米骨煎双能X线扫描观察防治去势大鼠骨质流失

米骨煎双能X线扫描观察防治去势大鼠骨质流失

一、密骨煎防治去卵巢大鼠骨丢失的双能X线扫描观察(论文文献综述)

徐慧慧[1](2021)在《基于成骨和破骨细胞PI3K/Akt信号通路的右归丸对雌雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用性别差异的机制研究》文中提出实验目的本研究从成骨细胞(osteoblast,OB)和破骨细胞(osteoblast,OC)PI3K/Akt信号调控通路的角度,采用体内实验与体外实验相结合的方法,揭示具有温补肾阳作用的右归丸对雌、雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用的性别差异及作用机制,以进一步阐明“肾主骨”的科学内涵,为中医药治疗骨质疏松症提供实验依据。实验方法与结果为了阐明上述问题,本研究通过以下4个实验进行探讨。实验一 右归丸对雌、雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用差异及对PI3K/Akt信号通路的影响实验方法选用3月龄SPF级Sprague-Dawley(SD)大鼠,雌雄各78只,适应性饲养后,将雌性大鼠按体重随机分为基础组12只、空白对照组12只、假手术组12只和造模组42只;雄性大鼠分组方法同雌性大鼠。分组结束后,先将雌、雄基础组大鼠经麻醉后处死,取第4腰椎和右侧胫骨检测骨组织形态指标数据,作为基础值。然后对雌、雄造模组分别进行去势手术(卵巢切除和睾丸切除),制备“肾虚”OP大鼠模型。去势手术13周后,将造模组大鼠分别按体重再随机分为卵巢切除(OVX)组(13只)、雌激素组(12只)、雌性右归丸组(12只);睾丸切除(ORX)组(13只)、雄激素组(13只)、雄性右归丸组(12只)。对各给药组大鼠分别进行灌胃给药,各组每日给药1次,每7d休息1d,连续给药13周。给药结束后,各组大鼠经麻醉处死后,取第4腰椎和双侧胫骨,分别用于Micro-CT骨组织形态指标的检测,及制作脱钙骨冰冻切片,采用免疫荧光方法分别检测各组大鼠胫骨骨髓中成骨细胞和破骨细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达;采用免疫组化方法检测大鼠胫骨骨髓中BGP、RANKL、OPG、p-GSK-3β、β-catenin、Runx2,TRAP,TRAF-6,c-Src,NFATc1 蛋白的表达。实验结果1右归丸对雌、雄去势大鼠腰椎BMD变化率的影响雌性和雄性空白对照组、假手术组BMD变化率均为正值,表示骨量增加,而模型组(OVX组、ORX组)大鼠BMD变化率为负值,表示骨丢失。模型组(OVX组、ORX组)大鼠腰椎骨丢失较同性别假手术组显着升高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠腰椎骨丢失率比较:OVX组骨丢失明显多于ORX组(P<0.05)。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组BMD变化率均呈现负增长(P<0.01,P<0.05),表明这些组仍处在骨丢失的状态;但与同性别模型组相比,其骨丢失的程度明显降低(P<0.01,P<0.05)。雌、雄大鼠给药后腰椎骨丢失率比较:雄性右归丸组骨丢失程度明显多于雌性右归丸组(P<0.05)。2右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨微观结构的影响2.1右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨BV/TV变化率的影响雌性和雄性空白对照组、假手术组大鼠胫骨BV/TV变化率均明显增加,OVX组和ORX组的BV/TV变化率呈现明显负增长(P<0.01)。雌激素、雌性右归丸组以及雄激素、雄性右归丸组的BV/TV变化率均呈现负增长,与同性别假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05),但其减少程度要明显低于同性别模型组大鼠(OVX组/ORX组)(P<0.01,P<0.05)。雌、雄去势大鼠及雌、雄去势大鼠给药后BV/TV变化率均具有显着差异,其中OVX组BV/TV变化率的减少程度明显大于ORX组(P<0.05);雌性右归丸组的减少程度明显小于雄性右归丸组(P<0.05)。2.2右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨Tb.N变化率的影响雌性和雄性空白对照组、假手术组大鼠胫骨松质骨Tb.N变化率均明显增加,而OVX组和ORX组Tb.N变化率大幅度减少,呈现负增长,与同性别假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。雌激素、雌性右归丸组以及雄激素、雄性右归丸组的Tb.N变化率均呈现负增长,与同性别假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05),但其减少程度要明显低于同性别模型组(P<0.01,P<0.05)。OVX组Tb.N变化率的减少程度明显大于ORX组(P<0.05),雌性右归丸组其减少程度明显小于雄性(P<0.05)。2.3右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨Tb.Sp变化率的影响雌性和雄性空白对照组、假手术组大鼠胫骨松质骨Tb.Sp的变化率呈现负增长,即骨小梁分离度变小,而OVX组和ORX组Tb.Sp变化率则呈正值,即骨小梁分离度变大,较同性别假手术组明显增加(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间比较:OVX组Tb.Sp变化率的增加程度明显大于ORX组(P<0.05),雌激素、雌性右归丸组以及雄激素、雄性右归丸组的Tb.Sp变化率均明显增加,与同性别假手术组比较,差异具有统计学意义,但其增加程度要明显低于同性别模型组(P<0.01)。雌、雄大鼠给药后比较:雌性右归丸组Tb.Sp变化率的增加程度则明显小于雄性右归丸组(P<0.05)。2.4右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨SMI的影响模型组(OVX组和ORX组)SMI较同性别假手术组明显增加(P<0.01)。雌激素、雌性右归丸组以及雄激素、雄性右归丸组SMI较同性别模型组明显下降(P<0.01,P<0.05),但仍明显高于同性别假手术组(P<0.01,P<0.05)。雌、雄之间模型组及给药组比较:OVX组SMI明显大于ORX组(P<0.05);雌性右归丸组SMI明显小于雄性右归丸组(P<0.05)。3右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中OPG、RANKL蛋白表达及RANKL/OPG比值的影响3.1右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中OPG蛋白表达的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中成骨细胞OPG蛋白表达较同性别假手术组大鼠显着降低(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠OPG蛋白表达显着低于ORX组(P<0.01)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、雌性右归丸组大鼠胫骨骨髓中成骨细胞OPG蛋白表达较同性别模型组(OVX组/ORX组)显着升高(P<0.01,P<0.05),但雄性右归丸组较ORX组则无明显差异。不同性别右归丸组之间相比,雌性右归丸组OPG蛋白表达显着高于雄性右归丸组(P<0.01)。3.2右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中RANKL蛋白表达的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中成骨细胞RANKL蛋白表达较同性别假手术组大鼠显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠RANKL蛋白表达显着高于ORX组(P<0.01)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、右归丸组大鼠胫骨骨髓中成骨细胞RANKL蛋白表达较同性别模型组(OVX组/ORX组)显着降低(P<0.01,P<0.05),但雄性右归丸组仍高于雄性假手术组(P<0.05)。不同性别右归丸组之间相比,雄性右归丸组RANKL蛋白表达显着高于雌性右归丸组(P<0.05)。3.3右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中RANKL/OPG比值的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中RANKL/OPG比值较同性别假手术组大鼠显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠RANKL/OPG 比值显着高于ORX组(P<0.01)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、右归丸组大鼠胫骨骨髓中成骨细胞RANKL/OPG比值较同性别模型组(OVX组/ORX组)显着降低(P<0.01,P<0.05),但雄性右归丸组仍高于雄性假手术组(P<0.05)。不同性别右归丸组之间相比,雄性右归丸组RANKL/OPG 比值显着高于雌性右归丸组(P<0.01)。4归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中成骨细胞BGP蛋白表达的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中成骨细胞BGP蛋白表达较同性别假手术组大鼠显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠BGP蛋白表达显着高于ORX组(P<0.05)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、右归丸组大鼠胫骨骨髓中成骨细胞BGP蛋白表达较同性别模型组显着降低(P<0.01,P<0.05),但右归丸组及雄激素组仍高于同性别假手术组(P<0.01)。不同性别右归丸组之间相比,雌性右归丸组BGP蛋白表达显着低于雄性右归丸组(P<0.01)。5右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中成骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响5.1右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中成骨细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达的影响模型组(OVX组/ORX组)大鼠胫骨骨髓成骨细胞中p-PI3K和p-Akt表达荧光面积较同性别假手术组大鼠显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比:OVX组大鼠p-PI3K和p-Akt表达显着高于ORX组(P<0.05)。阳性药组(雌激素组和雄激素组)、雌/雄右归丸组大鼠胫骨骨髓中成骨细胞中p-PI3K和p-Akt表达荧光面积较同性别模型组(OVX组/ORX组)显着降低(P<0.01,P<0.05)。雌、雄右归丸组之间相比:雌性右归丸组p-PI3K和p-Akt表达显着低于雄性右归丸组(P<0.05)。5.2右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中成骨细胞p-GSK-3β、β-catenin、RUNX2蛋白表达的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中p-GSK-3β、β-catenin、RUNX2蛋白表达较同性别假手术组大鼠均显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠三者表达显着高于ORX组(P<0.01)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、右归丸组大鼠胫骨骨髓中胫骨骨髓中p-GSK-3β、β-catenin、RUNX2蛋白表达较同性别模型组显着降低(P<0.01,P<0.05)。三者表达在不同性别右归丸组之间比较,雌性右归丸组p-PI3K和p-Akt表达显着低于雄性右归丸组(P<0.01)。6右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中破骨细胞TRAP蛋白表达的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中TRAP蛋白表达较同性别假手术组大鼠显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,ORX组大鼠显着低于OVX 组(P<0.05)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、右归丸组大鼠胫骨骨髓中胫骨骨髓中TRAP蛋白表达较同性别模型组显着降低(P<0.01,P<0.05)。不同性别右归丸组之间比较,雌性右归丸组TRAP表达显着低于雄性右归丸组(P<0.05)。7右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中破骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响7.1右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中破骨细胞p-PI3K、p-Akt蛋白表达的影响模型组(OVX组/ORX组)大鼠胫骨骨髓破骨细胞中p-PI3K和p-Akt表达荧光面积较同性别假手术组大鼠显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠p-PI3K和p-Akt表达显着高于ORX组(P<0.01,P<0.05)。雌/雄阳性药组(雌激素组、雄激素组)、雌/雄右归丸组大鼠胫骨骨髓中破骨细胞p-PI3K和p-Akt表达荧光面积较同性别模型组(OVX组/ORX组)显着降低(P<0.01,P<0.05)。不同性别右归丸组之间相比,雌性右归丸组p-PI3K和p-Akt表达显着低于雄性右归丸组(P<0.01,P<0.05)。7.2右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中破骨细胞TRAF-6、c-Src、NFATc1蛋白表达的影响模型组大鼠(OVX组和ORX组)胫骨骨髓中TRAF-6、c-Src、NFATc1蛋白表达较同性别假手术组大鼠均显着增高(P<0.01)。雌、雄去势大鼠之间相比,OVX组大鼠三者表达显着高于ORX组(P<0.01)。阳性药组(雌激素和雄激素组)、右归丸组大鼠胫骨骨髓中胫骨骨髓中TRAF-6、c-Src、NFATc1蛋白表达较同性别模型组显着降低(P<0.01,P<0.05)。三者表达在不同性别右归丸组之间比较,雌性右归丸组p-PI3K和p-Akt表达显着低于雄性右归丸组(P<0.01)。实验二雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响实验方法(1)制作含药血清:选用3月龄SD大鼠80只,SPF级,雌雄各半,首先雌、雄大鼠适应性饲养后,按体重随机分为假手术组及造模组,造模组的造模及分组方法同实验一,分组结束后,按组别对各组大鼠灌胃给药,每日给药2次,连续7d,末次给药1h后,将各组大鼠麻醉后于无菌条件下经腹主动脉取血,分离血清,经灭活、过滤除菌、分装后,于-80℃冰箱冻存备用。(2)将小鼠颅顶前成骨细胞株MC3T3-E1以5×104个/孔接种于6孔板中,24h细胞贴壁后,加入10%各组大鼠血清培养。实验分组如下:雌性假手术血清组、雄性假手术血清组、OVX血清组、ORX血清组、雌激素血清组、雄激素血清组、雌性右归丸血清组、雄性右归丸血清组。作用48h后,收集细胞进行后续指标检测。采用免疫组化方法检测OB中BGP、RANKL、OPG的蛋白表达;采用 Real-time PCR 方法检测 OB 中 PI3K、Akt、GSK-3β、β-catenin、Runx2mRNA的表达;采用 Western-Blot 方法检测 OB 中 p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-GSK-3β、GSK-3β、β-catenin、RUNX2 蛋白的表达。实验结果1雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞BGP蛋白表达的影响OVX血清组、雌激素含药血清组和雌性右归丸含药血清组BGP蛋白表达水平与雌性假手术组血清组相比,明显上升(P<0.01);ORX血清组、雄激素含药血清组和雄性右归丸含药血清组BGP蛋白表达水平与雄性假手术血清组相比,明显上升(P<0.01)。雌雄之间比较,OVX血清组BGP蛋白表达明显高于ORX血清组(P<0.05),雌性右归丸含药血清组BGP蛋白表达明显亦高于雄性右归丸组(P<0.05)。2雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达及RANKL/OPG比值的影响与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组OB的RANKL蛋白水平、RANKL/OPG 比值明显上调(P<0.01),OPG蛋白水平明显下调(P<0.01)。与OVX血清组比较,雌性右归丸含药血清和雌激素血清可明显降低OB的RANKL蛋白及RANKL/OPG 比值(P<0.01),并显着促进OB分泌OPG(P<0.01)。ORX血清组OB的RANKL蛋白表达、RANKL/OPG比值与雄性假手术血清组相比,明显上升(P<0.01),OPG蛋白水平明显下调(P<0.05)。雄激素血清和雄性右归丸含药血清对OB的RANKL蛋白表达与ORX血清组比较,具有明显下调作用(P<0.05,P<0.01),雄激素组OPG蛋白表达明显上调(P<0.05),但雄性右归丸含药血清组OPG较ORX组未见明显差异。雌雄之间OVX血清组RANKL蛋白表达、RANKL/OPG雌性明显高于OVX组(P<0.05,P<0.01),OPG蛋白表达ORX血清组明显高于OVX血清组(P<0.05)。雌性右归丸含药血清组RANKL蛋白水平、RANKL/OPG明显低于雄性右归丸组(P<0.05,P<0.01),OPG蛋白表达雌性右归丸含药血清组明显高于雄性(P<0.01)。3雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞PI3K、Akt、GSK3β、β-catenin和Runx2 mRNA表达的影响与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组、雌激素组和雌性右归丸含药血清组PI3K和Akt mRNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义(P<0.01)。与雄性假手术血清组相比,ORX血清组和雄性右归丸含药血清组PI3K mRNA表达水平明显增加,ORX血清组、雄激素组和雄性右归丸含药血清组AktmRNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与OVX组相比,雌激素和雌性右归丸含药血清对PI3K、Akt mRNA表达水平的影响,差异不具有统计学意义。雌雄模型组之间,OVX血清组PI3K和Akt mRNA表达明显高于ORX组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组GSK3β、β-catenin和Runx2 mRNA表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),雌激素组和雌性右归丸组Runx2mRNA表达水平亦明显增加(P<0.01),差异具有统计学意义。与雄性假手术血清组相比,ORX血清组GSK3β、β-catenin和Runx2 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),雄性右归丸组GSK3β mRNA表达水平亦明显升高(P<0.05)。与ORX组相比,雄激素和雄性右归丸含药血清对上述三种mRNA表达水平的影响,差异不具有统计学意义。雌雄模型组之间亦未见明显差异。4雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3β、β-catenin 和 RUNX2 蛋白表达的影响与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组、雌激素组和雌性右归丸含药血清组p-PI3K、p-Akt蛋白磷酸化表达水平明显升高(P<0.01,P<0.05),差异具有统计学意义。与雄性假手术血清组相比,ORX组和雄激素组p-PI3K蛋白磷酸化表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),ORX组、雄激素组和雄性右归丸含药血清组p-Akt蛋白磷酸化表达水平明显升高(P<0.01,P<0.05),差异具有统计学意义。雌、雄模型血清组之间,OVX血清组p-Akt蛋白水平明显高于ORX血清组(P<0.01),雌、雄右归丸组之间未见明显差异。PI3K和Akt各组之间均未见明显差异。与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组p-GSK3β、β-catenin和RUNX2蛋白表达水平明显增加(P<0.01,P<0.05),雌激素组β-catenin蛋白表达水平明显增加(P<0.05),差异具有统计学意义。与OVX组相比,雌激素组和雌性右归丸含药血清组差异无统计学意义。与雄性假手术血清组相比,ORX组和雄激素组β-catenin和RUNX2蛋白表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),雄性右归丸组β-catenin蛋白表达水平显着增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与ORX组相比,雄激素组和雄性右归丸含药血清组差异无统计学意义。GSK3β各组之间差异无统计学意义。雌雄各组之间各指标差异亦无统计学意义。实验三雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响实验方法将小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7以2×103个/孔接种于96孔板或6×104个/孔接种于6孔板,96孔板中预置骨片,细胞经24h贴壁后,加入分化培养基(DMEM+10%FBS+50ng/mL RANKL),诱导 48h,加入 10%各组大鼠血清(分组方法同实验二),细胞培养至第5d,对OC进行抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察和计算TRAP阳性细胞数(细胞核≥3个);细胞培养至第9d,对骨片进行骨陷窝甲苯胺蓝染色,计算骨吸收陷窝面积。采用免疫组化方法检测OC的TRAP蛋白表达;Real-time PCR方法检测OC中PI3K、Akt、TRAF-6、c-Src、NFATcl 的 mRNA水平,Western-Blot 方法检测 OC中 p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、TRAF-6、c-Src、NFATc1 等蛋白表达水平。实验结果1雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞分化的影响OC经TRAP染色后细胞呈紫红色,多核,将细胞核≥3的TRAP+细胞视为破骨细胞,进行计数。OVX血清组TRAP+破骨细胞数量较雌性假手术组明显增加(P<0.01),ORX血清组较雄性假手术组明显增加(P<0.01)。雌激素和雌性右归丸含药血清组TRAP+破骨细胞数量较OVX组大鼠明显降低(P<0.01),雄激素组和雄性右归丸含药血清组与ORX组比较,TRCP+破骨细胞数量明显降低(P<0.05,P<0.01),但雄性右归丸含药血清组仍显着高于雄性假手术组(P<0.01)。OVX组与ORX组之间比较,OVX组TRAP+破骨细胞数量显着高于ORX组(P<0.05);雌性右归丸含药血清组则明显低于雄性右归丸含药血清组(P<0.05)。2雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响骨片经甲苯胺蓝染色后,OC形成的骨吸收陷窝呈蓝色,形态为圆形、椭圆形或腊肠形,说明诱导的OC有噬骨功能。OVX组/ORX组骨吸收陷窝面积较同性别假手术组明显增加(P<0.01),各含药血清组与同性别模型组(OVX组/ORX组)相比,骨吸收陷窝面积明显降低(P<0.01)。雄性右归丸含药血清组高于雄性假手术组,有统计学差异(P<0.01)。OVX组与ORX组之间比较,OVX组骨吸收陷窝面积显着高于ORX组(P<0.05);雌性去势大鼠含药血清组则明显低于雄性去势大鼠含药血清组(P<0.05)。3雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞的TRAP蛋白表达的影响OVX/ORX血清组TRAP蛋白表达水平明显高于同性别假手术血清组(P<0.01)。各含药血清组与同性别模型组(OVX组/ORX组)相比,TRAP蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。雌雄模型组之间存在明显差异,OVX组TRAP蛋白表达水平明显高于ORX组(P<0.05)。雌性去势大鼠含药血清组则明显低于雄性去势大鼠含药血清组(P<0.05)。4雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞PI3K、Akt、TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA表达的影响与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组PI3K、AktmRNA水平明显升高(P<0.01)。与OVX血清组相比,雌激素和雌性右归丸含药血清组PI3K、Akt mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。与雄性假手术血清组相比,ORX组和雄性右归丸含药血清组PI3K、AktmRNA表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01)。与ORX血清组相比,雄激素组和雄性右归丸含药血清组PI3K、AktmRNA表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。雌雄模型组之间存在明显差异,OVX血清组PI3K、AktmRNA表达水平明显高于ORX血清组(P<0.05)。雌性右归丸含药血清组则明显低于雄性右归丸含药血清组(P<0.05)。与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA水平明显升高(P<0.01)。与OVX血清组相比,雌激素和雌性右归丸含药血清组TRAF6、c-Src、NFAc1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05)。与雄性假手术血清组相比,ORX组PI3K、Akt、TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。与ORX血清组相比,雄激素组和雄性右归丸含药血清组TRAF6、NFATc1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),雄性右归丸含药血清c-Src mRNA表达水平较ORX组具有下降趋势。雌雄模型组之间存在明显差异,OVX血清组TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA表达水平明显高于ORX血清组(P<0.05)。5雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达的影响与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组、雌激素组和雌性右归丸组p-PI3K、p-Akt蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.01,P<0.05)。与雄性假手术血清组相比,ORX血清组和雄性右归丸含药血清组PI3K、Akt蛋白磷酸化表达水平明显增加(P<0.01)。各含药血清组与同性别模型组(OVX组/ORX组)相比,PI3K、Akt蛋白磷酸化水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。雌、雄之间模型组、右归丸组存在明显差异。OVX组PI3K和Akt蛋白磷酸化表达水平明显高于ORX组(P<0.05,P<0.01)。雌性右归丸含药血清组则明显低于雄性右归丸含药血清组(P<0.01)。与雌性假手术组血清组相比,OVX血清组TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达水平明显增加(P<0.01)。与OVX血清组比较,雌激素和雌性右归丸含药血清可明显降低TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达水平(P<0.01)。与雄性假手术血清组相比,ORX组TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达水平显着升高(P<0.01)。与ORX组相比,雄激素组和雄性右归丸含药血清组可明显降低TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。雌雄之间比较,OVX组NFATc1蛋白水平明显高于ORX组(P<0.05)。雌性去势大鼠含药血清组则TRAF6明显低于雄性去势大鼠含药血清组(P<0.05)。实验四 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清在PI3K激动剂作用下对破骨细胞分化、功能及其PI3K/Akt信号通路的影响实验方法将小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7以以2×103个/孔接种于96孔板或6×104个/孔接种于6孔板,96孔板中预置骨片,细胞经24h贴壁后,加入分化培养基(DMEM+10%FBS+50ng/mL RANKL),诱导48h,在分组含有激动剂组的培养孔中,加入10μM浓度PI3K激动剂740Y-P刺激24h,并按分组方法加入10%各组大鼠血清,实验分组如下:OVX大鼠血清组、OVX大鼠血清+740Y-P组、雌性右归丸大鼠含药血清+740Y-P组、ORX大鼠血清组、ORX大鼠血清+740Y-P组、雄性右归丸大鼠含药血清+740Y-P组。对OC进行TRAP染色观察和计算TRAP+细胞数(细胞核≥3个);细胞培养至第9d,对骨片进行骨陷窝甲苯胺蓝染色,计算骨吸收陷窝面积。免疫组化方法检测OC的TRAP蛋白表达;Real-time PCR 方法检测 OC 中 PI3K、Akt、TRAF-6、c-Src、NFATc1 的 mRNA 水平,Western-Blot 方法检测OC中 p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、TRAF-6、c-Src、NFATc1等蛋白表达水平。实验结果1 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞分化中的作用加入PI3K激动剂740Y-P后,TRAP+破骨细胞数较同性别模型组(OVX血清组/ORX血清组)明显增加(P<0.05),与OVX+740Y-P组比较,雌性右归丸含药血清+740Y-P组TRAP+细胞计数显着降低(P<0.05);与ORX+740Y-P组比较,雄性右归丸含药血清+740Y-P组TRAP+细胞计数显着降低(P<0.05)。2 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞功能中的作用雌雄模型血清组加入PI3K激动剂740Y-P后,OVX+740Y-P组骨吸收陷窝面积较同性别模型组(OVX血清组/ORX血清组)明显增加(P<0.05)。与OVX血清+740Y-P组比较,雌性右归丸含药血清+740Y-P组骨吸收陷窝面积显着降低(P<0.01);与ORX血清+740Y-P组比较,雄性右归丸含药血清+740Y-P组骨吸收陷窝面积显着降低(P<0.05)。3 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA 表达的作用OVX和ORX血清组加入PI3K激动剂740Y-P后,OVX+740Y-P组PI3K、AktmRNA相对表达明显较OVX组明显增加(P<0.01),ORX+740Y-P组PI3K、AktmRNA相对表达明显较ORX组明显增加(P<0.01),说明PI3K/Akt信号通路被激活。与OVX+740Y-P组比较,雌性右归丸含药血清组+740Y-P组PI3K、AktmRNA相对表达表达显着降低(P<0.01);与ORX+740Y-P组比较,雄性右归丸含药血清组+740Y-P组PI3K、AktmRNA相对表达显着降低(P<0.05),说明雌、雄右归丸含药血清可明显抑制PI3K/Akt信号通路。雌雄模型血清组加入PI3K激动剂740Y-P后,OVX+740Y-P组TRAF-6、c-Src、NFATc1 mRNA表达水平明显较OVX组明显增加(P<0.01),ORX+740Y-P 组 TRAF-6、c-Src、NFATc1 mRNA 表达水平较 ORX 组明显增加(P<0.01)。与OVX+740Y-P组比较,雌性右归丸含药血清组+740Y-P组TRAF-6、c-Src、NFATc1 mRNA表达水平表达显着降低(P<0.01);与ORX+740Y-P组比较,雄性右归丸含药血清组+740Y-P组TRAF-6、c-Src、NFATc1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。4 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达中的作用雌雄模型血清组加入PI3K激动剂740Y-P后,OVX+740Y-P组p-PI3K、p-Akt蛋白磷酸化水平明显较OVX组明显增加(P<0.05,P<0.01),ORX+740Y-P组p-PI3K、p-Akt蛋白磷酸化水平较ORX组明显增加(P<0.05,P<0.01),说明PI3K/Akt信号通路被激活。与OVX+740Y-P组比较,雌性右归丸含药血清组+740Y-P组p-PI3K、p-Akt蛋白磷酸化水平表达显着降低(P<0.01);与ORX+740Y-P组比较,雄性右归丸含药血清组+740Y-P组p-PI3K、p-Akt蛋白磷酸化水平显着降低(P<0.05),说明雌、雄右归丸含药血清可明显抑制PI3K/Akt信号通路。雌雄模型血清组加入PI3K激动剂740Y-P后,OVX+740Y-P组TRAF-6、c-Src、NFATc1蛋白表达水平明显较OVX组明显增加(P<0.05,P<0.01),ORX+740Y-P组c-Src、NFATc1蛋白表达水平较ORX组明显增加(P<0.05,P<0.01),TRAF-6具有升高趋势,但差异未见统计学意义。与OVX+740Y-P组比较,雌性右归丸含药血清组+740Y-P组TRAF-6、c-Src、NFATc1蛋白表达水平表达显着降低(P<0.01);与ORX+740Y-P组比较,雄性右归丸含药血清组+740Y-P 组 TRAF-6、c-Src、NFATc1 蛋白表达水平显着降低(P<0.05,P<0.01)。实验结论(1)去势可导致同龄雌、雄大鼠发生高转换型骨质疏松症,但去势所导致的雌雄之间骨转换及骨丢失率存在性别差异,OVX大鼠骨转换及骨丢失率明显高于ORX大鼠。去势大鼠骨吸收增加,骨形成代偿性增加,但由于骨吸收大于骨形成而导致骨量丢失。其具体机制是:大鼠去势后,可引起OC的PI3K/Akt信号通路及其关键因子TRAF6、c-Src、NFATc1的mRNA及蛋白表达明显升高,OC活性增强;并可引起OB的PI3K/Akt信号通路及其关键因子GSK3β、β-catenin和Runx2的mRNA及蛋白表达均明显升高,OB活性增强,RANKL/OPG比值增加。但由于OC所致的骨吸收大于OB所致的骨形成,而导致骨质疏松症的发生。OVX大鼠的上述改变明显强于ORX大鼠,这是雌性去势大鼠骨转换及骨丢失率均明显高于雄性的机制之一。(2)右归丸对雌、雄去势大鼠骨质疏松症的作用存在性别差异,右归丸对OVX大鼠的疗效明显优于ORX大鼠。右归丸可使去势大鼠OC的PI3K/Akt信号通路及其关键因子TRAF6、c-Src、NFATc1的蛋白表达明显降低,导致OC活性减弱;并也可使OB的PI3K/Akt信号通路及其关键因子GSK3β、β-catenin和RUNX2的蛋白表达以及RANKL蛋白表达、RANKL/OPG 比值均明显降低。RANKL/OPG比值降低则表明,右归丸还可通过抑制RANKL/OPG 比值来降低OC的活性。右归丸的以上作用最终导致骨吸收与骨形成均降低,使两者恢复到一个相对的平衡状态,从而抑制骨的高转换状态,防止骨量丢失。右归丸对OVX大鼠OB和OC中PI3K/Akt信号通路抑制作用明显大于ORX大鼠,这是右归丸对雌、雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用存在性别差异的机制之一。综上,右归丸对同龄雌雄大鼠OB和OC中PI3K/Akt信号通路的差异调控作用是其对雌雄去势大鼠骨质疏松症治疗产生性别差异的机制之一。

