一、An Ultrastructural Study of the Organ Culture of Human Uterine Cervix Infected with Herpes Simplex Virus Type 2. Ⅱ. Changes of Nuclear Envelope,Multinucleated Giant Cell,Nuclear Microtubule,Replication of HSV-2 in Cytoplasm.(论文文献综述)
吴淑霞[1](2019)在《RbAp48在ALA-PDT治疗子宫颈上皮内病变及子宫颈癌中的作用及其机制研究》文中研究指明研究背景 子宫颈癌是严重威胁全球女性健康的恶性肿瘤之一,其发病率居女性恶性肿瘤的第四位。子宫颈转化区内高危型人乳头瘤病毒(High-Risk Human Papillomavirus,HR-HPV)持续性感染是导致子宫颈癌前病变及子宫颈癌的主要致病因素。在大多数子宫颈癌发生发展的过程中,存在着较长而且可逆转的癌前病变期。及时恰当的处理高危型HPV持续感染及子宫颈癌前病变,是防治子宫颈癌的根本所在。但目前临床上仍缺乏有效的清除HPV感染的手段,对于子宫颈鳞状上皮内病变(Cervical squamous intraepithelial lesions,SIL)和高危型HPV持续性感染的治疗主要是物理治疗和手术治疗。然而,物理治疗复发率较高;手术治疗(宫颈环形电切、冷刀锥切)又存在着出血、宫颈管狭窄、宫颈机能不全等不同程度影响生育功能的并发症。鉴于目前我国罹患宫颈病变的群体趋于年轻化,其中部分患者未婚或未产,强烈要求保留生理、生育功能,迫切需要一种既可以有效治疗子宫颈癌前病变、清除HPV感染又不影响宫颈机能的治疗方法。光动力学疗法(Photodynamic therapy,PDT)是临床医学、光学及光电子学等学科交叉融合而发展起来的一种新的治疗技术。PDT能选择性杀伤增生活跃的病变细胞,对正常细胞的毒性作用极小或无,可消灭隐性病灶,并能保留器官的完整性。此外,光动力学治疗还可与其他传统疗法如化疗、手术等相结合,具有协同作用,重复性好。PDT治疗肿瘤和HPV感染相关性疾病如尖锐湿疣、高危型HPV持续性感染、甚至早期子宫颈癌的临床疗效己得到肯定,但其疗效不一。深入研究PDT介导的细胞损伤的分子机制有助于提高PDT的治疗效果,对指导PDT在临床中的应用是非常必要的,也是PDT治疗最终走向临床的重要前提。Demyanenko等利用蛋白质微阵列芯片技术筛选与表观遗传学有关的差异表达蛋白质中发现:ALA-PDT作用后可引起组蛋白乙酰转移酶(Histone deacetylases,HDAC)-1和HDAC-11的表达上调。视网膜母细胞瘤结合蛋白48(Retinoblastoma associated protein 48,RbAP48),是组蛋白乙酰转移酶复合物中的高丰度蛋白组分。RbAp48,能协同其他蛋白调节组蛋白及其核小体相关的组蛋白乙酰转移酶复合物的构型和活性,从而抑制E2F调控基因的转录调节。研究己证实RbAp48是一种调控HPV16阳性子宫颈癌转化活性的重要蛋白,在HPV阳性的宫颈癌细胞系中过表达RbAp48能够抑制细胞的生长增殖及肿瘤形成,其机制与RbAp48调节抑癌基因p53、Rb以及Rb/E2F靶位基因和HPV E6、E7基因的表达有关。同时RbAP48也是一种放射敏感蛋白,其过表达能增加子宫颈癌细胞对放射治疗的敏感性,提示RbAp48可以作为一种HPV相关疾病的治疗靶位用于临床应用。本课题拟系统研究ALA-PDT对子宫颈鳞状上皮内病变及子宫颈癌的作用,以及RbAp48参与调控ALA-PDT对H8细胞及子宫颈癌细胞的作用及其机制,具体研究内容分为以下三个部分。第一部分ALA-PDT对H8细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究背景和目的 高危型HPV尤其是HPV16、18亚型,在子宫颈粘膜的持续感染与子宫颈癌的发生密切相关。H8细胞是取材于我国正常妇女子宫颈磷柱上皮交界处的鳞状上皮,经体外转染HPV16 E6和E7基因而达到永生化的细胞株。该细胞株是一种理想的癌前病变模型细胞。本课题采用H8细胞为靶细胞,研究ALA-PDT对HPV感染细胞的增殖和凋亡的作用,探讨其清除子宫颈上皮HPV感染的机制。研究方法1.通过CCK-8实验和细胞计数实验检测ALA-PDT对H8细胞的增殖活性的影响;2.采用流式细胞术分析ALA-PDT对H8细胞周期及凋亡的影响;3.采用Western blot检测ALA-PDT作用于H8细胞后对凋亡相关基因p53和p21蛋白的影响;4.采用Real-time PCR检测ALA-PDT作用于H8细胞后对肿瘤相关基因、凋亡相关因子及HPV致癌基因E6、E7的mRNA的表达影响;5.采用Real-time PCR和Western blot检测ALA-PDT作用于H8细胞后对RbAp48的表达影响。结果1.ALA-PDT抑制H8细胞增殖 CCK-8实验和细胞计数实验结果表明:ALA-PDT对H8细胞有显着增殖抑制作用,且该抑制作用随着ALA浓度的增加而增强,呈剂量依赖性。而单独使用光敏剂ALA孵育H8细胞30小时,与对照组(0μM ALA-PDT)细胞比较,细胞活力几乎没有抑制作用。 2.ALA-PDT对H8细胞周期分布的影响细胞周期分析结果表明:不同浓度的ALA-PDT组G0/G|期的比率增多,S和G2/M期的比率明显减少,差异有统计学意义,且呈现出明显的剂量依赖性。3.ALA-PDT能诱导H8细胞凋亡流式细胞仪检测结果表明:不同浓度的ALA-PDT作用后24小时可显着诱导H8细胞的凋亡,且呈现出明显的剂量依赖关系。Western blot结果表明:ALA-PDT作用于H8细胞后24小时引起凋亡相关转录因子p53蛋白的表达量显着增加,同时伴有其下游靶基因p21蛋白的表达增加。4.ALA-PDT能促进H8细胞抑癌基因及凋亡相关因子的表达Real-time PCR结果显示:ALA-PDT能够促进抑癌基因(p53、p21、Rb),凋亡相关因子Caspase-3的mRNA表达。5.ALA-PDT能抑制H8细胞HPV E6、E7基因的表达Real-time PCR结果显示:ALA-PDT能够明显抑制HPV E6、E7的mRNA表达,其中150μM的ALA-PDT组最明显,大约是对照组E6的1/4,E7的1/2,差异有统计学意义。6.ALA-PDT能促进H8细胞RbAp48的表达ALA-PDT作用于H8细胞后,RbAp48的表达在mRNA和蛋白水平均显着升高。结论1.ALA-PDT对HPV16转化的人宫颈上皮永生化细胞系H8细胞有显着的增殖抑制和诱导凋亡效应,证明ALA-PDT是子宫颈鳞状上皮内病变的有效治疗方法。2.ALA-PDT作用于H8细胞,诱导p53和p21表达增加,将细胞周期阻滞于G()/G1期,可能为其诱导细胞凋亡的机制之一;ALA-PDT导致HPV16病毒癌蛋白E6和E7mRNA表达下调及RbAp48的表达上调,有助于清除HPV感染。第二部分RbAp48在ALA-PDT作用于H8细胞中的作用及其机制研究背景和目的既往研究表明RbAP48是调控HPV16阳性的子宫颈癌转化活性的重要蛋白,能抑制宫颈癌细胞的生长,降低HPV病毒的致瘤性,RbAp48可以作为一种HPV感染相关疾病的治疗靶位应用于临床。所以这一部分主要研究RbAp48在ALA-PDT杀伤H8细胞中所发挥的作用及其机制。研究方法1.采用免疫组织化学染色法在15例HSIL、21例LSIL的子宫颈病变组织和25例正常对照的子宫颈组织中检测RbAp48的表达差异;2.构建RbAp48siRNA,转染H8细胞并检测其干扰效率;通过CCK-8和细胞计数实验观察干扰RbAp48的表达后,ALA-PDT对H8细胞抗增殖效应的影响。3.采用流式细胞术检测siRbAp48组细胞和NC组细胞在接受1 OOhM ALA-PDT前后细胞周期和细胞凋亡的变化;4.采用Real-time PCR方法检测siRbAp48组细胞和NC组细胞分别接受100μM ALA-PDT前后肿瘤相关基因(p53、p21、Rb),凋亡相关因子Caspase-3及HPV E6、E7的mRNA表达变化。结果1.RbAp48在子宫颈鳞状上皮内病变组织及正常子宫颈鳞状上皮组织中的差异表达免疫组织化学染色结果显示:RbAp48在子宫颈鳞状上皮内病变组织及正常宫颈鳞状上皮组织中的细胞核中表达。RbAp48在HSIL中的高表达率显着低于正常子宫颈组织,差异有统计学意义。2.干扰RbAp48的表达能抑制ALA-PDT对H8细胞的增殖抑制作用构建RbAp48siRNA,转染H8细胞并检测其干扰效率。CCK-8和细胞计数实验结果表明:siRbAp48联合ALA-PDT组细胞的增殖活性明显高于NC联合ALA-PDT组的细胞。由此可见,抑制RbAp48表达后可降低ALA-PDT对H8细胞增殖的抑制效应。说明ALA-PDT对H8细胞的抗增殖效应,至少部分是由于ALA-PDT诱导细胞内RbAp48的表达升高所致。3.干扰RbAp48的表达能降低ALA-PDT诱导H8细胞凋亡的作用流式细胞分析结果显示:siRbAp48组的H8细胞经ALA-PDT处理后,细胞的总凋亡比例要显着低于ALA-PDT处理后的NC组细胞。这说明抑制RbAp48的表达能抑制ALA-PDT所致的细胞凋亡。4.细胞周期分析RbAp48对ALA-PDT作用于H8细胞的影响流式细胞分析结果显示:siRbAp48组的H8细胞中,ALA-PDT处理后G0/G1期的细胞比例要明显低于ALA-PDT处理后的NC组细胞。