一、VASCULAR AND ASTROCYTIG REACTIONS DURING ESTABLISHMENT OF HIPPOCAMPAL TRANSPLANTS IN ADULT HOST BRAIN（论文文献综述）
韩朝[1]（2020）在《丝素蛋白水凝胶结合NSC对缺血缺氧脑损伤的修复及姜黄素的干预作用研究》文中认为背景来自实验动物疾病模型和早期临床试验的有力证据表明,神经干细胞移植是开发临床适用的外源性干细胞疗法的可行途径。基于目前在NSC生物学领域的进展和移植研究的积极成果,当代的观点是移植的NSC作为宿主本地“工厂”能够产生和分泌大量的免疫和神经营养因子,包括那些细胞外膜囊泡中包含因子,NSC移植物作为一种天然的生物制剂来源,能够调节和促进中枢神经系统（CNS）组织在急性或慢性组织损伤后的几个关键功能的恢复。但如何将NSC更为有效的定植于损伤器官组织,更加有效的让其分泌的因子作用于损伤微环境是神经组织工程亟待解决的问题。生物材料、细胞和刺激是神经组织工程的三个主要组成部分。组织工程神经材料已成为神经再生和功能恢复的一种潜在的替代自体神经移植物。各种材料的研究以改善特性和增强功能为出发点,生物可降解、生物相容、导电和免疫惰性的支架最终的目标是准确地模拟我们体内的细胞外基质,并通过各种聚合物、细胞和生长因子诱导出一种生物化学、地形学和电信号的组合,从而高效地进行神经定植及神经网络再生。选择合适的支架材料来促进神经细胞和非神经细胞的分化以及轴突的生长是神经组织工程整体设计策略的关键。在众多支架材料中,水凝胶已被证明是神经源性细胞培养和分化的良好选择。考虑到神经系统对再生的固有抗性,水凝胶已大量用于释放神经营养因子、神经生长抑制剂拮抗剂和其他神经生长促进剂。组内前期研究工作在静电力作用下获得的丝素蛋白水凝胶,电镜结果显示该凝胶具有纳米取向空隙,能够支持神经元的粘附生长。姜黄素广泛应用于各种疾病的防治。近年来,姜黄素作为神经源性和神经保护剂的应用受到越来越多的关注。姜黄素作为炎症条件因子,在神经干细胞的活力维持,神经向分化中的优势也得到了研究者的证实。目的本研究的目的分为三个方面:提取并稳定传代人胚胎来源神经干细胞,鉴定人神经干细胞的增殖能力、特异性标记物表达及分化能力,利用丝素蛋白水溶液来检验丝素蛋白是否影响神经干细胞的活力,增殖及分化能力,为后期利用丝素蛋白制备水凝胶支架结构奠定基础。通过静电场力作用丝素蛋白制备三维取向水凝胶,筛选适合的水凝胶浓度,结合NSC进行粘附培养、检测水凝胶结构对NSC的贴壁性,神经向分化能力的影响,尤其针对神经元轴突发育及伸展取向性进行研究。同步构建大鼠缺血缺氧性脑损伤模型,观察取向水凝胶及对照组无序水凝胶结合NSC移植治疗后的修复效果。探讨姜黄素作为炎症调控,多种信号激活的中药单体对NSC结合丝素水凝胶的神经组织工程组织的干预作用,为神经保护机制的研究和体外药物筛选提供新的思路。方法1.机械法消化提取人胚神经干细胞,无血清法悬浮培养法扩增神经球,CCK8检测NSC增殖能力,流式细胞仪及免疫荧光法检测神经干细胞干性标记物Nestin,Vimentin,Musashi-1,Notch,SOX1,SOX2,SSEA-1,CXCR4表达。经分化培养基培养至14天,经形态学,免疫荧光检测神经元Tub3、少突胶质GFAP、小胶质细胞的特异性标记蛋白O4的表达,明确分化能力。验证提取方法获得的神经干细胞属性。利用丝素蛋白水溶液（SF）加入到神经干细胞的培养基中,观察形态学,利用CCK8及PI染色检测SF对神经干细胞增殖及死亡的影响。免疫荧光染色检测SF对NSC干性的影响。2.静电法制备0.5%、1%、2%丝素蛋白水溶液并筛选合适的水凝胶浓度,将NSC在三维取向丝素蛋白水凝胶中分化培养,并将自然形成的无序丝素蛋白水凝胶作为对照组,Calcein-AM活细胞染色观察细胞形态,检测轴突的伸展方向,分化后经Tub3及GFAP染色并量化计算NSC向神经元及神经胶质细胞的分化比例。利用Fluo-AM试剂染色经流式细胞仪检测钙离子在两种细胞中的变化,共聚焦检测轴突蛋白Bassoon在分化后神经元突触中的表达,RT-PCR检测轴突相关基因GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp在两种细胞中的表达情况,分析有序水凝胶对轴突发育及轴突伸展的影响。3.构建大鼠缺血缺氧模型,选取三组损伤组（HI）、神经干细胞治疗组（NSC）及神经干细胞结合有序丝素蛋白水凝胶组（NSC+Silk）,每组10只。于出生后7天造模,10天治疗,28天行为学实验（圆柱筒、平衡木及水迷宫）,39天处死,固定、切片,进行GFAP免疫组化及Tub3、GFAP及Neu N的免疫荧光染色。获取海马区组织进行神经相关因子检测BDNF,NGF的ELISA检测。4.筛选1mg/ml,5mg/ml,10mg/ml,20mg/ml不同浓度的姜黄素作用于NSC,利用CCK8染色法检测NSC细胞活力。Ed U染色法检测不同浓度Cur对NSC增殖能力的影响。Annexin-V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡发生。检测不同浓度下Cur对NSC分化为神经细胞过程的影响,待分化培养12天,通过软件分析单位面积神经元数量及神经元轴突长度,收集分化培养6、12天的细胞样本检测GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp的mRNA表达,分析姜黄素对神经向分化的作用。结果1.经机械法原代提取的神经干细胞经7-10天可以形成标准的神经球集落,海马区的NSC增殖速度快,大小均匀,形态规则,指数生长期为5-7天,P1,3,5代的NSC增殖能力一致,倍增时间无显着性差异。获取的海马区NSC表达神经干细胞特异性标记物Nestin,Vimentin,Musashi-1,Notch,SOX1,SOX2,SSEA-1,CXCR4。能够在分化培养环境下分化为具有神经元形态细胞,并部分表达Tuj1、GFAP,神经元及神经胶质细胞特异性标记蛋白。2.对照组、两种浓度0.01%及0.1%的SF作用于NSC后倍增时间分别为:65.3h、76.2h及42.2h,检测SF对NSC细胞的死亡率影响,对照组,0.01%及0.1%分别为:31.5%,38.5%,40.6%,均不具有显着性差异。0.01%浓度的SF加入至培养基经免疫荧光染色检测Nestin,Vimentin,Musashi-1,Notch,SOX1,SOX2六个神经干细胞特异性标记物表达均为阳性。3.静电场力作用获得1%浓度的取向丝素蛋白水凝胶最适合于NSC悬浮及分化培养,对比无序水凝胶材料,分化后的神经细胞在有序水凝胶表面获得的轴突伸展方向一致性提高,有序丝素蛋白水凝胶能够提升神经元的分化比例为10.7±3.1个,照比无序材料的7.3±2.5个有显着性提高,神经元轴突长度统计分析无序凝胶为105.7±10.2nm,有序凝胶为400.3±25.3nm,神经元轴突长度进行量化并统计。能够显着提高神经元的轴突长度,并增高轴突内Bassoon蛋白及的表达,GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp基因的表达在分化12天时发生显着升高。4.成功建立大鼠缺血缺氧模型,经NSC及NSC+Silk治疗后,脑缺损区域减小,对比损伤组GFAP表达胶质细胞在皮层区、CA1区、DG区及CA3区表达下降,但NSC组与NSC+Silk组之间没有显着性变化。治疗后神经元细胞比例增高,海马区的GFAP比例下降,海马区Neu N的表达在治疗后升高,均据有统计学差异。平衡木试验结果及圆柱桶试验均发生治疗组有明显的修复效果,水迷宫试验结果显示NSC+Silk组有更好的修复效果。在治疗后1天海马组织内的BDNF及NGF因子含量即发生显着性升高,并在后期维持高表达状态。5.1mg/ml姜黄素作用于神经干细胞,不影响NSC增殖,大于5mg/ml的Cur抑制NSC增殖。1mg/ml Cur作用后,Ed U标记率增大但无统计学差异。2.5mg/ml,5mg/ml Cur作用后阳性率降低,表明NSC的增殖率下降。1mg/ml Cur与Cont组相比较没有显着变化。表明高浓度Cur能显着诱导NSC细胞发生凋亡。0.5mg/ml,1mg/ml,2.5mg/ml浓度不影响神经干细胞的分化形态,但5mg/ml,10mg/ml浓度明显抑制神经干细胞分化后贴壁细胞的伸展。经Cur处理,单位面积的神经元数量显着高于对照组,神经元轴突的长度也在分化12天时显着高于对照组。轴突相关基因GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp的mRNA表达检测的表达在12天时照比对照组有所升高。结论1.本实验部分成功提取了人胚胎来源的海马区原代NSCs,能够稳定进行扩增培养及特异性标记物鉴定,NSC能成功分化为神经元、胶质细胞,符合NSCs的基本属性和生物学特性;2.检测了丝素蛋白水溶液作为支架材料的生物安全性,评价了其对NSCs形态学、增殖能力及干性能力均无影响,体现了其良好的生物相容性。可作为后续的神经组织工程材料进行深入研究。1%浓度的丝素蛋白水凝胶能够支持神经干细胞增殖。静电作用获得的有序丝素蛋白水凝胶能够提高神经干细胞向神经元分化比例。有序丝素蛋白水凝胶在向神经细胞分化中能够增强神经元轴突GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp基因表达,促进神经突触的发育及迁移。有序丝素蛋白水凝胶结合NSC治疗大鼠脑缺血缺氧模型,对运动行为及学习记忆有修复功效。3.高浓度（>2.5mg/ml）姜黄素导致NSC细胞死亡,低浓度（<1mg/ml）促进NSC细胞增殖。1mg/ml姜黄素能够促进人神经干细胞向神经元分化,提高分化效率,提高分化后神经元突触长度及突触相关基因GAP-43、NCAM1、PSD-95和Syp表达。