张国光[2](2021)在《基于TGF-β1及Smad2/3信号通路探讨龟鹿二仙膏干预糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松大鼠的作用机制》文中研究指明目的:1.观察龟鹿二仙膏对糖皮质激素诱导的肾虚骨质疏松大鼠的影响。2.观察龟鹿二仙膏干预糖皮质激素诱导的肾虚骨质疏松大鼠的潜在作用机制。3.观察龟鹿二仙膏是否通过TGF-β1及Smad2/3信号通路上调TGF-β1及Smad2/3mRNA蛋白表达水平干预糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松大鼠的作用。4.为丰富中医“肾主骨”理论提供实验依据,进而为临床治疗糖皮质激素诱导肾虚型骨质疏松症的中医药精准医疗提供理论基础。材料与方法:1.实验动物分组、造模和评价选取60只3月龄Wistar大鼠,随机分为6组:空白组(CON组)、模型组(DXMS组)、龟鹿二仙膏低剂量组(LGLEX组)、龟鹿二仙膏中剂量组(MGLEX组)、龟鹿二仙膏高剂量组(HGLEX组)、阿仑膦酸钠组(AL组)。除CON组外,其余各组大鼠采用后肢肌注地塞米松磷酸钠注射液的方法(8w)构建糖皮质激素诱导的肾虚骨质疏松大鼠模型。第9w开始,各用药组给予相应药物持续干预8w。实验全程观察、评价并记录大鼠生物学表征信息。2.检测指标(1)采用双能X线吸收法(DEXA)检测各组大鼠左侧离体股骨骨密度(BMD)值。(2)采用万能拉力试验机检测大鼠右侧离体股骨生物力学参数。(3)采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清骨钙素(BGP)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP-5b)指标。(4)采用苏木精-伊红染色法(HE)、Masson三色染色法观察骨组织的病理形态结构。(5)采用免疫组织化学染色法(IHC)观察骨组织中TGF-β1及Smad2/3蛋白表达的分布情况。(6)采用实时荧光定量核酸扩增反转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测大鼠骨组织中TGF-β1及Smad2/3mRNA含量。(7)采用全自动蛋白质印迹定量分析系统(Simple Wes)检测大鼠骨组织中TGF-β1及Smad2/3蛋白表达量情况。3.统计学方法:采用SPSS26、Image Pro Plus和Graph Pad Prism8软件进行数据分析、图像分析和制图。P<0.05为差异具有统计学意义,P<0.01为差异具有显着性统计学意义。结果:1.生物学表征信息:造模成功后观察发现,相比于CON组,DXMS组、LGLEX组、MGLEX组、HGLEX组及AL组大鼠明显出现中医“肾虚”的表现。药物干预8w后观察发现,相比于DXMS组,LGLEX组、MGLEX组、HGLEX组及AL组均能明显改善造模大鼠中医“肾虚”表现。2.造模后及用药干预后大鼠左侧股骨骨密度(BMD)值:造模满8w后,采用DEXA检测正常组和造模组大鼠左侧活体股骨BMD值,统计发现造模组BMD值显着下降(P<0.01)。给药干预8w后,采用DEXA检测各组大鼠左侧离体股骨BMD值。与CON组比较,DXMS组大鼠股骨BMD值显着降低(P<0.01);与DXMS组比较,LGLEX组、MGLEX组、HGLEX组及AL组大鼠股骨BMD值均显着升高(P<0.01),其中以MGLEX组干预效果更为明显。3.大鼠右侧股骨生物力学:与CON组比较,DXMS组股骨截面惯性矩、弹性载荷、弹性桡度、弹性模量、最大载荷、最大桡度、最大弯曲应力、最大弯曲应变、弯曲能量、抗弯强度均显着下降(P<0.01);与DXMS组比较,LGLEX组、MGLEX组、HGLEX组及AL组大鼠股骨各项生物力学参数明显升高(P<0.05)。4.骨代谢生化指标:(1)血清骨钙素(BGP):与CON组比较,DXMS组大鼠血清BGP含量明显下降(P<0.01);与DXMS组比较,各用药组大鼠血清BGP含量均升高(P<0.01),其中以MGLEX组升高趋势更显着。(2)抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP-5b):与CON组比较,DXMS组大鼠血清TRACP-5b含量明显升高(P<0.01);与DXMS组比较,LGLEX组、MGLEX组、HGLEX组及AL组大鼠血清TRACP-5b含量均明显下降(P<0.01),且以MGLEX组下降最为显着(P<0.01)。5.大鼠股骨远端形态学观察:(1)大鼠股骨远端HE染色:与CON组相比,DXMS组骨小梁数量和骨小梁所占总面积显着降低,骨小梁稀疏、断裂、排列紊乱;与DXMS组相比,MGLEX组和HGLEX组骨小梁数量和骨小梁所占总面积显着升高,骨小梁致密且连续性佳。(2)大鼠股骨远端Masson染色:与CON组相比,DXMS组可见细胞排列紊乱,邻骨小梁处可见少量胶原纤维;与DXMS组相比,MGLEX组和HGLEX组邻近骨小梁处有大量连续性胶原纤维生成,呈丝状,排列规则。6.免疫组织化学染色(IHC):与CON组相比,DXMS组测量的TGF-β1和Smad2/3蛋白表达光密度平均值显着降低;与DXMS组相比,各用药组TGF-β1和Smad2/3蛋白表达光密度平均值均有不同程度提高。7.反转录聚合酶链式反应(RT-PCR):与CON组比,DXMS组TGF-β1和Smad2/3mRNA含量显着下降(P<0.01);与DXMS组比,MGLEX组、HGLEX组、AL组均能显着提高TGF-β1和Smad2/3mRNA表达含量(P<0.01)。8.全自动蛋白质印迹定量分析系统(Simple Wes):与CON组比,DXMS组TGF-β1和Smad2/3蛋白表达均呈现下降趋势(P<0.01);与DXMS组比,LGLEX组、MGLEX组、HGLEX组、AL组TGF-β1和Smad2/3蛋白表达呈现上升趋势(P<0.01)。结论:1.应用“肌注地塞米松磷酸钠注射液”的造模方法,可成功构建糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松大鼠模型。2.龟鹿二仙膏能有效提高糖皮质激素诱导的肾虚骨质疏松症大鼠骨密度值,其中低、中、高剂量的龟鹿二仙膏均具有一定疗效,但中剂量干预效果最佳。3.龟鹿二仙膏可以改善的糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松症大鼠生物力学特性,提高骨强度和抗骨折的能力。4.龟鹿二仙膏能明显提高大鼠血清骨钙素(BGP)含量,降低抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP-5b)含量,从而提高成骨细胞活性、促进骨形成,抑制破骨细胞活性、抑制骨吸收,最终发挥干预作用。5.龟鹿二仙膏能上调骨组织中TGF-β1及Smad2/3 mRNA及蛋白表达水平,表明龟鹿二仙膏可能通过TGF-β1及Smad2/3信号通路干预糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松大鼠的作用。

