一、钴60γ射线对猪六号病毒的消毒试验（论文文献综述）
袁厅,华利忠,张磊,孙叶茂,邵国青,熊祺琰,韦艳娜,王丽,刘蓓蓓,王海燕,冯志新[1]（2021）在《猪肺炎支原体无细胞培养用优质猪血清的制备》文中研究说明猪血清是细胞和微生物培养基的重要成分。笔者拟研究一种高质量猪血清生产工艺。筛选96头Mhp、PRV、PRRSV、PCV2等阴性育肥猪,随机分成2组,每组48头,分别采用无菌采血和屠宰场采血方式采血,优化血清分离和灭菌条件,通过比对2组血清采集量﹑溶血程度﹑无菌程度以及培养猪肺炎支原体的效果,对上述2种采血方式制备的血清进行评价。无菌技术共采集了129.6 L的血清量,远高于屠宰场采集的量（96.0 L）,且前者外观为半透明淡黄色,无溶血现象出现,后者每批均有不同程度的溶血。无菌方式采集的血清细菌污染鉴定均为阴性,而屠宰场采集的全部为阳性。无菌技术采集血清配置的培养基,培养Mhp 168株和NJ株的利用率均在95%以上,屠宰场采集的血清培养上述2种支原体的利用率仅在30%左右。此优质猪血清的制备工艺为支原体培养提供了保障。
段晓杰,赵岩,柯林楠,徐丽明,王召旭[2]（2020）在《次氯酸钠溶液和钴-60辐照对脱细胞结膜基质中病毒灭活效果的研究》文中研究表明目的验证猪源脱细胞结膜基质中病毒灭活工艺的灭活效果。方法用不同浓度次氯酸钠溶液对猪睾丸（ST）细胞和牛肾（MDBK）细胞行细胞毒性实验;选择猪眼结膜、脱细胞结膜基质各3个批号,用ST细胞和MDBK细胞进行次氯酸钠灭活处理和钴-60（25 kGy）辐照处理后的样品/终止产物的细胞毒性实验;以猪细小病毒（PPV）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）为指示病毒,采用细胞病变法分别测定次氯酸钠工艺和钴-60（25 kGy）辐照工艺对猪脱细胞结膜基质（中间品）病毒灭活效果,并进行细胞盲传实验。结果次氯酸钠溶液稀释至质量浓度100.00 mg/L（1.0‰）时,ST细胞增殖率大于70%;质量浓度50.00 mg/L（0.5‰）次氯酸钠溶液的MDBK细胞增殖率大于70%。1.0‰次氯酸钠溶液处理的猪眼结膜样品在10倍体积稀释后,对ST细胞和MDBK细胞均无抑制作用。脱细胞结膜基质辐照处理,经100倍体积稀释后对MDBK细胞无毒性,经10倍体积稀释后对ST细胞无毒性影响。3个批号猪眼结膜样品经过次氯酸钠溶液处理30 min后,PPV和BVDV的灭活平均降低系数分别为≥4.542 logs和≥4.333 logs;负载PPV病毒样品的盲传3代为阳性,即仍能检测到PPV。3个批号脱细胞结膜基质样品经钴-60辐照后,PPV和BVDV的灭活平均降低系数分别为≥4.792 logs和≥3.667 logs,负载BVDV的3个批号样品盲传结果为阴性,负载PPV病毒的3个批号样品盲传结果为阳性。结论用次氯酸钠溶液和钴-60辐照两个工艺分别处理脱细胞结膜基质（中间品）后的病毒灭活降低系数累加为:BVDV总降低系数大于8 logs,PPV总降低系数大于9 logs。两个工艺联合可以有效灭活猪源脱细胞结膜基质中污染的PPV和BVDV。
胡瑞鸿[3]（2020）在《抗H株小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与质量评估》文中进行了进一步梳理小鹅瘟（Gosling plague,GP）又称为鹅细小病毒病,是由鹅细小病毒引起的一种高度接触性、败血性传染病,是危害养鹅业的主要传染病。近年来,根据遗传进化分析,小鹅瘟病毒（Gosling plague virus,GPV）的毒力有增强趋势,给该病的防治带来更大的挑战。目前GP的特异性防治主要依赖接种卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,IgY）进行被动免疫,对GP强毒感染具有明显的防治效果。由于IgY具有价格低廉、防治效果好等优点,已被广大养鹅户接受和采用。但目前使用的IgY多为粗制抗体,缺乏统一的生产、检验标准,琼扩抗体效价高低不等,故研制一种纯度及效价高,防治效果好,有统一生产标准的GPV IgY势在必行。本研究从黑龙江省某地饲养的雏鹅群中,采集疑似GP病死鹅的病料,进行GPV的分离鉴定,利用分离获得的GPV研制抗GP的IgY,并对其质量进行评价,具体研究内容和方法如下:（1）GPV的分离鉴定用氯仿提取法从疑似GP病死鹅的肝、脾组织中分离病毒,接种3日龄雏鹅和12日龄鹅胚进行病毒分离;分离的病毒经特异性检验（琼脂扩散试验（AGP）和鹅胚中和试验）、超微结构观察、毒力测定、理化特性（热敏感试验、乙醚敏感试验、氯仿敏感试验、胰蛋白酶敏感试验、耐酸性试验）检验、纯净性试验、核酸检测、VP3基因序列鉴定及基因进化树分析,进行综合鉴定。（2）GPV IgY的研制将分离鉴定获得的GPV（命名为H株）,经鹅胚逐级传代至F10,F10代进行1000倍稀释,接种12日龄鹅胚,收获鹅胚液作为GPV灭活疫苗抗原,抗原无菌检验和毒力检测合格后,进行浓缩及灭活,通过接种12日龄鹅胚进行灭活检验;灭活检验合格后进行GPV灭活疫苗的配制及乳化,获得GPV灭活疫苗,对其进行物理性状、无菌检验及安全性检验;将检验合格的GPV灭活疫苗按经典免疫程序免疫产蛋鸡,当高免鸡蛋卵黄液的GPV IgY琼扩抗体效价≥1:64时,对其进行除脂、提取和灭活,制备出抗H株GPV IgY。（3）抗H株GPV IgY的质量评价通过监测GPV IgY的琼扩抗体效价对GPV IgY的理化特性（温度、酸碱度、胃蛋白酶的作用时间、冻融次数）进行评价;通过GPV IgY单次单剂量、重复单剂量和单次大剂量皮下注射3日龄雏鹅及小白鼠的安全性试验,观察雏鹅和小白鼠的健康状况,局部及全身反应情况对GPV IgY的安全性进行评价;通过不同琼扩抗体效价和不同剂量的GPV IgY对GPV强毒攻毒24 h雏鹅的治疗试验、对GPV感染不同时长和不同日龄雏鹅的治疗试验,依据雏鹅治愈率,对GPV IgY治疗效果进行评价;用不同琼扩抗体效价和不同免疫剂量的GPV IgY对雏鹅皮下接种,24 h后用GPV强毒攻毒,依据雏鹅保护率进行预防效果评价;同类产品免疫3日龄雏鹅,依据雏鹅保护率与治愈率,评价GPV IgY与同类产品的差异。通过物理性状、无菌检验、支原体检验、GPV IgY琼扩抗体效价监测及对雏鹅攻毒保护率监测,确定GPV IgY的储存温度和时间。试验结果表明:（1）GPV的分离鉴定结果分离的病毒接种雏鹅,呈现与GP一致的临床症状和病理剖检变化;接种鹅胚,可在鹅胚中增殖,且为非血凝性感染病毒;AGP显示,从雏鹅和鹅胚分离的病毒液与GP阳性血清之间出现沉淀线;鹅胚中和试验证明,病毒液能被GP阳性血清中和,中和后的病毒液接种鹅胚不引起死亡;电镜下观察,H株病毒粒子具有典型的细小病毒特征;H株鹅胚和雏鹅传代培养F6～F10代,毒价最高且稳定,病毒的ELD50和LD50分别大于10-5.0/0.2 m L和10-4.0/0.2m L;以分离到的H毒株分别接种3日龄、10日龄、20日龄雏鹅,其致病性随雏鹅日龄增大而减弱;分离的病毒在56℃3 h保持其感染性,能够抵抗乙醚、氯仿、胰蛋白酶和酸性条件（p H3.0）的作用;分离的病毒液细菌、支原体和外源病毒检查均为阴性,证明H株病毒纯净;PCR核酸检测病毒约在500 bp处出现特异性DNA条带,DNA大小与GPV相符;上述结果表明,分离的病毒符合GP生物学特性,该病毒为GPV（命名为H株）。以PCR扩增出的VP3基因,与参考毒株的VP3基因序列对比,核苷酸的同源性在95.9%～99.1%之间,氨基酸同源性为97.9%～99.6%之间;基因进化树分析表明,H株与在黑龙江省分离的SP、ZZ、ZD、DQ、JX等毒株亲缘关系较与GD（广东）、YG（扬州）等毒株近。（2）GPV IgY的制备结果GPV H株灭活疫苗抗原无菌检验呈阴性、鹅胚液ELD50为10-5.22/0.2 m L、灭活检验鹅胚全部健活。GPV灭活疫苗的物理性状、无菌检验、安全检验均合格。用该GPV灭活疫苗免疫产蛋鸡,收集AGP≥1:64高免鸡蛋的卵黄液。高免卵黄液经酸化水1:8稀释、p H5.2、4℃作用15 h、1900 g离心20 min条件下除脂;酸化水-1.5%辛酸-33%硫酸铵提取;终浓度0.05%甲醛溶液经20～25℃灭活24 h,对GPV IgY的琼扩抗体效价、蛋白浓度及蛋白纯度均无显着影响,确定上述除脂、提取和灭活条件为最佳工艺。