心脏间隙连接的超结构细胞化学

心脏间隙连接的超结构细胞化学

一、ULTRASTRUCTURAL CYTOCHEMISTRY OF THE CARDIAC GAP JUNCTION(论文文献综述)

徐亦辰,刘玲珑,赵文婧,王慧丰,韦雅淑,陈维平[1](2017)在《骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞相关基因表达与形态结构发生的关联》文中认为背景:前期已完成体外定向诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验。目的:观察骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞过程中,细胞形态变化、结构发生规律与GATA-4、Nkx-2.5和a-MHC表达的关联性。方法:采用心肌组织裂解液诱导SD乳鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞,以免疫组织化学染色检测心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43表达情况,鉴定心肌细胞;在定向诱导分化过程中,RT-PCR检测GATA-4、Nkx2.5与α-MHC的表达情况。结果与结论:(1)细胞形态:在定向诱导过程中,细胞形态由长梭形经历短杆状、形成短小突起、网状结构、呈竹节状及肌管样结构;(2)心肌细胞鉴定:竹节样结构开始出现心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43阳性细胞,肌管样结构心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43阳性细胞增多;(3)RT-PCR检测:在定向分化过程中,细胞GATA-4、Nkx2.5与α-MHC基因表达持续增加;细胞交错连接成网状时,GATA-4表达明显增加,之后持续高表达;相邻细胞融合形成肌管样结构时,α-MHC表达达到峰值;Nkx2.5表达随诱导时间的延长逐渐增加;(4)结果表明:骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞过程中,心肌细胞特异基因的表达与心肌样细胞的形态特征、特殊结构发生密切相关,具有典型的时序性和空间性。

孟泓旭[2](2017)在《用于心脏芯片的体外心肌微组织构建研究》文中研究表明体外构建微组织是组织工程长期以来的研究热点。水凝胶支架具有大量体内微环境基质的特征,因此组织工程常用优化的水凝胶支架在体外培养微组织。细胞的形态发生和改变以及表现型与细胞外基质的拓扑学特性、机械特性和生长因子浓度等因素息息相关。为使心肌细胞在体外生长为类似体内形态和生理特征的心肌微组织,本文使用明胶作为水凝胶支架的生物材料,并在拓扑结构特性、机械特性和化学性能等方面优化了支架。此外,为了更好地评估体外构建的心肌微组织性能,我们构建了电刺激体系,通过观察心肌细胞对特定电信号的响应情况来评估心肌细胞的电生理水平。同时开发了两款软件,可分别分析出心肌细胞的收缩频率、收缩速率和收缩力以及心肌细胞肌节的长度和排列角度。研究结果显示新生SD大鼠心肌细胞接种至本文使用的明胶水凝胶支架24h内就出现了间隙连接蛋白和肌节的表达以及收缩行为的出现,48h内就形成了同步收并能长期培养至40天后。表面有微图案的明胶水凝胶支架能很好地诱导心肌细胞定向。对比没有掺杂氧化石墨烯的支架,掺杂了氧化石墨烯的明胶水凝胶支架能显着提升Serca2a基因的表达水平和心肌细胞的收缩速率。综上所述,本文所用的明胶水凝胶支架材料很适合体外长期培养心肌细胞形成心肌微组织,支架的表面微结构能很好地诱导心肌细胞定向排列,氧化石墨烯掺入支架后能提升心肌细胞的收缩性能。

王学惠[3](2005)在《急性一氧化碳中毒大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43的表达及超微结构的观察》文中进行了进一步梳理目的:通过对急性一氧化碳中毒(ACOP)大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43的分布和含量的变化及心肌细胞在光镜、透射电镜下结构的变化的研究,比较正常大鼠与ACOP大鼠心脏之间缝隙连接蛋白Cx43的差异,确定ACOP大鼠心脏损害的发病机理,并提供细胞生物学依据,为ACOP的临床治疗提供理论基础。 方法:将30只Wistar青年雄性大鼠(3-5月龄),体重300g±25g。随机分成实验组20只,对照组10只。(1)ACOP大鼠模型制作:实验组采用腹腔内注射CO气体,170ml/kg,制备ACOP动物模型,对照组注射同等剂量的空气。2小时以后采血(剪尾法)及取材,分别测血中碳氧血红蛋白浓度,做心电图。(2)组织化学染色:HE染色观察心肌细胞形态结构变化;(3)免疫组织化学染色观察心肌细胞Cx43分布的变化,计算机图像分析测定Cx43含量的变化;(4)透射电镜下观察心肌细胞超微结构的变化,比较ACOP大鼠和对照组之间的差异。 结果:1、ACOP大鼠尾血中HBCO浓度含量明显增高,与对照组相比P<0.05,差异显着,有统计学意义。 2、ACOP大鼠心电图出现心律异常变化,与对照组相比p<0.01,差异极显着;实验组大鼠心电图出现多种心律失常及心肌缺血的改变,发生率两组相比,p值均<0.01,差异极显着。 3、HE染色观察光镜下ACOP大鼠心肌细胞结构没有明显的改变。电镜下可见实验组大鼠心肌细胞的超微结构发生明显的改变。实验组:弥漫性心肌细胞内线粒体中-重度肿胀,嵴排列紊乱,部分嵴和膜溶解消失;肌原纤维排列紊乱,部分肌节断裂消失;闰盘显示结构模糊不清,部分闰盘融合消失。

刘林[4](2019)在《AFM研究微绒毛、细胞膜微丝骨架及应用》文中研究指明细胞膜是细胞最重要的结构成分,在维持细胞内环境稳态和多种生理功能中均起到重要作用,而细胞膜的某些生理功能的发挥离不开细胞表面的一些特殊结构,如微绒毛,它在营养物质吸收、免疫调节、信号传导等活动中起到重要作用。由于传统技术的限制,生理条件下,纳米尺度上微绒毛结构的变化与吸收功能的关系还没有直接的证实。微丝不但对微绒毛结构起到支撑作用,还是细胞结构的重要成分,参与细胞形貌的维持、细胞粘附、细胞运动等生理功能,而近生理条件下,微绒毛和微丝在细胞中的空间分布特点还存在许多问题尚待探讨。此外,微丝参与机械力引起的多种生理活动,然而微丝是否参与相邻细胞间自噬信号的传递还不清楚。原子力显微镜(AFM)在细胞生物学研究中具有特殊优势,可以生理条件下对多种生物样品进行高分辨成像的同时获得样品的理化性质,已经应用于从单分子、细胞到组织样品的研究中。本文针对以上问题,利用AFM的高分辨成像,以及精准控制力优势,结合荧光显微镜的成像特点,在活细胞水平上,观察了微绒毛和微绒毛簇的动态变化;近生理条件下,纳米尺度上,研究了微绒毛结构的变化与吸收功能的关系,以及微丝和微绒毛的空间分布特点;此外,还初步探究了微丝在机械力引起的相连细胞间自噬信号传递中的重要作用。主要内容如下:第一,通过AFM的高分辨成像,在纳米尺度上,观察到细胞表面的微绒毛结构,获得单根微绒毛的尺寸及形貌特征。对活细胞进行连续原位成像,研究了细胞表面两种亚型的单根微绒毛及微绒毛簇的动态变化,发现了单根微绒毛的生长周期和微绒毛簇的解聚和聚合的现象。此外,对饥饿状态下,微绒毛结构的变化与葡聚糖吸收的直接相关性进行了研究,发现了微绒毛结构是动态可逆的变化。第二,基于AFM精准控制力的特点,探究了细胞膜外微绒毛及细胞膜内侧微丝的分布。在基本不破坏细胞结构的情况下,研究了微绒毛及微丝结构在细胞中的两层分布:细胞膜表面为微丝构成的单根和聚集成簇的微绒毛结构以及在这层下面是由粗细不同的微丝构成的致密网格结构。此外,通过AFM高分辨成像还获得了的单根微丝的形貌和细胞内致密微丝网格结构的特点。第三、利用AFM精准控制力的优势,还初步探究了微丝在自噬信号传递中的作用。通过AFM的针尖刺激细胞,研究了纳米机械力对细胞自噬水平的影响,发现了机械力引起的细胞自噬能传递给相连细胞,并且这种传递在同种或不同种细胞间均会发生。最后,通过构建N2a细胞的间隙连接,探究了间隙连接在相邻细胞间自噬传递中的作用。以上研究工作展示了AFM在研究活细胞的动态过程和细胞内微丝的空间分布中的优势,以及微丝在力信号传递中的功能。文章最后对以上工作进行了总结和展望。