张露露[3](2021)在《骨伤1号方对实验性绝经后骨质疏松性骨折的疗效观察及机制研究》文中认为背景早在二十一世纪初重庆市九龙坡区中医院骨伤科就已开始关注骨质疏松症及其并发症,因我院骨伤科在治疗相关疾病时,常因骨质疏松症带来的手术并发症而导致非计划的二次手术及后续治疗,自此我院开创了骨伤1号方,并在临床应用中逐渐将其改进完善。骨伤1号方作为重庆市九龙坡区中医院的经验方,确立至今已有十余年的临床应用历史,主治绝经后女性骨质疏松性骨折,具有滋阴壮骨,填精补髓的作用,在长期持续的临床应用中观察到其对于绝经后骨质疏松性骨折的愈合具有良好的促进作用。但一直以来未曾对该方进行完整的动物学实验,本研究的目的在于验证骨伤1号方对于绝经后骨质疏松性骨折愈合的促进作用,并探讨其可能的作用机制。目的观察骨折1号方对实验性绝经后骨质疏松骨折的愈合影响,探讨其治疗绝经后骨质疏松骨折可能作用机制,为其临床应用提供相应的理论依据。方法1.双侧卵巢摘除致骨质疏松大鼠模型的建立选用2月龄SPF级健康雌性SD大鼠75只,体重(200±20g),适应性饲养1周后,随机分为假手术组(10)和模型组(65只)。除假手术组外其余大鼠切除双侧卵巢制备骨质疏松模型,假手术组大鼠仅在相同位置摘除同等质量卵巢。大鼠行卵巢摘除术后第7天进行阴道上皮细胞涂片检测。2.骨伤1号方对骨质疏松骨折大鼠的药效学实验研究(1)骨伤1号方对大鼠骨质疏松性骨折模型血清离子含量的影响75只3月龄SPF级健康雌性SD大鼠,体重(200±20g),适应性饲养1周后,依照随机数字表法随机抽取10只为假手术组,剩下的60只为造模组。造模组大鼠摘除双侧卵巢,假手术组大鼠仅在相同位置摘除同等质量的脂肪。术后7天行大鼠阴道上皮细胞涂片观察,确定卵巢摘除成功。去势大鼠常规饲养20周后对其进行活体骨密度检测,将大鼠麻醉后置于全身型双能X线骨密度仪上(第三陆军军医大学),测定大鼠右侧股骨骨密度(BMD)。证实骨质疏松造模成功后,采用随机数字表法将造模成功的骨质疏松大鼠随机分为5组,分别为空白对照组(12只),仙灵骨葆对照组(12只),骨伤1号方高剂量组(12只),骨伤1号方中剂量组(12只),骨伤1号方低剂量组(12只)。在此基础上每组大鼠均采用开放式骨折髓内针固定方法制备右侧股骨中段横形骨折模型。并于术后第二天开始连续给予空白对照组纯水灌胃10ml/kg·d;仙灵骨葆组给予仙灵骨葆溶液灌胃,剂量为270mg/kg·d;骨伤1号方高剂量组给予骨伤1号方灌胃,剂量为544mg/kg·d;骨伤1号方中剂量组灌胃剂量为13.64mg/kg·d;骨伤1号方低剂量组灌胃剂量为136mg/kg·d。连续灌胃后6周后对大鼠进行眼眶后静脉丛采血,检测血清中钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)离子的含量。(2)骨伤1号方对大鼠骨质疏松性骨折模型骨痂形成的影响造模方法同前。分别于给药2周、4周及6周后对大鼠进行右侧股骨DR检测(北京万东医疗科技股份有限公司生产的新东方1000MD型医用X射线摄影系统),观察骨折处骨痂生长情况,骨痂连续性及最终骨折愈合情况。(3)骨伤1号方对大鼠骨质疏松性骨折模型骨生物力学的影响造模方法同前。给药6周后处死大鼠,完整取出大鼠右侧股骨,剔除干净股骨上附着软组织及结缔组织,从股骨髁间嵴处破开一小口,小心抽取出髓内针,随即用浸满生理盐水的纱布包裹保存(尽可能保持股骨生理状态),立刻于万能材料力学试验机上机检测(Instron E10000),水平放置于支撑横杆上,中央加压,选取标定载荷,加载速率,记录受试骨组织样品断裂前的最大弯曲力及最大弯曲变形,并绘制力值-变形曲线。(4)骨伤1号方对大鼠骨质疏松性骨折模型骨形态计量学的影响造模方法同前。给药6周后处死大鼠,完整取出大鼠右侧股骨,截取股骨骨折处制作骨组织石蜡切片,HE染色,采用OLYMPUSDP72显微镜采集图像,Image-proplus6.0图像分析系统对股骨松质骨和皮质骨静态参数进行测量和计算。(5)骨伤1号方对大鼠骨质疏松性骨折的作用机制研究从骨髓间充质干细胞、成骨细胞及破骨细胞入手,采用CCK-8法检测破骨细胞的增殖能力,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)检测法检测破骨细胞分化能力;免疫组织化学方法检测骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨保护素(OPG)、骨钙素(BGP)的表达;MTT法检测骨髓间充质干细胞增殖能力,通过检测碱性磷酸酶(ALP)的表达检测其分化能力,探寻其可能的作用机制。结果1.骨伤1号方对骨质疏松骨折大鼠的药效学实验研究(1)骨伤一号方对大鼠体重无显着影响在行卵巢摘除术后,各组别大鼠体重均在1周内显着下降,约在2周后开始重新增重。至大鼠6月龄时,体重不在增加,并保持稳定。行股骨中段横行骨折术后体重逐渐下降,1周后体重开始逐渐回升,直至稳定。实验期间内各组别间大鼠体重均无显着差异(P>0.05)。(2)骨伤1号方能显着提高骨质疏松骨折大鼠的血清钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)离子水平,促进骨折恢复。与空白对照组相比较,骨伤1号方高剂量组能极显着提升血清Ca、P离子浓度(P<0.01),骨伤1号方中剂量组能显着提升血清Ca、P离子浓度(P<0.05),骨伤1号方高剂量组能显着提升血清Mg离子浓度趋势(P<0.05),骨伤1号方中剂量组有提升血清Mg浓度的趋势,但无显着性差异(P>0.05),提示有促进骨折愈合的作用;骨伤1号方低剂量组有提升血清Ca、P、Mg趋势,但无显着性差异(P>0.05)。(3)骨伤1号方能促进骨质疏松性骨折骨痂形成,缩短骨折愈合时间。与空白对照组相比,第2周时,骨伤1号方高、中剂量组骨折断端边缘开始模糊不清,骨膜开始反应,骨伤1号方高剂量组骨折处有少量骨痂开始形成,骨伤1号方中剂量组骨折处有极少量骨痂开始形成,骨伤1号方低剂量组则未见明显变化;第4周时,骨伤1号方高、中、低剂量组均有明显骨痂形成,骨伤1号方高剂量组骨痂基本相接,骨髓腔贯通,骨折线模糊基本消失,骨伤1号方中、低剂量组及仙灵骨葆组骨痂量大,骨髓腔基本贯通,骨折线模糊可见,较骨伤1号方高剂量组差,提示骨伤1号方有促进骨痂形成,缩短骨折愈合时间的作用;第6周后,各组大鼠骨髓腔已全部贯通,骨折线基本消失(4)骨伤1号方能显着提高骨质疏松骨折大鼠股骨的抗弯曲能力与空白对照组相比较,骨伤1号方高剂量组极显着增加股骨最大负荷(P<0.01),骨伤1号方中、低剂量组能显着增加股骨最大负荷(P<0.05);骨伤1号方高剂量组能显着增加股骨最大位移及模数,骨伤1号方中、低剂量组有增加股骨最大位移及模数的趋势,但无显着性差异(P>0.05)。(5)骨伤1号方能显着增加骨质疏松骨折大鼠股骨骨皮质面积与空白对照组相比较,骨伤1号方高剂量组极显着增加股骨皮质骨面积,显着增加股骨皮质骨面积百分比(P<0.01),骨伤1号方中剂量组显着增加股骨皮质骨面积(P<0.05),有增加股骨皮质骨面积百分比的趋势(P>0.05);骨伤1号方低剂量组有增加股骨皮质骨面积及提升股骨皮质骨面积百分比的趋势,但无显着性差异(P>0.05);各组别大鼠均有降低骨髓腔面积的趋势,但无显着性差异(P>0.05)2.骨伤1号方细胞分子作用机制研究(1)骨伤1号方含药血清显着抑制破骨细胞的增殖和分化与诱导剂组相比,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组抗酒石酸酸性磷酸酶表达显着下调(P<0.05),且CCK-8试验结果显示,与破骨细胞诱导剂组相比,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组的细胞增殖数量显着减少(P<0.05)。(2)骨伤1号方含药血清显着促进成骨细胞的增殖和分化与空白血清组相比,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组中细胞碱性磷酸酶(ALP)的表达显着升高(P<0.001);细胞MTT试验结果显示,与空白血清组相比,24h时,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组骨髓间充质干细胞增殖数量显着增加(P<0.05),且骨伤1号方20%含药血清促增殖效果更为显着(P<0.01),48h时,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组骨髓间充质干细胞的增殖均显着增加(P<0.05)。(3)骨伤1号方上含药血清显着调成骨细胞骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和骨骼保护因子(OPG)的表达。WB试验结果显示,与空白血清组相比,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组均显着上调BMP-2与OPG的表达(P<0.05)。(4)骨伤1号方含药血清显着上调成骨细胞骨钙素(BGP)的表达与空白血清组相比,骨伤1号方5%、10%、20%含药血清组显着上调成骨细胞骨钙素(BGP)的分泌(P<0.05)。结论1.骨伤1号方能够促进大鼠骨质疏松性骨折愈合,缩短骨折愈合时间,提高愈合质量。2.骨伤1号方能够改善骨质疏松性骨折处生物力学和形态计量学,增加其抗弯曲能力,能够有效预防骨折再发生,降低非计划再手术可能。3.骨伤1号方能促进成骨细胞的分化与增殖,抑制破骨细胞的分化和增殖,并上调成骨细胞BMP-2和OPG的表达,从而发挥其促进骨质疏松骨折愈合的作用。4.骨伤1号方能够增加骨质疏松症模型大鼠股骨的骨小梁数目及百分比,提高股骨骨密度,对于绝经后骨质疏松症可能具有一定的治疗作用。

