一、同种异体原位心脏移植39例（论文文献综述）
曾顺[1]（2021）在《槲皮素干预心脏移植物血管病变的作用及机制初探》文中研究指明目的:研究槲皮素对大鼠心脏移植物血管病变是否具备干预作用及探讨初步机制。方法:予建立大鼠同种异体异位心脏移植模型。根据药物处理方式不同分为三组（每组12只）:A组（环孢素+槲皮素治疗组）,行腹部心脏移植,移植术后当天至实验结束均行环孢素灌胃（CsA,剂量10 mg/kg·d）1ml以及槲皮素腹腔注射（Que,剂量10 mg/kg·d）1ml;B组（环孢素治疗组）,行腹部心脏移植,移植术后当天至实验结束均行灌胃环孢素（CsA,剂量10mg/kg·d）1ml以及生理盐水1ml腹腔注射;C组（假手术组）,仅行腹部开关手术,移植术后当天至实验结束均予橄榄油1ml灌胃、生理盐水1ml腹腔注射。在心脏移植术后14、30天分别处死各组6只大鼠,取移植心脏,垂直心脏纵轴将心室肌切开,留取冠状血管分布较密集的部分,取一部分置入10%中性福尔马林液进行固定、脱水、石蜡包埋,并制成3μm切片,用于HE染色研究血管形态学变化。另取一部分冻存于-80℃备用;取各组受体大鼠下腔静脉血,离心取血清,保存于-20℃,备用。采用ELISA试剂盒检测受体大鼠血清中的TNF-α、VEGF;采用蛋白质印迹定量分析移植心脏组织中eNOS的含量。结果:1、各组各时间段获取移植心脏心率及跳动能力等级情况比较:同时间段A组同种异体心脏移植物心率较B组快,但均弱于C组;A组移植物跳动能力等级较B组显着提高。2、各组各时间点HE染色检测冠状动脉血管内膜结果比较:移植14、30天后,我们观察到A、B组冠状动脉血管内膜增生较C组形成明显。B组较A组新生内膜形成明显。3、各组各时间段血液中TNF-α的检测结果比较:14天处死大鼠血清检测,ELISA检测大鼠血清TNF-α示A组浓度为78.52±16.22 pg/ml,高于B组52.61±6.78 pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）,B组血清TNF-α浓度52.61±6.78 pg/ml,高于C组38.51±1.83pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）;30天处死大鼠血清检测,ELISA检测大鼠血清TNF-α示A组浓度为70.16±7.79pg/ml,高于B组49.49±10.57 pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）,B组血清TNF-α浓度49.49±10.57pg/ml,高于C组36.89±2.91 pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）;4、各组各时间段血液中VEGF的检测结果比较:14天处死大鼠血清检测,ELISA检测大鼠血清VEGF示A组浓度为26.54±1.57pg/ml,低于B组43.6±1.55pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）,B组血清VEGF浓度43.6±1.55pg/ml,高于C组16.08±0.92pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）;C组血清VEGF浓度16.08±0.92pg/ml,低于A组26.54±1.57pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）。30天处死大鼠血清检测,ELISA检测大鼠血清VEGF示A组浓度为35.91±1.21pg/ml,低于B组49.91±4.54pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）,B组血清VEGF浓度49.91±4.54pg/ml,高于C组16.17±1.43pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）,C组血清VEGF浓度16.17±1.43pg/ml,低于A组26.54±1.57pg/ml,差异存在统计学意义（p<0.05）。5、蛋白质印迹检测心脏移植物组织中eNOS的表达水平结果比较:该结果是运用蛋白质印迹法检测eNOS蛋白。14天获取移植物心脏组织中,A组eNOS的表达水平为0.23±0.04,高于B组0.06±0.01,差异存在统计学意义（p<0.05）;B组eNOS的表达水平为0.06±0.01,与C组0.06±0.03无显着性差异（p>0.05）。C组eNOS的表达水平为0.06±0.03,低于A组0.23±0.04,差异存在统计学意义（p<0.05）。30天获取移植物心脏组织中,A组eNOS的表达水平为0.43±0.02,高于B组0.19±0.01,差异存在统计学意义（p<0.05）;B组eNOS的表达水平为0.19±0.01,与C组0.17±0.02无显着性差异（p>0.05）。C组eNOS的表达水平为0.17±0.02,低于A组0.43±0.02,差异存在统计学意义（p<0.05）。结论:1.槲皮素具有提高大鼠心脏移植物的存活力及心脏跳动能力的作用;2.槲皮素可能对大鼠心脏移植物血管病变具有一定的预防作用,通过抑制VEGF的释放,延缓心脏移植物血管内膜的增生,通过介导eNOS信号通路的抗氧化损伤,减轻心脏移植物血管病变的发展,降低心脏移植物血管病变的发生率。
叶书林[2]（2021）在《木犀草素抑制小鼠同种异体器官移植排斥反应及其免疫调节机制研究》文中研究表明目的:同种异体器官移植是治疗终末器官衰竭的有效手段。为了维持移植物在受者体内的存活,往往需要长期服用免疫抑制剂。一方面,术后器官排斥反应因免疫抑制剂的使用得以降低;另一方面长期应用免疫抑制剂的不良反应严重影响移植物和移植患者的存活,是移植免疫学和临床医学研究亟待解决的一大难题。中药免疫调节相关的基础研究和临床研究取得许多新的进展,从中药中寻求高效、低毒的免疫抑制剂是当今移植免疫学领域的研究方向之一。木犀草素是一种黄酮类化合物,研究表明木犀草素具有许多药理作用,如抗炎、抗肿瘤、抗氧化和神经保护等。在免疫调节作用方面的研究中发现木犀草素可以抑制小鼠T细胞的增殖和活化,下调IFN-γ、IL-6、IL-5等细胞因子的表达,具有免疫抑制作用。此外,还可以通过诱导CD4+CD25T淋巴细胞向CD4+CD25+调节性T细胞分化来减轻气道炎症。然而,目前木犀草素对于同种异体器官移植排斥反应方面的作用研究仍为空白。由于皮肤上抗原呈递细胞很多,排斥反应比其他器官移植更强,若药物能抑制皮肤排斥反应,则更能抑制其他器官移植排斥。因此,本实验首先通过小鼠同种异体皮肤移植模型探讨木犀草素对移植排斥反应的作用,再以同种异体胰岛移植模型进行验证,研究木犀草素对小鼠同种异体器官排斥反应的作用,以及其免疫调节的作用机制。方法:1.木犀草素对小鼠同种异体皮肤移植排斥反应的研究建立小鼠皮肤移植模型,以BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体。造模成功后随机分为四组,分别为同种异体皮肤移植组（Control,灌胃,0.5%CMC-Na）、雷帕霉素组（Rapa,腹腔注射,1mg/kg）、木犀草素低剂量组（Lut-low,灌胃,25mg/kg）、木犀草素高剂量组（Lut-high,灌胃,50mg/kg）,观察木犀草素对移植皮片生存时间的影响,用中位存活时间（Mediansurvival time,MST）表示;移植10天后,取移植皮片检测炎症细胞浸润、CD3、Foxp3及相关细胞因子IFN-γ、IL-6、IL-10、TNF-α、IL-17a、Foxp3基因的表达情况;同时取移植小鼠脾脏和外周引流淋巴结检测CD4+CD44high CD62Llow 和 CD8+CD44high CD62Llow 效应 T 细胞、CD4+Foxp3+调节性 T细胞、CD11c+CD86+和CD11c+CD80+成熟树突状细胞的比例。