关于人类轮状病毒超微结构的一些新想法

一、SOME NEW IDEAS ON THE ULTRASTRUCTURE OF HUMAN ROTAVIRUS（论文文献综述）

孙晓琴^[1]（2015）在《氢氧化铝佐剂对灭活轮状病毒免疫原性的影响》文中研究指明[目的]研究评价氢氧化铝佐剂与灭活轮状病毒疫苗的最适配比。预防传染病传统有效的疫苗主要有减毒活疫苗和灭活疫苗。轮状病毒疫苗自上世纪90年代初开始研制,现有三种减毒活疫苗用于预防轮状病毒感染,Rotarix、RotaTeq和罗特威。减毒活疫苗在诱导全面免疫反应有其优势,但也存在一些如毒力返祖,不易除去外源因子污染,母体抗体对疫苗有效性影响,不能用于免疫缺陷儿童或进行免疫抑制治疗者接种等问题。灭活疫苗可最大限度降低上述问题,灭活疫苗安全性优于活疫苗但有效性往往低于活疫苗。因此,添加佐剂是增强灭活疫苗免疫原性提高有效性的常用方法。氢氧化铝是常用且有效的人用疫苗佐剂。如何将氢氧化铝佐剂与疫苗进行最适配比是关系到了灭活疫苗的有效性和安全性的主要问题,本论文就此问题做了系统的研究。[方法]疫苗制备：将在Vero细胞上培养的轮状病毒ZTR-68株收获的原液,通过浓缩、纯化和灭活工艺获得灭活轮状病毒疫苗。动物免疫：选用ICR小鼠,雌雄各半。肌肉注射,免疫2次,间隔两周,免疫后14d采血,蚀斑减数中和试验检测小鼠血清中和抗体效价。氢氧化铝对疫苗免疫原性影响实验包括两部分：第一部分不同浓度Al（OH）3对同一疫苗浓度（160EU/100ul）的比较,实验动物分别注射0.2 mg/ml Al（OH）3+160EU/100ul、0.4 mg/ml Al（OH）3+160EU/100ul、0.8 mg/ml Al（OH）3+160EU/100ul及1.6 mg/ml Al（OH）3+160EU/100ul;第二部分在同— Al（OH）3佐剂浓度（0.8 mg/ml）与不同抗原浓度进行比较,实验动物分别注射免疫剂量为2.5EU、10 EU、40EU、160EU、320EU及640 EU疫苗抗原,同时设相应无佐剂组及对照组。[结果]第一部分实验结果比较发现,免疫含0.8 mg/ml及1.6 mg/ml氢氧化铝灭活疫苗均可获得较高中和效价,几何均值（GMT）分别为1：228及1：256。第二部分实验结果比较发现,160 EU+0.8mg/ml Al（OH）3/100μl免疫剂量组免疫效果最好,中和效价GMT值达到203.18。同剂量的轮状病毒灭活疫苗佐剂组的免疫效果要优于无佐剂疫苗组（P均<0.05）。其次160EU与640EU剂量第一次免疫的中和效价GMT值分别90.50和161.27,相差较大,加入佐剂后中和效价GMT值分别是203.18和181.01,差异不明显且160EU组>640EU组。随后加强免疫后,160EU与640EU剂量中和效价GMT值明显升高,分别为161.27和228.07,含佐剂中和效价GMT值增加到287.35和256。[结论]氢氧化铝佐剂对提高轮状病毒灭活疫苗免疫原性有明显作用。Al（OH）3佐剂以0.8mg/ml的效果最好,灭活轮状病毒疫苗抗原160EU和640EU在此Al（OH）3浓度下均能诱导良好的体液免疫反应,二者无明显差异。因此160EU+0.8mg/ml Al（OH）3/100μl是配比最佳方案。