连雅君[4](2021)在《狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究》文中指出目的为开发抗骨质疏松症新型药物奠定基础,探索狗骨胶、双膝骨胶宝在治疗骨质疏松症疾病上的作用及相关信号通路,拓宽中医药在动物药材应用上的研究思路和研究方向。研究方法①理论探究:梳理历代中医着作、中医家对骨质疏松症的病机、病因及治疗等方面的文字记载,对中医药治疗骨质疏松症的中医认知及治疗思路做出归纳总结;通过“以形补形、五行生克”及“温肾助阳,活血通经”理论分别探究狗骨胶及双膝骨胶宝二者治疗骨质疏松症中医理论基础,为后续研究提供充分的理论依据。②实验研究:通过超高效的液相色谱质谱联用非靶点代谢组学分析方法对狗骨胶、炒制的狗骨粉进行成分分析及鉴定,比较不同的炮制方法下二者在成分上的差异,对比总结狗骨胶炮制方式的优点及在促吸收和抗骨质疏松症治疗方面的优势;通过比较戊酸雌二醇、狗骨胶、双膝骨胶宝治疗维甲酸骨质疏松症模型雌性大鼠的基础体重,肛温,耳廓局部温度,内脏指数,骨密度,骨矿量,HE染色,MASSON染色的差异进行组间观察,分析狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症药效研究;通过生化分析仪检测血清磷、钙、碱性磷酸酶,尿磷、钙,ELISA法检测血清OC、PN1P、CTX-1,分析狗骨胶、双膝骨胶宝对骨代谢的影响;通过ELISA法检测血清OPG,用WB、PCR法检测RANK、RA NKL、OPG、TRAF6、NF-κB指标在蛋白、mRNA的表达,免疫组化法观察RANKL、OPG的阳性表达,探究狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症在经典机制RANKL/OPG/TR AF6的效果,分析其在经典通路RANK/RANKL/OPG及TRAF6/NF-κB信号通路上的治疗作用,研究狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症内在机制。研究结果①理论研究结果:骨质疏松症疾病是一种符合中医概念骨痿的疾病,病位于肾,牵连肝脾,以阴阳失调为根,古代文献中记载的病机多与肾脏亏损,筋骨萎弱有关,可将肾精亏虚,瘀血阻滞,筋骨萎弱总结为本病的根本病机;骨痿的病因则与外邪风寒湿邪所感、情志失调、先天后天失调等有关。治疗的方法有温补肾阳法、滋补肾阴法、阴阳双补法、脾肾并治滋肾阴化湿痰法,肝肾并治补益肝肾法等。“以骨补骨,五行生克”理论为狗骨胶治疗骨质疏松症疾病的理论基础,双膝骨胶宝的理论基础基于仲景肾气丸加减变化而成,该方应用温肾健脾,活血通经法治疗肾阳虚血瘀类骨质疏松症。②实验研究结果正离子模式下,通过匹配分析筛选差异性成分212种,负离子模式下,筛选并匹配分析出差异性成分125种。正离子模式下,狗骨胶相对表达量偏高的成分有阿普比妥、胆碱、甜菜碱、脯氨酸、L-苯丙氨酸、荆芥内酰胺、新海藻糖、苦参碱、羟脯氨酸等,其中氨基酸6种;负离子模式下,狗骨胶相对表达量偏高的成分有:琥珀酸盐、脯氨酸、腺嘌呤、黄嘌呤、柠檬酸、异丁酮、L-正亮氨酸、肉豆蔻酸、白氨酸、肾上腺酸、次黄嘌呤、硬皮酸、色氨酸等,其中氨基酸4种。经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠的BMD、BMC含量明显下降(P<0.001),经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝药物治疗后的BMD、BMC含量明显上升(P<0.01,P<0.001);HE染色结果表明,骨质疏松症模型大鼠的骨小梁间隙增大(P<0.01),经双膝骨胶宝药物治疗后骨小梁的数量有所增加(P<0.01),骨小梁间隙距离呈现明显减少(P<0.05)。骨质疏松症模型大鼠的血清ALP含量显着地升高(P<0.001),经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后ALP含量均出现了明显下降(P<0.01,P<0.001);骨质疏松症模型大鼠血清钙含量降低(P<0.05),经双膝骨胶宝药物治疗后血清钙含量升高(P<0.05);骨质疏松症模型大鼠的血清磷含量明显升高(P<0.05),经戊酸雌二醇片、狗骨胶的药物治疗后血清磷含量明显降低(P<0.05);经双膝骨胶宝药物治疗后的骨质疏松症模型大鼠的尿钙含量明显有所下降(P<0.01),模型大鼠的尿磷含量明显有所上升(P<0.05),经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后尿磷含量明显有所下降(P<0.05,P<0.01);骨质疏松症模型大鼠血清的PN1P含量有所下降(P<0.001),经过戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后的PN1P含量有所上升(P<0.05);骨质疏松症模型大鼠的CTX-1含量有所上升(P<0.05),经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后CTX-1含量明显有所下降(P<0.05,P<0.01);骨质疏松症模型大鼠的骨钙素含量明显下降(P<0.01),经戊酸雌二醇片、双膝骨胶宝的药物治疗后骨钙素含量显着升高(P<0.05,P<0.01)。骨质疏松症模型大鼠的血清OPG含量明显降低(P<0.05);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后血清OPG含量均有明显上升(P<0.01,P<0.001);经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠的胫骨RANKL、TRAF6、NF-κB1蛋白质含量明显上升(P<0.01,P<0.05),OPG蛋白质含量明显下降(P<0.001);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨RANKL蛋白质浓度含量有明显减少(P<0.05);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨TRAF6蛋白质的含量明显减少(P<0.001),大鼠胫骨OPG蛋白质总含量明显升高(P<0.05);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠胫骨NF-κB1蛋白含量明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠RANK、RANKL、TRAF6的基因相对表达量含量明显升高(P<0.01),OPG的基因相对表达量含量明显降低(P<0.05);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANK的基因相对表达量含量显着降低(P<0.01,P<0.05);经戊酸雌二醇片、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANKL的基因相对表达量明显降低(P<0.05);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后OPG的基因相对表达量明显升高(P<0.01,P<0.05);经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后TRAF6的基因相对表达量明显降低(P<0.05)。免疫组化结果显示骨质疏松症模型大鼠股骨颈中OPG阳性表达量明显降低(P<0.05),经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠OPG阳性表达量明显增高(P<0.01,P<0.05);经维甲酸造模的骨质疏松症模型大鼠股骨颈中RANKL阳性表达量明显增高(P<0.001),经戊酸雌二醇片、狗骨胶、双膝骨胶宝的药物治疗后大鼠RANKL阳性表达量明显降低(P<0.001)。结论狗骨胶中相对含量较高的海藻糖、苦参碱、柠檬酸、氨基酸等成分与骨质疏松症相关联,相对含量较高的氨基酸以羟脯氨酸、脯氨酸为主,与骨质疏松症治疗关系密切;狗骨胶中含有的胶束化成分琥珀酸盐、硬脂酸具有增溶效果可促吸收,B族维生素有利于维持维生素的稳定性促进营养物质的吸收。狗骨胶、双膝骨胶宝均可通过调节骨密度水平、骨新陈代谢水平等方式抵抗骨质的流失,可调节RANKL/RANK/OPG信号通路,降低TRAF6含量抑制NF-κB1的炎症反应,通过调控RANKL/OPG/TRAF6信号通路达到抗骨质疏松症疗效。

