一、人骨髓细胞长期冻存的观察（论文文献综述）
郝艺[1]（2021）在《TNF-α诱导的脐带间充质干细胞外泌体对修复细胞及创面愈合的影响研究》文中提出目的:间充质干细胞外泌体（Mesenchymal Stromal Cells Derived Exosomes,MSC-Exos）可以有效的促进创面愈合,然而细胞的培养环境以及细胞移植部位的病理性炎症等微环境状况极大的影响着MSCs（Mesenchymal Stromal Cells,MSCs）的旁分泌效应及MSC-Exos的生物学效应,炎症预处理可以提高HUCMSCs（Human umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell,HUCMSC）的免疫抑制功能及修复功能。本研究通过炎症因子肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factorα,TNF-α）预刺激脐带间充质干细胞后提取的外泌体（TNF-Exos）,与正常条件下培养的HUCMSCs提取的外泌体（Nor-Exos）做对比,在体内研究TNF-Exos对创面愈合的作用效应。同时在体外通过用人脐静脉血管内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC）及成纤维细胞（Human Foreskin Fibroblast,HFF）研究其对创面主要修复细胞的修复相关的生物学效应。方法:（1）HUCMSCs的提取鉴定及HUCMSC-Exos的分离与鉴定:用组织贴壁法提取HUCMSCs,用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）鉴定。运用差速离心法提取脐带间充质干细胞外泌体（Human umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell Derived Exosomes,HUCMSC-Exos）,用透射电镜观察HUCMSC-Exos形态,用纳米颗粒跟踪分析仪（Nanosight）鉴定HUCMSC-Exos的粒径,用蛋白质印迹法（Western Blot,WB）鉴定HUCMSC-Exos特异性标记CD9、CD63的表达。提取正常培养条件下HUCMSC-Exos,记为正常外泌体（Nor-Exos）;参照相关文献取用20ng/m L的TNF-α刺激HUCMSCs,48h后用相同方法提取外泌体,记为TNF-α外泌体（TNF-Exos）。（2）不同的HUCMSC-Exos对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响:建立直径为1cm2的小鼠全层皮肤缺损创面模型,创面周围注射200μg的Nor-Exos或TNF-Exos,观察统计创面愈合率的变化。（3）不同HUCMSC-Exos对血管内皮细胞的影响:用浓度为10μg/m L、50μg/m L、100μg/m L的Nor-Exos或TNF-Exos,分别刺激HUVEC,研究不同浓度的Nor-Exos和TNF-Exos对HUVEC成管效应的作用。（4）不同HUCMSC-Exos对人皮肤成纤维细胞的影响:用浓度为100μg/m L的Nor-Exos或TNF-Exos作用于人皮肤成纤维细胞中,采用CCK8法、划痕实验、实时荧光定量PCR（RT-q PCR）实验,观察Nor-Exos和TNF-Exos对HFF的增殖、迁移、炎症及修复相关因子m RNA表达的影响。结果:TNF-α刺激的HUCMSCs来源的外泌体（TNF-Exos）,可更好的促进创面愈合,效果好于正常条件下培养的HUCMSCs来源的外泌体（Nor-Exos）（P<0.05）。体外研究表明外泌体表现出一定的剂量依赖性,浓度为100μg/m L时,Nor-Exos和TNF-Exos对HUVEC成管效应的效果最佳。与对照组相比,TNF-Exos可以在体外显着地促进HUVEC的血管的生成（P<0.05）,但与Nor-Exos相比无明显差异（P>0.05）。与对照组相比TNF-Exos能够在体外显着地促进HFF的增殖、迁移、降低炎症因子的表达、下调促纤维化因子的表达来抑制瘢痕的形成（P<0.05）,但与Nor-Exos相比无明显差异（P>0.05）。结论:（1）相比于正常培养条件下提取的HUCMSC-Exos,TNF-α预处理后提取的HUCMSC-Exos可更好地促进促进小鼠全层皮肤缺损创面的愈合。（2）Nor-Exos和TNF-α预处理后提取的HUCMSC-Exos都可以促进血管内皮细胞的成管、促进HFF的迁移、增殖、降低TGF-β、IL-6、Collagen I、α-SMA的m RNA的表达来促进创面愈合、减轻瘢痕的形成。（3）TNF-α预处理后提取的HUCMSC-Exos可以促进创面愈合的主要靶点可能并不是通过直接地作用于血管内皮细胞及人皮肤成纤维细胞上,有可能是通过改变创面中的炎症细胞或者炎症类修复细胞如巨噬细胞,以及创面的炎症微环境等因素来影响创面修复。
冯娟[2]（2021）在《成骨细胞损伤中H19及miR-675的表达》文中研究指明目的:长链非编码RNA以及microRNA在疾病中细胞的分化、增殖等功能的调控作用,成为近些年研究的热点。H19是一种长链非编码RNA,miR-675是其外显子,前期课题组在骨损伤愈合过程中发现H19及miR-675促进骨细胞的增殖与分化,具有临床指导意义。骨质疏松疾病中的H19及miR-675没有相关研究。因此,本文旨在研究过氧化氢致成骨细胞损伤后细胞相应的功能变化及H19和miR-675的表达,揭示长链非编码RNA以及microRNA在成骨细胞损伤中的作用,对未来骨质疏松症的诊断与治疗提供有利的科学依据。方法:采用MC3T3-E1细胞的第三代作为实验研究对象,使用碱性磷酸酶和茜素红染色验证细胞具有分化能力;将细胞接种在96孔板,待其贴壁后加入（50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、800μmol/L、1600μmol/L）的过氧化氢干预（2h、4h、8h）后,筛选出最适浓度和最佳时间。实验组为使用最适浓度和最佳时间过氧化氢处理组,对照组不做任何处理。实验组和对照组在处理后的0h、24h、48h、72h用CCK8测得OD值,在0h、24h用显微镜下观察细胞形态,48h进行碱性磷酸酶染色,0h进行流式细胞仪检测细胞凋亡的比例,0h、24h、48h检测细胞的H19以及miR-675的表达情况。结果:（1）本次实验中所用到的实验对象MC3T3-E1细胞系具有成骨细胞的分化能力。（2）选取400μmol/L的浓度干预4h用来建立成骨细胞损伤,成骨细胞损伤组的增殖曲线与对照组相比有显着性差异（P<0.001）,且细胞凋亡率显着高于对照组的（P<0.001）。损伤组的成骨细胞无显着性增殖（P>0.05）,且早期凋亡率显着高于晚期凋亡率。（3）实验组的H19和对照组的H19在成骨细胞损伤建立的24h、48h均有显着性差异（P<0.05）,在0h没有差异（P>0.05）;对照组在3个时间段中,24h的miR-675表达无显着性变化（P>0.05）。但在成骨细胞损伤组和对照组中,0h和24h（P<0.05）、24h和48h（P<0.001）的miR-675的表达有显着性差异（P<0.05）,均有统计学意义。结论:在正常成骨细胞增殖和分化过程中,miR-675参与成骨细胞的正向调控,且与H19存在负向调控的关系,在成骨细胞损伤中也是如此。在成骨细胞的损伤导致的细胞凋亡过程中,H19和miR-675可以作为一种骨质疏松发展期的生物标记,但H19对成骨细胞早期凋亡的判断无明显的作用。H19可作为鉴别骨质疏松的一种生物标记,而miR-675可作为治疗骨质疏松的一种生物标记。
宋京洋[3]（2021）在《不同类型城镇污水处理技术排水对人源干细胞的综合毒性》文中认为城镇污水处理厂排水常回用于工业用水、景观补给和农田灌溉等,用以实现城镇污水高效循环利用。然而城镇污水中残留有难降解污染物,经消毒工艺处理可能产生毒性产物。污水中残留有毒有害物在回用过程中对人体健康产生潜在危害,采用传统的水生生物模型监测排水健康效应受伦理学和周期成本等限制,且无法直接外推至人体健康,目前仍较为缺乏面向人体健康的体外生物毒性模型。本研究选择人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）体外模型,评估典型二级、三级处理和湿地修复技术进水、主要单元工艺出水和最终排水的综合毒性,主要检测hBMSCs的细胞毒性、氧化应激和分化潜能损伤。主要研究内容和结果包括:（1）研究不同处理工艺排水的细胞毒性及毒性削减效果。水样萃取物在相对富集倍数（relative fold enrichment,REF）1.5-45范围对hBMSCs产生细胞毒性,呈剂量依赖性关系。二级处理技术对细胞毒性的削减率为59.8%。三级处理过程中经混凝、微滤和反渗透处理后,出水无显着细胞毒性,但经臭氧消毒后细胞毒性显着上升10.8%。湿地修复技术对细胞毒性的削减率为49.9%。污水有机萃取物对hBMSCs的毒性高于发光菌,66.7%（14/21）水样品对于hBMSCs细胞毒性的TU值高于发光菌急性毒性测试结果。二级处理和三级处理技术对污水hBMSCs细胞毒性的削减率低于发光菌急性毒性,但湿地修复技术对细胞毒性的削减率高于发光菌急性毒性。（2）研究不同处理工艺排水对hBMSCs细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量的影响。水样萃取物在无细胞毒性的REF1-5范围诱导细胞活性氧含量升高。二级处理工艺、三级处理工艺和湿地修复技术对ROS诱导效应的削减率分别为33.8%、20.0%和14.6%,低于细胞毒性削减率和理化指标COD和NH3-N的去除率。（3）研究不同污水处理工艺排水对hBMSCs分化潜能的影响。水样萃取物在REF1-2.5范围损伤干细胞分化潜能。二级处理工艺排水显着抑制细胞内钙沉积的发生,抑制率分别为61.2%、32.3%、44.8%和12.7%。三级处理工艺显着促进细胞的成骨分化,但显着抑制细胞的成脂分化。湿地修复技术进水和出水对细胞的分化潜能损伤无显着差异。毒性指标和理化参数之间无显着相关性,提示排水毒性监测的必要性。污水处理厂排水中的残留有机污染物对人源干细胞的具有一定的有害效应。研究结果为排水水质安全性评价以及城镇污水资源化技术研发提供参考依据和方法。