说明RbAp48表达的降低能抑制ALA-PDT所引起的Go/G1期的阻滞。5.ALA-PDT作用于H8细胞后,RbAp48对肿瘤基因p53、p21、Rb及凋亡相关因子Caspase-3的影响Real-time PCR结果同样显示:经ALA-PDT作用后,siRbAp48组细胞p53、p21、Rb和Caspase-3的mRNA表达水平显着低于NC组细胞。干扰RbAp48的表达后,ALA-PDT促进p53、p21、Rb和Caspase-3的mRNA表达受到抑制。6.ALA-PDT治疗后,RbAp48对HPV相关基因的影响Real-time PCR 结果显示:经 ALA-PDT 作用后,siRbAp48 组细胞 HPV E6、E7mRNA表达水平显着高于NC组细胞。说明干扰RbAp48的表达后,ALA-PDT引起的HPV E6、E7的mRNA表达降低明显受到抑制。结论1.ALA-PDT对HPV16转化的人宫颈上皮永生化细胞系H8细胞有显着的增殖抑制和诱导凋亡效应,干扰RbAp48的表达则抑制这一过程,证明RbAp48参与调控ALA-PDT对H8细胞的作用过程。2.RbAp48主要通过阻滞细胞周期、诱导凋亡、促进抑癌基因、抑制HPVE6、E7mRNA的表达来参与并影响ALA-PDT对H8细胞的作用过程。第三部分RbAp48在ALA-PDT作用于子宫颈癌细胞中的作用及其机制研究背景及目的 上述研究表明RbAp48参与了调控ALA-PDT对子宫颈鳞状上皮内病变的作用过程,在本部分的研究中,我们进一步以子宫颈癌细胞系SiHa细胞和HeLa细胞为例,采用一系列的实验方法验证RbAp48在ALA-PDT在治疗宫颈癌中所发挥的作用及其机制。研究方法1.采用Real-time PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平上检测子宫颈癌细胞SiHa、Hela细胞在不同浓度的ALA-PDT作用后RbAp48的表达变化;2.构建RbAp48siRNA,转染子宫颈癌细胞系SiHa细胞和HeLa细胞并检测其干扰效率,通过CCK-8和细胞计数实验观察干扰RbAp48的表达后,ALA-PDT对子宫颈癌细胞抗增殖效应的影响;3.采用流式细胞术检测siRbAp48组细胞和NC组细胞分别接受100μM ALA-PDT前后细胞凋亡的变化;4.采用Real-time PCR方法检测siRbAp48组细胞和NC组细胞分别接受100μM ALA-PDT和对照处理后肿瘤相关基因(p53、p21、Rb),凋亡相关因子Caspase-3及HPV E6、E7的mRNA表达变化。结果1.RbAp48在ALA-PDT作用后子宫颈癌细胞中的表达差异Real-time PCR和Western blot结果表明:不同浓度的ALA-PDT作用于SiHa、HeLa细胞后,RbAp48的表达在mRNA和蛋白水平均显着升高。2.干扰RbAp48的表达能抑制ALA-PDT对子宫颈癌的增殖抑制作用构建RbAp48siRNA,转染子宫颈癌细胞系SiHa细胞和HeLa细胞并检测其干扰效率,其中siRbAp48(2)能更有效的抑制RbAp48的mRNA和蛋白水平的表达。因此,我们选取了 siRbAp48(2)进行后续的实验。CCK-8和细胞计数实验结果表明:siRbAp48联合ALA-PDT干扰处理组的细胞增殖活性显着高于NC联合ALA-PDT处理组细胞。由此可见,抑制RbAp48表达后可降低ALA-PDT对H8细胞增殖生长的抑制效应,说明ALA-PDT对子宫颈癌细胞增殖抑制效应,至少部分是由于ALA-PDT诱导细胞内RbAp48的表达升高所致。3.干扰RbAp48的表达能降低ALA-PDT诱导子宫颈癌细胞凋亡的作用流式细胞分析结果显示:siRbAp48组细胞经ALA-PDT处理后细胞凋亡的比例要显着低于ALA-PDT处理后的NC组细胞。也就是说RbAp48表达的降低能抑制ALA-PDT作用于子宫颈癌细胞所引起的细胞凋亡。4.ALA-PDT作用于子宫颈癌细胞后,RbAp48对肿瘤基因p53、p21、Rb及凋亡相关因子Caspase-3的影响Real-time PCR结果显示:经ALA-PDT作用后,siRbAp48组子宫颈癌细胞抑癌基因p53、p21、Rb和凋亡相关因子Caspase-3的mRNA表达水平显着低于NC组细胞。表明干扰RbAp48的表达后,ALA-PDT促进p53、p21、Rb和Caspase-3的mRNA表达增加受到抑制。5.ALA-PDT治疗后,RbAp48对HPV相关基因的影响Real-time PCR结果显示:经ALA-PDT作用后,siRbAp48组子宫颈癌细胞HPV E6、E7的mRNA表达水平显着高于NC组细胞。表明干扰RbAp48的表达后,ALA-PDT引起的HPV E6、E7的mRNA表达降低明显受到抑制。结论1.ALA-PDT对子宫颈癌细胞SiHa和HeLa细胞有显着的增殖抑制和诱导凋亡效应,干扰RbAp48的表达则抑制这一过程,证明RbAp48参与调控ALA-PDT对子宫颈癌细胞的作用过程。2.RbAp48主要通过阻滞细胞周期、诱导凋亡、抑制HPVE6、E7mRNA的表达来参与并影响ALA-PDT对SiHa和HeLa细胞的作用过程。
Alison Courtney[2](2013)在《针刺在辅助生殖技术中的作用的调查研究》文中提出目的研究的目的是明确英国运用针灸疗法在辅助受孕过程(ACP)中的效果。本课题研究了ACP的诊疗规范,其使用的程度,和在两性生殖问题上针灸应用的广度。本研究的理论基础在既往的研究中,针灸能提高ACP成功率,特别是在受精卵移植前后的一段时间里(ET)。有证据表明,针灸在ACP过程中起到了积极的作用;例如,改善卵巢功能,提高卵子质量;协同促排药物调节激素水平,增加子宫血液循环,增加子宫内膜厚度,并防止宫缩。在英国主要有BOVEY等人进行了这方面的研究。在2010年针对英国针灸师对不孕症治疗的观点进行了一次大规模的调查。一项由英国针灸协会(BACC)资助的调查显示,不孕症的标准化治疗在英国比较罕见,且针灸疗法诊疗规范一般应用于生殖医学。笔者希望进一步探讨英国针灸师如何成功的将针灸疗法与ACP结合,及怎样开发出最行之有效的方法。笔者也希望能进一步增进中西医学对ACP的认识。假说如下:1.就女性不孕症而言,针刺的临床疗效较单一ACP高,而与针刺联合ACP的疗效无异。2.就男性不育症而言,针刺联合ACP的临床疗效高于单一针刺或ACP。3.就针刺与ACP联合而言,基于“辨证”的临床疗效高于常规的诊疗规范。研究的唯一限制在于异性伴侣无法获得精子或卵子捐赠。方法采用定性和定量相结合的混合研究方法。定量法同时论证问题和假说,并提供数据来验证针灸是否对ACP产生积极影响。定量研究方面,发放在线调查问卷予英国针协成员(约1000名);附属国家网络Zita West成员(140名)以及中国医学会注册成员(150名)。调查数据的收集通过SurveyMonkey公司,进行统计和绘图。并将这些数据下载到电子表格进行更多的分析。从访谈的资料中分析主题,确定观点和趋势。定性法则增加了研究的深度和广度。研究的问题集中在:英国针灸师利用针刺治疗介入ACP的程度;针刺联合ACP对临床受孕率的影响;针刺疗法作为诊疗规范的临床效应;ACP过程中针刺的治疗规范;对六位英国针灸师进行了半结构式访谈,并综合各方建议和个人经验,以进一步了解针刺在生殖健康方面的作用。结果问卷发给了1,234名英国针灸师,收到回馈64份。其中98.4%均主治不孕症,这些中有87.5%采用针灸联合ACP的治疗方法。大多数针灸师在整个ACP阶段使用针刺疗法,同时有6.6%的治疗师在胚胎移植前后使用针刺疗法。访谈内容主要强调几个主题——针灸在降低压力水平;调节月经周期,有助生育;改善体质和治疗习惯性流产等均有优势。大部分受访的针灸师认为针刺可以减少促排药物的副作用。调查结果显示,对女性而言,接受单纯针刺治疗的受孕率(75%)往往较单一ACP(33.4%)高;而针刺联合ACP的受孕率约为57%。而对男性而言,评估发现单纯针刺治疗的受孕率最高(50%),比单一ACP(33.4%)和针刺联合ACP的受孕率(30%)都高。基于中医辨证论治的受孕率约57%,高于在ACP过程中遵循诊疗规范的受孕率(33.4%)约23.4%。然而,基于Paulus诊疗指南的治疗则达到了更高的受孕率(75%),这比规定的受孕率33.4%高了41.6%。受访者认为针刺疗法在ACP过程中大有裨益,能有效减轻压力,并极大的协助了ACP。多数人认为针灸治疗最好在启动ACP前至少1-3个月内介入。受访者认为女性不孕的最常见问题在于:排卵障碍,月经失调,多囊卵巢综合征,子宫内膜异位症和痛经。仅有50%的受访者经治男性不育症。从收集的数据来看,688名患者接受了针刺治疗,其中499名成功妊娠。499例患者接受了针刺联合ACP疗法,其中282例妊娠。进行卡方检验P=0.003077674,具有统计学意义。结论虽然研究结果有统计学意义,但需要进行进一步研究来探讨为何Paulus诊疗指南较中医联合ACP疗法更为成功。半结构式访谈有效划分了具体问题并增加了数据的丰富性。本研究得出的结论如下:1.单一针刺治疗女性不孕症能获得更高的受孕率(75%),高于单纯的ACP(33.4%);和针刺联合ACP的57%。2.针刺联合ACP的受孕率仅为30%,均低于针刺疗法(50%),或ACP(33.4%)。3.遵照诊疗规范的ACP往往获得较高的受孕率(75%),较传统中医疗法高(57%)。4.调查结果预示着英国的从业者将受益于对ACP诊疗规范的新认识。调查数据显示,一些从业者对本调查中提出的问题不了解,将通过接受系统的学习和加深对中医与ACP相结合的复杂性过程的了解而受益匪浅。