李宛卫[5](2019)在《一氧化碳干预Cx43-ERK信号通路在新生儿急性肺损伤中的保护作用》文中进行了进一步梳理背景与目的各种原因所致的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)仍是引起新生儿伤残甚至死亡的最常见的临床危重症,其所并发的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)可引起了肺组织结构的大量破坏,肺功能受到严重影响,易发展为难治性新生儿呼吸衰竭而死亡。目前国内外新生儿ALI/ARDS的研究起步较晚,临床上缺乏大样本数据的对照性研究。一氧化碳(carbon monoxide,CO)是一种重要的内源性气体信号分子,通常由血红素加氧酶分解血红素而形成。其作为血红素分解代谢的副产物,在体内外具有抗炎、抗凋亡、抗氧化、抗增殖、舒张血管等多种生物学作用。越来越多的研究发现CO水平在一定程度范围内升高对多种细胞的坏死具有保护作用。本课题组前期研究表明,低浓度CO不仅可以通过抑制肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AEC)凋亡而减少ALI,而且也可以减少AEC坏死。遗憾的是,CO减少AEC坏死从而保护ALI的分子通路还没有完全揭示清楚。新近的观点认为细胞坏死可受信号分子的调控,与凋亡一样存在较为复杂的信号通路,即细胞程序性坏死(necroptosis)。因此可能为细胞死亡的干预提供新机会。在CO保护ALI的过程中,程序性坏死发挥何种作用,目前也尚不清楚,需要进一步的研究。新生儿持续性肺动脉高压(Persistent pulmonary hypertension of newborn,PPHN)是新生儿重症监护室里重症患儿中较常见的一种非常严重的疾病,其发病凶险,死亡率较高,对新生儿的健康造成严重威胁,也是导致新生儿死亡的重要原因之一。而目前国内外治疗PPHN的手段有限,迫切需要研究新的治疗方法来降低其病死率和伤残率。而CO具有舒张血管、抑制平滑肌细胞增殖等生物学效应,研究显示,肺血管平滑肌细胞和内皮细胞均有血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)蛋白及其活性的表达,是内源性CO生成和释放的重要场所之一,内源性HO/CO系统可能参与了低氧性肺动脉高压的形成。深入研究CO抑制AEC程序性坏死的信号转导通路,为临床上外源性吸入低浓度CO防治新生儿呼吸危重病提供新的理论基础和开发新药提供新思路。方法(一):通过气管插管,气管内注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备新生大鼠ALI的动物模型;(二):在新生大鼠ALI动物模型腹腔注射一氧化碳释放分子3(Carbon monoxide releasing molecule 3,CORM3)或非活性一氧化碳释放分子3(Inactive carbon monoxide releasing molecule 3,i CORM3)。收集各组肺组织标本进行组织学检测,测定支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中细胞的总数和蛋白质的含量。并同时对各组肺组织应用定量实时定量PCR和western blot的方法来检测Cx43(Connexin43)及坏死相关标志物的表达。(三):采用A549细胞,完成细胞复苏与传代,利用细胞转染技术,研究CO通过下调Cx43水平保护LPS导致的ALI。(四):临床选择机械通气PPHN新生儿,随机给予一氧化氮(Nitric oxide,NO)吸入或CO吸入,收集临床资料,检测相关指标。结果1.气管导管内滴入LPS或者腹腔内注入LPS均可以建立新生大鼠ALI的动物模型。其表现为肺湿/干重比(Lung wet/dry weight ratio,w/d)升高,支气管肺泡灌洗液中总细胞数和蛋白浓度升高。2.LPS导致肺组织损伤这些变化通过腹腔注射给予CORM3后得到显着改善,但给予i CORM3却没有明显效果。3.CORM3能抑制LPS诱导的ALI中Cx43表达升高,过度表达的Cx43能减弱CORM3对肺的保护作用。4.LPS能增加坏死相关标记物MLKL、RIP1、RIP3、FADD的表达,给予CORM3能够明显阻碍这些标记物表达的升高。5.CORM3可减弱LPS诱导的细胞外信号调节激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)的激活,ERK抑制剂U0126可减弱其对细胞程序性坏死的保护作用。6.吸入NO能降低肺动脉压力(n=8,P<0.05)和吸入CO也能一定程度降低肺动脉压力(n=5,P<0.05)。7.低浓度吸入CO能降低炎症指标白细胞介素1-β、α肿瘤坏死因子、白介素-8、白介素-6的水平(n=5,P<0.05)。结论1.通过气管导管内滴入LPS或者腹腔内注入LPS均可以建立新生大鼠ALI的动物模型,为研究ALI提供更好的动物模型。2.CO减少LPS诱导的ALI肺泡上皮细胞程序性坏死。3.CO通过下调Cx43减少LPS诱导的肺泡上皮细胞程序性坏死。4.CO通过下调Cx43激活的ERK信号通路保护LPS诱导的ALI。5.低浓度CO有抗炎的作用及一定的降低肺动脉压力的作用。

秦宇红[6](2007)在《脂肪组织来源间充质细胞向心肌细胞定向诱导分化的电生理学研究》文中提出背景:干细胞治疗急性心肌梗死是近年来研究的热点。脂肪来源的间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cclls,ADMSCs)作为一种新的细胞工程的种子细胞因为取材方便、来源充足、更易被人们所接受等优点逐渐被大家接受。但目前国内、外对于ADMSCs的研究还处于起步阶段,与骨髓来源干细胞研究相比,其治疗相关机制的基础研究还很有限,在临床应用前尚有许多问题有待解决。比如ADMSCs是否可以分化为真正的具有兴奋、收缩和传导功能的心肌细胞,如何提高AMDSCs向肌细胞的分化率等。这些问题的解决对于指导ADMSCs在临床的应用具有十分重要的意义。目的:一是要建立从Wistar大鼠脂肪组织大量分离、培养ADMSCs方法,并观察在体外培养扩增、长期保存、外源目的基因的导入情况,确定其是否可以作为一个合适的工具细胞,为后续研究做准备。二是观察比较不同体外向心肌细胞定向诱导分化的方法,探索最佳的体外诱导策略。三是观察诱导前后的ADMSCs兴奋性和传导性的变化。内容和方法:根据以上目的,本研究分成为三个部分:第一部分研究Wistar大鼠ADMSCs的分离及体外培养、保存;并通过对获取的细胞进行细胞表面间充质干细胞相关标志及多向分化潜能的检验来验证其是否为间充质干细胞;用携带绿色荧光蛋白和肝细胞生长因子的人Ⅴ型腺病毒感染AMDSCs以观察其是否可以作为有效的基因载体。第二部分对第一部分获取的第3代ADMSCs分别采用5-氮胞苷、心肌细胞提取物、5-aza和心肌细胞提取物混合诱导的方法向心肌细胞定向诱导分化。诱导4~6周后应用RT-PCR技术、免疫组化法、透视电镜技术对诱导后的ADMSCs从基因水平、蛋白水平和超微结构多个方面进行鉴定,并用流式细胞计数的方法比较各诱导方法α-actin阳性细胞比率,以找到最有效的诱导方法,同时还观察ADMSCs(用DAPI荧光标记)与乳鼠心肌细胞混合培养的状况。第三部分用多电极阵列系统(multi-channel array system,MEA)测定诱导前、后ADMSCs兴奋性和传导性的变化。分别测定了第2代乳鼠心肌细胞、未经诱导的第3代ADMSCs、经混合诱导的第3代ADMSCs、诱导ADMSCs与乳鼠心肌细胞的共培养模型。结果:从Wistar大鼠脂肪组织分离培养出大量螺旋生长的长梭形细胞。这些细胞的细胞表面分子CD13、CD44、CD105皆阳性,CD34、CD45、Ⅷ因子、HLA-DR、VWF均阴性;具有成骨、成脂、成肌的多向分化能力。可以在体外连续传代培养而保持稳定的生长速度,第3至8代细胞倍增时间为55至63小时;经2至4周液氮冷冻保存后复苏存活率90%以上,细胞表面阳性标志保持不变;可以用人Ⅴ型腺病毒转染目的基因GFP和HGF并大量表达目的基因相关的蛋白,但感染后的细胞很快死亡。在体外用5-氮杂胞苷,心肌细胞提取物、5-aza和心肌细胞提取物混合诱导的方法均可成功诱导Wistar大鼠的ADMSCs向心肌细胞定向分化,分化率分别为18.58%,58.67%,62.27%。研究证明诱导后可以使与心肌细胞发育相关基因GATA-4、Nkx2.5及MyoD启动,并表达α-actin、间隙连接蛋白CX43和CX45;透视电镜下可见到肌丝样结构。但诱导后未发现有自发跳动的细胞。与乳鼠心肌细胞混合培养的ADMSCs在混合培养后分裂增殖减弱,可并随乳鼠心肌细胞群一同收缩运动。对于诱导前、后的ADMSCs,多电极阵列系统检测均未发现有自发电活动信号。但诱导前、后ADMSCs对外源电刺激的细胞膜反应不同:未诱导的ADMSCs对电刺激反应弱;而诱导后的ADMSCs对外源性电刺激反应明显,记录到了较明显的类似心肌动作电作的细胞膜电位变化,但这种电位变化也不能有效传导;ADMSCs与乳鼠心肌细胞的共培养模型中可以在心肌细胞覆盖的电极区记录到心肌细胞自发兴奋信号,心肌细胞周围ADMSCs覆盖的电极未记录到相应的电信号。结论:1.通过酶消化的方法成功地从Wistar大鼠脂肪组织分离培养出具有多向分化潜能的ADMSCs。分离的ADMSCs具有旁分泌功能,易于在体外长期传代培养、大量扩增、长期冻存,并能成功导入外源基因。这些特征证明了ADMSCs作为细胞和基因工程备选种子细胞的基础,也为ADMSCs进一步的实验研究提供了一个理想的工具细胞。2.在体外可以用多种方法成功诱导Wistar大鼠的ADMSCs分化成为心肌样细胞,其中用5-aza和乳鼠心肌细胞裂解液混合诱导的分化率最高。3.诱导后的ADMSCs的兴奋性增强,但传导性很差,表现为明显的延迟和衰减。