木犀草素联合应用Anti-CD25删除小鼠体内Treg对小鼠皮肤移植反应的实验研究,分为四组:同种异体皮肤移植组（Control,灌胃,0.5%CMC-Na）、木犀草素高剂量组（Lut-high,灌胃,50mg/kg）、木犀草素高剂量联合同型对照组（Lut-H+Isotype,木犀草素50mg/kg灌胃联合Isotype抗体第0、3、6天0.2mg腹腔注射）,以及木犀草素高剂量联合Anti-CD25抗体组（Lut-H+PC61,木犀草素50mg/kg灌胃联合PC61抗体第0、3、6天0.2mg腹腔注射）,观察移植皮片生存时间,同时检测移植10天后脾脏和淋巴结中CD11c+CD86+和CD11c+CD80+成熟DC的比例。2.木犀草素对小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的研究以BALB/c小鼠胰岛细胞为供体,移植到STZ诱导的糖尿病C57BL/6小鼠肾包膜下,建立小鼠同种异体胰岛移植模型。造模成功后随机分为四组,分别为同种异体胰岛移植组（Control,灌胃,0.5%CMC-Na）、雷帕霉素组（Rapa,腹腔注射,1mg/kg）、木犀草素低剂量组（Lut-low,灌胃,25mg/kg）、木犀草素高剂量组（Lut-high,灌胃,50mg/kg）,观察木犀草素对移植后血糖的影响,用中位存活时间（Median survival time,MST）表示;移植10天后,取胰岛移植物检测胰岛素、炎症细胞浸润及CD3+T的表达情况;同时取移植小鼠脾脏和引流淋巴结通过流式细胞术检测CD4+Foxp3+Treg的比例。3.木犀草素调节小鼠T细胞功能的体外实验流式细胞术分选CD3+T淋巴细胞,采用CCK-8法检测木犀草素对体外CD3+T细胞的细胞毒性,CFSE法检测木犀草素对体外CD3+T淋巴细胞增殖的影响,ELISA检测CD3+T细胞上清液中细胞因子IFN-y、IL-10和IL-17a蛋白的表达水平,流式细胞术分选CD4+CD25-T,检测木犀草素干预后对CD4+CD25+Treg的分化情况,Western Blotting检测木犀草素干预后CD3+T细胞中AKT/mTOR信号通路的蛋白表达。结果:1.木犀草素对小鼠同种异体皮肤移植排斥反应的研究（1）与对照组相比,木犀草素低剂量组和高剂量组均能延长移植皮片的存活时间[MST=23.50±5.34（Lut-low）VS.16.50±2.74（Control）,P<0.05;MST=33.00±5.04（Lut-high）VS.16.50±2.74（Control）,P<0.01]。此外,与雷帕霉素组比较,木犀草素高剂量组在延长皮肤移植物存活率的作用差异无统计学意义（MST=33.00±5.04（Lut-high）VS.35.00±6.70（Rapa）,P>0.05）。（2）在移植皮片中,与对照组相比,木犀草素低剂量和高剂量组均能改善炎症细胞浸润,抑制CD3+T淋巴细胞浸润,上调Foxp3的表达,同时抑制促炎细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17amRNA的表达,上调IL-10和Foxp3mRNA的表达。（3）在受体小鼠淋巴器官脾脏和淋巴结中,与对照组相比,木犀草素低剂量和高剂量组均可显着降低CD4+CD44highCD62Llow和CD8+CD44highCD62Llow 效应 T 细胞以及 CD11c+CD86+和 CD11c+CD80+成熟 DC 的比例,同时显着增加引流淋巴结中CD4+Foxp3+Treg的比例（P<0.05或P<0.01）。（4）在应用Anti-CD25抗体删除Treg后,可逆转木犀草素延长移植皮片生存时间的作用,同时逆转对成熟DC的抑制作用（P<0.05或P<0.01）。2.木犀草素对小鼠同种异体胰岛移植排斥反应的研究（1）与对照组相比,木犀草素可延长移植术后胰岛的存活时间。（2）在胰岛移植区域,与对照组相比,木犀草素可减轻炎症细胞浸润。（3）在受体小鼠周围淋巴器官中,与对照组相比,木犀草素可上调移植后引流淋巴结中CD4+Foxp3+Treg的比例。3.木犀草素调节小鼠T细胞功能的体外实验（1）不同浓度的木犀草素（1.25、2.5、5、10和20μM）给药48h和96h后,仅20μM浓度木犀草素对T细胞有活力有明显抑制作用（P<0.01）。（2）在T细胞增殖实验中,与对照组相比,木犀草素低浓度（Lut-low,2.5μM）和木犀草素高浓度（Lut-high,5μM）组与雷帕霉素组（Rapa,0.1μM）一样,均能显着抑制T细胞的增殖（P<0.01）。（3）与对照组相比,木犀草素低浓度和高浓度组均能显着抑制CD3+T细胞上清液中IFN-y和IL-17a的蛋白水平（P<0.01）,并上调IL-10蛋白的表达水平（P<0.05或P<0.01）。（4）与对照组相比,木犀草素低浓度和高浓度组均能明显促使CD4+CD25-T细胞向CD4+Foxp3+Treg分化（P<0.01）。（5）木犀草素（无论低浓度还是高浓度）能有效抑制P-p70S6K、P-mTOR和P-AKT蛋白的表达（P<0.01）,而雷帕霉素组对P-AKT蛋白的表达无明显作用（P>0.05）。结论:我们实验结果揭示了不管是在小鼠同种异体皮肤移植模型中还是胰岛同种异体移植模型中,木犀草素均可显着延长移植物的存活时间,提示木犀草素可抑制同种异体器官移植排斥反应,其潜在的作用机制可能是通过抑制效应性T细胞的增殖、DCs的成熟,同时诱导CD4+Foxp3+Treg的分化,以及抑制AKT/mTOR信号通路的激活而实现的。因此,我们的研究填补了木犀草素在抑制移植反应作用方面的空白,木犀草素在自然界中来源广泛,无明显毒副作用,作为一种潜在的免疫抑制剂,具有进一步深入研究的价值。
涂丽裙[3]（2020）在《转化生长因子-β2反义寡核苷酸的微生物疫苗及肿瘤疫苗的佐剂作用》文中指出转化生长因子-β2（TGF-β2）对免疫应答有全方位的负调节作用,可调节几乎每一种适应性免疫应答和固有免疫应答的细胞,包括树突状细胞、T细胞、B细胞、粒细胞和固有免疫淋巴样细胞。使用免疫检查点抑制剂治疗肿瘤的成功案例提示我们:抑制免疫抑制性细胞因子TGF-β2可能是一种新的策略去研制新型疫苗佐剂。为了研制出以核酸为基础的TGF-β2的抑制剂,我们设计了三个靶向人鼠的TGF-β2 m RNA3’UTR保守区域的反义寡核苷酸,并将其命名为TIO1,TIO2,TIO3。在小鼠巨噬细胞,人单核细胞及人浆细胞样树突状细胞,TIO1,TIO2及TIO3均明显下调TGF-β2的表达。在小鼠中,TIO3和TIO1,均可显着增强微生物疫苗所诱导的抗体反应。其中TIO3为佐剂的流感疫苗可抵抗流感病毒的攻击并减轻流感病毒引起的急性肺损伤。在小鼠中,TIO3可明显下调淋巴结及脾脏细胞CD4+T细胞及CD19+B细胞上s TGF-β2的表达,上调CD19+B细胞及CD11c+DC表面CD40,CD80,CD86,CD69及MHC II分子的表达,促进CD4+T细胞和CD8+T细胞产生IFN-γ,促进CD4+T细胞产生IL-4,抑制调节性T细胞（Tregs）的产生,促进CD4+T细胞和CD19+B细胞的增殖与活化,促进流感病毒感染的小鼠的肺脏中CD4+T细胞和CD8+T细胞表面CD69的表达。总的来说,通过干扰TGF-β2的表达,TIO3或TIO1,可作为新型微生物疫苗佐剂增强疫苗诱导的抗体反应;此外,TIO3为佐剂的胶质瘤细胞裂解物疫苗可显着延长原位接种胶质瘤预防模型小鼠的生存期。TIO3可通过抑制人和小鼠的胶质瘤细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞表达TGF-β2,诱生胶质瘤特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞,激活NK细胞,促进CD4+T细胞和CD8+T细胞产生IFN-γ,上调胶质瘤细胞表面MHCI分子的表达进而增强胶质瘤疫苗的抗肿瘤功效。单独应用TIO3可通过抑制胶质瘤细胞表达TGF-β2、促进胶质瘤细胞表达MHC I,IL-17A及IFN-α、抑制CD4+T细胞和CD8+T细胞表达s TGF-β2、抑制Tregs的产生、促进CD4+T细胞及CD8+T细胞的增殖而明显延长原位接种胶质瘤预防模型小鼠的生存期。单独应用TIO3可通过抑制胃癌细胞表达TGF-β2,促进MHC I,IL-13,IL-15,IL-17及IFN-γ的表达而显着减少肿瘤体积、延长胃癌背部移植瘤小鼠的生存期。TGF-β2的反义寡核苷酸有潜能作为微生物疫苗和肿瘤疫苗的新型佐剂,或单独治疗胶质瘤和胃癌的候选药物。
