一、羊精子细胞质膜及顶体外膜Ca~(2+)-ATPase的活力分布（论文文献综述）
肖凯[1]（2021）在《水牛精浆外泌体蛋白质组的初步研究》文中指出水牛（Bubalus bubalis）是我国南方亚热带地区一种优良的乳肉兼用型大家畜,具有广泛的产业开发价值,但相比地处中温带的牛属物种,水牛的繁殖率较低,精子活力低下是其中重要影响因素之一,极大的限制了奶水牛业的发展和本地水牛品种改良的步伐。精子是一种高度特化和浓聚的已不能生长和分裂的细胞,基因组的转录和翻译功能几乎处于沉默状态,主要依赖于精浆发育内环境调节其成熟过程。正常的受精不仅取决于精子发育的内在因素,还受到精浆等外部因素的影响,这些因素会影响精子的功能。精浆外泌体是来源于雄性生殖道内众多附属性腺分泌的胞外囊泡,在精子成熟和受精过程中扮演重要角色。蛋白质组学技术是研究哺乳动物精子成熟与发育的重要手段,可以高通量寻找影响精子受精的功能蛋白质,有助于筛选关键基因或生物标志物,目前,精浆外泌体的蛋白质组研究报道较少。本研究通过蛋白质组学技术探索水牛精浆外泌体与精子功能的关系,发现外泌体调节精子功能的关键因子并进行分析,有助于解释水牛活力低下的成因,阐明水牛雄性生殖机制。本文研究的主要内容如下:一、水牛精浆外泌体的分离与鉴定。使用改良后的差速离心+蔗糖垫法分离提取精浆外泌体,通过蛋白质印迹（Western blot）验证外泌体蛋白标志物CD81、TSG101和ALIX,结果均阳性表达。通过纳米颗粒跟踪分析仪（NTA）分析外泌体粒径大小,结果显示粒径集中于119.4 nm附近,占比99.2%;通过透射电子显微镜（TEM）观察外泌体形态,结果显示其具有明显的茶托状结构。二、水牛精子、精浆及精浆外泌体蛋白质表达谱的构建和生物信息学分析。利用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）蛋白质组学策略在精子、精浆和精浆外泌体中分别鉴定到1894种、1247种和1343种蛋白质。对蛋白质表达谱进行GO分析,结果显示精子、精浆和外泌体蛋白质主要参与氧化还原过程和蛋白质转运过程,具有ATP、GTP结合能力,定位于胞外外泌体、细胞质、线粒体上。KEGG分析显示,精子、精浆和精浆外泌体蛋白质富集最丰富的均为代谢通路;精子在能量代谢相关的通路上参与的蛋白质数量最多;精浆通过补体系统和蛋白酶体通路起到稳定内环境的作用;外泌体中蛋白质参与了蛋白酶体通路,说明蛋白酶体通路可能是外泌体发挥保护功能的主要方式。三、水牛高低活力精浆外泌体的定量蛋白质组学分析。利用i TRAQ结合液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）蛋白质组学策略对高低活力精浆外泌体进行定量分析。以高活力水牛精浆外泌体表达蛋白质作为对照组,筛选到差异表达蛋白质160个（差异倍数>1.2）,包括下调表达蛋白质119个,上调表达蛋白质41个,低活力精浆外泌体中差异蛋白质变化总体呈现下降趋势。对差异蛋白质进行GO分析,结果显示大部分差异蛋白质定位于精子和囊泡,具有水解酶、金属蛋白酶活性,参与精卵识别、受精、单受精、精子与透明带的结合、单生物生殖、细胞识别等过程。KEGG分析结果显示,差异蛋白质主要参与PPAR信号通路、钙信号通路、c AMP信号通路等,其中IZUMO1等10种蛋白质表达量在低活力精浆外泌体显着下调。综上所述,本研究首次分离并鉴定水牛精浆外泌体,构建了水牛精子、精浆和精浆外泌体蛋白质表达谱,获得水牛高低活力精浆外泌体差异蛋白质表达谱,通过比较水牛高低活力精浆外泌体的差异表达蛋白质,筛选出了一批可能与精子功能相关的外泌体蛋白质,分析外泌体与水牛精子活力维持的关系,为水牛雄性生殖机理研究提供新的视角。
何翁潭[2]（2021）在《水牛附睾头、体和尾部精子差异蛋白质组学的初步研究》文中研究指明哺乳动物的精子在经过附睾成熟后才具有受精能力,这一过程称为精子成熟。精子在成熟过程中其基因转录和翻译过程几乎处于沉默状态,因此精子的成熟主要由发育内环境调控或蛋白质修饰调控,精子的成熟过程涉及形态和机能的变化,与精子的质量息息相关。目前对精子成熟的研究多围绕附睾细胞组织或单一部位精子,而对精子成熟的整个过程中蛋白质的动态变化研究较少。水牛（Bubalus bubalis）是我国南方亚热带地区一种优良的乳肉兼用型大家畜,但其繁殖效率较低,而雄性配子的质量是影响水牛繁殖因素之一,因此,研究水牛精子成熟过程的调控机制对提高雄性配子的质量具有重要意义。本研究通过高通量蛋白质谱鉴定、透射电子显微镜观察、荧光分子探针标记及流式细胞仪分析等生物学技术对水牛附睾头、体和尾部精子进行研究,从微观层面展示精子成熟过程中的变化,筛选关键蛋白质,分析附睾精子成熟的重要因素,为水牛生殖机理研究提供新的视角。本文的主要研究结果如下:一、水牛附睾不同部位精子超微结构观察及分析利用Percoll密度梯度离心分离得到纯度为95%的附睾头、体和尾部精子;通过计算机辅助精子分析系统（CASA）发现精子活力分别为头部8.35%,体部20.21%,尾部65.60%;通过透射电镜观察发现附睾不同部位精子在顶体、线粒体鞘、外周致密纤维以及轴丝纤维等都存在着相同的缺陷类型。流式细胞仪分析结果显示,精子质膜完整率从附睾头部到尾部精子逐渐升高,附睾尾部精子的线粒体鞘高膜电位比率最高,流式细胞仪结合荧光显微镜分析观察发现精子顶体完整率从附睾头部到尾部逐渐升高。二、水牛附睾头、体和尾部精子的定量蛋白质组学分析利用TMT定量蛋白质组学技术鉴定附睾头、体和尾三部位精子得到2796个蛋白质,其中,以附睾头部精子表达蛋白质作为对照组,发现体部和尾部共有差异蛋白质130个（差异倍数>1.3）,包括上调蛋白质53个,下调蛋白质77个。对差异蛋白质进行GO分析表明大部分差异蛋白质参与了生殖、配子产生等相关的生物学过程,亚细胞定位分析表明大部分差异蛋白质与外泌体、囊泡、内质网相关。KEGG富集分析显示,差异表达蛋白质所参与的信号通路主要包括内质网蛋白加工、过氧化物酶体、抗原加工呈递、代谢、激素合成等。利用STRING工具构建了差异蛋白互作网络,发现蛋白质之间具有复杂的相互作用关系,其子网络主要包括代谢、定位、翻译、氧化应激等。发现HSD17B4、PRDX4在附睾精子成熟过程中具有重要作用。通过免疫荧光和Western Blot证实了HSD17B4、PRDX4在附睾精子体部和尾部相对头部高表达,且PRDX4蛋白定位在精子的头部及尾部,HSD17B4蛋白定位在精子的头部。综上所述,本研究分析了水牛附睾不同部位精子的超微结构特征及畸形类型,构建了水牛附睾精子的差异表达蛋白质谱,通过生物信息学分析发现附睾精子成熟涉及的生物学过程、亚细胞定位,参与的信号通路以及蛋白质互作网络,发现一批与精子成熟相关的关键蛋白质。本研究为阐明水牛附睾精子成熟过程的调控机制奠定基础。
贺巾津[3]（2021）在《表儿茶素对猪精液冷冻保存效果的影响》文中研究说明
周正娜[4]（2021）在《添加R848处理小鼠精子对胚胎性别比率的影响》文中认为
王娜,张洁,海超,李欣,李光鹏,赵跃芳[5]（2021）在《牛精子冷冻损伤及其改善方法》文中进行了进一步梳理牛精液冷冻与人工授精技术相结合,在牛品种改良、保护优良种质资源中发挥着重要作用。尽管冷冻后部分牛精子活力高达60%以上,但是冷冻后精子受损现象却普遍存在,尤其是受精能力与鲜精相比显着降低。作者详细介绍了冷冻-解冻过程对牛精子造成的主要损伤,包括精子的形态完整性、活力及遗传物质的改变等;阐述了冷冻造成精子损伤的主要原因,即细胞内冰晶形成和氧化应激反应及其产生的可能机制;并且对目前常用的提高冷冻精子质量的方法,如添加冷冻保护剂、优化冷冻程序以及添加抗氧化剂等进行了详细地综述;提出了在冷冻精液研究方面值得探索的问题,以期为家畜精液冷冻保存技术的进一步优化提供理论依据。