（3）GPV IgY的质量评价结果上述制备的抗H株GPV IgY在60℃以下作用2 h,GPV IgY琼扩抗体效价与对照比不降低,当温度达到70℃以上,琼扩抗体效价显着降低,当温度达到75℃作用30 min时,琼扩抗体效价呈阴性;p H范围在4.0～11.0时,GPV IgY琼扩抗体效价与对照比差异不显着,p H值为3.0和12.0时,GPV IgY琼扩抗体效价显着低于对照组;当胃蛋白酶作用6 h,琼扩抗体效价无变化,作用8 h以上显着降低;GPV IgY经5次反复冻融,琼扩抗体效价与对照比无显着差异;GPV IgY免疫雏鹅和小白鼠均未出现任何注射局部和全身不良反应,精神状态良好,采食正常;GPV IgY对雏鹅治疗效果表明,琼扩抗体效价越高、注射剂量越大,雏鹅治愈率越高;病毒感染雏鹅的时间越长、雏鹅日龄越大,雏鹅治愈率越低;GPV IgY对雏鹅预防效果表明,同一注射剂量,琼扩抗体效价越高,雏鹅保护率越高,同一琼扩抗体效价,注射剂量增加,雏鹅保护率增高;GPV IgY免疫雏鹅后12 h～10 d,对雏鹅保护率高达88.00%以上,可有效抵抗病毒感染。差异对比试验表明,研制的GPV IgY的雏鹅保护率与治愈率均高于同类产品。（4）GPV IgY的储存条件2～8℃储存24个月,GPV IgY的物理性状、纯净性、琼扩抗体效价稳定,对雏鹅感染GPV的保护率达88.00%以上。（5）GPV IgY推荐使用剂量和方法对已感染GPV的雏鹅,选择GPV IgY琼扩抗体效价为1:16以上,1.0 m L/只;对未感染雏鹅进行紧急预防免疫,0.5 m L/只,皮下注射,对GPV感染的治愈率和保护率均达80.00%。
杨刚[4]（2020）在《基于P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白构建纳米纤维复合疝修补片的研究》文中研究说明疝气是一种发病率高且只可通过无张力疝修补手术治疗的普外科疾病。采用疝修补片修补疝环口的治疗术式大大减少了患者的痛苦以及疝的复发,但多数商用补片材料由于无法被降解吸收,会使患者出现异物反应。与此同时,可吸收的生物补片由于缺乏促进腹壁再生的能力,最终导致缺损处修复失败,复发率高。因此,迫切需要开发新型补片产品用以应对临床及市场需求。为了构建一种可完全降解吸收的同时又可诱导组织再生的疝修补片,本文依托静电纺丝技术构建了组织工程纳米纤维基补片支架,同时在支架结构中引入猪源纤维蛋白作为诱导性再生因子,研究中首先通过调整纺丝液浓度、纺丝电压、电纺距离以及灌注速度,探究了过程参数对聚（ε-己内酯-L-丙交酯）[poly（ε-caprolactone-co-L-lactide）,P（CL/LLA）]膜片表面纤维形貌的影响。随后将浓度为9%的P（CL/LLA）溶液与猪源纤维蛋白溶液按照体积比为1:0、2:1、1:1、1:2、0:1共混纺丝,制备了一系列P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白复合电纺膜,利用SEM结合孔隙率的测定结果对补片样品的表观形貌进行了评价;通过FITR和XPS来表征了复合补片样品表面的基团和元素;以静态水接触角实验评价了样品的亲水性;并对P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白复合电纺膜的机械性能以及生物相容性进行了测试与评价;最后在产品质量控制方面也根据相关标准进行了后续的尺寸加工和溶剂挥发性检测等。研究结果显示,静电纺丝技术制备的P（CL/LLA）纳米纤维材料具有与天然ECM类似的微观结构,其形态结构随着不同参数的设置有规律的变化:电纺纤维直径会随纺丝液浓度的升高而变粗且P（CL/LLA）最佳的纺丝浓度为6%9%;纤维直径会随着电压的升高而变小;接收距离过短或灌注过快都会导致溶剂难以充分挥发,使纤维之间产生粘连。P（CL/LLA）与猪源纤维蛋白可通过静电纺丝技术结合成一种孔隙率高、孔隙相连性好的材料,且两种物质间没有发生化学反应。P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白复合电纺膜对细胞没有毒性,且随着猪源纤维蛋白的比例逐渐提高,膜中纤维直径逐渐减小、孔隙率增大、亲水性能以及促进细胞黏附和增殖的性能均有所提升,然而其抗拉伸、顶破、撕裂和缝合牵拉等力学性能却出现不同程度的下降。通过对比各组复合疝修补片样品性能可知,当P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白体积为2:1时,其细胞相容性以及诱导细胞生长增殖的能力最好,力学性能也可满足临床使用的标准,具有潜在的诱导组织再生的能力。此外,临床操作过程可以通过在复合疝修补片上打孔的方式使其在植入后获得紧密的和耐久的固定,切割打孔后的补片的尺寸会610天内发生一定程度的缩小,因此在出厂前应予以调整使其尺寸充分稳定。最后,还需要将补片解析35天使其六氟异丙醇残留量<最低标准0.55mg/g,同时辐照灭菌并保证28℃的避光真空条件保存。
董沐晨[5]（2018）在《维持脱细胞角膜基质透明机理的研究 ——一种新型脱细胞猪角膜基质的制备及临床初步观察》文中进行了进一步梳理目的:探索维持脱细胞角膜基质透明的机理,研究一种新型的保护性脱细胞体系,在脱除异种细胞和抗原的同时,保持角膜结构和透明度,并初步观察新型脱细胞角膜基质的临床应用效果。方法:1.新鲜猪角膜刮除上皮后,采用飞秒激光将角膜切割成直径10 mm,厚度300μm或500μm的基质片。将500μm厚的猪角膜基质在超纯水中溶胀至1、2和5 mm厚,然后将其浸入100%甘油中进行脱水,透射电镜观察角膜基质纤维的超微结构变化,分析溶胀造成角膜透明度下降的原因。将500μm厚的猪角膜基质置于保护液中进行高静压处理（200 MP×1 min×2次）,随后置于含有去垢剂和核酸酶的角膜脱细胞液体中,在26℃、100 rpm条件下处理2 h,为了探索胶体渗透压与离子渗透压在脱细胞过程中对角膜透明度维持的不同作用,在角膜保护液中加入不同剂量氯化钠,调节离子渗透压至200、400和600 mOsM,加入不同剂量试剂A,调节胶体渗透压至10、30和50 mmHg,检测不同离子和胶体渗透压对角膜透明度、厚度、透光率及脱细胞程度的影响,确定影响角膜透明度的关键因素。2.采用试剂A辅助的新型脱细胞体系制备脱细胞猪角膜基质（APCs）,并对其生物学特征进行评价,包括透明度、厚度、体外透光率、DNA残留量、α-gal含量、胶原含量、糖胺聚糖（GAG）含量、机械性能等,通过扫描和透射电镜观察其超微结构。行MTT及迟发型超敏反应实验,观察其浸提液对人角膜上皮细胞增殖活性的影响及是否会引起豚鼠的迟发型超敏反应;行兔角膜基质囊袋移植、兔板层角膜移植术（300μm）,观察术后角膜上皮愈合、透明度、新生血管及免疫排斥反应情况,评价其相容性。3.临床上对5例符合条件的角膜溃疡患者移植该新型脱细胞猪角膜基质,术后随访3个月,观察角膜上皮愈合速度、透明度、视力恢复、角膜厚度、缝线松动、眼压情况等,初步评价其临床效果。结果:1.与正常猪角膜基质相比,随着溶胀程度的增加,角膜透明度逐渐下降。虽然所有角膜通过甘油脱水后都恢复了透明,但溶胀超过2 mm厚度时,角膜基质纤维的完整性和规则排列被破坏且难以恢复正常。与补充氯化钠以达到各种离子渗透压相比,补充试剂A后胶体渗透压的增加对细胞脱除效率未产生明显影响,但是随着胶体渗透压的增高,脱细胞后角膜透明度、厚度和透光率均逐渐改善,当胶体渗透压达到50 mmHg时与正常猪角膜基质最为接近。2.使用胶体渗透压为50 mmHg的新型保护性脱细胞体系能够在2 h内完成脱细胞处理,同时保持角膜的结构和透明度。该体系去除了猪角膜基质中约98.6%的DNA成分和28.4%的α-gal成分,而胶原蛋白、糖胺聚糖含量和机械性能未见明显降低。新型脱细胞猪角膜基质浸提液对人角膜上皮细胞的增殖活性未产生明显影响,对豚鼠未引起明显的迟发型超敏反应;兔囊袋移植后6个月未见明显异常反应;兔板层角膜移植术后6个月,脱细胞猪角膜透明度良好,未观察到排斥反应,生物相容性好。3.5位患者进行新型脱细胞猪角膜板层移植后,平均3.8±1.5天可完成角膜再上皮化。3个月时,患者的平均裸眼视力为0.25±0.09,平均最佳矫正视力为0.42±0.16,较术前明显改善;角膜厚度为504.2±54.2μm,植片厚度为411.0±31.8μm,未见层间渗出;眼压为9.4±3.4 mmHg;角膜植片透明,未发生明显的免疫排斥反应。结论:角膜过度肿胀会引起基质纤维超微结构不可逆的损伤,并导致透明度下降,通过胶体渗透压控制角膜的溶胀程度是维持脱细胞角膜基质透明度的关键因素;胶体渗透压辅助的新型脱细胞体系在有效脱除猪角膜基质细胞和抗原的同时,未对角膜超微结构、胶原和糖蛋白成分造成明显破坏;新型脱细胞猪角膜基质具有免疫原性低、生物力学和生物相容性好等特点;临床移植3个月时,患者角膜透明、视力恢复良好、眼压稳定、未见层间渗出及免疫排斥反应。