李佳洋[5](2021)在《基于JNK/p38通路探讨培本固疏方治疗绝经后骨质疏松症的作用机制》文中指出目的:通过观察去卵巢大鼠的骨密度、骨生物力学指标、骨微结构、炎性因子指标,基于JNK/p38信号通路,验证培本固疏方对绝经后骨质疏松的治疗作用,探讨其作用机制。方法:36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、培本固疏方低剂量组、培本固疏方中剂量组、培本固疏方高剂量组与阿仑膦酸钠组,每组6只。假手术组仅将卵巢旁脂肪组织切除,其余组通过去卵巢法(OVX)建立大鼠绝经后骨质疏松模型。造模4周后开始给药,采用灌胃方式给药,假手术组与模型组均每日给予NS 1ml/200g;中药低、中、高剂量组每日分别给予低、中、高剂量的培本固疏方制剂1ml/200g,(生药浓度分别为1.0605g/ml,2.121g/ml,4.242g/ml);阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液1ml/200g(浓度为0.21mg/ml)。干预8周后检测观察并分析指标。骨密度仪检测大鼠腰椎L5的骨密度,三点弯曲试验仪检测左侧股骨屈服载荷、断裂载荷、刚度,HE切片染色观察右侧股骨微结构,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β含量,WesternBlot检测股骨JNK、与股骨p38表达量。结果:和假手术组相比,模型组大鼠L5腰椎骨密度显着减少(P<0.01),左侧股骨的屈服载荷、断裂载荷、刚度均下降(P<0.01),骨微结构破坏,血清TNF-α、IL-1β,骨组织JNK、p38蛋白含量均升高(P<0.01);与模型组比较,中、高剂量及阿仑膦酸钠组骨密度、屈服载荷均显着上升(P<0.01);高剂量组、阿仑膦酸钠组断裂载荷显着上升(P<0.01、P<0.001);中剂量组、阿仑膦酸钠组刚度显着上升(P<0.05)。各干预组骨微结构逐渐好转,血清TNF-α、IL-1β含量均降低(P<0.01),骨组织JNK、p38蛋白含量均降低(P<0.05)。结论:1.培本固疏方可以有效改善大鼠骨密度、骨骼质量及骨微观结构,治疗绝经后骨质疏松症。2.培本固疏方可下调炎性因子IL-1β、TNF-α的表达水平,抑制炎性反应,进而治疗绝经后骨质疏松症。3.培本固疏方可下调JNK/p38信号通路,或通过抑制炎性因子IL-1β、TNF-α间接抑制JNK/p38通路的激活,从而发挥抗绝经后骨质疏松作用。

康胜[6](2021)在《基于KL/FGF23信号通路探讨二苯乙烯苷影响绝经后骨质疏松大鼠的机制研究》文中研究说明目的:1.二苯乙烯苷对绝经后骨质疏松的疗效评价;2.观察二苯乙烯苷在治疗绝经后骨质疏松的过程中对雌激素和钙磷代谢的影响;3.进一步探讨二苯乙烯苷是否通过KL/FGF23信号通路发挥抗骨质疏松的作用。材料与方法:选取3月龄SD雌性大鼠40只,分为4组,每组10只。包括:正常组、模型组、实验组(二苯乙烯苷组)、对照组(雷洛昔芬组)。除正常组以外的其余各组行双侧卵巢摘除法,建立PMOP大鼠模型。术后第7天开始,持续给药8周。末次给药后麻醉大鼠进行双能X线骨密度检测,取材后分步进行椎体骨应力检测,全自动生化分析仪检测血钙磷,ELISA法检测雌激素、FGF23,HE染色法观察右侧股骨形态,免疫组织化学法检测KL蛋白表达水平,各项检测结果进行统计学分析。结果:1.二苯乙烯苷可以对绝经后骨质疏松产生有效治疗作用,改善骨结构,恢复骨应力:与正常组相比,模型组骨密度值明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,实验组和对照组骨密度值均上升,差异具有统计学意义(P<0.05);骨质疏松模型建立后大鼠体重增长,模型组与正常组对比差异具有统计学意义(P<0.01);进行治疗后,实验组与对照组体重明显降低,与模型组对比差异具有统计学意义(P<0.05);与正常组相比,模型组子宫指数较低,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,实验组与对照组子宫指数较高,差异具有统计学意义(P<0.05);HE染色法观察发现正常组骨切片骨小梁结构完整,连续性好,骨小梁占比高;模型组骨小梁稀疏,间隙变大,连续性变差;实验组与对照组骨小梁致密,连续性良好,骨小梁数目多;与正常组相比,模型组各项骨应力检测值下降明显,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,实验组和对照组各项骨应力指标均上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.二苯乙烯苷可以调控去势大鼠雌激素和血钙磷含量影响骨代谢:与正常组相比,模型组雌激素含量较低,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,实验组与对照组雌激素水平具有不同程度提高,差异具有统计学意义(P<0.05);模型组血清钙含量较低,与正常组对比差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,实验组与对照组血清钙含量均上升,差异具有统计学意义(P<0.05);模型组血清磷含量较高,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,实验组与对照组血清磷含量均下降,差异具有统计学意义(P<0.05);3.二苯乙烯苷可以影响Kl、FGF23蛋白表达:与正常组相比,模型组FGF23含量较高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,实验组与对照组FGF23含量均下降,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学染色法发现模型组Kl蛋白表达含量较低,实验组和对照组均能提高Kl蛋白的表达;结论:1.二苯乙烯苷可以有效影响绝经后骨质疏松症,促进骨形成,恢复骨结构;2.二苯乙烯苷可以上调去势大鼠雌激素水平,减少钙流失,恢复钙磷调节,影响骨代谢;3.二苯乙烯苷可以促进KL蛋白的表达,抑制FGF23蛋白的表达发挥抗骨质疏松的作用,但Kl-FGF23信号通路是否发挥作用需要进一步验证。

黄觅,王瑛,魏孝义,彭锐[7](2020)在《电镜技术在骨质疏松研究中的应用》文中研究表明骨质疏松症是一种以骨量减低、骨微结构破坏为主的隐匿性疾病,已成为严重影响中老年人群健康的慢病之一。电子显微镜(electron microscopy,EM)以其高精密度优势逐渐应用于医学科研及临床诊断。本文对近年来电镜技术在骨质疏松科研领域的应用与进展进行综述,介绍EM技术在骨质疏松研究领域中的应用,包括动物模型、细胞模型、临床研究、生物材料研究以及免疫电镜的应用。展望EM技术在骨质疏松研究领域的应用拓展及普及。

徐浩军[8](2020)在《温肾强骨丸治疗老年性脾肾阳虚型骨质疏松症的临床疗效观察》文中认为目的:观察温肾强骨丸在治疗脾肾阳虚型骨质疏松症中的临床疗效,观察其在患者腰背部疼痛的缓解、骨密度提高、中医证候改善、骨转换指标的改善、脆性骨折发生率的降低的作用,探讨其临床应用价值。方法:选取2017年9月至2018年12月期间在甘肃省中医院脊柱骨科门诊和病房就诊的老年性骨质疏松症患者,且根据《中药新药临床研究指导原则》进行中医证候的判定,选取126例脾肾阳虚证患者,按随机数字表法分为治疗组(n=42)、对照组(n=42)和基础治疗组(n=42)。基础治疗组给予西药抗骨质疏松治疗,对照组在基础治疗组上加服仙灵骨葆胶囊,治疗组在基础治疗组上加服温肾强骨丸,三组均治疗6个月。观察三组治疗后6个月骨密度值(BMD)改变情况、3、6个月疼痛评分(VAS)的改变、观察三组治疗前与治疗后3、6个月骨形成指标(OC)和骨吸收指标(DPD/Cr)的变化;对比三组治疗前与治疗后6个月中医证候积分的变化;治疗后对比观察至少12个月内三组发生脆性骨折的比率,运用SPSS21.0统计软件进行结果分析。结果:(1)三组患者治疗前年龄、性别、病程、中医证候积分等相关基础资料的对比,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)BMD值:治疗后三组BMD值比治疗前均有不同程度升高,比较差异有统计学意义(P<0.05);相对治疗前,治疗后治疗组与对照组对比差异无统计学意义(P>0.05),但治疗组与基础治疗组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)VAS评分:三组治疗后VAS评分与治疗前比较均有明显改善,比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组治疗后3个月VAS评分对比差异有统计学意义(P<0.05),对照组优于治疗组,治疗后6个月对比差异无统计学意义(P>0.05);治疗组与基础治疗组治疗后3个月、6个月VAS评分对比差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)中医证候积分:治疗组和对照组治疗后中医证候积分与治疗前相比均有明显改善,比较差异均有统计学意义(P<0.05),基础治疗组治疗前后差异无统计学意义(P>0.05);在治疗后治疗组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),治疗组改善效果明显;治疗组与基础治疗组治疗后中医证候积分相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)骨转换指标检测:治疗后三组观察的OC值与治疗前相比均有升高,其差异有统计学意义(P<0.05),治疗后3、6个月治疗组与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);但治疗后3、6个月治疗组与基础治疗组相比,治疗组优于基础治疗组,差异均有统计学意义。治疗后三组观察的DPD/Cr值与治疗前相比均有改善,与治疗前相比,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后3、6个月治疗组与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);但治疗后3、6个月治疗组与基础治疗组相比,治疗组优于基础治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(6)脆性骨折发生率:三组病例治疗后均随访12个月,随访期间三组病例共发生脆性骨折11例,其中治疗组发现2例,脆性骨折发生率为4.8%;对照组发现3例,脆性骨折发生率为7.1%;基础治疗组发现6例,脆性骨折发生率为14.3%,治疗组和对照组的脆性骨折发生率明显低于基础治疗组。结论:老年性脾肾阳虚型骨质疏松症患者给予温肾强骨丸干预,可有效缓解骨质疏松症导致的腰背部及下肢疼痛,增加患者的BDM值,改善患者畏寒、腰膝酸软症状,提高患者生活质量,对防治患者骨质疏松性骨折的发生具有一定价值,值得进一步研究及推广。

