一、锌对致突变物诱发的CHO细胞突变的影响（论文文献综述）
余航[1]（2021）在《双酚化合物致突变性、对前致癌物作用的影响及代谢酶相关性》文中提出背景双酚类化合物（bisphenols,BPs）是一类新型有机污染物,具有广泛的环境与人体暴露。但是关于BPs的代谢活化、遗传毒性及作用机制仍不清楚。目的本研究拟探讨BPs对调控生物转化酶表达的三种核受体（Nuclear receptors,NRs）[如芳烃受体（aryl hydrocarbon receptor,AhR）、孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）、组成型雄甾烷受体（constitutive androstanereceptor,CAR）]和细胞色素P450（CYP）酶各亚型的表达水平的影响,分析BPs自身的致突变性和它们对数个前致突变物遗传毒作用的影响,从而对BPs本身及与常见前致癌物复合暴露情况下的环境危险度评价提供科学依据。方法采用计算机模拟分子对接分析BP-CYP酶蛋白（BPA、BPF、BPS分别与人CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2B6、CYP2E1、CYP3A4 组合）结合的亲和性和底物潜能,并以分子动力学方法模拟各BP化合物与AhR、PXR、CAR的结合。采用 V79-Mz（对照细胞系）、V79-hCYP1A1、V79-hCYP1A2、V79-hCYP1B1、V79-hCYP2B6、V79-hCYP2E1、V79-hCYP3A4-hOR 和人肝细胞瘤（C3A）细胞系（内源表达多个CYP酶）,按不同时程方案用BPs处理受试细胞,分析细胞毒性（CCK-8实验）和染色体损伤（微核试验）作用,验证分子对接关于底物预测的结果。进一步采用着丝粒蛋白B（centromereprotein B,CENP-B）免疫荧光显色分析所诱发的微核是否含有着丝粒,以区分致断裂与致非整倍体作用。采用Western blot法分别检测BPA、BPF、BPS、BPAF对人肝细胞瘤（HepG2）细胞NRs和CYPs酶蛋白表达的影响;以各BP化合物预处理HepG2细胞48 h,然后以苯并芘（BaP）、黄曲霉毒素B1（AFB1）、苯及4-（甲基亚硝胺基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）或者BP自身对细胞进行48 h染毒,以观察微核形成。结果（1）BPA、BPF、BPS 以 9h/15h（暴露/恢复）方案处理 V79-Mz 和V79-hCYP1A1、V79-hCYP1A2、V79-hCYP1B1、V79-hCYP2B6、V79-hCYP2E1、V79-hCYP3A4-hOR细胞,结果显示BPA、BPF、BPS对V79-hCYP1A1细胞均呈现诱发微核作用,而对V79-Mz细胞和另五种V79衍生细胞无作用或作用较弱。各BP化合物对C3A细胞在较低剂量（2.5～5μM）即呈现诱发微核效应,并具有浓度依赖性,此作用可被1-氨基苯并三唑（60μM,CYP酶广谱抑制剂）或7-羟基黄酮（5μM,CYP1A1特异性抑制剂）阻断。免疫荧光分析显示BPs对C3A细胞仅诱发不含着丝粒的微核增高（对含着丝粒微核细胞率无影响）。UDP-葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）和磺基转移酶（SULT）抑制剂共暴露可在一定程度增强BPs诱发微核作用。（2）BPA、BPF、BPS 和 BPAF以1nM～100nM 浓度处理HepG2 细胞48h后,AhR、PXR、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2E1、CYP3A4 的蛋白表达水平均增高,而CAR的蛋白水平则降低。四个受试BP在上述浓度范围均增强BaP、AFB1、苯、NNK诱发HepG2细胞微核形成的作用,使后者作用的阈浓度显着降低。（3）延长暴露时间（从48h变为72h或96h）使BPA、BPF、BPS和BPAF（单独或以不同方式联合暴露）对HepG2细胞诱发微核的作用明显增强;各BP化合物在100nM及以上浓度可显着增强其本身及另外BP化合物对HepG2细胞诱发微核作用。结论（1）BPs可由人CYP1A1酶所激活并产生染色体断裂作用,且Ⅱ相代谢酶参与双酚的代谢减毒作用。（2）BPs对在相当于人体实际内暴露的低浓度范围（1nM～100nM）可通过诱导AhR、PXR以及CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1、CYP2E1、CYP3A4蛋白表达而显着增强多种前致癌物（BaP、AFB1、苯、NNK）的细胞遗传毒作用。（3）BPs的细胞遗传毒作用可因持久暴露及多个同系物的联合暴露而显着增强。总之,在生物圈普遍存在的多种有机物复杂暴露的情况下,BPs借助于对人类细胞NRs和CYP酶的诱导作用,可增强重要致癌物作用;并且BPs持久性、多组分联合暴露对BPs自身遗传毒作用也呈现放大效应,其实际健康危害可能超过了目前学界的认知。
洪涵璐,赵伟,尹金宝[2]（2020）在《饮用水消毒副产物基因毒性与致癌性研究进展》文中研究说明简述了饮用水消毒副产物（DBPs）的基因毒性与致癌性的研究进展。从Ames试验、SOS/umu试验、彗星试验、微核试验及一些新颖的致突变试验结果对DBPs基因的毒性,以及从毒理学实验、流行病学研究和致癌风险评估3个方面对DBPs的致癌性进行了分析和总结,以期为今后饮用水DBPs毒性效应及其致毒机理研究提供参考,进而促进饮用水质量管理与立法的发展。
董俊青[3]（2020）在《遗传毒性物质响应菌株构建及其对农药样品的测试研究》文中研究指明近年来,人们的生活水平普遍提高,与此同时产生了很多环境污染问题,包括日常产出垃圾的随意丢弃问题,工业上的“三废”问题,农药残留及水环境的污染问题等,严重威胁着人类的生存和健康。为此,人们研发了多种检测环境中的微量遗传毒素的方法,其中物理化学中使用到的色谱和质谱检测技术能够有效地检测出环境中的痕量化学物质,但因其操作繁琐、成本高且测试时间长等缺点,未能在环境毒物检测中得到广泛使用。继而人们又开发出了微生物检测系统,其中,遗传毒性物质短期检测技术Ames试验和SOS/umu试验因其具有检测周期短、检测样品用量少、可靠性高等优势得到了广泛的应用。本研究基于SOS响应原理,选择了5种SOS启动子recA、imuA、qnrB、sulA、cda并选用噬菌体裂解基因SRRz作为启动子下游的报告基因,以大肠杆菌表达菌株E.coli BL21为宿主菌,构建了5种工程菌。将6个典型的遗传毒性物质分别与5种工程菌于37℃共孵育0.5-1 h后,菌株菌体密度开始下降并用肉眼可观察到菌体浊度的变化,验证了5种检测体系对遗传毒物检测的可行性并具有检测时间短,易于操作,成本低等优点;利用化学品诱导工程菌产生的细胞死亡率与药品浓度之间的剂量-效应关系计算得到5种工程菌对不同化学品的检测限,结果显示,工程菌E.coli BL21 pUC-RST（rec A启动子）对5-氟尿嘧啶、过氧化氢异丙苯、异菌脲和硫酸二甲酯四个化学品表现出了更强的响应,其检测限分别为1.2、2.1、1.1和6.6μg/m L,相比于传统SOS/umu实验的LOD值下降了92.5%、58.0%、66.7%和82.6%,此外,工程菌E.coli BL21 p UC-SST（sul A启动子）对异菌脲和硫酸二甲酯也表现出很好的灵敏性,其LOD相比传统SOS/umu实验的LOD值下降了72.7%和92.1%,而其它3株菌则针对不同的化学品会显示出不同的结果。采用具有更好灵敏性的工程菌E.coli BL21 pUC-RST对市售40种农药的遗传毒性进行筛查,结果显示其中16种农药具有遗传毒性。并把它们的检测限与国标GB2763-2016《食品中农药最大残留限量》中规定的农药最大残留限量作比较,结果表明,本研究构建的工程菌对市售的农药产品有很好的响应,并能够检测到低于国标最大残留限量的农药含量。因此,本研究构建的重组裂解筛查体系能够应用于环境中农药残留的检测实验,具有一定的实用价值。综上,本研究构建的遗传毒性物质检测体系具有如下优点:易于操作,检测周期短,所需样品用量少,成本低;并且对于遗传毒性物质响应性好,灵敏度高,检测范围较广泛,能够适用于实际环境样品的现场检测并实现高通量筛选。
