一、猪水泡病的血清学（论文文献综述）
钟金栋[1]（2007）在《猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究》文中研究说明猪水泡病（SVD）又名猪传染性水泡病，是由猪水泡病毒（SVDV）引起的一种烈性传染病，以口和蹄部产生水泡性损伤为特征，其临床症状与猪口蹄疫（FMD）极为相似，不容易区别，严重阻碍我国畜牧业和动物及其产品国际贸易的发展，引起严重的公共卫生问题，国际兽医局（OIE）将这疫病列为A类传染病。在国际贸易中，多数国家对SVD采取严格的检疫和控制措施已成为一种技术性贸易保护壁垒。猪水泡病和水泡性口炎（VSV）及口蹄疫临床症状相似，需要进行鉴别诊断，因此建立敏感性高、特异性强，快速、安全和可靠的诊断方法对于猪水泡病、水泡性口炎、口蹄疫的控制和出入境检验检疫至关重要。本研究应用基因克隆、基因表达等技术，对猪水泡病病毒外壳蛋白抗原（VP1）编码基因进行了克隆，构建于原核表达载体，高效表达目的蛋白，应用表达产物建立了酶联免疫吸附试验（ELISA），同时建立了猪水泡病RT-PCR、多重RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR核酸检测方法，并进行了相关病毒核酸的鉴别检测，其主要内容和结果为：1．以猪水泡病病毒核酸为模板，反转录聚合酶链式反应，扩增获得849bp的VP1基因，通过T-A克隆，将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中，构建SVDV VP1基因重组质粒，并进行核苷酸序列测定确定其基因的正确性。再将片断插入pBAD／Thio TOPO表达载体，经测序鉴定，筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆，成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明，以终浓度为0.002％的L—阿拉伯醛糖进行诱导，5h后表达可达到高峰，表达蛋白为融合蛋白，分子量为47.13kDa，表达产量约占菌体总蛋白的16％。Western blotting检测表明，诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。应用该重组抗原建立了检测猪水泡病的间接ELISA方法，以重组的猪水泡病病毒VP1蛋白为包被抗原，建立了以重组VP1蛋白为抗原检测SVDV抗体的酶联免疫吸附试验。2．根据基因库中的猪水泡病病毒高度保守的序列，设计了与SVDV互补的特异性引物，成功地建立了RT-PCR检测方法，扩增出251bp和366bp特异性条带，本试验能稳定、高效、快速地检测出猪水泡病病毒。通过检测FMDV、VSV、BHK21细胞等，对照的扩增结果均为阴性，证明该方法可特异性扩增目的基因。对SVDV RNA进行10倍系列稀释后检测，结果SVDV RNA在10-4稀释度时仍能检测到阳性，说明该方法具有较好的敏感性。3．应用RT-PCR技术，建立了多重PCR同时检测鉴别口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎病毒的方法。根据基因库中的口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和水泡性口炎病毒各基因的序列，设计了与FMDV、SVDV、VSV互补的3对特异性引物，对样品中的cDNA模板进行了多重RT-PCR扩增及反应条件的优化，结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带，分别为189bp、125bp和300bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增，均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能同时特异、敏感、快速地鉴定FMDV、SVDV和VSV。4．建立了实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的方法。根据基因库中的SVDV高度保守的序列，设计合成引物和TaqMan探针，经各反应条件的优化，建立了实时荧光定量PCR技术。对SVDV进行了特异性、敏感性和重复性试验，结果表明，实时荧光TaqMan RT-PCR可检测到每个反应相当于1×102copies病毒RNA；与FMDV、VSV等其它水泡性病毒不发生交叉反应；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0.993；与常规的RT-PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量SVDV进行准确检测，是一种SVDV检测的良好方法。综上所述，本研究成功表达了猪水泡病病毒VP1基因，应用表达产物建立了酶联免疫吸附试验；并建立了猪水泡病RT-PCR、多重PCR、实时荧光定量RT-PCR核酸检测方法。该检测体系对于猪水泡病的预防和控制、出入境检验检疫以及社会公共安全显得至关重要，为我国猪水泡病的诊断和动物检疫提供了技术支撑。