何涛[6]（2021）在《绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究》文中认为为了研究绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的影响,筛选适宜的添加剂量。本研究以绿原酸、木犀草素和黄精多糖作为猪精液冷冻保存稀释液保护添加物,通过测定其冷冻-解冻后精子的各项指标（包括精子活力、活率,质膜、顶体和DNA完整率,线粒体、超氧化歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性等）来判定对精液保存效果的影响。并进行了绿原酸、木犀草素和黄精多糖不同配比添加试验,筛选出最适的添加剂量和配比并运用于猪精液冷冻与人工授精试验,取得以下结果:1.添加绿原酸对猪精子冷冻-解冻后各项检测指标有一定的提升作用,其中添加50μg/m L试验组效果最好（P<0.05）,但绿原酸添加浓度与冻后精子的活力活性、顶体、质膜、DNA完整率和线粒体活性之间相关性不强。其中添加15μg/m L试验组的精子活率、顶体和质膜完整率与对照组差异不显着（P>0.05）,添加剂量与猪精液冻后的精子抗氧化物酶活性有一定相关性,添加量从30μg/m L到100μg/m L,其SOD、CAT、GSH-Px活性均有提升作用（P<0.05）。其中添加50μg/m L试验组较对照组差异极显着（P<0.01）,但添加15μg/m L试验组CAT、GSH-Px活性较对照组差异不显着（P>0.05）。结果提示,猪精液冷冻稀释液中适量添加绿原酸对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率以及线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定的提升作用,最佳添加量为50μg/m L。2.添加木犀草素对猪精子冷冻-解冻后各项检测指标有一定的作用,添加剂量与冻后精子的活力活性、顶体、质膜和DNA完整率以及线粒体活性之间有弱的正相关性。当添加80μg/m L时,冻后精子质膜完整率较对照组差异极显着（P<0.01）,抗氧化物酶活性试验组较对照组差异显着（P<0.05）。当添加100μg/m L时,精子冻后SOD、CAT、GSH-Px活性数值又有所降低,试验组较对照组差异不显着（P>0.05）。结果提示,猪精液冷冻稀释液中适量添加木犀草素对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率以及线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定作用,最佳添加量为80μg/m L。3.添加黄精多糖对猪精子冷冻-冻后活力活率有一定的提高,其中添加30μg/m L、80μg/m L处理组较对照组差异显着（P<0.05）,添加15μg/m L、50μg/m L、100μg/m L处理组较对照组差异不显着（P>0.05）。其中精子的活力活率、质膜和DNA完整率峰值均出现在30μg/m L添加组,顶体完整率峰值出现在80μg/m L添加组,与50μg/m L试验组差异显着（P<0.05）,精子活率试验组与对照组差异极显着（P<0.01）。添加剂量与猪精子活率和功能完整性相关性规律不明显,其中50μg/m L、100μg/m L试验组数据较对照组差异不显着（P>0.05）。添加黄精多糖对猪精子冻后精子抗氧化物酶活性有提升作用,其中添加30μg/m L处理组较对照组差异显着（P<0.05）。精子SOD活性峰值出现在80μg/m L处理组,较对照组差异显着（P<0.05）;精子GSH-Px活性峰值出现在30μg/m L处理组,其中30μg/m L和80μg/m L处理组较对照组差异极显着（P<0.01）;但添加15μg/m L处理组SOD、CAT、GSH-Px活性较对照组差异不显着（P>0.05）。结果显示,猪精液冷冻稀释液中适量添加黄精多糖对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率,线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定作用,最佳添加量为30μg/m L。4.不同配伍处理组与对照组之间差异显着（P<0.05）,对猪精子冻后活率、顶体、质膜和DNA完整率均有提高作用,表明不同配伍组存在协同作用。其中组合6（即35μg/m L绿原酸加40μg/m L木犀草素加15μg/m L黄精多糖）效果最好,精子活力活率、质膜、顶体和DNA完整率最高,分别为48.9%、50.81%、50.09%、49.36%和48.13%。精子活力活率、顶体和质膜完整率各配伍处理组之间有差异,但精子DNA完整率各配伍组之间差异不显着（P>0.05）。不同配伍处理组与对照组之间差异显着（P<0.05）,表明不同配伍处理组对猪精子冻后抗氧化酶活性有提高作用,且存在一定的协同作用。其中组合6效果最好,冻后精子SOD、CAT和GSH-Px最高,分别为69.79 U/m L、3.98 U/m L和221.37 U/I,各配伍处理组之间有差异。结果显示,猪精液冷冻稀释液中添加不同配伍的绿原酸、木犀草素和黄精多糖对冻后精子活力活率,质膜、顶体和DNA完整率,线粒体、SOD、CAT、GSH-Px活性等指标有一定作用,最佳配伍组合为35μg/m L绿原酸加40μg/m L木犀草素加15μg/m L黄精多糖。5.与新鲜猪精液人工授精相比,冷冻精液在不返情率、受胎率、分娩率和窝产仔数上均有所降低。但在冷冻精液试验组中,各处理组的结果要明显优于对照组。猪精液冷冻稀释液中分别添加50μg/m L绿原酸、80μg/m L木犀草素、30μg/m L黄精多糖以及联合添加35μg/m L绿原酸、40μg/m L木犀草素、15μg/m L黄精多糖后,能够显着提高窝产仔数（P<0.05）。结果显示,与新鲜猪精液人工授精结果相比,冷冻保存精液人工授精效果仍然不理想,但各冷冻试验组中,添加50μg/m L绿原酸、80μg/m L木犀草素、30μg/m L黄精多糖以及联合添加35μg/m L绿原酸、40μg/m L木犀草素、15μg/m L黄精多糖试验组,对提高人工授精监测指标有一定作用。配伍组的窝产仔数显着高于其它冷冻组（P<0.05）。综上,在冷冻稀释液中单一添加绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保及人工授精效果有一定作用,配伍添加效果最佳。