任登鹏[2]（2018）在《干细胞活性因子保护大鼠损伤神经干细胞及改善神经功能的研究》文中研究说明目的:研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）源性的干细胞活性生长因子对体外培养的神经干细胞增殖、分化及低氧耐受的影响,以及对大鼠脑创伤模型的体内损伤修复效果,为未来脑创伤神经功能恢复提供理论指导和实验依据。方法:（1）原代分离培养SD大鼠BMSCs,流式细胞术测定特异性的表面标志蛋白的表达。（2）酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测培养48 h的BMSCs条件培养液中BDNF、IGF-1、VEGF和NGF的蛋白质水平,了解BMSCs条件培养液中的主要干细胞活性因子的表达水平。（3）原代分离培养大鼠的神经干细胞（NSCs）,将其培养于含间充质干细胞活性因子的培养环境中,观察细胞克隆球的生长情况,以及其向神经元和神经胶质细胞分化潜能;建立氧糖剥夺模型,检测上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）含量,观察干细胞活性因子对低氧应激环境下的NSCs的保护作用。（4）制作冲击性脑损伤大鼠模型,给予干细胞活性因子治疗,观察脑损伤大鼠术后一般情况,水迷宫实验检测实验动物的神经功能恢复情况。（5）行HE染色进行大体病理组织学观察;干/湿重法检测脑水肿程度。（6）荧光定量PCR方法检测实验大鼠脑组织中目标基因IL-1β、Gap43、Jun、和TNF的表达;免疫组织荧光方法检测目标蛋白BrdU+NeuN、BrdU+GFAP的表达;Western Blot方法检测目的蛋白NF-κBp65在脑组织中的表达情况。结果:（1）流式细胞术检测结果显示,本实验所培养的第四代骨髓源性的细胞表达间充质干细胞的标记蛋白CD90和CD105的阳性表达率均高于95%;同时表达造血干细胞标记物CD34的阳性表达率和成熟造血细胞的标志蛋白CD45的阳性表达率均低于5%。证实所培养的细胞为高纯度的BMSCs,符合实验要求。（2）酶联免疫吸附测定实验结果显示,第4代至第14代BMSCs表达VEGF水平始终维持在400 pg/ml浓度以上,IGF-1的水平一直维持在100pg/ml-150 pg/ml浓度之间,NGF维持在380 pg/ml-430 pg/ml浓度之间,BDNF的水平维持在310 pg/ml-330 pg/ml浓度之间。（3）原代分离培养的大鼠神经干细胞（NSCs）培养于含BMSCs细胞活性因子的培养环境中,细胞克隆球较单纯NSCs培养基培养具有更快的生长速度;并且BMSCs细胞活性因子能够诱导NSCs更容易向神经元分化;氧糖剥夺模型实验结果显示,BMSCs细胞活性因子能够增强NSCs对低氧应激的耐受能力。（4）冲击性脑损伤大鼠模型结果显示,假手术组实验大鼠在麻醉清醒后精神状态迅速好转,大鼠体重较术前无明显变化;脑损伤模型（TBI）组实验动物能够出现明显偏瘫,主要表现为创伤对侧肢体不活动或活动明显减少,体重于手术初期下降明显,后稍有回升;TBI+干细胞活性因子治疗组实验动物亦出现明显偏瘫现象,体重于手术初期亦下降明显,但在5天之后回升较快,最终体重优于TBI组。水迷宫实验检测结果显示干细胞活性因子治疗组实验动物具有更佳的神经功能恢复能力。（5）HE染色实验结果显示,假手术组脑组织完整,结构正常,细胞形态符合正常大鼠脑组织组织与解剖结构特点;TBI组创伤侧大鼠脑组织可见明显创伤灶,脑组织结构紊乱;活性因子治疗组创伤侧大鼠脑组织同样可见细胞排列较TBI组相对更为规整。干/湿重法检测结果显示TBI组脑组织水肿程度最高,活性因子治疗组的脑水肿程度明显低于TBI组。（6）荧光定量PCR方法检测结果显示,TBI组实验大鼠脑组织中IL-1β、Jun和TNF的表达水平明显高于假手术组,干细胞活性因子治疗能降低TBI后上述因子的mRNA表达水平;实验大鼠脑组织中GAP43的表达水平于TBI后第3天时处于较低水平,随后逐渐升高,干细胞活性因子治疗后能增加GAP43的表达水平;免疫组织荧光方法检测结果显示,脑创伤大鼠创伤侧海马BrdU、NeuN和GFAP的表达水平均明显高于假手术组,活性因子治疗组则可进一步提高BrdU/NeuN的蛋白质表达水平;Western Blot方法检测结果显示NF-κBp65在TBI组实验大鼠脑组织中的蛋白表达水平明显高于假手术组,活性因子治疗组则可降低该蛋白的表达水平。结论:（1）培养第4代至第14代的BMSCs始终维持表达较高水平的VEGF、IGF-1、NGF和BDNF,对周围细胞具有持续的细胞营养作用。（2）BMSCs细胞活性因子能够促进NSCs克隆球的增殖,诱导NSCs更容易向神经元分化,此外BMSCs细胞营养因子能够增强NSCs对低氧应激的耐受能力。（3）BMSCs细胞活性因子能够促进内源性的NSCs动员,并诱导NSCs易于向神经元分化。（4）BMSCs细胞活性因子能够帮助脑创伤大鼠增进学习和记忆功能的恢复,改善运动能力,降低炎症水平,抑制细胞凋亡。
刘辉[3]（2002）在《神经干细胞生物学特性、神经干细胞移植治疗颅脑损伤后神经功能缺失及免疫基因治疗大鼠胶质瘤的研究》文中研究说明目前，损伤、恶性肿瘤和心脑血管疾病已经成为人类健康的头号敌人，现行的医疗方案已经远远不能满足疾病治疗的需要，在90年代兴起的干细胞研究为疾病的治疗提供了崭新思路，干细胞研究因为其巨大的应用前景被美国《Science》杂志评为1999年世界10大科学进展之首，为世人所瞩目。干细胞特有的生物学特征及潜在生物学应用价值成为近年生物学领域的热点课题。正因为干细胞的特殊科学意义及在医学上的应用前景，各国对此都投入了大量的人力物力进行研究，日本把干细胞列入“千年世纪工程”中的4大重点之一；英国议会通过了应用人胚胎进行研究的议案。 神经干细胞（NSCs）是长期具有自我更新能力的细胞，经过不对称分裂神经干细胞可以生成一个祖细胞及另一个干细胞，其中祖细胞进行有限的分裂而分化成神经元及胶质细胞，而干细胞则继续分裂。从哺乳动物及人类的中枢神经系统的一定部位可分离出神经干细胞，如脑室下区、海马齿状回、嗅脑、小脑皮质生发层等。 干细胞疗法近年来已成为治疗多种疾病的新策略，其目的是替代、修复或加强受损的组织或器官的生物学功能，同时干细胞具有自我更新与增殖分化的生物学特性，是基因疗法一种理想的靶细胞。由于神经干细胞具有基因的可操作性，可携带多个外源基因；转染后外源基因在体内体外稳定表达；移植后可整合到宿主脑组织；在宿主脑内迁移等优良特性，使其成为基因治疗的良好载体。 天津医科大学博士学位论文 有关海马神经干细胞的分离及生物学特性的研究，目前国外只有少量报道，国内则未见报道。神经干细胞移植在颅脑损伤方面的应用仅见个别报道，转染白介素12（工L一12）的神经干细胞用于治疗大鼠胶质瘤的研究则未见报道。本实验首先对取自胎鼠或胎儿海马的神经干细胞自我更新及多向分化生物学特性进行研究，并且对NSCs的标记神经上皮干细胞蛋白（nestin）、表皮生长因子（EGF）及碱性成纤维生长因子（FGF一2）对NSCs的作用、NSCs体内分化等进行系统的研究，随后对NSCs移植修复颅脑损伤后神经功能缺失、转染工L一12的神经干细胞用于免疫基因治疗大鼠颅内胶质瘤进行初步研究。第一部分:神经干细胞生物学特性的研究 对胎鼠及胎儿海马EGF、FGF一2依赖性神经干细胞的分裂增殖、多向分化特性及超微结构进行研究，并且对NSCs的标记nestin、EGF及FGF一2对NSCs的作用、NSCS体内分化等进行系统的研究。 1.应用MTT检测法及5一滨脱氧尿核昔（BrdU）染色观察干细胞的分裂增殖，应用透射电子显微镜观察干细胞的超微结构，应用免疫荧光及免疫组化方法观察干细胞的抗原特性及分化潜能。胎鼠及胎儿海马中存在多潜能神经干细胞，体外培养时其细胞活性不断增加，大多数细胞呈BrdU阳性。在电镜下可见核浆比大，核仁明显，异染色质分散呈小碎片状，胞浆中有很多游离核糖体，线粒体及粗面内质网很少。在适当的条件下神经干细胞可以分化产生具有一定比例的神经元及神经胶质细胞。 2.Nestin是NSCs中的中间丝状蛋白。本实验使用细胞免疫染色、队CS、RT一PCR、Western Blot方法检验取自胎儿海马的NSCs的nestin表达。神经干细胞球体中的细胞几乎均（>90%）呈nestin阳性，但呈神经元特异性烯醇化酶伽sE)阴性，胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阴性。通过RT一pCR方法检测到nestin在mRNA水平的表达，Western Blot显示nestin分子量大约为240KD。 3.EGF和FGF一2对NSCs有重要作用，最初由EGF和FGF一2共同作用分离的 天津医科大学博士学位论文hNSCs在去掉一种生长因子（EGF或FGF一2）后细胞增殖立即下降，在FGF一2持续存在时hNSCS产生明显多的神经元，但EGF存在与否对hNSCS的分化无明显影响。 4.在被移植到成年大鼠脑组织内，hNSCS发生部位特异性的分化，并可沿内源性NSCS的移动路径发生迁移。 可见胎鼠或胎儿海马神经干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞，具有不成熟的细胞核及胞浆超微结构，EGF、FGF一2作为外源性信号因子作用于胎鼠海马神经干细胞的相应受体，对其分裂分化可产生重要作用。nestin作为特异性标记可以帮助我们区分NSCs，因而对NSCs移植治疗颅脑疾病有重要的应用价值。NSCs移植后对体内环境信号的恰当反应，及其在体外的大量增殖能力使其在日后的实验及临床应用方面有重要意义。第二部分:神经干细胞移植治疗颅脑损伤后的神经功能缺失 在体外培养中NSCs能够不断分裂增殖，当NSCs被移植到动物体内，可与宿主细胞良好整合，对局部信号产生形态反应，恰当地分化成为不同的神经元及胶质细胞，并沿着神经轴迁移加入正常的神经发育。本实验对NSCS移植修复颅脑损伤后神经功能缺失，间充质干细胞（MSCs）向神经细胞分化，MSCs移植对颅脑损伤修复进行研究。 我们使用自由落体大鼠颅脑损伤模型，全部动物分为4组，假损伤组（Sham），损伤组（TBI），治疗对照组（TBI+DF），治疗组（TBI+N SCs）。损伤组与正常组相比，在伤后48小时及7天运动神经功
卢梦晗[4]（2019）在《“通督启神”法电针对AD小鼠海马区小胶质细胞及TLR4通路的影响》文中研究指明1目的和意义阿尔茨海默病（AD）是最常见的神经退行性疾病,对当今老龄化社会人类健康产生了巨大的威胁,给社会带来了沉重的经济负担。AD主要由淀粉样蛋白β（Aβ）沉积,异常的Tau蛋白磷酸化和脑内神经免疫炎性反应等原因引起。大量研究显示,在传统中医理论指导下,电针疗法在改善阿尔茨海默病患者临床症状和在AD模型动物实验研究中均显现出一定的优势,本研究采用“通督启神”法指导下的不同电针（脉冲电针和音乐电针）以及不同电针结合多奈哌齐对7月龄APPswe/PS1δE9转基因小鼠进行干预,旨在探讨其对于AD模型小鼠的行为学作用差异,并从小胶质细胞活化以及TLR4通路角度探讨其发挥作用的可能机制。2研究方法7月龄APPswe/PS1δE9小鼠60只随机分为6组,每组10只,分别为:AD模型组（M组）、药物组（D组）、脉冲电针组（DZ组）、脉冲电针合药物组（DZ+D组）、音乐电针组（YZ组）及音乐电针合药物组（YZ+D组）。以7月龄相同遗传背景的雄性C57BL6小鼠10只为正常对照组（N组）。N组:其他组干预时抓取一次,固定于自制鼠套,不做其他处理,1次/天;M组:同N组;D组:多奈哌齐溶液按体重以0.92 mg/kg标准灌胃,然后固定于自制鼠套,1次/天;DZ组:将小鼠固定于自制鼠套,选取小鼠百会穴（GV20）、印堂穴（GV29）、水沟穴（GV26）,其中百会向上、印堂穴向下平刺进针,进针深度为0.3 cm,脉冲电针正极连接百会穴处针柄,负极连接印堂处针柄,选择疏密波,电流强度0.1 mA,频率2/50 Hz,脉冲电针干预结束,取无菌针灸针快速点刺小鼠水沟穴,不留针不连接电针;DZ+D组:每天行脉冲电针干预,方法同DZ组,灌胃给药方法同D组,连续15天;YZ组:取穴、针刺方法同DZ组,将音乐电针两级连接小鼠百会、印堂穴处针柄,选择“痴呆”音乐治疗处方,强度以小鼠头部轻轻颤动为标准;YZ+D组:每天行音乐电针干预,方法同YZ组,灌胃给药方法同D组。以上干预,20min/次,1次/天,共计15天。15天干预结束后,将各组小鼠放于Morris水迷宫恒温游泳池中进行可视平台实验,随后开始进行为期5天的隐蔽平台实验和在隐蔽平台实验,结束后24小时内进行的定位航行实验。