孙丹[4]（2020）在《长白山红景天提取物抗氧化性、抗突变性和癌细胞生长抑制效果研究》文中研究表明红景天具有抗缺氧、抗氧化、抗肿瘤、神经调节等功效,且毒性较低,已被广泛应用于医药、保健和美容等领域。本文通过对长白山产红景天提取物抗氧化性、抗突变性和癌细胞生长抑制效果的研究,以期为其作为一种新的功能性材料在抗衰老、抗癌领域功效产品的开发和应用中提供参考,成为带动边疆少数民族地区经济增长的新支撑。试验方法:1、采用70%乙醇加热回流提取制备红景天提取物,通过DPPH、ABTS+、NO自由基清除试验以及Fe3+还原能力试验等,评价红景天提取物体外抗氧化效果。2、使用4NQO、MNNG、B（α）P及Trp-P-1对组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA98、TA100菌株进行诱变,通过Ames试验评价红景天提取物对变异物质活性的抑制效果。3、采用MTT染色法,通过人肺癌细胞（A549）、肝癌细胞（HepG2）、胃癌细胞（AGS）和乳腺癌细胞（MCF-7）相对活性检测,评价红景天提取物对癌细胞生长的抑制效果。试验结果:1、红景天提取物对DPPH、ABTS+、NO自由基的清除效果及对Fe3+的还原作用均随着浓度的增加呈现上升趋势,并有很好的线性关系。浓度为100 μg/mL时,其对DPPH、ABTS+、NO自由基的清除率分别为70.8%、55.6%、72.5%,清除效果显着。特别是红景天乙酸乙酯相提取物的IC50值为14.3 μg/mL,抗氧化活性最好。2、红景天提取物无致突变性,有一定的抗突变效果。浓度为200μg/Plate时,对MNNG诱导的TA98和TA100菌株的突变抑制率分别为82.8%和89.1%,对4NQO诱导的TA98和TA100菌株的突变抑制率分别为89.7%和91.5%,对B（α）P诱导的TA98和TA100菌株的突变抑制率分别为94.2%和95.7%,对Trp-P-1诱导的TA98和TA100菌株的突变抑制率分别为92.3%和93.8%。特别是红景天乙酸乙酯相提取物的抗突变性最明显。3、红景天提取物能够有效地抑制四种癌细胞的生长,且随着浓度的增加,对癌细胞的生长抑制作用逐渐增强。浓度为1.0 mg/mL时,对肺癌细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞和胃癌细胞的生长抑制率分别为88.5%、76.5%、70.8%和80.7%,特别是对肺癌细胞和胃癌细胞的生长抑制效果较强,抑制率均超过了80%。并且红景天乙酸乙酯相提取物对上述四种癌细胞的生长抑制效果最为显着。
李子焕[5]（2020）在《1-甲基芘基于代谢活化诱发细胞染色体损伤作用》文中指出背景1-甲基芘（1-MP）是烷基化多环芳烃的一个代表性化合物,具有肝脏致癌性。它的致癌作用依赖于代谢活化,即甲基的羟化和羟基的磺基结合这二步反应依次发生,以形成亲电子性终致癌物。本研究团队已证实1-MP对表达人类CYP1A2（或CYP2E1）和磺基转移酶（SULT）1A1的哺乳类细胞可诱发基因突变和微核形成;而1-羟甲基芘（1-HMP）作为中间代谢物经后者作用亦活化为遗传性代谢物。然而,代谢活化基础上1-MP诱发染色体损害的机制（断裂作用或致非整倍体作用）尚不清楚。目的本研究旨在探讨1-MP在代谢活化酶作用下对哺乳动物细胞染色体损伤作用类型:染色体断裂或丢失,及其对细胞有丝分裂和微管装置的影响。方法采用微核试验分析1-MP和1-HMP对人肝细胞瘤（HepG2）细胞和由其衍生的富含生物转化酶的C3A细胞的染色体效应;微核实验中受试细胞的暴露/恢复时间依细胞周期设计:暴露与恢复的总时长为2个细胞周期,短暴露(0.25周期-长恢复（1.75周期）和长暴露（2个周期、无恢复期）两种方案相结合（分别有利于断裂剂与致非整倍体剂的检出）。在此基础上采用抗着丝粒蛋白B免疫荧光法分析其微核含着丝粒的比率,并将此方法用于1-MP对重组表达人CYP1A2和SULT1A1的V79衍生细胞系（V79-hCYP1A2-hSULT1A1）诱发微核的分析。进一步采用微管蛋白（β-tubulin和γ-tubulin）免疫荧光分析受试物对细胞分裂中期纺锤丝和中心粒形态的影响。结果采用短暴露/长恢复方案,1-MP与1-HMP对C3A细胞分别在20μM和1μM以上浓度诱发微核形成,而对HepG2细胞无作用;上述受试物对C3A细胞的效应可被1-氨基苯三唑（60 μM,CYP酶抑制剂）和五氯酚（10 μM,SULT1抑制剂）所阻断。MP对V79-hCYP1A2-hSULT1A1细胞在20 μM浓度即可诱发微核,并且以着丝粒阴性的微核为主;然而其对V79-Mz对照细胞在80 μM浓度以上才可诱发微核,且微核以着丝粒阳性者为主。1-MP对C3A细胞在20μM浓度即可诱发微核,而对HepG2细胞则需要120 μM以上浓度才诱发微核,两种情况下形成的微核都单纯为着丝粒阴性。在短暴露后（不留恢复期）直接分析受试物对细胞有丝分裂中期微管装置的影响,结果1-MP和1-HMP在明显低于上述诱发微核阈浓度的水平即可诱发V79-hCYP1A2-hSULT1A1和C3A细胞有丝分裂中期纺锤体与中心粒形态异常。在长暴露、不留恢复期条件下进行微核试验,发现二受试物对C3A细胞在上述干扰有丝分裂作用的浓度水平也可诱发微核形成,且在较低浓度时（1～8μM）仅诱发着丝粒阳性的微核,提示1-MP经过代谢活化致非整倍体作用强度明显高于断裂作用。结论1-MP经过代谢活化,因浓度与作用时间（方案）的不同有致断裂或致非整倍体作用。在持续暴露条件下,致非整倍体作用较敏感;而短暴露/长恢复的条件下仅呈现较高浓度所致单纯断裂作用。鉴于实际上1-MP以低浓度、持续性暴露为特征,本研究结果提示它在代谢活化基础上通过损害微管结构干扰细胞有丝分裂及引起非整倍体的作用特征。
张晨霞[6]（2020）在《油炸鸡肉中杂环胺的形成及控制》文中进行了进一步梳理油炸广泛用于家庭烹饪、快餐店和食品工业,油炸食品具有酥脆质地,诱人风味和金黄色泽等特点成为人们理想又可口的食物。然而,国际癌症研究机构2017年公布的致癌物初步整理稿将油炸食品列入2A类致癌物清单中,这与其中杂环胺含量有着密切关系。杂环胺（heterocyclic aromatic amines,HCAs）是高温加工蛋白质丰富的食品时形成的一类致癌性、致突变性化合物,广泛存在于油炸肉制品中。油炸加工温度一般为150℃～200℃,在油炸过程中多种因素会影响杂环胺的产生,油炸肉制品中杂环胺的含量值得高度关注。因此,研究油炸对油炸肉制品中杂环胺形成的影响,建立油炸肉制品中杂环胺的抑制方法,具有重要理论意义与应用价值。本论文建立一种准确测定油脂和油炸食品中杂环胺的检测方法;以鸡肉为研究对象,探讨油炸工艺条件对油炸鸡肉中杂环胺含量的影响;研究添加抗氧化剂对杂环胺的抑制效果以及最佳使用条件,对于降低油炸肉制品中杂环胺的风险有重要意义;具体研究结论如下:（1）建立油脂及油炸食品中杂环胺的检测方法:采用含1%（体积分数）氨水的乙腈溶液萃取,乙腈饱和的正己烷脱脂,PCX固相萃取柱净化,超高效液相色谱-三重四极杆质谱（UPLC-MS/MS）法检测杂环胺,该方法线性关系良好,相关系数大于0.999,在3个加标水平下,杂环胺在油脂和油炸食品中的平均回收率为64.31%～113.8%,相对标准偏差为0.18%～9.26%,检出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分别为0.01～0.14 ng/g和0.09～0.38 ng/g。该方法具有灵敏、准确等优点,适用于油脂和油炸食品中杂环胺的检测。（2）探讨油炸工艺条件对油炸肉制品中杂环胺含量的影响:结果表明,油炸温度和油炸时间显着影响油炸鸡肉中杂环胺的生成;杂环胺的含量与样品表面积呈正相关关系;相同的油炸温度和时间下,煎炸用油的循环使用次数的增加也会导致油炸鸡肉中杂环胺的含量增加;煎炸用油的选择对油炸鸡肉中杂环胺含量有一定影响,炒香型油脂（浓香花生油和浓香菜籽油）对应的油炸鸡肉中杂环胺含量较高;在不同油炸温度下,氧化程度高的煎炸用油制得的油炸鸡肉中杂环胺含量总是高于新鲜油对应的油炸鸡肉。（3）研究两种抗氧化剂添加方式（鸡肉中添加和煎炸用油中添加）对油炸鸡肉中杂环胺的影响:在鸡肉中添加维生素E（Vitamin E,VE）、茶多酚和芝麻酚时,能抑制Me IQx、4,8-Di Me IQx、Ph IP和Harman的生成,但是却促进了Norharman的生成,这三种抗氧化剂对总的杂环胺的抑制率分别为15.6%、7.79%和25.7%。在煎炸用油中添加VE、茶多酚和芝麻酚时,能抑制Me IQx、4,8-Di Me IQx、Ph IP、Harman和Norharman的生成,对总的杂环胺的抑制率分别为51.2%、33.7%和29.8%。相对来说,在煎炸用油中添加抗氧化剂可以有效抑制油炸鸡肉中杂环胺的形成。（4）研究煎炸用油中添加抗氧化剂抑制杂环胺形成的最佳使用条件:茶多酚和VE对油炸鸡肉中杂环胺的抑制效果随着油炸温度增加而降低,在较低的油炸温度（160℃和180℃）下,茶多酚和VE能发挥更佳的抑制作用,在最佳抑制效果的温度下,茶多酚和VE对油炸鸡肉中总的杂环胺的抑制率分别为48.1%和51.2%;茶多酚和VE对油炸鸡肉中杂环胺的抑制效果随着添加量的增加而增大,添加量为400 mg/kg油时,达到最佳抑制效果,此时茶多酚和VE对油炸鸡肉中总的杂环胺的抑制率分别为45.2%和67.2%。