甘肃省兽医研究所[2]（1976）在《猪水泡病》文中指出猪水泡病,俗称“猪烂脚瘟”,是由肠道病毒引起的猪的一种发热性接触性传染病,其特征为病猪蹄部间或鼻端皮肤和口腔、舌面粘膜形成水泡或烂斑。 本病在临床症状上与猪口蹄疫难于鉴别。血清学、生物学和病原学试验证明,与已知的七个口蹄疫病毒血清型无关,但和科赛奇B5病毒（Coxsackie B5 Virus）能发生血清交互中和反应,生物学和病原学特性等亦与之颇为相似。
卢昌[3]（2014）在《三种水疱性疾病GeXP检测方法的建立》文中研究说明口蹄疫、猪水泡病和水疱性口炎分别是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）、猪水泡病病毒（Swine vesicular disease virus,SVDV）和水疱性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）引起的哺乳动物的急性、高度接触性传染病,这三种病毒都可以感染猪,发病率极高,并能够形成大范围的流行,均被世界动物卫生组织（OIE）列为法定报告的动物疫病。临床上这三种疾病均以猪舌、唇、口腔黏膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水疱为主要症状,因此从临床症状上难以对这三种疾病进行区分,必须通过病原学进行鉴别诊断。GeXP多重基因分析系统（Gene eXpression Profiler Genetic Analysis System）是美国Beckman Coulter公司研发的用于多基因表达定量分析的平台。该系统以mRNA为模版,在同一PCR反应体系中由荧光标记的通用引物和特异性嵌合引物引发的多种PCR反应,随后经毛细管电泳分离技术进行分析。该系统将毛细管电泳分离技术和高灵敏的激光诱导荧光技术相结合,使基因表达定量分析实现了更高的灵敏度和更快的速度。本研究以口蹄疫病毒O型、A型、Asia1型、猪水泡病病毒和水疱性口炎病毒为研究对象,建立了5种病毒的GeXP多重PCR检测体系。研究内容如下：1.5种病毒的引物常规PCR验证参考GenBank中已公布的FMDV-O型、FMDV-A型、FMDV-Asia1型、SVDV及VSV的基因组序列,根据GeXP引物设计要求选择其保守区域设计引物,并在RNA基因组水平上对所设计的5对引物的特异性和灵敏性进行验证。同时,构建口蹄疫病毒的O、A、Asia1、SVDV和VSV的pMD18-T Simple克隆载体,对所构建的质粒进行测序。结果显示,5对引物均具有良好的特异性和敏感性,克隆的靶基因与NCBI公布的序列一致性均在95%以上。2. GeXP多重PCR的建立通过对上述5对引物进行修饰,设计含有通用引物的特异性嵌合引物,以及5’端含有Cy5的通用引物。建立了GeXP的单重PCR和多重PCR检测系统,并对它们的特异性和敏感性进行了验证。结果显示所建立的GeXP单重PCR和多重PCR检测方法具有良好的特异性,除却FMDV-A型GeXP单重PCR检测灵敏度达到10copies/μL,其他4种病毒的GeXP单重PCR检测灵敏度均达到102copies/μL, GeXP多重PCR检测灵敏性为102copies/μL,比文献报道的荧光定量PCR的灵敏性高10～100倍。3. GeXP的样品检测及试剂盒组装利用建立的GeXP多重PCR检测体系对实验室保存的5株FMDV-O型毒株、3株FMDV-A型毒株、3株FMDV-Asia1型毒株、SVDV、VSV-IN毒株的野外样品和人工感染样品以及不同公司生产的口蹄疫病毒灭活疫苗进行了检测。同时组装了GeXP多重PCR检测试剂盒,并对其进行了批间、批内和保存期的验证检测。结果显示,该方法对5种病毒的检出率可达到100%,具有很好的敏感性和特异性,且该试剂盒具有良好的实用性和稳定性,在-20℃下可以保存6个月。