季茹[6]（2013）在《肝脏脱细胞生物支架的制备及诱导骨髓间充质干细胞肝向分化的研究》文中研究说明肝移植是目前针对终末期肝病的有效治疗方式。然而，供肝短缺、手术并发症、慢性排斥反应和医疗成本高等限制因素迫使研究者开始寻求新的替代治疗，并诞生了肝脏组织工程和再生医学这一新兴研究领域。在过去的数十年中，尽管研究人员在仿生三维动态培养方面取得了较大进展，但仍难于完全模仿肝脏细胞外基质（ECM）的复杂微环境。目前，全器官脱细胞支架正逐渐受到研究者的关注。脱细胞是指去除脏器中细胞成分，并且最大程度地保留脏器的大体形态、ECM成分和超微结构。一些研究成功地将功能性实质细胞或特定干/祖细胞种植于脱细胞ECM，为组织工程和再生医学研究提供新的研究平台。脱细胞支架研究的一个难题是脱细胞方案的选择和优化。近年来，研究人员已通过比较研究对心脏、肾脏、肺和膀胱等器官的脱细胞方案进行了改进。目前，文献中已报道了多种方案制备脱细胞肝支架（DLB），但尚无研究对上述方案制备DLB的理化性质、细胞相容性和免疫原性进行比较。该研究领域的另一难题是如何获取足够数量且功能完备的肝细胞。由于自体肝组织获取和体外维持肝细胞特性等方面存在困难，从干/祖细胞获取肝细胞成为目前该领域关注的研究热点。其中，间充质干细胞（MSCs）被认为是最具治疗潜力的细胞类型之一。目前已有多项研究证实了MSCs在特定培养条件下可诱导分化为类肝细胞。但诱导成功率较低，并且诱导的类肝细胞只具有成熟肝细胞的部分标志物和功能。因此，对MSCs肝向分化诱导方案和培养条件还需要进一步研究。近期一些研究证实组织特异性ECM可促进干/祖细胞定向分化。本研究将探讨DLB是否能够体外诱导MSCs向肝系细胞分化。本研究利用三种文献报道的洗脱方案（CHAPS、SDS和Triton X-100方案）和一种新建立的方案（NP-40方案）制备大鼠DLB，全面评估DLB的结构特点和生化特性及其细胞相容性和免疫原性，为DLB制备方案的改进提供依据；本课题还利用大鼠DLB制成的三维支架，为小鼠MSCs提供体外培养和诱导分化微环境，为体外高效诱导MSCs向肝系细胞分化寻找新的方法；最后，将体外预分化的MSCs移植给CCl4致肝纤维化小鼠，进一步观察DLB体外诱导分化MSCs的在体功能，并对其治疗作用机制进行探讨。主要研究成果如下：1.除CHAPS方案外，SDS、Triton X-100和NP-40方案均成功制备出符合脱细胞标准的大鼠DLB，但不同方案制备的DLB在超微结构、ECM成分、细胞相容性和免疫原性存在明显差异；与SDS和Triton X-100方案相比，NP-40方案制备的DLB具有更好的细胞支持作用和体内重塑结局；另外，统计学分析发现DLB体内重塑结局与DNA残留量、M2巨噬细胞数量和M2:M1细胞比值具有显着相关性。2.从GFP基因敲入C57BL/6小鼠体内成功分离和培养出骨髓干细胞，表达MSCs的细胞形态和表面标志物；NP-40制备的DLB为种植的MSCs提供了三维生长微环境；与DLB和培养瓶（TCF）静止培养相比，动态培养的DLB显着提高MSCs的细胞存活率和增殖速度。3.动态培养肝支架（DCS）本身或联合肝细胞诱导生长因子（GF），均能体外诱导MSCs向肝系细胞分化；与TCF培养相比，DCS培养的细胞表达更高水平的肝细胞标志物（AFP、ALB、CK7、CK8、CK9、CK19、肝细胞转录因子和肝细胞代谢酶等），并具有更强的肝细胞相关合成和代谢功能（分泌AFP和ALB、代谢尿素、合成糖原、摄取吲哚氰绿和低密度脂蛋白），以及具有成熟肝细胞超微结构特点。4.与未分化MSCs相比，体外利用GF预处理或DCS联合GF预处理的MSCs在移植给CCl4致肝纤维化小鼠后显着改善小鼠生存率、肝脏功能和纤维化程度；其中DCS联合GF预处理MSCs的归巢效率最高。定植到肝脏的预分化MSCs主要通过旁分泌作用抑制肝星状细胞活化、刺激内源性肝细胞增殖，达到修复肝损伤的目的。上述结果表明，本研究建立了一种新的肝脏脱细胞方案，制备的DLB具有良好的细胞相容性和较低的免疫原性；这种DLB在动态培养条件下可以高效地诱导MSCs向类肝细胞分化、表达更加稳定和丰富的肝细胞功能，并在移植体内后对慢性肝损伤具有较好的治疗作用。总之，这种肝脏脱细胞支架为肝脏组织工程和再生医学提供了一个全新的研究平台，有望为临床治疗终末期肝病提供新的治疗手段。
薛晓阳[7]（2012）在《鸡新城疫卵黄抗体的提取工艺及应用研究》文中认为本试验目的是研究简便快速提取纯化卵黄抗体的生产工艺,适用于大规模生产。卵黄抗体的提取主要就不同浓度泊洛沙姆法、不同浓度PEG6000法、水稀释法和冻融法相结合进行比较,检测提取上清液抗体效价、去脂率等指标。应用冷冻干燥方法浓缩卵黄抗体,比较冷冻干燥前后和不同倍数浓缩后产品抗体效价的变化。通过饱和硫酸铵纯化卵黄抗体,主要就50%、33%、33%路线纯化卵黄抗体,HI测定纯化前后抗体效价的变化,紫外分光光度计测定蛋白含量的变化;SDS-PAGE分析各组提取的卵黄抗体纯化后有无差异。选取母源抗体接近消失的60日龄公鸡随机分成试验组和对照组,试验组肌肉注射卵黄抗体,剂量为2ml,试验用卵黄抗体包含新城疫抗体、禽流感H5亚型、禽流感H9亚型抗体,研究机体肌肉注射卵黄抗体对血清抗体效价的影响。选取新城疫抗体水平为阴性的公鸡随机分为6组:预防组、自愈组、低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、对照组,通过新城疫病模型试验研究肌肉注射卵黄抗体的治疗效果。预防组在接毒前后2天肌肉注射2ml抗ND卵黄抗体;自愈组不做任何治疗;治疗组接毒72h后开始连续治疗3天;低剂量组每天肌肉注射1ml;中剂量组2ml;高剂量组4ml;对照组注射生理盐水。试验结果如下1.1.0%泊洛沙姆法上清液微黄,沉淀结实易分离;3.5%PEG6000和1:10水稀释法上清液清澈,但沉淀不结实,不易分离。以氯仿提取法得到的卵黄抗体为标准, 1.0%泊洛沙姆法上清液效价比氯仿提取法得到的卵黄抗体低1-2个HI效价滴度,3.5%PEG6000法上清液效价比氯仿提取法抗体效价降低3个HI抗体滴度。1:10水稀释法上清液效价比氯仿提取法抗体效价低了4-5个HI抗体滴度;因此1.0%泊洛沙姆法提取抗体效价较高,结合冻融法可以进一步去脂,减少了后期浓缩的工作量,符合大规模提取要求。2.卵黄抗体纯化结果饱和硫酸铵可以有效的纯化卵黄抗体,各组纯度差异不大,电泳分析主要以66KD条带为主,抗体效价上升2-3个滴度,蛋白含量明显上升,表明卵黄抗体可以用此方法纯化。3.卵黄抗体浓缩结果冷冻干燥可以有效浓缩卵黄抗体产品,冷冻干燥前后原倍稀释抗体活性滴度一致,5倍浓缩产物上升2个HI抗体滴度,10倍浓缩产物上升5个HI抗体滴度,说明冷冻干燥可以明显提高卵黄抗体产品效价。4.肌肉注射卵黄抗体对鸡血清抗体效价的影响检测到注射后1-8天,试验组血清各个时间点的新城疫抗体水平均极显着高于与对照组（P <0.01）;注射后1-11天,试验组血清禽流感H5亚型抗体水平均极显着高于对照组（P <0.01）;注射后1-14天,试验组血清禽流感H9亚型抗体水平均极显着高于对照组（P <0.01）,高滴度抗体水平维持5-6天后开始逐步衰减。5.卵黄抗体抗新城疫治疗结果预防组死亡率为5%,自愈组死亡率为70%、低剂量死亡率40%、中剂量死亡率为30%、高剂量治疗组死亡率15%,对照组无死亡,预防组保护率为95%,治疗组保护率比自愈组提高了30%-55%;并且在恢复过程中预防组和治疗组恢复正常采食要早,鸡冠恢复正常颜色要快,表明肌肉注射卵黄抗体应用于新城疫治疗明显有效。结论:1. 1.0%泊洛沙姆结合冻融法适合于大量提取卵黄抗体1.0%泊洛沙姆可以减少卵黄稀释倍数,减少后续工作,且在试验组中上清液效价最高;冻融法可以进一步去除卵黄抗体产品的含脂量,简单易行,两种方法联合应用适合大规模生产。2.重复饱和硫酸铵法能有效纯化卵黄抗体饱和硫酸铵法可以有效去除卵黄抗体中的杂蛋白,抗体滴度和蛋白含量得到了明显升高,在4种方法得到的卵黄抗体纯化后纯度无太大差异。3.冷冻干燥法适用于浓缩卵黄抗体冷冻干燥对卵黄抗体效价活性没有影响,浓缩产物抗体效价上升,效果明显。4.抗NDV卵黄抗体对鸡新城疫病具有显着的防治作用试验动物新城疫抗体为阴性,结果预防保护率为95%,治疗组比自愈组死亡率明显降低,保护率提高了30%-55%,表明肌肉注射卵黄抗体对新城疫的治疗效果明显。