戎文婷^[2]（2014）在《干扰线粒体的TPGS/PLGA纳米粒逆转多药耐药机制研究》文中研究指明背景聚（乳酸-羟基乙酸）共聚物（poly（lactic-co-glycolic acid）, PLGA）是功能高分子有机化合物,有良好的生物相容性和生物降解性,它能降解且速度可控。PLGA被作为药用辅料收录进美国药典,广泛应用于生物制药及医用工程材料。生育酚聚乙二醇琥珀酸盐（TPGS）作为乳化剂应用于纳米粒制备,可以控制药物释放,提高载药效率,保证纳米颗粒良好的粒径及表面形态。而且TPGS常被用作P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）外排泵抑制剂广泛应用于多药耐药（multidrug resistance,MDR）逆转,但具体抑制机制还未清楚。线粒体参与很多细胞活动,如氧化磷酸化、三磷酸腺苷（ATP）合成、钙水平调节和细胞凋亡等,多种疾病的发展过程中均存在线粒体功能紊乱。因此,药物线粒体靶向性运输是有效而有潜能的治疗措施。目的TPGS修饰的PLGA纳米粒（TPGS/PLGA NPs）对肿瘤细胞的多药耐药逆转机制还未研究清楚。本课题以癌细胞线粒体结构和功能,ATPase活性为切入点,研究TPGS/PLGA NPs逆转P-gp介导的肿瘤细胞多药耐药机制。方法1.采用复乳化溶剂挥发技术制备TPGS/PLGA NPs,用扫描电镜（SEM）、纳米粒度电位分析仪、X射线衍射（XRD）、差式扫描量热仪（DSC）和傅里叶变换红外光谱（FTIR）对纳米颗粒进行形态学及理化结构检测。2.采用耐顺铂的的人非小细胞肺癌细胞株（A549/DDP）作为体外研究模型,从细胞水平研究TPGS/PLGA NPs对细胞凋亡和坏死,细胞及线粒体结构的影响。3.利用A549/DDP细胞模型研究TPGS/PLGA NPs对线粒体功能、ATPase活性的影响,研究TPGS/PLGA NPs在细胞及分子水平的多药耐药逆转机制。结果1.制备的TPGS/PLGA NPs颗粒为表面光滑的球形,平均粒径为114.3nm,表面Zeta电位为-19.6mV。DSC、XRD、FTIR进一步对TPGS/PLGA NPs进行表征检测证实TPGS成功修饰了PLGA纳米颗粒。2.TPGS/PLGA NPs只有达到一定浓度才会对细胞凋亡和坏死、细胞及线粒体结构和功能产生明显影响,影响程度呈浓度及时间依赖性。3.TPGS/PLGA NPs作用机制研究实验发现其逆转P-gp介导的MDR与抑制线粒体ATP生成、降低线粒体膜电位、降低P-gp底物诱导的ATPase活性有关。结论本课题显示TPGS/PLGA NPs通过影响线粒体结构和功能,抑制ATPase活性,逆转肿瘤细胞内P-gp过表达引起的多药耐药,为研发能逆转多药耐药的安全高效新型纳米递药系统（nano-drug delivery system,NDDS）提供新的有用信息。