Lee Kun[3](1983)在《AN ULTRASTRUCTURAL STUDY OF THE ORGAN CULTURE OF HUMAN UTERINE CERVIX INFECTED WITH HERPES SIMPLEX VIRUS TYPE 2 Ⅰ. A COMPARATIVE STUDY OF THE CELL PATHOLOGY AFTER VIRAL INFECTION BETWEEN LIGHT AND ELECTRON MICROSCOPY》文中提出Introduction The study of the relationship between the carcinogene- sis of human uterine cervix and the herpes simplex virus type 2(HSV-2)has became more and more important nowadays, so,to research for the pathogenesis of herpes virus cervi- citis and its relation to the carcinoma of uterine cervix
杨贵波,邵一鸣[4](2005)在《人类免疫缺陷病毒与黏膜免疫》文中提出人类免疫缺陷病毒(HIV)主要通过突破黏膜屏障侵入人体.在全世界范围内大约有90%的HIV感染是通过黏膜发生的.由于黏膜固有层中存在大量的CD4+CD45RO+T淋巴细胞, 他们表达HIV的受体CD4和辅助受体CCR5,是HIV侵入黏膜后优先攻击的靶细胞.这些细胞为HIV早期繁殖提供场所并为系统扩散制造更多的病毒.黏膜中HIV及其感染细胞不仅存在于黏膜免疫系统的效应部位,也大量存在于黏膜免疫系统的诱导部位.HIV感染导致黏膜CD4+T淋巴细胞快速损耗并进而导致黏膜免疫功能缺陷.由于绝大多数感染因子都通过黏膜侵入人体,黏膜免疫功能缺损必然导致机会性感染增加,最终导致艾滋病的发生和感染者因完全无法控制机会性感染而死亡,由于黏膜既是HIV侵入机体的主要门户,又在HIV感染的急性期及随后的整个病理过程中发挥作用,因此在AIDS疫苗和药物的研究中应重视对HIV黏膜传播的控制.
QUINTON Paul M[5](2007)在《囊性纤维化:太多NaCl,太少HCO3-(英文)》文中提出胰腺囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)是一种单基因缺陷导致的致死性遗传疾病,在高加索人种中广泛分布。这种疾病在其它人种的发生率非常低,但据报道大部分人种中发现有该基因的突变。本文对CF发生的分子和病理生理学基本概念进行阐述。首先,阐述了CF的病理学和遗传特征,其基因产物囊性纤维化跨膜电导调节体(cystic fibrosis transmembrane con- ductance regulator,CFTR)的分子结构、特征、功能和调控。其次,由于突变的主要表现是电解质转运失调,其病理学效应和机制在两个典型受累器官中得到了很好的阐明,一个是汗腺,其病理发生是由于分泌过多NaCl,另一个是胰腺,其病理发生是由于分泌太少HCO3-。然而,CF的发病率和死亡率主要来自难治性呼吸道感染,其发生机制存存争议,我们推断可能的机制为阴离子转运失调导致CF肺部慢性感染。
章琳俐[6](2015)在《两种水生动物精子发生和成熟的细胞学机制》文中提出精子发生和成熟过程关系到物种的延续,这一过程的异常往往导致生殖障碍和雄性不育。对不同雄性动物生殖生物学进行研究不仅有助于了解动物生殖规律,也与动物生产实践密切相关。脊椎动物精子发生模式在无羊膜动物到羊膜动物进化过程中发生变化。爬行动物精子发生在羊膜动物中具有过渡性和进化性意义。中华鳖是我国传统的水产养殖动物,常见的龟鳖目物种,具有较高的营养价值。认识和掌握中华鳖生殖生物学规律,不仅对于鳖的繁殖具有理论意义和潜在的应用价值,同时也能为爬行类动物生殖研究提供更为丰富的资料。斑马鱼作为重要的新型模式动物之一,是水生实验动物的代表性品种。虽然对斑马鱼精子发生过程已有一些报道,但资料并不详尽。本文分别对中华鳖和斑马鱼精子发生超微结构特征进行观测,进一步探究中华鳖精子结构变化与储存的关系及斑马鱼精子结构特点,并对繁殖期中华鳖和不同温度下斑马鱼精子发生过程中TLR2和TLR4的表达规律进行研究。在此基础上探讨结构与功能之间的联系。从细胞和分子水平阐明这两种水生动物雄性生殖生物学特性,为精子发生模式演化的研究提供理论依据,并为水生动物繁殖及资源利用等应用研究奠定基础。实验Ⅰ中华鳖精子的发生应用光镜和电镜技术,研究中华鳖精子发生过程中各阶段生殖细胞的超微结构和组织学特征。中华鳖精子发生过程依次经历A型精原细胞、B型精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。精原细胞除了明显的核仁及异染色质外,胞质中包含大量的细胞器,主要是少嵴的线粒体、内质网、高尔基复合体和3-5个体积较小的Nuages。初级精母细胞体积增大,粗线期联会复合体清晰可见,胞质中具有发达的高尔基复合体、致密拉长的线粒体以及与囊泡和线粒体相连Nuages,甚至出现早期鞭毛。精子细胞变形过程中,经历了核浓缩拉长、顶体形成、鞭毛形成以及细胞质的排除。除此之外,中华鳖精子细胞发育过程中具有独特的结构变化:(1)精子细胞核浓缩过程中,微管机械性挤压胞核,多余的物质从顶体冒末端边缘形成空泡排出。(2)精子细胞头部形成管状复合物。(3)细胞质包含大而致密Nuages,精子形成后期依然存在。(4)精子形成过程中具有独特菊花状的内质网;第一期精子细胞开始出现,由内质网中心发出大量突起和分支,其突起与核膜、脂滴、线粒体、高尔基体和环孔板存在密切联系;精子形成后期内质网膨大成空泡。(5)精子形成过程伴随着脂滴的形成和发育,最终大量的脂滴保留于线粒体周围和头部后段,成为精子胞质小叶的主要成分。这些特征的发现为爬行动物的非传统的系统发育分析及相关功能研究提供重要参考。实验Ⅱ中华鳖精子结构变化及其与精子储存的关系研究许多动物能够储存精子于体内长达数年,来延长受精时间,但储存机制目前仍不清楚。本文应用光镜和电镜技术,研究中华鳖储存于附睾和输卵管中精子的变化,发现中华鳖精子呈现独特的形态变化过程。附睾中,精子具有体积较大的胞质小叶,包含数个脂滴,始终位于精子中段及头部后段,不向后移动;而输卵管中精子缺乏胞质小叶。提示胞质小叶储备的内源性能源物质,有利于附睾的精子储存。在输卵管储存后期,精子的洋葱样线粒体恢复至普通线粒体形态,为中华鳖线粒体代谢的变化的提供形态学基础。精子中段发达的致密纤维鞘为糖酵解酶和底物提供结合部位。这些独特的形态变化是中华鳖精子在不同的储存阶段利用不同的代谢方式和能量的来源的形态学依据。这些结构的变化有利于精子的长期储存。除此之外,中华鳖或许是揭示精子成熟和储存机制的潜在模型。实验Ⅲ中华鳖输卵管精子存储及精子与上皮的互作动物交配后将精子存储在雌性生殖道中,从而使得交配、受精和产卵等这些生殖过程在适当的时间发生。精子长期存储的机制仍不清楚。本研究使用光镜和电镜观察分析中华鳖精子和输卵管之间的相互作用,探究精子长期存储可能的细胞学机制。中华鳖全年都可存储精子于输卵管的峡部、子宫部和阴道部,这表明精子可以在体内长期存活。精子的头部常常嵌入到输卵管上皮纤毛之间,有些甚至插入到输卵管黏膜上皮细胞凹陷所形成的腔腺中。上皮细胞凹陷周围并没有溶酶体的分布,这说明输卵管中这些纤毛细胞不是吞噬精子而是能够维持精子储存。储存的精子也能在腺体导管中发现。尽管在输卵管黏膜的血管中存在少量免疫细胞,但输卵管上皮和固有层中很难发现有免疫细胞的分布。中华鳖输卵管的这些特征有利于作为外来细胞的精子在输卵管中长时间存活。这些发现将有助于了解中华鳖的生殖规律和物种保护策略的研究。实验Ⅳ中华鳖睾丸TLR2和TLR4的表达应用免疫组织化学(IHC)的方法探究中华鳖繁殖期不同月份睾丸TLR2和TLR4的分布特点,蛋白质印迹法(Western blot)研究TLR2和TLR4蛋白的表达差异。结果显示,TLR2表达于中华鳖睾丸生精上皮基底部的精原细胞,4月份、7月份和11月份差异不大。而TLR4在4月份精原细胞呈弱阳性反应;7月份可见生精上皮精原细胞、精母细胞和精子细胞TLR4呈阳性,精原细胞阳性较强;11月份排精季节,生精上皮依然成较强阳性,管腔中也存在阳性生精细胞,而精子阳性反应较弱。Western blot结果表明,4月、7月和11月中华鳖睾丸TLR2的表达并未表现出明显差异;而随着时间的推移,TLR4蛋白表达出现增高趋势,11月份显着增高。这一结果提示生殖细胞TLR4可能与中华鳖生精上皮的精子发生和排放有关。实验Ⅴ斑马鱼精子的发生斑马鱼是重要的模式动物,在生殖与发育生物学研究领域广泛应用,但关于斑马鱼生精细胞的细微结构特征的研究报道有限。本文应用光镜和透射电镜详细观察了斑马鱼精子发生过程中生殖细胞显微和超微结构的变化,发现了斑马鱼精子发生特殊的结构和变化规律。(1)斑马鱼精子形成的基本事件不同步,鞭毛定位在精子形成初期完成;核浓缩在中期发生;多余细胞质排放主要发生于后期。(2)精母细胞中发现早期鞭毛,早期精子细胞中近端中心粒携带鞭毛接近细胞核,陷入核凹窝,近端中心粒和基体由相互垂直转变成呈125°角。(3)精子形成过程中染色体的浓缩方式独特,精子细胞染色质不均匀地浓缩,从细颗粒状到染色质块;染色质块中央形成圆形或长条的低电子密度区,该区域不断缩小,最后形成精子细胞中的核泡。