王珺[7]（2021）在《优化猪冷冻精液配方及猪冻精品质相关基因的多态性研究》文中研究表明人工授精（Artificial insemination,AI）技术是提高家畜繁殖效率的重要环节,因此筛选获得高质量的猪冷冻精液尤为重要。检测种公猪精液品质是鉴定种公猪是否具有正常繁殖能力的重要环节,也是猪选种、育种工作中最基本的一项衡量指标,间接影响生产效益。因此,筛选可生产高品质精液的种公猪尤为重要。从优化猪冷冻精液配方及筛选出优势基因型两方面出发,试验结果如下:1.为优化冷冻精液配方,将品质佳的精液平均分为7组,即对照组、试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,其中对照组不添加抗氧化剂及冷冻保护剂,试验Ⅰ组添加100μmol/L绿原酸（chlorogenic acid,CGA）,试验Ⅱ组添加40μmol/L咖啡酸苯乙酯（phenethyl caffeate,CAPE）,试验Ⅲ组添加0.5g/L聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrrolidone,PVP）5,试验Ⅳ组添加100μmol/L CGA和0.5g/L PVP,试验Ⅴ组添加40μmol/L CAPE和0.5g/L PVP,试验Ⅵ组添加100μmol/L CGA、40μmol/L CAPE和0.5g/L PVP进行液氮冷冻保存,30 d后解冻精液,测定结果表明:与对照组相比,添加100μmol/L CGA、40μmol/L CAPE和0.5 g/L PVP的冷冻精液在精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性、过氧化氢酶（Catalase,CAT）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）活性均出现极显着提高（P<0.01）;DNA完整性、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活性均显着提高（P<0.05）;活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平极显着降低（P<0.01）;丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平显着降低（P<0.05）。说明在猪精液冷冻基础液中同时添加100μmol/L CGA、40μmol/L CAPE和0.5 g/L PVP可提高新吉林黑猪冷冻精液品质。2.优化配方后,对88只公猪精液进行冷冻处理,通过冷冻精液提取基因组,进行DNA测序和HRM分型,结果显示:在公猪AQP7基因exon7上检测出一个SNP位点C187T,共有3种基因型,氨基酸序列并未发生改变;在公猪LPAR1基因exon2上检测出一个SNP位点T136C,共有2种基因型,氨基酸序列并未发生改变;在公猪HSP90基因exon3和exon9上各检测出一个SNP位点,分别为C129A和C176T,各有3种基因型,C129A处氨基酸序列并未发生改变,C176T处氨基酸序列发生错义突变,由谷氨酸突变为丙氨酸;在公猪CRISP3基因exon5上检测出一个SNP位点A159G,共有2种基因型,氨基酸序列发生错义突变,由苏氨酸突变为丙氨酸。各候选基因的SNP位点在检测公猪群体中分布较为均匀,各位点符合Hardy-Weinberg定律,处于Hardy-Weinberg遗传平衡,且均介于0.25<PIC<0.5,处于中度多态。3.检测冷冻精液在精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性及DNA完整性等冷冻精液品质指标。检测结果表示:在AQP7基因C187T位点上,CC基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且TT基因型和CC基因型在活力、顶体完整率、质膜完整率及线粒体完整率等方面均达到了极显着性差异（P<0.01）。该位点各基因型的DNA完整率无显着性差异（P>0.05）。在LPAR1基因T136C位点上,TC基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且TT基因型和TC基因型在活力、顶体完整率、质膜完整率及线粒体完整率等方面均达到了极显着性差异（P<0.01）。该位点各基因型的DNA完整率无显着性差异（P>0.05）。在HSP90基因C129A位点上,CC基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且AA基因型和CC基因型在活力、顶体完整率和质膜完整率等方面均达到了极显着性差异（P<0.01）,AA基因型与CA基因型和CC基因型在线粒体活率与DNA完整率两方面均达到了显着性差异（P<0.05）。在HSP90基因C176T位点上,CC基因型的精子活力、顶体完整率和质膜完整率均为最高,且TT基因型和CC基因型在活力、顶体完整率和质膜完整率等方面均达到了极显着性差异（P<0.01）,TT基因型与CT基因型和CC基因型在线粒体活率与DNA完整率两方面均达到了显着性差异（P<0.05）。在CRISP3基因A159G位点上,AA基因型的精子活力、顶体完整率、质膜完整率、线粒体完整率及DNA完整率均为最高,且AA基因型和AG基因型在活力、顶体完整率、质膜完整率及线粒体完整率等方面均达到了极显着性差异（P<0.01）,且DNA完整率达到了显着性差异（P<0.05）。
汪棋,汪长建,魏宗友,陆汉希,姚晓磊,杨花,王锋,张艳丽[8]（2020）在《AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究》文中认为旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin,Met）和阿卡地新（acadesine,AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度(0、100、200、300、400、500μmol·L-1)的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度(400μmol·L-1 Met、200μmol·L-1 AICAR);然后分别使用不同的冷冻稀释液(对照组:稀释液;Met组:含400μmol·L-1 Met的稀释液;AICAR组:含200μmol·L-1 AICAR的稀释液)冷冻精液,解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明,稀释液中添加400μmol·L-1 Met和200μmol·L-1AICAR均可显着提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05）,其中400μmol·L-1 Met组精子总活力达43.20%,顶体完整率为91%,质膜完整率为46%。与对照组相比,Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显着升高（P<0.05）;顶体酶活性显着提高（P<0.05）;丙酮酸水平显着下降（P<0.05）,乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显着升高（P<0.05）;与对照组相比,Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05）,提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。