采用HE染色方法观察各组小鼠海马区齿状回组织结构和病理变化;利用免疫组织化学法标记海马区小胶质细胞表面受体Iba1观察小胶质细胞活化数量;采用免疫荧光双标技术,观察活化小胶质细胞表面蛋白CD11b和TLR4受体表达情况;运用免疫组织化学、Western blot（WB）和RT-PCR技术观察并分析各组小鼠海马区活化小胶质细胞关键通路中TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6、TAK1、NF-κB、iNOS和CD40的蛋白、mRNA相对表达情况。3研究结果3.1Morris水迷宫实验结果:可视平台实验:各组小鼠逃避潜伏期和游泳速度均无明显差异（p>0.05）;隐蔽平台实验;不同干预方式对各组小鼠的逃避潜伏期长短随时间变化而变化（p<0.05）,第2-5天,M组逃避潜伏期高于N组（p（day 2-5）<0.05）;与M组相比,D组、DZ组、DZ+D组、YZ组和YZ+D组的逃避潜伏期缩短（均为p<0.05）,差异具有统计学意义。空间探索实验:各组小鼠穿越平台次数和目标象限（WS）停滞的时间占总游泳时间百分比（目标象限时间比）之间存在差异（均为p<0.05,）,具有统计学意义;M组的平台穿越次数和目标象限时间显着低于N组（p<0.01）;与M组相比,D组、DZ组、DZ+D组、YZ组和YZ+D组的平台交叉数（均为p<0.05）和目标象限时间比增加（p<0.01）,有统计学意义;与D组相比,YZ+D组在目标象限停滞的时间增多,差异有统计学意义（p<0.05）。3.2各组小鼠海马区齿状回组织形态、活化小胶质细胞数量苏木精-伊红（HE）染色后（图1）,N组神经元层次清晰,结构排列致密,神经元形态大小正常,核仁清晰,核仁可见,细胞簇边界清晰,胞浆呈淡红色。M组的组织病理学形态与N组相比有明显变化,神经元细胞核固缩、核移位,细胞质和细胞核的边界不明显,神经元和神经胶质细胞之间的细胞空间扩大,而海马锥体神经元变小组织结构松散,神经、胶质细胞肿胀,出现广泛的空泡变化,细胞排列紊乱;治疗后,D组、DZ组、YZ组、DZ+D组和YZ+D组的病理变化有均所改善。免疫组化标记小胶质细胞表面受体（Iba1）结果显示,N组小鼠海马中Iba1标记的小胶质细胞数量较低,观察到的小胶质细胞似乎处于静止状态,细胞体较小,染色较浅,突起细长,M组小胶质细胞呈典型的激活状态,细胞体增大,细胞突起缩短,细胞形态呈圆形或阿米巴状,Iba1阳性细胞在老年斑块周围聚集。各组小鼠海马区活化小胶质细胞数量有显着差异（p<0.01）;M组Iba1阳性细胞数也高于N组（p<0.01）;相比之下,D组、DZ组、YZ组、DZ+D组和YZ+D组的小胶质细胞多处于静止状态,活化的小胶质细胞数量均低于M组（p均<0.01）;其中与D组比,DZ组（p<0.05）、YZ组（p<0.01）、DZ+D组（p<0.05）和YZ+D组（p<0.01）活化的小胶质细胞数量较少;另外,DZ组、YZ组、DZ+D组和YZ+D组活化小胶质细胞数量虽有差异,但无统计学意义。3.3各组小鼠TLR4通路相关蛋白、基因的表达水平利用激光共聚焦显微镜观察各组CD11b与TLR4免疫荧光表达情况,结果显示,与N组相比,M组有着较强的CD11b与TLR4荧光表达;D组、DZ组、DZ+D组、YZ组和YZ+D组CD11b与TLR4荧光共表达减弱。免疫组织化学结果显示,与N组相比,7月龄APPswe/PS1δE9转基因小鼠脑内海马区TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6、TAK1、NF-κB、iNOS和CD40阳性细胞呈深棕色,数量较多,着色较深,且M组各指标积分光密度值显着高于N组（p<0.01）;经过15天干预后,与M组相比,D组、DZ组、DZ+D组、YZ组和YZ+D组各蛋白阳性表达积分光密度值均有不同程度下降（p<0.01或p<0.05）;其中与D组相比,YZ+D组TLR4和CD40蛋白阳性表达积分光密度值显着降低（p<0.05）。WB和RT-PCR结果显示,M组海马区TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6、TAK1、NF-κB、iNOS和CD40的蛋白和mRNA相对表达量均显着高于N组（p<0.01或p<0.05）,较之M组,D组、DZ组、DZ+D组、YZ组和YZ+D组各指标蛋白、mRNA相对表达量均有不同程度的降低（p<0.01或p<0.05）;与D组相比,DZ组、DZ+D组、YZ组和YZ+D组各指标蛋白、mRNA相对表达量也均有不同程度的降低（p<0.01或p<0.05）;其中,以YZ+D组下降程度最为显着。4结论（1）基于“通督启神”法的各干预措施对于7月龄APPswe/PS1δE9小鼠的空间学习能力和记忆保持能力均有一定改善,且效果优于单纯使用盐酸多奈哌齐:其中音乐电针合多奈哌齐效果最为显着;（2）7月龄APPswe/PS1δE9小鼠大脑海马区神经元数目减少,活化的小胶质细胞增多,基于“通督启神”法的各干预措施能够减少海马区活化小胶质细胞的数量,改善海马区神经元形态,减少神经细胞的坏死,可能是改善AD模型小鼠学习认知障碍的机制;（3）基于“通督启神”法的各干预措施能够减少小胶质细胞与其TLR4模式识别受体的共表达,还能够对TLR4及其信号通路下游蛋白MyD88、IRAK4、TAK1、TRAF6和NF-κB,氧化应激产物iNOS和共刺激分子CD40具有显着负调节作用,可能是“通督启神”法抑制小胶质细胞活化,减缓神经元凋亡,从而发挥改善AD小鼠学习记忆能力的可能机制。（4）基于“通督启神”法的各干预措施能够减少TLR4及其信号通路下游蛋白MyD88、IRAK4、TAK1、TRAF6和NF-κB,氧化应激产物iNOS和共刺激分子CD40的基因表达,从遗传学角度解释了其发挥改善AD样症状作用的可能机制。（5）在改善7月龄APPswe/PS1δE9小鼠学习记忆能力、保护其大脑海马区神经元、减少活化的小胶质细胞数量、降低TLR4通路相关蛋白和炎性因子表达方面,不同电针与阳性药物多奈哌齐结合使用所产生的加载效应,优于单纯使用单一的药物、脉冲电针和音乐电针。
张卉[5]（2003）在《干细胞移植在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究》文中提出缺血性脑血管病的发病率正逐年增高，这种疾病对人类健康乃至生命的威胁使其愈来愈受到关注。但目前现有的治疗措施对许多患者还未取得理想的效果，因此如何促进脑缺血患者受损神经功能的修复仍是目前研究的重点。近年来成年哺乳动物乃至成人脑中NSCs的发现为CNS疾病治疗点燃了新的希望。NSCs的发现提示脑组织自身修复功能的存在，脑损伤后内源性神经前体细胞的激活有助于受损神经功能的恢复；另外外源性NSCs移植也可用于修复受损的神经功能。但来源受限使得NSCs不能得到广泛应用，BMSCs可取自自体骨髓并具有多种分化潜能，满足种子细胞的基本要求。基于以上各点，对脑缺血后内源性神经前体细胞的激活、NSCs和BMSCs移植治疗脑缺血进行分析将会对脑缺血治疗提供重要的理论帮助。 第一部分 大鼠局灶性脑缺血后内源性神经前体细胞的激活 目的：采用大鼠局灶性脑缺血模型观察不同时间点和不同脑区的内源性神经前体细胞的激活情况及神经生成情况，进一步阐明自身修复的启动过程，为临床治疗脑缺血提供理论帮助。 方法：采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型，成年健康雄性Wistar大鼠随机分为6组，包括正常对照组；假手术组；局灶性脑缺血3、7、14和21天组。在大鼠处死的前3天开始以BrdU腹腔注射标记增殖细胞，在最后一次注射后1天处死。以大鼠神经功能障碍的出现作为脑缺血的整体评价；采用光镜、Evans Blue和TTC染色判断脑缺血的部位及范围；以免疫组织化学法检测nestin、BrdU；结合RT-PCR技术检测脑组织中nestin、NSE、GFAP mRNA分析脑缺血后内源性神经前体细胞激活及神经生成情况。 结果：（1）应用线栓法短暂闭塞大鼠右侧大脑中动脉后，大鼠出现以左博士研究生学位论文摘要上肢为重的偏瘫同时伴有右侧Homor氏征。Evans Blue、竹C和HE染色均显示缺血区域位于右侧纹状体、颗顶区皮层，位置和范围较为稳定。（2）正常大鼠侧脑室SVZ和海马DG处均可见到nestin阳性的细胞。局灶性脑缺血后，这两个部位的nestin阳性细胞数均较正常组明显增加，在缺血后7天达到峰值，但海马DG处nestin阳性细胞数变化不如侧脑室SVZ处明显:在缺血区域及周围也可见到大量的 nestin阳性细胞，在脑缺血后7天达到峰值。缺血侧与对侧相比nestin阳性细胞变化情况一致，但缺血侧阳性细胞数明显多于对侧。（3）正常大鼠侧脑室SVZ和海马DG处均可以见到BrdU阳性的细胞，数量少于nestin阳性细胞。局灶性脑缺血后，这两个部位的BrdU阳性细胞数均较正常组明显增加，在脑缺血后7天达到峰值，但海马DG处BrdU阳性细胞数目少、变化不如侧脑室SVZ处明显;在缺血区域及周围也可以见到大量的BrdU阳性细胞，在脑缺血后3天达到峰值，缺血侧与对侧相比BrdU阳性细胞变化情况一致，但缺血侧阳性细胞数明显多于对侧。（4）大鼠局灶性脑缺血后nestin mRNA水平与对照组相比明显增加，在脑缺血后7天达到高峰。NSE、GEAP mRNA水平在脑缺血后14天有所增加，21天时有一定的表达，而且GFAP mRNA水平高于NSE mRNA水平。 结论:（l）大鼠线栓法MCAO模型是研究局灶性脑缺血后自身修复和内源性神经前体细胞激活理想的动物模型。（2）正常成年大鼠侧脑室SVZ和海马DG均存在少量nestin阳性细胞，BrdU染色证实这些细胞部分处于增殖状态，提示成年脑中存在具有增殖活性的神经前体细胞。（3）脑缺血可以使内源性神经前体细胞增殖增加;损伤周围成熟细胞中nestin的表达提示由非神经前体细胞启动的另一种修复过程的存在。（4）脑缺血所激活的内源性神经前体细胞可逐渐分化为成熟的神经元和星形胶质细胞，但这种分化过程需要一定的时间才能实现。第二部分神经干细胞在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中 应用的实验研究 目的:通过体外NSCs的培养，了解NSCs的生长、增殖以及分化等生物学特性，并观察NSCs移植入脑缺血大鼠后，细胞存活、迁移、分化以及大鼠的神经功能障碍恢复情况，探讨NSCs移植对于神经功能修复的作用及可能机制，以期为NSCs移植治疗脑缺血提供帮助。 方法:在特定培养条件下进行新生大鼠NSCs培养和诱导分化，通过细胞形态学观察、MTT检测、nestin、PCNA、BrdU、NSE、GFAP、 MAP一2、 天津医科大学5博士研究生学位论文摘要NF、GalC染色了解其生物学特性。将实验大鼠随机分为单纯MCAn组、MCAo+DF组及MCA。+NSCs组，将以BrdU标记的NSCs通过立体定向植入大鼠脑缺血区周围。通过脑缺血后1、7及14天时神经功能缺损评分、HE染色、nestin及BrdU免疫组化染色以及BrdU月呵SE、BrdU/GEAP免疫组化双染观察植入NSCs的存活、迁移、分化及对神经功能改善的影响。 结果:（1）新生大鼠NSCs在特定的培养基及神经营养因子EGF、bFGF的作用下可以持续分裂增殖，形成神经球，呈nestin、PCNA、BrdU阳性反应;当撤去营养因子并加入血清后可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞，且胶质细胞比例大于神经元比例。〔2) NSCs移植后，MCA。十NSCs组随时间延长，神经?