孙文婷[4]（2021）在《补肾强督方通过lncRNA H19/miR-22/Wnt通路干预人骨髓间充质干细胞成骨机制的研究》文中研究说明目的:探讨补肾强督方在人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs）成骨过程中对lncRNAH19/miR-22/Wnt通路的影响,探索补肾强督方干预hBMSCs成骨分化的机制。方法:选用Wister雄性大鼠制备补肾强督方及西药（塞来昔布）对照含药血清,将hBMSCs细胞分为空白对照组、西药对照组、补肾强督方低、中、高剂量组。诱导成骨分化后,茜素红染色法检测各组成骨情况,荧光定量PCR测定成骨相关标志物及lncRNAH19、miR-22表达,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测Wnt通路DKK-1和β-catenin蛋白表达情况。使用lncRNA H19过表达慢病毒构建lncRNA H19过表达hBMSCs。诱导成骨分化14天后,茜素红染色观察成骨情况,荧光定量PCR测定成骨标志物的表达,Western blot检测Wnt通路DKK-1和β-catenin蛋白表达情况。使用miR-22过表达慢病毒构建miR-22过表达hBMSCs。诱导成骨分化14天后,茜素红染色观察成骨情况,荧光定量PCR测定成骨相关标志物及lncRNA H19表达情况,Western blot检测Wnt通路DKK-1和β-catenin蛋白表达情况。在lncRNAH19过表达hBMSCs诱导成骨分化过程中,加入高剂量补肾强督方含药血清进行干预。诱导成骨分化14天后,茜素红染色观察成骨情况,荧光定量PCR检测成骨标志物及lncRNAH19、miR-22的表达情况,Western blot检测Wnt通路DKK-1和β-catenin蛋白表达情况。结果:hBMSCs诱导成骨分化14天后,补肾强督方各组及西药（塞来昔布）含药血清组均能抑制hBMSCs成骨分化所致的矿化结节形成。与空白对照组比较,补肾强督方各组成骨相关标志物ALP、BMP2、RUNX2、COL1A1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,Wnt通路β-catenin蛋白表达水平降低（P<0.05）、DKK-1蛋白表达升高（P<0.05）,补肾强督方高剂量组lncRNAH19表达降低（P<0.01）,miR-22表达升高（P<0.01）。成功构建lncRNA H19过表达hBMSCs细胞系。诱导成骨分化14天后,与Vector组相比,lncRNAH19过表达组矿化结节明显增加;成骨标志物ALP、BMP2、RUNX2、COL1A1的表达显着升高（P<0.05）;Wnt通路DKK-1蛋白表达显着降低（P<0.05）,β-catenin蛋白表达显着升高（P<0.05）。成功构建miR-22过表达hBMSCs细胞系。诱导成骨分化14天后,与Vector组相比,miR-22过表达组矿化结节明显减少;成骨标志物ALP、BMP2、RUNX2的表达显着降低（P<0.05）;lncRNAH19表达无显着差异（P>0.05）;Wnt通路DKK-1蛋白水平显着升高（P<0.05）,β-catenin水平显着降低（P<0.05）。在lncRNAH19过表达的hBMSCs诱导成骨分化过程中,加入补肾强督方高剂量含药血清进行干预。与lncRNA H19过表达组相比,lncRNA H19过表达加补肾强督方干预组矿化结节明显减少,成骨标志物ALP、BMP2、RUNX2、COL1A1表达均降低（P<0.05）;Wnt通路β-catenin蛋白表达显着升高（P<0.05）、DKK-1表达显着降低（P<0.05）;lncRNAH19 表达降低,miR-22 表达升高（P<0.01）。结论:补肾强督方可以抑制hBMSCs成骨分化,下调lncRNAH19、上调miR-22的表达,同时调控Wnt通路关键蛋白DKK-1和β-catenin的表达。lncRNA H19与miR-22均密切参与hBMSCs成骨分化过程中,lncRNA H19过表达可促进hBMSCs成骨分化,miR-22过表达可抑制hBMSCs成骨分化,二者均能干预下游Wnt通路DKK-1和β-catenin蛋白的表达。补肾强督方含药血清可部分逆转lncRNA H19过表达引成的hBMSCs成骨相关表型变化以及Wnt通路DKK-1、β-catenin蛋白的表达,并上调miR-22 的表达。初步认为补肾强督方可能通过 lncRNA H19/miR-22/Wnt 通路干预 hBMSCs成骨分化,为阐明补肾强督方干预强直性脊柱炎病理性成骨的作用靶点提供客观依据,对进一步探索中药治疗强直性脊柱的作用机制有重要意义。
汪姣[5]（2021）在《胎盘间充质干细胞对糖尿病肾脏疾病免疫炎症损伤的修复作用及机制研究》文中研究表明研究背景与目的:糖尿病肾脏疾病（DKD）是由糖尿病引起的以肾小球硬化和蛋白尿为主要特征的代谢性疾病,是糖尿病最严重的微血管并发症之一,目前已成为导致终末期肾病的主要原因之一。现有治疗方法包括严格控制血糖和血压、限制蛋白质摄入、减少尿蛋白排泄、使用RAS系统阻断剂和SGLT-2抑制剂等,疗效仍有限,很难阻止DKD的发生与进展。鉴于免疫炎症反应是DKD持续发展的驱动因素,本研究立足于免疫炎症视角探寻DKD的防治新策略,具有较为重要的研究意义。近年来,以干细胞治疗为基础的再生医学在防治DKD中具有良好的应用前景,尤其是间充质干细胞（MSCs）因其免疫原性低、强大的免疫调节性能、来源丰富以及不受伦理束缚等优点而备受青睐。已有研究证据显示,MSCs可通过减轻氧化应激、旁分泌营养因子、调节系统或肾脏局部免疫微环境等促进DKD损伤的修复。然而,大多数研究集中在MSCs与固有免疫细胞的交互作用上,其能否通过调节适应性免疫细胞如Th17/Treg细胞平衡对DKD发挥治疗作用,目前尚缺少相关文献报道。基于以上研究背景,本项目拟研究P-MSCs对DKD免疫炎症损伤的修复作用及可能的分子机制。研究方法:本研究首先从GEO数据库筛选出DKD患者肾组织表达芯片数据集,并应用CIBERSORT及单样本基因集富集得分（ss GSEA）算法进行免疫浸润分析。应用主成分分析（PCA）确定免疫浸润特征对DKD患者与正常对照组的聚类能力,并采用R“psych”软件包分析各类免疫细胞在DKD微环境中的相互关系。随后,选取本院DKD及对照肾脏蜡块标本进行病理染色及多标记全景分析DKD微环境差异表达的免疫细胞浸润模式及程序性死亡受体-1（PD1）表达水平。接着,分离并鉴定P-MSCs,构建链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病（T1DM）肾损伤模型并随机分为2组:DKD模型组、P-MSCs治疗组,以正常大鼠作为对照组。STZ注射后8周,尾静脉注射P-MSCs细胞悬液（1×106/细胞,每周1次,共3次）或等量的生理盐水。P-MSCs首次输注后8周,收集每只大鼠尿液、血清及肾脏等组织样本进行后续分析。应用全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮、血糖水平,ELISA法检测血清胱抑素C水平和尿液微量白蛋白水平,苦味酸法检测尿液肌酐水平。应用透射电镜、HE染色及PAS染色评估各组肾脏组织病理改变。应用免疫荧光法进行P-MSCs示踪检测,流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞比例,液相芯片技术检测血清及肾脏组织细胞因子（IL-17A、IL-6、IL-10）水平。另外,利用DKD模型组与P-MSCs治疗组肾脏组织m RNA转录组测序分析显着富集的通路。最后,分离大鼠脾脏淋巴细胞并构建与P-MSCs共培养体系,分为4组:空白对照组、IL-2（10 ng/m L）+PHA（10ug/m L）刺激淋巴细胞组、淋巴细胞与P-MSCs直接接触（按4:1比例加入）组、淋巴细胞与P-MSCs间接接触（上室为淋巴细胞,下室为P-MSCs）组。应用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例和PD1在淋巴细胞中的表达水平,从而分析P-MSCs调节Th17/Treg细胞平衡的可能途径。而且,应用PD-L1 si RNA序列下调P-MSCs上PD-L1表达,通过q RT-PCR验证干扰效率,并应用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例,从而验证P-MSCs是否通过PD1/PD-L1通路调控Th17/Treg细胞平衡。研究结果:本研究从GEO数据库中筛选出25例对照与19例DKD样本进行免疫浸润分析,研究结果显示在DKD组织中细胞毒性T细胞、Th2、Tfh、黏膜相关T细胞、单核细胞、巨噬细胞浸润水平显着升高;Treg细胞、NK细胞、中性粒细胞浸润水平显着降低;Th1和Th17细胞在DKD组织中浸润水平呈升高趋势。此外,PCA与相关性分析结果提示免疫细胞浸润特征能将DKD与对照样本很好地区分开,且各类免疫细胞在DKD肾脏微环境中呈网络式调控关系。