陈帅[4]（2020）在《改良去污剂-联合酶法制备羊脱细胞气管支架及其性能评价》文中指出先天性畸形、肿瘤、损伤、感染等容易引起气管的坏死或者管腔的狭窄,在这种情况下,对病变气管的治疗往往刻不容缓。根据病变部位长度的不同,主要分为两种治疗方式,当其长度小于成人总长度的1/2或幼儿的1/3,气管切除并端端吻合为治疗的金标准,反之则需要进行气管移植。异体移植容易导致排斥反应,患者需长期使用免疫抑制剂,且出现移植物感染、坏死的概率较大。为了解决这个问题,脱细胞处理应运而生。该技术优势在于可在最大程度保持原生组织机械性能的基础上,获得异体组织无法比拟的生物相容性。本研究通过改进的去污剂联合酶法（Detergent-enzymatic method,DEM）对羊气管进行脱细胞处理,探讨不同周期脱细胞后气管结构、成分及机械完整性的影响,对比得出最佳脱细胞周期。目的 探究不同DEM脱细胞周期对羊气管结构、组成及机械性能的影响,通过对比遴选最佳脱细胞周期。方法 1.用改良DEM制备羊脱细胞气管支架;2.利用病理切片染色、扫描电子显微镜等对羊脱细胞气管的结构及组成进行评价;3.羊脱细胞气管支架的机械性能测试;4.羊脱细胞气管支架的体内埋植实验。结果 1.与原生气管相比,6个DEM循环脱细胞基本去除气管黏膜上皮,但并未对气管黏膜下组织造成明显破坏;绝大多数细胞核溶解,仅软骨保留少量细胞核;2.采用6个DEM循环制备的脱细胞支架可保持原生气管相似的力学性能,而7个循环将对气管力学性能产生明显破坏。3.相比原生气管,6个DEM循环制备的脱细胞支架在体内排斥反应较弱。结论 6个DEM循环可在有效降低羊气管免疫原性的基础上,具备与原生气管相似的组织结构及生物力学性能,且生物相容性良好,有望成为一种性能优良的气管替代材料。
陈亮[5]（2020）在《Treg细胞外泌体诱导移植肝免疫耐受的机制研究》文中提出[目的]优化提取方法,分离活化高质量、高增殖率的Treg细胞。证实Treg细胞除了通过直接接触抑制CD8+T细胞增殖外,也可以通过非接触方式抑制CD8+T细胞增殖。证实Treg细胞对CD8+T的抑制是可以通过exosomes实现的。Treg及其 exosomes 可通过 microRNA-194-1-3p 靶向 LAT1（Slc7a5）调控 mTOR 信号传导通路,影响氨基酸的转运,从而抑制CD8+T细胞增殖。建立SD大鼠供体,Wistar大鼠异体原位肝移植模型,通过动物体内实验证实Treg-exosomes对同种异体肝移植的保护作用。[方法]1、Treg细胞对CD8+T细胞功能和增殖影响:取BALB/C小鼠脾脏,分别采用磁珠吸附分选和流式分选Treg细胞。分离得到的Treg细胞通过CD3、CD28、IL-2单克隆抗体以及Rapamycin共同活化并扩增。CD8+T细胞采用磁珠吸附分选,通过CD3、IL-2单克隆抗体活化CD8+T细胞。采用Transwell系统及直接共培养Treg细胞和CD8+T细胞。采用CCK-8检测不同时间点CD8+T细胞增殖情况,以及通过PI染色分析CD8+T细胞细胞周期变化情况。2、Treg-exosomes对CD8+T细胞功能和增殖影响:收集Treg细胞上清液,分别采用exosomes提取试剂盒和超高速差速离心法两种方法提取exosomes,并通过western blot检测CD63表达,确定不同培养时间Treg细胞上清液不同提取方法中exosomes的含量。通过电镜分析以及粒径分析和western blot检测CD63、LAPMP-1蛋白表达三方法,共同鉴定提取的exosomes。构建绿色荧光蛋白（GFP）标记的CD63慢病毒,感染Treg细胞,并在荧光显微镜检测感染效率,提取带荧光的Treg-exosomes感染活化的CD8+T细胞,共聚焦荧光显微镜检测感染效率。按照下面分组进行干预细胞:a对照组:正常培养的CD8+T细胞;b共培养组:Treg细胞和CD8+T细胞组;c高剂量exosomes组:在CD8+T细胞中加入40ug Treg细胞来源的exosomes;d低剂量exosomes组:在CD8+T细胞中加入10ug Treg细胞来源的exosomes;e抑制剂Treg组:活化Treg细胞加入GW48692小时后与CD8+T细胞共培养;f抑制剂exosomes组:在CD8+T细胞中加入40ug Treg细胞来源的exosomes的同时加入GW4869。采用CCK-8检测不同时间点上面6组CD8+T细胞增殖情况及细胞周期变化情况,同时通过QPCR、Western blotting、流式细胞术检测CD8+T细胞分泌细胞因子IFNλ和Perforin的表达情况。3、Treg 细胞及其 exosomes 可通过 microRNA-194-1-3p靶向LAT1（Slc7a5）调控mTOR信号通路:收集Treg细胞和exosomes干预后CD8+T细胞,使用microRNA芯片检测筛选差异microRNA,并进行QPCR验证、靶基因预测、靶基因GO和KEGG分析。生物信息学预测网站预测microRNA-194-1-3p与LAT1（Slc7a5）的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因实验证实。mumics和inhibitor转染CD8+T细胞,QPCR检测mmu-miR-194-1-3p和Slc7a5基因的变化情况,mmu-miR-194-1-3p mimics 和 inhibitor 干预 CD8+T 细胞检测 CD8+T 细胞增殖情况。通过 western blot 检测 mmu-miR-194-1-3p的mimics 和 inhibitor 干预 CD8+T细胞后靶基因Slc7a5和p-mTOR蛋白表达情况。4、Treg-exosomes对同种异体肝移植保护作用:本实验通过Kamada“二袖套”法,建立Wistar大鼠异体原位肝移植模型,分为A、B两组,术后第4天开始均给予雷帕霉素,A组在第1、3、5天注射Treg细胞中提取的exosomes。术后3day、11day、18day尾静脉取血浆检查ALT、TBIL水平,同时观察存活时间。[结果]1、Treg细胞对CD8+T细胞功能和增殖抑制作用:流式细胞术鉴定流式分选和磁珠吸附分选Treg细胞CD4+CD25+Treg阳性比率分别为93.2%和87%,CD8+T细胞磁珠吸附分选阳性比率为91.44%。Treg细胞与CD8+T细胞共培养后CCK-8检测结果显示,无论是Transwell系统共培养还是直接共培养,CD8+T细胞增殖都显着下降（均P<0.05）。共培养后增殖周期检测结果显示,GO/G1期的CD8+T细比例显着增加,S期和G2/M期都表现出更少的富集细胞。2、Treg-exosomes对CD8+T细胞功能和增殖抑制作用:（1）Western Blot检测结果显示,聚合沉淀法提取的exosomes CD63表达明显高于超速离心法。透射电镜下观察exosomes是圆形或类圆形的,直径分布在30-150nm的范围内。Western Blot检测结果显示exosomes中CD63、LAPMP-1蛋白均呈阳性表达。荧光显微镜观察慢病毒感染Treg细胞,48h后显示荧光表达含量达到70%以上。共聚焦荧光显微镜可以观察到Treg-exosomes感染了 CD8+T细胞。（2）Treg-exosomes与CD8+T细胞共培养后,CCK-8检测CD8+T细胞增殖情况显示:Treg-exosomes与活化CD8+T细胞共培养后,CD8+T细胞的增殖明显降低,而且在高剂量exosomes组中抑制作用更为明显。而预先在Treg中加入了 GW4869抑制exosomes的分泌,结果显示Treg细胞对CD8+T细胞的抑制作用减弱了。流式细胞仪检测CD8+T细胞周期情况得到了相似的结果。