易华[7](2009)在《从缝隙连接探讨六味地黄丸对自杀基因治疗肝癌的增效作用》文中认为原发性肝癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤之一,素有“癌王”之称。中国肝癌发病人数居世界首位,每年约23万人死于肝癌,其恶性程度高,预后差。使用基因疗法对付肿瘤已经成为中外科学家一个重要的选择。1989年—2003年6月,美国批准注册的基因治疗临床试验方案共523项,约占世界总数的80%,接受治疗病例数达到15000人,其中肿瘤基因治疗约占70%/。自杀基因疗法因存在旁观者效应的独特机制而成为具有广泛应用前景的肿瘤治疗新方法,但单纯应用不能完全治愈肿瘤,因而增强自杀基因治疗的效果成为研究热点。改善荷瘤机体的免疫状态是其增效措施之一,中药方药具有肯定的免疫药理作用,课题组前期以此为切入点开展研究,证实滋阴补肾经典复方六味地黄丸对肝癌HSV-tk/GCV自杀基因治疗具有增效作用,其机理与该方改善自杀基因抗肿瘤作用的炎症免疫微环境,增强自杀基因的旁观者效应有关。而GJIC介导的缝隙连接机制被认为是自杀基因旁观者效应的主要机制,鉴于中药方药具有多途径、多靶点的特点,该方对自杀基因治疗增效作用的机制也可能与缝隙连接机制相关。本课题拟对其进行研究,探讨六味地黄丸对自杀基因治疗的增效作用是否与其改善肝癌细胞GJIC功能相关,并进一步明确其机制。一、研究目的:本研究在前期工作的基础上,应用中药复方血清药理学的方法,以大鼠肝癌细胞CBRH7919为研究对象,初步探讨六味地黄丸对肝癌HSV-tk/GCV自杀基因治疗增效作用的缝隙连接机制,以期为临床自杀基因疗法联合中药复方的中西医结合治疗方案的建立提供实验数据、科学依据及工作基础。二、研究方法:1.免疫组化SABC法检测肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织Cx26、Cx43、Cx32蛋白的表达:选用课题组前期实验保存的3批肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织的石蜡标本(分为肿瘤模型组、自杀基因治疗组、六味地黄丸治疗组、自杀基因治疗联合六味地黄丸治疗组共4个组),每组选取18个左右动物蜡块,常规切片DAB免疫组化染色,显微镜下随机选取5个高倍视野计数,根据显色强度和阳性细胞数两项指标判断阳性等级。2.四甲基偶氮唑盐(MTT法)观测六味地黄丸含药血清对自杀基因HSV-tk/GCV系统杀伤大鼠肝癌CBRH7919细胞的增效作用:选用前期构建的HSV-tk/GCV CBRH7919自杀基因治疗系统,确定丙氧鸟苷(GCV)工作浓度为39.2μmol/L、鼠血清添加量为10%(体积分数);制备SD大鼠4d和8d六味地黄丸(32g·kg-1·d-1)灌胃含药血清和生理盐水灌胃的对照血清;大鼠肝癌细胞CBRH7919/tk-及CBRH7919/10%tk+(tk+与tk-细胞以1:9比例混合)细胞按3×103个/孔密度接种96孔板,设对照血清组、GCV加对照血清组、1 0%tk+/GCV联合对照血清组、含药血清组、GCV加含药血清组及10%tk+/GCV联合含药血清组;8d含药血清组又再分为低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组6个复孔,用完全培养基培养24h后,相应组分别加入空白血清或含药血清,孵育12h,加入GCV培养60h,MTT法检测细胞存活率,用Q值(实测药效与理论药效的比值)分析自杀基因系统与含药血清联合的相互作用是否具有协同性(0.85≤Q≤1.15为相加作用,Q≥1.15为协同作用)。3.检测六味地黄丸含药血清对CBRH7919细胞GJIC功能的影响:设血清对照组(10%鼠空白血清)、含药血清低剂量组(2.5%含药血清+7.5%对照血清)、中剂量组(5%含药血清+5%对照血清)和高剂量组(10%含药血清)。添加不同浓度的六味地黄丸含药血清孵育CBRH7919细胞4gh,采用预标记双染料传输技术及荧光光漂白恢复技术检测各组细胞染料传输功能即GJIC功能的状况。4.采用实时荧光定量RT-PCR技术检测六味地黄丸含药血清对CBRH7919细胞Cx26、Cx43、Cx32 mRNA表达的影响:设细胞对照组(不添加鼠血清)、血清对照组(10%鼠空白血清)、含药血清低剂量组(2.5%含药血清+7.5%空白血清)、中剂量组(5%含药血清+5%空白血清)和高剂量组(10%含药血清)。含药血清作用CBRH7919细胞48h,应用实时荧光定量RT-PCR染料法检测Cx26、Cx43、Cx32mRNA的相对表达量。以看家基因GAPDH作为实时荧光定量PCR反应的内参照,结果计算:Δct=Cx的ct均值—GAPDH的ct均值,然后取2-ΔCt即代表某样品其初始cDNA的相对量。5.检测六味地黄丸含药血清对CBRH7919细胞Cx26、Cx43、Cx32蛋白表达的影响:六味地黄丸含药血清作用CBRH7919细胞48h,然后采用FITC间接免疫荧光染色,激光扫描共聚焦显微镜观察和流式细胞仪及Western-blot技术检测各组细胞Cx26、Cx43、Cx32蛋白的相对表达量。三、研究结果:1.免疫组化SABC法检测肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织Cx26、Cx43、Cx32蛋白的表达,镜下观察阳性表达定位于细胞浆和细胞膜。Cx43在癌旁组织,特别是有纤维组织浸润的部位表达呈强阳性,而在癌结节中肿瘤细胞表达相对较弱;Cx26、Cx32在肿瘤细胞特别是脂肪组织浸润附近的癌组织中呈现强阳性表达。GCV治疗组三种Cx蛋白的表达与肿瘤模型组水平差异不大(P>0.05),而六味地黄丸治疗组和联合治疗组的蛋白表达均高于肿瘤模型组,其中联合组三种蛋白阳性表达与模型组的差异具有统计学意义(P<0.05)。2.对照血清组、含药血清组、GCV加对照血清组、GCV加含药血清组细胞均未显示明显细胞毒性,表明在实验条件下血清和GCV对肿瘤细胞的生长无明显影响;自杀基因系统10%tk+/GCV加对照血清,及10%tk+/GCV联合不同浓度的含药血清组均具有明显的杀伤作用(P<0.05,与空白血清组比较),表明自杀基因系统具有生物学功能;10%tk+/GCV系统联合5%、10%含药血清组的细胞存活率均明显低于10%tk+/GCV加对照血清组及相对应的含药血清组,联合组的实际抑制率均显着高于理论抑制率,Q值分别为1.16、1.49,均大于1.15,说明其相互作用具有协同性,且随着含药血清浓度的增高Q值增大,协同作用增强。对照血清和含药血清浓度在体积分数20%以下时未显示明显细胞毒性;血清浓度为体积分数5%和7.5%时,自杀基因系统联合含药血清组与单独含药血清组及自杀基因系统加对照血清组比较,联合组对肿瘤细胞的杀伤作用均强于其他非联合组,细胞存活率均有显着性差异(P<0.01),而且自杀基因系统联合含药血清的作用具有明显的协同性(Q>1.15)。3.六味地黄丸含药血清对CBRH7919细胞GJIC功能的影响:(1)流式细胞仪测定结果显示,CBRH7919细胞经六味地黄丸含药血清作用一定时间后,与对照组相比,六味地黄丸含药血清组的双阳性细胞比例(红色和绿色荧光皆阳性的细胞数占总细胞数的比例)逐渐升高,到48h可达32%,达到饱和状态后随着时间的延长双阳性细胞比例逐渐下降;48h检测三个剂量组双阳性细胞的比例,对照组为18.76±2.22%,低剂量组27.93±3.55%,中剂量组35.23±4.15%,高剂量组39.93±5.71%,随着六味地黄丸含药血清浓度的增加,双阳性细胞率逐渐增加(低剂量组P<0.05,中高剂量组P<0.01),并呈现出一定的剂量依赖效应。(2)从荧光漂白恢复图像上发现,在强激光漂白前,各组CBRH7919细胞都被激发出较强的蓝绿色荧光。选择的受试漂白细胞经瞬间漂白后细胞内荧光强度明显变弱,随着时间的推移荧光逐渐恢复,至4 min时对照血清组的平均荧光恢复率为5.93±0.72%,而含药血清组的平均荧光恢复率明显高于对照组,并呈现出一定的浓度依赖趋势。由低到高剂量组分别为15.71±3.81%,38.34±2.64%(P<0.01),46.22±4.33%(P<0.01)。4.六味地黄丸含药血清作用于CBRH7919细胞48h后,随着六味地黄丸含药血清浓度的增加,CBRH7919细胞中Cx26、Cx32和Cx43基因mRNA相对表达量逐渐增多,并呈现出一定的剂量依赖效应,而Cx32和Cx43基因mRNA的表达以中剂量组最明显。设对照血清组Cx mRNA表达量为1,含药血清各剂量组Cx26mRNA相对表达量分别为6.63±0.78、19.29±3.62、29.04±5.35,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);Cx32 mRNA相对表达量分别为23.02±5.10、261.55±29.11、73.68±16.23,Cx43 mRNA相对表达量分别为1.53±0.84、6.75±1.71、4.09±0.98,中、高剂量组Cx32和Cx43 mRNA与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。5.激光共聚焦显微镜观察可见,各组阴性对照组未见阳性细胞表达,细胞对照组和血清对照组CBRH7919细胞表达Cx26、Cx32及Cx43较少,阳性细胞的荧光强度较弱。阳性细胞荧光表达主要集中在胞浆,部分在胞膜,特别是细胞连接部位;六味地黄丸含药血清各浓度组CBRH7919细胞表达Cx 26、Cx32及Cx43较多,阳性细胞的荧光强度较强。含药血清组Cx 32蛋白在CBRH7919细胞膜上呈强阳性表达,特别是细胞连接部位,荧光沿其细胞膜呈颗粒状或细线状分布,胞浆部分也有表达。Cx 26和Cx43阳性表达主要集中在胞浆、细胞连接处、胞膜及核膜周边,荧光呈颗粒状或细线状分布。流式细胞仪结果显示,与细胞血清组相比,鼠血清对照组三种Cx膜蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照血清组相比,各浓度含药血清组Cx26、Cx32和Cx43膜蛋白的表达量均显着增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),尤其是Cx32含药血清组阳性细胞率可达70%以上。且呈现一定的剂量效应依赖趋势,与低剂量组相比,含药血清中、高剂量组Cx32阳性细胞率差异有统计学意义(P<0.05)。而Cx43和Cx32的阳性细胞率有增高的趋势,但尚无统计学差异。Western-blot测定结果显示,含药血清各浓度组显着可提高Cx26、Cx32蛋白的表达,并呈现明显的量效关系。四、结论:1.免疫组化SABC法检测肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织Cx26、Cx43、Cx32蛋白的表达结果显示,与肿瘤模型组相比,六味地黄丸联合自杀基因治疗组能增强Cx26、Cx43、Cx32蛋白表达,尤其是促进Cx26的表达,提示六味地黄丸增强自杀基因旁观者效应的机制与缝隙连接相关。2.HSV—tk/GCV自杀基因治疗系统联合六味地黄丸对杀伤肝癌细胞具有协同增效作用。3.六味地黄丸含药血清具有上调大鼠肝癌细胞CBRH7919 GJIC功能的作用,并呈一定的剂量依赖关系。4.六味地黄丸含药血清能显着增加CBRH7919细胞Cx26、Cx32和Cx43总蛋白的表达,并能增多其在细胞膜的定位分布,尤其促进Cx32在细胞膜的表达。并显示出一定的剂量依赖效应。5.六味地黄丸含药血清能显着增加CBRH7919细胞Cx26、Cx32和Cx43mRNA的表达,从转录水平增强Cx的表达。综上所述,六味地黄丸可能通过调控大鼠肝癌CBRH7919细胞Cx26、Cx32Cx43蛋白及mRNA表达、促进Cx的成熟与定位分布,在一定程度上恢复了Cx介导的GJIC功能,重新建立细胞间缝隙连接,进而提高HSV-tk/GCV系统旁观者效应来实现对自杀基因系统杀伤肝癌细胞的协同性增效作用。