冯科[8]（2012）在《淫羊藿苷在大鼠体内促使骨髓间充质干细胞向睾丸类间质细胞分化的研究》文中研究说明研究背景及目的间质细胞的功能在老年男性、糖尿病病人、接受放射治疗的直肠癌病人中是逐渐下降的,人体内雄激素合成和分泌的量就会减少,引起一系列相关症状。典型的疾病有老年迟发型性腺功能减退症。另外先天性雄激素不足导致患有克氏综合症的患者达到152/10000。外源性雄激素的摄入就成了这些病人的常规治疗方法,外源性睾酮的摄入在一定程度上也是有利于男性第二性征的维持和性功能障碍的恢复。另外,长时期补充雄激素治疗不易达到理想的治疗效果,可能存在副作用和潜在的风险。目前自体干细胞移植成为研究的热点,干细胞移植后在自身的下丘脑-垂体-性腺轴调节下,通过自身反馈和负反馈相互作用的机制补充机体生理活动所需要的激素,从而避免激素过量和补充不足的问题。骨髓间充质干细胞是具有向多种中胚层细胞分化能力的成体干细胞。同时由于它可作为自体移植的源细胞,不存在伦理学的问题又能有效地避免免疫排斥反应。而睾丸间质细胞就起源于中胚层。两者起源相同,共有许多相似的特性。最近的研究发现骨髓间充质干细胞能分化为睾丸类间质细胞,主要是通过类固醇激素合成因子-1的稳定转染。有研究证实类固醇生成因子-1是一个主要的类固醇合成转录调控相关的基因。而中药单体淫羊藿苷是从淫羊藿中提取出来的黄酮类化合物。淫羊藿苷具有提高体内睾酮的水平和促进骨髓间充质干细胞转化的功能。本研究是观察淫羊藿苷促使骨髓间充质干细胞在大鼠睾丸内向类间质细胞分化中的作用。方法：4周龄SPF级雄性SD大鼠50只,体重约200g左右。采用随机数字表法平均分为5组,每组10只。分为A组正常对照组；B组照射对照组；C组移植干细胞组D组移植后低剂量灌胃组和E组移植后高剂量灌胃组。A组正常饲养,B、C、D、E组大鼠睾丸均接受60Coγ射线（6Gy+8GY）照射,分次照射时间间隔为24小时。C、D、E组大鼠在60Co γ射线照射完成1周后向大鼠睾丸组织中注射第九代骨髓间充质干细胞0.lml（规格1*10-6）。移植过骨髓间充质干细胞的D组和E组大鼠分别用淫羊藿苷2mg/100g,5mg/100g灌胃8周。8周后大鼠被处死,测量大鼠的体重。无菌条件下收集血液和睾丸组织并称重。一部分睾丸组织用福尔马林固定,用来做HE染色和免疫荧光分析。另一部分睾丸组织存放于-80℃冰箱中备行RT-PCR用。采用60Co Y射线照射大鼠睾丸致间质细胞损伤模型,移植入带有绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞于造模后的大鼠睾丸内,然后用中药单体淫羊藿苷悬液灌胃8周。采用ELISA法检测循环血清中的睾酮和黄体生成素。通过RT-PCR检测睾丸组织中SF-1和P450scc基因的转录水平。采用免疫荧光和共聚焦分析的方法检测带有GFP表达和间质细胞标志物P450scc的细胞。结果：骨髓间充质干细胞移植组,尤其是高剂量淫羊藿苷灌胃组似乎可减轻60Co y射线照射所致的损伤。免疫荧光和共聚焦分析显示GFP阳性的移植细胞定位于睾丸的间质中,在干细胞移植组和淫羊藿苷灌胃组中这些细胞同时表达P450scc。RT-PCR证实与照射对照组相比,在这些移植干细胞组中P450scc表达增加。同时在高剂量淫羊藿苷组中睾丸内SF-1表达显着升高。结论：中药单体淫羊藿苷在大鼠体内可作为一种促进型诱导剂促使骨髓间充质干细胞向睾丸类间质细胞分化,这种能力主要与类固醇生成因子-1的高表达有关。
韦鹏建[9]（2011）在《脑心肌炎病毒VP1片段基因稳定性、原核表达及应用研究》文中认为脑心肌炎是由脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）引起猪及一些哺乳动物、乃至灵长类动物的脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要临床症状的一种人畜共患急性传染病。它具有重要的公共卫生学意义,近年来引起了国内外学者的重视。其中研究最热门的是VP1基因,因为其表达的蛋白处于脑心肌炎病毒粒子的最表面,其抗原性也是最强的,该蛋白可刺激机体产生具有中和活性的多克隆抗体,是形成病毒受体结合位点的主要成分,同时VP1的氨基酸序列与病毒的致病性密切相关。本研究以ATCC保藏的EMCV毒株在BHK-21细胞上进行稳定性培养,选取原毒（F0）,F4,F8,F12,F16,F20提取核酸,扩增VP1片段,构建克隆载体后由上海生工完成测序并进行拼接。用DNAstar软件进行比对分析,结果显示各代次间VP1的碱基突变率为0.3%-1.6%,传代后各代次病毒VP1基因与F0同源性为98.4%-99.7%。氨基酸突变率为0.7%-1.7%,传代后各代次病毒VP1基因与F0同源性为98.3%-99.3%。突变率较低,符合2010年《中华人民共和国药典》的规定。说明EMCV在BHK-21细胞中连续培养VP1基因的遗传学特性稳定,可以应用于疫苗生产中的病毒接种及培养环节。设计引物,从EMCV原始毒株上扩增VP1片段,构建表达载体,通过优化最佳表达条件,实现VP1的可溶性表达,得到的目的产物大小为56kD,经Western Blotting分析,该蛋白可与EMCV抗血清发生特异性结合反应,证明它具有良好的生物学活性和特异性,可用于双抗原夹心Elisa方法的建立。将上述VP1基因重组蛋白进行包被,以灭活后EMCV病毒液标记辣根过氧化物酶,建立双抗原夹心检测抗体Elisa法,对其试剂批内、批间精密度以及热稳定性进行研究,结果显示,建立双抗原夹心检测抗体Elisa法的精密度小于10%,且稳定性良好,特异性高。用所建方法对来自甘肃某两个地区的1475份体检人血和1309份猪血进行检测,结果这两地区正常人群血清抗体阳性率分别为16.7%和17.0% ,正常猪血清3月龄以下抗体阳性率为56.4%,3月龄以上抗体阳性率为70.7%,符合文献报道。实验结果表明,EMCV能在BHK-21细胞上进行稳定传代,传代后VP1蛋白基因突变率较低,经优化表达条件实现VP1可溶性表达,得到的蛋白具有良好的生物学活性和特异性,用该蛋白包被,成功建立了稳定性、精密性和特异性良好双抗原夹心Elisa法,所建立的方法对甘肃省健康人群和猪血清样品进行检测。结果发现,在甘肃省存在人和猪的EMCV的感染,且在猪群中感染率较高。由于EMCV属人畜共患传染病病毒,可能会存在种属间交叉感染,在今后的研究和工作中应予以高度重视。
张萍[10]（2005）在《超声介导脂质体微泡对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为影响的研究》文中研究指明背景和目的:血管新生内膜形成是经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后再狭窄（RS）的病理基础。血管内皮损伤后,中膜的血管平滑肌细胞（VSMC）在多种生长因子、细胞因子、炎症介质的作用下,由收缩型转化为合成型,并向内膜下迁移,发生过度增殖则是新生内膜形成的关键环节。此外,介入术后早期VSMC凋亡相对不足,增殖与凋亡之间平衡失调,也是RS发生的重要机制。因此,如何有效抑制VSMC细胞增殖和迁移、调节VSMC增殖与凋亡之间的平衡,已成为RS防治的重点。目前的防治方法主要有口服抗血小板药、他汀类药、抗增殖药等药物,血管内放射治疗,转基因治疗和药物涂层支架,但均不能完全解决新生内膜增生的问题。近年来,有关将超声介导微泡技术引入超声治疗的研究进展十分迅速。超声空化效应本身对周围组织细胞可产生各种生物学效应,如抑制细胞增殖、迁移、粘附,促进细胞凋亡等,这些生物学效应可用于临床治疗的各个方面;超声造影剂作为一种人为的空化核,不仅降低超声的空化阈值,增强空化效应,并减少产生空化效应所需的超声能量,还可作为携带药物、蛋白和基因的载体,并利用超声击破微泡,实现药物的靶向导入和释放。因此,如果能将微泡造影剂的靶向载体功能和超声空化效应本身的生物学效应有机地结合起来,将为临床防治RS开辟一个新途径。本研究拟制备一种包载紫杉醇的脂质体微泡造影剂,研究超声介导载紫杉醇脂质体微泡对体外培养的大鼠VSMC增殖、迁移、凋亡以及表型转化的影响,并对其机理进行探讨。方法:（1）采用组织块贴壁法原代培养大鼠主动脉VSMC。（2）通过台盼蓝排斥试验评价超声介导脂质体微泡对VSMC的安全性。（3）采用冷冻干燥法制备携带紫杉醇的脂质体微泡造影剂,在光镜和荧光显微镜下观察其形态和大小以及紫杉醇在微泡上的定位,用Zetasizer 3000和pH计检测载紫杉醇脂质体微泡的粒径和粒度、表面电位、pH值,应用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）检测紫杉醇的包封率,通过台盼蓝排斥试验评价载紫杉醇脂质体微泡的安全性。（4）应用四唑盐（MTT）比色试验、流式细胞术、millicell小室和Annexin V-FITC/PI双标染色分别检测超声介导空白脂质体微泡和超声介导载紫杉醇脂质体微泡对VSMC增殖、迁移和凋亡的影响。（5）应用免疫细胞化学、
