一、固真方对免疫抑制动物白细胞介素-2基因转录的作用研究(论文文献综述)
唐秀松[1](2021)在《壮医立体综合疗法对类风湿关节炎患者外周血circRNA及IL-1、IL-6表达影响的研究》文中认为
田超[2](2021)在《围产期奶牛亚临床酮病的临床特征及甘草酸单铵盐的预防效果》文中研究指明酮病是围产期奶牛高发的营养代谢性疾病。其导致的死亡率虽然不高,但诱发脂肪肝、子宫炎、胎衣不下等疾病,而且会导致奶牛的泌乳量和乳质量降低,增加奶牛的淘汰率和治疗成本,严重威胁奶牛的健康和牧场的经济效益。患酮病的奶牛,肝脏会受到不同程度的损伤,导致肝功能异常。甘草酸单铵盐具有抗炎、抗氧化、保护肝脏等功效。本研究通过监测围产期奶牛生产性能和血清生化指标的变化,确定亚临床酮病的临床特征,并探讨了甘草酸单铵盐对奶牛肝细胞脂肪变性的作用及对酮病的预防效果,为临床应用提供理论依据。一、亚临床酮病对围产期奶牛生产性能和血清生化指标的影响选择40头体况、胎次相近的围产期健康荷斯坦奶牛,分别采集产前21、14、7 d和产后1、3、5、7、14、21 d的尾静脉血。按照血清BHBA水平的高低将奶牛分为亚临床酮病(SCK)组和健康对照组,比较两组奶牛在生产性能和血清相关指标的变化。结果表明,产后8周内,两组奶牛泌乳量无显着差异(P>0.05),但SCK组乳中的乳脂率显着高于对照组(P<0.05)。SCK组体细胞数和尿素氮的含量虽然高于对照组但差异不显着,且乳蛋白率低于对照组(P>0.05)。产后1~3周SCK组奶牛体况评分低于对照组(P>0.05)。两组奶牛血清BHBA、NEFA含量在产前一周均升高,但SCK组奶牛产后显着高于对照组,而血清GLU的水平低于对照组(P<0.05)。SCK奶牛血清肝功能、肾功能、代谢激素、抗氧化、炎症等相关指标有一定变化,但与对照组均差异不显着(P>0.05)。表明产后三周是奶牛亚临床酮病的高发期,血清BHBA、NEFA含量可作为诊断亚临床酮病的依据,亚临床酮病影响乳汁中的体细胞数和乳蛋白含量。二、甘草酸单铵盐对体外奶牛肝细胞脂肪变性的保护作用分离原代犊牛肝细胞,根据处理不同将细胞分为对照组(不做任何处理)、模型组(用0.25 mmol/L油酸钠诱导建立体外奶牛肝细胞脂肪变性模型)、MAG组(在油酸钠诱导之前使用0.1、0.25、0.5、1、5 mmol/L的甘草酸单铵盐预处理肝细胞12 h作为预保护)。结果显示,与对照组相比,油酸钠诱导培养可以使肝细胞内蓄积大量的脂滴,细胞的活性降低、凋亡率增加且细胞培养上清ALT、AST活性显着升高(P<0.05);模型组细胞氧化指标MDA、LDH的水平显着高于对照组(P<0.05),抗氧化指标GSH和CAT显着低于对照组(P<0.05);模型组脂合成基因SREBP-1c的表达水平,脂转运和代谢基因PPARα、MTP、CPT1、CPT2的转录水平均显着高于对照组(P<0.05);模型组炎症相关基因TLR4、MyD88、TNF-α、IL-1β、NF-κB、IL-6基因的转录水平显着高于对照组(P<0.05),其中TLR4、NF-κB、IL-6的蛋白表达水平显着高于对照组(P<0.05);模型组凋亡相关基因Cyt-c、caspase9、caspase8、caspase3、Bax基因转录和蛋白表达水平均显着高于对照组(P<0.05),Bcl-2的转录和蛋白表达水平均显着低于对照组(P<0.05)。与模型相比,MAG预处理细胞可以提高肝细胞的活性,减少细胞内的脂肪蓄积,显着降低培养上清ALT、AST活性(P<0.05)。MAG组细胞氧化指标MDA、LDH的水平显着低于模型组(P<0.05),GSH、CAT显着高于模型组(P<0.05);MAG组脂合成基因SREBP-1c的转录水平显着低于模型组(P<0.05),ChREBP的转录水平差异不显着(P>0.05),脂转运和代谢基因PPARα、MTP、CPT1、CPT2基因的转录水平显着高于模型组(P<0.05);MAG组炎症相关基因TLR4、MyD88、TNF-α、IL-1β、NF-κB、IL-6转录水平显着均低于模型组(P<0.05),其中TLR4、NF-κB、IL-6的蛋白表达水平均显着低于模型组(P<0.05);MAG组凋亡相关基因Cyt-c、caspase9、caspase8、caspase3、Bax基因转录和蛋白表达水平均显着低于模型组(P<0.05),Bcl-2的转录和蛋白表达水平均显着高于模型组(P<0.05)。