A.J.M.Garland,张伯澄[4]（1977）在《科赛奇B5型病毒感染猪的尝试》文中指出尽管猪水泡病（SVD）和科赛奇B5型（CxB5）二种肠道病毒间存在着一种紧密的血清学关系,但是通过各种途径,将此型科赛奇病毒接种易感猪均不发生临床疾病。 攻毒之后,没有检出病毒血症,但是从粪便和口拭子断断续续地找到了病毒。曾证实了在一些猪只的粪便培养物中是一种混合病毒群,包括科赛奇B5病毒和其它病原,大概是本地的猪肠道病毒,初次攻击之后一直到8天粪便中的科赛奇病毒量才开始下降。 抗科赛奇病毒的血清中和抗体显现出一种暂时的上升,攻击之后14天达到高峰,28天即降低到可查证滴度之下。所获抗体滴度与所给予的病毒剂量是相应的,并且中和SVD和CxB5两种病毒的程度也是很相近的。 攻击CxB5病毒之后28天再交叉攻击SVD病毒,虽然血清中和抗体滴度对两种病毒均显示出一种特有的既往症的反应,但是大部分动物（5/6）没有典型的水泡损伤。
崔忠道[5]（1990）在《猪传染性水泡病的研究》文中认为 前言引起猪发生水泡症状的传染病,有口蹄疫、水泡性口炎、猪水泡疹以及由肠道病毒引起的猪水泡病。这四种病以在猪的蹄及口鼻等部位引起水泡病变为其主要特征,在症状上难以区别。重要差别是感染对象范围不同:口蹄疫传染牛、羊、猪等偶蹄动物,水泡性口炎除传染牛、羊、猪外,尚传染马;猪水泡疹及猪水泡病则仅传染猪,不传染其
况乾惕[6]（1977）在《猪水泡病国外科研动态》文中研究说明 自1966年10月Nardelli氏等报道了一种临床上与口蹄疫难以区分的猪病在意大利Lombardy地区发生以来,1968年,意大利Brescia市兽疫实验室预备研究所与英国Pirbright动物病毒研究所的工作者,最早描述了该病是由一种肠道病毒引起,而与口蹄疫、水泡性口炎和水泡疹相区别。嗣后,1971年在香港、1972年以后本病在一些欧洲国家和日本相继出现,因而引起了国际有关部门和许多国家有关行政部门和研究单位的深切关注。
W.Becker,肖佩蘅[7]（1977）在《猪水泡病》文中认为 引言 猪水泡病（SVD）是肠道病毒引起的,以鼻、舌、蹄出现水泡为特征的猪的一种急性经过的发热疾病。猪水泡病与猪口蹄疫的鉴别诊断是有特别重大意义的,尤其是当此二种病 1971年在香港和1973年在奥地利同时发生时,其与猪口蹄疫在临床上和病理解剖上是无法加以区别的。 猪水泡病1966年首次在意大利记载,在那里首次由Nardelli和Mitarb分离和描述了病原。1971年此病在香港发生。自1972年至1975年在许多欧洲国家(波兰、奥地利、瑞士、法
甘肃省兽医研究所[8]（1974）在《猪传染性水泡病病毒鉴定》文中指出 猪传染性水泡病（以下简称猪水泡病）于1964～1966年开始在我国流行。随后便肯定了其病原体是一种病毒。
冯霞[9]（2005）在《猪瘟和猪水泡病基因标记疫苗的研究》文中研究指明猪瘟和猪水泡病被世界动物卫生组织（OIE）列入A类传染病名录,世界各国对这两种疫病均采取了严加防制及消灭措施,二者也是国际贸易中必查必检的对象。疫苗接种是预防和控制动物疫病的主要手段。由于传统疫苗在生产中的生物安全隐患和感染与免疫动物难以鉴别等缺陷,利用现代分子生物学技术和免疫学理论,研制新型安全、多联、可鉴别疫苗已成必然之势。基因疫苗以其自身的诸多优点和巨大的应用潜能已成为当今的研究热点之一。本研究通过RT-PCR、套式PCR和亚克隆技术构建了猪水泡病基因疫苗、猪水泡病和猪瘟二联基因疫苗和几种猪瘟基因疫苗,研究其免疫效果,为最终研制成功猪瘟和猪水泡病基因疫苗作技术探索。 1)构建了几种猪瘟基因疫苗:包括E2基因单表达重组质粒pcDNA Es1-11、E2基因双抗原表达质粒pBudCE Es1-11/Es2-22、E2基因与报告基因lacZ共表达质粒pBudCE lacZ/Es2-22、E2基因与猪IFN-γ基因共表达质粒pBudCE Es1-11/IFN-γ、以及E2基因与猪IL-18基因共表达质粒pBudCE Es1-11/IL-18,将以上真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,用原位染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）或RT-PCR技术证实它们均可表达外源基因。 2)用这几种猪瘟基因疫苗免疫兔,以阻断ELISA和MTT法监测试验兔抗体水平和淋巴细胞增殖情况,并进行攻毒保护试验。结果,单表达质粒pcDNA Es1-11免疫组中有3/4兔产生E2抗体,攻毒后,4/4完全保护。双抗原表达质粒pBudCE Es1-11/Es2-22免疫组有1/4兔产生抗体,攻毒后,1/4完全保护,1/4部分保护,2/4不保护。