二、钴60γ射线对猪六号病毒的消毒试验（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、钴60γ射线对猪六号病毒的消毒试验（论文提纲范文）
（1）猪肺炎支原体无细胞培养用优质猪血清的制备（论文提纲范文）
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 猪源 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 供血猪采血 |
| 1.3.1 无菌采血方法 |
| 1.3.2 屠宰场采血 |
| 1.4 血清析出 |
| 1.5 无菌分离血清及溶血观察 |
| 1.6 灭菌及效果评价 |
| 1.7 猪肺炎支原体培养效果评价 |
| 2 试验结果与分析 |
| 2.1 血清分离量及溶血比较 |
| 2.2 血清无菌检验结果 |
| 2.3 血清利用率 |
| 3 讨论与结论 |
（2）次氯酸钠溶液和钴-60辐照对脱细胞结膜基质中病毒灭活效果的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料与仪器 |
| 1.1.1 脱细胞结膜基质 |
| 1.1.2 指示病毒与培养细胞 |
| 1.1.3 主要试剂与仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 病毒接种方法 |
| 1.2.2 细胞毒性实验 |
| 1.2.2. 1 细胞培养和铺板 |
| 1.2.2. 2 次氯酸钠溶液制备 |
| 1.2.2. 3 次氯酸钠处理猪眼结膜的样品制备 |
| 1.2.2. 4 钴-60辐照脱细胞结膜基质的样品制备 |
| 1.2.2. 5 样品分组及接种 |
| 1.2.2. 6 细胞毒性MTT法检测 |
| 1.2.3 1.0‰次氯酸钠溶液和钴-60辐照工艺验证实验 |
| 1.2.3. 1 1.0‰次氯酸钠溶液工艺的病毒灭活样品制备 |
| 1.2.3. 2 钴-60辐照样品制备 |
| 1.2.3. 3 样品滴定 |
| 1.2.4 盲传实验 |
| 2 结果 |
| 2.1 次氯酸钠溶液的细胞毒性实验结果 |
| 2.2 次氯酸钠溶液和钴-60处理样品后细胞毒性实验结果 |
| 2.3 1.0‰次氯酸钠溶液工艺的病毒灭活验证结果 |
| 2.3.1 1.0‰次氯酸钠溶液病毒灭活检测结果 |
| 2.3.2 1.0‰次氯酸钠溶液病毒灭活的盲传结果 |
| 2.4 钴-60辐照工艺验证实验结果 |
| 2.4.1 钴-60辐照的病毒灭活检测结果 |
| 2.4.2 钴-60辐照盲传结果 |
| 3 讨论 |
（3）抗H株小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与质量评估（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 小鹅瘟病毒研究现状 |
| 1.1.1 小鹅瘟病毒及小鹅瘟病简介 |
| 1.1.2 小鹅瘟病毒的鉴定方法 |
| 1.2 小鹅瘟生物制剂研究进展 |
| 1.2.1 小鹅瘟病毒活疫苗 |
| 1.2.2 小鹅瘟病毒灭活疫苗 |
| 1.2.3 小鹅瘟病毒基因疫苗 |
| 1.2.4 小鹅瘟病毒重组活载体疫苗 |
| 1.2.5 小鹅瘟抗血清 |
| 1.2.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体 |
| 1.3 卵黄抗体的研究进展 |
| 1.3.1 卵黄抗体的结构特点 |
| 1.3.2 卵黄抗体的提取方法 |
| 1.3.3 卵黄抗体的灭活方法 |
| 1.3.4 卵黄抗体应用 |
| 1.3.5 卵黄抗体的优势与展望 |
| 1.4 研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与设备 |
| 2.2 主要材料和试剂 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 研究技术路线图 |
| 2.3.2 小鹅瘟病毒分离培养 |
| 2.3.3 小鹅瘟病毒的鉴定 |
| 2.3.4 小鹅瘟病毒灭活疫苗的制备及检验 |
| 2.3.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体的制备 |
| 2.3.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体质量评价 |
| 2.3.7 小鹅瘟病毒卵黄抗体储存条件的确定 |
| 2.4 试验数据分析及统计 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 小鹅瘟病毒分离培养 |
| 3.1.1 小鹅瘟病毒在雏鹅分离培养结果 |
| 3.1.2 小鹅瘟病毒在鹅胚分离培养结果 |
| 3.2 小鹅瘟病毒鉴定 |
| 3.2.1 小鹅瘟病毒特异性试验结果 |
| 3.2.2 小鹅瘟病毒粒子超微结构观察结果 |
| 3.2.3 小鹅瘟病毒毒力测定 |
| 3.2.4 小鹅瘟病毒理化特性 |
| 3.2.5 小鹅瘟病毒的纯净性试验结果 |
| 3.2.6 小鹅瘟病毒核酸检测结果 |
| 3.2.7 小鹅瘟病毒VP3基因序列鉴定 |
| 3.3 小鹅瘟病毒灭活疫苗抗原的制备及成品检验 |
| 3.3.1 小鹅瘟病毒H株灭活疫苗制备抗原用病毒的检验 |
| 3.3.2 小鹅瘟病毒H株灭活疫苗检验 |
| 3.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体的制备 |
| 3.4.1 产蛋鸡选择结果 |
| 3.4.2 高免鸡蛋的琼扩抗体效价监测结果 |
| 3.4.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体除脂条件的确定 |
| 3.4.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体提取方法的确定 |
| 3.4.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体外源性病毒灭活方法确定 |
| 3.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体的质量评价 |
| 3.5.1 小鹅瘟病毒卵黄抗体的理化特性 |
| 3.5.2 小鹅瘟病毒卵黄抗体的安全性评价 |
| 3.5.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体对人工感染雏鹅的治疗效果评价 |
| 3.5.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体对雏鹅注射后攻毒的预防效果评价 |
| 3.5.5 小鹅瘟病毒卵黄抗体与试验选用的同类产品差异试验 |
| 3.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体储存条件的确定 |
| 3.6.1 储存温度及时间对小鹅瘟病毒卵黄抗体物理性状的影响 |
| 3.6.2 储存温度及时间对小鹅瘟病毒卵黄抗体纯净性的影响 |
| 3.6.3 储存温度及时间对小鹅瘟病毒卵黄抗体琼扩抗体效价的影响 |
| 3.6.4 储存温度及时间对雏鹅攻毒预防效果的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小鹅瘟病毒的分离鉴定及生物学特性分析 |
| 4.2 小鹅瘟病毒H株VP3基因序列分析 |
| 4.3 影响HA与HI效果的因素分析 |
| 4.4 小鹅瘟病毒灭活疫苗的制备 |
| 4.5 鸡群的选择管理与高免蛋黄收集 |
| 4.6 小鹅瘟病毒卵黄抗体除脂条件的确定及主要影响因素分析 |
| 4.7 最优小鹅瘟病毒卵黄抗体提取方法确定及分析 |
| 4.7.1 辛酸终浓度对小鹅瘟病毒卵黄抗体的影响 |
| 4.7.2 小鹅瘟病毒卵黄抗体提取方法的对比分析及验证 |
| 4.7.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体的琼扩抗体效价与蛋白浓度的相关性分析 |
| 4.8 小鹅瘟病毒卵黄抗体灭活条件的确定 |
| 4.9 小鹅瘟病毒卵黄抗体的质量评价 |
| 4.9.1 小鹅瘟病毒卵黄抗体安全性评价 |
| 4.9.2 小鹅瘟病毒卵黄抗体治疗效果评价 |