结果表明MAG预处理可以提高肝细胞的抗氧化能力,并通过TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制炎症因子的表达,减轻细胞炎症反应,提高细胞活性,促进肝细胞内脂质代谢,减少细胞内脂肪沉积。三、甘草酸单铵盐对围产期奶牛生产性能和血清生化指标的影响选择体况和胎次相近的围产期荷斯坦奶牛45头,分为三组,对照组、MAG3g组、MAG 6g组,MAG添加在日粮中饲喂,试验周期为奶牛产前21 d至奶牛产后21 d。分别采集奶牛产前21、14、7d和产后1、3、5、7、14、21 d尾静脉血液样品,检测血清生化指标;记录试验期间不同组奶牛体况评分变化、常见营养代谢性疾病的发病率,统计奶牛产后第60 d泌乳量和乳成分的变化。结果表明,与对照组相比,MAG对围产期奶牛体况和泌乳量无明显影响(P>0.05),但MAG3 g组可以显着提高乳脂和乳蛋白的含量(P<0.05),MAG组奶牛产后常见疾病的发病率低于对照组。与对照组比较,MAG组奶牛产后血清NEFA、LDL-C含量显着降低(P<0.05),血清葡萄糖含量显着提高(P<0.05),血清GC、LEP、INS含量差异不显着(P>0.05);MAG组奶牛血清ALT、AST活性降低,血清TP、GLB含量升高(P<0.05),血清肾功能相关指标变化不显着(P>0.05);MAG 3 g组可以显着提高奶牛产前血清Ca的水平(P<0.05),MAG 6 g组显着提高奶牛产后血清P的水平(P<0.05);MAG可降低围产期奶牛血清MDA、NO含量,提高血清GSH-Px、SOD、CAT、T-AOC活性(P<0.05);MAG可降低围产期奶牛血清IL-1、IL-12、IL-6的水平,提高IL-2的水平,但对血清IgG、IgM、IgA含量无显着影响(P>0.05),但是3 g MAG组IgG的水平显着低于6g组(P<0.05)。表明围产期奶牛日粮中添加MAG,能够提高奶牛的生产性能,降低血清脂肪代谢相关指标的水平,提高抗氧化能力,改善机体的代谢状况,从而降低产后疾病的发病率。
满君[3](2021)在《从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究》文中提出背景与目的肺结节病是以非干酪样坏死性上皮细胞肉芽肿为病理特征的系统性疾病,西医治疗以糖皮质激素为主,但激素治疗停药后极易复发,且副作用明显,中医药治疗肺结节病具有一定优势,通化方是在姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论基础上创立的治疗肺结节病的基本方。本研究第一部分从循证学证据确定糖皮质激素治疗肺结节病的确切疗效和对其预后及复发的影响,第二部分梳理总结姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论和在肺结节病临床诊治中的重要指导价值。第三部分为临床研究观察通化方加减治疗肺结节病的疗效和对其远期预后的影响。第四部分通过网络药理学分析通化方的作用机制和有效性。方法1糖皮质激素治疗肺结节病的Meta分析:通过检索国内外文献数据库,筛选符合纳入标准的糖皮质激素治疗肺结节病的临床随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs),采用Meta分析方法,主要观察指标为治疗有效率、随访有效率、复发率、肺功能及血清血管紧张素转化酶(serum angiotensin converting enzyme,SACE)。2从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论研究:结合古文献研究及近现代医家对三焦的论述,系统梳理三焦形质、功能及辨证相关内容。