朱娜[7]（2019）在《几种前致突变物对与其活化细胞相互作用的V79细胞诱发微核作用》文中研究表明背景在受试细胞外形成的活性代谢物因其生物膜透过性不可确定,其对靶细胞的遗传毒作用也受影响。在受试细胞外形成的带负电荷的硫酸基结合物就不易进入靶细胞,并且一些细胞色素P450（CYP）酶形成的代谢产物也可能不耐受转运过程。目前遗传毒性试验中纳入的代谢活性主要是采用大鼠肝S9混合物,在受试细胞外形成的活性代谢物对生物膜的透过性及对跨距离迁移的承受性可能会有差异,不同代谢产物在生物利用度上的差异对毒效应的影响还缺少研究报道。目的本研究旨在揭示不同前致突变物在重组表达特定活化酶的细胞内转化为活性代谢物后,对缺乏特异活化酶的受试细胞的遗传毒作用差异,尤其是相较于受试物对相关代谢细胞直接作用的差异;以此了解体外代谢活化系统S9混合物对不同受试物遗传毒性检测效能的变异,并揭示重组表达生物转化酶的哺乳动物细胞系用于遗传毒性试验的独特价值。采用几种常见的前致突变物,包括1-甲基芘[1-methylpyrene,1-MP,由CYPs和磺基转移酶（SULTs）按次序经二步反应而活化]、1-羟甲基芘（1-hydroxymethyl pyrene,1-HMP,为1-MP的中间代谢物、依赖SULTs活化的前致突变物）、苯并（a）芘（Benzoapyrene,BaP,需要CYP1A1或CYP1B1活化的前致突变物）和黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1,需要CYP1A2或CYP3A4活化的前致突变物）,观察它们对表达其活化酶的重组V79细胞及与这些代谢型细胞以不同形式相交通的V79对照细胞诱发微核的作用。有关不同细胞间交通的形式包括:对照细胞与代谢细胞等比例混合培养,对照细胞与代谢细胞通过0.4 μm的微孔和1 mm距离（结合transwell培养系统）进行物质交换,以及受试细胞接受化学物与代谢细胞孵育后移出的培养液处理。微核试验的暴露/恢复时程为3h/21h。以Western blot法分析各受试细胞表达特定生物转化酶的相对水平。结果1-MP对同时表达人CYP1A2和人SULT1A1的V79衍生细胞系（V79-hCYP1A2-hSULT1A1）明显诱发微核形成,且效应呈浓度相关性。在以下另外的实验模型中,1-MP也呈现相似的诱发微核作用:（1）表达人CYP1A2的重组V79细胞（V79-hCYP1A2）与表达人SULT1A1的重组V79细胞（V79-hSULT1A1）按1:1混合培养,（2）应用上述transwell系统使受试细胞V79-hSULT1A1 与V79-hCYP1A2细胞相交通,以及（3）受试细胞V79-hSULT1A1接受转移自1-MP与V79-hCYP1 A2细胞孵育3h的培养液。1-HMP也对V79-hSULT1A1细胞明显诱发微核,然而在以下模型中1-HMP诱发微核作用都明显减弱:（1）受试细胞V79-Mz与V79-hSULT1A1在transwell系统中相交通,（2）V79-Mz细胞接受转移自1-HMP与V79-hSULT1A]细胞孵育后的培养液处理。BaP和AFB1对V79细胞在Aroclor 1254诱导的大鼠肝脏S9混合物存在的条件下,均诱发微核形成,且效应均呈浓度依赖性;与之相比较,相似效应也在BaP对重组表达人CYP1A1的V79细胞（V79-hCYP1A1）的微核试验观察到,而AFB1对V79-hCYP1 A2细胞的作用强度明显增高。此外,BaP对与V79-hCYP1A1细胞相交通的V79-Mz细胞诱发微核作用与其对V79-hCYP1A1细胞的直接作用强度相似;相反,AFB1对与V79-hCYP1A2细胞相交通的V79-Mz在受试浓度下微核试验结果为阴性。结论本研究结果提示,1-MP的终毒物（1-甲磺基花,1-sulfoxymethylpyrene）扩散进入靶细胞发挥作用的机会远低于不带电荷的1-HMP;而AFB1的活化产物（AFB1-8,9-环氧化物）对缺乏代谢能力的靶细胞的生物可及性很低（远低于BaP的活性代谢物）,尤其不能经受一定的扩散距离,难以跨膜及跨距离转运而作用于靶细胞。本研究结果支持重组表达生物转化酶的哺乳动物细胞系用于遗传毒性试验的重要性。
金桂芳[8]（2019）在《CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验模型探讨及在多氯联苯诱发基因突变研究中的应用》文中认为有机致癌物自身通常缺乏生物反应性,需要经过代谢活化才具有致突变和致癌性。化学物的致突变性筛查通常采用体外细胞遗传毒理学试验,然而,由于常规细胞缺少生物转化酶活性,易致假阴性结果。采用体外代谢活化系统（如大鼠肝脏S9混合物）可增加致突变物的检出率。然而,某些重要的代谢酶在肝细胞中并不表达或者表达量不受常用诱导剂（如Aroclor 1254）影响,导致依赖相应酶活化的前致突变物在添加S9混合物的实验体系中也表现为阴性结果。采用重组表达特定细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）酶的细胞系作为遗传毒性研究的实验体系可明显增加前致突变物的检出率。CYP2E1是活化某些亲脂性小分子化合物的重要代谢酶,表达该酶的各种细胞模型已被用于研究相关前致突变物的遗传毒作用,然而关于细胞内表达代谢酶的实验体系与细胞外添加S9混合物的活化体系的比较优势尚未见报道。N-二乙基亚硝胺（NDEA）是重要的食品污染物及肝脏诱癌剂,在缺乏代谢酶活性的实验体系中遗传毒性试验结果为阴性,只有在添加S9混合物并采用高浓度处理才表现致突变作用。有研究提示其可能经CYP2E1酶代谢活化。本研究采用表达人CYP2E1酶的重组中国仓鼠（V79）细胞和人肝（L-02）细胞研究NDEA的遗传毒性及其对CYP2E1酶的依赖性,并将其与在S9混合物作用下对缺乏代谢活性的V79-Mz（无CYP酶表达）细胞的效应进行比较,以探讨细胞内酶表达体系用于体外遗传毒性研究的优势。由于CYP2E1的底物一般为有机物,试验中需要有机溶剂助溶。然而,据报道常用的有机溶剂二甲基亚砜（DMSO）可抑制CYPs酶活性,其中以对CYP2E1酶的作用最强;而其他许多有机溶剂（如甲醇、氯仿、丙酮等）不巧却均为CYP2E1底物,不适合作为相关遗传毒性试验的受试物助溶剂。DMSO是否会影响前致癌物经人CYP2E1活化产生的遗传毒作用迄今无报道,考虑到DMSO浓度对相关实验模型可能构成重要的影响,本研究选择NDEA（可兼溶于水和有机相）作为模型前致突变物探讨DMSO对人CYP2E1依赖性遗传毒作用的影响,为优化CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验模型的实验条件提供可靠依据。多氯联苯是具有致癌效应的持久性有机污染物,但其代谢活化酶和致突变效应一直未明确。本课题组报道了一氯联苯和二氯联苯经CYP2E1活化后可对哺乳动物细胞诱发微核和基因突变作用。空气和人体样本检测结果显示,某些三氯、四氯联苯的暴露水平比一氯、二氯联苯更高,具有更大的潜在健康风险,但遗传毒理学试验数据缺乏。本研究还将使用已优化的CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验体系探讨三氯联苯、四氯联苯化合物经人类CYP2E1酶代谢活化导致基因突变作用及突变类型,并探讨PCBs在联苯骨架上氯取代基增加对遗传毒性强度的影响。目的1.探明NDEA经CYP2E1酶代谢活化在哺乳动物细胞中导致的遗传毒作用及细胞内CYP2E1酶活化实验体系相对于S9混合物体系的优势,并评价DMSO作为溶剂应用于相关遗传毒性试验的适用性,提出不干扰试验结果的DMSO浓度限值,以优化CYP2E1酶依赖性遗传毒性试验的条件。2.探讨非共平面（非二恶英样）三氯联苯和四氯联苯化合物（PCB 22、PCB 28、PCB 52、PCB 74）对重组表达人CYP2E1的哺乳动物细胞诱发Hprt基因突变作用,并了解受试物诱发突变子的Hprt基因序列改变特征。方法1.受试细胞系:V79-Mz,表达人CYP2E1酶的重组V79细胞系（V79-hCYP2E1）,以后者为母体细胞构建的同时表达人硫酸基转移酶（SULT）1A1的重组V79细胞系（V79-hCYP2E1-hSULT1A1）,以及人肝细胞（L-02）系。2.受试化合物:NDEA、2,3,4’-三氯联苯（PCB22）、2,4,4’-三氯联苯（PCB 28）、2,2’,5,5’-四氯联苯（PCB 52）和2,4,4’,5-四氯联苯（PCB 74）。3.