| 4.9.3 小鹅瘟病毒卵黄抗体的预防效果评价 |
| 4.9.4 小鹅瘟病毒卵黄抗体试验选用的同类产品差异 |
| 4.10 储存条件的确定 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 作者简历 |
（4）基于P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白构建纳米纤维复合疝修补片的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 疝气的危害及治疗方法 |
| 1.1.1 疝气的分类及临床表现 |
| 1.1.2 疝气的诱发病因 |
| 1.1.3 疝气的治疗方法 |
| 1.2 疝修补材料的分类及术后并发症 |
| 1.2.1 疝修补材料的分类 |
| 1.2.2 补片植入后的术后并发症 |
| 1.3 疝修补补片的国内外发展现状 |
| 1.3.1 国外补片产品及研究现状 |
| 1.3.2 国内补片产品及研究现状 |
| 1.4 静电纺丝技术概述 |
| 1.4.1 静电纺丝及其影响参数 |
| 1.4.2 纳米纤维基组织工程支架的研究进展 |
| 1.5 课题意义 |
| 1.6 课题研究内容与方法 |
| 1.6.1 研究内容 |
| 1.6.2 研究方法 |
| 第二章 纳米纤维基支架材料的制备及结构调控 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.3 实验部分 |
| 2.3.1 实验方法 |
| 2.3.2 纺丝液的粘度测试及其电纺膜的制备 |
| 2.3.3 不同电压下电纺膜的制备 |
| 2.3.4 不同接收距离下电纺膜的制备 |
| 2.3.5 不同灌注速度下电纺膜的制备 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 纺丝原液浓度对纤维膜形貌的影响 |
| 2.4.2 过程参数对纤维形貌的影响 |
| 2.5 本章小节 |
| 第三章 组织工程复合补片的制备及其理化特性表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.3 实验部分 |
| 3.3.1 P(CL/LLA)/猪源纤维蛋白复合纳米纤维膜的制备 |
| 3.3.2 SEM观察 |
| 3.3.3 孔隙率测定 |
| 3.3.4 FITR分析 |
| 3.3.5 XPS分析 |
| 3.3.6 静态水接触角的测定 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 不同比例P(CL/LLA)/猪源纤维蛋白膜片形貌对比分析 |
| 3.4.2 电纺纤维膜孔隙率的变化与分析 |
| 3.4.3 电纺纤维膜表面官能团的表征 |
| 3.4.4 电纺纤维膜表面元素分析 |
| 3.4.5 电纺纤维膜亲水性评价 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 组织工程补片的力学性能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 补片的拉伸弹性性能测试 |
| 4.2.2 补片的顶破强度测试 |
| 4.2.3 补片的缝合强度测试 |
| 4.2.4 补片的撕裂强度测试 |
| 4.3 力学测试结果与讨论 |
| 4.3.1 补片的拉伸应力-应变曲线分析 |
| 4.3.2 补片的抗顶破性能分析 |
| 4.3.3 补片的抗缝合牵拉性能分析 |
| 4.3.4 补片的抗撕裂性能分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 组织工程补片的生物相容性评价 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.3 组织工程补片的生物学表征方法 |
| 5.3.1 体外细胞毒性 |
| 5.3.2 细胞的增殖与黏附 |
| 5.3.3 细胞的活力检测 |
| 5.4 实验部分 |
| 5.4.1 细胞毒性测试 |
| 5.4.2 细胞增殖与黏附测试 |
| 5.4.3 细胞的活力检测 |
| 5.5 测试结果与分析 |
| 5.5.1 体外细胞毒性 |
| 5.5.2 细胞的增殖与黏附 |
| 5.5.3 细胞活力检测 |
| 5.6 本章小节 |
| 第六章 组织工程补片的产品质量控制 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 补片的切割与打孔 |
| 6.3 补片溶剂残留量评估 |
| 6.4 补片的短期尺寸变化规律 |
| 6.5 补片的灭菌处理以及保存条件 |
| 6.6 本章小结 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）维持脱细胞角膜基质透明机理的研究 ——一种新型脱细胞猪角膜基质的制备及临床初步观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要符号表 |
| 前言 |
| 第一部分 维持脱细胞角膜基质透明机理的研究 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与耗材 |
| 1.3 实验方法 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 溶胀对角膜透明度及角膜基质超微结构的影响 |
| 2.2 离子渗透压与胶体渗透压在脱细胞过程中对角膜的影响 |
| 第三章 小结 |
| 第二部分 新型脱细胞猪角膜基质的制备及特征 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与耗材 |
| 1.3 实验方法 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 新型保护性脱细胞体系参数的确定 |
| 2.2 新型脱细胞猪角膜基质的基本特征 |
| 2.3 新型脱细胞猪角膜基质的机械性能 |
| 2.4 新型脱细胞猪角膜基质的组织学观察 |
| 2.5 新型脱细胞猪角膜基质的超微结构观察 |
| 2.6 新型脱细胞猪角膜基质成分检测结果 |
| 2.7 浸提液细胞毒性分析结果 |
| 2.8 浸提液迟发型超敏反应结果 |
| 2.9 兔角膜基质囊袋内植入试验结果 |
| 2.10 兔板层角膜移植试验结果 |
| 第三章 小结 |
| 第三部分 新型脱细胞猪角膜基质的临床初步观察 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1.1 材料的制备 |
| 1.2 仪器与耗材 |
| 1.3 试验方法 |
| 第二章 结果 |
| 2.1 术后角膜上皮再生情况 |
| 2.2 术后角膜透明度恢复情况 |
| 2.3 术后视力恢复情况 |
| 2.4 术后角膜厚度变化 |
| 2.5 术后缝线松动情况 |
| 2.6 术后眼压变化 |
| 第三章 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（6）肝脏脱细胞生物支架的制备及诱导骨髓间充质干细胞肝向分化的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 一、肝脏组织工程与再生医学研究 |
| 1. 组织工程与再生医学的发展 |
| 2. 肝脏胚胎发育和调控机制 |
| 3. 种子细胞类型和来源 |
| 4. 生物人工肝 |
| 5. 细胞移植治疗 |
| 6. 肝脏组织工程 |
| 二、全器官脱细胞生物支架 |
| 1. 脱细胞支架的制备 |
| 2. 脱细胞支架的灭菌 |
| 3. 脱细胞支架的鉴定 |
| 4. 脱细胞支架的结构和功能 |
| 5. 全器官组织工程的研究进展 |
| 6. 脱细胞支架的研究前景 |
| 三、干/祖细胞肝向分化的体外诱导和鉴定 |
| 1. 体外诱导分化的常见方案 |
| 2. 肝向分化程度的检测手段 |
| 3. 干/祖细胞肝向分化的调控机制 |
| 实验一 DLB 制备及其细胞相容性和免疫原性的研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验二 DLB 体外诱导 MSCS 向肝系细胞分化的研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 实验三 DLB 预处理 MSCS 对慢性肝纤维化的治疗作用 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（7）鸡新城疫卵黄抗体的提取工艺及应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 1 引言 |