其次重点论述姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论。最后阐述该理论在肺结节病诊治中的重要指导价值,根据此理论创立“通化方”为治疗肺结节病的基本方。3通化方加减治疗肺结节病的临床研究:采用适用于少见病的前瞻性病例系列研究,纳入病情进展或复发的Ⅱ期肺结节病患者,予以通化方加减治疗,疗程6个月,随访期为6个月。治疗前记录患者一般资料和临床资料,根据SACE水平将其分为SACE升高组和正常组,比较两组中胸部HRCT、理化检查指标、中医证候积分的差异,及SACE与上述临床资料的相关性。疗效评价方面,比较患者治疗和随访前后的综合疗效、胸部HRCT、理化检查指标、中医证候积分和中医有效率,同时监测通化方的安全性。4通化方治疗肺结节病的网络药理学研究:提取“通化方”及肺结节病的作用靶点,构建通化方-肺结节病-靶点调控网络并对发挥核心作用的靶基因蛋白进行数据挖掘,最后通过对核心靶点基因蛋白进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析得出通化方作用于肺结节病的疗效机制。与目前公认的肺结节病发病机制进行对比,探讨其有效性。结果1 Meta分析:本研究最终纳入8个RCTs,均以英文形式发表。结果显示:治疗后,糖皮质激素治疗组有效率高于对照组(P<0.05),随访期间,治疗组有效率及复发率与对照组相比均未见明显差异(P>0.05);治疗后治疗组患者肺功能FVC、DLCO高于对照组(P<0.05),FEV1和SACE在两组间未见显着差异(P>0.05)。2理论研究:三焦形质是争论焦点,三焦功能论述主要集中在三焦主气化和主水液方面。三焦辨证在湿热病及其他复杂疾病治疗方面均有深远影响。姜良铎教授从三焦“膜性四通管道”理论认识肺结节病,提出三焦为人体器官的被膜、包膜、淋巴、间质组织等脏腑间联系的四通管道,三焦郁滞不通则气机气化不利、不能化生护卫精微,津液和血液运行障碍,形成痰瘀、痰瘀互结形成结节,并以膜性四通管道为途径流窜全身,治疗当疏利三焦。导师在此理论基础上创立通化方作为治疗肺结节病基本方。3临床研究:3.1一般资料:治疗前共入组31例患者,男性7例,女性24例,31例患者平均年龄56.97±1.07岁,平均病程为1.91±0.06年;肺外系统病变包括皮下结节、眼部侵润、双侧腮腺肿大;肺浸润HRCT评分上肺区和中肺区肺浸润HRCT评分高于下肺区(P<0.05)。3.2临床资料比较:治疗前完成SACE检测的共26人,其中SACE升高者有12例,正常者有14例,SACE升高组与正常组相比肺浸润HRCT评分与胸部HRCT总分升高,理化检查中淋巴细胞减低(P<0.05)。相关性分析发现SACE水平与肺浸润HRCT评分、胸部HRCT总分、淋巴细胞存在相关性(P<0.05)。3.3临床疗效比较:①综合疗效分析:通化方加减治疗6个月综合疗效有效率为66.7%,随访6个月综合疗效有效率为63.6%,随访期间有效率与治疗后有效率比较未见明显降低(P>0.05)。②胸部HRCT 比较:治疗6个月和随访6个月与治疗前比较,肺浸润HRCT评分、淋巴结肿大HRCT评分、胸部HRCT总分均有明显降低(P<0.01);随访6个月与治疗6个月比较,肺浸润HRCT评分、淋巴结肿大HRCT评分、胸部HRCT总分未见统计学差异(P>0.05)。治疗6个月淋巴结肿大有效率高于肺浸润有效率(P<0.05)。③肺浸润类型及程度分级比较:肺浸润类型包括肺结节影、磨玻璃影与实变影,治疗与随访前后,三种类型所占比例无统计学差异(P>0.05)。治疗6个月与治疗前比较,结节影与磨玻璃影的HRCT评分降低(P<0.05或P<0.01);随访6个月与治疗前比较,结节影HRCT评分降低(P<0.01);随访6个月与治疗6个月比较,三者HRCT评分差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗与随访前后患者肺浸润HRCT评分均分为轻度组和中度组,两组所占比例在治疗与随访前后无统计学差异(P>0.05)。