pBudCE Es1-11/IL-18利pBudCE Es1-11/IFN-γ免疫组,都未检测到猪瘟抗体（4/4）,攻毒后,1/4部分保护,3/4不保护。pBudCE lacZ/Es2-22免疫组（3只）也没出现猪瘟抗体,攻毒后,3/3部分保护。而空载体pcDNA3.1和pBudCE4.1对照组,4/4血清阴性,攻毒后,全部发病。与对照组相比,各免疫组的淋巴细胞均有一定程度的增殖。 3)构建了猪水泡病和猪瘟二联基因疫苗pBudCE E2/P1-11,用它转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光染色和ELISA分别检测到猪水泡病和猪瘟抗原的表达。将其免疫兔,可检测到免疫组兔T淋巴细胞增殖明显;但用阻断ELISA未检测到血消CSFV特异性抗体,用猪瘟活疫苗（Ⅱ）攻击,实验兔有1/4完全保护。用乳鼠中和试验检测,发现所有兔血清SVDV中和抗体均低于1∶4。 4)构建了猪水泡病基因疫苗pcDNA P1,将其转染的BHK-21细胞经荧光染色,可见许多特异性荧光细胞。用其单独（B组）免疫或与pcDNA IFN-γ共同（C组）免疫猪三次,检测免疫前、后猪血清中SVDV特异性抗体的变化,发现免疫后B组和C组各有两只猪产生低水平的抗体,并在攻毒后迅速升高;并对免疫前和攻毒前的猪血清用乳鼠中和试验检测SVDV特异性抗体,结果只有pcDNA P1与pcDNA IFN-γ共同免疫组中有两只猪产生低水平的中和抗体（1∶4）,其余猪的中和抗体均小于1∶4。第三次免疫3月后,用猪水泡病香港乳鼠组织毒5mL（2mL蹄叉和3mL颈部肌肉）分两个滴度（104 LD50/0.1mL和105 LD50/0.1mL）攻击,结果pcDNA P1单独免疫组（B组）有1/4获得完全保护（为104/0.1mL攻击）,pcDNA P1与pcDNA IFN-γ共同免疫组（C组）中有1/4获得部分保护（为105/0.1mL攻击）,A和D两个对照组全部发病。
J.H.Graves[10]（1973）在《猪水泡病病毒与B5型科赛奇病毒的血清学关系》文中进行了进一步梳理 猪水泡病最近在英国的流行使得人们的注意力集中在其病毒的特性上。这种病毒属于小核糖核酸病毒的肠道病毒亚类中,在意大利1966年第一次流行中分离的毒株与后来于1971年在香港和1972年在英国分离的毒株都有血清学上的关系。作者在本文中报告猪的这种肠道病毒与人的一种肠道病毒的关系,并且推测这种病毒可能是由人传于猪的。 猪水泡病病毒能使新生小白鼠致死。这是肠道病毒中的科赛奇病毒的特性。因此曾试验
二、猪水泡病的血清学（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪水泡病的血清学（论文提纲范文）
（1）猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 猪水泡病研究进展 |
| 1.1 SVDV病原学 |
| 1.1.1 病毒分类与特性 |
| 1.1.2 基因组结构 |
| 1.1.3 病毒蛋白质的结构和功能 |
| 1.1.4 SVDV的抗原结构 |
| 1.2 SVDV流行病学 |
| 1.2.1 流行与危害 |
| 1.2.2 病毒的繁殖与复制 |
| 1.2.3 SVDV的传播 |
| 1.3 SVDV诊断技术及其研究进展 |
| 1.3.1 动物试验 |
| 1.3.2 血清抗体检测方法 |
| 1.3.3 核酸诊断 |
| 1.4 SVD的控制和预防 |
| 1.5 本论文的研究目的和研究策略 |
| 第二章 猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要材料及试剂 |
| 2.2.2 主要试剂配制 |
| 2.2.3 引物设计 |
| 2.2.4 技术路线 |
| 2.2.5 病毒基因组RNA的提取 |
| 2.2.6 cDNA的反转录 |
| 2.2.7 SVDV-VP1基因的PCR扩增 |
| 2.2.8 PCR产物的小量胶回收 |
| 2.2.9 感受态细胞的制备 |
| 2.2.10 克隆及表达载体的构建 |
| 2.2.11 重组表达质粒在TOPO10E.coli细胞中的诱导表达 |
| 2.2.12 SDS-PAGE分析表达蛋白 |
| 2.2.13 表达产物的Western blotting检测 |
| 2.2.14 重组蛋白的小批量生产和纯化 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 目的片段的克隆与鉴定 |