在本院收集的6例DKD与6例对照样本验证结果显示,巨噬细胞和Treg细胞浸润水平与预测结果一致,但几乎未观察到Th2细胞的浸润;而且PD-1在DKD肾脏微环境中表达显着升高。分离的P-MSCs在细胞形态上呈纺锤状成纤维样,其细胞表面高表达CD73、CD90、CD105、低表达CD19、CD31、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR,而且P-MSCs细胞能向脂肪、软骨、骨组织分化,因而符合MSCs的鉴定标准。P-MSCs体内示踪结果表明,其主要归巢于胸腺及脾脏等免疫器官,而在胰腺及肾脏局部组织中定植数量很少。P-MSCs治疗能有效改善DKD模型大鼠血糖、肌酐、尿素氮、尿白蛋白/肌酐比值、肾脏肥大指数以及肾脏病理损伤;P-MSCs治疗明显降低Th17细胞比例和升高Treg细胞比例,同时降低促炎因子IL-17A、IL-6水平以及升高抗炎因子IL-10水平。而且,肾脏转录组学分析结果显示,适应性免疫通路、细胞因子通路（IL-17信号通路与TNF-α信号通路）在P-MSCs治疗组显着富集,从而佐证了MSCs通过调节免疫炎症保护DKD的作用机制。P-MSCs与T淋巴细胞共培养结果显示,PHA刺激组Th17细胞比例显着升高、Treg细胞比例显着降低;与PHA刺激组相比,P-MSCs直接接触组Th17细胞比例显着降低、Treg细胞比例显着升高,同时诱导T淋巴细胞PD1表达的上调;而P-MSCs间接接触组Th17及Treg细胞比例未见显着变化;以上结果提示P-MSCs以直接接触方式能显着改善Th17/Treg细胞平衡。而且,与si RNA对照组相比,si RNA PD-L1转染P-MSCs组Th17细胞比例显着升高、Treg细胞比例显着降低,从而提示P-MSCs可能部分通过PD1/PD-L1通路调控Th17/Treg细胞平衡。研究结论:本研究结果表明,P-MSCs通过调节免疫炎症促进DKD损伤的修复,而且PD-1/PD-L1通路可能是介导P-MSCs调控Th17/Treg平衡的分子机制,从而为MSCs应用于DKD防治提供新的实验数据。
卢雅琴[6]（2021）在《人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用及作用机制》文中研究表明研究背景:急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）是一类造血干、祖细胞来源的恶性克隆性疾病,发病时骨髓中异常的原始细胞及白血病细胞大量增殖并抑制正常造血。外泌体（Exosome,Exo）是由细胞分泌的内含蛋白或核酸等活性物质、直径为30～200 nm的脂质双分子层囊泡。外泌体主要参与细胞间的通讯,并且正在成为造血的关键调节剂。Micro RNAs（miRNAs）是一类长度为22 nt的单链非编码RNA,多次被证明在外泌体中富集,发挥疾病治疗的作用。目的:本研究旨在探讨人骨髓间充质干细胞源性外泌体（Exosome derived from human bone marrow mesenchymal stem cells,h BM-MSCs-Exo）是否是通过传递miR-222-3p来抑制IRF2/INPP4B信号转导途径,从而对AML细胞的生长产生负向的调节作用。方法:1.通过超速离心法分离h BM-MSCs-Exo,并将其导入THP-1细胞,以阐明THP-1细胞中外泌体的作用。THP-1细胞的增殖采用CCK-8法检测,细胞的凋亡采用流式细胞术检测。通过q RT-PCR和Western-blot检测miR-222-3p、IRF2和INPP4B的表达。2.通过荧光素酶报告法对miR-222-3p和IRF2之间的相互作用进行分析。结果:1.h BM-MSCs-Exo诱导的THP-1细胞存活率低,凋亡率高,miR-222-3p表达增高,IRF2/INPP4B表达降低。2.当骨髓间充质干细胞源性Exo中的miR-222-3p表达受到抑制时,骨髓间充质干细胞Exo对THP-1细胞的抑制增殖和促凋亡作用明显减弱。一方面,miR-222-3p直接靶向于THP-1细胞的IRF2/INPP4B信号转导。另一方面,IRF2或INPP4B的过度表达抵消了由BM-MSCs-Exo介导的抑制增殖和促凋亡作用。结论:骨髓间充质干细胞通过外泌体传递miR-222-3p,靶向IRF2负向调控THP-1细胞的IRF2/INPP4B信号转导从而抑制白血病细胞增殖和促进细胞凋亡。
周建国[7]（2021）在《microRNA-1286调控BMSCs成骨分化在骨质疏松骨重建作用及机制研究》文中提出目的:骨质疏松（Osteoporosis,OP）是一种全身性代谢性骨病,以骨量减少、骨微结构破坏、骨脆性增加及容易引起脆性骨折为典型特征,预防与治疗一直是临床医师所需解决的问题。骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）是成骨细胞及脂肪细胞的共同前体,其在骨代谢中发挥了重要作用。miRNAs可通过靶向调控干细胞、成骨细胞、破骨细胞和软骨细胞中各种转录因子参与骨形成和血管形成。miRNAs作为OP新的潜在治疗靶点或生物标志物,迅速得到了临床关注,越来越多研究表明miRNAs在OP成骨分化起重要作用,如miR-346、miR-20a、miR-29b、miR-433等。目前已有报道发现micro RNA-1286（miR-1286）被证实与癌症及骨关节炎发生与进展有关,但还没有研究探讨其在OP的作用。我们预实验发现OP患者血清过表达miR-1286,在诱导h MSCs成骨分化不同阶段miR-1286的表达逐渐降低,推测miR-1286可能与OP进展有关。相关研究提示miR-1286可能经某些信号通路（如NF-k B、Wnt/β-catenin、氧化应激）参与成骨分化进程,但miR-1286是否参与OP发生发展尚无相关研究证实。卷曲相关蛋白4（Frizzled related protein 4,FZD4）可经不同信号通路（如氧化应激、甲基化、Wnt/β-catenin信号通路）参与细胞的增殖、分化过程,影响BMSCs的细胞分化方向及分化进程。从Starbase3.0网站上查询miR-1286与FZD4存在结合位点,但关于miR-1286与FZD4在BMSCs成骨分化的调控机制是否存在关联尚无相关报道。为此,本研究探讨分析miR-1286与OP的关联性,阐明miR-1286参与BMSCs成骨分化调控OP骨重建作用及相关机制,旨在为OP的防治提供新的治疗思路。方法:第一部分:（1）选取正常健康成人50例,OP患者50例,抽取5m L血液EDTA抗凝处理,采用实时定量聚合酶链反应（Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR）检测OP患者血清miR-1286的表达差异。（2）将OP患者的BMSCs细胞体外培养,给予间充质干细胞-成骨分化培养基（Mesenchymal Stem Cell-Osteogenic Differentiation Medium,MODM）培养,观察细胞生长、存活与分化状况,采用碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）染色及茜素红染色表征OP患者的BMSCs分化过程。（3）采用q RT-PCR检测OP患者的BMSCs细胞分化过程中的miR-1286表达情况。第二部分:（1）将50例OP患者的BMSCs细胞作为研究对象,传代培养至3-4代后经MODM培养基诱导成骨分化,并分为过表达miR-1286组（miR-1286-mimic组）、对照组（miR-NC组）、低表达miR-1286（miR-1286-Inhibitor组）,每例OP患者的BMSCs标本作3个复孔。（2）miR-1286-mimic组转染miR-1286,形成miR-1286过表达的BMSCs细胞分化环境;miR-NC组转染Anti-miR-NC行对照研究;miR-1286-Inhibitor组转染miR-1286抑制,形成miR-1286低表达的BMSCs细胞分化环境,每2-4d更换MODM培养基,培养14d。（3）采用q RT-PCR检测ALP、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2,RUNX2）、骨钙素（Osteocalcin,OCN）、成骨相关转录因子抗体（Osterix）的m RNA表达水平;采用Western blotting法检测RUNX2、OCN、FZD4、Osterix蛋白表达水平;采用q RT-PCR检测卷曲相关蛋白4野生型（Frizzled related protein 4 wild type,FZD4 WT）、卷曲相关蛋白4突变型（Frizzled related protein 4 mutant,FZD4 MUT）、FZD4的m RNA表达水平;荧光素酶报告基因检测miR-1286表达对FZD4的影响;采用ALP染色检测ALP活性和含量;采用茜素红染色评估细胞钙化情况。第三部分:（1）将50例OP患者的BMSCs细胞作为样本,将传代至5代的BMSCs细胞经MODM培养诱导成骨分化,并分为过表达FZD4组（pc DNA-FZD4组）、空白对照组（pc DNA-NC组）、对照组（miR-NC组）过表达miR-1286组（miR-1286-mimic组）、过表达miR-1286及FZD4组（miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4组）,每例OP患者BMSCs标本作3个复孔。（2）pc DNA-FZD4组转染pc DNA-FZD4模拟FZD4过表达,pc DNA-NC组转染pc DNA-NC行对照组,miR-NC组转染Anti-miR-NC行对照,miR-1286-mimic组转染miR-1286模拟miR-1286过表达,miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4组转染pc DNA-FZD4及miR-1286模拟pc DNA-FZD4和miR-1286同时过表达。