④理化检查比较:治疗6个月、随访6个月与治疗前比较,SACE、血沉降低,淋巴细胞升高(P<0.05);随访6个月与治疗6个月比较,淋巴细胞降低、单核细胞升高(P<0.05);治疗6个月、随访6个月与治疗前三个阶段比较,SACE、血沉、淋巴细胞所占异常比例具有统计学差异(P<0.05)。⑤肺功能比较:治疗前共16例完成肺功能检测,肺功能通气类型以弥散伴小气道功能减低所占比例最高,未进行治疗和随访后疗效比较。⑥中医证候比较:全组与三焦郁滞、痰瘀痹阻、气阴亏虚组患者治疗6个月和随访6个月与治疗前和治疗1个月比较证候总积分显着降低(P<0.01);三焦郁滞、痰瘀痹阻、湿热蕴肺组治疗6个月和随访6个月与治疗前比较证候总积分降低(P<0.05或P<0.01);三焦郁滞、痰瘀痹阻、阳气亏虚组随访6个月与治疗前比较证候总积分降低(P<0.05)。⑦中医疗效比较:治疗1个月、治疗6个月与随访6个月3个阶段比较,中医有效率具有显着差异(P<0.01);治疗6个月和随访6个月与治疗1个月比较有效率升高(P<0.01);随访6个月与治疗6个月比较有效率未见差异(P>0.05)。⑧中医各症状比较:治疗1个月与治疗前比较,脘腹胀闷症状积分降低(P<0.05);治疗6个月和随访6个月与治疗前比较胸闷、皮下结节、乏力、咳痰、口干咽燥、畏寒肢冷、潮热盗汗、大便溏泄症状积分均见降低(P<0.05)。⑨不良反应:在治疗和随访过程中,入组患者均未出现严重不良反应。4网络药理学研究:通过构建通化方-肺结节病-靶点调控网络发现白介素-6(interleukin 6,IL-6)、基质金属蛋白酶 9(matrixmetalloproteinase 9,MMP9)、半胱氨酸蛋白酶 3(caspase 3,CASP3)、趋化因子配体2(chemokine ligand 2,CCL2)为关键作用靶点蛋白,通过GO功能和KEGG信号通路富集分析发现通化方主要干预Hepatitis B信号通路、辅助性T细胞17(T helper cell,Th17)细胞分化、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路、白介素-17(interleukin 17,IL-17)信号通路。IL-6、MMP9、CASP3、CCL2 基因,Th17 细胞分化、TNF信号通路、IL-17信号通路是目前公认的肺结节病发病相关靶点蛋白与机制,故证实了通化方治疗肺结节病的有效性。结论糖皮质激素治疗肺结节病有一定的疗效,但对远期预后及复发未见益处,通化方是在姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论基础上创立的治疗肺结节病基本方,临床疗效确切,可改善肺部浸润、淋巴结肿大和皮下结节、降低疾病活动性与严重性相关理化指标、改善中医证候积分,通过随访发现对远期预后较好,降低复发率,进一步采用网络药理学分析同样证实了通化方的有效性。
王玉天[4](2021)在《从数据挖掘和网络药理学探讨“湿瘀”理论与清热利湿方治疗痛风性关节炎作用机制》文中认为研究一:数据挖掘研究目的:通过数据挖掘分析痛风性关节炎证候特点及朱跃兰教授治疗痛风性关节炎的遣方用药规律,梳理痛风“湿瘀”理论,总结核心处方及导师学术思想。方法:收集2012年1月至2019年12月于北京中医药大学东方医院风湿病科门诊或住院治疗且经朱跃兰教授开具中药处方的痛风性关节炎患者病历资料;病历信息经规范化处理后,录入中医传承辅助平台V2.5和EXCEL进行频次统计、规则分析、熵聚类分析及复杂网络分析。结果:(1)本研究共纳入612例病历资料,男性患者580例,女性患者32例,平均年龄51岁,共出现41个合并疾病,以“高血压”最多。(2)整体数据挖掘结果:发病诱因以“饮酒”最为多见;共出现126种症状和舌脉,症状以“局部皮肤灼热感,关节红肿热痛”最多,舌脉以“舌暗红,苔黄腻,脉弦滑”为多;共出现5种证型,“湿热蕴结证”占绝大多数;612首中药处方中,共出现207味中药,“虎杖、土茯苓、甘草”等中药出现频次最高,功效分类显示,“清热药”使用频次最高,药性以“平、寒”居多,药味以“甘、苦、辛”居多,归经以“肝经、脾经、胃经”等居多。