（3）QPCR、Western blotting和流式细胞术检测perforin、IFN-γ。结果显示,Treg细胞以及高剂量exosomes干预CD8+T细胞后IFN-γ和Perforin蛋白表达明显下调（均P<0.05）,相比之下,Treg细胞加入GW4869后IFN-y和Perforin蛋白表达无明显变化。3、Treg 细胞及其 exosomes 通过 microRNA-194-1-3p靶向LAT1（S1c7a5）调控mTOR信号通路:基因芯片及QPCR验证Treg细胞及exosomes一致变化的有13个microRNA。双荧光素酶报告基因实验证实,mmu-miR-194-1-3p与S1c7a5基因3’-UTR靶向结合。细胞转染构建高表达miR-194-1-3p和低表达miR-194-1-3p的细胞株检测mRNA和蛋白水平表达的变化,结果提示miR-194-1-3p与Slc7a5、p-mTOR在CD8+T细胞中的表达呈直接负相关。高表达miR-194-1-3p可以显着抑制CD8+T细胞的增殖,G0/G1、G2/M期表现细胞显着增加而S期表现细胞显着减少。4、Treg-exosomes对同种异体肝移植保护作用:术后第3天时A组的ALT、TBIL水平较B组的低,但差别不大,第11天时两组的ALT、TBIL水平均有降低,但A组更为明显,两组之间有显着差异（P<0.05）。到第18天时两组的ALT、TBIL水平继续有降低,但仍然是A组降低更为明显（P<0.05）,两组之间有显着差异。注射Treg-exosomes大鼠存活时间明显延长。对照组（B组）在移植后有28天的中位存活时间,而Treg-exosomes治疗组（A组）的存活时间明显更长,达到90天。[结论]1、通过磁珠吸附分选得到的Treg细胞,在CD3/CD28单抗、雷帕霉素、IL-2刺激培养下,可以良好增殖。Treg细胞对CD8+T细胞的增殖具有明显抑制作用,Treg细胞对CD8+T细胞既可以通过细胞间直接接触,也可以通过非直接接触的方式抑制CD8+T细胞增殖。2、通过ExoQuick precipitation法可以提取到更多的Treg细胞exosomes,同时显示Treg细胞培养72h收集上清得到的exosomes量更多。Treg细胞可以被pCT-CD63-GFP慢病毒转染且标记其分泌的exosomes,并可以直观地观察到Treg分泌的exosomes转移并整合到CD8+T细胞内。Treg细胞可以通过分泌exosomes影响CD8+T细胞的细胞周期分布,抑制CD8+T细胞增殖,以及抑制其分泌穿孔素以及IFN-γ。3、Treg细胞及其分泌的exosomes可以通过miR-194-1-3p发挥其对CD8+T细胞的抑制作用。miR-194-1-3p可能通过靶向下调LAT1（Slc7a5）抑制mTOR信号传导通路,影响氨基酸的转运,从而抑制CD8+T细胞增殖。4、同种异体肝移植大鼠注射Treg细胞来源的exosomes后同,移植大鼠存活时间明显延长。Treg-exosomes在大鼠体内发挥免疫抑制作用需要一定的反应时间,且随着时间的推移有进一步扩大的趋势。
张鹏[6]（2020）在《花椒毒酚在大鼠同种异体移植物血管病中的作用及相关机制研究》文中研究说明目的:探讨花椒毒酚（xanthotoxol）在大鼠心脏移植物血管病（cardiac allograft vasculopathy,CAV）中对移植动脉血管的保护作用及其相关机制。方法:（1）以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体（Wistar to SD）将大鼠随机分为对照组,模型组和药物组（n=15）,模型组和药物组再分为1周组,4周组和8周组（n=5）。采用动脉套管法,将供体大鼠胸主动脉固定于自制的套管上,植入到受体大鼠腹腔动脉中,药物组在关腹前注入花椒毒酚10mg/kg,之后每天灌胃给药,模型组在术后第一天起同剂量生理盐水灌胃作对照。（2）在各观察时间点,处死大鼠后取出移植动脉,常规行HE染色和免疫组织化学染色,观察动脉形态变化,测量各期动脉内膜增厚情况,并计算各组ICAM-1、TNF-α、SMA-α,TGF-β1和NF-κB/P65表达的平均光密度值。结果:（1）每组大鼠都存活到各观察时间点,药物组大鼠无明显不良反应。模型组在第4周动脉管壁出现大量炎症细胞的浸润,第8周动脉被侵蚀、管壁机化,内膜增厚明显,药物组在第4周和第8周炎症细胞浸润明显减少,管壁较完整,新生内膜可见完好的内皮细胞层和增殖的平滑肌细胞;（2）与模型组相比,药物组在第8周动脉内膜/中膜比值明显减小（P=0.004）,其中ICAM-1的平均光密度值在第4周（P=0.006）和第8周（P=0.017）明显降低,TNF-α的表达量比同期模型组都显着降低（P<0.01）,α-SMA的表达量在第4周（P=0.002）和第8周（P=0.005）明显增加,TGF-β1在第1周（P<0.001）和第4周（P=0.022）表达量明显减少,同时NF-κB/P65的表达量在第4周（P=0.016）和第8周（P=0.032）也明显降低。结论:花椒毒酚对心脏移植物血管病有一定防治作用,其能降低大鼠心脏移植物血管病中ICAM-1,TNF-α,TGF-β1的表达水平,保留部分平滑肌细胞的收缩表型,改善血管形态,其机制可能与部分抑制NF-κB/P65的活化相关。
邱从来[7]（2020）在《供体兔获取前高钠血症对受体兔移植肾预后影响的研究》文中认为【目的】通过建立供体兔高钠血症模型及新西兰白兔异体原位肾移植模型,观察高钠血症组受体兔与正常血钠组受体兔肾移植术后尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）、血清肌酐（Serum creatin,Scr）及尿量情况,并比较两组移植肾组织病理变化及移植肾组织中血管平滑肌α肌动蛋白（α-SMA）的表达水平,初步探讨供体兔获取前高钠血症对受体兔移植肾预后的影响,为加强临床供体器官维护,保障供肾质量提供参考。【方法】选取60只健康成年雄性新西兰白兔,按照随机数字表法随机分为A、B两组,每组各30只,A组为高钠血症组,B组为正常血钠组。然后再次按照随机数字表法将A、B两组各自分为两组,即供体组、受体组。A组供体予以经过高钠血症造模,B组供体对照处理。获取并修整供体组左肾,对应供受体组间进行同种异体原位肾移植术,再切除受体右肾。术后常规环孢素抗排斥治疗,收集两组受体白兔术后第1、3、5、7天的尿素氮、血肌酐及尿量情况,并于术后第7天处死受体兔,获取移植肾组织进行病理检查,比较两组移植肾组织病理结构变化及移植肾组织α-SMA的表达情况。【结果】1、尿素氮变化高钠血症组受体兔术后第1、3、5天尿素氮值分别为（22.28±3.84）mmol/L、（18.88±3.88）mmol/L、（17.10±4.06）mmol/L,正常血钠组受体兔尿素氮值分别为（19.10±2.75）mmol/L、（16.04±2.55）mmol/L、（13.10±2.01）mmol/L,两者比较,P<0.05,表明术后第1、3、5天两组尿素氮值差异具有统计学意义;高钠血症组受体兔术后第7天尿素氮值为（14.55±3.26）mmol/L,正常血钠组尿素氮值为（12.61±2.71）mmol/L,两者相比较,P>0.05,表明术后第7天两组尿素氮值差异无统计学意义。2、血肌酐变化高钠血症组受体兔术后第1、3天血清肌酐值分别为（337.49±12.96）umol/L、（233.43±18.58）umol/L,正常血钠组受体兔血清肌酐值分别为（324.61±18.09）umol/L、（215.42±15.69）umol/L,通过比较,P<0.05,表明术后第1、3天两组血肌酐值差异有统计学意义;高钠血症组受体兔术后第5、7天血肌酐值分别为（134.07±13.20）umol/L、（126.53±9.66）umol/L,正常血钠组受体兔血肌酐值分别为（129.79±11.38）umol/L、（123.35±8.23）umol/L,两者数据无明显差别,通过比较,P>0.05,表明术后第5、7天两组血肌酐值差异无统计学意义。