每2-4d更换MODM培养基,培养14d。（3）采用q RT-PCR检测ALP、RUNX2、OCN、Osterix的m RNA表达水平;采用Western blotting法检测RUNX2、OCN、Osterix蛋白表达水平;采用ALP染色检测ALP活性和含量;采用茜素红染色评估细胞钙化情况。结果:第一部分:（1）OP患者血清中miR-1286的表达明显高于正常健康人群,差异有统计学意义（p<0.01）。（2）OP患者的BMSCs细胞传代4-6h后,贴壁生长,逐渐有伪足伸出,贴壁细胞轮廓清晰,呈现梭形排列;传代培养7d后,细胞数量逐渐增加,细胞出现了进一步的融合生长,形态呈现蝌蚪、草束样,排列紧密,部分区域可见有旋涡样。成骨诱导7d后,ALP阳性细胞染色呈现深蓝色;茜素红染色呈现桔红色,钙化结节明显。（3）诱导BMSCs成骨分化后第3d、第7d及第14d的miR-1286表达水平低于第1d;诱导BMSCs成骨分化后的第7d及第14d的miR-1286表达水平低于第3d;诱导BMSCs成骨分化后的第14d的miR-1286表达水平低于第7d,差异有统计学意义（p<0.01）。第二部分:（1）miR-1286-mimic组的ALP、RUNX2、OCN、Osterix的m RNA表达水平均低于miR-NC组,miR-1286-Inhibitor组ALP、RUNX2、OCN、Osterix的m RNA表达水平均高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。（2）miR-1286-mimic组的ALP活性低于miR-NC组;miR-1286-Inhibitor组ALP活性高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。miR-1286-mimic组的ALP染色显示ALP含量较miR-NC组显着降低,茜素红染色显示矿化结节的形成较miR-NC组明显减少;miR-1286-Inhibitor组的ALP染色显示ALP含量较miR-NC组增加,茜素红染色显示矿化结节的形成较miR-NC组明显增加。（3）miR-1286-mimic组的RUNX2、OCN、Osterix蛋白水平低于miR-NC组,miR-1286-Inhibitor组的RUNX2、OCN、Osterix蛋白水平高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。荧光素酶报告基因实验表明miR-1286的过表达显着猝灭了野生型FZD4（FZD4 WT）的荧光;miR-1286-mimic组的突变型FZD4（FZD4MUT）表达水平与miR-NC组比较无统计学差异（p>0.05）;miR-1286-mimic组的FZD4 WT表达水平低于miR-NC组;miR-1286-Inhibitor组的FZD4 WT表达水平高于miR-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。miR-1286-mimic组的ALP染色显示ALP含量显着降低,茜素红染色显示矿化结节的形成明显减少。第三部分:（1）pc DNA-FZD4组的ALP、RUNX2、OCN及Osterix的m RNA表达水平均高于pc DNA-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。pc DNA-FZD4组的ALP活性高于pc DNA-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。此外,Western blotting分析还显示pc DNA-FZD4组的RUNX2、OCN、Osterix蛋白水平均高于pc DNA-NC组,差异有统计学意义（p<0.01）。ALP染色显示pc DNA-NC组的ALP含量显着增加,茜素红染色显示矿化结节形成明显增加。（2）miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4与miR-1286-mimic组的ALP、RUNX2、OCN及Osterix m RNA表达水平均低于miR-NC组;且miR-1286-mimic组的ALP、RUNX2、OCN及Osterix m RNA表达水平低于miR-1286-mimic+pc DNA-FZD4组,差异有统计学意义（p<0.01）;在对成果分化相关的ALP活性及成骨相关蛋白水平检测后发现,ALP活性、RUNX2蛋白、OCN蛋白、Osterix蛋白亦呈现了相同变化。结论:（1）OP患者血浆中的miR-1286的表达明显高于健康正常人群,且在诱导BMSCs成骨分化1d、3d、7d、14d后,miR-1286的表达逐渐降低,这提示miR-1286与OP成骨分化负性相关,可能与OP的发生发展有关。（2）本研究从OP患者提取的BMSCs经细胞培养后发现,传代效果良好,细胞生长能力旺盛,功能状态良好,可满足细胞形态学观察研究,可作为后续体外实验成骨分化的实验标的。（3）miR-1286的过表达抑制了OP患者BMSCs的成骨分化能力,引起了成骨分化下游的关键酶及蛋白表达下调;而miR-1286低表达,促进了OP患者BMSCs的成骨分化能力,引起了成骨分化下游的关键酶基因与蛋白表达的上调,这说明miR-1286可能介导参与了OP成骨分化相关过程。（4）miR-1286可直接与FZD4 m RNA靶向结合,进而影响了FZD4的表达,FZD4的过表达促进了OP患者的BMSCs成骨分化作用,加速了OP骨的生成;miR-1286能够通过与FZD4相互作用而调控抑制h BMSCs的成骨分化,这表明miR-1286与FZD4存在靶向结合特性,能靶向结合FZD4,经Wnt/FZD4途径介导参与OP的BMSCs成骨分化过程,从而调控影响OP的发生发展。
刘杰[8]（2021）在《基于膜式微流控的低温保护剂在线处理方法研究》文中研究表明作为细胞、组织唯一有效的长期保存方法,低温保存在现代医学中发挥着重要作用,特别是低温保存的红细胞、干细胞和免疫细胞已广泛应用于临床治疗。低温保护剂是低温保存中的必要材料,但在常温下有毒副作用。临床输注前的低温保护剂处理过程常需要消耗大量时间,并导致大量细胞丢失,影响临床救治。本文探索基于微流控的“在线处理”模式,即在临床输注过程中实时去除细胞中的低温保护剂,有望杜绝现有低温保护剂处理模式对细胞治疗产生的不利影响。所开展的工作包括以下几个方面:（1）低温保护剂在线处理系统研究。为满足“在线处理”的高通量、高去除率、高细胞回收率等需求,本文设计并制作了基于微滤式微流控的在线处理系统。首先基于对系统中流动传质特性的理论分析,对微流道、膜窗的结构尺寸及膜窗材料进行了详细设计,促使系统的跨膜流动阻力远大于微流道内的流动阻力,从而实现稀释液向细胞悬浮液的单向流动,避免细胞堵塞膜孔所导致的系统性能下降;进一步地,基于等摩尔法设计在线处理系统的组合结构,并通过对系统流动传质过程的三维仿真,确认设计方案具备理想的序列化、梯度式降低细胞悬浮液侧低温保护剂浓度的性能。在此基础之上,运用改进的膜式微流控芯片加工和装配工艺,完成在线处理系统的制作。（2）低温保存干细胞的在线处理实验研究。利用所设计的在线处理系统,开展了面向骨髓间充质干细胞（BMSCs）的低温保护剂处理实验,并以单步法作为实验对照。实验结果表明,在线处理系统在低通量（0.2 ml/min）和高通量（1.0 ml/min）入口条件下均获得良好结果:细胞存活率高于81.1%,计数回收率高于92.7%。相比单步法,本文设计的在线处理系统实现了低温保护剂的梯度去除,有效减少渗透压突变造成细胞损伤,而且处理过程简单高效。细胞形态学观察和CCK检测进一步表明,在线处理后的细胞功能与新鲜干细胞及对照实验结果均无显着性差异。（3）在线处理系统的优化方法研究。在线处理系统的设计变量复杂,支持在特定条件下对在线处理系统的优化,本文提出了对在线处理系统性能快速仿真和预测的方法。首先运用有限体积法原理建立系统流动传质过程的准二维模型,并基于等效电路法和基尔霍夫定律建立系统的离散控制方程,从而快速求解系统内部流量/浓度分布;进一步地,基于所得流量和浓度分布情况,预测细胞在系统中的运动过程和环境浓度变化条件,以龙格库塔算法计算细胞体积响应特性。通过比较不同系统方案对应的最大细胞体积,将可获得不同入口条件下的优化方案。本文对基于微流控的“在线处理”模式进行研究,并面向BMSCs开展低温保护剂的处理实验。通过开发低温保护剂在线处理系统,解决了传统方法耗时长、处理通量小、细胞存活率低、低温保护剂去除不彻底的问题。实验结果表明,在线处理系统可在高通量条件下高效地去除细胞中的低温保护剂,细胞回收率也优于传统方法,为解决目前低温保护剂处理面临的问题提供了有效方案。