刘佳[6]（2010）在《细胞移植治疗脊髓损伤的优化方案及PDGF-B在脊髓修复中的作用》文中进行了进一步梳理【目的】建立三种干细胞即神经干细胞（NSC）、骨髓问充质细胞（BMSC）和造血干细胞（HSC）,及两种支持细胞即嗅鞘细胞（OEC）和雪旺细胞（SC）的体外培养技术,并将两种支持细胞分别和三种干细胞分别联合移植入SD大鼠和猴损伤的脊髓,筛选出细胞联合移植治疗SCI的优化方案,并探讨与其相关的分子表达,找出相对重要的调节分子,研究该分子在SCI中的作用。为寻找细胞移植治疗SCI的有效方法和相关的分子机制提供实验依据,为指导临床应用干细胞移植治疗SCI提供新思路。【方法】1.建立嗅鞘细胞、雪旺细胞、神经干细胞、骨髓间充质细胞和造血干细胞的体外培养技术,并对培养细胞进行鉴定。2.建立SD大鼠脊髓T10全横断损伤模型。将动物分假手术组、单纯脊髓全横断手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组,NSC移植组、BMSC移植组、HSC移植组、SC细胞移植组,OEC移植组,以及NSC+OEC,BMSC+OEC,HSC+SC联合移植组。术后14d沿原切口暴露损伤脊髓,选取距离瘢痕5mm的脊髓上下端和瘢痕各取左右两个位点（脊髓上下端旁开脊髓后正中沟0.5mm,瘢痕处的左右侧位点参照脊髓上下端的左右位点定位）,共6个位点用立体定向仪进行细胞移植（1.0×105/5uL,每个位点）。用5mg/kg/天腹腔注射环孢素（CsA）以减轻细胞移植后的免疫排斥反应。3.后肢运动功能评分:移植术后1～24周,采用双盲法由三名观察人员每周末进行大鼠后肢BBB运动功能评分。最后将三人所得分值求平均分后进行统计学处理。筛选出促进脊髓损伤功能恢复最好的一组为NSC+OEC联合移植组。4.神经电生理检测:对NSC+OEC联合移植组,及其相应对照组进行神经电生理检测,进一步探讨NSC+OEC联合移植组促进SCI的实验依据。（1）运动诱发电位（MEP）的测定采用了神经电生理经颅磁刺激器对NSC+OEC联合移植组14d组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组的MEP进行检测。3.6%水合三氯乙醛麻醉固定动物后,用盘状电极通过导电膏粘附于大鼠耳朵作为地线,记录电极置于大腿股四头肌,正负电极间距1cm,磁力板中心置于大脑皮质运动区之上刺激大脑皮质,以刺激强度40%刺激大脑皮质,记录股四头肌收集到得电位变化,待波形稳定且重复3次时中止并描记结果。（2）皮层体感诱发电位（CSEP）的测定本实验采用了皮层体感诱发仪（MEDTRONIC公司产品-KEYPOINY）对移植14d的NSC+OEC联合移植组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组进行了检测。电流为方波脉冲型,刺激电极置于大鼠左下肢胫后神经处,正负电极间距为1cm,参考电极置于大鼠鼻正中皮下,记录电极置于大鼠右侧大脑皮层处皮下,接地电极置于大鼠耳朵。参数设置:扫描速度10ms/D,灵敏度10uv/D,滤波低频10Hz,滤波高频2KHz,刺激强度以引起大鼠后爪抖动为止。每次均记录300次波形后将其叠加平均得到最终的检测结果。5.植入细胞存活检测:在第12和24W末取部分动物用3.6%的水合氯醛进行腹腔注射麻醉,4%的多聚甲醛灌注固定后取材、冰冻切片,荧光显微镜下观察植入细胞存活,迁移。6.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子:将14d、21d、28d的各组全横断脊髓（手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组、OEC移植组和NSC+OEC联合移植组）活体取出疤痕部位及临近组织,匀浆、裂解、提取总RNA、逆转录合成cDNA,进行神经营养因子NGF、BDNF、NT-3、CNTF、PDGF-B、IGF-1、bFGF、TGF-β1,及其受体TrkA、TrkB和TrkC,和凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及内参照β-actin的PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。测光密度值,进行统计学分析,筛选出有变化的因子。推测其中与SCI有关的重要分子。7.用高等动物灵长类猴验证NSC+OEC联合移植治疗SCI的效果:建立恒河猴半横断SCI模型。动物分半横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组、OEC移植组和NSC+OEC联合移植组。通过运动功能评分（1-9周）,神经电生理和核磁共振检测（1月）,和形态学观察来阐明NSC+OEC联合移植对SCI的促进作用。8.选择通过PCR扩增后确定的疤痕组织内有变化的PDGF-B作为切入点:通过免疫组化,RT-PCR,Western Blot,细胞培养,RNA干扰,抗体封闭等技术来研究PDGF-BB在SCI中的作用和可能的作用机制。【结果】1.本实验成功建立了OEC、SC、NSC、BMSC和HSC的体外培养方法,并进行了鉴定。2.运动功能评分:所有大鼠脊髓全横断后,双侧后肢完全瘫痪,不能排尿。大鼠靠前肢拖动身体前行。1周末时,手术损伤组大鼠双后肢开始出现1个后肢关节（踝关节）的轻微活动。细胞移植组则开始出现1或2个后肢关节轻微活动（多为膝关节或/和踝关节）。在第2周末时,手术损伤组和细胞移植组大鼠在细胞移植后排尿障碍均较第1周末时稍有好转,膀胱残余尿仍较多,手术损伤组部分大鼠开始出现2个后肢关节的轻微活动,而细胞移植组部分大鼠开始出现1或2个后肢关节大幅运动。各细胞移植组的大鼠BBB评分在整个恢复的过程中均有明显的提高,但变化最明显的的就是OECs+NSCs组。说明OEC+NSC移植对运动功能恢复明显改善。3.神经电生理感觉和运动诱发电位检测3.1 CSEP检测N1波变化:脊髓全横断组没有测到波形,潜伏期无限延长,与假手术组比较差异显着;说明手术切断脊髓后上行传导通路明显受损。细胞移植后,OEC、NSC移植组均分别能测到N1波,其与SCI组相比较,有显着性统计学差异（P=0.001,≤0.001、P=0.045,＜0.05）。但OEC+NSC移植组分别与OEC组和NSC组比较,均无统计学差异（P=0.720、0.323,＞0.05）。说明OEC+NSC移植对感觉神经生理功能恢复改善不明显。P1波变化:脊髓全横断组亦没有测到波形,说明潜伏期无限延长,与假手术组比较差异显着;然而OEC、NSC移植组能测到P1波,其与SCI组完全消失的情况相比较,差异显着,P=0.001,≤0.001;然而,需注意的是,仅OEC移植组P1波的潜伏期较与假手术组比较明显延长,有统计学差异;而NSC移植组P1波的潜伏期与SCI组相比较,P=0.069,＞0.05,无统计学差异;OEC+NSC移植组P1波的潜伏期与OEC组和NSC组的相比较,P值分别为0.688、0.247,＞0.05,无统计学差异。进一步说明OEC+NSC移植对感觉神经生理功能恢复改善不明显。3.2 MEP检测:本实验中,假手术大鼠均能测到明显的诱发电位,这种诱发电位的波幅为均值在6mv左右,潜伏期5ms左右。而SCI后,波幅和潜伏期均测不到,MEP消失。但给予NSC或者OEC移植后,均能测到MEP。只是其潜伏期有些延长（说明传导速度减慢）,且恢复波幅明显降低（说明突触功能受损）。细胞联合治疗对MEP没有明显影响。4.植入细胞的存活:脊髓切片上可见到GFP标记的绿色荧光细胞。而联合移植组脊髓既可见绿色荧光细胞,又可见Hochest33342标记的细胞核。标记细胞在损伤脊髓瘢痕,及其上段、下端均可见到。说明移植细胞向头、尾侧迁移,并在宿主脊髓存活。5.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子的表达变化发现:①在疤痕组织中均未检测到BDNF、NT-3、bFGF、TrkA、TrkB表达;②NGF各时间点均没有变化。③凋亡基因变化:Bcl-2:在联合移植21d时与NSC移植组比较明显降低,P=0.011,＜0.05,差异有统计学意义;Caspas-3:联合移植组在14d与NSC移植组、OEC移植组相比较,明显增加（P=0.039、0.032,＜0.05）,差异有显着统计学意义;但至在21d时,联合移植组与NSC移植组比较Caspas-3表达明显减P=0.006,＜0.01,差异有显着统计学意义;在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。Bax在联合移植组14d时与NSC移植比较,明显增加,P=0.031,＜0.05,差异有统计学意义;但至21d时,联合移植组与手术组比较明显减少,P=0.040,＜0.05,差异有统计学意义;在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。④NTF变化:CNTF在联合移植14d时,与OEC移植组及NSC移植比较表达明显增加,P值分别为0.007、0.001、0.023,均＜0.05,差异有显着统计学意义;在21d,联合移植组与NSC移植组比较明显减少,P值为0.000,＜0.01,差异有显着统计学意义;在28d,联合移植组与OEC移植组、NSC移植组比较均明显减少,P值分别为0.028、0.028,均＜0.05,差异有显着统计学意义。IGF-1:在14d时,联合移植组与OEC移植组及NSC移植比较,明显增加,尸值分别为0.003、0.001,均＜0.05,差异有显着性统计学意义;而在21d和28d时,各处理方式之间比较,差异均无统计学意义;PDGF-B:在14d时,联合移植组、OEC、NSC移植与手术组比较,明显减少,P=0.044,＜0.05,差异有统计学意义;联合移植组与NSC移植比较,明显减少,P=0.047,＜0.05,差异有统计学意义。在21d时,联合移植组与NSC移植组、OEC移植组及手术组比较明显减少,P=0.039、0.039、0.031,＜0.05,差异有统计学意义。在28d时,联合移植组与OEC移植组之间比较显着减少,P=0.011,＜0.05,差异有统计学意义。TGF-betal:在14d时,联合移植组与NSC移植组、OEC移植组和手术组比较明显增加,p=0.001、0.019、0.001,＜0.05,差异有统计学意义;而在21d和28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。Trkc:在14d时,联合移植组与NSC移植组比较,明显降低,P值分别为0.031,＜0.05,差异有统计学意义;在21时,联合移植组与手术组比较（P=0.015,＜0.05）,和NSC移植组比较（P=0.010,＜0.05）。差异有统计学意义,而在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。可以看出,PDGF-B是细胞移植促进损伤脊髓修复中变化最明显的分子,提示其可能是细胞移植改进功能可塑性相关的重要分子。6.OEC+NSC移植对恒河猴SCI功能恢复的影响6.1后肢运动功能评分:改良的Tarlov’s Method评分结果显示损伤侧、细胞联合移植侧评分均较假手术组明显降低,有统计学差异（P＜0.05）。第1周、第2周、第3周、第4周、第7周,OEE+NSE移植细胞联合移植侧Tarlov’s Method评分均明显高于损伤侧评分,均有统计学意义（P＜0.05）。6.2移植细胞在宿主脊髓存活和迁移情况:在宿主脊髓可观察到大量荧光细胞,向头端或尾端迁徙;说明移植细胞在宿主脊髓存活,迁移。6.3神经电生理:CSEP:SCI后各组动物的CSEP信号均消失。