季星妤^[3]（2020）在《鸡RIG-I样受体MDA5及下游接头蛋白MAVS的相关研究》文中研究指明天然免疫是机体的第一道防御屏障,其通过一系列模式识别受体（PRRs）识别各种病原微生物产生的病原相关分子模式（PAMPs）。其中RIG-I样受体家族（RLRs）为胞浆内主要RNA识别受体,包括RIG-I、MDA5和LGP2。MDA5能够识别长双链RNA,并将信号传递给下游接头蛋白MAVS以介导信号通路,产生干扰素、促炎因子以及相关趋化因子,最终启动天然免疫抵御病原微生物。MDA5识别RNA病毒,也有研究证明MDA5能够识别DNA病毒和寄生虫复制过程中产生RNA以及细胞内源RNA。由于鸡缺失RIG-I,鸡MDA5（chMDA5）发挥关键作用。本研究从鸡细胞中克隆出鸡源MDA5,构建chMDA5及其信号接头蛋白chMAVS真核表达载体并验证两者表达及信号功能。同时通过DF-1细胞转染表达与敲除系统检验chMDA5和chMAVS的抗病毒作用以及二者之间的信号功能关系。最后构建chMDA5原核表达质粒,纯化细菌表达蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体为后续试验提供服务。1.chMDA5和chMAVS的克隆表达及其信号功能本研究从HD11细胞中RT-PCR扩增出chMDA5编码基因,与中间载体pENTER4-MCS-3FLAG连接获得重组中间质粒pENTER4-chMDA5-3FLAG。同时将合成chMAVS基因同样克隆到中间载体获得重组中间质粒pENTER4-chMAVS-3FLAG。将重组中间质粒分别与目的载体pDSET47特异位点性重组（LR）获得重组真核表达质粒pcDNA-chMDA5-3FLAG 和 pcDNA-chMAVS-3FLAG。Western blotting 检测 chMDA5 与chMAVS在转染293T细胞中表达,蛋白大小分别是140kDa和50kDa,符合预期。荧光共聚焦显微镜表明chMDA5和chMAVS都定位于细胞浆,但不存在明显共定位。启动子双荧光素酶报告基因和RT-PCR方法检测chMDA5和chMAVS的信号功能,结果显示chMDA5和chMAVS共转染293T细胞激活NF-κB通路,显着上调IL-1β与IL-8的转录。而共转染DF1细胞激活鸡IFNβ启动子,上调细胞下游基因IFNβ和OASL表达,上述结果差异显示了细胞种属特异性。此外信号接头蛋白也表现出种属特异性,与前述chMDA5和chMAVS共转染293T细胞只激活NF-κB相对照,chMDA5和猪（p）MAVS共转染可以有效激活细胞ISRE和NF-κB信号。定量RT-PCR方法检测鸡不同组织内chMDA5和chMAVS转录分布,发现chMDA5和chMAVS分布情况较为一致,主要集中在消化腺和肠道,其次是肺脏和脾脏。2.chMDA5和chMAVS转染表达与敲除对RNA和DNA病毒复制的影响DF1细胞用于单独或共转染chMDA5和chMAVS表达质粒,转染细胞用不同病毒感染刺激,包括RNA病毒水泡性口炎病毒（VSV）、仙台病毒（SeV）、脑心肌炎病毒（EMCV）、鸡新城疫病毒（NDV）和DNA病毒痘苗病毒VacV株、SMV株。qRT-PCR检测感染细胞中病毒复制基因和细胞下游基因表达情况。根据已知序列利用Benchling软件分别设计chMDA5和chMAVS的gRNA编码DNA序列（引物）,引物退火后与plentiCRISPRv2载体连接,获得重组敲除质粒gMDA5与gMAVS。敲除gRNA质粒和相应真核表达质粒共转染293T细胞检验gRNA敲除效率,挑选其中敲除效果较好gRNA质粒用于细胞转染实验。DF1用于单独或共转染gMDA5和gMAVS基因敲除质粒,转染细胞同样用上述不同RNA和DNA病毒感染刺激,qRT-PCR检测感染细胞中病毒复制基因和细胞下游基因表达情况。结果显示转染表达与敲除细胞系统中,chMDA5-chMAVS能够响应RNA病毒VSV、SeV、EMCV、NDV并产生IFN与OASL以影响病毒复制,chMDA5-chMAVS表达DF-1细胞系统中上述RNA病毒复制受到抑制,而敲除细胞系统中RNA病毒复制得到提高。同时,chMDA5和chMAVS共表达能够进一步增强抑制RNA病毒效果,而共敲除细胞系统中RNA病毒复制进一步升高。因此chMDA5与chMAVS在抗RNA病毒天然免疫中起到至关重要的作用。DNA病毒感染细胞结果表明,内源性chMDA5和chMAVS不影响病毒复制和下游病毒刺激基因表达,因此chMDA5-chMAVS在抗DNA病毒感染中无显着作用。3.chMDA5的多抗制备将pENTER4-chMDA5与原核目的载体pDSET527通过特异位点同源重组（LR）获得重组原核表达质粒。表达质粒转化细菌BL21（DE3）,大量扩增后使用IPTG诱导chMDA5蛋白表达。从细菌裂解上清中分离获得大小符合预期的可溶性chMDA5蛋白。将分离蛋白纯化并浓缩后进行定量,免疫BALB/c小鼠（每次15μg/只）,三次免疫后采集血清。Western blotting检测发现,血清多抗能够检测外源表达chMDA5。

崔嘉良^[4]（2021）在《自交联阳离子硅丙乳液合成及抗菌耐沾污涂料制备研究》文中研究指明

二、SOME NEW IDEAS ON THE ULTRASTRUCTURE OF HUMAN ROTAVIRUS（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、SOME NEW IDEAS ON THE ULTRASTRUCTURE OF HUMAN ROTAVIRUS（论文提纲范文）

（1）氢氧化铝佐剂对灭活轮状病毒免疫原性的影响（论文提纲范文）

（2）干扰线粒体的TPGS/PLGA纳米粒逆转多药耐药机制研究（论文提纲范文）

（3）鸡RIG-I样受体MDA5及下游接头蛋白MAVS的相关研究（论文提纲范文）

四、SOME NEW IDEAS ON THE ULTRASTRUCTURE OF HUMAN ROTAVIRUS（论文参考文献）

• [1]氢氧化铝佐剂对灭活轮状病毒免疫原性的影响[D]. 孙晓琴. 昆明医科大学, 2015(02)
• [2]干扰线粒体的TPGS/PLGA纳米粒逆转多药耐药机制研究[D]. 戎文婷. 南京师范大学, 2014(12)
• [3]鸡RIG-I样受体MDA5及下游接头蛋白MAVS的相关研究[D]. 季星妤. 扬州大学, 2020
• [4]自交联阳离子硅丙乳液合成及抗菌耐沾污涂料制备研究[D]. 崔嘉良. 北京化工大学, 2021

标签：轮状病毒;  免疫佐剂;  细胞转染;  质粒载体;  科学;