裴歌[9]（2021）在《具有抗菌性能的可降解生物材料在骨修复中的应用》文中研究指明可降解骨修复材料可在体内逐渐降解并促进骨修复等优点,目前已成为生物材料研究与产品开发的重要方向。无论是可降解无机骨修复材料还是可降解金属骨修复材料目前都存在一定的缺陷:临床上常用的硫酸钙骨水泥存在降解速率过快、力学性能差、生物活性差、抗菌活性低等缺点,而具有优异力学性能的金属锌存在生物活性较低、抗菌活性仍需提高等问题。因此在骨修复过程中容易出现细菌感染的情况,影响骨缺损的修复进度。针对以上缺点,本文一方面使用具有生物活性的硅基陶瓷对硫酸钙骨水泥进行改性,另一方面对金属锌表面构建微纳米结构化来改性,通过对材料理化性能和抗菌性能的探究,评估具有可降解性和抗菌性的双功能材料在受感染骨缺损领域的应用潜力。本论文的研究内容和结果主要包括以下两个方面:1.负载万古霉素的硅酸钙微球/硫酸钙复合骨水泥性能的研究。通过向硫酸钙骨水泥中掺入硅酸钙微球,制备得到了一种具有合适降解速率、药物缓释能力和生物活性的复合骨水泥。研究结果表明,引入硅酸钙微球后使得硫酸钙骨水泥的固化时间延长、可注射性提高,降解速率明显减缓,养护三天后的复合骨水泥的抗压强度可以达到15.67 MPa,几乎是POP骨水泥的两倍。使用负载万古霉素的硅酸钙微球与硫酸钙复合的骨水泥具有很好的缓释药物的能力,其21天累计药物释放量约为载药硫酸钙骨水泥的1/2。此外,掺入硅酸钙微球提高了硫酸钙骨水泥的体外矿化性能,并且硅酸钙微球降解会释放活性离子Si2+,可以促进人骨髓间充质干细胞的增殖。2.可降解金属锌表面金属有机框架（MOFs）结构的构建与性能研究。通过超声法在锌表面原位合成了由沸石咪唑酯骨架-8（ZIF8）晶体组成的MOFs层。实验结果显示超声时间与二甲基咪唑的浓度会影响锌表面ZIF8的形貌和生长密度。稳定性测试结果显示ZIF8颗粒层在锌表面具有良好的稳定性。体外矿化实验证明表面修饰后的锌,在其表面有明显的Ca-P层的生成,提高了锌的体外矿化性能。抗菌实验显示,相对于锌金属,ZIF8修饰后的锌对金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用。此外,体外细胞实验结果表明ZIF8层对细胞无明显毒性,具有较好的细胞相容性。综上所述,本文使用不同的制备方法,通过对负载万古霉素的硅酸钙微球/硫酸钙复合骨水泥和锌表面修饰ZIF8颗粒的制备,实现了材料的抗菌功能,改善了材料的理化性质,提高了材料的生物活性,为感染骨缺损修复材料的研究提供了新策略。
王佳[10]（2021）在《i-PRF对人骨髓间充质干细胞成骨分化影响及其机制》文中研究指明目的:富血小板纤维蛋白在口腔软硬组织再生中应用广泛,但其机制尚未明了,本实验旨在探究注射型富血小板纤维蛋白（injectable-PRF,i-PRF）对人骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells）生物学行为影响,以及该细胞在成骨分化过程中作用及其机制。材料与方法:通过全骨髓贴壁法,根据间充质干细胞特性获得细胞后,通过流式细胞仪检测细胞表面分子以及干细胞多向分化能力对细胞进行鉴定。获得人肘前臂静脉血后通过700rpm室温离心3分钟后获得i-PRF。通过扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）和人生长因子阵列膜检测其显微结构和分子组成。并将获得的i-PRF置于完全培养基后获得含有10%、20%和40%的i-PRF。将对照组与各个实验组刺激细胞后通过CCK-8（Cell counting kit-8）、细胞迁移实验、活/死细胞染色确定后续实验浓度。使用含有10%、20%的i-PRF在含有或不含有诱导液的条件下与BMSCs体外培养并通过碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性检测、茜素红染色以及通过RT-q PCR检测成骨相关基因表达。本实验并通过RT-q PCR和Western Bolt探究i-PRF在促进BMSCs成骨分化过程中分子机制。结果:BMSCs表面CD90及CD44阳性率达到97.65%和96.37%,CD34和CD45的阳性率为3.57%和2.35%。并通过成骨分化诱导21天、成脂诱导28天后成骨及成脂诱导阳性。扫描电镜下观察i-PRF为高密度的三维网状结构,含有大量的白细胞和血小板嵌入其复杂的纤维蛋白结构中,并通过人生长因子阵列膜半定量检测i-PRF中所含生长因子类别,其中不仅大量含有EGF,IGF,PDGF等已知因子,还有M-CSF-R,以及β-NGF等尚未报道过的因子。CCK-8结果显示:第3天开始,各组出现差别,直至第7天,含有10%及20%的i-PRF对比空白组细胞增殖率高。但含有40%的i-PRF在第7天细胞增殖则进入了静止期,在所有实验组中以20%的i-PRF在3、5、7天促进细胞增殖作用效果最为显着。并通过活/死细胞染色发现,i-PRF生物相容性良好,所有实验组均无死细胞并且其中通过染色证明10%和20%i-PRF组细胞增殖效果最为明显。以及通过细胞迁移实验进一步证实10%和20%浓度的i-PRF组在促进细胞迁移作用效果最佳。在成骨诱导过程中通过ALP活性和茜素红染色发现,20%浓度的i-PRF可诱导BMSCs成骨分化并显着促进分化。RT-q PCR结果显示,成骨相关基因Runx2,COL1,OCN,OPN在7天培养后,10%和20%i-PRF显着促进Runx2和COL1的表达,但在OCN、OPN的表达上,实验组20%i-PRF可促进其表达但并无显着意义。最终通过RT-q PCR和Western Bolt探究其成骨分化机制中,经过i-PRF处理过的细胞发现,p-ERK1/2以及p-PLCγ1经过i-PRF刺激后,比对照组其表达量分别增加47.2%和66%,并且成骨相关蛋白Runx2的表达也有所增加,并高达72.7%。与加入抑制剂U0126相比,可见到Runx2、p-ERK1/2以及p-PLCγ1的表达与相应对照组相比均被抑制。RT-q PCR检测也发现相同结果,ERK1/2以及基因PLCγ1经过i-PRF刺激后,基因表达量增加,与加入抑制剂U0126相比,可见到ERK1/2、Runx2以及PLCγ1的表达被抑制。结论:i-PRF可诱导BMSCs成骨分化,可能通过活化ERK1/2通路正向调控BMSCs的成骨分化并促进PLCγ1的表达。
二、人骨髓细胞长期冻存的观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人骨髓细胞长期冻存的观察（论文提纲范文）
（1）TNF-α诱导的脐带间充质干细胞外泌体对修复细胞及创面愈合的影响研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分:不同的HUCMSC-Exos对小鼠皮肤全层缺损创面愈合的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第二部分:不同的HUCMSC-Exos对人脐静脉内皮细胞的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 第三部分:不同的HUCMSC-Exos对人皮肤成纤维细胞的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 不同预处理对间充质干细胞的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）成骨细胞损伤中H19及miR-675的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要英文缩写中英文对照表 |
| 前言 |
| 1.文献综述 |
| 1.1 .骨组织 |
| 1.2 .骨质疏松症 |
| 1.3 .成骨细胞 |
| 1.3.1 .成骨细胞的来源与作用 |
| 1.3.2 .成骨细胞增殖 |
| 1.3.3 .成骨细胞凋亡 |
| 1.3.4 .成骨细胞与相关研究 |
| 1.4 .过氧化氢 |
| 1.4.1 .过氧化氢的损伤作用 |
| 1.4.2 .过氧化氢相关研究 |
| 1.4.3 .过氧化氢在成骨细胞的研究 |
| 1.5.H19 |
| 1.5.1 .H19 结构 |
| 1.5.2 .H19 与氧化应激 |
| 1.5.3 .H19 与相关研究 |
| 1.5.4 .H19 与成骨细胞 |
| 1.6.miR-675 |
| 1.6.1 .miR-675 的结构 |
| 1.6.2 .miR-675 与氧化应激 |
| 1.6.3 .miR-675 与相关研究 |
| 1.6.4 .miR-675 与成骨细胞 |
| 1.7.H19 与miR-675 |
| 2.实验对象和实验方法 |
| 2.1 .实验对象和主要试剂 |
| 2.1.1 .实验对象 |
| 2.1.2 .主要试剂及试剂来源 |
| 2.2 .实验方法 |
| 2.2.1 .成骨细胞培养 |
| 2.2.2 .实验分组及干预 |
| 2.2.3 .主要仪器 |
| 2.2.4 .过氧化氢的制备 |
| 2.2.5 .磷酸缓冲盐溶液制备 |
| 2.2.6 .碱磷酸酶染色(ALP) |
| 2.2.7 .茜素红染色 |
| 2.2.8 .细胞增殖实验 |
| 2.2.9 .细胞损伤模型 |
| 2.2.10 .细胞凋亡 |
| 2.2.11 .mRNA相对表达量检测 |
| 2.3 .数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 .成骨细胞鉴定 |
| 3.2 .成骨细胞最适干预方案 |
| 3.3 .细胞增殖曲线 |
| 3.4 .细胞损伤及碱性磷酸酶染色 |
| 3.5 .细胞凋亡 |
| 3.6 .mRNA相对表达量检测 |
| 3.6.1 .H19 的表达变化 |
| 3.6.2 .miR-675 的表达情况 |
| 4.分析与讨论 |
| 4.1 .过氧化氢损伤细胞引起成骨细胞功能改变 |
| 4.2 .H19 的变化受过氧化氢损伤的影响 |
| 4.3 .miR-675 的变化受过氧化氢损伤的影响 |
| 4.4 .H19 与miR-675 在过氧化氢调节中存在负调节的关系 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）不同类型城镇污水处理技术排水对人源干细胞的综合毒性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1.绪论 |
| 1.1 回用水水质毒性效应研究进展 |
| 1.1.1 国内外中水回用概况 |
| 1.1.2 污水回用风险研究 |