石武[9]（2020）在《壳聚糖、庆大霉素和维生素C对猪精液常温保存效果的研究》文中研究指明随着猪人工授精技术在生猪养殖业中的广泛应用,精液保存技术迅速发展。由于猪精子结构的特殊性,目前猪精液常温保存是人工授精最常用的保存方法。众所周知,细菌污染和氧化应激是精液常温保存所面临的两大重要障碍。目前的研究表明,在稀释液中加入适当的抗氧化剂可以有效防止精子的氧化损伤,从而提高常温保存的精液品质。然而随着抗生素的禁用,新的抗生素代替策略逐渐成为了研究热点。壳聚糖具有改善动物生长性能、增强机体免疫力、调节脂肪代谢、抗菌抑菌和抗氧化等多种生物学功能,被认为是具有广泛开发前景的绿色添加剂,但壳聚糖在精液保存方面的研究较少。因此,为了提高猪精液常温保存的效果,本研究结合前期研究基础,在猪精液常温保存稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖,检测保存1～6 d的精子活力、质膜完整性、顶体完整性等,与0.25 g/L庆大霉素和0.068 g/L维生素C进行比较,并进行16S r DNA测序分析,研究壳聚糖的抗氧化性能与抗菌性能,以期对壳聚糖作为猪精液常温保存抗氧化剂的应用提供理论依据。本研究获得的主要结果如下:1.在猪精液常温保存稀释液中分别加入0.1 g/L壳聚糖、0.25 g/L庆大霉素、0.068g/L维生素C,常温保存6 d后,三组精液的保存质量显着高于对照组（P<0.05）,其中稀释液中添加庆大霉素组的保存质量显着高于其他组（P<0.05）,壳聚糖组的保存质量显着高于维生素C组（P<0.05）。稀释液中添加壳聚糖保存6 d的精子活力、质膜完整率和顶体完整率分别为61.67%、68.67%、72.67%,仅次于庆大霉素组,但均显着高于对照组（P<0.05）。同时,对照组精子凋亡细胞占比最高,稀释液中添加0.1 g/L的壳聚糖组和0.068 g/L的维生素C组的精子凋亡细胞占比仅次于对照组,而添加0.25g/L庆大霉素组的精子凋亡细胞占比最低。因此,稀释液中添加0.1 g/L的壳聚糖可达到庆大霉素等传统添加剂的效果,精子有效保存时间可达到6 d。2.在猪精液常温保存稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖、0.25 g/L庆大霉素、0.068 g/L维生素C,对常温保存6 d后精子的相关抗氧化酶及凋亡情况进行检测发现,稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖和维生素C组精子的T-AOC活性、GSH活性、SOD活性和CAT活性显着高于庆大霉素组和对照组（P<0.05）,而MDA含量和ROS水平显着低于庆大霉素组和对照组（P<0.05）。虽然稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖组和维生素C组之间差异不显着（P>0.05）,但0.1 g/L壳聚糖组的精子T-AOC活性、GSH活性、SOD活性和CAT活性高于维生素C组,MDA含量和ROS水平低于维生素C组,稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖组的保存效果显着优于对照组和庆大霉素组（P<0.05）。因此,在稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖组的保存效果最佳,显着提升了精子的抗氧化性能。3.本研究分别从门、目、属三个水平上的微生物组成的变化来分析精液中微生物的种类及分布情况,发现精液中在门水平上占据主导地位的细菌主要包括变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）;在纲水平上占据主导地位的细菌主要包括γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）、梭菌纲（Clostridia）和α-变形菌纲（Gammaproteobacteria）;在目水平上的优势菌种为肠杆菌目（Enterobacteriales）、假单胞菌目（Pseudomonadales）和梭菌目（Clostridiales）,其中最为优势的是肠杆菌目,占总变形菌门的60%～80%。本研究结果表明稀释液中添加壳聚糖组和庆大霉素组精液中变形菌门（Proteobacteria）、肠杆菌目（Enterobacteriales）、假单胞菌目（Pseudomonadales）和沙雷氏菌属（Serratia）等的丰度显着低于其他组（P<0.05）。精液保存5 d后,16S r DNA测序结果表示稀释液中添加0.25 g/L庆大霉素和0.1 g/L壳聚糖相对于对照组来说变形菌门的含量显着下降（P<0.05）,其中肠杆菌目和假单胞杆菌目的含量也相应下降,但有部分菌属的含量也有所上升,表明壳聚糖有类似庆大霉素的抗菌作用,且只对部分菌属有抑制作用。因此,本研究结果表明在猪精液常温保存稀释液中添加0.1 g/L壳聚糖能够显着提高精子常温保存后的精子活力、质膜完整率和顶体完整率、T-AOC、SOD、GSH和CAT活性,并显着降低MDA含量和ROS水平,且抗菌效果达到庆大霉素等传统抗生素的效果,表明在一定程度上可替代抗生素的使用,壳聚糖既具有抗氧化性能,又具有一定的抑菌性能,对于猪精液常温保存的研究具有重要意义。
李作臣[10]（2020）在《延边黄牛精子蛋白组学鉴定及蛋白通路分析》文中研究说明精子获能是受精前的一个过程,对于产生高质量的活胚胎至关重要。虽然在理解精子获能过程中的信号通路方面已经取得了很大的进展,但构成这些过程的分子基础仍有待阐明。受精前的许多过程,例如精子获能,是蛋白质依赖性的,通过这种方式,蛋白质的翻译后修饰在获能机制中起着关键作用。同时已经表明,在获能期间,精子可以取代降解的蛋白质或合成新的蛋白质,这对于获能和受精过程都是必不可少的。蛋白质组学已应用于哺乳动物精子获能的研究,其分子机制已从人类和公牛等物种中得到阐明。质谱分析是蛋白质组学中应用的一项综合技术,它可以用来阐明细胞中的蛋白质水平及其组成。因此,本研究通过采取延边黄牛种公牛精液进行体外获能和非获能比较,利用蛋白组学分析两组蛋白的表达差异。本试验从20头中选择3头3-5岁、健康无疾病的延边黄牛,取其精液,编号分别为A、B、C,设置获能和非获能两个处理组。试验主要分为两个部分进行:第一部分主要对延边黄牛获能精子生理生化特征变化进行研究,具体为通过微生物动（静）态图像检测系统（CASA）,检测牛精子的生物学特性;采用考马斯亮蓝染色法和低渗肿胀法检测精子质膜和顶体膜的完整性;提取两个处理组样品的精子蛋白,进行SDS PAGE和Western Blot用于磷酸化分析:通过JC-1染色,检测精子获能前后线粒体膜电位的变化;通过流式细胞仪（BDaccuri C6）,检测精子细胞凋亡和质膜膜脂质紊乱情况;以及观察获能精子与牛卵母细胞的体外受精及发育。第二部分主要是对获能和非获能精子的蛋白质组进行鉴定和蛋白通路的分析。具体为提取获能和非获能处理组的精子蛋白,进行SDS PAGE和Western Blot用于质谱分析,本试验选用的是液相色谱-质谱分析（LC-MS）;通过GO富集、KEGG Pathway富集、蛋白间相互作用（PPI）进行生物信息的分析。试验结果如下:1.经微生物动（静）态图像检测系统（CASA）检测,延边黄牛获能精子的活率、质膜和顶体膜完整性以及线粒体膜电位水平均低于非获能处理组;2.经微生物动（静）态图像检测系统（CASA）和Western Blot检测,延边黄牛获能精子的曲线速度、蛋白酪氨酸磷酸化水平高于非获能精子;3.经流式细胞仪（BDaccuri C6）检测,延边黄牛获能精子的凋亡及膜脂质紊乱程度大于非获能精子;4.延边黄牛精子获能后与卵母细胞进行体外培养,卵裂率可达到46%以上;5.与未获能精子相比,获能精子中89个蛋白表达上调,509个蛋白表达下调;6.经Western Blot分析,获能精子组（H）PSMD1和HSPA5的表达水平明显低于未获能精子组（F）。本试验利用蛋白组学分析了延边黄牛体外获能和非获能精子的蛋白表达差异,发现在精子获能过程中有89种蛋白表达量上调,509种蛋白表达量下调,用Western Blot检测PSMD1蛋白和HSPA5蛋白的表达水平,观察到获能后,PSMD1和HSPA5的表达量均下调。我们发现的精子获能过程中这些关键蛋白的变化,有助于筛选影响精子获能的关键蛋白,增强了我们对延边黄牛精子获能的一些分子过程的理解,对深入了解精子发生调控机制有参考价值,并为进一步研究这一过程提供了框架。