3、尿量变化高钠血症组受体兔术后第1、3天尿量分别为（85.86±7.77）ml、（98.79±10.12）ml,正常血钠组受体兔术后尿量分别为（93.16±10.61）ml、（111.86±10.36）ml。两者数据通过比较,P<0.05,表明术后第1、3天两组尿量差异有统计学意义;高钠血症组受体兔术后第5、7天尿量分别为（150.43±11.25）ml、（157.02±11.37）ml,正常血钠组受体兔术后第5天、第7天尿量分别为（158.83±12.95）ml、（166.05±13.02）ml,两者相比较,P>0.05,表明术后第5、7天两组尿量差异无统计学意义。4、移植肾脏病理检查两组移植术后第7天肾组织切片经过苏木精-伊红染色（HE染色）,光学显微镜下观察发现两组肾脏都可见肾小管管腔扩张,有炎症细胞浸润,部分肾小管凝固性坏死,肾间质水肿。比较两组肾组织形态损伤评分,P>0.05,差异不具有统计学意义。同时将高钠血症组及正常血钠组肾移植术后第7天肾组织进行Masson三色染色,高钠血症组部分肾小管间质发现胶原纤维蓝色染色,提示纤维化形成,正常血钠组肾小管间质未发现明显纤维化。5、移植肾α-SMA免疫组化检测高钠血症组术后第7天移植肾α-SMA阳性表达率为（12.65±3.01）%,正常血钠组术后第7天移植肾α-SMA表达率为（3.12±1.16）%,高钠血症组术后移植肾组织α-SMA表达率高于正常血钠组术后移植肾α-SMA表达率,P<0.001,差异具有统计学意义。【结论】供体兔获取前诱导急性高钠血症可能导致供肾急性肾损伤;供体获取前高钠血症对受体移植肾72h内肾功能恢复有所影响;高钠血症可能是诱导移植肾脏发生纤维化的一个重要因素。
胡永浩[8]（2020）在《CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究》文中认为背景:目前在临床实践中,对于那些患有终末期疾病或者患有先天性器官缺陷的患者,器官移植的实施已经成为了一种行之有效的治疗手段。免疫抑制剂的研发和应用在器官移植的发展过程中起到了不可或缺的作用,虽然现有的免疫抑制方案也在朝着个体化和联合用药的方向不断地进行优化,但是其长期应用仍然会带来许多免疫抑制剂相关的并发症,比如:感染、肿瘤和器官损伤等。此时,间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）的发现和应用,为抑制移植排斥反应带来了新的选择。MSC是一种多能干细胞,能够分化多种谱系包括脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。研究表明MSC能够抑制机体的免疫功能,而且在器官移植中应用能够使移植受体获益。与常用的免疫抑制剂相比,MSC更安全,也能避免免疫抑制剂相关的副作用。但是,若将MSC的应用于临床治疗,其也存在自身的局限性（有创的获取方式以及相关的并发症,有限的增殖能力以及来源短缺等）。然而,一种新发现的类间充质干细胞:子宫内膜再生细胞（Endometrial regenerative cell,ERC）,其不仅拥有与MSC相似的免疫调节功能,并且具有高增殖率、低免疫原性、广泛扩增等特点,最重要的是ERC能够无创的从无限来源的月经血中提取出来。不仅如此,相关的研究也已经发现ERC在器官移植中具有诱导免疫耐受和保护器官移植物的作用。然而,ERC发挥免疫抑制的机制尚不清楚,仍需要进一步的研究。与此同时,我们发现ERC表面能够表达5’-核苷酸外切酶（Ecto-5’-nucleotidase,CD73）。CD73是细胞外腺苷（Adenosine,ADO）生成过程中的限速酶,而ADO又可以与其下游的受体结合,发挥相应的生物学功能。因此,阐明ERC表达CD73对其在免疫调节过程中发挥作用的机制将会对ERC的应用具有极大的指导意义。所以,本课题聚焦于CD73表达对ERC在体内和体外调节免疫细胞过程中的影响和机理。课题的成功实施将会为ERC的临床转化和规范化应用提供坚实的理论和实践依据。目的:分离提纯ERC并验证其表面能够稳定表达CD73。探究ERC表面所表达的CD73的体外催化功能及其在体外培养中对树突状细胞、巨噬细胞和调节T细胞的调控作用。探讨CD73表达对ERC延长同种异体心脏移植物生存时间及抑制免疫排斥反应发生的作用机制。方法:本研究主要由三个部分构成:第一部分,从健康女性志愿者的月经血中提取ERC并进行体外培养;通过流式细胞术鉴定ERC的细胞表型;通过细胞的免疫荧光实验再次验证ERC表面CD73的表达。第二部分,使用Pi Color Lock TM磷酸检测试剂盒检测ERC表面的CD73在体外催化单磷酸腺苷（Adenosine monophosphate,AMP）分解为ADO的能力;通过体外培养研究CD73表达对ERC体外调控树突状细胞（Dendritic cell,DC）,巨噬细胞和调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）分化增殖能力的影响,并通过流式细胞术检测细胞群数量的变化。第三部分为体内实验,建立小鼠同种异体异位心脏移植模型;体内探究ERC表面表达CD73在其抑制小鼠同种异体异位心脏移植排斥反应中的作用以及相应的作用机制。结果:第一部分:成功的从志愿者的月经血中提取出ERC,并且实现了体外扩增;流式细胞术结果显示ERC可以稳定表达CD90、CD105、CD73,低表达CD39;ERC免疫荧光的结果也显示CD73表达在ERC的细胞膜上。第二部分:ERC表面的CD73在体外可以催化AMP水解为ADO,并且CD73的功能可以被抗CD73单克隆抗体阻滞;ERC表面的CD73被阻滞后其体外抑制成熟DC增殖的能力会下降,促进2型巨噬细胞（Macrophages type 2,M2）和Treg增殖的能力也会被抑制。第三部分:成功制备了小鼠同种异体异位心脏移植模型;ERC表面的CD73功能被阻滞后其延长移植物生存时间,减轻移植物病理改变,减轻CD4+和CD8+细胞浸润,上调耐受性树突状细胞（Tolerogenic dendritic cells,Tol-DC）、M2、Treg的比例,减少促炎因子IFN-γ和TNF-α分泌,增加抗炎因子IL-10分泌以及促进心肌组织A2B受体表达等功能均受到抑制。结论:通过三部分的实验研究,可以得出以下结论:1)可以从健康适龄女性志愿者的月经血中提取出表型稳定的ERC,并且ERC的表面可以稳定表达CD73。2)ERC表面表达的CD73体外具有催化AMP脱磷酸分解为ADO的能力,并且CD73的功能可以被抗CD73单克隆抗体阻滞,同时表达CD73对ERC发挥抑制DC细胞成熟、促进M2和Treg增殖的作用极其重要。3)表达CD73的ERC可以抑制小鼠同种异体心脏移植排斥反应,延长移心脏移植物的生存期。因此,课题的成功实施为ERC的临床转化和规范化应提供了理论和实践依据。
徐澈[9]（2020）在《小鼠肺移植后缺血再灌注损伤的影响及其机制研究》文中提出第一部分:冷缺血时间对肺移植后缺血再灌注损伤及原发性肺功能障碍的影响及机制研究原发性移植物功能障碍（PGD）是肺移植后发病和死亡的主要原因。而缺血再灌注损伤（IRI）是导致PGD的关键事件,尽管复杂的相互作用会影响供体肺的状态,例如先前存在的脑死亡（BD）,失血性休克（HS）和植入前的肺部的保存运输情况,后者被认为很重要是PGD的重要危险因素。我们假设多重打击肺移植小鼠模型与PGD的联系比单独IRI更紧密。在近交系C57BL/6小鼠之间进行左肺原位移植。通过在植入前0、1、72或96小时诱导供体肺部冷缺血（CI）,建立IRI模型。通过在24小时CI前诱导24小时的HS和/或3小时BD来建立多重打击模型。移植后24小时处死受体,并分析肺移植样品。在IRI的一次打击模型中,长达72小时的CI时间导致24小时再灌注后小动脉附近出现少量的细胞浸润;将CI时间延长至96小时会导致24小时再灌注后细胞浸润和坏死性途径激活增加,而没有凋亡迹象。与单独的IRI相比,在PGD多重打击模型中,“HS+BD+IRI”处理显示肺损伤,细胞浸润以及坏死性凋亡和凋亡信号通路的激活增加。受体相互作用蛋白激酶1激酶抑制剂（necrostatin-1）处理后的IRI组和多重打击模型组,均导致下游的凋亡通路激活明显减少。