| 2.3.2 SVDV VP1基因的亚克隆及重组表达质粒的构建 |
| 2.3.3 SVDV核蛋白表达重组质粒的序列分析 |
| 2.3.4 表达产物的SDS-PAGE分析 |
| 2.3.5 表达产物的Western blotting检测 |
| 2.3.6 重组基因表达产物的纯化 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 VP1基因的选择 |
| 2.4.2 基因表达系统的选择 |
| 2.4.3 VP1基因表达 |
| 2.4.4 表达产物的纯化 |
| 第三章 猪水泡病检测技术的建立 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 病毒株、细胞和主要试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 试剂配制 |
| 3.2.4 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.2.5 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究 |
| 3.2.6 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究 |
| 3.2.7 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体的间接ELISA方法的研究 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.3.2 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究 |
| 3.3.3 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究 |
| 3.3.4 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体的间接ELISA方法的研究 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.4.2 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究 |
| 3.4.3 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究 |
| 3.4.4 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体间接ELISA方法的研究 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）三种水疱性疾病GeXP检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 口蹄疫病毒的研究进展 |
| 1.1.1 口蹄疫病毒的病原学特征 |
| 1.1.2 口蹄疫病毒的流行病学特征 |
| 1.1.3 口蹄疫的临床症状 |
| 1.1.4 口蹄疫诊断的研究进展 |
| 1.2 猪水泡病病毒的研究进展 |
| 1.2.1 猪水泡病毒病毒的病原学特征 |
| 1.2.2 猪水泡病病毒的流行病学特征 |
| 1.2.3 猪水泡病病毒的临床症状 |
| 1.2.4 猪水泡病诊断的研究进展 |
| 1.3 水疱性口炎病毒的研究进展 |
| 1.3.1 水疱性口炎病毒的病原学特征 |
| 1.3.2 水疱性口炎病毒的流行病学特征 |
| 1.3.3 水疱性口炎的临床症状 |
| 1.3.4 水疱性口炎诊断的研究进展 |
| 1.4 GeXP多重基因表达分析系统及其应用 |
| 1.4.1 系统扩增的原理 |
| 1.4.2 系统的优势 |
| 1.4.3 系统在生命科学中的应用 |
| 1.4.4 展望 |
| 1.5 研究的目的意义 |
| 第二章 FMDV、VSV及SVDV引物设计及验证 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 毒株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 试剂配制 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞的冻存、复苏与传代 |
| 2.2.2 FMDV、VSV及SVDV的培养 |