郭琪[9](2020)在《龟鹿三黄汤调节机体炎症微环境改善骨代谢防治乳腺癌骨质疏松临床对照研究》文中提出背景:乳腺癌内分泌治疗后引起的骨代谢异常是一种常见的并发症,如何改善调节骨微环境稳态以防治骨质疏松是临床研究热点之一。中医认为患者发病多为肝肾两虚,临床证实补益肝肾类方药治疗该阶段骨质疏松疗效确切,但其相关治则治法机制探索尚未取得突破性进展。我们临床应用发现,以补益肝肾法为指导的龟鹿三黄汤可改善骨代谢异常状态,其中三黄煎剂能够影响乳腺恶性肿瘤患者体内肿瘤细胞所处内环境,降低机体内氧化应激血清学相关指标水平,同时具有抗炎、改善机体血瘀相关指标及增强总体抗肿瘤疗效,龟板胶与鹿角胶乃血肉有情之品,具备良好的添精补髓、滋养肝肾功效,将龟板胶与鹿角胶加入三黄煎剂中,形成龟鹿三黄汤,以此方针对肝肾两虚的乳腺癌内分泌治疗患者,进一步推测其作用机制与调节患者体内的相关炎症介质IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、IL-1 β、TNF-α及骨胶原相关因子PINP、β-CTX、N-MID相关,其变化可由调控患者机体应激N0、SOD、MDA情况、雌激素情况基础上调控。目的:探索龟鹿三黄汤调节患者骨微环境代谢异常的临床相关作用机制及靶点,为开发新型内分泌治疗后引起骨质疏松类中药提供依据。方法:根据纳入标准选择研究对象,随机分为对照组30例及治疗组患者30例。治疗组口服内分泌药物外加用中药汤剂龟鹿三黄汤+钙尔奇口服;对照组单纯内分泌治疗+钙尔奇。各组患者治疗前、治疗后3个月、6个月各观察记录一次中医症状量表、骨质疏松量表、生活质量量表SF、Karnofsky(KPS)卡氏评分、实验室检查项目(雌激素水平、IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、IL-1β、TNF-α、NO、SOD、MDA、CEA、CA125、CA153、PINP、β-CTX、N-MID)、腰椎骨密度;血常规、肝肾功能、肝胆胰脾彩超、心电图、(全部病例治疗前、治疗3个月后、治疗6个月必检项);胸部CT全部病例治疗前、治疗6个月必检项,了解各组患者用药后有效性及安全性。结果:本研究在调研跟踪肝肾亏虚型乳腺癌内分泌治疗患者在治疗期间的骨代谢异常情况,对照组单纯服用钙片,治疗组在服用钙片基础上服用龟鹿三黄汤,期间检测症状学、血清学等各项指标,同时监测两组患者在治疗期间血常规、肝肾功、心电图、肝胆胰脾彩超、胸部CT无明显异常。患者在服用龟鹿三黄汤6个月后,肝肾亏虚型患者症状评分较治疗前,治疗组改善总体水平高于对照组(P<0.05);这一结果符合中国骨质疏松量表调查结果,治疗组应用龟鹿三黄汤6个月后生活质量评分升高(p<0.05),疼痛、身体机能、精神心理状总评分尤为突出;生活质量量表SF调查结果提示,治疗组在6月后,体力活动及自我健康评价均有改善(p<0.05),提高了患者的部分生活质量;KPS评分,主要针对患者能否耐受抗肿瘤治疗进行实时监测,结果得出,治疗组评分升高优于对照组(p<0.05),患者能很好的耐受目前治疗方案。实验室检测中:治疗组在运用龟鹿三黄汤后,N0较前降低,SOD较前略升高(p<0.05),优于对照组,提示龟鹿三黄汤依然可以很好的改善患者体内的氧化应激情况;在监测患者炎症因子水平中,治疗组治疗6个月后较对照组,IL-2 较前升高(p<0.05),IL-10、IL-1β、TNF-α 较前降低(p<0.05),提示龟鹿三黄汤可改善机体炎症状态,已达到提高抗肿瘤、降低骨破坏的功效;为证实龟鹿三黄汤对骨代谢异常的干预,进行了骨代谢指标及骨密度指标的检测,发现治疗组治疗6个月后,PINP、β-CTX较治疗前降低(p<0.05),提示龟鹿三黄汤可改善骨合成及骨吸收情况;骨密度检测结果可看出,治疗6个月后,治疗组骨矿含量升高,且优于对照组(p<0.05);在肿瘤标记物监测中,发现两组对肿瘤标记物均略有改善,其中治疗组CEA改善明显(p<0.05);检测雌激素水平(p>0.05),两组治疗后均无明显影响(p>0.05),提示加用龟鹿三黄汤并不影响内分泌治疗效果。结论:龟鹿三黄汤可通过改善体内相关炎症因子并减少体内氧化应激反应微环境,降低骨质异常代谢情况,减少骨吸收、增加骨形成;同时不影响内分泌治疗效果。

郭海玲,杨光月,商海滨,吴玉云,庞坚,詹红生,赵咏芳[10](2019)在《密骨胶囊对去卵巢大鼠骨内血管内皮生长因子及其受体表达的影响》文中提出目的观察密骨胶囊对去卵巢大鼠骨内血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响。方法取3月龄雌性Wistar大鼠,运用卵巢切除手术建立骨质疏松模型。模型成功后随机分为模型组、密骨胶囊组,同时设立对照组。密骨胶囊组予密骨胶囊混悬液3 m L/d,模型组和对照组予相同体积生理盐水。检测大鼠左侧股骨的骨密度;运用三点弯曲实验方法检测右侧股骨的生物力学性能;运用Real-time q PCR和Western blot检测股骨内VEGF、VEGF受体1(VEGFR1)及VEGF受体2(VEGFR2)的表达。结果模型组股骨骨密度低于对照组,密骨胶囊组股骨骨密度高于模型组,且均有统计学差异。卵巢切除后股骨生物力学性能指标降低,密骨胶囊可以改善股骨生物力学性能,但未见统计学差异。大鼠去卵巢后,骨内VEGF、VEGFR1和VEGFR2 m RNA和蛋白表达均降低,密骨胶囊可以促进骨内VEGF和VEGFR2 m RNA和蛋白表达,而VEGFR1 m RNA和蛋白表达未见明显变化。结论密骨胶囊可以增加骨质疏松大鼠的股骨骨密度,可能是通过促进骨内VEGF及其受体VEGFR2的表达实现的。

二、密骨煎防治去卵巢大鼠骨丢失的双能X线扫描观察(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、密骨煎防治去卵巢大鼠骨丢失的双能X线扫描观察(论文提纲范文)

(1)基于成骨和破骨细胞PI3K/Akt信号通路的右归丸对雌雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用性别差异的机制研究(论文提纲范文)

中文摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
文献综述 中医药防治骨质疏松症的研究进展
    参考文献
前言
实验一 右归丸对雌、雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用差异及对PI3K/Akt信号通路的影响
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 统计学分析
    结果
        1 右归丸对雌、雄去势大鼠腰椎BMD变化率的影响
        2 右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨微观结构的影响
        3 右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中OPG、RANKL蛋白表达及RANKL/OPG比值的影响
        4 右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中成骨细胞BGP蛋白表达的影响
        5 右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中成骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响
        6 右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中破骨细胞TRAP蛋白表达的影响
        7 右归丸对雌、雄去势大鼠胫骨骨髓中破骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响
    小结
实验二 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 统计学分析
    结果
        1 成骨细胞形态学观察
        2 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞BGP蛋白表达的影响
        3 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达及RANKL/OPG比值的影响
        4 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞PI3K、Akt、GSK3β、β-catenin和Runx2 mRNA表达的影响
        5 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对成骨细胞p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3β、β-catenin和RUNX2蛋白表达影响
    小结
实验三 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞PI3K/Akt信号通路的影响
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 统计学分析
    结果
        1 破骨细胞形态学观察
        2 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞分化的影响
        3 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响
        4 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞TRAP蛋白表达的影响
        5 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞PI3K、Akt、TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA表达的影响
        6 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清对破骨细胞p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达的影响
    小结
实验四 雌、雄去势大鼠右归丸含药血清在PI3K激动剂作用下对破骨细胞分化、功能及其PI3K/Akt信号通路的影响
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
        3 统计学分析
    结果
        1 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞分化中的作用
        2 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞功能中的作用
        3 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞TRAF6、c-Src、NFATc1 mRNA表达的作用
        4 PI3K/Akt信号通路在雌、雄去势大鼠右归丸含药血清抑制破骨细胞TRAF6、c-Src、NFATc1蛋白表达中的作用
    小结
讨论
结论
创新点
参考文献
在学期间主要研究成果
致谢
附图
附件

(2)基于TGF-β1及Smad2/3信号通路探讨龟鹿二仙膏干预糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松大鼠的作用机制(论文提纲范文)

摘要
abstract
英文缩略词表
前言
材料与方法
实验结果
讨论
结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
附图
综述 中医药通过TGF-β1/Smads信号通路治疗骨质疏松症的实验研究进展
    参考文献
个人简介
在学期间科研成绩
致谢

(3)骨伤1号方对实验性绝经后骨质疏松性骨折的疗效观察及机制研究(论文提纲范文)

中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 骨伤1 号方对绝经后骨质疏松性骨折大鼠模型的药效学实验研究
    第一节 骨伤1 号方对绝经后骨质疏松性骨折大鼠模型的血清离子含量影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.结论
    第二节 骨伤1 号方对实验大鼠骨痂生成及骨折线消失影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.结论
    第三节 骨伤1 号方对实验大鼠骨组织生物力学影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.结论
    第四节 骨伤1 号方对实验大鼠骨组织形态计量学的影响
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.结论
    章节讨论
    全章小结
第二部分 骨伤1 号方治疗实验性骨质疏松骨折的细胞分子机制研究
    第一节 骨伤1 号方干预破骨细胞作用
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.结论
    第二节 骨伤1 号方干预成骨细胞作用
        1.实验材料
        2.实验方法
        3.实验结果
        4.结论
    章节讨论
    全章小结
全文总结
创新点及意义
思考与展望
参考文献
附录
    附录一
    附录二:中英文缩略词对照表
    附录三:细胞培养照片
文献综述 绝经后骨质疏松骨折动物模型的研究进展
    参考文献 Reference
在学期间研究成果
致谢
个人简历