这也是斑马鱼精子核泡形成的首次发现。(4)Nuages存在于精原细胞和精母细胞中。它们与线粒体和细胞核直接接触,甚至在核周间隙中发现。(5)各时期生精细胞线粒体的形态与分布多样,粗线期精母细胞出现致密的线粒体,精母细胞和精子细胞同时存在包含膜团的线粒体。这些特征的发现将为斑马鱼精子发生相关分子学和功能的研究提供了形态学依据。实验Ⅵ斑马鱼精子的细微结构应用相差显微镜和电镜观察了斑马鱼精子的结构、几何学特征并对形态参数进行测量。抽取30只斑马鱼精液样品,用于相差显微镜和透射显微镜观察。斑马鱼精子总长度32.79±1.97μm,由无顶体球形头部、短椎形中片和尾部组成。头部偏向一侧,几乎被细胞核占据。精子细胞核均匀致密,但含有少量小空泡。浅的核窝位于核中侧部。两个中心粒相互成125角,位于核窝内。中片由袖套和鞭毛起始段。袖套不对称,含有少量细胞质,圆形或杆状弯曲的线粒体集中于袖套一侧,另一侧仅剩余一层很薄的细胞质。鞭毛长29.32±1.98μm,宽242.56±19.27nm,偏于核一侧。鞭毛轴丝的微管为“9×2+2”模式,但在基体与鞭毛的交界处无中央微管呈"9×2+0”模式。此外轴丝外侧分布有大小不一的囊泡。根据观察结果,绘制了斑马鱼精子结构模式图。斑马鱼精子具有鲤科鱼类精子的一般特征,但仍存在种间差异。这些特征有助于与其它物种的比较研究,同时为精子质量评估提供参考。实验Ⅶ斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达研究应用免疫组织化学反应(IHC)研究不同温度条件下,斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达分布情况。斑马鱼分别饲养于低温(10-15℃)和常温(25-30℃)条件下。结果显示,常温下斑马鱼精巢TLR2和TLR4阳性反应微弱;而低温条件下精巢生精小管边缘的间质及支持细胞TLR2阳性反应强烈,精原细胞和支持细胞中也出现TLR4阳性反应。这一结果表明低温可引起斑马鱼精巢TLR2和TLR4表达提高,增强斑马鱼精巢固有免疫能力。
Lee Kun[7](1983)在《An Ultrastructural Study of the Organ Culture of Human Uterine Cervix Infected with Herpes Simplex Virus Type 2. Ⅱ. Changes of Nuclear Envelope,Multinucleated Giant Cell,Nuclear Microtubule,Replication of HSV-2 in Cytoplasm.》文中研究说明Results and Discussions 1.Changes of the nuclear envelope after infected with HSV-2. The nuclear envelope of the“ground-glass appearance” nucleus as observed in the eptical microscope duplicated and reduplicated forming four,six,even eight layers which pro-
郭毅[8](2004)在《“逆临床思维”的理论探讨及在发现病原生物性疾病中的应用》文中研究指明本课题由三部分组成: 1.“逆临床思维”与新型疾病发现方法的探讨,从理论上探讨发现新型疾病的思维模式。 2.“急性出血性阑尾炎”的发现与鉴别,即用“逆临床思维”模式分析鉴别所遇到的新型传染病现象——“急性出血性阑尾炎”。 3.“急性出血性阑尾炎”的病原学探讨,用系统的发现新型病原体的方法检测导致“急性出血性阑尾炎”的潜在传染因子。 第一部分 “逆临床思维”与新型疾病发现方法的探讨 目的:初步提出发现新型疾病的方法和一种新的临床思维模式。 方法:收集并研究20余种疾病发现的过程,总结其规律。 结果:新型疾病的发现过程和判断的思维模式似可初步总结为以下三个方面: 1、以疾病的异常特征为发现新型疾病的线索,包括流行病学特征、临床特征和实验室检查的特征。 2、研究新型疾病的步骤和方法。发现线索后要从流行病学、临床和实验室三方面系统收集资料,注意以个体表现异常和群体表现异常导致新型疾病发现的不同特点。 3、判断新型疾病思维方法的建议:①运用宏观思维。临床思维是针对个体的。当发现病例有异常特征时,常用个体差异解释。而“逆临床思维”是多层次、系统地寻找病例的群体特征,从整体上分析,排除个体差异,具有宏观思维的特征。②采用归纳推理综合判断。临床思维属演绎推理,即将已知的诊断标准判别患病的个体,尽量寻找与已知疾病的相似点,这种思维方式只适合已知的疾病。而“逆临床思维”强调收集各个有异常表现个体的共同特征,属归纳推理。不仅收集与已知疾病相同的特征,而且收集与已知疾病不同的特征,特别要注意有诊断价值的特征改变。当发现诊断标准与疾病的特征存在有意义的差别时,应考虑是新病种的可能。差别越多,越具有特征性,越有可能是新病种。③注意从已知疾病中独立出新型疾病可能性。④注意与病因学研究相结合。发现新的病因可帮助判断。⑤排除已知疾病。 结论:发现新型疾病的方法与思维模式不同于经典的临床思维模式。
李晓东[9](2008)在《局部温热对HPV感染表皮朗格汉斯细胞功能活性的影响》文中研究表明背景人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一组可引发人类上皮细胞发生增殖反应的环状DNA病毒。HPV感染可以引起皮肤粘膜的良性增生性病变甚至发生恶性肿瘤。由于感染局部的免疫缺陷以及缺乏有效的特异性抗病毒制剂和彻底根治的物理方法,使感染迁延不愈。近年来随着加温、测温和控温技术的不断发展和完善,以及有关热疗的生理学和病理生理学的研究逐步深入,热疗得到了迅速发展。有学者将局部温热用于病毒疣的治疗,取得了一定的效果,而且局部温热疗法无创伤,痛苦小,复发率低,患者易于接受,有可能成为一种简捷、常规、有效的治疗手段。造成HPV持续感染的可能原因是机体不能建立有效的免疫反应及机体的免疫监视功能障碍。朗格汉斯细胞(Langerhans cell,LC)为树突状细胞系统中的一种独特类型,作为皮肤及黏膜的抗原提呈细胞,在摄取、加工和处理抗原的过程中,同时发生形态学变化,并逐渐离开表皮,移行至引流淋巴结,将抗原递呈给T辅助细胞,在协同刺激信号的作用下使之活化,从而启动免疫应答,因此在免疫系统中起着重要作用。HPV进入人体后常形成持续感染,其原因在于局部的免疫抑制和/或不能识别病毒蛋白,导致免疫逃逸。在HPV感染的皮肤组织中,LC有充足的机会接触HPV抗原,单独的抗原和或淋巴细胞并不能激活机体的免疫功能,只有在抗原提呈细胞的作用下,多方面因素相结合,才能激发机体的免疫应答。LC作为迄今为止所发现的功能最强大、表皮内分布最广泛的抗原提呈细胞,对其在温热治疗病毒疣治疗的发病机制中作用研究就显得非常必要。本研究中,我们通过检测:①不同温热对LC数量和形态的影响;②不同温热对朗格汉斯细胞游走及成熟功能的影响;③温热对LC信号传导功能的影响。以说明温热对促进LC有效诱发免疫应答中的作用,为病毒疣的温热治疗提供可靠的依据和指导。材料和方法一、材料临床资料:女性尖锐湿疣(Condyloma acuminatum,CA)患者均为我院皮肤科、妇科科2006年1月-2008年2月的门诊患者,符合2000年卫生部防疫司制订的CA诊断标准。均为初发患者,未经过任何治疗。对照组:对照为同时期我院急诊外伤缝合的非CA患者。二、方法(一)取材:1、征得患者知情同意后,局部消毒麻醉,分别切取疣体/正常组织,每例组织等分为4份。其中一份OTC包埋剂包埋后直接冷冻保存,另3份真皮侧向下,放入少量RPMI-1640培养液,只将疣体底部浸于培养液中分别以37℃、42℃和45℃三个温度照射30分钟后,将疣体取出,OCT包埋剂包埋后冷冻保存。2、征得患者知情同意后,局部消毒麻醉,切取疣体/正常组织各,每例组织用以上相同方法处理后,将疣体全部浸于RPMI-1640培养液,37℃培养箱孵育12小时后将组织取出,OCT包埋剂包埋后冷冻保存,同时收集培养液中的细胞。(二)温热对表皮内LC数量和形态的影响采用免疫组化方法对20例CA患者和20例正常人表皮内LC染色,高倍光学显微镜下观察不同温热处理后LC数目和形态变化。(三)采用直接免疫荧光方法,用CD1a、CD83单克隆抗体标记LC,利用共聚焦显微镜观察未经过任何处理CA和正常皮肤组织CD1a+,CD83+LC的分布。(四)通过流式细胞分析仪检测CA/正常人不同温热处理后CD1a+,CD83+LC细胞百分率。观察不同温热治疗后LC成熟标志—CD83的变化。(五)采用QRT-PCR方法检测不同温热治疗对LC表面趋化因子受体CCR6和CCR7 mRNA的表达变化。(六)采用QRT-PCR方法检测不同温热治疗对LC信号传导分子—PI3-KmRNA的表达变化。(七)统计学方法:采用SPSS13.0版本软件对资料进行统计学分析。测得结果用(?)±s表示,采用区组方差分析、t检验统计方法。P<0.05有统计学意义。结果一、温热治疗后皮肤组织内LC数量和形态的变化1、温热治疗后CA和正常人表皮内LC的数量变化:不同温热治疗后,随温度升高,LC数量逐渐减少,经统计学处理,差异具有显着性(P<0.01);CA组织比正常组织表皮内LC减少更明显,也随温度变化而变化。正常人和CA组织相同温度之间的LC数量经统计学处理,也具有显着性差异(P<0.01)。