| 2.2.3 引物设计与合成 |
| 2.2.4 病毒RNA模板提取 |
| 2.2.5 病毒RNA的RT-PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳 |
| 2.2.6 单重PCR的特异性验证 |
| 2.2.7 单克隆质粒标准品的制备 |
| 2.2.8 单重PCR的敏感性验证 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 单引物验证实验结果 |
| 2.3.2 单重PCR的特异性验证 |
| 2.3.3 单克隆质粒标准品的鉴定 |
| 2.3.4 单重PCR的灵敏度验证 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 FMDV、VSV及SVDV的GeXP检测方法的建立 |
| 3.1 材料与仪器 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 GeXP引物的设计与合成 |
| 3.2.2 GeXP单重PCR检测体系的建立 |
| 3.2.3 引物特异性及灵敏性分析 |
| 3.2.4 GeXP多重PCR的建立及灵敏性分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 GeXP单重PCR的特异性分析 |
| 3.3.2 GeXP单重PCR的灵敏性分析 |
| 3.3.3 GeXP多重PCR的灵敏性分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 GeXP多重PCR的初步应用及其检测试剂盒的组装 |
| 4.1 材料与仪器 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 样品处理及病毒RNA的提取 |
| 4.2.2 样品的GeXP多重PCR检测 |
| 4.2.3 试剂盒的组装 |
| 4.2.4 试剂盒使用说明书 |
| 4.2.5 试剂盒性能验证 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 样品检测 |
| 4.3.2 试剂盒组装 |
| 4.3.3 试剂盒储存稳定性验证 |
| 4.3.4 试剂盒的重复性检测 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）猪瘟和猪水泡病基因标记疫苗的研究（论文提纲范文）
| 第一章 序言 |
| 1.1 研究背景及目的、意义 |
| 1.1.1 猪瘟、猪瘟病毒和猪瘟弱毒疫苗 |
| 1.1.2 猪水泡病和猪水泡病病毒 |
| 1.1.3 基因标记疫苗 |
| 1.1.4 本研究的目的及意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 猪瘟疫苗研究进展 |
| 1.2.2 猪水泡病疫苗研究概况 |
| 1.3 研究内容与方法 |
| 第二章 猪瘟基因标记疫苗的构建及体外表达 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 菌种、载体和主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 细胞和种毒 |
| 2.1.4 引物的设计与合成 |
| 2.1.5 目的片段的获得 |
| 2.1.6 重组质粒的构建、克隆及鉴定 |
| 2.1.7 转染质粒的提取 |
| 2.1.8 转染 |
| 2.1.9 各基因体外表达的检测 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 目的片段 |
| 2.2.2 表达质粒的鉴定 |
| 2.2.3 转染质粒浓度 |
| 2.2.4 各基因的体外表达 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 猪瘟基因标记疫苗对兔的免疫保护试验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 质粒、疫苗与实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 免疫用质粒的制备 |
| 3.1.4 各猪瘟基因疫苗对家兔的免疫 |
| 3.1.5 阻断ELISA检测CSFV特异性抗体 |
| 3.1.6 T淋巴细胞增殖试验 |