| 1.1.3 污水回用水质评价方法 |
| 1.2 污水处理工艺概述 |
| 1.2.1 污水二级处理 |
| 1.2.2 污水三级处理 |
| 1.2.3 污水消毒工艺 |
| 1.2.4 湿地生态修复 |
| 1.3 生物毒性测试方法 |
| 1.3.1 急性毒性 |
| 1.3.2 氧化应激 |
| 1.3.3 双向诱导分化 |
| 1.4 人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)毒理学模型 |
| 1.5 本文主要研究思路与内容 |
| 1.5.1 选题依据 |
| 1.5.2 研究目的和内容 |
| 2.污水处理工艺排水对hBMSCs的细胞毒性及毒性削减 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.2 水样采集及前处理 |
| 2.1.3 理化指标检测方法 |
| 2.1.4 hBMSCs细胞培养和暴露 |
| 2.1.5 hBMSCs细胞活性测定 |
| 2.1.6 发光菌急性毒性实验 |
| 2.1.7 数据处理 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 理化指标检测结果 |
| 2.2.2 代表性城镇二级污水处理厂进水和各工艺排水对 hBMSCs 的细胞毒性 |
| 2.2.3 代表性城镇三级污水处理厂进水和各工艺排水对 hBMSCs 的细胞毒性 |
| 2.2.4 代表性湿地生态修复项目进水和最终排水对 hBMSCs 的细胞毒性 |
| 2.2.5 代表性城镇二级、三级污水厂和湿地修复技术排水的发光菌急性毒性 |
| 2.2.6 两种受试生物模型的比较 |
| 2.2.7 不同处理工艺对污水发光菌急性毒性和人源细胞毒性的削减 |
| 2.2.8 水体一般毒性与理化参数的相关性分析 |
| 2.3 小结 |
| 3.污水处理工艺排水对hBMSCs的氧化损伤效应 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂与仪器 |
| 3.1.2 hBMSCs细胞培养和暴露 |
| 3.1.3 细胞氧化应激实验 |
| 3.1.4 数据处理 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 代表性二级污水处理工艺排水对人源干细胞的氧化损伤效应 |
| 3.2.2 代表性三级污水处理工艺排水对人源干细胞的氧化损伤效应 |
| 3.2.3 湿地修复技术排水对人源干细胞的氧化损伤效应 |
| 3.2.4 不同处理工艺对人源干细胞的氧化损伤效应削减 |
| 3.3 小结 |
| 4.污水处理工艺排水对hBMSCs细胞分化潜能的干扰作用 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂与仪器 |
| 4.1.2 hBMSCs细胞培养和暴露 |
| 4.1.3 成骨/成脂双向诱导分化 |
| 4.1.4 钙结节茜素红染色与定量 |
| 4.1.5 油红O染色与定量 |
| 4.1.6 数据处理 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 代表性二级污水处理工艺排水对人源干细胞双向分化的影响 |
| 4.2.2 代表性三级污水处理工艺排水对人源干细胞双向分化的影响 |
| 4.2.3 湿地修复技术排水对人源干细胞双向分化的影响 |
| 4.2.4 不同处理工艺对hBMSCs多种毒性效应结果比较 |
| 4.3 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
（4）补肾强督方通过lncRNA H19/miR-22/Wnt通路干预人骨髓间充质干细胞成骨机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一: 长链非编码RNA对骨髓间充质干细胞成骨分化及强直性脊柱炎影响的研究进展 |
| 1 lncRNA的概述 |
| 2 lncRNA与BMSCs成骨分化 |
| 3 lncRNA与强直性脊柱炎 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二: 中医药治疗强直性脊柱炎的研究进展 |
| 1 病因病机 |
| 1.1 古籍溯源 |
| 1.2 现代医家的认识 |
| 3 中医药治疗强直性脊柱炎的临床实验研究进展 |
| 4 中医药治疗强直性脊柱炎的基础实验研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验相关细胞系 |
| 1.2 实验相关动物 |
| 1.3 实验相关仪器设备 |
| 1.4 实验相关试剂 |
| 1.5 实验相关抗体 |
| 1.6 实验相关引物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 补肾强督方对hBMSCs成骨分化及lncRNA H19、miR-22表达的影响 |
| 2.2 H19/miR22调控Wnt通路对hBMSCs成骨分化的影响 |
| 2.3 补肾强督方通过lncRNA H19调控Wnt通路干预hBMSCs成骨分化的验证 |
| 2.3.2 细胞传代扩增培养 |
| 2.3.4 诱导成骨分化 |
| 2.3.5 诱导成骨分化14天后茜素红染色验证成骨情况 |
| 2.3.6 Westerm blot法检测Wnt通路关键蛋白DKK-1、β-catein |
| 2.3.7 荧光定量PCR法检测成骨相关基因及lncRNA H19、miR-22 |
| 研究结果 |
| 1 补肾强督方对hBMSCs成骨分化及H19、miR-22表达的影响 |
| 1.1 补肾强督方对hBMSCs成骨分化的影响 |
| 1.2 补肾强督方对Wnt通路关键蛋白的影响 |
| 1.3 补肾强督方对hBMSCs成骨分化后H19、miR-22表达影响 |
| 2 lncRNA H19/miR-22通过Wnt通路干预hBMSCs成骨分化 |
| 2.1 lncRNA H19过表达对hBMSCs成骨分化的影响 |
| 2.2 miR-22过表达对hBMSCs成骨分化的影响 |
| 3 补肾强督方通过H19干预hBMSCs成骨分化 |
| 3.1 茜素红染色观察各组矿化结节情况 |
| 3.2 荧光定量PCR检测各组成骨相关标志物的表达 |
| 3.3 Western Blot检测Wnt通路关键蛋白的表达 |
| 3.4 荧光定量PCR检测各组H19、miR-22的表达 |
| 讨论 |
| 1 AS病理性成骨与lncRNA H19/miR22/Wnt通路 |
| 2 AS病理性成骨的中医认识及补肾强督方干预AS病理成骨的研究基础 |
| 3 补肾强督方对hBMSCs成骨分化及lncRNA H19、miR-22表达的影响 |
| 4 H19/miR-22调控Wnt通路对hBMSCs成骨分化的影响 |
| 5 补肾强督方通过H19干预hBMSCs成骨分化的验证 |
| 6 本研究的特色 |
| 7 本研究的创新性与局限性 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）胎盘间充质干细胞对糖尿病肾脏疾病免疫炎症损伤的修复作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 DKD的流行状况 |
| 1.2 DKD的发病机制 |
| 1.3 DKD的治疗现状 |
| 1.3.1 新型降糖药 |
| 1.3.2 RAAS系统抑制剂 |
| 1.3.3 内皮素受体拮抗剂 |
| 1.3.4 其他药物 |
| 1.4 间充质干细胞概述 |
| 1.4.1 MSCs的多向分化潜能 |
| 1.4.2 MSCs的旁分泌功能 |
| 1.5 MSCs在糖尿病及DKD治疗中的应用 |
| 1.5.1 MSCs在糖尿病治疗中的临床应用 |
| 1.5.2 MSCs在 DKD治疗中的应用 |
| 1.6 本研究目的与内容 |
| 第2章 糖尿病肾脏疾病免疫细胞的浸润模式分析 |
| 2.1 资料与方法 |
| 2.1.1 数据下载与预处理 |
| 2.1.2 应用CIBERSORT反卷积算法进行免疫浸润分析 |
| 2.1.3 主成分分析(principal component analysis,PCA) |
| 2.1.4 应用ss GSEA算法进行免疫浸润分析 |
| 2.1.5 免疫细胞浸润丰度的相关性分析 |
| 2.1.6 DKD标本获取 |
| 2.1.7 PAS与 Masson染色分析 |
| 2.1.8 多标记全景分析 |
| 2.1.9 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 纳入样本的基本临床特征 |
| 2.2.2 DKD与对照样本22 种免疫细胞浸润比例分析 |
| 2.2.3 DKD与对照样本22 种免疫细胞聚类分析 |
| 2.2.4 DKD与对照样本22 种免疫细胞PCA分析 |
| 2.2.5 免疫细胞在DKD和对照样本中的比例差异 |
| 2.2.6 DKD样本中24 种免疫细胞的相关性分析 |
| 2.2.7 DKD和对照组PAS与 Masson染色结果分析 |
| 2.2.8 DKD和对照组差异表达的免疫细胞验证分析 |
| 2.2.9 DKD和对照组PD-1 的表达水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 间充质干细胞对 DKD 模型大鼠免疫炎症损伤的修修复作用研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 主要试剂的配置 |