二、羊精子细胞质膜及顶体外膜Ca~(2+)-ATPase的活力分布（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、羊精子细胞质膜及顶体外膜Ca~(2+)-ATPase的活力分布（论文提纲范文）
（1）水牛精浆外泌体蛋白质组的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 精子发生与成熟 |
| 1.1.1 精子结构 |
| 1.1.2 精子的发生 |
| 1.1.3 精子的成熟 |
| 1.2 外泌体的研究背景 |
| 1.2.1 外泌体的发现、定义和组成 |
| 1.2.2 外泌体的生物发生 |
| 1.2.3 外泌体的功能 |
| 1.2.4 外泌体的分离与鉴定 |
| 1.3 外泌体与精子活力 |
| 1.3.1 精浆外泌体 |
| 1.3.2 精浆外泌体在精子成熟过程中的作用 |
| 1.4 蛋白质组学概况 |
| 1.4.1 蛋白质组学研究概况 |
| 1.4.2 蛋白质组学在精浆外泌体中的应用 |
| 1.5 本研究的目的、意义及技术路线 |
| 第二章 水牛精浆外泌体的分离鉴定与蛋白质表达谱的构建 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 精液的处理 |
| 2.1.3 精子和精浆总蛋白的提取 |
| 2.1.4 基于超高速差速离心结合蔗糖垫纯化方法对精浆外泌体的分离和提取 |
| 2.1.5 精浆外泌体蛋白的提取 |
| 2.1.6 BCA法测定蛋白质浓度 |
| 2.1.7 蛋白免疫印迹法检测精浆外泌体的蛋白标志物 |
| 2.1.8 透射电子显微镜(TEM)观察精浆外泌体形态 |
| 2.1.9 纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)分析外泌体颗粒尺寸 |
| 2.1.10 蛋白质的还原烷基化和酶切 |
| 2.1.11 反相高效液相色谱(RP-HPLC)预分离 |
| 2.1.12 肽段脱盐 |
| 2.1.13 LC-MS/MS分析 |
| 2.1.14 数据检索与生物信息学分析 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 基于超高速差速离心结合蔗糖垫提取水牛精浆外泌体的鉴定 |
| 2.2.2 水牛精子活力的检测 |
| 2.2.3 精子、精浆和精浆外泌体蛋白质的质谱鉴定结果及Venn分析 |
| 2.2.4 蛋白质的理化性质统计 |
| 2.2.5 高丰度蛋白质分析 |
| 2.2.6 精子、精浆和精浆外泌体的基因本体论(GO)分析 |
| 2.2.7 精浆外泌体中生殖相关蛋白质的挖掘 |
| 2.2.8 精子、精浆和精浆外泌体的信号通路分析 |
| 2.2.9 精浆外泌体蛋白质互作网络(PPI) |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 水牛高低活力精浆外泌体的差异蛋白质组学分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 精液的采集及处理 |
| 3.1.3 水牛精浆外泌体的分离和提取 |
| 3.1.4 水牛精浆外泌体蛋白质的提取与浓度测定 |
| 3.1.5 水牛精浆外泌体的鉴定 |
| 3.1.6 蛋白质的还原烷基化和酶切 |
| 3.1.7 iTRAQ标记 |
| 3.1.8 反相高效液相色谱(RP-HPLC)预分离 |
| 3.1.9 肽段脱盐 |
| 3.1.10 LC-MS/MS分析 |
| 3.1.11 数据检索与生物信息学分析 |
| 3.2 实验结果与分析 |
| 3.2.1 高低活力水牛精液的检测 |
| 3.2.2 质谱鉴定结果及质量控制 |
| 3.2.3 差异表达蛋白质(DEPs)分析 |
| 3.2.4 基因本体论分析 |
| 3.2.5 KEGG通路分析 |
| 3.2.6 差异表达蛋白质的互作网络(PPI)分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 全文结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（2）水牛附睾头、体和尾部精子差异蛋白质组学的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 精子研究进展 |
| 1.1.1 精子结构 |
| 1.1.2 精子运动 |
| 1.1.3 精子能量代谢 |
| 1.1.4 精子质量检测技术与方法 |
| 1.2 附睾功能研究进展 |
| 1.2.1 附睾结构 |
| 1.2.2 附睾内生理环境 |
| 1.2.3 附睾功能 |
| 1.3 附睾精子的蛋白质组学研究 |
| 1.3.1 蛋白质组学的研究 |
| 1.3.2 附睾精子成熟的研究进展 |
| 1.3.3 蛋白质组学在附睾精子成熟研究中的应用 |
| 1.4 本研究的目的、意义与技术路线 |
| 第二章 水牛附睾不同部位精子超微结构及荧光标记差异分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 水牛附睾 |
| 2.1.2 主要仪-器设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 附睾HE染色 |
| 2.2.2 附睾精子分离 |
| 2.2.3 精子运动能力评估 |
| 2.2.4 透射电镜观察 |
| 2.2.5 流式分析 |
| 2.2.6 精子顶体染色 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 附睾HE染色 |
| 2.3.2 精子纯化和成熟活力分析 |
| 2.3.3 精子超微结构差异分析 |
| 2.3.4 精子表型差异检测 |
| 2.3.5 精子顶体染色分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 水牛附睾头、体和尾部精子的定量蛋白质组学分析 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 水牛附睾 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要生物信息学分析软件和数据库 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 附睾头、体和尾三部位精子蛋白质的提取 |
| 3.2.2 附睾头、体和尾三部位精子蛋白质浓度的测定(BCA法) |
| 3.2.3 凝胶电泳 |
| 3.2.4 蛋白质的还原烷基化、酶解和TMT标记 |
| 3.2.5 反相高效液相色谱(RP-HPLC)预分离 |