| 1.1 新城疫 |
| 1.1.1 新城疫病毒结构形态 |
| 1.1.2 常用新城疫病毒疫苗的种类 |
| 1.2 卵黄抗体的研究进展 |
| 1.2.1 卵黄抗体的形成 |
| 1.2.2 卵黄抗体的理化性质 |
| 1.2.3 卵黄抗体和IgG 的结构比较 |
| 1.2.4 卵黄抗体热稳定性良好 |
| 1.2.5 卵黄抗体酶解性能良好 |
| 1.3 卵黄抗体的开发利用 |
| 1.3.1 卵黄抗体的饲料添加剂开发 |
| 1.3.2 卵黄抗体在动物疾病治疗的应用 |
| 1.3.3 卵黄抗体在人医临床的应用 |
| 1.4 卵黄抗体治病的机理 |
| 1.4.1 抗细菌卵黄抗体治病机理 |
| 1.4.2 抗病毒卵黄抗体治病机理 |
| 1.4.3 卵黄抗体对机体生理变化的影响 |
| 1.5 卵黄抗体单抗生产及基因工程抗体的发展应用 |
| 1.6 卵黄抗体治疗动物疾病的注意事项 |
| 1.7 高免鸡蛋的获取及水溶性组分的分离 |
| 1.7.1 水稀释法 |
| 1.7.2 有机物沉淀法 |
| 1.7.3 二氧化碳超临界抽提法 |
| 1.7.4 表面活性剂提取法 |
| 1.7.5 氯仿提取法 |
| 1.8 卵黄抗体粗制品的浓缩 |
| 1.8.1 乙醇沉淀法 |
| 1.8.2 盐析法 |
| 1.9 卵黄抗体的精制纯化 |
| 1.9.1 凝胶过滤 |
| 1.9.2 离子交换层析 |
| 1.9.3 亲和层析 |
| 1.9.4 疏水作用层析 |
| 1.9.5 混合模式层析技术 |
| 1.10 卵黄抗体的灭活方法 |
| 1.10.1 化学灭活法 |
| 1.10.2 滤膜滤除法 |
| 1.10.3 钴60 辐射灭活法 |
| 1.11 立题背景和意义 |
| 2 新城疫卵黄抗体的提取纯化 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验用检测抗原 |
| 2.1.2 试验用试剂及设备 |
| 2.1.3 试验用检测抗原的扩增 |
| 2.1.4 制做疫苗 |
| 2.1.5 蛋鸡的饲养 |
| 2.1.6 免疫方法 |
| 2.2 卵黄抗体的提取试验 |
| 2.2.1 高免鸡蛋的消毒和卵黄液的获取 |
| 2.2.2 泊洛沙姆提取法 |
| 2.2.3 PEG6000 提取法 |
| 2.2.4 水稀释法提取法 |
| 2.2.5 冻融对卵黄抗体效价的影响 |
| 2.2.6 4 种提取方法比较 |
| 2.2.7 重复饱和硫酸铵法纯化卵黄抗体 |
| 2.2.8 冷冻干燥浓缩卵黄抗体对黄抗体效价的影响 |
| 2.2.9 卵黄抗体的灭活方法 |
| 2.2.10 超声波处理卵黄抗体研究 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 蛋鸡免疫结果 |
| 2.3.2 泊洛沙姆沉降法效果比较 |
| 2.3.3 PEG6000 提取法效果比较 |
| 2.3.4 水稀释法提取结果 |
| 2.3.5 冻融对对卵黄抗体提取的影响 |
| 2.3.6 4 种提取方法的比较 |
| 2.3.7 饱和硫酸铵纯化卵黄抗体纯度的比较 |
| 2.3.8 饱和硫酸铵纯化卵黄抗体结果 |
| 2.3.9 冷冻干燥对抗体效价的影响 |
| 2.3.10 超声波处理对抗体 |
| 2.3.11 卵黄抗体的灭活结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 高免卵黄的研制 |
| 2.4.2 卵黄抗体的提取方法比较 |
| 2.4.3 冻融对卵黄抗体效价去脂的影响 |
| 2.4.4 硫酸铵纯化卵黄抗体结果 |
| 2.4.5 冷冻干燥对卵黄抗体效价的影响 |
| 2.4.6 超声波对卵黄抗体的处理 |
| 2.5 小结 |
| 2.5.1 1.0%泊洛沙姆法提取卵黄抗体效果较好 |
| 2.5.2 重复饱和硫酸铵法可以有效纯化卵黄抗体 |
| 2.5.3 冷冻干燥方法浓缩卵黄抗体产品效果明显 |
| 3 鸡新城疫卵黄抗体的应用研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试验用检测抗原 |
| 3.1.2 试验试剂及仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 商品蛋鸡母源抗体衰减规律的研究 |
| 3.2.2 鸡注射卵黄抗体后血清抗体的衰减规律 |
| 3.2.3 卵黄抗体对鸡新城疫防治的研究 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 鸡新城疫母源抗体衰减规律 |
| 3.3.2 鸡禽流感H5 亚型母源抗体衰减规律 |
| 3.3.3 鸡禽流感H9 亚型母源抗体衰减规律 |
| 3.3.4 注射卵黄抗体后血清新城疫抗体变化 |
| 3.3.5 注射卵黄抗体后血清禽流感H5 亚型抗体效价变化 |
| 3.3.6 禽流感H9 亚型抗体变化分析结果 |
| 3.3.7 卵黄抗体治疗鸡新城疫试验结果 |
| 3.3.8 卵黄抗体治疗对鸡新城疫临床症状的影响 |
| 3.3.9 卵黄抗体治疗剖检变化及血清抗体效价 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 母源抗体的衰减规律 |
| 3.4.2 注射外源性卵黄抗体对机体血清抗体效价的影响 |
| 3.4.3 卵黄抗体对新城疫模型治疗试验 |
| 3.5 小结 |
| 3.5.1 雏鸡新城疫、禽流感H5、H9 亚型衰减规律基本一致 |
| 3.5.2 鸡注射外源性卵黄抗体显着提高机体血清抗体效价水平 |
| 3.5.3 注射新城疫卵黄抗体对鸡新城疫具有显着的防治作用 |
| 4 结论 |
| 4.1 1.0%泊洛沙姆能够快速便捷提取卵黄抗体 |
| 4.2 注射外源性卵黄抗体显着提高机体血清抗体效价水平 |
| 4.3 注射新城疫卵黄抗体对鸡新城疫具有显着的防治作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位论文期间发表论文情况 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（8）淫羊藿苷在大鼠体内促使骨髓间充质干细胞向睾丸类间质细胞分化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 前言 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（9）脑心肌炎病毒VP1片段基因稳定性、原核表达及应用研究（论文提纲范文）
| 项目资金来源 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词英文对照表 |
| 第一部分：文献综述 |
| 1 EMCV 的分子生物学特征 |
| 1.1 病毒基因组结构 |
| 1.1.1 病毒的结构蛋白及功能 |
| 1.1.2 病毒的非结构蛋白及其功能 |
| 1.2 病毒蛋白的裂解 |
| 2 EMCV 的理化特性 |
| 3 EMCV 的致病性 |
| 4 EMCV 感染的临床症状及病理变化 |
| 5 EMC 的流行情况及特点 |
| 6 EMC 的诊断 |
| 7 EMC 的防治 |
| 8 本论文研究目的与意义 |
| 第二部分：实验研究 |
| 第一章：EMCV 连续培养VP1 基因稳定性 |
| 1 材料及仪器设备 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要溶液及培养基 |
| 2 实验步骤及方法 |
| 2.1 EMCV 在细胞上的适应性培养及连续传代 |
| 2.1.1 病毒复融 |
| 2.1.2 适应性培养 |
| 2.1.2.1 毒液的稀释 |
| 2.1.2.2 细胞处理 |
| 2.1.2.3 细胞接毒 |
| 2.1.2.4 连续传代 |
| 2.2 EMCV-VP1 基因的克隆 |
| 2.2.1 引物设计与合成 |
| 2.2.2 病毒核酸的提取 |
| 2.2.3 逆转录 |
| 2.2.4 套式 PCR 扩增 |
| 2.2.5 目的基因 PCR 产物的纯化与回收 |