(3)分层数据挖掘结果:①湿热蕴结证:共出现106种症状和舌脉,以“关节红肿热痛,局部皮肤灼热感”为核心症状,舌脉以“舌暗红,苔黄腻,脉弦滑”为多;共出现166味中药,以“虎杖、土茯苓、川牛膝”等12味中药为核心,共演化出11首新处方。②瘀热阻滞证:共出现72种症状和舌脉,以“关节肿胀疼痛,皮色紫暗”为主症,舌脉以“舌暗红,苔腻,脉弦滑”为多见;共出现112味中药,以“土茯苓、虎杖、川牛膝”等9味中药为核心,共演化出13首新处方。③脾虚湿盛证:共出现61种症状和舌脉,以“高尿酸血症”为主症,舌脉以“舌暗红,苔白腻,脉滑”多见;共出现107味中药,以“六君子汤”加减为核心,共演化出5首新处方。④肝肾亏虚证:共出现74种症状和舌脉,以“关节畸形、反复发作”为核心症状,舌脉以“舌黯淡,苔薄黄,脉弦细”为主;共出现136味中药,以“川牛膝、熟地黄”等12味中药为核心,共演化出8首新处方。⑤痰浊阻滞证:共出现50种症状和舌脉,以“关节酸痛,关节肿胀疼痛”为核心症状,舌脉以“舌黯淡胖大,苔白腻,脉弦”为主;共出现88味中药,以“甘草、砂仁、茯苓”等10味中药为核心,共演化出2首新处方。结论:(1)痛风临床以“湿热蕴结证”最为多见,“瘀热阻滞证”次之,“湿”“瘀”“热”可能是痛风的主要特征性因素。(2)朱跃兰教授以“湿瘀”理论为辨治思想,认为痛风以“湿热瘀阻”为核心病机,治疗以清热利湿、活血止痛为法,“清热利湿方”为其核心代表方剂。研究二:网络药理学研究目的:利用网络药理学方法探究清热利湿方治疗痛风性关节炎的主要成分、靶点以及通路,预测其治疗痛风性关节炎的作用机制,为后续实验研究提供思路及理论基础。方法:通过TCMSP中药数据库收集清热利湿方主要活性成分及作用靶点,采用Swiss Target Prediction数据库预测主要活性成分靶点;通过OMIM数据库、TTD数据库、DisGeNET数据库以及CTD数据库收集痛风性关节炎疾病相关靶点;通过韦恩图,得到疾病与药物的共同靶点;利用Cytoscape3.7.2软件构建“药物-化合物-靶点”网络;将共同靶点上传至String数据库构建蛋白相互作用网络图,分析后获得关键靶点;对关键靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析以及京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析。结果:收集并筛选出清热利湿方140个活性成分、358个靶点,痛风性关节炎疾病相关靶点1494个,清热利湿方与痛风性关节炎的共同靶点93个,关键靶点38个。GO富集分析得到1504条富集结果,KEGG富集分析得到126条相关信号通路,主要涉及白细胞介素(interleukin,IL)-17信号通路、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路、辅助性T细胞17分化、Toll样受体(toll-likereceptors,TLRs)信号通路、核苷酸结合寡聚结构域样受体(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors,NLRs)信号通路等。结论:清热利湿方含有多种有效成分及靶点,作用机制较为复杂,本研究预测了清热利湿方治疗痛风性关节炎的作用机制,可能通过TLRs信号通路、NLRs信号通路及TNF信号通路等发挥作用,体现了中药多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步研究提供了理论基础和研究方向。研究三:动物实验研究目的:基于TLRs信号通路及Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体探讨清热利湿方治疗急性痛风性关节炎大鼠疗效及作用机制。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、双氯芬酸钠组和中药组,每组12只。除空白组外,余3组大鼠均复制急性痛风性关节炎模型,空白组大鼠相同部位注射等量生理盐水。