(4)狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
符号说明
文献综述
    综述一: 动物药狗骨在中医领域的历史沿革与应用
        1. 从狗的历史文化到药用价值
        2. 狗骨的药用历史沿革进展
        3. 讨论
        4. 参考文献
    综述二: 狗骨胶及其相关复方治疗骨质疏松症现代研究及进展
        1. 狗骨(胶)成分、药理基础研究
        2. 狗骨不同剂型的现代研究及应用
        3. 狗骨胶不同剂型的现代研究及应用
        4. 讨论
        5. 参考文献
    综述三: 含胶类复方治疗骨科类疾病常用药物的配伍规律研究
        1. 资料来源及方法
        2. 结果
        3. 讨论
        4. 参考文献
    综述四: 骨质疏松症发病机理及RANKL/OPG/TRAF6相关机制研究进展
        1. 骨质疏松症疾病的患病率
        2. 骨质疏松症发病与骨代谢关联性
        3. 骨质疏松症RANK/RANKL/OPG通路研究进展
        4. 骨质疏松症与RANKL/OPG/TRAF6信号通路的相关研究进展
        5. 参考文献
前言
第一部分: 理论研究
    理论研究一: 中医古籍文献对骨质疏松症的理论认知
        1. 骨痿的病机:虚实夹杂,骨枯髓减
        2. 骨痿的病因:年老体衰,诸多病因
        3. 骨痿的治疗:补益肾气,滋补阴阳
        4. 小结
    理论研究二: 基于“以形补形、五行生克”理论探究狗骨胶治疗骨质疏松症的理论基础
        1. 对“以形补形”理论应“不拘于泥,师于古,异中求同”
        2. 从“五行生克”探虎骨、狗骨抗骨质疏松症之理
        3. 骨胶常见用于治疗骨痿
        4. 讨论
        5. 小结
    理论研究三: 双膝骨胶宝基于“温肾助阳,活血通经”法治疗骨质疏松症的理论探讨
        1. 双膝骨胶宝组成药物抗骨质疏松症理论探究
        2. 双膝骨胶宝整体方剂配伍特点
        3. 小结
第二部分: 实验研究
    实验一: 基于UHPLC-QE-MS技术的非靶标代谢组学探究狗骨胶、狗骨粉成分差异分析
        1. 试剂及仪器
        2. 实验流程
        3. 实验结果
        4. 讨论
        5. 小结
    实验二: 狗骨胶、双膝骨胶宝治疗维甲酸骨质疏松大鼠抗骨质疏松症疗效观察
        1. 实验材料
        2. 实验方法
        3. 实验结果
        4. 讨论
        5. 小结
    实验三: 狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症之骨代谢影响
        1. 实验材料
        2. 实验方法
        3. 实验结果
        4. 讨论
        5. 小结
    实验四: 狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究
        1. 实验材料
        2. 实验方法
        3. 实验结果
        4. 讨论
        5. 小结
结语与展望
    一、中医理论研究结果显示
    二、实验研究结果显示
    三、创新性
    四、不足与展望
参考文献
附录
致谢
在学期间主要研究成果

(5)基于JNK/p38通路探讨培本固疏方治疗绝经后骨质疏松症的作用机制(论文提纲范文)

摘要
Abstract
前言
第一部分 理论研究
    一 绝经后骨质疏松症的研究现状
        1 病因及危险因素
        2 治疗措施
        2.1 基础措施
        2.2 药物干预
        2.3 物理治疗
        2.4 康复治疗
        2.5 中医药疗法
    二 IL-1β、TNF-α、JNK/p38通路与绝经后骨质疏松症
        1 IL-1、TNF-α与骨代谢
        1.1 白细胞介素-1
        1.2 肿瘤坏死因子
        2 IL-1、TNF-α参与调控JNK/P38信号通路影响骨代谢
        2.1 JNK信号通路
        2.2 p38信号通路
        2.3 炎性因子与JNK/p38通路
    三 绝经后骨质疏松症的中医病机治则探讨
        1 骨质疏松的病因病机探讨
        1.1 五脏虚衰,阴阳两虚
        1.2 络虚邪瘀
        1.2.1 络病的含义与生理基础
        1.2.2 络病的病理变化与骨质疏松症
        2 骨质疏松的治则治法
        2.1 补虚荣络固其本
        2.2 祛邪通络治其标
    四 培本固疏方防治绝经后骨质疏松症的理论内涵
第二部分 实验研究
    1 实验目的
    2 实验材料与设备
        2.1 实验动物
        2.2 实验药物及试剂
        2.3 实验器材
    3 实验方法
        3.1 模型建立
        3.2 分组及干预
        3.3 标本采集及指标测定
        3.3.1 骨密度
        3.3.2 骨生物力学
        3.3.3 骨组织形态学(HE染色)
        3.3.4 血清炎性因子TNF-α、IL-1β
        3.3.5 骨组织JNK、p38表达量
    4 实验结果
        4.1 骨密度
        4.2 骨生物力学
        4.3 骨组织形态学
        4.4 血清IL-1β、TNF-α
        4.5 骨组织JNK、p38
    5 讨论
        5.1 动物模型的选择
        5.2 观察指标及实验结果分析
    6 结论
结语
参考文献
附录
攻读硕士学位期间取得的学术成果
致谢

(6)基于KL/FGF23信号通路探讨二苯乙烯苷影响绝经后骨质疏松大鼠的机制研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
英文缩略词表
前言
材料与方法
实验结果
讨论
结论
本研究创新性自我评价
参考文献
附图
综述 何首乌及其复方防治骨质疏松症的临床和实验研究进展
    参考文献
个人简介
在学期间科研成绩
致谢

(7)电镜技术在骨质疏松研究中的应用(论文提纲范文)

EM技术概述
EM技术在骨质疏松动物模型中的应用
    动物模型
    细胞模型
EM技术在临床研究中的应用
EM技术在生物材料研究中的应用
OP与免疫电镜

(8)温肾强骨丸治疗老年性脾肾阳虚型骨质疏松症的临床疗效观察(论文提纲范文)

摘要
Abstract
英文缩写词表
前言
第一部分 临床资料与方法
    1 研究对象
        1.1 病例来源
        1.2 诊断标准
        1.3 纳入标准
        1.4 排除标准
        1.5 脱落标准
    2 研究方法
        2.1 治疗方法
        2.1.1 基础治疗组
        2.1.2 对照组
        2.1.3 治疗组
        2.2 观察指标
        2.2.1 临床疗效观察指标
        2.2.2 安全性观察指标
        2.3 统计学处理
第二部分 研究结果
    1 一般资料对比
        1.1 年龄分布比较
        1.2 性别分布比较
        1.3 病程比较
        1.4 治疗前中医证候积分比较
    2 治疗疗效评价
        2.1 病例完成情况及安全性评价
        2.2 临床疗效观察评价
        2.2.1 治疗前后骨密度变化比较分析
        2.2.2 治疗前后VAS评分变化比较分析
        2.2.3 治疗前后中医证候积分变化对比分析
        2.2.4 治疗前后骨转换指标变化对比分析
        2.2.5 治疗后脆性骨折发生率对比分析
第三部分 讨论
    1 中医学关于骨质疏松症的辨证分型
        1.1 脾肾阳虚型
        1.2 肝肾阴虚型
        1.3 肾虚血瘀型
    2 现代医学关于骨质疏松症的认识
    3 脾肾阳虚型骨质疏松症的病机和中医药治疗
    4 温肾强骨丸的来源及方药分析
        4.1 温肾强骨丸的来源
        4.2 温肾强骨丸的药物组成及药效分析
    5 结果分析
结论
问题与展望
参考文献
综述 中西医药物治疗骨质疏松症的研究进展
    参考文献
致谢
附录
研究生学习期间主要研究成果

(9)龟鹿三黄汤调节机体炎症微环境改善骨代谢防治乳腺癌骨质疏松临床对照研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
缩略词表
前言
第一部分 理论研究
    1. 乳腺癌骨质疏松的现状:发生率及易发生的人群
    2. 现代医学治疗骨质疏松方法
    3. 炎症微环境与骨质疏松的研究进展
    4. 骨胶原代谢与骨质疏松的研究进展
    5. 炎症因子与肿瘤的研究进展
    6. 氧化应激与乳腺癌骨质疏松的研究进展
    7. 中医药改善骨质疏松研究现状
    8. 龟鹿三黄汤应用基础及研究进展
第二部分 临床研究
    1. 资料与方法
    2. 结果
    3. 小结
    4. 结论
讨论
结论
参考文献
综述
    1 病因病机
    2 治疗方案
        2.1 辨证施治
        2.2 中成药
        2.3 其他中医治疗方案
    3 中药治疗现代理论
        3.1 炎症因子
        3.2 调节干细胞
        3.3 调节骨髓内环境
        3.4 信号通路
        3.5 氧化应激
    4 结语
    参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
附件
致谢
作者简介

(10)密骨胶囊对去卵巢大鼠骨内血管内皮生长因子及其受体表达的影响(论文提纲范文)

1 材料与方法
    1.1 实验动物
    1.2实验药物及试剂
    1.3实验仪器
    1.4 实验方法
        1.4.1 造模方法
        1.4.2分组方法
        1.4.3干预方法
        1.4.4标本准备
    1.5 检测指标与方法
        1.5.1 股骨骨密度检测
        1.5.2股骨生物力学检测
        1.5.3 m RNA表达检测
        1.5.4蛋白表达检测
    1.6统计学方法
2 结果
    2.1 密骨胶囊对骨密度的影响
    2.2 密骨胶囊对生物力学的影响
    2.3密骨胶囊对VEGF及其受体表达的影响
3 讨论

四、密骨煎防治去卵巢大鼠骨丢失的双能X线扫描观察(论文参考文献)

  • [1]基于成骨和破骨细胞PI3K/Akt信号通路的右归丸对雌雄去势大鼠骨质疏松症治疗作用性别差异的机制研究[D]. 徐慧慧. 中国中医科学院, 2021
  • [2]基于TGF-β1及Smad2/3信号通路探讨龟鹿二仙膏干预糖皮质激素诱导肾虚骨质疏松大鼠的作用机制[D]. 张国光. 辽宁中医药大学, 2021
  • [3]骨伤1号方对实验性绝经后骨质疏松性骨折的疗效观察及机制研究[D]. 张露露. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
  • [4]狗骨胶、双膝骨胶宝抗骨质疏松症大鼠的疗效观察及RANKL/OPG/TRAF6信号通路研究[D]. 连雅君. 北京中医药大学, 2021
  • [5]基于JNK/p38通路探讨培本固疏方治疗绝经后骨质疏松症的作用机制[D]. 李佳洋. 南京中医药大学, 2021(01)
  • [6]基于KL/FGF23信号通路探讨二苯乙烯苷影响绝经后骨质疏松大鼠的机制研究[D]. 康胜. 辽宁中医药大学, 2021
  • [7]电镜技术在骨质疏松研究中的应用[J]. 黄觅,王瑛,魏孝义,彭锐. 中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志, 2020(06)
  • [8]温肾强骨丸治疗老年性脾肾阳虚型骨质疏松症的临床疗效观察[D]. 徐浩军. 甘肃中医药大学, 2020(11)
  • [9]龟鹿三黄汤调节机体炎症微环境改善骨代谢防治乳腺癌骨质疏松临床对照研究[D]. 郭琪. 南京中医药大学, 2020(08)
  • [10]密骨胶囊对去卵巢大鼠骨内血管内皮生长因子及其受体表达的影响[J]. 郭海玲,杨光月,商海滨,吴玉云,庞坚,詹红生,赵咏芳. 老年医学与保健, 2019(04)

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米骨煎双能X线扫描观察防治去势大鼠骨质流失
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