试验方法:采用CCK-8试验分析细胞毒作用,用微核试验、Hprt致突变试验测试遗传毒作用;免疫印迹（Western Blot）试验和实时荧光定量PCR（Q-PCR）检测CYP2E1蛋白和mRNA水平;采用基因测序技术分析突变细胞Hprt基因碱基序列改变。结果1.CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验模型探讨（1）NDEA依赖人CYP2E1酶的致突变作用及其在不同实验体系中遗传毒性强度的比较①NDEA对V79-Mz细胞无诱发微核或致突变作用,然而它对V79-hCYPE1-hSULT1A1和L-02细胞可诱发微核和/或/Hprt突变,且该作用可被CYP酶抑制剂或CYP2E1专一抑制剂所阻断。②NDEA对V79-hCYPE1-hSULT1A1细胞诱发微核作用的强度和效能显着高于其对添加S9混合物的V79-Mz细胞的效应。（2）CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验条件的优化—溶剂DMSO工作浓度探讨①DMSO在0.05%～0.2%（v:v）浓度范围内不影响NDEA对V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞诱发微核和基因突变作用;DMSO在0.1%和0.2%浓度即分别明显降低NDEA对L-02诱发微核和对V79-hCYP2E1细胞（CYP2E1蛋白水平均远低于V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞）致突变作用。②DMSO在0.05%～0.2%浓度范围不影响V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞CYP2E1蛋白水平,并且对上述细胞以及V79-hCYP2E1和L-02细胞CYP2E1的mRNA水平也无影响。2.几个三氯联苯、四氯联苯化合物对V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞的致突变作用（1）受试PCBs（PCB22、PCB28、PCB52、PCB74）对V79-Mz细胞无致突变作用,对V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞（五氯酚同时暴露以抑制SULU1A1）均诱发Hprt基因突变,且有浓度相关性。（2）从PCB 74（四氯联苯）致突变作用的强度和效能均明显高于PCB 28（三氯联苯,化学结构与前者高度相似）来看,氯化程度的增高未必导致致突变性减弱,甚至可增强。（3）以PCB 28和PCB 52诱发的突变子为代表,基因测序结果提示Hprt基因突变以碱基置换及外显子缺失为主要特征;阳性对照NDEA诱发的突变的主要类型为碱基置换,A:T-→G:C出现频率最高。结论1.表达人CYP2E1的重组细胞比人肝L-02细胞及V79-Mz（添加S9混合物）具有更好的代谢活化效果,是更适用于研究CYP2E1依赖性前致突变物的实验模型;该实验体系中作为受试物溶剂的DMSO在0.05%至0.2%浓度范围一般不影响试验结果,尤其是当CYP2E1蛋白量相对充足时。2.非二恶英样化合物PCB 22、PCB 28、PCB 52、PCB 74具有依赖人CYP2E1酶的致突变作用,而氯化程度增加有时会增强致突变效应（PCB 22、PCB 52、PCB 74分别强于结构相似的PCB 5、PCB 9、PCB 28）;PCBs和阳性对照物NDEA诱发的突变类型包括单碱基置换、外显子缺失等,表现出以单碱基置换为主的特征。
张海珍[9]（2019）在《大青杨PuHSFA4a转录因子调控高锌胁迫应答的机理研究》文中认为锌（Zn）作为一种营养元素在植物体内发挥着重要的作用,是植物体内多种酶的必需成分,对植物的生长发育有着很重要的作用。随着人类排放的废物废水的增多,大量的重金属进入土壤中。当土壤中大量的锌元素被植物吸收后,会导致植物的生长受到抑制,严重时会导致植物死亡。当植物在高含量锌的土壤中生长时,自身也会有一系列的抗逆机制来应对高锌胁迫。目前大部分的研究都集中在锌转运子上,对锌解毒的转录因子及其调控机理的研究很少。本研究的目的是初步阐明大青杨PuHSFA4a转录因子调控高锌胁迫应答的分子作用机制。（1）在大青杨中克隆了 PuHSFA4a转录因子,发现这个转录因子能够特异性地提高大青杨的抗高锌能力。在大青杨受到高锌胁迫后,通过qRT-PCR和GUS染色发现这个转录因子在根部发挥作用。通过亚细胞定位发现这个转录因子定位于细胞核和细胞质中,说明了这个转录因子是组成型表达蛋白。转录自激活实验展现出PuHSFA4a的转录激活区域在蛋白序列上的214 AA到278 AA处,包含一个AHA1激活部位。（2）将获得的PuHSFA4a过表达、抑制表达转基因株系和野生型大青杨进行高锌胁迫,结果表明:在高锌胁迫下,与野生型大青杨相比PuHSFA4a过表达转基因株系有着更健壮的根系和产生更少量的活性氧（ROS）,说明过表达PuHSFA4a基因提高了大青杨的抗高锌能力;而PuHSFA4a抑制表达转基因株系与野生型相比有着更矮小的根系同时产生了更多的ROS,最终对高锌胁迫更敏感了。（3）对PuHSFA4a转录因子抗高锌胁迫的机理进行了更深入的探究。在正常生长和高锌胁迫后,将PuHSFA4a过表达和野生型大青杨的根部进行转录组测序,结果表明:PuHSFA4a转录因子通过调控下游与非生物胁迫相关或者是和根生长相关的基因来提高植物的抗高锌能力。（4）通过染色质免疫共沉淀（ChIP）、酵母单杂实验（Y1H）、双荧光素酶实验（LUC）和凝胶阻滞实验（EMSA）发现:PuHSFA4a结合谷胱甘肽-S-转移酶（PuGSTU17）和马铃薯糖蛋白型磷脂酶（PuPLA2）基因启动子上的HSE元件从而直接调控这两个基因的表达。（5）通过对PuGSTU17转基因株系和野生型大青杨进行表型观察和生理指标测定:发现过表达PuGSTU17基因提高了大青杨根部的GST酶活,降低了根部的ROS水平,最终提高了整个植物的抗高锌能力。对另一个靶基因PuPLA2进行了转基因表型观察:发现在正常生长和高锌胁迫后,PuPLA2过表达株系根部生长比野生型更茂盛。综上所述:PuHSFA4a转录因子一方面通过直接调控PuGSTU17功能基因来提高大青杨根部GST酶活,最终降低了胁迫后产生的ROS。另一方面通过正调控下游靶基因PuPLA2的表达来促进根部的生长,最终提高植物的抗高锌能力。本研究不仅首次发现了热激转录因子能够提高植物的的抗高锌能力,而且拓宽了转录因子调控高锌胁迫的机制。为林木重金属土壤修复提供了理论依据和参考,对于培育出重金属抗逆性强的植物具有重要意义,有很重要的应用前景。
蔡露[10]（2018）在《苯及其羟化代谢物对重组表达人CYP2E1的V79细胞致突变作用》文中提出苯（Benzene）是一种常见环境污染物和人类致癌物,尤以引发再生障碍性贫血和白血病令人关注。既往研究表明苯的慢性（包括致癌）毒效应是通过其活性代谢物来起作用的,即CYP2E1酶催化的反应产物。然而,迄今尚无报道苯在人CYP2E1酶活化条件下诱发基因突变作用;此外,本课题组近年报道苯及其代谢产物对重组表达人CYP2E1和人磺基转移酶（sulfotransferase,SULT）1A1的V79细胞诱发微核形成,并且证明CYP2E1对苯、苯酚、氢醌、儿茶酚及三羟基苯均具有活化作用,而人SULT1A1则具有代谢减毒作用。本研究进一步探讨苯、上述羟化物及其终毒物1,4-苯醌诱发V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞Hprt基因突变的作用,并对活性氧（ROS）作为其一种影响基因致突变效应作用机制的可能性进行了研究。目的1.以诱发基因突变作为观察终点,观察细胞内人CYP2E1酶对苯及其羟化代谢物苯酚、氢醌、儿茶酚、三羟基苯代谢活化作用。2.对苯、其一系列羟化代谢物或1,4-苯醌作用于细胞产生的ROS进行检测,以探讨氧化应激与代谢活化的关系及是否参与受试物的毒性作用。方法细胞毒性采用CCK-8试验来观察,暴露/恢复时程为72 h/0 h或24 h/48 h;Hprt致突变试验采用上述处理方案,按标准实验程序进行;以DCFH-DA为荧光染料用流式细胞术检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量。细胞毒性和ROS数据（均数±标准差,分别含6与4个重复样）用方差分析进行统计学推断;基因突变数据按计数资料（合并2个重复数据）采用确切概率法处理。结果1.CCK-8试验结果提示6种受试物对V79-hCYP2E1-hSULT1A1和V79-Mz细胞均呈现一定的细胞毒性,同一化合物不同细胞之间无明显差异,细胞毒性强度呈现苯<三羟基苯<苯酚<儿茶酚<苯醌<氢醌的次序;除苯以外其它化合物都表现出浓度依赖性细胞毒作用。2.苯在72 h/0 h试验条件下对两个细胞系均不呈现致突变作用;但在24 h/48 h实验条件下,苯诱发V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞基因突变,而对V79-Mz细胞结果阴性。其它5种受试物对V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞均可在72h暴露条件下诱发基因突变,并呈浓度相关性;致突变作用强度为苯<苯酚<三羟基苯<儿茶酚<氢醌<苯醌。对于V79-Mz细胞,苯、苯酚、三羟基苯和儿茶酚均无致突变作用,而苯醌的作用比氢醌强。3.经过ROS活性氧检测后发现,在实验浓度范围内三羟基苯诱导细胞内ROS水平增高,且对V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞的作用微强于V79-Mz细胞。其它化合物对两种受试细胞都未明显改变ROS水平。结论本研究首次观察到苯对哺乳动物细胞诱发基因突变作用,而人CYP2E1酶是其必需的代谢活化酶;同时,实验结果支持人CYP2E1对各个羟化代谢物的进一步活化作用,也印证了 1,4-苯醌是苯的终致突变物。ROS并非上述化合物致突变作用的主要介导者。