| 3.2.6 肽段浓缩与纯化 |
| 3.2.7 LC-MS/MS分析 |
| 3.2.8 数据检索与生物信息学分析 |
| 3.2.9 Western Blot验证 |
| 3.2.10 免疫荧光验证 |
| 3.3 试验结果与分析 |
| 3.3.1 蛋白完整性及酶切效果鉴定 |
| 3.3.2 质谱鉴定结果 |
| 3.3.3 蛋白质的理化性质和肽段分布统计 |
| 3.3.4 基因本体论分析 |
| 3.3.5 KEGG通路分析 |
| 3.3.6 蛋白质互作网络(PPI)分析 |
| 3.3.7 质谱数据验证分析 |
| 3.3.8 免疫荧光验证蛋白在精子的定位 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（5）牛精子冷冻损伤及其改善方法（论文提纲范文）
| 1 冷冻后精子的损伤 |
| 1.1 冷冻-解冻对精子活力的影响 |
| 1.2 冷冻-解冻对精子形态变化的影响 |
| 1.3 冷冻-解冻对精子功能的影响 |
| 1.3.1 精子获能变化 |
| 1.3.2 精子膜流动性变化 |
| 1.3.3 生物大分子的变化 |
| 2 冷冻对精子产生损伤的机理 |
| 2.1 细胞内冰晶形成 |
| 2.2 氧化应激增强 |
| 3 提高冷冻精子质量的方法 |
| 3.1 添加冷冻保护剂 |
| 3.1.1 渗透性冷冻保护剂 |
| 3.1.2 非渗透性冷冻保护剂 |
| 3.2 优化冷冻方法 |
| 3.2.1 常规冷冻方法 |
| 3.2.2 探索性冷冻方法 |
| 3.3 添加抗氧化剂 |
| 4 小 结 |
（6）绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 缩略词中英文对照表 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 精液的组成 |
| 1.2 精子的生物学特性 |
| 1.2.1 精子的结构 |
| 1.2.2 精子的功能 |
| 1.3 精液冷冻保存的机理 |
| 1.3.1 精液冷冻保存的理论基础 |
| 1.3.2 精液冷冻保存对精子的损伤原理 |
| 1.3.3 精液冷冻保存对精子的损伤途径 |
| 1.4 猪精液冷冻保存研究进展 |
| 1.4.1 猪精液冷冻保存简史 |
| 1.4.2 猪精液冷冻类型 |
| 1.4.3 猪精液冷冻稀释液 |
| 1.4.4 精液冷冻保护剂 |
| 1.5 精液质量评定 |
| 1.5.1 精子活力 |
| 1.5.2 精子活率 |
| 1.5.3 精子质膜完整性 |
| 1.5.4 精子顶体完整性 |
| 1.5.5 精子DNA完整性 |
| 1.5.6 精子线粒体活性 |
| 1.5.7 精子抗氧化性 |
| 1.6 绿原酸的研究进展 |
| 1.6.1 绿原酸简介 |
| 1.6.2 绿原酸的主要作用 |
| 1.7 木犀草素研究进展 |
| 1.7.1 木犀草素简介 |
| 1.7.2 木犀草素的主要作用 |
| 1.8 黄精多糖研究进展 |
| 1.8.1 黄精多糖简介 |
| 1.8.2 黄精多糖的主要作用 |
| 第二章 绿原酸对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要试剂及耗材 |
| 2.2.2 主要仪器及设备 |
| 2.2.3 试验溶液的配制 |
| 2.2.4 精液样品的采集与筛选 |
| 2.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 2.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 2.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 2.2.8 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子活力和活率的影响 |
| 2.3.2 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子质膜完整性的影响 |
| 2.3.3 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 2.3.4 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 2.3.5 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 2.3.6 绿原酸对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 木犀草素对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要试剂及耗材 |
| 3.2.2 主要仪器及设备 |
| 3.2.3 溶液配制 |
| 3.2.4 精液样品采集 |
| 3.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 3.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 3.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 木犀草素对冷冻保存猪精子活力和活率的影响 |
| 3.3.2 木犀草素对冷冻保存猪精子质膜完整性的影响 |
| 3.3.3 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 3.3.4 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 3.3.5 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 3.3.6 木犀草素对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂及耗材 |
| 4.2.2 主要仪器及设备 |
| 4.2.3 溶液配制 |
| 4.2.4 精液样品采集 |
| 4.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 4.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 4.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 4.2.8 统计分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 黄精多糖对冷冻保存猪精子活力和活率的影响 |
| 4.3.2 黄精多糖对冷冻保存猪精子质膜完整性的影响 |
| 4.3.3 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 4.3.4 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 4.3.5 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 4.3.6 黄精多糖对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 不同配伍对猪精液冷冻保存效果的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 主要试剂及耗材 |