刘江波[8](2019)在《基于DNA纳米技术的细胞膜界面调控》文中研究表明本论文将DNA纳米技术用于细胞膜的界面调控。细胞膜对细胞的生长代谢、胞吞与胞吐、信号转导、迁移和凋亡等生命活动有重要作用。而如何表征和控制细胞膜的生理过程就成了细胞生物学研究中的一个重要课题,传统的材料在细胞膜上相互缠绕,难以实现对细胞膜的精确调控。本论文立足于细胞膜界面调控这个科学问题,利用DNA分子精确的碱基互补配对原则和可编程性,合成各种DNA纳米结构,实现对细胞膜界面的定量调控,为细胞膜的研究提供新的视野和方法。本论文主要内容包括胆固醇—DNA修饰细胞膜、DNA四面体框架核酸(framework nucleic acids,FNA)监测囊泡膜融合动力学、DNA纳米机器控制细胞膜胆固醇寡聚化与解聚化、DNA Origami介导细胞连接与细胞cluster内通讯和人工构建胞体-胞体突触间神经递质监测五方面内容。具体内容如下:(1)把DNA修饰到细胞膜上后,利用DNA的碱基互补原则和可编程性来表征、控制细胞膜,进而研究细胞的功能。这些研究的先决条件是要把DNA修饰到细胞膜上,我们利用胆固醇—DNA直接修饰细胞,这种方法不但能对悬浮细胞,而且还能对贴壁细胞实现快速修饰。(2)囊泡的融合是神经类细胞信息传递中的重要过程。我们构建了基于DNA四面体的FNA,它能快速响应pH的变化,并通过与胆固醇-DNA链杂交锚定在PC12细胞膜上。FNA通过胞吞进入细胞囊泡内后,稳定锚定在囊泡内膜上;并且囊泡内含有多个FNA。当囊泡释放时,FNA这些性质使之可以用来实时监测囊泡膜融合的动力学,明确区分囊泡完全融合与部分融合这两种不同模式,并能指示完全融合时囊泡膜的融合速度。(3)细胞膜分子的寡聚化和去寡聚化是其发挥生理功能的普遍机制。我们构建了新型DNA纳米机器,通过支点介导的DNA链置换反应,可以在活细胞膜上实现胆固醇寡聚化(包括二聚化和三聚化),并能实现其逆过程——解聚化。此外,我们发现胆固醇寡聚化后主要分布在细胞膜脂筏区域,具有生物学应用的潜能。这种DNA纳米技术为细胞膜分子的相互作用研究和调控提供了新的方法。(4)细胞cluster对细胞间通讯、组织和器官形成、免疫反应和癌症转移至关重要。然而,精确控制细胞cluster的形成和研究cluster相互作用仍然是一个巨大的挑战。我们开发了基于DNA Origami这种纳米结构的细胞cluster构建技术,利用DNA Origami的可编程性,我们构建了各种各样的细胞cluster模式。基于简单的细胞cluster模式,我们研究了它们的接触式细胞间通信:基于间隙连接的分子扩散、基于隧道纳米管的膜泡运输和细胞免疫。(5)生物体内具有各种各样的神经突触,然而现在分析单个孤立突触间的递质释放仍然是一个巨大挑战。我们利用DNA Origami在体外构建了孤立的单个胞体-胞体突触,并用碳纤维纳米电极实时监测了突触间的神经递质释放。这种细胞连接和纳米电极耦联的方法为突触间递质监测的研究提供了新的视野。