二、锌对致突变物诱发的CHO细胞突变的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、锌对致突变物诱发的CHO细胞突变的影响（论文提纲范文）
（1）双酚化合物致突变性、对前致癌物作用的影响及代谢酶相关性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 双酚致染色体损害作用—人CYP1A1代谢活化及Ⅱ相酶减毒作用 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞系 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 主要溶液配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 计算机模拟分子对接 |
| 1.2.2 实时荧光定量PCR法 |
| 1.2.3 蛋白质免疫印迹(Western blot)实验 |
| 1.2.4 细胞毒性实验 |
| 1.2.5 微核实验 |
| 1.2.6 统计学分析 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 分子对接结果显示各BPs与人CYP底物潜能 |
| 1.3.2 C3A与HepG2细胞系之间各种CYP酶mRNA及蛋白水平的比较 |
| 1.3.3 V79-hCYP2B6细胞系的重组酶蛋白及其活性鉴定 |
| 1.3.4 BPs对V79-Mz和V79衍生细胞系微核形成的影响 |
| 1.3.5 BPs诱发C3A细胞微核形成以及CYP酶抑制剂的影响 |
| 1.3.6 磺胺苯咪唑对BPs和苯妥英诱发微核的差异性影响 |
| 1.3.7 Ⅱ相代谢酶对BPs遗传毒作用的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 BPs遗传毒性机制:致断裂作用 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 主要溶液配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细胞毒性(CCK-8)实验 |
| 2.2.2 微核CENP-B免疫荧光分析 |
| 2.2.3 In-cell Western blot检测γ-H2AX和p-H3 |
| 2.2.4 BPs暴露后细胞有丝分裂指数及中期细胞纺锤体、中心粒的观察 |
| 2.2.5 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 受试物诱发微核的CENP-B免疫荧光染色 |
| 2.3.2 BPs对V79-Mz、V79-hCYP1A1、C3A细胞诱发双链DNA断裂以及CYP抑制剂的影响 |
| 2.3.3 BPs对V79-Mz、V79-hCYP1A1和C3A细胞有丝分裂和有丝分裂装置的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 BPs通过诱导CYPs酶增强多种前致癌物遗传毒作用 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 细胞系 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 主要溶液配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 蛋白质免疫印迹(Western blot)试验 |
| 3.2.2 计算机分子动力学模拟 |
| 3.2.3 细胞毒性实验 |
| 3.2.4 微核实验 |
| 3.2.5 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 BPs对HepG2细胞NRs和CYPs蛋白表达的影响(预试)及蛋白印迹实验所用抗体特异性分析 |
| 3.3.2 BPs对HepG2细胞NRs和CYPs蛋白表达影响的定量分析结果 |
| 3.3.3 分子模拟BP-NR结合的构象特征和亲和力大小 |
| 3.3.4 BPs增强几种前致癌物对HepG2细胞诱发微核的作用 |
| 3.3.5 NRs/CYPs抑制剂对BPA增强前致癌物诱发微核作用的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 BPs延长或联合暴露对诱发微核效应的影响 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 HepG2细胞系 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 主要溶液配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 BPs不同暴露方案对AhR和CYP1A1的影响(Western blot) |
| 4.2.2 不同暴露方案下BP的细胞毒性实验(CCK-8) |
| 4.2.3 不同暴露方案下BPs诱发微核实验 |
| 4.2.4 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 BPs按不同时程暴露对HepG2细胞AhR、CYP1A1蛋白水平的差异性影响 |
| 4.3.2 BPs化合物间相互增强彼此诱发HepG2细胞微核的作用 |
| 4.3.3 BPs的延长或联合暴露对HepG2细胞诱发微核的增强效应 |
| 4.3.4 NRs激动剂和BPA预暴露对BPA诱发HepG2细胞微核的影响及CYP/NR抑制剂的干预作用 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文总结 |
| 本文的创新性与局限性 |
| 创新性 |
| 局限性 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 中英文缩略词表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（2）饮用水消毒副产物基因毒性与致癌性研究进展（论文提纲范文）
| 0前言 |
| 1 基因毒性研究进展 |
| 1.1 Ames试验与SOS/umu试验 |
| 1.2 彗星试验与微核试验 |
| 1.3 其他基因毒性研究方法 |
| 2 致癌性研究进展 |
| 2.1 三卤甲烷 |
| 2.2 卤乙酸 |
| 2.3 溴酸盐 |
| 2.4 醛类 |
| 2.5 亚硝胺类 |
| 2.6 卤代呋喃酮 |
| 2.7 卤代硝基甲烷 |
| 2.8 卤乙腈 |
| 3 流行病学研究进展 |
| 3.1 膀胱癌 |
| 3.2 结直肠癌 |
| 3.3 其他癌症 |
| 4 癌症风险评估研究进展 |
| 4.1 癌症风险评价 |
| 4.2 计算毒理学 |
| 5 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
（3）遗传毒性物质响应菌株构建及其对农药样品的测试研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 遗传毒性物质的特征及含义 |
| 1.1.1 遗传毒性物质的定义及其在环境中的毒理学行为 |
| 1.1.2 遗传毒性物质的分类 |
| 1.1.3 遗传毒性物质的致癌机理 |