因此,延长CI后,坏死性凋亡通路的激活是IRI的中心事件,尽管它可能不足以单独导致PGD。CI诱导的IRI后的供体肺的病理学评估,以及我们多重打击模型中的移植前供体肺的情况,证实了肺原始损伤与PGD的相关性。我们的研究结果认为,原先存在的供体肺部状态比CI时间对PGD的发生发展炎症通路激活更为重要,这可能对供体肺部恢复具有重要的临床意义。第二部分:保护性肺通气将供体肺的可耐受热缺血时间延长至心脏死亡后12小时如果肺脏可以被纳入心脏死亡后器官捐献（DCD）的选择范围,则肺供体库将大大增加。然而,心脏死亡的患者肺部特征在于难以控制的热缺血（WI）时间,而其极有可能参与严重缺血再灌注损伤（IRI）及早期移植物功能障碍,并且由于必须在心脏死亡后立即进行肝素给药而存在伦理和法律障碍。目的:确定心脏死亡后不给予肝素的供肺,是否可以通过通气处理改善移植物功能,并确定其参与IRI的分子机制。方法:首先,采用小鼠短暂性单侧左肺动脉夹闭（PAC）4或5小时而无支气管受累的小鼠手术模型,评估正常通气的肺在缺血而不缺氧的条件下,对I/R损伤进行评估,以评估肺功能。然后在近交C57BL/6小鼠之间进行原位左肺移植（OLT）。DCD供体小鼠被随机分为三组,分别在PAC 4小时（PAC-LTx）、37℃环境下100%纯氧通气4小时（37V4-LTx）或37℃环境下不通气放置4小时（37N4-LTx）后进行小鼠原位左肺移植处理,以达到240分钟的WI时间,移植后24小时检测移植物功能,促炎细胞因子和分子途径激活情况。结果:37N4-LTx组的肺部形成气道上皮肿胀,血气严重受损,中性粒细胞和单核细胞浸润明显增加。与PAC-LTx组的移植物相比,通气处理的肺表现出较好的费功能,未发生炎症细胞和炎性细胞因子（IL-6,HMGB1和MCP-1）的浸润。这些作用是由37N4-LTx组中cl-caspase-3和caspase-9的高表达导致的凋亡途径激活介导的。WI后240分钟结束时,37N4-LTx组供体肺组织5’-三磷酸腺苷（ATP）水平显着高于37V4-LTx组。结论:供体保护性肺通气策略可延长热缺血耐受时间,同时避免肝素化,有利于DCD肺移植的开展。
景启明,王睿,陈鑫[10]（2019）在《同种异体原位心脏移植36例临床分析》文中研究说明目的分析同种异体原位心脏移植患者的临床疗效。方法回顾性分析2014年1月1日至2019年1月1日于南京市第一医院心脏中心实施的36例同种异体原位心脏移植患者的临床资料,其中男31例、女5例,年龄23～65（46.2±8.8）岁。受体患者原发病包括扩张型心肌病33例,终末期冠心病2例及终末期瓣膜性心脏病1例。心脏移植手术术式均采用双腔静脉吻合法。术中免疫诱导均采用巴利昔单抗与甲强龙联合治疗。术后均采用新三联免疫抑制方案:FK506+骁悉+泼尼松。结果围手术期1例患者因严重感染死亡。心力衰竭8例,经调整及主动脉内球囊反搏（IABP）辅助治疗后心功能均好转。肾功能衰竭5例,经连续性肾脏替代治疗（CRRT）后,肾功能均恢复正常。术后随访3～49（16±4）个月,1例患者术后1年因移植物功能衰竭死亡,1年生存率为97.1%（34/35）。其中10例为边缘供体,与常规供体比较差异无统计学意义。结论对于终末期心脏病,心脏移植是有效的治疗手段之一,近中期疗效满意。合理应用IABP、CRRT等辅助治疗手段和新三联抗排异方案,可显着提高心脏移植手术成功率,减少急、慢性排斥反应的发生。边缘供体的应用,可以在一定程度上缓解目前供体短缺的现状。
二、同种异体原位心脏移植39例（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、同种异体原位心脏移植39例（论文提纲范文）
（1）槲皮素干预心脏移植物血管病变的作用及机制初探（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 心脏移植物血管病变研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）木犀草素抑制小鼠同种异体器官移植排斥反应及其免疫调节机制研究（论文提纲范文）
| 答辩委员会名单及评定意见 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 移植免疫概述 |
| 一、器官移植排斥反应概述 |
| 二、调节性T细胞在移植免疫中的作用 |
| 三、DC细胞在移植免疫中的作用 |
| 第二节 免疫抑制剂在器官移植中的作用 |
| 一、免疫抑制剂分类 |
| 二、雷帕霉素 |
| 第三节 中医药在器官移植中的研究进展 |
| 一、中医药对移植前后的病因病机认识 |
| 二、中医药对移植前后的辨证认识 |
| 三、中药对器官移植的治疗 |
| 第四节 木犀草素的研究进展 |
| 一、木犀草素药代动力学及生物利用度的研究进展 |
| 二、木犀草素药理作用的研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 木犀草素对小鼠皮肤移植排斥反应的实验研究 |
| 一、小鼠同种异体皮肤移植模型的建立 |
| 二、木犀草素对小鼠同种异体皮肤移植排斥反应的作用 |
| 三、木犀草素联合应用Anti-CD25抗体删除Treg对小鼠皮肤移植反应的影响 |
| 四、讨论 |
| 第二节 木犀草素对小鼠胰岛移植排斥反应的实验研究 |
| 一、小鼠同种异体胰岛移植模型的建立 |
| 二、木犀草素对小鼠胰岛移植的作用 |
| 三、讨论 |
| 第三节 木犀草素调节小鼠T细胞功能的体外实验 |
| 一、实验内容 |
| 二、讨论 |
| 第三章 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、创新性 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（3）转化生长因子-β2反义寡核苷酸的微生物疫苗及肿瘤疫苗的佐剂作用（论文提纲范文）
| 提要 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 文章缩略词表 |
| 引言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 TGF-β的概述 |
| 1.1.1 TGF-β的来源 |
| 1.1.2 TGF-β的表达 |
| 1.1.3 TGF-β的结构 |
| 1.1.4 TGF-β的信号通路 |
| 1.2 TGF-β的生物学活性 |
| 1.2.1 TGF-β对胚胎发育的调节 |
| 1.2.2 TGF-β对免疫应答的负向调节 |
| 1.2.3 TGF-β2对肿瘤的生长,侵袭及迁移的促进作用 |
| 1.2.4 TGF-β对组织损伤修复、创面愈合、瘢痕增生的促进作用及炎症反应的抑制作用 |
| 1.2.5 TGF-β2对纤维化的调节作用 |
| 1.2.6 TGF-β对肿瘤的抑制作用 |
| 1.3 靶向TGF-β2的药物 |
| 1.3.1 TGF-β2的反义寡核苷酸 |
| 1.3.2 TGF-β2的micro RNA |
| 1.3.3 TGF-β2的sh RNA |
| 1.3.4 TGF-β2的抗体 |
| 1.3.5 TGF-β2的反义基因修饰的同种异体肿瘤疫苗 |
| 1.3.6 TGF-β2的反义基因修饰的同种异体肿瘤疫苗 |
| 1.3.7 TGF-β2的抑制剂 |
| 1.4 疫苗佐剂的概述及其研究进展 |
| 1.4.1 增强第一信号的佐剂 |
| 1.4.2 增强第二信号的佐剂 |
| 1.4.3 增强第三信号的佐剂 |
| 1.4.4 抑制T细胞抑制信号的佐剂 |
| 1.4.5 改善肿瘤免疫抑制微环境的佐剂 |
| 1.4.6 病毒载体佐剂 |
| 1.4.7 其他佐剂 |
| 1.4.8 多佐剂肿瘤疫苗 |
| 1.4.9 佐剂的接种途径 |
| 1.4.10 佐剂发挥作用的机制 |
| 1.5 RNA靶向性寡核苷酸的研究进展 |
| 1.5.1 反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotide) |