靳海宝[9](2014)在《超支化聚合物囊泡的多级自组装及其在模拟细胞聚集中的应用研究》文中指出细胞模拟化学(Cytomimetic Chemistry)是二十世纪末出现的一个新兴研究领域,研究内容主要是通过利用人工合成的双层膜(囊泡),来模拟细胞的结构和功能;属于一个涵盖了化学、生命科学及材料等多学科交叉诞生的研究方向。细胞-细胞聚集在生命体系中起着非常重要的作用,存在于多数的生物过程中,例如免疫反应、凝血、炎症、胚胎形成、内皮组织或神经组织等。作为细胞模拟化学的一个分支,用“囊泡-囊泡”聚集来模拟“细胞-细胞”聚集的研究工作引起了科学家们广泛的关注;迄今为止,许多科学家在这个领域中做出了卓有成效的工作。他们以脂质体囊泡为基元,通过多重超分子相互作用,实现了囊泡的聚集,用以模拟细胞聚集的过程。总结文献工作可以发现,该研究领域依然存在以下一些问题:第一,常用于囊泡聚集研究的囊泡尺寸过小,远远小于细胞的尺寸;第二,制备的囊泡聚集体尺寸偏小,远远小于自然界中细胞聚集体的尺寸;第三,大部分采用脂质体囊泡来开展研究工作,关于聚合物囊泡聚集的研究工作非常少;第四,可逆及可控的囊泡聚集研究甚少。针对上述问题,本论文成功地将细胞尺寸的超支化聚合物囊泡引入到模拟细胞聚集研究领域中,通过设计新的驱动力,包括相分离、主客体作用、点击化学反应、多巴胺的强吸附作用等,研究了超支化聚合物囊泡的聚集行为。主要研究内容和结论概括如下:1.“类聚合”的囊泡多级自组装研究采用阳离子开环聚合和原子转移自由基聚合的方法,合成了两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO和pH响应性的两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PDMAEMA。通过两种聚合物在中性水溶液中的共组装,成功制备了具有pH响应性的杂臂超支化聚合物囊泡,并研究了该杂臂超支化聚合物囊泡在不同pH下的多级自组装行为。通过OM、FM和LCSM对多级组装过程进行了详细地跟踪表征,并利用LCSM和NOSEY对组装机理进行了证明。研究发现,随着pH的增加,PDMAEMA在囊泡膜表面发生微相分离,形成类似脂筏结构的疏水微区,从而使囊泡带上各向异性的疏水位点。这些各向异性的囊泡可以通过疏水位点之间的识别进一步聚集形成线性、支化状、环状、超支化或者网状的囊泡链,如同单体的均聚、接枝共聚、内环化、超支化聚合及交联聚合过程。最后,通过融合,得到线性、支化状、环状或者网状的微米管。2.主客体作用驱动的宏观囊泡聚集通过端基修饰的方法,合成了环糊精、金刚烷或偶氮苯修饰的两亲性超支化多臂共聚物。将它们与未修饰的超支化多臂共聚物共组装,分别制备了环糊精、金刚烷或偶氮苯修饰的超支化聚合物囊泡,命名为cd-bps、ada-bps和azo-bps。基于环糊精和金刚烷的主客体作用,实现了cd-bps和ada-bps的聚集,制备了模拟细胞粘着连接的宏观可见的超支化聚合物囊泡聚集体。om和fm结果表明,囊泡聚集体是由三维的紧密堆积的囊泡组成。通过fl和nosey谱等表征方法,证实了主客体作用在囊泡聚集过程中举足轻重。基于环糊精和偶氮苯的光可逆的主客体作用,实现了cd-bps和azo-bps的聚集,构筑了光响应的可逆超支化聚合物囊泡聚集体系,模拟了细胞可逆的粘着连接。通过加入竞争主体分子、uv/vis和nosey谱等方法,对此过程的主客体作用进行了证明。超支化聚合物囊泡的聚集程度可以通过改变聚合物浓度或官能团浓度进行调节;且随着浓度的降低,超支化聚合物囊泡聚集体转变为线性超支化聚合物囊泡链。此外,om、fm和fl等结果表明囊泡融合发生在这两个囊泡聚集的体系中。3.点击化学反应驱动的囊泡聚集:可控融合和相分离通过端基修饰的方法,制备了叠氮基团和丙炔基团修饰的两亲性超支化多臂共聚物。将它们与未修饰的超支化多臂共聚物共组装,分别得到了叠氮基团或丙炔基团修饰的超支化聚合物囊泡(n3-bps或alk-bps)。通过om、fm及fl等表征方法,对复合囊泡的组成和结构进行了详细表征。将二者混合,在点击化学反应的条件下,实现了模拟粘着连接的超支化聚合物囊泡的聚集。om,nmr和ftir等结果表明,超支化聚合物囊泡聚集体是由点击化学反应促发的,并且官能团的浓度会影响到聚集体的堆积程度。研究还发现,不期望的囊泡融合发生在这个过程中。受桥粒连接启发,成功地制备了末端为叠氮基团的两亲性超支化多臂共聚物,它可以在水中自组装形成叠氮基团修饰的球形胶束。将它与alk-bps混合,制备了大面积、无融合的超支化聚合物囊泡聚集体。通过om、fm和fl等表征方法,证实了整个过程。调节丙炔基团与叠氮基团的摩尔比例,可以使紧密堆积的三维聚集体转变为单个超支化聚合物囊泡。此外还发现,在点击化学反应驱动的囊泡聚集过程中还伴随着囊泡表面的侧向微相分离,该微相分离过程与囊泡膜表面的官能团浓度有密切关系;随着官能团浓度的降低,相分离行为减弱。4.三组份识别作用驱动的囊泡聚集行为研究通过官能团的转换,制备了巯基修饰的两亲性超支化多臂共聚物,并通过水合自组装,制备了表面含硫醇的超支化聚合物囊泡。采用om和fm等表征方法,详细分析了超支化聚合物囊泡的中空结构。通过原位还原氯金酸,成功地制备了金纳米粒子覆盖的超支化聚合物囊泡。uv/vis、om、sem和tem等结果表明金纳米粒子均匀地分布在超支化聚合物囊泡的膜表面上,其平均直径为9.3 nm。通过多巴胺的自聚合反应,制备了聚多巴胺包裹的多壁碳纳米管。TEM结果表明聚多巴胺层的厚度为12.5 nm。在Tris缓冲溶液中,将金纳米粒子覆盖的囊泡和聚多巴胺包裹的碳纳米管混合,成功地制备了大面积的超支化聚合物囊泡聚集体。粒径统计结果表明,该囊泡聚集过程有效地避免了囊泡融合。