造模后2h对所有大鼠开始灌胃,空白组、模型组大鼠灌胃蒸馏水,其余各组均灌胃给药,每天一次,连续灌胃5天。观察大鼠一般情况,并于不同时间节点对所有大鼠进行踝关节肿胀度、功能障碍指数以及关节炎症指数测定。末次给药2h后,测定各组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平,踝关节滑膜组织病理学观察,并分别检测 TLR2、TLR4、核转录因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)、NLRP3蛋白及mRNA水平。结果:(1)造模6h后,中药组关节功能障碍指数评分逐渐减低,造模48h后,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与双氯芬酸钠组比较,各时间节点均无明显差异(P>0.05)。(2)造模12 h后,中药组关节炎症指数评分逐渐减低,造模72 h后,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);与双氯芬酸钠组比较,各时间节点均无明显差异(P>0.05)。(3)造模6 h后,中药组踝关节肿胀度逐渐减低,造模12 h后,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与双氯芬酸钠组比较,各时间节点均无明显差异(P>0.05)。(4)与模型组比较,中药组血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均显着下降(P<0.01);与双氯芬酸钠组比较,中药组血清IL-8水平显着升高(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α水平虽呈升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(5)与模型组比较,中药组大鼠踝关节滑膜组织病理可见少量炎性细胞浸润,部分细胞轻度水肿增生,偶见细胞坏死变性;与双氯芬酸钠组比较未见明显差异。(6)与模型组比较,中药组大鼠踝关节滑膜组织TLR2、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平显着下降(P<0.05),TLR4蛋白表达水平呈下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);与双氯芬酸钠组比较,TLR2、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平呈升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);(7)与模型组比较,中药组大鼠踝关节滑膜组织TLR2、TLR4、NF-κB、NLRP3 mRNA表达水平均显着下降(P<0.05,P<0.01);与双氯芬酸钠组比较,TLR2、TLR4、NF-κB mRNA表达水平显着升高(P<0.05,P<0.01),NLRP3 mRNA表达水平虽呈升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)清热利湿方可有效缓解急性痛风大鼠关节炎性症状,改善大鼠踝关节肿胀、炎性浸润等,并可显着降低急性痛风大鼠血清炎症因子水平;(2)清热利湿方可能通过抑制TLR2/NF-κB信号通路及NLRP3炎性小体发挥抗炎作用。