| 2.2.6 目的基因与pMD-18T 载体的连接 |
| 2.2.7 连接物的转化、单克隆 |
| 2.2.8 质粒 DNA 的提取 |
| 2.2.9 序列测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.2 EMCV-VP1 基因的 PCR 扩增 |
| 3.3 PCR 产物的纯化与回收验证 |
| 3.4 质粒DNA 的提取 |
| 3.5 序列测定结果 |
| 3.5.1 VR-129 株与X74312 序列比对 |
| 3.5.2 各代次序列比对 |
| 4 小结与分析 |
| 第二章：结构蛋白 VP1 基因的克隆与表达 |
| 1 材料及仪器设备 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要溶液及培养基 |
| 2 方法 |
| 2.1 引物设计与合成 |
| 2.2 PCR 扩增 |
| 2.3 目的基因PCR 产物的纯化与回收 |
| 2.4 克隆载体的构建 |
| 2.4.1 目的基因与pMD-18T 载体的连接 |
| 2.4.2 转化与单克隆 |
| 2.4.3 质粒 DNA 的提取 |
| 2.5 重组载体的构建 |
| 2.5.1 目的片段和载体酶切 |
| 2.5.2 目的基因与载体 DNA 的连接 |
| 2.5.3 转化与单克隆 |
| 2.5.4 质粒 DNA 的提取 |
| 2.6 重组载体的鉴定 |
| 2.6.1 酶切鉴定 |
| 2.6.2 PCR 鉴定 |
| 2.7 重组蛋白可溶性表达条件的优化 |
| 2.7.1.诱导温度的选择 |
| 2.7.2 IPTG 浓度的选择 |
| 2.7.3 诱导时间的选择 |
| 2.8 EMCV-VP1 的诱导表达 |
| 2.9 表达蛋白的Western-Blotting 鉴定 |
| 3 结果 |
| 3.1 EMCV-VP1 基因的 PCR 扩增结果 |
| 3.2 EMCV-VP1 纯化与回收验证 |
| 3.3 质粒DNA 的提取 |
| 3.4 重组载体的鉴定 |
| 3.5 重组蛋白质可溶性表达条件的优化 |
| 3.5.1 诱导温度对表达的影响 |
| 3.5.2 IPTG 浓度对表达的影响 |
| 3.5.3 诱导时间对表达的影响 |
| 3.6 重组蛋白的诱导表达 |
| 3.7 重组蛋白的Western blotting 鉴定 |
| 4 小结与分析 |
| 第三章：双抗原夹心 Elisa 法的建立及初步应用 |
| 1 材料及仪器设备 |
| 1.1 主要材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器设备 |
| 1.4 主要溶液 |
| 2 方法 |
| 2.1 酶标抗原制备 |
| 2.2 双抗原夹心Elisa 法建立 |
| 2.2.1 包被浓度确定 |
| 2.2.2 封闭液选择 |
| 2.2.3 酶标抗原稀释度确定 |
| 2.2.4 阴阳性对照 |
| 2.3 建立内部参考品 |
| 2.3.1 血清筛选及灭活 |
| 2.3.2 内部参考品阴阳性确立 |
| 2.4 双抗原夹心Elisa 法试剂质量评价 |
| 2.4.1 精密性 |
| 2.4.2 稳定性 |
| 2.4.3 与间接 Elisa 法试剂比较 |
| 2.5 双抗原夹心Elisa 法应用 |
| 3 结果 |
| 3.1 EMCV 抗原包被浓度确定 |
| 3.2 封闭液选择结果 |
| 3.3 酶标抗原工作浓度的确定 |
| 3.4 内部参考品阴阳性确定 |
| 3.5 精密度实验 |
| 3.6 稳定性实验 |
| 3.7 与间接法Elisa 试剂的比较结果 |
| 3.8 双抗原夹心Elisa 法初步应用 |
| 4 小结与分析 |
| 第三部分：结论 |
| 1 EMCV-VP1 基因稳定性 |
| 2 EMCV-VP1 可溶性表达 |
| 3 双抗原夹心 Elisa 法的建立及应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 硕士期间已发表论文 |
| 硕士期间参与的课题研究 |
（10）超声介导脂质体微泡对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为影响的研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩写词简表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 超声介导脂质体微泡对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为影响的研究 |
| 前言 |
| 第一部分 超声介导脂质体微泡对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制探讨 |
| 分题一 超声介导脂质体微泡对血管平滑肌细胞安全性的评价 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 分题二 超声介导脂质体微泡对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 分题三 超声介导脂质体微泡对血管平滑肌细胞生物学行为影响的机制探讨. |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 照片 |
| 第二部分 载紫杉醇脂质体微泡的制备及其质量、安全性的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 照片 |
| 第三部分 超声介导载紫杉醇脂质体微泡对血管平滑肌细胞表型转化增殖、迁移和凋亡的影响及其机制探讨 |
| 分题一 超声介导载紫杉醇脂质体微泡对血管平滑肌细胞增殖迁移和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 分题二 超声介导载紫杉醇脂质体微泡对血管平滑肌细胞生物学行为影响的机制探讨 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 分题三 超声介导载紫杉醇脂质体微泡对血管平滑肌细胞表型转化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 照片 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 冠状动脉支架内狭窄的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二超声微泡造影剂在基因转移中的应用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间文章发表情况 |
四、钴60γ射线对猪六号病毒的消毒试验（论文参考文献）
- [1]猪肺炎支原体无细胞培养用优质猪血清的制备[J]. 袁厅,华利忠,张磊,孙叶茂,邵国青,熊祺琰,韦艳娜,王丽,刘蓓蓓,王海燕,冯志新. 当代畜牧, 2021(06)
- [2]次氯酸钠溶液和钴-60辐照对脱细胞结膜基质中病毒灭活效果的研究[J]. 段晓杰,赵岩,柯林楠,徐丽明,王召旭. 生物医学工程与临床, 2020(05)
- [3]抗H株小鹅瘟病毒卵黄抗体的研制与质量评估[D]. 胡瑞鸿. 东北农业大学, 2020(07)
- [4]基于P（CL/LLA）/猪源纤维蛋白构建纳米纤维复合疝修补片的研究[D]. 杨刚. 东华大学, 2020(01)
- [5]维持脱细胞角膜基质透明机理的研究 ——一种新型脱细胞猪角膜基质的制备及临床初步观察[D]. 董沐晨. 济南大学, 2018(01)
- [6]肝脏脱细胞生物支架的制备及诱导骨髓间充质干细胞肝向分化的研究[D]. 季茹. 第四军医大学, 2013(02)
- [7]鸡新城疫卵黄抗体的提取工艺及应用研究[D]. 薛晓阳. 河北农业大学, 2012(08)
- [8]淫羊藿苷在大鼠体内促使骨髓间充质干细胞向睾丸类间质细胞分化的研究[D]. 冯科. 郑州大学, 2012(09)
- [9]脑心肌炎病毒VP1片段基因稳定性、原核表达及应用研究[D]. 韦鹏建. 西北民族大学, 2011(06)
- [10]超声介导脂质体微泡对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为影响的研究[D]. 张萍. 第三军医大学, 2005(11)