损伤侧N1波波幅明显低于损伤对侧,有统计学差异（P＜0.05）;而NSC联合OEC细胞移植1个月,细胞联合移植侧N1波幅明显高于损伤侧,有统计学意义（P＜0.05）;MEP:SCI后各动物MEP信号均消失。而细胞移植1个月能检测到MEP,只是损伤侧损伤平面以下节段MEP的波幅明显低于损伤侧损伤平面以上节段的MEP波幅,有统计学差异（P＜0.05）;而损伤侧与细胞联合移植侧测得的波幅相比较没有明显差异,没有统计学意义（P＞0.05）。比较之,损伤侧损伤平面以上节段测得的潜伏期较损伤侧损伤平面以下节段测得波幅明显延长,有统计学差异（P＜0.05）;而细胞联合移植测得的潜伏期较损伤侧测得的潜伏期明显缩短,有统计学差异（P＜0.05）。6.4 MRI:脊髓左侧半横断+细胞移植瘢痕横切面积明显小于单纯脊髓左侧半横断组脊髓损伤对照节段面积,有统计学差异（P＜0.05）;而脊髓损伤上1节段和损伤下1阶段脊髓横切面面积无明显差异,均没有统计学差异（P＞0.05）。7.PDGF-B在大鼠脊髓全横断损伤后的变化和作用研究:SCT后1天直至损伤后28天,PDGF-B蛋白质和mRNA在损伤脊髓中明显上调。PDGF-B免疫反应的产物分布在疤痕星型胶质细胞中。同时星型胶质细胞明显增值,疤痕组织内的PDGF-B信号分子转录激活因子3（STAT-3）的上调相一致。通过PDGB-B抗体封闭和iRNA对PDGF-B活性分别在蛋白水平和基因水平进行阻断和干扰,导致以下几方面的显着改变:（1）显着下调了PDGF-B下游信号分子的水平;（2）显着减少了星形细胞胶质增生和疤痕的形成;（3）增加轴突再生和出芽;（4）后肢运动功能和感觉功能的显着改善。【结论】1本实验通过不同的细胞组合治疗方法,在低等啮齿类动物SD大鼠和高等灵长类动物恒河猴SCI模型上证明了NSC联合OEC移植能够最有效促进损伤脊髓的运动功能恢复。是目前较为乐观的有效策略。移植细胞能够在大鼠和猴损伤脊髓长时间存活、迁徙。NSC联合OEC移植作为一种治疗SCI的有效方法,具有潜在的临床应用价值。2 NSC联合OEC移植有效促进损伤脊髓的运动功能恢复与多种细胞因子的表达调节有关。其中PDGF-B是较重要的分子。3 PDGF-B蛋白和基因干扰,能显着减少了星形胶质增生,抑制疤痕形成,促进轴突再生,并改善后肢运动功能。从而证明PDGF在SCI修复中是一个关键的调节分子。
衣昕[7]（2007）在《壳聚糖作载体的神经干细胞移植修复脑损伤研究》文中研究说明第一部分壳聚糖支架制备及与神经干细胞生物相容性研究目的:初步研究壳聚糖（chitosan）多孔支架的制备,评价神经干细胞（neural stem cells, NSCs）与壳聚糖多孔支架的生物相容性并研究外源性神经生长因子（neuron growth factor, NGF）在壳聚糖多孔支架微环境中对NSCs分化的影响,探讨壳聚糖作为神经组织工程载体材料的可行性。方法:利用冷冻干燥技术制备壳聚糖多孔生物支架,采用乙醇替代法测定壳聚糖多孔支架孔隙率,形态分析系统软件测量支架孔径。从鼠胚前脑中分离NSCs并进行扩增,将传至第4代的亚细胞系NSCs接种于培养孔内已灭菌的壳聚糖多孔支架载体中继续体外培养,分为NSCs+支架+NGF组、NSCs+支架组。NSCs+支架+NGF组加入含100ng/ml NGF的DMEM/F12无血清培养基;NSCs+支架组加入DMEM/F12无血清培养基。2W后固定取材并行冰冻切片,行MAP-2、GFAP和CNP免疫组化染色,镜下观察,并进行MAP-2阳性细胞计数、细胞面积、细胞周长的图像处理和统计分析。结果:冷冻干燥制备的壳聚糖多孔支架孔隙率为90%,多孔支架孔径为50350μm。NSCs可以在壳聚糖多孔支架中存活、迁移并分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。NSCs+支架+NGF组MAP-2阳性细胞明显多于NSCs+支架组,且胞体较大,突起较多较长。结论:壳聚糖多孔支架与NSCs具有良好的生物相容性,外源性的NGF在壳聚糖多孔支架中能够促进NSCs向神经元分化,壳聚糖可以作为神经组织工程的备选支架材料。第二部分壳聚糖作载体的神经干细胞移植修复脑损伤研究目的:研究壳聚糖作载体的NSCs移植治疗对大鼠创伤性脑损伤的修复作用。方法:将从鼠胚前脑中分离的NSCs进行扩增,并标记BrdU。采用Feeney法致54只SD大鼠创伤性脑损伤,随机分为损伤对照组、NSCs+支架移植组、NSCs+支架+ NGF移植组,每组18只。损伤对照组:清创后不做移植;NSCs+支架移植组:清创后行壳聚糖作载体的NSCs移植;NSCS+支架+ NGF移植组:清创后行壳聚糖作载体的NSCs移植,并在壳聚糖载体中加入NGF。损伤对照组和两移植组大鼠于术后1个月、2个月、3个月三个时间点的前7d分别在损伤区和移植区注射BDA追踪剂,7d后3组大鼠应用避暗回避实验和跳台实验进行学习、记忆等认知功能检测,最后灌注取材、冰冻切片,行Nissl染色、GFAP免疫荧光染色以及BDA追踪组化染色,两移植组还行BrdU与NF-200、GFAP免疫荧光双标检测。结果:①术后1个月、2个月、3个月的行为学检测中两移植组的学习、记忆等认知功能较损伤对照组改善明显,而且NSCs+支架+ NGF移植组较NSCs+支架移植组的改善更加显着。②Nissl染色可见损伤对照组创伤区形成烧杯状空洞,损伤侧海马萎缩变形,两移植组创伤区有移植物填充,移植物中可见到许多尼氏细胞,术后3个月时移植物已经与宿主整合,壳聚糖支架部分降解,损伤侧海马萎缩不明显。③损伤对照组术后1个月创伤区周边可见到大量连接成网状的GFAP阳性细胞, GFAP阳性细胞荧光强度较强,术后3个月仍未有明显改变。两移植组术后13个月创伤区周边只见到少量的GFAP阳性细胞,GFAP阳性细胞荧光强度较弱,两移植组间无明显差异。④两移植组在术后1个月、2个月、3个月移植区均可见到BrdU与NF-200免疫荧光双标记阳性细胞,且NSCs+支架+ NGF移植组较NSCs+支架移植组阳性细胞数多、胞体大、突起多且长。术后3个月两移植组阳性细胞较前两个月在形态上更加成熟。⑤两移植组在术后1个月、2个月、3个月移植区均可见到较多的BrdU与GFAP免疫荧光双标记阳性细胞,两移植组间BrdU与GFAP双标细胞的数量和形态在术后1个月、2个月、3个月时均无明显差异。⑥损伤对照组术后1个月、2个月、3个月BDA追踪组化染色结果为阴性;两移植组在术后1个月、2个月未见到移植区内的细胞突起向宿主脑组织区延伸,术后3个月时移植区内的细胞突起已经延伸至宿主脑组织区,而且NSCs+支架+NGF移植组向宿主脑组织延伸的突起较NSCs+支架移植组多。结论:大鼠创伤性脑损伤后进行壳聚糖作载体的NSCs移植治疗,可以改善大鼠的学习、记忆等认知功能;移植物可以减轻损伤侧海马萎缩变形,并且抑制创伤区周边的胶质细胞增生反应;移植的NSCs可以在脑损伤区的壳聚糖支架中存活、迁移并分化为神经元和星形胶质细胞;外源性的NGF可以促进移植的NSCs向神经元分化,及与宿主脑组织建立联系,更好地改善脑损伤大鼠的认知功能。
张国庆[8]（2007）在《丰富环境干预对新生大鼠HIBD的神经康复作用及其机制的研究》文中指出缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是新生儿时期的危重疾患，常导致患儿死亡，幸存者也易遗留神经系统后遗症。临床上的治疗仅限于支持对症处理，尚缺乏有效的治疗方法。目前，国内外的研究证实，对于HIBD患儿在康复期进行早期干预可以改善神经行为预后，减轻神经系统后遗症。目前我们对于神经康复以及早期干预的机理仍然知之甚少。作为早期干预的动物模型，HIBD大鼠的丰富环境干预模型为我们开启了一扇了解早期干预机制的窗口。丰富环境包括丰富多变的饲养环境、较多的自发运动以及个体间密切交往等因素。具体来说丰富环境应该有较大的笼舍，内有玩具，如梯子、滚轮、绳子、平台、隧洞、盒子、球、积木、秋千等。同时考虑到大鼠的昼夜习性、摄食习惯等因素，每周更换二至三次环境布置。新生大鼠大脑具有丰富的神经干细胞和神经前体细胞，理论上具有很大的神经可塑性。但是，新生大鼠的神经干细胞和前体细胞对于缺氧缺血损伤极为敏感，容易受到损害。因此，丰富环境是否可以改善HIBD大鼠神经行为预后，是否可以促进干细胞的增殖分化值得探究。此外，丰富环境干预脑损伤成年大鼠的窗口期是损伤后一周，但术后一月内干预仍有效果。鉴于新生大鼠神经可塑性更强，理应有更长的干预窗口期。本实验希望了解在不同的起始时间予以不同强度的丰富环境干预对于HIBD大鼠神经预后、齿状回神经干细胞增殖和分化、髓鞘形成以及海马神经营养因子含量的影响，以了解丰富环境干预对于HIBD大鼠的神经行为学影响以及可能的作用机理。第一部分丰富环境对于缺氧缺血新生大鼠的神经行为能力的影响目的：了解不同起始时间和强度的丰富环境干预对于HIBD新生大鼠神经行为学预后的影响。方法：7日龄新生大鼠结扎右侧颈总动脉，在含8％氧气的缺氧箱中缺氧2小时，造成新生大鼠HIBD模型。大鼠分为早期干预组、中期干预组和晚期干预组，分别在HIBD术后第7、14和21天，即生后第14、21和28天开始丰富环境干预，干预期为14天，以了解不同干预起始时间对于干预效果的影响。早中期干预组又分为每天干预1小时、6小时和24小时组，以了解不同干预强度对于干预效果的影响。早中期干预结束后于缺氧缺血（HI）造模后第29天行悬吊试验；HI后第29～32天行水迷宫试验。晚期干预组丰富环境干预结束后于HI后第36天行悬吊试验；第36～39天行水迷宫试验。结果：早中期组每天干预1小时，大鼠的悬吊试验得分（2.86±1.23分和2.74±0.97分）与缺氧缺血组（2.35±1.02分）相比无显着提高；水迷宫试验成绩（分别为53.28±21.23和51.23±22.43s）与缺氧缺血对照组（56.66±10.96）相比无显着提高。而早期干预6、24小时组、中期干预6、24小时组及晚期干预24小时组的悬吊试验成绩（分别为3.67±1.12、3.50±1.41、3.50±0.93、3.56±1.13、3.50±0.92分）和早期干预6小时组、中期干预6、24小时组及晚期干预24小时组的水迷宫试验（46.49±19.27、38.20±18.36、47.96±20.65、35.93±22.45秒）成绩显着高于相应时段的缺氧缺血对照组，但是早中期6小时、24小时干预组之间的悬吊试验成绩和水迷宫试验成绩没有显着性差异。结论：一定强度的丰富环境干预可以显着改善HIBD大鼠的前肢运动能力和空间记忆能力；而且年幼的HIBD大鼠可能具有比较长的干预窗口期。第二部分丰富环境对于HIBD新生大鼠齿状回神经再生和脑髓鞘形成的影响目的：了解丰富环境干预对于大体病理改变、齿状回神经再生和脑髓鞘形成的影响。方法：本部分大鼠HIBD造模和丰富环境干预方法同第一部分。大鼠分为早期干预组、中期干预组和晚期干预组，分别在HIBD造模后第7、14和21天开始丰富环境干预，干预14天。早中期干预组又分为每天干预6小时和24小时组，晚期干预组每天干预24小时。大鼠在丰富环境干预的同时，每天腹腔注射5-溴2-脱氧尿嘧啶（BrdU）50mg／kg，共14天；假手术组和缺氧缺血对照组大鼠也在相对应的时间注射BrdU。早中期组在HI后第32天处死；晚期干预组在HI后第39天处死。取海马齿状回互包平面进行病理及免疫组化检测。测量大鼠损伤侧脑横径和半脑面积，了解丰富环境对大脑病理学的影响。通过BrdU和神经巢蛋白（nestin）的荧光免疫双标检测齿状回新生的神经干细胞；BrdU和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫双标检测新生的星形胶质细胞；BrdU和微管相关蛋白2（MAP2）的荧光免疫双标检测新生的神经元，了解丰富环境干预对于海马齿状回神经干细胞再生和分化的影响。