| 1.2 遗传毒性物质的生物学检测方法及研究进展 |
| 1.2.1 染色体畸变实验(Chromosome aberrations assay) |
| 1.2.2 微核试验(Micronucleus assay) |
| 1.2.3 单细胞凝胶电泳实验 |
| 1.2.4 Ames试验 |
| 1.2.5 SOS/umu试验 |
| 1.3 检测方法的实际应用及研究进展 |
| 1.3.1 水环境污染方面 |
| 1.3.2 农药残留方面 |
| 1.3.3 药物安全评价方面 |
| 1.4 研究意义及主要内容 |
| 1.4.1 研究意义 |
| 1.4.2 主要内容 |
| 1.4.3 本研究的技术路线 |
| 第二章 遗传毒性物质测试菌株的构建 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验菌株 |
| 2.2.2 实验所需溶液的配制 |
| 2.2.3 实验主要试剂 |
| 2.2.4 实验主要仪器设备 |
| 2.3 实验方法与步骤 |
| 2.3.1 重组表达载体的构建 |
| 2.3.2 大肠杆菌克隆菌株E.coli DH5α的化学转化 |
| 2.3.3 重组表达载体的筛选与鉴定 |
| 2.3.4 大肠杆菌表达菌株E.coli BL21 的化学转化及验证 |
| 2.3.5 菌株的保藏 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 启动子的选择 |
| 2.4.2 启动子的合成 |
| 2.4.3 载体的双酶切 |
| 2.4.4 遗传毒性物质检测载体及工程菌的构建 |
| 2.4.5 工程菌的筛选与鉴定 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 不同工程菌对已知遗传毒性物质的响应检测 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验菌株 |
| 3.2.2 培养基与溶液 |
| 3.2.3 实验主要试剂 |
| 3.2.4 实验主要仪器设备 |
| 3.3 实验方法与步骤 |
| 3.3.1 菌株生长曲线的测定 |
| 3.3.2 经化学品诱导后工程菌OD600的测定 |
| 3.3.3 工程菌对不同化学试剂的响应浓度范围的测定 |
| 3.3.4 工程菌在化合物诱导下相对生长量(Relative growth)的测定 |
| 3.3.5 工程菌在化合物诱导下细胞死亡率(Cell death rate%)的测定 |
| 3.3.6 剂量-效应曲线 |
| 3.3.7 化学试剂最小响应浓度即检测限的计算 |
| 3.3.8 诱导比率(IR,inducing ratio)的计算 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 工程菌生长状态的检测 |
| 3.4.2 工程菌对已知毒物响应性的测试 |
| 3.4.3 工程菌对已知遗传毒性化合物的检测 |
| 3.4.4 工程菌对已知毒物的检测限分析 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 工程菌对市售农药遗传毒性的检测 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验试剂与仪器 |
| 4.2.1 实验菌株 |
| 4.2.2 培养基与溶液 |
| 4.2.3 实验主要试剂 |
| 4.2.4 实验主要仪器 |
| 4.3 实验方法与步骤 |
| 4.3.1 农药样品的配制 |
| 4.3.2 工程菌对农药遗传毒性的筛查 |
| 4.3.3 工程菌在农药诱导下相对生长量的测定 |
| 4.3.4 工程菌在农药诱导下细胞死亡率的测定 |
| 4.3.5 具有遗传毒性的农药检测限的计算 |
| 4.3.6 诱导比率的计算 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 农药所属种类的分析结果 |
| 4.4.2 工程菌对农药遗传毒性的筛查结果 |
| 4.4.3 农药诱导的工程菌相对生长量的测定结果 |
| 4.4.4 农药诱导的工程菌细胞死亡率的测定结果 |
| 4.4.5 农药产品检测限的计算结果 |
| 4.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（4）长白山红景天提取物抗氧化性、抗突变性和癌细胞生长抑制效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 红景天概述 |
| 1.2 红景天的研究现状 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 1.4 研究内容 |
| 第二章 红景天提取物抗氧化性研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 材料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 红景天提取物的制备 |
| 2.2.2 DPPH自由基清除试验 |
| 2.2.3 ABTS~+自由基清除试验 |
| 2.2.4 NO自由基清除试验 |
| 2.2.5 Fe~(3+)还原能力试验 |
| 2.2.6 红景天不同有机相提取物抗氧化活性测定 |
| 2.2.7 数据分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 红景天提取物对DPPH自由基清除率的影响 |
| 2.3.2 红景天提取物对ABTS~+自由基清除率的影响 |
| 2.3.3 红景天提取物对NO自由基清除率的影响 |
| 2.3.4 红景天提取物对Fe~(3+)还原能力的影响 |
| 2.3.5 红景天不同有机相提取物抗氧化活性 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 红景天提取物抗突变性研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 菌株与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 S-9混合液的制备 |
| 3.2.2 致突变试验 |
| 3.2.3 抗突变试验 |
| 3.2.4 数据分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 红景天提取物的致突变效果 |
| 3.3.2 红景天提取物的抗突变作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 红景天提取物对癌细胞的生长抑制效果研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 细胞株与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 红景天提取物的制备 |
| 4.2.2 细胞的复苏、传代、冻存 |
| 4.2.3 MTT法检测细胞相对活性 |
| 4.2.4 数据分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 红景天提取物对不同癌细胞的生长抑制效果 |
| 4.3.2 红景天不同有机相提取物对不同癌细胞的生长抑制效果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）1-甲基芘基于代谢活化诱发细胞染色体损伤作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 1-甲基芘的环境暴露、生物负荷和毒性作用 |
| 1.2 1-甲基芘的代谢活化 |
| 1.3 1-甲基芘由代谢激活的遗传毒作用 |
| 1.4 本研究的科学假说 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 试剂溶液的配置 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞毒性实验(CCK-8实验) |
| 2.4.2 微核实验(Micronucleus Test) |
| 2.4.3 微核抗着丝粒蛋白B(CENP-B)免疫荧光检测 |
| 2.4.4 中期相细胞有丝分裂器形态观察及细胞有丝分裂指数测定 |
| 2.4.5 免疫印迹(Western Blot)试验分析受试细胞酶蛋白量的表达 |