2、不同温热治疗后表皮内LC的形态变化不同温热治疗后,LC减少、变短或消失,具有温度相关性。CA组织较正常组织变化更明显。二、我们采用免疫荧光方法,用CD1a、CD83单克隆抗体双标记正常皮肤组织和疣组织,发现多数LC位于表皮,而且只表达CD1a,不表达CD83。三、不同温热条件对LC游走的影响:正常皮肤组织和疣组织经不同温度处理,并孵育12小时后,培养液中有较多的游走细胞。本研究采用双色色标记法,检测了游走至培养液中CD1a,CD83阳性细胞的百分数。经37℃,42℃和45℃处理后游走至培养液中LC的比例不同。随温度升高,CD1a+,CD83+LC百分比逐渐增加。四、为进一步证明温热对LC成熟功能的影响,我们采用荧光实时定量PCR的方法检测趋化因子受体CCR6和CCR7 mRNA水平变化。正常皮肤组织、疣体组织经不同温热条件处理后,游走至培养液中LC趋化因子受体mRNA表达比率不同;同一组织利用不同温度处理后,CCR6mRNA的表达量随温度增加逐渐减少,而CCR7mRNA的表达量随温度增加逐渐增加。五、温热对LC信号传导功能的影响本研究采用RT-PCR方法检测游走纯化的LC发现PI3Kp110αmRNA表达量随温度升高而逐渐增加。而未经过处理的疣组织的表达量低于正常皮肤组织。结论1、局部温热治疗后皮损部位LC较正常组织LC数量和结构均发生了明显改变,推测温热能促进LC离开表皮,通过真皮向局部淋巴结迁移,促进局部细胞免疫应答反应。2、局部温热治疗后游走至培养液中的LC明显增多,而且随温度升高CD83+LC逐渐增多,CCR7 mRNA表达量也逐渐增多,说明温热能够促进LC成熟,温热能够促进LC的迁移和增强抗原提呈能力,LC通过真皮向局部淋巴结迁移,在局部细胞免疫应答中发挥作用。温热能够有效治疗HPV感染皮肤病,是协助增强了机体免疫系统的作用。3、温热可能通过抑制HPV感染皮肤LC PI3-K的活性,调控信号传导通路。
贾帅[10](2017)在《双峰驼PIGR和FCGRT的基因克隆、生物信息学分析及在扁桃体中表达特性的研究》文中研究说明机体黏膜生态系统主要由黏膜和其表面的微生态系统构成,是抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。pIgR和FcRn是黏膜生态系统中参与黏膜免疫应答的重要效应分子,能够转运相应抗体到黏膜表面,并能中和清除病原,以维持黏膜生态系统中正常的微生物菌群和生理环境。呼吸道、消化道和泌尿生殖道等器官的多种细胞能够合成pIgR和FcRn,并在特定部位参与黏膜免疫应答。扁桃体(包括腭扁桃体、咽扁桃体、舌扁桃体、软腭扁桃体、会厌扁桃体、咽鼓管扁桃体)在不同动物呼吸道中的存在情况不同,并且作为重要的黏膜相关淋巴组织(Mucosa-associated lymphoid tissues,MALT)在呼吸道黏膜免疫和整个黏膜免疫系统中发挥着重要的作用。以上6种扁桃体在双峰驼中均存在。为了确定pIgR和FcRn在双峰驼各扁桃体中的表达和分布特点以及两种受体在局部黏膜免疫中的生物学功能,同时为进一步探究两种受体在双峰驼和其他动物体内的生物学功能有无物种间差异。本文以6峰健康成年(616岁)阿拉善双峰驼为研究对象,借助生物信息学分析对双峰驼pIgR和FcRnα链的相关生物信息学特性加以分析;克隆得到双峰驼的pIgR和FcRnα链的编码区(coding regions,CDS);并采用免疫组织化学和实时荧光定量(相对)等方法,研究了成年双峰驼6种扁桃体中FCGRT和PIGR的相对表达量及各扁桃体各部位pIgR和FcRn阳性细胞的分布特点。研究结果如下:(1)PIGR和FCGRT在不同扁桃体中的表达及相关生物信息学分析PIGR和FCGRT在咽扁桃体中的表达水平显着高于其他各扁桃体(p<0.05)。对两者的生物信息学分析表明双峰驼pIgR和FcRnα链均为I型跨膜分泌蛋白;pIgR和FcRnα链的一级结构在区域分布上同人和牛等哺乳动物具有相似性;而双峰驼与人的pIgR和FcRnα链的三级结构显示出高度的相似性。此外,序列同源性分析显示,克隆得到的PIGR和FCGRT CDS区的核苷酸和氨基酸序列与GenBank中预测序列的核苷酸和氨基酸CDS区序列高度一致。(2)pigr阳性细胞在各扁桃体中的分布同一扁桃体不同区域:腭扁桃体中,滤泡区显着高于滤泡间区(p<0.05),滤泡间区又显着高于上皮下区和网状上皮下区(p<0.05);会厌扁桃体中,滤泡区显着高于滤泡间区和网状上皮下区,滤泡间区和网状上皮下区(两者彼此差异不显着)又显着高于上皮下区(p<0.05);软腭扁桃体中,滤泡区、上皮下区和网状上皮下区(三者之间彼此差异不显着)显着高于腺体周围区和滤泡间区(两者之间彼此差异不显着)(p<0.05);咽鼓管扁桃体中,滤泡区、滤泡间区和腺体周围区差异不显着(p>0.05),但三者分别显着高于上皮下区(p<0.05)。不同扁桃体同一区域:滤泡区中,会厌扁桃体显着高于腭扁桃体、咽扁桃体以及咽鼓管扁桃体(三者之间彼此差异不显着)(p<0.05);滤泡间区中,会厌扁桃体和咽扁桃体(两者彼此差异不显着)显着高于腭扁桃体和咽鼓管扁桃体(两者彼此差异不显着),腭扁桃体和咽鼓管扁桃体均又显着高于软腭扁桃体(p<0.05);上皮下区中,咽扁桃体和软腭扁桃体(两者彼此差异不显着)均显着高于腭扁桃体、舌扁桃体、会厌扁桃体以及咽鼓管扁桃体(四者之间彼此差异不显着)(p<0.05);网状上皮下区中,会厌扁桃体和软腭扁桃体(两者彼此差异不显着)均显着高于腭扁桃体(p<0.05);腺体周围区中,咽扁桃体和咽鼓管扁桃体(两者彼此差异不显着)均显着高于软腭扁桃体(p<0.05)。(3)fcrn阳性细胞在各扁桃体中的分布同一扁桃体不同区域:腭扁桃体中,网状上皮下区显着高于其他三个区域(p<0.05);咽扁桃体中,滤泡区、滤泡间区和腺体周围区(三者彼此差异不显着)均显着高于上皮下区(p<0.05);会厌扁桃体中,滤泡区和网状上皮下区(两者彼此差异不显着)显着高于滤泡间区和上皮下区(p<0.05);软腭扁桃体中,滤泡区、滤泡间区和网状上皮下区(三者彼此差异不显着)均显着高于上皮下区和腺体周围区(两者彼此差异不显着)(p<0.05);咽鼓管扁桃体中,滤泡区和腺体周围区(两者彼此差异不显着)显着高于滤泡间区和上皮下区(两者彼此差异不显着)(p<0.05)。不同扁桃体同一区域:滤泡区中,腭扁桃体、会厌扁桃体和软腭扁桃体(三者彼此差异不显着)均显着高于咽扁桃体和咽鼓管扁桃体(两者彼此差异不显着)(p<0.05);滤泡间区中,咽扁桃体、会咽扁桃体和软腭扁桃体(三者彼此差异不显着)均显着高于腭扁桃体和咽鼓管扁桃体(两者彼此差异不显着)(p<0.05);上皮下区中,腭扁桃体、舌扁桃体和会厌扁桃体(三者彼此差异不显着)均显着高于咽扁桃体,软腭扁桃体和咽鼓管扁桃体(三者彼此差异不显着)(p<0.05);网状上皮下区中,腭扁桃体和会厌扁桃体(两者彼此差异不显着)均显着高于软腭扁桃体(p<0.05);腺体周围区中,咽扁桃体、软腭扁桃体和咽鼓管扁桃体三者之间无显着差异(p>0.05)。(4)pIgR和FcRn阳性细胞在同一扁桃体同一区域的分布腭扁桃体的滤泡区、滤泡间区、上皮下区和网状上皮下区中FcRn阳性细胞的密度均显着高于pIgR阳性细胞的密度(p<0.05);咽扁桃体的上皮下区中FcRn阳性细胞的密度显着高于pIgR阳性细胞的密度(p<0.05),其他区域无显着差异;会厌扁桃体滤泡区、滤泡间区、上皮下区和网状上皮下区两种阳性细胞密度差异不显着(p>0.05);软腭扁桃体和舌扁桃体各区域两种受体阳性细胞差异均不显着(p>0.05)。上述结果证实,不同类型的扁桃体在发挥黏膜免疫应答时,其免疫应答的诱导部位可能不同,提示不同扁桃体产生黏膜免疫应答的诱导机制可能不同;pIgR和Fc Rn阳性细胞在扁桃体各区域的分布优势可能还与解剖学位置有关;pIgR和Fc Rnα链的核苷酸和氨基酸序列在属及属以下分支的物种中的高度同源性表明pIgR和FcRnα链在双峰驼、人、牛、啮齿类动物以及其他哺乳动物内具有相似的生物学功能。
二、An Ultrastructural Study of the Organ Culture of Human Uterine Cervix Infected with Herpes Simplex Virus Type 2. Ⅱ. Changes of Nuclear Envelope,Multinucleated Giant Cell,Nuclear Microtubule,Replication of HSV-2 in Cytoplasm.(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、An Ultrastructural Study of the Organ Culture of Human Uterine Cervix Infected with Herpes Simplex Virus Type 2. Ⅱ. Changes of Nuclear Envelope,Multinucleated Giant Cell,Nuclear Microtubule,Replication of HSV-2 in Cytoplasm.(论文提纲范文)
(1)RbAp48在ALA-PDT治疗子宫颈上皮内病变及子宫颈癌中的作用及其机制研究(论文提纲范文)
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符号说明 |
前言 |