| 3.1.3 实验设备与仪器 |
| 3.1.4 P-MSCs的获取与分离 |
| 3.1.5 P-MSCs的鉴定 |
| 3.1.6 P-MSCs的培养技术 |
| 3.1.7 P-MSCs的体外标记 |
| 3.1.8 实验动物与分组 |
| 3.1.9 标本采集 |
| 3.1.10 生理生化指标的检测 |
| 3.1.11 肾脏病理指标的检测 |
| 3.1.12 流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞比例 |
| 3.1.13 利用Luminex技术检测细胞因子水平 |
| 3.1.14 肾脏组织m RNA转录组测序分析 |
| 3.1.15 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 P-MSCs细胞形态 |
| 3.2.2 P-MSCs细胞表面标志物 |
| 3.2.3 P-MSCs细胞多系分化潜能 |
| 3.2.4 P-MSCs标记和体内示踪 |
| 3.2.5 P-MSCs对 DKD模型大鼠理化指标的影响 |
| 3.2.6 P-MSCs对 DKD模型大鼠肾脏病理学改变的作用 |
| 3.2.7 P-MSCs对 DKD模型大鼠外周血Th17/Treg细胞平衡的作用 |
| 3.2.8 P-MSCs对 DKD模型大鼠系统及肾脏局部炎症因子的作用 |
| 3.2.9 P-MSCs对 DKD模型大鼠肾脏组织转录组分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 PD-1/PD-L1通路在P-MSCs调控 Th17/Treg 平衡中的作用研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验设备与仪器 |
| 4.1.3 P-MSCs的培养技术 |
| 4.1.4 分离大鼠脾脏淋巴细胞 |
| 4.1.5 q RT-PCR法测定si RNA PD-L1 干扰效率 |
| 4.1.6 P-MSCs与淋巴细胞共培养及分组情况 |
| 4.1.7 流式检测PD1 在淋巴细胞中的表达水平 |
| 4.1.8 流式检测Th17/Treg细胞比例 |
| 4.1.9 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 P-MSCs对 Th17 细胞的影响 |
| 4.2.2 P-MSCs对 Treg细胞的影响 |
| 4.2.3 P-MSCs对 PD1 表达水平的影响 |
| 4.2.4 si RNA序列的选择 |
| 4.2.5 下调P-MSCs上 PD-L1 表达对Th17 细胞的影响 |
| 4.2.6 下调P-MSCs上 PD-L1 表达对Treg细胞的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 全文总结 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 攻读博士期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用及作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 英文缩略词表 |
| 附录B 常用试剂配制 |
| 附录C 个人简历 |
| 附录D 综述 外泌体和 miRNA 在白血病中的作用及其治疗意义 |
| 参考文献 |
（7）microRNA-1286调控BMSCs成骨分化在骨质疏松骨重建作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分:人骨髄间充质干细胞体外培养与成骨分化诱导 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验设备及方法 |
| 2.2 研究方法与步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 2.4 研究技术路线图 |
| 3 结果 |
| 3.1 BMSCs体外诱导成骨分化及ALP、茜素红染色 |
| 3.2 miR-1286在OP患者血清和正常健康人群血清的表达及miR-1286在hBMSCs成骨分化过程中的表达 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:miR-1286对BMSCs成骨分化作用及其与FZD4 结合特性 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验设备及方法 |
| 2.2 实验方法及步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 2.4 研究技术路线图 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-1286 过表达抑制人骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 3.2 miR-1286 靶向结合FZD4 并调控其表达 |
| 4 讨论 |
| 第三部分:miR-1286 通过介导FZD4 调控OP骨重建中BMSCs成骨分化作用 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验设备及方法 |
| 2.2 实验方法及步骤 |
| 2.3 统计学处理 |
| 2.4 研究技术路线图 |
| 3 结果 |
| 3.1 FZD4 高表达促进人骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 3.2 miR-1286 通过介导FZD4 调控人骨髓间充质干细胞成骨分化 |
| 4 讨论 |
| 结论与展望 |
| 1 结论 |
| 2 本研究特色创新之处 |
| 3 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 论文综述 卷曲受体蛋白在内分泌代谢疾病、肿瘤及诱导骨分化的研究进展 |
| 参考文献 |
（8）基于膜式微流控的低温保护剂在线处理方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景和意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 离心法 |
| 1.2.2 膜分离法 |
| 1.2.3 微流控法 |
| 1.3 研究内容与结构安排 |
| 1.3.1 研究内容 |
| 1.3.2 章节安排 |
| 第二章 低温保护剂在线处理系统研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 在线处理系统设计原理 |
| 2.3 在线处理系统微流道设计 |
| 2.3.1 微流道单元设计 |
| 2.3.2 系统微流道设计 |
| 2.3.2.1 几何建模 |
| 2.3.2.2 参数设置 |
| 2.3.2.3 网格划分 |
| 2.3.2.4 仿真求解 |
| 2.3.2.5 结果分析 |
| 2.4 膜式微流控芯片的制作 |
| 2.4.1 芯片结构 |
| 2.4.2 芯片材质 |
| 2.4.3 芯片制作 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 低温保存干细胞的在线处理实验研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 低温保存干细胞的在线处理实验 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验平台 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.3.1 添加低温保护剂过程 |
| 3.2.3.2 降复温过程 |
| 3.2.3.3 去除低温保护剂过程 |
| 3.2.3.4 对照试验 |
| 3.2.4 检测方法 |
| 3.2.4.1 荧光染色 |
| 3.2.4.2 渗透压检测 |
| 3.2.4.3 细胞增殖与形态学观察 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 生物学分析 |
| 3.3.2 物理学分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 在线处理系统的优化方法研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 干细胞体积响应实验 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 实验结果 |
| 4.2.4 实际应用 |
| 4.3 膜装置的传质特性研究 |
| 4.3.1 理论基础 |
| 4.3.2 离散模型 |
| 4.3.3 数值方法 |
| 4.3.3.1 流量分布的确定 |
| 4.3.3.2 溶质分布的确定 |
| 4.3.3.3 计算程序 |
| 4.3.4 实验验证 |
| 4.4 在线处理系统优化与验证 |
| 4.4.1 序列优化 |
| 4.4.2 序列验证 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 工作总结 |
| 5.2 工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 |
（9）具有抗菌性能的可降解生物材料在骨修复中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 骨组织缺损及其修复 |