| 2.4.6 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 CYP1A2、SULT1A1酶在受试细胞中的酶蛋白表达水平 |
| 3.2 1-MP和1-HMP对四种受试细胞诱发微核作用(短暴露/长恢复方案) |
| 3.3 1-MP诱发细胞微核的着丝粒蛋白B(CENP-B)荧光免疫分析(短暴露/长恢复模型 |
| 3.4 受试物对细胞有丝分裂指数和中期微管装置形态的影响 |
| 3.5 1-MP和1-HMP在持续暴露条件下对HepG2和C3A细胞诱发微核作用 |
| 3.6 持续暴露条件下1-MP和1-HMP对C3A细胞诱发微核的着丝粒免疫荧光分析 |
| 第四章 讨论 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）油炸鸡肉中杂环胺的形成及控制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 杂环胺简介 |
| 1.1.1 杂环胺的结构与分类 |
| 1.1.2 杂环胺的生物毒性 |
| 1.2 油炸肉制品与杂环胺 |
| 1.3 国内外研究现状 |
| 1.3.1 杂环胺的分析方法 |
| 1.3.2 杂环胺的形成和抑制机理 |
| 1.3.3 影响油炸肉制品中杂环胺生成的因素 |
| 1.4 课题研究目的及内容 |
| 1.4.1 课题研究目的 |
| 1.4.2 课题研究内容 |
| 1.4.3 课题来源 |
| 2 超高效液相色谱-三重四极杆质谱检测油脂及油炸食品中7种杂环胺类化合物 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料和试剂 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.1.3 试验方法 |
| 2.1.4 试验方法 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 质谱条件的优化 |
| 2.2.2 流动相条件的优化 |
| 2.2.3 提取和净化条件的优化 |
| 2.2.4 样品基质效应的消除 |
| 2.2.5 方法的线性关系和相关系数 |
| 2.2.6 加标回收率和重复性 |
| 2.2.7 方法对比 |
| 2.2.8 方法应用 |
| 2.3 小结 |
| 3 不同油炸工艺条件对杂环胺形成的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 原料与试剂 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.1.3 油炸鸡肉的制备 |
| 3.1.4 油脂和油炸鸡肉中杂环胺的测定 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 原料中杂环胺含量分析 |
| 3.2.2 油炸过程中煎炸用油的油温变化情况 |
| 3.2.3 油炸温度和时间对杂环胺含量的影响 |
| 3.2.4 原料形状对杂环胺形成的影响 |
| 3.2.5 煎炸用油的种类对杂环胺形成的影响 |
| 3.2.6 煎炸用油循环使用对杂环胺形成的影响 |
| 3.2.7 煎炸用油氧化程度对杂环胺形成的影响 |
| 3.3 小结 |
| 4 油炸鸡肉中杂环胺的控制技术研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 原料与试剂 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.1.3 油炸鸡肉的制备 |
| 4.1.4 油脂和油炸鸡肉中杂环胺的测定 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 原料中杂环胺含量分析 |
| 4.2.2 抗氧化剂种类和添加方式对杂环胺的影响 |
| 4.2.3 不同油炸温度下抗氧化剂对杂环胺含量的影响 |
| 4.2.4 抗氧化剂添加量对杂环胺含量的影响 |
| 4.3 小结 |
| 结论与展望 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）几种前致突变物对与其活化细胞相互作用的V79细胞诱发微核作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 1-甲基芘、1-羟甲基芘、苯并(a)芘及黄曲霉毒素B1暴露情况及健康效应 |
| 1.2 1-甲基芘、1-轻甲基芘、苯并(a)芘、黄曲霉毒素B1的代谢活化与遗传毒作用 |
| 1.3 遗传毒性实验中大鼠肝脏S9混合物的应用及其局限 |
| 1.4 重组表达生物转化酶的细胞用于遗传毒性实验的有效性—与S9混合物的作用比较 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要化合物中英文对照及其结构 |
| 2.2 试剂的配置 |
| 2.2.1 DMEM基础培养基的配置 |
| 2.2.2 完全培养基的配置 |
| 2.2.3 磷酸盐缓冲溶液(PBS)的配置 |
| 2.2.4 Tris-甘氨酸电泳缓冲液 |
| 2.2.5 转膜缓冲液 |
| 2.2.6 TBST缓冲液 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 细胞培养 |
| 2.4.2 细胞毒性实验(CCK-8实验) |
| 2.4.3 SDS-PAGE和免疫印迹(Western Blot)试验分析受试细胞酶蛋白表达 |
| 2.4.4 微核实验 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 1-甲基芘对V79-hCYP1A2-hSULT1A1细胞诱发微核作用 |
| 3.2 1-甲基芘对V79-hCYP1A2: V79-hSULT1A1 (1:1)混合培养细胞诱发微核作用 |
| 3.3 CYP1A2、SULT1A1酶在相关重组细胞系中的蛋白水平 |
| 3.4 利用微孔膜体系观察1-甲基芘、1-羟甲基芘的代谢物对非代谢细胞诱发微核作用 |
| 3.5 将1-甲基芘、1-羟甲基芘与代谢型细胞孵育后的条件培养液作用于靶细胞后的诱发微核作用 |
| 3.6 苯并(a)芘、黄曲霉毒素B1在大鼠肝脏S9混合物作用下对V79细胞诱发微核作用 |
| 3.7 苯并(a)芘、黄曲霉毒素B1对分别表达人CYP1A1和人CYP1A2的重组V79细胞诱发微核作用 |
| 3.8 利用微孔膜体系观察苯并(a)芘和黄曲霉毒素B1的代谢物对非代谢细胞诱发微核作用 |
| 第四章 讨论 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（8）CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验模型探讨及在多氯联苯诱发基因突变研究中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 基于细胞内CYP2E1酶活化的遗传毒性测试的优势与溶剂DMSO的适用性探讨 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 人CYP2E1介导多氯联苯Hprt突变作用与突变特征分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（9）大青杨PuHSFA4a转录因子调控高锌胁迫应答的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 植物修复 |
| 1.2.1 植物修复技术概述 |
| 1.2.2 植物修复原理 |
| 1.2.3 植物修复重金属污染土壤的进展 |
| 1.2.4 杨树修复重金属污染的研究进展 |
| 1.3 锌污染及对植物的伤害 |
| 1.3.1 锌污染来源及危害 |
| 1.3.2 过量锌对植物生长发育的影响 |
| 1.3.3 过量锌对植物生理生化的影响 |
| 1.4 植物在高锌胁迫下的生理和分子的响应机制 |
| 1.4.1 根系分泌物机制 |
| 1.4.2 细胞壁结合机制 |
| 1.4.3 外排和区域化隔离过量的锌离子机制 |
| 1.4.4 络合及螯合机制 |
| 1.4.5 氧化胁迫防卫机制 |
| 1.5 热激转录因子(Heat shock transcription factor,HSF)功能研究进展 |
| 1.5.1 HSF介绍 |
| 1.5.2 HSFs的调控作用 |