第一部分 ALA-PDT对H8细胞增殖和凋亡的影响及其机制 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第二部分 RbAp48在ALA-PDT作用于H8细胞中的作用及其机制 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
第三部分 RbAp48在ALA-PDT作用于子宫颈癌细胞中的作用及其机制 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
全文总结 |
主要创新点 |
主要不足与展望 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
致谢 |
攻读学位间期发表的主要论文 |
学位论文评阅及答辩情况表 |
英文文章Ⅰ |
英文文章Ⅱ |
(2)针刺在辅助生殖技术中的作用的调查研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
Acknowledgements |
Contents |
1.0 Introduction |
1.1 Backround and Context |
1.1.1 In Vitro Fertilisation |
1.1.2 Infertility |
1.1.3 Aetiology |
1.1.4 Indications for IVF |
1.2 Research Aim |
1.2.1 Hypotheses and Key Questions to be Addressed |
1.2.2 Rationale |
1.3 Research Methods |
1.3.1 Quantitative Study |
1.3.2 Qualitative Study |
1.4 Range |
1.5 Anticipated Results |
1.6 Significance |
1.7 Theoretical Foundations |
1.8 Evidence-base for Proposal |
1.9 Research Gap |
2.0 Literature Review |
2.1 Literature Search Strategy |
2.2 Chinese Medicine Perspective |
2.2.1 TCM Gynaecology and the Menstrual Cycle |
2.2.2 Diagnostic Theories in Chinese Medicine |
2.2.3 Acupuncture and Female Infertility |
2.2.4 Cycle-regulating Theory |
2.2.5 Benefits of Acupuncture in the Treatment of Infertility |
2.2.6 Andrology and Sub-fertility |
2.3 Western Medicine Perspective |
2.3.1 Overview of Female Reproductive Anatomy and Physiology |
2.3.2 Study of Infertility |
2.3.3 Andrology and Sub-fertility |
2.4 Relationship Between Chinese and Western Medicine |
2.5 IVF and Acupuncture |
2.5.1 Overview of IVF Steps |
2.5.2 Risks Associated with IVF |
2.5.3 Discussion of Various Acupuncture Protocols during IVF |
2.6 Conclusion of Literature Review |
2.6.1 Summary of 'Chinese Medicine Perspective' |
2.6.2 Summary of 'Western Medicine Perspective' |
2.6.3 Summary of 'Relationship between Chinese and WesternMedicine' |
2.6.4 Summary of TVF and Acupuncture' |
2.6.5 Synthesis |
3.0 Research Proposal |
3.1 Research Question |
3.2 Aims and Objectives |
3.3 Hypotheses and Key Questions to be Addressed |
4.0 Methodology |
4.1 Criteria for Selecting Research Methods |
4.1.1 Criteria for Using a Quantitative Approach |
4.1.2 Criteria for Using a Qualitative Approach |
4.1.3 Methods Rationale for Combining Quantitative and Qualitative Research Methods |
4.2 Data Collection |
4.2.1 Methods Used to Collect Data |
4.2.2 Piloting the Survey and Interview Questionnaire |
4.2.3 Survev |
4.2.4 Interviews |
4.3 Characteristics of the Population and Samples |
4.3.1 Participants |
4.3.2 Sampling-Inclusion/ Exclusion Criteria |
4.4 Ethical Considerations |
5.0 Data Presentation and Analysis |
5.1 Introduction |
5.1.1 Overview of survey data results |
5.1.2 Overview of interview data results |
5.2 Hypotheses, Questions and Sub-questions |
5.2.1 Hvpothesis 1 |
5.2.2 Hypothesis 2 |
5.2.3 Hvpothesis 3 |
5.3 Conclusion |
6.0 Discussion |
6.1 Significance of the Research |
6.2 Contrasting Viewpoints |
6.3 Assessment of Findings |
6.4 Hypotheses, Related Questions and Sub-questions |
6.4.1 Hypothesis 1 |
6.4.2 Hypothesis 2 |
6.4.3 Hypothesis 3 |
6.5 Synthesis |
6.6 Assessment of Research |
6.6.1 Difficulties Encountered |
6.6.2 Limitations |
6.6.3 Strengths and Weaknesses of Data |
6.6.4 Does the Data Support the Propositiin |
7.0 Conclusion |
7.1 Summary |
7.2 Sinificance |
7.3 Limitations of the Work |
7.4 The Future |
7.5 Recommendations |
8.0 Appendices |
Appendix A Survey and Statistical Analysis from SurveyMonkey |
Appendix B Semi-structured Interview Questionnaire, Accompanying Letter, and Informed Consent Form |
B.1 Semistructured Interview Questionnaire |
B.2 Accompanying Letter |
B.3 Informed Consent Form |
Appendix C Chi-square Test |
Appendix D Data from Interviewees(July to December 2012) |
Appendix E Concept of Qi |
Appendix F Classification of TCM Syndrome Types and Treatment for Infertility |
F.1 Kidney Deficiency |
F.2 Qi and Blood Deficiency,Heart Qi Stagnation/Liver Qi Stagnation |
F.3 Blood Stagnation and Phlegm-Damp/Damp-heat Accumulation |
Appendix G The Treatment Principles and Acupuncture Points in the Four Phases of the Menstrual Cycle |