姚庆华,郭勇[10](2005)在《细胞间隙连接通讯、连接蛋白与肿瘤的抑制》文中研究表明细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication, GJIC)是多细胞生物体内普遍存在的一种通讯方式,在肿瘤的发生、发展和组织自身稳定的维持中具有重要作用。近年的研究显示,肿瘤和转化细胞中普遍存在GJIC的缺陷本文通过对GJIC的生物学特性及GJIC、连接蛋白基因家族抑瘤作用的文献回顾旨在探讨细胞间隙连接通讯、连接蛋白在肿瘤抑制中的重要作用。

二、ULTRASTRUCTURAL CYTOCHEMISTRY OF THE CARDIAC GAP JUNCTION(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、ULTRASTRUCTURAL CYTOCHEMISTRY OF THE CARDIAC GAP JUNCTION(论文提纲范文)

(1)骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞相关基因表达与形态结构发生的关联(论文提纲范文)

文章快速阅读:
文题释义:
    骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞:
    心脏的发育过程中相关基因的表达:
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
        实验动物:
        主要试剂及仪器:
    1.4 实验方法
        1.4.1 骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定
        骨髓间充质干细胞的分离培养:
        骨髓间充质干细胞的鉴定:
        骨髓间充质干细胞的多向分化潜能鉴定:
        1.4.2 定向诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞模型的建立
        诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞:
        心肌样细胞的鉴定:
        RT-PCR检测GATA-4、Nkx2.5、α-MHC的表达:
    1.5 主要观察指标
    1.6 统计学分析
2 结果Results
    2.1 骨髓间充质干细胞的鉴定
    2.2 骨髓间充质干细胞的多向分化潜能鉴定
    2.3 诱导分化过程中的细胞形态变化
    2.4 心肌样细胞的鉴定
    2.5 PT-PCR检测GATA-4、Nkx2.5和α-MHCm RNA的表达
3 讨论Discussion

(2)用于心脏芯片的体外心肌微组织构建研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 心脏及心肌细胞生理
        1.2.1 心脏
        1.2.2 心脏纤维支架(心肌细胞细胞外基质)
        1.2.3 心脏的主要细胞构成
    1.3 心脏组织工程的常用生物水凝胶材料
        1.3.1 常用于心肌组织工程水凝胶制备的生物材料
        1.3.2 常用的优化方案
    1.4 心脏组织工程的研究方法
        1.4.1 电学在心肌组织工程中的应用
        1.4.2 用于药物筛选的组织芯片
    1.5 研究内容
第二章 基于明胶的水凝胶支架制备及表征
    2.1 引言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验试剂与设备
        2.2.2 水凝胶支架的制备
        2.2.3 水凝胶支架的表征
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 AFM表面形貌表征结果
        2.3.2 AFM弹性模量表征结果
    2.4 本章小结
第三章 电刺激体系搭建和心肌细胞评估软件开发
    3.1 引言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验试剂与设备
        3.2.2 电刺激体系
        3.2.3 心肌细胞肌丝排列角度的评估方法
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 心肌细胞肌丝角度评估软件测试结果
        3.3.2 心肌细胞动态视频分析软件测试结果
        3.3.3 电刺激体系测试结果
    3.4 本章小结
第四章 心肌微组织构建研究
    4.1 引言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验试剂与设备
        4.2.2 水凝胶支架制备及预处理
        4.2.3 新生SD大鼠心肌细胞的提取、接种与培养
        4.2.4 心肌细胞在支架上的增殖测试
        4.2.5 支架上心肌细胞的免疫染色观察
        4.2.6 钙瞬变染色实验
        4.2.7 心肌细胞电生理指数测试
        4.2.8 PCR定量检测
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 心肌细胞在不同氧化石墨烯掺杂浓度的支架上生物活性情况
        4.3.2 明胶水凝胶支架用于心肌细胞培养
        4.3.3 表面微图案对心肌细胞生长的影响
        4.3.4 氧化石墨烯对心肌细胞生长的影响
    4.4 本章小结
第五章 总结与展望
    5.1 论文总结
    5.2 论文创新
    5.3 展望
致谢
参考文献
作者简介

(3)急性一氧化碳中毒大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43的表达及超微结构的观察(论文提纲范文)

摘要
前言
第一章 材料与方法
第二章 结果
第三章 讨论
第四章 结论
参考文献
附图
综述
个人简介
致谢

(4)AFM研究微绒毛、细胞膜微丝骨架及应用(论文提纲范文)

摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 细胞表面研究
    1.2 细胞膜的结构与功能
        1.2.1 细胞膜的结构
        1.2.2 细胞膜的功能
    1.3 微绒毛的结构与功能
        1.3.1 微绒毛结构
        1.3.2 微绒毛的功能
    1.4 微丝的结构与功能
        1.4.1 微丝的结构
        1.4.2 微丝的功能
    1.5 原子力显微镜
        1.5.1 工作原理
        1.5.2 工作模式
        1.5.3 AFM在生物学研究中的应用
        1.5.3.1 在细胞膜研究中的应用
        1.5.3.2 在微绒毛研究中的应用
        1.5.3.3 在微丝研究中的应用
        1.5.3.4 在生物领域中的其他应用
    1.6 小结
    1.7 本研究课题的提出
第二章 AFM对细胞表面微绒毛结构的表征
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验材料和仪器
        2.2.2 实验步骤
        2.2.2.1 主要试剂的配制
        2.2.2.2 细胞培养
        2.2.2.3 微丝的染色
        2.2.2.4 免疫荧光实验
        2.2.2.5 微绒毛结构的动态
        2.2.2.6 饥饿实验
        2.2.2.7 细胞的吸收功能
        2.2.2.8 微绒毛变化与吸收功能的关系
    2.3 结果和讨论
        2.3.1 联合AFM与荧光显微镜对细胞表面微绒毛结构表征
        2.3.2 AFM对微绒毛结构动态观察
        2.3.3 饥饿引起的微绒毛结构变化影响细胞吸收功能
    2.4 小结
第三章 AFM对细胞膜微丝骨架结构的表征
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验材料和仪器
        3.2.2 实验步骤
        3.2.2.1 主要试剂的配制
        3.2.2.2 细胞培养
        3.2.2.3 微丝的染色
        3.2.2.4 细胞不同层次结构表征
        3.2.2.5 微丝空间分布的揭示
    3.3 结果和讨论
        3.3.1 激光共聚焦图像揭示细胞不同层次结构
        3.3.2 联合AFM与荧光显微镜对细胞表面微绒毛结构表征
        3.3.3 细胞膜相关的微丝骨架的超微结构的表征
        3.3.4 联合AFM与荧光显微镜对细胞表面微丝表征
        3.3.5 肌动蛋白微丝组成的空间异质结构的表征
    3.4 小结
第四章 微丝在细胞自噬传递中的作用
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验材料和仪器
        4.2.2 实验步骤
        4.2.2.1 主要试剂的配制
        4.2.2.2 质粒的构建
        4.2.2.3 细胞的培养
        4.2.2.4 细胞稳定株的构建
        4.2.2.5 细胞株的瞬转染
        4.2.2.6 不同种细胞间连接的标记
        4.2.2.7 AFM对细胞进行纳米机械力作用
        4.2.2.8 微丝结构的染色
        4.2.2.9 机械压力作用细胞
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 细胞稳定株的获得
        4.3.2 微丝在机械力感应中的作用
        4.3.3 纳米机械力引起细胞自噬
        4.3.4 细胞间自噬信号的传递
        4.3.5 间隙连接在相连细胞自噬传递中的作用
    4.4 小结
第五章 总结与展望
参考文献
附录1 已发表和待发表文章目录
致谢

(5)一氧化碳干预Cx43-ERK信号通路在新生儿急性肺损伤中的保护作用(论文提纲范文)