| 5.2.2 主要仪器及设备 |
| 5.2.3 溶液配制 |
| 5.2.4 精液样品采集 |
| 5.2.5 精液的平衡与稀释 |
| 5.2.6 精液的冷冻和解冻 |
| 5.2.7 解冻后精子质量评定 |
| 5.2.8 试验设计 |
| 5.2.9 统计分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 不同配伍对冷冻保存猪精子活力和活率的影响 |
| 5.3.2 不同配伍对冷冻保存猪精子质膜完整性的影响 |
| 5.3.3 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子顶体完整性的影响 |
| 5.3.4 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子DNA完整性的影响 |
| 5.3.5 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子线粒体活性的影响 |
| 5.3.6 不同配伍对猪精液冷冻保存后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 不同处理对猪精液人工授精的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 主要试剂及耗材 |
| 6.2.2 主要仪器及设备 |
| 6.2.3 溶液配制 |
| 6.2.4 精液样品采集 |
| 6.2.5 精子冷冻保存 |
| 6.2.6 精液人工授精 |
| 6.2.7 不返情率 |
| 6.2.8 受胎率 |
| 6.2.9 分娩率及窝产仔数 |
| 6.2.10 统计分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 不同处理对猪人工授精不返情率的影响 |
| 6.3.2 不同处理对猪人工授精受胎率的影响 |
| 6.3.3 不同配伍对猪人工授精分娩率的影响 |
| 6.3.4 不同配伍对猪人工授精窝产仔数的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果 |
| 导师简介 |
（7）优化猪冷冻精液配方及猪冻精品质相关基因的多态性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 冷冻保存机理 |
| 1.2 猪精子的冷冻损伤 |
| 1.3 精子品质检测 |
| 1.4 冷冻基础液添加剂 |
| 1.5 SNP 标记 |
| 1.6 候选基因概述 |
| 第二章 绿原酸、咖啡酸苯乙酯及聚乙烯吡咯烷酮联合添加对猪冷冻精液的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 候选基因多态性对猪冷冻精液品质的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要溶液配制 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 精液处理 |
| 1.2.2 精液品质相关指标的检测 |
| 1.2.2.1 精子活力及运动性能: |
| 1.2.2.2 顶体完整率: |
| 1.2.2.3 质膜完整率: |
| 1.2.2.4 其他指标测定: |
| 1.2.3 精子免疫荧光检测 |
| 1.2.4 精子蛋白免疫印迹检测 |
| 1.2.5 数据分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子活力及运动性能的影响 |
| 2.2 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子结构完整性的影响 |
| 2.3 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子中AMPK蛋白表达的影响 |
| 2.4 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子顶体酶活性的影响 |
| 2.5 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子代谢指标的影响 |
| 2.6 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子线粒体功能的影响 |
| 2.7 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 3 讨 论 |
| 3.1 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子活力及运动性能的影响 |
| 3.2 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子结构完整性及顶体酶活性的影响 |
| 3.3 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子中AMPK蛋白表达的影响 |
| 3.4 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子能量代谢的影响 |
| 3.5 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子线粒体膜电位和ATP酶活性的影响 |
| 3.6 AMPK激活剂对冷冻解冻后精子抗氧化酶活性的影响 |
| 4 结 论 |
（9）壳聚糖、庆大霉素和维生素C对猪精液常温保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 猪人工授精技术研究概况 |
| 1.2 猪精液常温保存技术研究概况 |
| 1.3 影响猪精液常温保存的环境因素 |
| 1.3.1 温度 |
| 1.3.2 pH |
| 1.3.3 渗透压 |
| 1.3.4 稀释倍数 |
| 1.3.5 微生物 |
| 1.4 猪精液常温保存稀释液成分 |
| 1.4.1 营养物质 |
| 1.4.2 缓冲物质 |
| 1.4.3 抗生素 |
| 1.4.4 抗氧化物质 |
| 1.4.5 壳聚糖的抗氧化及抑菌性能研究进展 |
| 1.5 猪精液品质评估常规指标 |
| 1.5.1 精子活力 |
| 1.5.2 精子密度 |
| 1.5.3 顶体完整性 |
| 1.5.4 质膜完整性 |
| 1.5.5 抗氧化能力 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 1.6.1 本研究的目的 |
| 1.6.2 本研究的意义 |
| 试验研究 |
| 第二章 壳聚糖、维生素C及庆大霉素对猪精液常温保存效果的比较分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 稀释液配制 |
| 2.1.4 试验动物与精液采集 |
| 2.1.5 精液处理与保存 |
| 2.1.6 精液质量检测 |
| 2.1.7 数据处理 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子活力的影响 |