| 1.5.3 HSF与植物的抗逆性有关 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 2 大青杨PuHSFA4a基因和启动子的表达研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 菌株与载体 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 药品和培养基的配置 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大青杨中A类PuHSFs基因在高锌胁迫下的表达模式 |
| 2.2.2 大青杨PuHSFA4a基因在各种非生物胁迫下的表达模式 |
| 2.2.3 PuHSFA4a启动子克隆及pBI121-ProPuHSFA4a-GUS载体的构建 |
| 2.2.4 PuHSFA4a启动子转基因大青杨的获得及鉴定 |
| 2.2.5 高锌胁迫条件及GUS染色方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 大青杨A类PuHSFs基因在高锌胁迫下的表达模式 |
| 2.3.2 大青杨PuHSFA4a基因在非生物胁迫下的表达模式 |
| 2.3.3 PuHSFA4a启动子的克隆及转基因株系的鉴定 |
| 2.3.4 PuHSFA4a启动子的时空表达 |
| 2.4 本章小结与讨论 |
| 3 大青杨PuHSFA4a基因的抗高锌功能研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 药品的配置 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 PuHSFA4a基因的克隆及转录自激活分析 |
| 3.2.2 PuHSFA4a转录因子转录激活结构域的研究 |
| 3.2.3 PuHSFA4a过表达载体和抑制表达载体的构建 |
| 3.2.4 PuHSFA4a过表达和抑制表达转基因的获得及其鉴定 |
| 3.2.5 高锌胁迫下PuHSFA4a转基因组培苗的抗逆分析及生理生化指标测定 |
| 3.2.6 高锌胁迫下PuHSFA4a转基因土培苗抗逆分析及生理生化指标测定 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 PuHSFA4a基因的克隆及结构分析 |
| 3.3.2 PuHSFA4a转录因子转录激活结构域的研究 |
| 3.3.3 PuHSFA4a过表达和抑制表达载体构建及转基因检测 |
| 3.3.4 高锌胁迫下PuHSFA4a转基因组培苗的表型观察及生理指标测定 |
| 3.3.5 高锌胁迫下PuHSFA4a转基因土培苗抗逆分析及生理生化指标测定 |
| 3.4 本章小结和讨论 |
| 4 大青杨PuHSFA4a调控下游基因的表达分析 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 常用试剂 |
| 4.1.3 溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 RNA的提取、反转录和检测 |
| 4.2.2 转录组的构建和测序 |
| 4.2.3 转录组数据与参考基因组序列比对 |
| 4.2.4 转录组文库质量评估 |
| 4.2.5 差异基因分析 |
| 4.2.6 qRT-PCR方法验证表达谱测序结果 |
| 4.3 结果和分析 |
| 4.3.1 转录组结果评估 |
| 4.3.2 差异基因分析及GO分析 |
| 4.3.3 qRT-PCR验证转录组结果 |
| 4.4 本章小结和讨论 |
| 5 PuHSFA4a下游靶基因PuGSTU17和PuPLA_2的鉴定 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 植物材料 |
| 5.1.2 常用试剂 |
| 5.1.3 溶液配制 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 PuHSFA4a下游基因启动子上HSE元件预测 |
| 5.2.2 ChIP验证PuHSFA4a的下游靶基因 |
| 5.2.3 大青杨中PuGSTU17(1654 bp)和PuPLA_2(1673 bp)启动子克隆 |
| 5.2.4 酵母单杂(Y1H)实验 |
| 5.2.5 双荧光素酶(LUC)实验 |
| 5.2.6 凝胶迁移实验(EMSA)实验 |
| 5.2.7 高锌胁迫下PuHSFA4a转基因大青杨中PuGSTU17基因的表达 |
| 5.3 结果和分析 |
| 5.3.1 PuHSFA4a下游基因启动子上的HSE元件预测 |
| 5.3.2 ChIP确定PuHSFA4a下游靶基因 |
| 5.3.3 Y1H验证PuHSFA4a下游靶基因PuGSTU17和PuPLA_2 |
| 5.3.4 LUC验证PuHSFA4a下游靶基因PuGSTU17和PuPLA_2 |
| 5.3.5 EMSA验证PuHSFA4a下游靶基因PuGSTU17和PuPLA_2 |
| 5.3.6 高锌胁迫下PuHSFA4a转基因株系中PuGSTU17基因的表达 |
| 5.4 本章小结和讨论 |
| 6 PuGSTU17和PuPLA_2基因功能验证 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 植物材料 |
| 6.1.2 载体与菌株 |
| 6.1.3 溶液配制 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 PuGSTU17和PuPLA_2基因的克隆 |
| 6.2.2 PuGSTU17和PuPLA_2表达载体的构建 |
| 6.2.3 PuGSTU17和PuPLA_2转基因大青杨的鉴定 |
| 6.2.4 高锌胁迫下PuGSTU17转基因抗逆分析及生理生化指标测定 |
| 6.2.5 高锌胁迫下PuPLA_2转基因抗逆表型分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 PuGSTU17和PuPLA_2基因的克隆 |
| 6.3.2 PuGSTU17抑制表达载体的构建 |
| 6.3.3 PuGSTU17和PuPLA_2表达载体转基因大青杨的鉴定 |
| 6.3.4 高锌胁迫下PuGSTU17转基因株系的抗逆分析及生理生化指标测定 |
| 6.3.5 高锌胁迫下PuPLA_2转基因抗逆分析 |
| 6.4 本章小结和讨论 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（10）苯及其羟化代谢物对重组表达人CYP2E1的V79细胞致突变作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要试剂配制 |
| 2.3 试验仪器设备 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 苯及其羟化代谢物对V79-Mz和V79-hCYP2E1-hSULT1A1的细胞毒性和致突变作用 |
| 3.2 苯及其羟化代谢物对V79-Mz和V79-hCYP2E1-hSULT1A1细胞内ROS水平的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、锌对致突变物诱发的CHO细胞突变的影响（论文参考文献）
- [1]双酚化合物致突变性、对前致癌物作用的影响及代谢酶相关性[D]. 余航. 南方医科大学, 2021
- [2]饮用水消毒副产物基因毒性与致癌性研究进展[J]. 洪涵璐,赵伟,尹金宝. 环境监控与预警, 2020(05)
- [3]遗传毒性物质响应菌株构建及其对农药样品的测试研究[D]. 董俊青. 华南理工大学, 2020
- [4]长白山红景天提取物抗氧化性、抗突变性和癌细胞生长抑制效果研究[D]. 孙丹. 延边大学, 2020(05)
- [5]1-甲基芘基于代谢活化诱发细胞染色体损伤作用[D]. 李子焕. 南方医科大学, 2020
- [6]油炸鸡肉中杂环胺的形成及控制[D]. 张晨霞. 河南工业大学, 2020
- [7]几种前致突变物对与其活化细胞相互作用的V79细胞诱发微核作用[D]. 朱娜. 南方医科大学, 2019(09)
- [8]CYP2E1酶依赖性遗传毒性实验模型探讨及在多氯联苯诱发基因突变研究中的应用[D]. 金桂芳. 南方医科大学, 2019(09)
- [9]大青杨PuHSFA4a转录因子调控高锌胁迫应答的机理研究[D]. 张海珍. 东北林业大学, 2019
- [10]苯及其羟化代谢物对重组表达人CYP2E1的V79细胞致突变作用[D]. 蔡露. 南方医科大学, 2018(01)