缩略语表
英文摘要
中文摘要
第一部分 一氧化碳在肺泡上皮细胞程序性坏死中的保护作用研究
    第一章 前言
    第二章 急性肺损伤新生大鼠动物模型的制备
        2.1 材料与方法
        2.2 实验结果
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 一氧化碳对LPS诱导的急性肺损伤的保护作用研究
        3.1 材料与方法
        3.2 结果
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 一氧化碳干预LPS诱导的急性肺损伤新生大鼠肺泡上皮细胞程序性坏死的研究
        4.1 材料与方法
        4.2 结果
        4.3 讨论
        4.4 小结
    第五章 Cx43在一氧化碳保护新生大鼠急性肺损伤中的作用研究
        5.1 引言
        5.2 材料与方法
        5.3 结果
        5.4 讨论
        5.5 小结
    第六章 Cx43-ERK信号通路在肺泡上皮细胞程序性坏死中的作用研究
        6.1 材料与方法
        6.2 结果
        6.3 讨论
        6.4 小结
第二部分 一氧化碳吸入治疗新生儿持续性肺动脉高压的随机对照研究
    第一章 前言
    第二章 一氧化碳吸入治疗新生儿持续性肺动脉高压的临床研究
        2.1 引言
        2.2 材料与方法
        2.3 实验结果
        2.4 讨论
        2.5 小结
全文结论
参考文献
文献综述 一氧化碳保护急性肺损伤的分子机制研究进展
    参考文献
附件1
附件2
攻读博士研究生期间发表论文
致谢

(6)脂肪组织来源间充质细胞向心肌细胞定向诱导分化的电生理学研究(论文提纲范文)

英文缩略词表
中文摘要
英文摘要
第一部分: Wistar 大鼠 ADMSCs的分离、培养与鉴定
    前言
    材料
    方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
第二部分: 体外诱导 Wistar 大鼠 ADMSCs 向心肌细胞分化
    前言
    材料
    方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
第三部分: 多电极阵列测定 ADMSCs 体外向心肌细胞诱导分化前、后电生理学的变化
    前言
    主要仪器设备及材料
    方法
    结果
    讨论
    小结
    参考文献
全文总结
综述: 脂肪来源间充质干细胞──细胞学工程的新选择
攻读学位期间发表文章情况
致谢

(7)从缝隙连接探讨六味地黄丸对自杀基因治疗肝癌的增效作用(论文提纲范文)

中文摘要
Abstract
引言
第一部分 研究背景
    一、肿瘤自杀基因治疗现状与发展趋势
        (一) 肿瘤自杀基因治疗系统概述
        (二) 自杀基因疗法的旁观者效应及机制
        (三) 缝隙连接机制与旁观者效应
    二、缝隙连接通讯与肿瘤
        (一) 缝隙连接的生物特性
        (二) GJIC与肿瘤抑制
    三.中医对肿瘤的认识及治疗法则
        (一) 溯源
        (二) 病因病机
        (三) 治法
    四、六味地黄丸的抗肿瘤作用进展
        (一) 直接抗肿瘤作用
        (二) 抗放、化疗毒副作用,间接发挥抑瘤作用
        (三) 通过调节机体的免疫功能,增强人体抗病邪的能力,间接发挥抑瘤作用
        (四) 通过影响肿瘤细胞内cAMP含量,作用于肿瘤细胞
        (五) 通过缝隙连接机制对肿瘤自杀基因疗法起到增效作用:
    五、中药血清药理学研究进展
        (一) 中药血清药理学概述
        (二) 中药血清药理学的优势
        (三) 中药血清药理学存在的问题
        (四) 中药血清药理学方法在我国的应用现状
        (五) 中药血清药理学的应用前景
第二部分 实验研究
    第一章 免疫组化SABC法检测肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织Cx26、Cx43、Cx32蛋白的表达
        1 材料
        2 方法
        3 结果
        4 讨论
    第二章 六味地黄丸含药血清对大鼠肝癌CBRH7919细胞HSV-tk/GCV系统旁观者效应的影响
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
    第三章 六味地黄丸含药血清对大鼠肝癌细胞CBRH7919 GJIC功能的影响
        实验一 预标记双染料传输流式细胞术检测六味地黄丸含药血清对大鼠肝癌细胞CBRH7919 GJIC功能的影响
        1 材料
        2 方法
        3 结果
        4 讨论
        实验二 FRAP法检测六味地黄丸含药血清对大鼠肝癌CBRH7919细胞GJIC功能的影响
        1 材料和方法
        2 结果
        3 讨论
    第四章 荧光定量RT-PCR检测六味地黄丸含药血清对大鼠肝癌细胞CBRH7919 Cx26、Cx43、Cx32 mRNA表达的影响
        1 材料
        2 方法
        3 结果
        4 讨论
    第五章 六味地黄丸含药血清对大鼠肝癌细胞CBRH7919Cx26、Cx43、Cx32蛋白表达的影响
        1 材料
        2 方法
        3 结果
        4 讨论
第三部分 结论与展望
参考文献
附录
致谢

(8)基于DNA纳米技术的细胞膜界面调控(论文提纲范文)

摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 DNA纳米技术
    1.2 DNA分子修饰细胞膜的方法
        1.2.1 DNA分子共价修饰细胞膜
        1.2.2 DNA分子基于特定基团修饰细胞膜
        1.2.3 DNA分子基于疏水相互作用修饰细胞膜
    1.3 DNA分子功能化细胞膜
        1.3.1 DNA分子研究细胞膜分子的相互作用
        1.3.2 DNA分子控制细胞膜分子的相互作用
        1.3.3 DNA分子监测细胞膜微环境
        1.3.4 DNA分子介导细胞连接
    1.4 本课题的设计
第2章 基于胆固醇—DNA的活细胞膜修饰
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验试剂与仪器
        2.2.2 实验步骤
        2.2.2.1 DNA定量
        2.2.2.2 细胞培养
        2.2.2.3 DNA修饰细胞膜
        2.2.2.4 共聚焦显微镜成像
        2.2.2.5 扫描电子显微镜成像
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 胆固醇—DNA修饰悬浮细胞L1210
        2.3.2 胆固醇—DNA修饰贴壁细胞PC12
        2.3.3 细胞膜被修饰后仍具有流动性
    2.4 结论
第3章 FNA监测囊泡膜融合动力学
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验试剂与仪器
        3.2.2 实验步骤
        3.2.2.1 FNA 的合成与 PAGE 表征
        3.2.2.2 FNA 的 AFM 与 CD 表征
        3.2.2.3 FNA和量子点细胞外荧光光谱表征
        3.2.2.4 FNA细胞外单分子荧光表征
        3.2.2.5 FNA锚定细胞膜
        3.2.2.6 细胞胞吞摄入FNA
        3.2.2.7 DNA在细胞中的取代反应
        3.2.2.8 囊泡动力学监测
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 FNA在体外的表征
        3.3.2 FNA稳定锚定在细胞膜上
        3.3.3 FNA胞吞后定位于囊泡中
        3.3.4 囊泡膜融合动力学的监测
    3.4 结论
第4章 DNA纳米机器介导细胞膜胆固醇寡聚化和解聚化
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验试剂与仪器
        4.2.2 实验步骤
        4.2.2.1 DNA纳米机器的合成
        4.2.2.2 DNA纳米机器的荧光光谱表征
        4.2.2.3 DNA纳米机器锚定细胞膜
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 DNA纳米机器锚定在细胞膜上
        4.3.2 DNA纳米机器诱导细胞膜胆固醇寡聚化
        4.3.3 DNA纳米机器诱导细胞膜胆固醇解聚化
        4.3.4 胆固醇寡聚化后定位于细胞膜脂筏
    4.4 结论
第5章 DNA Origami 介导的细胞连接和细胞 cluster 内通讯
    5.1 引言
    5.2 实验部分
        5.2.1 实验试剂与仪器
        5.2.2 实验步骤
        5.2.2.1 DNA Origami 的合成
        5.2.2.2 DNA 的 AFM、SEM 表征
        5.2.2.3 DNA 与 SPDP 交联
        5.2.2.4 细胞染色
        5.2.2.5 细胞修饰DNA与细胞连接
        5.2.2.6 细胞 cluster 内钙黄绿素运输
        5.2.2.7 细胞 cluster 内膜泡运输
        5.2.2.8 T细胞免疫
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 DNA修饰细胞膜
        5.3.2 DNA Origami 介导细胞连接
        5.3.3 细胞 cluster 内细胞通讯
        5.3.3.1 间隙连接通讯
        5.3.3.2 TNT膜泡运输
        5.3.3.3 细胞凋亡与拯救
        5.3.3.4 细胞免疫
    5.4 结论
第6章 人工构建胞体—胞体突触及突触间递质释放实时监测
    6.1 引言
    6.2 实验部分
        6.2.1 实验试剂与仪器
        6.2.2 实验步骤
        6.2.2.1 DNA Origami 的合成与表征
        6.2.2.2 细胞染色
        6.2.2.3 细胞修饰DNA与细胞连接
        6.2.2.4 碳纤维纳米电极CFNE制备与表征
        6.2.2.5 突触间递质释放监测
    6.3 结果与讨论
        6.3.1 细胞连接形成胞体-胞体突触
        6.3.2 碳纤维纳米电极CFNE制备与表征
        6.3.3 碳纤维纳米电极CFNE插入胞体-胞体突触间隙
        6.3.4 胞体-胞体突触间隙递质释放监测
    6.4 结论
第7章 总结与展望
参考文献
致谢
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果