| 3.1.7 病毒攻击保护试验 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 兔血清CSFV特异性抗体的动态变化 |
| 3.2.2 T淋巴细胞增殖试验 |
| 3.2.3 攻毒试验 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 猪瘟与猪水泡病二联基因疫苗研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 菌种、载体和主要试剂 |
| 4.1.2 细胞、种毒、质粒、疫苗和实验动物 |
| 4.1.3 猪瘟病毒E2基因与猪水泡病病毒P1区基因双表达质粒的构建 |
| 4.1.4 转染质粒的提取、转染和体外表达 |
| 4.1.5 免疫用质粒的制备 |
| 4.1.6 双表达基因疫苗对家兔的免疫 |
| 4.1.7 阻断ELISA检测CSFV特异性抗体 |
| 4.1.8 T淋巴细胞增殖试验和猪瘟活疫苗(Ⅱ)攻毒保护实验 |
| 4.1.9 乳鼠中和试验 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 猪瘟病毒E2基因与猪水泡病病毒P1区基因双表达质粒的鉴定 |
| 4.2.2 转染质粒浓度 |
| 4.2.3 间接免疫荧光染色检测猪水泡病抗原的表达 |
| 4.2.4 猪瘟E2蛋白的表达 |
| 4.2.5 双表达质粒免疫家兔的CSFV特异性抗体的动态变化 |
| 4.2.6 T淋巴细胞增殖试验 |
| 4.2.7 乳鼠中和试验 |
| 4.2.8 猪瘟活疫苗(Ⅱ)攻毒保护试验 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 猪水泡病基因标记疫苗的研究 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 引物的设计和合成 |
| 5.1.3 猪水泡病基因疫苗的构建及体外表达 |
| 5.1.4 猪水泡病基因疫苗的猪体试验 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 目的片段的获得和猪水泡病P1基因重组质粒的鉴定 |
| 5.2.2 转染质粒浓度 |
| 5.2.3 间接免疫荧光染色检测猪水泡病抗原的表达 |
| 5.2.4 间接ELISA检测SVDV特异性抗体 |
| 5.2.5 乳鼠中和试验检测猪血清SVDV中和抗体 |
| 5.2.6 攻毒保护试验 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 猪水泡病及猪水泡病病毒研究进展(文献综述) |
| 7.1 猪水泡病 |
| 7.1.1 疾病的发现、命名与流行情况 |
| 7.1.2 病原学 |
| 7.1.3 流行病学 |
| 7.1.4 临床症状和组织嗜性 |
| 7.1.5 诊断 |
| 7.2 猪水泡病病毒 |
| 7.2.1 SVDV基因组结构 |
| 7.2.2 SVDV编码的蛋白及功能 |
| 7.2.3 SVDV的衣壳结构和抗原特性 |
| 7.2.4 SVDV受体及其侵入 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简历 |
四、猪水泡病的血清学（论文参考文献）
- [1]猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究[D]. 钟金栋. 昆明理工大学, 2007(02)
- [2]猪水泡病[J]. 甘肃省兽医研究所. 兽医科技资料, 1976(01)
- [3]三种水疱性疾病GeXP检测方法的建立[D]. 卢昌. 中国农业科学院, 2014(11)
- [4]科赛奇B5型病毒感染猪的尝试[J]. A.J.M.Garland,张伯澄. 兽医科技资料, 1977(S2)
- [5]猪传染性水泡病的研究[J]. 崔忠道. 北京实验动物科学, 1990(02)
- [6]猪水泡病国外科研动态[J]. 况乾惕. 兽医科技资料, 1977(S2)
- [7]猪水泡病[J]. W.Becker,肖佩蘅. 兽医科技资料, 1977(S2)
- [8]猪传染性水泡病病毒鉴定[J]. 甘肃省兽医研究所. 兽医科技资料, 1974(01)
- [9]猪瘟和猪水泡病基因标记疫苗的研究[D]. 冯霞. 中国农业科学院, 2005(10)
- [10]猪水泡病病毒与B5型科赛奇病毒的血清学关系[J]. J.H.Graves. 兽医科技资料, 1973(04)