标记脑组织的髓鞘碱性蛋白（MBP），了解HIBD和丰富环境干预对于髓鞘的影响。结果：HIBD大鼠和各丰富环境干预组大鼠损伤侧脑横径和半脑面积无统计学差异。荧光免疫双标结果显示：早、中、晚期缺氧缺血组的海马齿状回的新生细胞总和（分别为102.23±24.44、100.67±31.45、72.45±26.38个）显着高于同期假手术组（分别为22.34±5.71、25.45±6.78、27.45±4.57）；早、中、晚期缺氧缺血组的海马齿状回新生神经元细胞（分别为37.25±20.06、44.57±13.95、28.67±14.57）显着高于同期假手术组（分别为6.17±2.71、10.17±2.64、10.50±2.89）。早期6小时、24小时干预组、中期6小时、24小时干预组和晚期干预24小时组的海马齿状回的新生细胞总和（分别为142.56±21.56、152.57±29.67、157.05±25.78、162.79±29.92、115.34±25.79个）显着高于同期缺氧缺血组。早期6小时、24小时干预组、中期6小时、24小时干预组和晚期干预24小时组的海马齿状回的新生神经元细胞数量（分别为99.85±27.43、94.00±26.97、99.75±20.49、114.85±24.74、72.00±24.91个）显着高于同期缺氧缺血组，显示了丰富环境可以促进齿状回以神经元为主的神经再生。各组间齿状回的新生神经干细胞和星形胶质细胞的数量差异不明显。MBP标记脑白质髓鞘的结果显示：早中期和晚期缺氧缺血对照组MBP阳性细胞比例（分别为6.32±1.63％和6.74±2.19％）显着少于同期假手术组（9.09±1.69和9.37±2.46％），各期丰富环境干预组MBP阳性细胞比例虽然与假手术组相比有所升高，尤其是中期干预组6小时组（8.89±2.29）和中期干预24小时组（8.48±2.67），但与假手术组相比尚未达到统计学差异。结论：丰富环境干预对于脑宏观病理改变无显着影响；丰富环境干预增加海马齿状回新生细胞形成，尤其是新生神经元的形成；缺氧缺血可损伤大脑髓鞘的形成，丰富环境干预对于缺氧缺血后髓鞘的形成可能有有益影响。第三部分丰富环境对于HIBD大鼠海马NGF、BDNF的影响目的：了解丰富环境干预对于HIBD大鼠海马神经生长因子（nerve growthfactor，NGF）和脑源性神经生长因子（brain—derived neurotrophic factor，BDNF）含量的影响。方法：本部分大鼠分组、HIBD造模和丰富环境干预同第二部分。早中期组在HI后第29天处死，晚期干预组在HI后第36天处死，取海马部分以Western blot的方法检测NGF—β和BDNF含量。结果：早中期和晚期HIBD对照组海马的NGF—β相对丰度（分别为0.4939±0.1837、0.3500±0.1095）显着高于同期假手术组（分别为0.1433±0.0536、0.1003±0.0777）：早中期和晚期HIBD对照组海马的BDNF含量（分别为0.9352±0.1961和0.4274±0.1764）显着高于同期假手术组（分别为0.1758±0.1058和0.1086±0.0688），而早期6小时、24小时干预组、中期6小时、24小时干预组和晚期干预组海马NGF—β的相对丰度（分别为1.0419±0.1972、1.1849±0.3396、1.2250±0.4331、1.4587±0.5351、0.7799±0.2533）显着高于同期缺氧缺血组。早期6小时、24小时干预组、中期6小时、24小时干预组和晚期干预组的海马BDNF含量（分别为1.9112±0.4088、1.7472±0.2484、1.6027±0.6925、1.8560±0.4891、1.0565±0.4415）显着高于同期缺氧缺血组。结论：缺氧缺血损伤显着增加海马NGF和BDNF含量，而丰富环境干预进一步增加HIBD后海马NGF和BDNF丰度。通过实验，我们得出以下结论：1．丰富环境干预可以显着改善HIBD大鼠的神经行为预后，无论是在缺氧缺血后的早期、中期还是晚期开始干预均有效果，显示了年幼大鼠可能具有比较长的干预窗口期。2．每天干预6小时与干预24小时的效果明显优于每天干预1小时。但是每天干预6小时组与24小时组之间没有显着性差异，提示对于本模型的新生大鼠，每天干预6小时的强度即已足够，再增加干预强度也不能进一步改善HIBD大鼠的神经学预后。3．无论是早期、中期还是晚期干预组，丰富环境干预均显着增加HIBD新生大鼠齿状回的神经再生，在新生细胞中，神经元占大多数。丰富环境干预可增加脑髓鞘的形成。4．早中晚期丰富环境干预均可以显着增加HIBD大鼠海马的NGF和BDNF的含量。5．丰富环境促进齿状回神经再生并增加海马NGF和BDNF的含量，这可能是丰富环境改善HIBD大鼠神经行为预后的机理之一。
余资江[9]（2006）在《noggin基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究》文中研究表明阿尔茨海默病（Alzheimer disease,AD）是一种中老年人常见的中枢神经退行性疾病,主要表现为进行性痴呆、记忆和认知功能减退,其患病率随年龄增长而上升。随着世界人口日趋老龄化,AD已经成为继心血管疾病、肿瘤和脑卒中之后的第4位死亡原因,当前AD已成为老年医学的重要研究课题。在神经退行性疾病中,神经元的变性、坏死是其功能障碍的主要原因,因此采取有效措施来补充和取代已死亡的神经元,并恢复其功能,将是治疗神经退行性疾病的重要途径。已有研究表明,神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）具有自我更新能力,能够分化成神经元和胶质细胞。利用NSCs植入受损的神经组织,替代和修复受损的神经元,以恢复大脑的正常功能,是未来治疗AD的一个重要方向。目前,利用NSCs治疗AD的研究尚处于初步阶段。已经证实NSCs不仅存在于发育中的神经系统,也持续存在于成年中枢神经系统多个脑区。近年来对于NSCs在神经系统疾病应用方面作了大量的研究,然而真正有效的策略是直接移植或作为基因治疗的载体细胞。但移植的NSCs成活率低,分化为神经元的比例非常低,因此治疗作用非常有限。目前需要解决体外培养NSCs保持其强大的增殖能力和诱导其定向分化的问题。已有研究表明,noggin基因在体内外均具有明显的诱导作用,能够促进NSCs的定向分化,为了提高移植NSCs的治疗效果,我们用noggin基因转染NSCs后移植入海马内,利用NSCs自身的修复和noggin基因定向诱导的双重作用,给予衰老小鼠的海马补充有一定功能的神经元,以达到更好的治疗效果。在本实验中,我们通过基因重组技术构建了表达noggin基因的重组腺病毒,通过病毒上清感染培养的NSCs,将表达noggin的NSCs移植入衰老模型小鼠的海马内,观察noggin修饰的NSCs是否对衰老小鼠具有一定的治疗作用,并与仅含GFP的对照病毒pAdEasy-1-GFP感染的NSCs移植的疗效进行比较,实验结果如下:1.成功构建表达noggin基因的重组腺病毒载体pAdEasy-1-noggin和对照病毒载体pAdEasy-1-GFP,并鉴定其在靶细胞中表达;2.分离、培养并鉴定新生昆明小鼠NSCs;
杨海云[10]（2009）在《脊髓骨髓间充质干细胞促进损伤脊髓修复和神经干细胞的分化》文中进行了进一步梳理目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）及其同时应用免疫抑制药物他克莫司（FK506）对脊髓损伤后神经功能恢复、对星形胶质细胞增生、对空洞形成以及损伤区神经细胞凋亡的影响,探讨BMSC促进脊髓功能恢复的机制;探讨BMSC对神经干细胞分化的影响。方法实验一:提取BMSC;制作大鼠脊髓损伤模型;将体外培养的骨髓间充质干细胞注入脊髓损伤区域,同时联合腹腔注射FK506,于伤后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB评分及斜板实验观察神经恢复情况,并行TUNEL染色观察各组神经细胞凋亡的情况。8周后取材行GFAP免疫组化观察,并测量各组脊髓空洞的大小。实验二:提取神经干细胞;制作大鼠脊髓损伤模型;将体外培养的骨髓间充质干细胞注入脊髓损伤区域,在三天及五周后采集脑脊液;将收集的脑脊液分别与神经干细胞球和神经干细胞与雪旺细胞混合液共同培养,于培养72小时后在倒置显微镜下观察细胞形态、黏附力及代谢状况并随机测量各实验组神经细胞10个轴突长度,用免疫组化进行神经元染色观察神经干细胞的分化情况。结果实验一:1、单纯BMSC移植组与BMSC联合FK506治疗组两组大鼠后肢运动功能均有较明显的恢复,2周开始出现后肢活动,逐步恢复排尿,伤后4周变化最为明显,伤后8周可见协调运动,BMSC联合FK506治疗组恢复情况最快,BBB最高评分可达14分,统计学上有显着差异（P＜0.05）;2、单纯BMSC移植组与BMSC联合FK506治疗组与对照组相比在不同时间段内神经细胞凋亡数都减少,联合治疗组凋亡细胞数减少最为明显（P＜0.05）,TUNEL阳性细胞数3天达到高峰,7天后开始减少;3、应用BMSCs治疗后大鼠脊髓中反应性星型胶质细胞数量及GAFP染色面积均减小,而BMSCs联合FK506更加明显减轻反应性神经胶质增生程度以及减小GFAP染色面积（P＜0.05）;4、损伤8周后两治疗组形成的脊髓空洞明显减小,BMSC联合FK506治疗组减小的更为明显（P＜0.05）。实验二:1、在脑脊液培养神经干细胞球实验中,BMSC移植3天后采集脑脊液组的神经干细胞球贴于培养板底部,并有细胞突生长。BMSC移植5周后采集脑脊液组显示仅有少量的神经干细胞球贴于培养板底部,细胞突短小少见。2、在脑脊液与神经干细胞和雪旺细胞共同培养的实验中发现BMSC移植组的神经干细胞球贴壁,细胞分化明显,细胞突细长,明显多于其它组;雪旺细胞和神经干细胞相互具有亲和现象,细胞突起沿雪旺细胞呈放射状伸展,形成类似“海星”状排列。结论1、移植的大鼠骨髓间质干细胞在脊髓损伤部位能长期存活,并能向邻近脊髓内迁徙。骨髓间质干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用,减少星形胶质细胞的增生,缩小空洞形成体积,抑制神经细胞凋亡。联合应用FK506有协同效果。脊髓损伤后的恢复的微环境需要多个因素的共同作用,FK506是其中的一个有利因素。2、BMSC分泌的各种因子能够促进神经干细胞的分化,并能也能协同雪旺细胞促进神经干细胞的分化。
二、VASCULAR AND ASTROCYTIG REACTIONS DURING ESTABLISHMENT OF HIPPOCAMPAL TRANSPLANTS IN ADULT HOST BRAIN（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、VASCULAR AND ASTROCYTIG REACTIONS DURING ESTABLISHMENT OF HIPPOCAMPAL TRANSPLANTS IN ADULT HOST BRAIN（论文提纲范文）
（1）丝素蛋白水凝胶结合NSC对缺血缺氧脑损伤的修复及姜黄素的干预作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 人神经干细胞原代提取及丝素蛋白作为神经组织工程材料安全性分析 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 培养基配置 |
| 2.方法 |
| 2.1 人神经干细胞(hNSC)的原代培养、传代、冷冻、复苏 |
| 2.2 NSC分化实验 |
| 2.3 细胞增殖实验 |
| 2.4 神经干细胞免疫荧光鉴定 |