| 1.5.2 siRNA |
| 1.5.3 micro RNA |
| 1.5.4 反义寡核苷酸的化学修饰方法 |
| 第2章 材料方法 |
| 2.1 ODN及引物 |
| 2.2 实验试剂,仪器与耗材 |
| 2.3 细胞与细胞系 |
| 2.4 实验动物 |
| 2.5 IAV的扩增 |
| 2.6 IAV TCID50 的测定 |
| 2.7 IAV血凝效价的测定 |
| 2.8 聚合酶链式反应(RT-PCR) |
| 2.9 小鼠PBMC、脾脏及淋巴结单细胞悬液的制备 |
| 2.10 TIO对 TGF-β2 m RNA表达的抑制实验 |
| 2.11 流式细胞术(Flow cytometry) |
| 2.12 蛋白免疫印迹实验(Western Blotting analysis) |
| 2.13 免疫荧光技术 |
| 2.14 TIO在小鼠器官和组织中的分布检测 |
| 2.15 小鼠的免疫 |
| 2.15.1 疫苗的制备 |
| 2.15.2 小鼠的免疫和血清的收集 |
| 2.16 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 2.17 流感病毒攻毒实验 |
| 2.18 小鼠肺组织的病理学观察 |
| 2.19 脑胶质瘤细胞裂解物(TCL)的制备 |
| 2.20 GL261脑胶质瘤原位模型的建立 |
| 2.21 脑胶质瘤预防模型的建立 |
| 2.22 脑胶质瘤治疗模型的建立 |
| 2.23 肿瘤周围浸润的炎性细胞的检测 |
| 2.24 肿瘤组织病理分析 |
| 2.25 胃癌背部移植瘤模型的建立 |
| 2.26 统计学分析 |
| 第3章 研究结果 |
| 3.1 靶向TGF-β2的反义寡核苷酸的设计与筛选 |
| 3.2 TIOs对 RAW264.7 细胞,U-937 细胞及CAL-1 细胞表达TGF-β2的影响 |
| 3.2.1 TIOs对 IL-4 诱导的RAW264.7 细胞TGF-β2 m RNA表达的影响 |
| 3.2.2 TIOs对 IL-4诱导的RAW264.7细胞Arg1及TNF-αmRNA表达的影响 |
| 3.2.3 TIOs对 LPS诱导的RAW264.7 细胞TGF-β2 mRNA表达的影响 |
| 3.2.4 TIOs对 LPS诱导的U-937 细胞表达TGF-β2 mRNA的影响 |
| 3.2.5 TIOs对甲型流感病毒(IAV)诱导的CAL-1 细胞TGF-β2mRNA表达的影响 |
| 3.2.6 TIOs对 IL-4/LPS诱导的RAW264.7/U-937细胞表达TGF-β2蛋白的影响 |
| 3.3 TIO3在细胞和组织中的分布 |
| 3.4 TIOs的微生物疫苗佐剂效应 |
| 3.4.1 TIOs对微生物疫苗诱导的抗体产生水平的影响 |
| 3.4.2 TIO3对流感病毒疫苗诱导的抗流感病毒效率的增强作用 |
| 3.4.3 TIO1和TIO3 的微生物疫苗佐剂效应的可能机制 |
| 3.4.4 TIOs的微生物疫苗佐剂的安全性评价 |
| 3.5 TIO的胶质瘤疫苗的佐剂作用 |
| 3.5.1 TIOs为佐剂的胶质瘤细胞裂解物疫苗对原位接种脑胶质瘤预防模型小鼠的影响 |
| 3.5.2 TIOs为佐剂的胶质瘤疫苗对原位接种胶质瘤治疗模型小鼠生存期的影响 |
| 3.6 单独应用TIO3的抗胶质瘤及抗胃癌作用 |
| 3.6.1 单独应用TIO3对脑胶质瘤原位移植瘤模型小鼠生存期的影响 |
| 3.6.2 单独应用TIO3对胃癌背部移植瘤模型小鼠体重、肿瘤大小及生存期的影响 |
| 3.6.3 单独应用TIO3对胃癌细胞腹腔种植模型小鼠生存期的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 TIOs的微生物疫苗佐剂效应 |
| 4.1.1 TIO3对CD4~+T细胞表面s TGF-β2 表达的抑制作用 |
| 4.1.2 TIO3 对 CD19~+ B 细胞表面 sTGF-β2 表达的抑制作用 |
| 4.1.3 TIO3的药效动力学分析 |
| 4.1.4 TIO1,TIO2及TIO3 的不同功效的机理分析 |
| 4.1.5 TIO3用于微生物疫苗佐剂的副作用分析 |
| 4.1.6 TIO3用于微生物疫苗佐剂的可行性分析 |
| 4.2 TIO3的胶质瘤疫苗佐剂效应 |
| 4.2.1 TIO3 对胶质瘤细胞MHC I分子表达的上调作用 |
| 4.2.2 TIO3的胶质瘤疫苗佐剂效应的机理分析 |
| 4.3 单独应用TIO3的抗胶质瘤和抗胃癌作用 |
| 4.4 总结和展望 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 附录1 |
| 附录2 The College of Basic Medical Sciences of Jilin University Ethics Committee Approval Form |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）改良去污剂-联合酶法制备羊脱细胞气管支架及其性能评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验设备 |
| 1.3 试剂耗材 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验用试剂配制 |
| 2.2 脱细胞气管基质的制备 |
| 2.3 脱细胞气管基质的体外性能检测 |
| 2.4 体内埋植实验 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 羊DEM脱细胞气管基质的大体标本及组织学结构观察 |
| 3.2 扫描电镜检测结果 |
| 3.3 羊DEM脱细胞气管DAPI染色结果 |
| 3.4 免疫组织化学染色分析 |
| 3.5 番红0染色结果分析 |
| 3.6 生物力学检测 |
| 3.7 体内埋植实验 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述一：脱细胞技术在器官移植领域应用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二：组织工程气管再上皮化的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（5）Treg细胞外泌体诱导移植肝免疫耐受的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 Treg细胞对CD8~+T细胞功能和增殖影响的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 Treg细胞来源的exosomes对CD8~+T细胞功能和增殖影响的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 Treg及其exosomes可通过microRNA-194-1-3p靶向LAT1 (Slc7a5)调控mTOR信号传导通路 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 Treg细胞对同种异体原位肝移植影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Treg细胞及其来源的exsomes与移植免疫耐受 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）花椒毒酚在大鼠同种异体移植物血管病中的作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 内容摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第一部分 移植动脉HE染色及新生内膜增厚情况 |