| 1.1.1 骨组织 |
| 1.1.2 骨缺损及其修复 |
| 1.2 骨修复生物材料概述 |
| 1.2.1 可降解骨修复材料的研究 |
| 1.2.2 骨修复材料抗菌方式的研究 |
| 1.3 课题的提出及研究内容 |
| 1.3.1 课题的提出 |
| 1.3.2 本文的研究内容 |
| 第2章 负载万古霉素的硅酸钙微球/硫酸钙复合骨水泥性能的研究 |
| 2.1 负载万古霉素的硅酸钙微球/硫酸钙复合骨水泥的制备 |
| 2.1.1 主要原料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器与检测设备 |
| 2.1.3 制备方法 |
| 2.2 CSM/POP骨水泥的性能表征 |
| 2.2.1 CSM的物相分析及形貌表征 |
| 2.2.2 CSM/POP骨水泥的相组成 |
| 2.2.3 CSM/POP骨水泥的体外矿化性能 |
| 2.2.4 CSM/POP骨水泥的凝固时间和可注射性 |
| 2.2.5 CSM/POP骨水泥的力学性能与孔隙率 |
| 2.2.6 CSM/POP骨水泥的降解性能及离子释放速率 |
| 2.2.7 CSM/POP骨水泥的药物释放性能 |
| 2.2.8 CSM/POP骨水泥的细胞培养 |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 CSM的物相分析及形貌表征 |
| 2.3.2 CSM/POP骨水泥的相组成与矿化 |
| 2.3.3 CSM/POP骨水泥的凝固时间和可注射性 |
| 2.3.4 CSM/POP骨水泥的力学性能及孔径分布 |
| 2.3.5 CSM/POP骨水泥的体外降解性能 |
| 2.3.6 CSM/POP骨水泥的药物释放性能 |
| 2.3.7 CSM/POP骨水泥的细胞活性 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 可降解金属锌表面MOF结构的构建与性能研究 |
| 3.1 可降解金属锌表面MOF结构的制备及性能表征 |
| 3.1.1 主要原料与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器与检测设备 |
| 3.1.3 制备方法 |
| 3.2 Zn-ZIF8 的性能表征 |
| 3.2.1 Zn-ZIF8 的物相分析及形貌表征 |
| 3.2.2 Zn-ZIF8 的亲疏水性 |
| 3.2.3 Zn-ZIF8 的稳定性 |
| 3.2.4 Zn-ZIF8 的离子释放速率 |
| 3.2.5 Zn-ZIF8 的体外矿化性能 |
| 3.2.6 Zn-ZIF8 的抗菌性能及细胞培养结果 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 Zn-ZIF8 的物相分析及形貌表征 |
| 3.3.2 Zn-ZIF8 的亲疏水性 |
| 3.3.3 Zn-ZIF8 的稳定性 |
| 3.3.4 Zn-ZIF8 的离子释放速率 |
| 3.3.5 Zn-ZIF8 的体外矿化性能 |
| 3.3.6 Zn-ZIF8 的抗菌性能 |
| 3.3.7 Zn-ZIF8 的细胞活性 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 全文总结与展望 |
| 4.1 总结 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（10）i-PRF对人骨髓间充质干细胞成骨分化影响及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 骨缺损修复的研究现状 |
| 1.2 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells)的研究 |
| 1.2.1 BMSCs的体外分离 |
| 1.2.2 BMSCs的表面特征及鉴定 |
| 1.2.3 BMSCs的动员 |
| 1.3 富血小板纤维蛋白的研究现状及其在骨缺损修复中的应用 |
| 1.4 MAPK通路研究现状 |
| 1.5 PLC-γ蛋白的研究现状 |
| 第二章 BMSCs分离培养与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料及方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 实验仪器设备 |
| 2.2.3 成骨诱导液成分表 |
| 2.2.4 BMSCs的分离及培养 |
| 2.2.4.1 骨髓组织获取 |
| 2.2.4.2 BMSCs的分离 |
| 2.2.4.3 BMSCs传代及冻存 |
| 2.2.4.4 BMSCs表明标志物鉴定 |
| 2.2.4.5 BMSCs的多向分化鉴定 |
| 2.2.4.5.1 BMSCs的成骨分化鉴定 |
| 2.2.4.5.2 BMSCs的成脂分化鉴定 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 BMSCs形态观察 |
| 2.3.2 BMSCs表面标志物鉴定 |
| 2.3.3 BMSCs多向分化鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 i-PRF的制取与结构分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料及方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.2.2.1 i-PRF的制备 |
| 3.2.2.2 i-PRF的结构及细胞因子 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 i-PRF |
| 3.3.2 i-PRF分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 i-PRF对 BMSCs的生物学行为的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 仪器设备及试剂 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.2.2.1 i-PRF对 BMSCs增殖的影响 |
| 4.2.2.2 i-PRF对 BMSCs活力的影响 |
| 4.2.2.3 i-PRF对 BMSCs迁移的影响 |
| 4.2.2.4 i-PRF对 BMSCs成骨分化的影响 |
| 4.2.2.4.1 碱性磷酸酶活性 |
| 4.2.2.4.2 茜素红染色 |
| 4.2.2.4.3 成骨相关基因表达分析 |
| 4.2.3 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 CCK-8 |
| 4.3.2 活/死细胞染色结果 |
| 4.3.3 细胞迁移 |
| 4.3.4 影响成骨分化结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 i-PRF通过上调ERK1/2和PLCγ1 促进BMSCs成骨分化 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与方法 |
| 5.2.1 仪器设备及试剂 |
| 5.2.2 方法 |
| 5.2.2.1 i-PRF 对 BMSCs 成骨基因以及 ERK1/2 和 PLCγ1 表达水平的影响 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 RT-qPCR检测i-PRF对 BMSCs成骨基因以及ERK1/2和PLCγ1 表达水平的影响 |
| 5.3.2 Western Blot检测i-PRF对 BMSCs相关蛋白表达水平的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 总论与展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
| 临床病例报告 |
| 参考文献 |
四、人骨髓细胞长期冻存的观察（论文参考文献）
- [1]TNF-α诱导的脐带间充质干细胞外泌体对修复细胞及创面愈合的影响研究[D]. 郝艺. 遵义医科大学, 2021
- [2]成骨细胞损伤中H19及miR-675的表达[D]. 冯娟. 武汉体育学院, 2021(12)
- [3]不同类型城镇污水处理技术排水对人源干细胞的综合毒性[D]. 宋京洋. 大连理工大学, 2021(01)
- [4]补肾强督方通过lncRNA H19/miR-22/Wnt通路干预人骨髓间充质干细胞成骨机制的研究[D]. 孙文婷. 北京中医药大学, 2021(08)
- [5]胎盘间充质干细胞对糖尿病肾脏疾病免疫炎症损伤的修复作用及机制研究[D]. 汪姣. 南昌大学, 2021(01)
- [6]人骨髓间充质干细胞源性外泌体在急性髓系白血病中的作用及作用机制[D]. 卢雅琴. 蚌埠医学院, 2021(01)
- [7]microRNA-1286调控BMSCs成骨分化在骨质疏松骨重建作用及机制研究[D]. 周建国. 南昌大学, 2021(01)
- [8]基于膜式微流控的低温保护剂在线处理方法研究[D]. 刘杰. 电子科技大学, 2021(01)
- [9]具有抗菌性能的可降解生物材料在骨修复中的应用[D]. 裴歌. 上海师范大学, 2021(07)
- [10]i-PRF对人骨髓间充质干细胞成骨分化影响及其机制[D]. 王佳. 兰州大学, 2021(09)