| 2.5 流式细胞仪检测NSC死亡率 |
| 2.6 统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.不同脑区神经干细胞原代提取形态学 |
| 2.海马区神经干细胞形态学 |
| 3.神经干细胞增殖能力 |
| 4.神经干细胞特异性标记物表达 |
| 5.分化后神经细胞形态及标记物表达 |
| 6.丝素蛋白水溶液对神经干细胞形态及生长活力的影响 |
| 7.丝素蛋白水溶液对NSC死亡率的影响 |
| 8.丝素蛋白水溶液对NSC干性的影响 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 第二部分 丝素蛋白水凝胶通过影响NSC的轴突发育治疗大鼠缺血缺氧性脑损伤 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 2.方法 |
| 2.1 丝素蛋白水凝胶制备及细胞结合培养 |
| 2.2 分化后神经细胞轴突长度及相关基因检测 |
| 2.3 NSC结合水凝胶对缺血缺氧模型的治疗 |
| (三)结果 |
| 1.不同浓度丝蛋白凝胶材料对神经干细胞悬浮生长状态的影响 |
| 2.分化NSC在丝素蛋白水凝胶上的形态学 |
| 3.分化NSC在丝素蛋白水凝胶上的神经元与神经胶质比例 |
| 4.丝素蛋白水凝胶培养后神经元轴突长度 |
| 5.丝素蛋白水凝胶培养后Bassoon蛋白表达 |
| 6.有序丝素蛋白水凝胶对NSC突触可塑性的影响 |
| 7.SD大鼠缺血缺氧模型构建及NSC治疗 |
| 8.NSC+Silk治疗对Tub-3及GFAP表达的影响 |
| 9.NSC+Silk治疗对Neu N蛋白表达的影响 |
| 10.鼠缺血缺氧模型经治疗后运动受损情况 |
| 11.鼠缺血缺氧模型治疗后学习记忆功能改善 |
| 12.海马组织内神经相关因子表达 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 第三部分 姜黄素对神经组织工程组织的作用及机制研究 |
| (一)前言 |
| (二)材料和方法 |
| 1.材料 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2.方法 |
| 2.1 姜黄素的配制 |
| 2.2 EdU标记率测定 |
| 2.3 细胞凋亡实验 |
| 2.4 轴突数据处理 |
| 2.5 统计学分析 |
| (三)结果 |
| 1.不同浓度Cur对 NSC细胞毒性检测 |
| 2.不同浓度Cur对 NSC增殖能力的影响 |
| 3.不同浓度Cur对 NSC凋亡的影响 |
| 4.不同浓度Cur对 NSC分化形态的影响 |
| 5.姜黄素影响分化神经元轴突长度 |
| 6.姜黄素对分化后神经元轴突相关基因表达 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| (六)参考文献 |
| 综述 神经组织工程(NTE)研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）干细胞活性因子保护大鼠损伤神经干细胞及改善神经功能的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、干细胞活性因子改善大鼠受损神经干细胞 |
| 1.1 对象与方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.1.2.1 大鼠BMSCs的原代分离、培养、传代及保存 |
| 1.1.2.2 流式细胞术鉴定BMSCs细胞膜标记蛋白的表达情况 |
| 1.1.2.3 双抗体夹心法酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA）测定BMSCs培养基中BDNF、IGF-1、VEGF和NGF细胞活性因子的水平 |
| 1.1.2.4 大鼠NSCs的原代分离、培养与传代 |
| 1.1.2.5 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs增殖的影响 |
| 1.1.2.6 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs分化的影响 |
| 1.1.2.7 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs乏氧耐受能力的影响 |
| 1.1.2.8 活性因子对细胞损伤模型中大鼠NSCs耐受能力的影响 |
| 1.1.2.9 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠BMSCs初期克隆形成、细胞形态及传代特点 |
| 1.2.2 大鼠BMSCs细胞膜表面标记蛋白的表达特点 |
| 1.2.3 大鼠BMSCs培养基中BDNF、IGF-1、VEGF和NGF细胞活性因子的表达水平 |
| 1.2.4 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs增殖的影响 |
| 1.2.5 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs分化的影响 |
| 1.2.6 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs乏氧耐受能力及牵张损伤耐受力的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 脑创伤救治的国内外研究现状 |
| 1.3.2 脑创伤靶向治疗药物的研发现状 |
| 1.3.3 干细胞治疗脑创伤的研究进展 |
| 1.3.4 本研究的主要发现与分析 |
| 1.4 小结 |
| 二、BMSCs源性细胞活性因子改善TBI大鼠神经功能的体内实验研究 |
| 2.1 对象与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 SD实验大鼠的购置与日常饲养 |
| 2.1.4 脑损伤大鼠模型的制作与实验分组 |
| 2.1.5 脑损伤大鼠模型术后观察及行为学检测 |
| 2.1.6 脑损伤大鼠模型术后解剖及组织病理学检查 |
| 2.1.6.1 组织解剖及一般组织观察 |
| 2.1.6.2 干/湿重法检测脑水肿程度 |
| 2.1.6.3 mRNA提取及荧光定量PCR检测组织中目标基因的表达 |
| 2.1.6.4 免疫组织荧光方法检测目标蛋白的表达 |
| 2.1.6.5 Western Blot方法检测目的蛋白在脑组织中的表达情况 |
| 2.1.7 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 实验动物一般状况观察 |
| 2.2.2 实验动物活体实验结果 |
| 2.2.2.1 水迷宫训练结果 |
| 2.2.2.2 Morris水迷宫定位航行实验结果 |
| 2.2.3 实验动物离体实验结果 |
| 2.2.3.1 HE染色实验结果分析 |
| 2.2.3.2 实验大鼠脑水肿检测结果 |
| 2.2.3.3 荧光定量PCR检测目标基因在脑组织中的mRNA表达结果 |
| 2.2.3.4 免疫组织荧光方法检测目标蛋白在脑组织中的表达结果 |
| 2.2.3.5 Western Blot方法检测目的蛋白在脑组织中的表达结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 细胞组织工程与TBI治疗概述 |
| 2.3.2 内源性修复对神经损伤的反应及其媒介因子 |
| 2.3.3 细胞因子通过调节损伤微环境影响神经干细胞行为 |
| 2.3.4 生物活性因子调节内源性神经干细胞活性 |
| 2.3.5 本研究的主要发现与分析 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 干细胞治疗中枢神经损伤的可行性和潜在价值 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）神经干细胞生物学特性、神经干细胞移植治疗颅脑损伤后神经功能缺失及免疫基因治疗大鼠胶质瘤的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 神经干细胞生物学特性的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1. 大鼠神经干细胞 |
| 2 人神经干细胞(hNSCs) |
| 讨论 |
| 第二部分 神经干细胞移植治疗颅脑损伤后的神经功能缺失 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1. 神经干细胞治疗脑外伤 |
| 2 骨髓间充质干细胞(MSCs)及应用 |
| 讨论 |
| 第三部分 转染IL-12的神经干细胞免疫基因治疗大鼠颅内C6胶质瘤 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）“通督启神”法电针对AD小鼠海马区小胶质细胞及TLR4通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 阿尔茨海默病的现代研究进展 |
| 1 流行病学现状 |
| 1.1 阿尔茨海默病的诊断 |
| 1.2 阿尔茨海默病的患病率 |
| 1.3 阿尔茨海默病的经济负担 |
| 1.4 患病的危险因素 |
| 2 阿尔茨海默病的发病机制研究进展 |
| 2.1 β淀粉样蛋白假说 |
| 2.2 胆碱能系统假说 |
| 2.3 Tau蛋白假说 |
| 2.4 神经炎症 |
| 2.5 氧化应激假说 |
| 2.6 载脂蛋白E假说 |
| 2.7 细胞自噬 |
| 3 阿尔茨海默病的现代医学治疗研究进展 |
| 3.1 当前药物 |
| 3.2 针对淀粉样蛋白生成途径的药物 |
| 3.3 针对Tau蛋白的药物 |
| 3.4 针对神经炎性反应的药物 |
| 4 总结与展望 |
| 综述二 小胶质细胞在阿尔茨海默病神经炎症中的作用 |
| 1 神经炎症与阿尔茨海默病 |
| 2 小胶质细胞参与神经炎症在阿尔茨海默病中的作用 |
| 2.1 小胶质细胞的起源与分布 |
| 2.2 小胶质细胞的功能分型 |
| 2.3 小胶质细胞的激活 |
| 2.4 阿尔茨海默病中激活小胶质细胞的主要Aβ受体 |
| 2.5 小胶质细胞参与AD中特异性细胞因子信号的传导 |
| 3 总结与展望 |
| 综述三 电针治疗阿尔茨海默病的研究进展 |
| 1 传统医学中对阿尔茨海默病的认识 |
| 1.1 阿尔茨海默病的中医诊断与治疗 |
| 1.2 阿尔茨海默病的针刺选穴依据 |
| 2 电针治疗阿尔茨海默病临床疗效研究 |
| 2.1 电针与药的疗效比较 |
| 2.2 电针加药与药的疗效比较 |
| 2.3 单纯电针疗效 |
| 2.4 其他报道 |
| 3 电针对AD模型动物实验相关机制的研究 |
| 3.1 电针对AD模型动物Aβ沉积的影响 |
| 3.2 电针对AD模型动物Tau蛋白磷酸化的影响 |
| 3.3 电针对AD模型动物突触可塑性及突触传递效果的影响 |
| 3.4 电针对AD模型动物大脑葡萄糖代谢的影响 |
| 3.5 电针对AD模型动物炎性因子表达的影响 |
| 3.6 电针对AD模型动物胆碱能受体的影响 |
| 3.7 电针对AD模型动物细胞凋亡、神经元保护相关因子的影响 |
| 3.8 电针对AD模型动物氧化应激的影响 |
| 3.9 电针对AD模型动物自噬水平的影响 |