王婷玉[5](2021)在《健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎的Meta分析和网络药理学研究》文中提出研究背景溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种反复发作、难以治愈的慢性炎症性肠病,给社会经济、医疗资源和患者生活质量带来一定的负累。由于本病病因尚未明确,西医治疗往往不能给患者带来满意的疗效,并且常伴有不良反应发生。近年来中医药治疗UC获得了更多的关注。针对本病脾虚失运,湿热蕴肠的基本病机,以健脾清肠法治疗UC显示出了良好的疗效和安全性。但由于目前相关研究评价指标、方法学质量的差异,导致结论不完全统一,具体疗效不能得到客观、准确的判断。同时,由于各研究间中药方剂的不同,难以直接应用于临床或进一步探究其作用机制。研究目的运用Meta分析系统评价健脾清肠法治疗UC的临床疗效和安全性,并挖掘其核心药物组合,运用网络药理学方法探究其治疗UC可能的作用机制,为进一步的实验研究和临床应用提供参考。研究方法对国内外6个数据库中2020年10月前公开发表的文献进行检索。由2名评价者相互独立完成文献检索、筛选工作,再由第3名评价者对比两者获得的文献,并做出最终决定。其后提取纳入文献资料,规范文献内中药名称,评价文献质量。通过Revman软件和R软件完成Meta分析以及关联规则分析。通过TCMSP数据库,筛选获取核心药物组合活性成分和蛋白质靶点。在GeneCards、DRUGBANK、TTD及OMIM数据库中获取UC相关靶点。对两者取交集后,输入STRING平台获取PPI参数,导入Cytoscape软件构建PPI网络图,筛选潜在的重要靶点和蛋白质功能模块。运用Metascape平台分析共同靶点涉及的细胞组成、分子功能、生物进程和信号通路,对富集程度较高的条目进行描述。最后通过Cytoscape软件构建药物活性成分、共同靶点和主要信号通路的网络图,筛选核心药物组合治疗UC的关键成分和靶点。研究结果1 Meta分析结果本研究共纳入23项随机对照试验,总病例数2130例。Meta分析结果显示:主要观察指标中,与西药对照组比较,健脾清肠法治疗UC可明显提高临床总有效率[OR=3.41,95%CI(2.46,4.72),P<0.00001]、临床治愈率[OR=2.84,95%CI(2.18,3.71),P<0.00001]、中医证候有效率[OR=3.19,95%CI(1.71,5.97),P=0.0003],降低肠镜总积分[SMD=-0.57,95%CI(-0.91,-0.24),P=0.0009]和不良反应发生率[OR=0.41,95%CI(0.20,0.84)]。亚组分析结果提示在临床治愈率方面,中药口服联合保留灌肠相较于单纯口服效果更优。次要观察指标中,与西药对照组比较,健脾清肠法可明显降低症状总积分[SMD=-1.22,95%CI(-1.84,-0.61),P<0.00001]、腹泻症状积分[SMD=-0.72,95%CI(-0.93,-0.51),P<0.00001]、腹痛症状积分[SMD=-0.77,95%CI(-1.22,-0.32),P=0.0008]、脓血便症状积分[SMD=-0.55,95%CI(-0.93,-0.18),P=0.004]、里急后重症状积分[SMD=-0.66,95%CI(-0.89,-0.43),P<0.00001]、复发率[OR=0.36,95%CI(0.17,0.80),P=0.001]及血清 IgM 水平[MD=-0.52,95%CI(-0.98,-0.06),P=0.03],但在血清 ESR 水平[MD=-1.19,95%CI(-4.42,2.04),P=0.47]、IgA 水平[MD=-0.17,95%CI(-0.36,0.02),P=0.08]、IgG 水平[MD=0.40,95%CI(-3.12,3.93),P=0.82]和补体C3水平[MD=-0.04,95%CI(-0.55,0.46),P=0.86]改善方面与西药治疗无明显差异。纳入文献共计使用中药种类17种,药物61味,总使用频次297次。使用频次前6位的药物分别是甘草、白术、木香、茯苓、党参、黄连,类别方面以补虚药和清热药使用较多。核心药物组合为甘草、黄连、白术、木香。2网络药理学研究结果核心药物组合共有116个活性成分、作用于233个蛋白质靶点,UC相关靶点有1227个。两者的交集靶点共131个。构建PPI网络筛选其中互相作用较为密切的靶点56个,主要蛋白质功能模块参与的生物进程包括对脂多糖的应答、细胞迁移的正调控和对活性氧的应答。构建成分-靶点-通路图筛选出主要活性成分42个,包括槲皮素、山柰酚、柚皮素、芒柄花黄素等;主要作用靶点55个,包括PTGS2、ESR1、NOS2、PPARG、MAPK14等。