]赤小豆当归散对皮肤癌的防治作用研究[D]. 闫桂溪. 河南大学, 2020(02)
- [2]基于WNT通路筛选具有胃黏膜修复和黑色素瘤抑制活性的植物多酚[D]. 苟娜. 华南理工大学, 2020(02)
- [3]荸荠皮和浒苔的化学成分及其抗肿瘤、抗菌活性研究[D]. 徐小净. 东南大学, 2019(05)
- [4]灰星鲨鱼皮多肽的提取及生物活性的研究[D]. 王堡煊. 厦门大学, 2019(09)
- [5]酪氨酸酶新型抑制剂曲酸衍生物的合成及其抑制黑色素形成的作用机理[D]. 陈艳梅. 厦门大学, 2019(09)
- [6]重组人可溶性CD80乳酸菌的构建及其对小鼠移植瘤的治疗作用[D]. 林子青. 南方医科大学, 2017(01)
- [7]木鳖子对羟基桂皮醛对小鼠黑素移植瘤生长的抑制作用及机制研究[J]. 于向艳,崔雯萱,孙士萍,赵连梅,张超,单保恩. 中草药, 2016(10)
- [8]表皮葡萄球菌来源的脂肽衍生物调节黑色素瘤细胞增殖、分化与迁移的功能机制[D]. 王玥. 华东师范大学, 2014(04)
- [9]木鳖子对羟基桂皮醛诱导黑色素瘤细胞分化的实验研究[D]. 耿艺漫. 河北医科大学, 2013(12)
- [10]地西他滨抗肿瘤作用及其长循环温度敏感脂质体的研究[D]. 刘茜英. 沈阳药科大学, 2012(01)