| 第二部分 移植动脉免疫组织化学染色ICAM-1、TNF-α、PCNA、SMA-α,TGF-β1和NF-κB/P65 的表达情况 |
| 讨论 |
| 第一部分 CAV相关进展 |
| 第二部分 CAV大鼠模型建立 |
| 第三部分 花椒毒酚在CAV中的防治作用 |
| 第四部分 本实验的不足之处及展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 CAV 概述及相关进展 |
| 参考文献 |
| 后记 |
| 附录:攻读硕士学位期间发表的部分学术论着 |
（7）供体兔获取前高钠血症对受体兔移植肾预后影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要中英文缩略词索引 |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 供体兔术前血钠变化 |
| 3.2 移植术后尿素氮变化 |
| 3.3 移植术后血肌酐变化 |
| 3.4 移植术后尿量变化 |
| 3.5 移植肾组织HE染色 |
| 3.6 移植肾组织Masson染色 |
| 3.7 移植肾组织α-SMA表达情况 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 异体原位肾移植模型建立 |
| 4.2 高钠血症与肾损伤 |
| 4.3 供体高钠血症对受兔肾移植术后的影响 |
| 4.3.1 对受兔肾功能及尿量影响 |
| 4.3.2 移植肾组织病理变化 |
| 4.3.3 移植肾组织α-SMA表达 |
| 4.4 不足与展望 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、ERC的提取、培养、细胞表型鉴定以及CD73表达情况的鉴定 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 ERC的提取和培养 |
| 1.1.2 ERC的形态学观测 |
| 1.1.3 ERC的细胞表型鉴定 |
| 1.1.4 CD73的免疫荧光 |
| 1.1.5 主要仪器、耗材、试剂 |
| 1.1.6 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 ERC的形态 |
| 1.2.2 细胞表型鉴定结果 |
| 1.2.3 ERC表面CD73免疫荧光结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、ERC表面表达的CD73的体外功能研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 ERC细胞悬液的制备 |
| 2.1.2 ERC表面CD73的体外催化功能研究 |
| 2.1.3 小鼠脾脏细胞悬液的制备 |
| 2.1.4 抗CD73抗体预处理的ERC |
| 2.1.5 体外细胞共培养实验 |
| 2.1.6 流式细胞技术 |
| 2.1.7 主要仪器耗材和实验试剂 |
| 2.1.8 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 ERC表达的CD73能够体外催化AMP脱磷酸形成ADO |
| 2.2.2 表达CD73的ERC于体外可以抑制成熟DC的产生 |
| 2.2.3 表达CD73的ERC于体外能够促进M2 的增殖 |
| 2.2.4 表达CD73的ERC于体外能够促进Treg的增殖 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、ERC表达CD73在其抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用及作用机制 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 小鼠同种异体异位心脏移植模型的制备 |
| 3.1.3 实验分组及治疗 |
| 3.1.4 同种异体异位心脏模型移植物生存观察 |
| 3.1.5 模型标本取材 |
| 3.1.6 组织病理检测及评分 |
| 3.1.7 免疫组织化学染色及分析 |
| 3.1.8 流式细胞术 |
| 3.1.9 单向混合淋巴细胞反应 |
| 3.1.10 酶联免疫吸附实验 |
| 3.1.11 实时荧光定量PCR |
| 3.1.12 相关仪器、耗材、试剂 |
| 3.1.13 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 ERC表达CD73能够延长小鼠心脏移植物的生存期 |
| 3.2.2 ERC表达CD73能够改善小鼠心脏移植物的病理改变 |
| 3.2.3 ERC表达CD73能够减轻小鼠心脏移植物急性细胞排斥反应 |
| 3.2.4 ERC表达CD73能够降低成熟DC的比例 |
| 3.2.5 ERC表达CD73能够增强Tol-DC的功能 |
| 3.2.6 ERC表达CD73能够降低总巨噬细胞数量并促进巨噬细胞向M2 极化 |
| 3.2.7 ERC表达CD73能够诱导体内Treg细胞增多 |
| 3.2.8 ERC表达CD73参与调节抗炎细胞因子和促炎因子的平衡 |
| 3.2.9 ERC表达CD73影响移植心脏A_(2A)和A_(2B)受体mRNA的转录水平 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 CD73/ADO/ADOR信号通路在实体器官移植免疫中的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）小鼠肺移植后缺血再灌注损伤的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 论文主要缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 :冷缺血时间对肺移植后缺血再灌注损伤及原发性肺功能障碍的影响及机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 :保护性肺通气将供体肺的可耐受热缺血时间延长至心脏死亡后12小时 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肺移植现状 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间论文发表情况 |
| 攻读博士期间课题专利及获奖情况 |
| 致谢 |
四、同种异体原位心脏移植39例（论文参考文献）
- [1]槲皮素干预心脏移植物血管病变的作用及机制初探[D]. 曾顺. 遵义医科大学, 2021(01)
- [2]木犀草素抑制小鼠同种异体器官移植排斥反应及其免疫调节机制研究[D]. 叶书林. 广州中医药大学, 2021(02)
- [3]转化生长因子-β2反义寡核苷酸的微生物疫苗及肿瘤疫苗的佐剂作用[D]. 涂丽裙. 吉林大学, 2020(03)
- [4]改良去污剂-联合酶法制备羊脱细胞气管支架及其性能评价[D]. 陈帅. 扬州大学, 2020(01)
- [5]Treg细胞外泌体诱导移植肝免疫耐受的机制研究[D]. 陈亮. 昆明医科大学, 2020(02)
- [6]花椒毒酚在大鼠同种异体移植物血管病中的作用及相关机制研究[D]. 张鹏. 三峡大学, 2020(06)
- [7]供体兔获取前高钠血症对受体兔移植肾预后影响的研究[D]. 邱从来. 南华大学, 2020(01)
- [8]CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究[D]. 胡永浩. 天津医科大学, 2020(06)
- [9]小鼠肺移植后缺血再灌注损伤的影响及其机制研究[D]. 徐澈. 南京医科大学, 2020(06)
- [10]同种异体原位心脏移植36例临床分析[J]. 景启明,王睿,陈鑫. 中国胸心血管外科临床杂志, 2019(10)