(9)超支化聚合物囊泡的多级自组装及其在模拟细胞聚集中的应用研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
缩写说明
第一章 绪论
    1.1 人工合成膜——囊泡
        1.1.1 囊泡的简介
        1.1.2 囊泡的分类
        1.1.3 囊泡的功能化
    1.2 自然界中的细胞聚集
        1.2.1 细胞粘着分子
        1.2.2 细胞连接
    1.3 模拟细胞聚集的研究进展
        1.3.1 基于氢键作用构筑的囊泡聚集体系
        1.3.2 基于静电作用构筑的囊泡聚集体系
        1.3.3 基于金属配位作用构筑的囊泡聚集体系
        1.3.4 基于主客体相互作用构筑的囊泡聚集体系
    1.4 超支化聚合物囊泡在细胞模拟化学中的应用
        1.4.1 超支化聚合物自组装的研究概述
        1.4.2 超支化聚合物囊泡的研究进展
        1.4.3 超支化聚合物囊泡在模拟细胞膜中的研究进展
    1.5 本课题的研究目的、主要内容及意义
第二章“类聚合”的囊泡多级自组装研究
    2.1 引言
    2.2 实验
        2.2.1 实验原料、仪器、设备
        2.2.2 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO的合成
        2.2.3 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PDMAEMA的合成
        2.2.4 罗丹明B修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-Rb的合成
        2.2.5 丹磺酰氯修饰的超支化聚合物DNS-HBPO-star-PDMAEMA的合成
        2.2.6 复合囊泡的制备
        2.2.7 复合囊泡的多级组装体过程
        2.2.8 表征
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO的合成与表征
        2.3.2 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PDMAEMA的合成与表征
        2.3.3 pH响应性囊泡的构筑
        2.3.4 pH诱导的类聚合的囊泡聚集
        2.3.5 微米管的稳定性研究
        2.3.6 多级的类聚合的囊泡聚集的机理
        2.3.7 组装过程的可控性
    2.4 本章小结
第三章 主客体作用驱动的宏观囊泡聚集
    3.1 引言
    3.2 实验
        3.2.1 实验原料、仪器、设备
        3.2.2 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO的合成
        3.2.3 环糊精修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-CD的合成
        3.2.4 金刚烷修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-Ada的合成
        3.2.5 偶氮苯修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-Azo的合成
        3.2.6 丹磺酰基修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-DNS的合成
        3.2.7 芘基团修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-Py的合成
        3.2.8 复合囊泡的制备
        3.2.9 复合囊泡中封装样品
        3.2.10 表征
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 功能化的超支化聚合物的合成与表征
        3.3.2 功能型复合囊泡的构筑
        3.3.3 基于环糊精和金刚烷的主客体作用驱动的囊泡聚集
        3.3.4 基于环糊精和偶氮苯的主客体作用驱动的可逆囊泡聚集
    3.4 本章小结
第四章 点击化学反应驱动的囊泡聚集:可控融合和相分离
    4.1 引言
    4.2 实验
        4.2.1 实验原料、仪器、设备
        4.2.2 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO的合成
        4.2.3 丙炔基团修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-Alk的合成
        4.2.4 叠氮化钠修饰的超支化聚合物HBPO-star-PEO-N3的合成
        4.2.5 叠氮化钠修饰的超支化聚合物HBPO-star-PDMAEMA-N3的合成
        4.2.6 荧光基团修饰的超支化聚合物的合成
        4.2.7 复合囊泡的制备
        4.2.8 表征
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 功能化的超支化聚合物的合成与表征
        4.3.2 功能型复合囊泡的构筑
        4.3.3 基于丙炔基团和叠氮基团的点击化学反应驱动的囊泡-囊泡聚集
        4.3.4 基于丙炔基团和叠氮基团的点击化学反应驱动的囊泡-胶束聚集
    4.4.本章小结
第五章 三组份识别作用驱动的囊泡聚集行为研究
    5.1 引言
    5.2 实验
        5.2.1 实验原料、仪器、设备
        5.2.2 两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO的合成
        5.2.3 末端为疏基的两亲性超支化多臂共聚物HBPO-star-PEO-SH的合成
        5.2.4 荧光基团修饰的超支化聚合物的合成
        5.2.5 制备金纳米颗粒覆盖的超支化聚合物囊泡(SBP@Au)
        5.2.6 合成聚多巴胺包裹的多壁碳纳米管(MWCNTs@PDA)
        5.2.7 SBP@Au的聚集实验
        5.2.8 表征
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 末端为巯基的超支化聚合物HBPO-star-PEO-SH的合成与表征
        5.3.2 金纳米颗粒覆盖的超支化聚合物囊泡的构筑
        5.3.3 聚多巴胺包裹的多壁碳纳米管的合成与表征
        5.3.4 吸附作用驱动的超支化聚合物囊泡的聚集
        5.3.5 超支化聚合物囊泡聚集机理的证明
        5.3.6 超支化聚合物囊泡聚集体的融合现象研究
    5.4 本章小结
第六章 全文总结
附录:超支化聚合物囊泡双层结构的表征
参考文献
致谢
攻读学位期间发表或投寄的学术论文

四、ULTRASTRUCTURAL CYTOCHEMISTRY OF THE CARDIAC GAP JUNCTION(论文参考文献)

  • [1]骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞相关基因表达与形态结构发生的关联[J]. 徐亦辰,刘玲珑,赵文婧,王慧丰,韦雅淑,陈维平. 中国组织工程研究, 2017(13)
  • [2]用于心脏芯片的体外心肌微组织构建研究[D]. 孟泓旭. 东南大学, 2017(04)
  • [3]急性一氧化碳中毒大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43的表达及超微结构的观察[D]. 王学惠. 山西医科大学, 2005(06)
  • [4]AFM研究微绒毛、细胞膜微丝骨架及应用[D]. 刘林. 中国科学院大学(中国科学院上海应用物理研究所), 2019(07)
  • [5]一氧化碳干预Cx43-ERK信号通路在新生儿急性肺损伤中的保护作用[D]. 李宛卫. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)
  • [6]脂肪组织来源间充质细胞向心肌细胞定向诱导分化的电生理学研究[D]. 秦宇红. 中国人民解放军军医进修学院, 2007(02)
  • [7]从缝隙连接探讨六味地黄丸对自杀基因治疗肝癌的增效作用[D]. 易华. 广州中医药大学, 2009(10)
  • [8]基于DNA纳米技术的细胞膜界面调控[D]. 刘江波. 中国科学院大学(中国科学院上海应用物理研究所), 2019(07)
  • [9]超支化聚合物囊泡的多级自组装及其在模拟细胞聚集中的应用研究[D]. 靳海宝. 上海交通大学, 2014(03)
  • [10]细胞间隙连接通讯、连接蛋白与肿瘤的抑制[J]. 姚庆华,郭勇. 肿瘤研究与临床, 2005(01)

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心脏间隙连接的超结构细胞化学
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