| 3.10 电针对AD模型动物线粒体功能的影响 |
| 3.11 音乐电针治疗阿尔茨海默病的研究进展 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 实验研究技术路线图 |
| 实验一 “通督启神”法电针对AD模型小鼠学习记忆能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 Morris水迷宫可视平台实验结果 |
| 2.2 Morris水迷宫隐蔽平台实验结果 |
| 2.3 Morris水迷宫空间探索实验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 动物模型选择依据 |
| 3.2 水迷宫检测选择依据 |
| 3.3 干预方法选择依据 |
| 实验二 “通督启神”法电针对AD模型小鼠海马区形态学与小胶质细胞活化情况的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组小鼠海马区齿状回组织形态学的情况 |
| 2.2 各组小鼠海马区小胶质细胞活化的情况 |
| 3 讨论 |
| 实验三 基于小胶质细胞TLR4信号通路探讨“通督启神”针法的效应机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 CD11b与TLR4免疫荧光共表达情况 |
| 2.2 各组小鼠海马区TLR4蛋白表达情况 |
| 2.3 各组小鼠海马区MyD88蛋白表达情况 |
| 2.4 各组小鼠海马区IRAK4蛋白表达情况 |
| 2.5 各组小鼠海马区TAK1蛋白表达情况 |
| 2.6 各组小鼠海马区TRAF6蛋白表达情况 |
| 2.7 各组小鼠海马区NF-κB蛋白表达情况 |
| 2.8 各组小鼠海马区iNOS蛋白表达情况 |
| 2.9 各组小鼠海马区CD40蛋白表达情况 |
| 3 讨论 |
| 实验四 “通督启神”法电针对AD模型小鼠TLR4 信号通路相关蛋白mRNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组小鼠海马区TLR4mRNA表达水平 |
| 2.2 各组小鼠海马区MyD88mRNA表达水平 |
| 2.3 各组小鼠海马区IRAK4mRNA表达水平 |
| 2.4 各组小鼠海马区TAK1mRNA表达水平 |
| 2.5 各组小鼠海马区TRAF6mRNA表达水平 |
| 2.6 各组小鼠海马区NF-κBmRNA表达水平 |
| 2.7 各组小鼠海马区iNOSmRNA表达水平 |
| 2.8 各组小鼠海马区CD40mRNA表达水平 |
| 3 讨论 |
| 实验研究小结 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新点 |
| 3 存在问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 各组各指标免疫组化表达情况 |
| 附录2 各指标RT-PCR溶解、扩增曲线 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）干细胞移植在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 实验思路 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 大鼠局灶性脑缺血后内源性神经前体细胞的激活 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 神经干细胞在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 骨髓基质细胞在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 神经干细胞与骨髓基质细胞移植治疗的比较 |
| 综述 |
| 研究生在学期间发表的文章 |
| 致谢 |
（6）细胞移植治疗脊髓损伤的优化方案及PDGF-B在脊髓修复中的作用（论文提纲范文）
| 中英文对照索引 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 |
| 一、神经干细胞体外培养技术的建立 |
| 参考文献 |
| 二、骨髓基质干细胞培养技术建立 |
| 参考文献 |
| 三、骨髓造血干细胞的体外培养 |
| 参考文献 |
| 四、嗅鞘细胞培养 |
| 参考文献 |
| 五雪旺细胞的体外培养 |
| 参考文献 |
| 第二部分 |
| 一 材料与方法 |
| 二.实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 |
| 材料和方法 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 博士期间发表的论文和参编教材 |
| 参加科研项目 |
| 博士期间获奖情况 |
| 致谢 |
（7）壳聚糖作载体的神经干细胞移植修复脑损伤研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 已发表文章 |
| 在读期间所获奖励 |
（8）丰富环境干预对新生大鼠HIBD的神经康复作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 丰富环境对于缺氧缺血新生大鼠的神经行为能力的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 丰富环境对于HIBD新生大鼠海马神经再生和脑髓鞘形成的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 丰富环境对于HIBD大鼠海马齿状回NGF、BDNF的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一:NICU住院早产儿1岁时神经发育预后及干预依从性对其的影响 |
| 附录二:丰富环境对于中枢神经系统可塑性的影响 |
| 致谢 |
（9）noggin基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 noggin 基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分noggin 基因重组腺病毒的构建及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 小鼠神经干细胞分离、培养、鉴定及基因转染的实验研究 |
| 实验一 神经干细胞分离、培养及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 noggin 基因转染神经干细胞及表达 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 noggin 基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 文献综述一 神经干细胞微环境的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 脑老化与神经干细胞替代治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 博士研究生期间发表的论文 |
（10）脊髓骨髓间充质干细胞促进损伤脊髓修复和神经干细胞的分化（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 脊髓损伤研究现状 |
| 2.2 脊髓急性损伤修复的研究现状及策略 |
| 2.3 骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤现状 |
| 第3章 大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.2 大鼠骨髓间质干细胞(rBMSC)的分离培养 |
| 第4章 完全性脊髓损伤动物模型的制作 |
| 4.1 钳夹法制作完全性脊髓损伤动物模型 |
| 4.2 讨论 |
| 4.3 大鼠脊髓损伤后相关护理 |
| 第5章 BMSC移植和联合应用FK560对神经功能恢复的影响 |
| 5.1 材料及方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 BMS移植和联合应用FK560对神经细胞凋亡的影响 |
| 6.1 试验材料与方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.3 小结 |
| 第7章 BMSC移植和联合应用FK560对神经胶质增生的影响 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.3 小结 |
| 第8章 BMSC移植和联合应用FK560对残留空洞大小的影响 |
| 8.1 材料及方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.3 结论 |
| 第9章 BMSC移植后脑脊液对神经干细胞球分化的影响 |
| 9.1 材料和方法 |
| 9.2 移植MSCs后的脑脊液(MSCc-CSF)培养神经干细胞 |
| 9.3 试验结果 |
| 9.4 小结 |
| 第10章 BMS移植后脑脊液联合雪旺细胞促进神经干细胞分化 |
| 10.1 材料和方法 |
| 10.2 试验结果 |
| 10.3 结论 |
| 第11章 讨论 |
| 第12章 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
| 论文摘要 |
| ABSTRACT |
四、VASCULAR AND ASTROCYTIG REACTIONS DURING ESTABLISHMENT OF HIPPOCAMPAL TRANSPLANTS IN ADULT HOST BRAIN（论文参考文献）
- [1]丝素蛋白水凝胶结合NSC对缺血缺氧脑损伤的修复及姜黄素的干预作用研究[D]. 韩朝. 大连医科大学, 2020(03)
- [2]干细胞活性因子保护大鼠损伤神经干细胞及改善神经功能的研究[D]. 任登鹏. 天津医科大学, 2018(12)
- [3]神经干细胞生物学特性、神经干细胞移植治疗颅脑损伤后神经功能缺失及免疫基因治疗大鼠胶质瘤的研究[D]. 刘辉. 天津医科大学, 2002(01)
- [4]“通督启神”法电针对AD小鼠海马区小胶质细胞及TLR4通路的影响[D]. 卢梦晗. 北京中医药大学, 2019(04)
- [5]干细胞移植在局灶性脑缺血后神经功能缺损治疗中应用的实验研究[D]. 张卉. 天津医科大学, 2003(01)
- [6]细胞移植治疗脊髓损伤的优化方案及PDGF-B在脊髓修复中的作用[D]. 刘佳. 昆明医学院, 2010(08)
- [7]壳聚糖作载体的神经干细胞移植修复脑损伤研究[D]. 衣昕. 南通大学, 2007(07)
- [8]丰富环境干预对新生大鼠HIBD的神经康复作用及其机制的研究[D]. 张国庆. 复旦大学, 2007(05)
- [9]noggin基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究[D]. 余资江. 第三军医大学, 2006(11)
- [10]脊髓骨髓间充质干细胞促进损伤脊髓修复和神经干细胞的分化[D]. 杨海云. 吉林大学, 2009(08)