Appendix H The Menstrual Cycle Phases |
H.1 The Follicular,Luteal and Yin/Yang Phases,within the Menstrual Cycle |
H.2 Patterns of Disharmony,within the Follicular Phase of the Menstrual Cycle |
H.3 Patterns of Disharmony within the Luteal Phase of the Menstrual Cycle |
Appendix I Interview with Professor Wang,Guangzhou University |
Appendix J Male Infertility |
J.1 Kidney Yang Deficiency in Male Infertility |
J.2 Explanation of the Acupuncture Points Used in J.1 |
J.3 Kidney Yin Deficiency in Male lnfertility |
J.4 Explanation of the Acupuncture Points Used in J.3 |
J.5 Liver Qi Stagnation with Blood Stasis in Male Infertility |
J.6 Explanation of the Acupuncture Points Used in J.5 |
J.7 Damp Heat Blocking and Obstructing the Lower Jiao |
J.8 Explanation of the Acupuncture Points Used in J.7 |
Appendix K Sperm Parameters |
K.1 Low Sperm Count-Diagnosis and Acupuncture Points |
K.2 Volume-Diagnosis and Acupuncture Points |
K.3 Motility-Diagnosis and Acupuncture Points |
K.4 Morphology-Diagnosis and Acupuncture Points |
K.5 Non-liquefaction-Diagnosis and Acupuncture Points |
Appendix L The Three Clinical Indicators for OHSS and Appropriate Acupuncture Treatments |
Appendix M Elisabet Stener-Victorin Protocol |
Appendix N Email from Elisabet Stener-Victorin(December 2012) |
Appendix O Paulus Protocol |
Appendix P Cridennda and Magarelli |
P.1 Interview Questionnaire |
P.2 Email to Cridennda and Magarelli,April 2~(nd) 2013 |
P.3 Transcript of Interview with Dianne Crdennda,Paul Magarelli and Alison Courtney-February 14~(th) 2013 |
P.4 Informed Consent Form |
Appendix Q Abbreviations of Acupuncture Points |
Appendix R Appendices to Reference List |
9.0 References |
(6)两种水生动物精子发生和成熟的细胞学机制(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一部分 文献综述 |
第一章 鱼类和爬行类动物生殖特性的研究进展 |
第一节 鱼类精子发生和成熟的研究进展 |
1 鱼类精巢结构与生殖周期 |
2 鱼类精子发生模式 |
3 鱼类精子发生和生殖细胞的结构 |
第二节 爬行动物精子发生和成熟的研究进展 |
1 爬行动物生精上皮的结构与生精周期 |
2 爬行动物生殖细胞的结构 |
第三节 生殖道内精子的成熟和储存 |
第四节 睾丸内Toll样受体的研究进展 |
参考文献 |
第二部分 试验研究 |
第二章 中华鳖精子的发生 |
1 材料与方法 |
1.1 试验材料 |
1.2 光镜样品制备与观察 |
1.3 透射电镜制样与观察 |
2 结果 |
2.1 精子发生的组织学特点 |
2.2 精子发生的超微结构特征 |
3 讨论 |
4 小结 |
参考文献 |
第三章 中华鳖精子结构变化及其与精子储存的关系研究 |
1 材料与方法 |
1.1 试验动物 |
1.2 取材 |
1.3 光镜样品制备与观察 |
1.4 透射电镜制样与观察 |
1.5 扫描电镜制样与观察 |
2 结果 |
2.1 附睾精子的特征 |
2.2 输卵管中的精子 |
3 讨论 |
3.1 精子胞质小叶有利于附睾精子储存 |
3.2 输卵管中精子线粒体的变化 |
3.3 致密纤维鞘支持附睾和输卵管精子储存 |
4 小结 |
参考文献 |
第四章 中华鳖输卵管精子存储及精子与上皮的互作 |
1 材料与方法 |
1.1 试验动物 |
1.2 取材 |
1.3 光镜样品制备与观察 |
1.4 透射电镜制样与观察 |
2 结果 |
3 讨论 |
3.1 精子在输卵管中至少可以存储一年 |
3.2 输卵管上皮细胞对精子具有保护和支持作用 |
3.3 输卵管的免疫耐受 |
4 小结 |
参考文献 |
第五章 中华鳖睾丸TLR2和TLR4的表达 |
1 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 主要仪器和试剂 |
1.3 组织光镜样品制备 |
1.4 免疫组织化学观察 |
1.5 Western blot法检测TLR2和TLR4蛋白的表达 |
2 结果 |
2.1 TLR2和TLR4在中华鳖睾丸的分布 |
2.2 中华鳖繁殖期睾丸TLR2和TLR4的表达 |
3 讨论 |
4 小结 |
参考文献 |
第六章 斑马鱼精子的发生 |
1 材料与方法 |
1.1 试验材料 |
1.2 主要仪器和试剂 |
1.3 光镜样品制备与观察 |
1.4 透射电镜制样与观察 |
2 结果 |
2.1 精子发生的组织学与解剖学研究 |
2.2 精子发生的超微结构特征 |
3 讨论 |
4 小结 |
参考文献 |
第七章 斑马鱼精子的细徽结构 |
1 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 取材 |
1.3 光镜样品制备与观察 |
1.4 透射电镜制样与观察 |
2 结果 |
2.1 光镜观察结果 |
2.2 透射电镜观察 |
3 讨论 |
4 小结 |
参考文献 |
第八章 斑马鱼精巢TLR2和TLR4的表达研究 |
1 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 主要仪器和试剂 |
1.3 光镜样品制备 |
1.4 免疫组织化学观察 |
2 结果 |
2.1 不同饲养温度斑马鱼精巢TLR2的表达 |
2.2 不同饲养温度斑马鱼精巢TLR4的表达 |
3 讨论 |
4 小结 |
参考文献 |
全文结论 |
创新点 |
附录 |
论文发表情况 |
致谢 |
(8)“逆临床思维”的理论探讨及在发现病原生物性疾病中的应用(论文提纲范文)
一、中文摘要 |
二、英文摘要 |
三、引言 |
四、正文 |
第一部分 “逆临床思维”与新型疾病发现方法的探讨 |
材料与方法 |
结果和讨论 |
第二部分 “急性出血性阑尾炎”爆发的发现与鉴别 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
第三部分 “急性出血性阑尾炎”的病原学探讨 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
参考文献 |
五、综述 |
正文 |
参考文献 |
六、后记 |
(9)局部温热对HPV感染表皮朗格汉斯细胞功能活性的影响(论文提纲范文)
一、摘要 |
中文论着摘要 |
英文论着摘要 |
二、英文缩略语 |
三、学位论文正文 |
论文一 局部温热对HPV感染表皮朗格汉斯细胞数量和形态的影响 |
前言 |
材料和方法 |
结果(附论文图片) |
讨论 |
结论 |
论文二 局部温热对HPV感染表皮朗格汉斯细胞成熟功能的影响 |
前言 |
材料和方法 |
结果(附论文图片) |
讨论 |
结论 |
论文三 温热对HPV感染皮肤LC的PI3-K活性的影响 |
前言 |
材料和方法 |
结果 |
讨论 |
结论 |
四、本研究创新性的自我评价 |
五、参考文献 |
六、附录 |
综述 |
在学期间科研成绩 |
致谢 |
个人简介 |
(10)双峰驼PIGR和FCGRT的基因克隆、生物信息学分析及在扁桃体中表达特性的研究(论文提纲范文)
摘要 |
SUMMARY |
英文缩略词表 |
第一部分 文献综述 |