| 2.2.2 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子质膜完整率的影响 |
| 2.2.3 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子顶体完整率的影响 |
| 2.2.4 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精子凋亡的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对猪精液常温保存抗氧化能力的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 稀释液配制 |
| 3.1.4 试验动物与精液采集 |
| 3.1.5 精液处理与保存 |
| 3.1.6 测定指标 |
| 3.1.7 数据处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对常温保存猪精液中T-AOC活性的影响 |
| 3.2.2 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对常温保存猪精液中MDA含量的影响 |
| 3.2.3 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对常温保存猪精液中GSH、CAT和 SOD活性的影响 |
| 3.2.4 壳聚糖、庆大霉素及维生素C对对常温保存猪精液中ROS水平的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 壳聚糖、维生素C及庆大霉素对猪精液常温保存抗菌能力的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 稀释液配制 |
| 4.1.3 试验动物与精液采集 |
| 4.1.4 精液处理与保存 |
| 4.1.5 精液样品16SrDNA测序 |
| 4.1.6 数据处理 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 常温保存猪精液中微生物测序结果及OTU聚类 |
| 4.2.2 常温保存猪精液中微生物多样性分析 |
| 4.2.3 常温保存猪精液中微生物群落结构分析 |
| 4.2.4 处理组间微生物差异物种分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）延边黄牛精子蛋白组学鉴定及蛋白通路分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 综述部分 |
| 1.1 精子获能 |
| 1.1.1 精子成熟 |
| 1.1.2 精子获能 |
| 1.1.3 精子获能的能量要求 |
| 1.1.4 碳酸氢盐和sAC/cAMP/PKA激活 |
| 1.1.5 碳酸氢盐和膜脂结构 |
| 1.1.6 精子蛋白的酪氨酸磷酸化 |
| 1.1.7 钙在获能过程中的作用 |
| 1.2 精子获能和受精过程中的精子蛋白酶体 |
| 1.2.1 精子蛋白酶体的亚细胞定位 |
| 1.2.2 精子获能和顶体胞吐过程中对蛋白酶体活性的要求 |
| 1.2.3 PSMD1 |
| 1.3 活性氧参与精子获能 |
| 1.3.1 活性氧的性质 |
| 1.3.2 线粒体活性氧生成 |
| 1.3.3 线粒体活性氧与精子凋亡 |
| 1.3.4 氧化应激对精子的影响 |
| 1.3.5 精子活性氧的生理来源 |
| 1.4 热休克蛋白(HSPs) |
| 1.4.1 细胞表面GRP78 |
| 1.4.2 GRP78在增殖内皮细胞的表面上 |
| 1.4.3 GRP78从ER转移到细胞表面的潜在机制 |
| 1.4.4 GRP78在细胞质中 |
| 1.4.5 线粒体的GRP78 |
| 1.5 蛋白组学 |
| 第二章 延边黄牛获能精子生理生化特征变化的研究 |
| 1 前言 |
| 2 试验材料与方法 |
| 2.1 试验样本 |
| 2.2 试验所用仪器及药品 |
| 2.3 药品的配制 |
| 2.4 试验步骤 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 获能和非获能状态下延边黄牛精子生物学参数的变化 |
| 3.2 获能和非获能状态下延边黄牛精子动力学参数的分析 |
| 3.3 获能和非获能状态下延边黄牛精子蛋白酪氨酸磷酸化水平的检测 |
| 3.4 获能和非获能状态下延边黄牛精子线粒体膜电位的变化 |
| 3.5 获能处理对延边黄牛精子细胞凋亡的影响 |
| 3.6 获能处理对延边黄牛精子膜脂质紊乱的影响 |
| 3.7 获能处理对体外受精及发育的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 获能和非获能牛精子蛋白质组鉴定 |
| 1 前言 |
| 2 试验材料与方法 |
| 2.1 试验样本 |
| 2.2 试验所用仪器及药品 |
| 2.3 药品的配制 |
| 2.4 试验步骤 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 实验酶切效率及搜库结果 |
| 3.2 蛋白定性分析 |
| 3.3 蛋白定量分析 |
| 3.4 组间比较差异蛋白 |
| 3.5 蛋白质组概要分析 |
| 3.6 GO富集分析 |
| 3.7 KEGG Pathway富集分析 |
| 3.8 蛋白-蛋白相互作用(PPI)分析 |
| 3.9 蛋白质印迹分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录一 中英文对照表 |
| 附录二 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、羊精子细胞质膜及顶体外膜Ca~(2+)-ATPase的活力分布（论文参考文献）
- [1]水牛精浆外泌体蛋白质组的初步研究[D]. 肖凯. 广西大学, 2021(12)
- [2]水牛附睾头、体和尾部精子差异蛋白质组学的初步研究[D]. 何翁潭. 广西大学, 2021(12)
- [3]表儿茶素对猪精液冷冻保存效果的影响[D]. 贺巾津. 西北农林科技大学, 2021
- [4]添加R848处理小鼠精子对胚胎性别比率的影响[D]. 周正娜. 新疆农业大学, 2021
- [5]牛精子冷冻损伤及其改善方法[J]. 王娜,张洁,海超,李欣,李光鹏,赵跃芳. 中国畜牧兽医, 2021(06)
- [6]绿原酸、木犀草素和黄精多糖对猪精液冷冻保存效果的研究[D]. 何涛. 甘肃农业大学, 2021(01)
- [7]优化猪冷冻精液配方及猪冻精品质相关基因的多态性研究[D]. 王珺. 延边大学, 2021
- [8]AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究[J]. 汪棋,汪长建,魏宗友,陆汉希,姚晓磊,杨花,王锋,张艳丽. 畜牧兽医学报, 2020(12)
- [9]壳聚糖、庆大霉素和维生素C对猪精液常温保存效果的研究[D]. 石武. 西北农林科技大学, 2020
- [10]延边黄牛精子蛋白组学鉴定及蛋白通路分析[D]. 李作臣. 延边大学, 2020(05)