第一章 黏膜免疫系统概述 |
1 黏膜免疫系统的构成形式 |
2 黏膜免疫系统的作用机制 |
2.1 黏膜免疫系统的抗原摄取和抗原递呈 |
2.2 黏膜免疫系统的免疫应答机制 |
3 黏膜免疫耐受机制 |
第二章 pIgR和FcRn在黏膜免疫系统中的作用 |
1 pIgR和FcRn概述 |
2 pIgR的生物学特性 |
2.1 pIgR的组成结构 |
2.2 PIGR基因的定位和结构 |
2.3 pIgR的主要功能 |
2.4 pIgR的组织表达特点 |
2.5 pIgR的表达调控 |
3 FcRn的生物学特性 |
3.1 FcRn的组成结构 |
3.2 FCGRT基因的结构与定位 |
3.3 FcRn的主要功能 |
3.4 FcRn的组织表达特点 |
3.5 FcRn的表达调控 |
第三章 扁桃体的构成和功能 |
1 扁桃体的种类 |
1.1 腭扁桃体 |
1.2 舌扁桃体 |
1.3 咽扁桃体 |
1.4 软腭扁桃体 |
1.5 会厌扁桃体 |
1.6 咽鼓管扁桃体 |
2 扁桃体对机体的重要保护作用 |
3 双峰驼在免疫方面的特殊性及其扁桃体相关研究 |
第二部分 实验研究 |
第一章 双峰驼FCGRT和PIGR的基因克隆及相关生物信息学分析 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.1.1 主要仪器设备 |
1.1.2 主要试剂 |
1.1.3 引物合成 |
1.2 方法 |
1.2.1 总RNA的提取 |
1.2.2 去除基因组DNA |
1.2.3 合成c DNA第一链 |
1.2.4 扩增及基因片段的回收 |
1.2.5 回收片段加A并回收 |
1.2.6 连接p MD18-T |
1.2.7 DH5a感受态细胞的制备 |
1.2.8 转化感受态细胞 |
1.2.9 阳性克隆的鉴定和测序 |
1.3 生物信息学分析 |
1.3.1 理化性质 |
1.3.2 亚细胞定位分析 |
1.3.3 跨膜情况预测 |
1.3.4 信号肽预测 |
1.3.5 磷酸化位点预测 |
1.3.6 一级结构预测 |
1.3.7 二级结构预测 |
1.3.8 三维结构预测 |
1.3.9 序列同源性分析 |
1.3.10 进化分析 |
2 实验结果 |
2.1 总RNA的抽提 |
2.2 目的基因的PCR扩增 |
2.3 重组质粒的菌液PCR鉴定 |
2.4 克隆所得双峰驼FcRn α 链和pIgR CDS区的序列信息 |
2.4.1 FCGRT α 链CDS区序列 |
2.4.2 PIGR CDS区序列 |
2.5 双峰驼FcRnα链和pIgR的理化性质与亚细胞定位分析 |
2.6 双峰驼FcRnα链和pIgR跨膜情况预测 |
2.7 双峰驼FcRnα链和pIgR信号肽预测 |
2.8 双峰驼FcRnα链和pIgR磷酸化位点预测 |
2.9 双峰驼FcRnα链和pIgR一级结构预测 |
2.10 双峰驼FcRnα链和pIgR二级结构预测 |
2.11 双峰驼FcRnα链和pIgR三维结构预测 |
2.12 克隆所得双峰驼FcRnα链和pIgR CDS区的同源性分析 |
2.13 克隆所得双峰驼FcRnα链和pIgR的进化树构建 |
3 讨论 |
3.1 亚细胞定位 |
3.2 一级结构 |
3.3 二级结构 |
3.4 三级结构 |
3.5 同源性分析 |
4 小结 |
第二章 PIGR和FCGRT在双峰驼扁桃体中的表达特点及其与黏膜免疫的关系 |
1 材料方法 |
1.1 主要试剂 |
1.2 主要仪器 |
1.3 主要耗材 |
2 实验方法 |
2.1 RNA提取 |
2.2 逆转录 |
2.2.1 总RNA中基因组DNA的去除 |
2.2.2 逆转录 |
2.2.3 c DNA的稀释与保存 |
2.3 荧光定量PCR检测 |
2.3.1 引物合成 |
2.3.2 PCR反应体系的配制 |
2.3.3 荧光定量PCR循环条件 |
3 结果 |
3.1 双峰驼扁桃体总RNA的提取 |
3.2 FCGRT在双峰驼扁桃体中的表达情况 |
3.3 PIGR在双峰驼扁桃体中的表达情况 |
4 讨论 |
5 小结 |
第三章 成年双峰驼扁桃体中pIgR和FcRn的细胞分布及其与黏膜免疫的关系 |
实验一 成年双峰驼扁桃体中pIgR的细胞分布及其与黏膜免疫的关系 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.1.1 实验动物 |
1.1.2 药品与试剂 |
1.1.3 主要仪器设备 |
1.2 方法 |
1.2.1 样品采集 |
1.2.2 石蜡切片 |
1.2.3 间接免疫组织化学(SABC)染色 |
1.2.4 数据的获取及分析 |
2 结果 |
2.1 同一器官不同区域pIgR阳性细胞密度的比较 |
2.2 不同器官同一区域pIgR阳性细胞密度的比较 |
2.2.1 滤泡区 |
2.2.2 滤泡间区 |
2.2.3 上皮下区 |
2.2.4 网状上皮下区 |
2.2.5 腺体周围区 |
3 讨论 |
4.小结 |
实验二 成年双峰驼扁桃体中FcRn的细胞分布及其与黏膜免疫的关系 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
2.1 同一器官不同区域FcRn阳性细胞密度的比较 |
2.2 不同器官同一区域FcRn阳性细胞密度的比较 |
2.2.1 滤泡区 |
2.2.2 滤泡间区 |
2.2.3 网状上皮下区 |
2.2.4 腺体周围区 |
2.2.5 上皮下区 |
3 讨论 |
4 小结 |
实验三 成年双峰驼扁桃体同部位pIgR和FcRn阳性细胞的分布及其与黏膜免疫的关系 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
2.1 同器官同区域pIgR和FcRn阳性细胞密度比较 |
2.1.1 腭扁桃体 |
2.1.2 咽扁桃体 |
2.1.3 会厌扁桃体 |
2.1.4 软腭扁桃体 |
2.1.5 咽鼓管扁桃体 |
2.1.6 舌扁桃体 |
3 讨论 |
4 小结 |
第三部分 全文结论 |
参考文献 |
致谢 |
作者简介 |
导师简介 |
四、An Ultrastructural Study of the Organ Culture of Human Uterine Cervix Infected with Herpes Simplex Virus Type 2. Ⅱ. Changes of Nuclear Envelope,Multinucleated Giant Cell,Nuclear Microtubule,Replication of HSV-2 in Cytoplasm.(论文参考文献)
- [1]RbAp48在ALA-PDT治疗子宫颈上皮内病变及子宫颈癌中的作用及其机制研究[D]. 吴淑霞. 山东大学, 2019(02)
- [2]针刺在辅助生殖技术中的作用的调查研究[D]. Alison Courtney. 广州中医药大学, 2013(S1)
- [3]AN ULTRASTRUCTURAL STUDY OF THE ORGAN CULTURE OF HUMAN UTERINE CERVIX INFECTED WITH HERPES SIMPLEX VIRUS TYPE 2 Ⅰ. A COMPARATIVE STUDY OF THE CELL PATHOLOGY AFTER VIRAL INFECTION BETWEEN LIGHT AND ELECTRON MICROSCOPY[A]. Lee Kun. Recent Development of Electron Microscopy--Proceedings of the Second Chinese-Japanese Electron Microscopy Seminar, 1983
- [4]人类免疫缺陷病毒与黏膜免疫[J]. 杨贵波,邵一鸣. 世界华人消化杂志, 2005(14)
- [5]囊性纤维化:太多NaCl,太少HCO3-(英文)[J]. QUINTON Paul M. 生理学报, 2007(04)
- [6]两种水生动物精子发生和成熟的细胞学机制[D]. 章琳俐. 南京农业大学, 2015(06)
- [7]An Ultrastructural Study of the Organ Culture of Human Uterine Cervix Infected with Herpes Simplex Virus Type 2. Ⅱ. Changes of Nuclear Envelope,Multinucleated Giant Cell,Nuclear Microtubule,Replication of HSV-2 in Cytoplasm.[A]. Lee Kun. Recent Development of Electron Microscopy--Proceedings of the Second Chinese-Japanese Electron Microscopy Seminar, 1983
- [8]“逆临床思维”的理论探讨及在发现病原生物性疾病中的应用[D]. 郭毅. 武汉大学, 2004(11)
- [9]局部温热对HPV感染表皮朗格汉斯细胞功能活性的影响[D]. 李晓东. 中国医科大学, 2008(06)
- [10]双峰驼PIGR和FCGRT的基因克隆、生物信息学分析及在扁桃体中表达特性的研究[D]. 贾帅. 甘肃农业大学, 2017(12)