主要信号通路包括AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路和IL-17信号通路等。研究结论1.运用健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎与西药相比可提高临床疗效,促进肠黏膜修复,改善症状,减少不良反应和复发。2.健脾清肠法核心药物组合可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗作用,其作用机制涉及抗炎、抗氧化应激、调控细胞凋亡等多个方面。
何鑫瑜[6](2021)在《敦煌疗癣加味膏治疗慢性湿疹临床疗效观察》文中提出目的:通过对敦煌疗癣加味膏治疗轻、中度慢性湿疹的临床疗效观察,探讨其对皮肤瘙痒、红斑、丘疹、鳞屑、苔藓化等临床症状改善的重要作用,为外用敦煌疗癣加味膏治疗慢性湿疹的临床研究提供理论基础。方法:将100例轻、中度慢性湿疹患者50例随机分为治疗组,其余50例随机分为对照组,治疗组每天外用两次敦煌疗癣加味膏,对照组每天外涂两次湿疹膏。共治疗4周,分别观察用药前、用药后2周及用药后4周皮肤瘙痒、红斑、丘疹、鳞屑、苔藓化等症状的改善情况,并进行症状量化积分,对不良反应及复发率进行研究。结果:1.治疗2周后,与治疗前相比,两组患者皮肤瘙痒、红斑、丘疹、鳞屑、苔藓化等各项积分均有所下降,P﹤0.05,差异有统计学意义。2.治疗4周后,分别与治疗前、治疗2周后相比,两组患者各项皮肤症状积分均有所下降,P﹤0.05,差异有统计学意义。3.治疗2周后,两组在皮肤丘疹、苔藓化方面对比,P>0.05,差异无统计学意义。治疗4周后,P﹤0.05,差异具有统计学意义,敦煌疗癣加味膏组优于湿疹膏组。4.治疗2周后,两组在缓解瘙痒方面对比,P﹤0.05,差异有统计学意义,敦煌疗癣加味膏组优于湿疹膏组。两组在皮肤红斑、鳞屑改善方面对比,P﹤0.05,差异有统计学意义,湿疹膏组优于敦煌疗癣加味膏组。治疗4周后,两组在缓解瘙痒症状方面对比,P﹤0.05,差异有统计学意义,敦煌疗癣加味膏组优于湿疹膏组。两组在皮肤红斑、鳞屑改善方面对比,P﹤0.05,差异有统计学意义,湿疹膏组优于敦煌疗癣加味膏组。5.治疗4周后,敦煌疗癣加味膏组总有效率89.58%,湿疹膏组总有效率为81.63%,P﹤0.05,两组疗效差异有统计学意义,敦煌疗癣加味膏组总体疗效优于湿疹膏组。结论:(1)敦煌疗癣加味膏治疗轻、中度慢性湿疹临床疗效确切,可缓解患者皮肤瘙痒,改善患者皮肤红斑、丘疹、鳞屑、苔藓化等症状。(2)敦煌疗癣加味膏在缓解患者皮肤瘙痒症状方面具有疗效较佳、缩短疗程、减少复发的作用。
周静波[7](2021)在《金丝桃苷通过靶向miR-499-5p改善STZ诱导的糖尿病肾病作用机制研究》文中指出第一部分:芪葵颗粒对糖尿病肾病患者临床疗效研究目的 通过芪葵颗粒对糖尿病肾病患者进行治疗,确认芪葵颗粒临床疗效,为后续研究提供临床数据支持。方法 筛选2016年3月~2020年1月在我院确诊为2型糖尿病的患者作为研究对象,所有患者均符合2型糖尿病诊断且病史资料完整、临床样本收集齐全。通过尿白蛋白排泄率及临床信息诊断分为糖尿病组及糖尿病肾病组。糖尿病组采用常规降糖治疗,作为对照组。糖尿病肾病组采用常规降糖治疗,并口服芪葵颗粒治疗,作为治疗组。治疗前后,采集治疗组患者血液样本及尿液样本。对比糖尿病组、糖尿病肾病组治疗前后的性别、年龄、收缩压、舒张压、高血压发病率、FPG、HBA1c、TG、PBG、TC、血肌酐(SCR)、UACR、24h-UTP 及 EGFR 等指标。结果 两组患者治疗前一般资料:男女比例、年龄、收缩压、舒张压、高血压发病率等比较,差异均无统计学差异(P<0.05)。与糖尿病组(DM组)对比,DN组患者的FPG、HBA1c及TG显着高于DM组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者PBG、TC水平无显着性差异(P>0.05)。与糖尿病组(DM组)对比,DN组患者的血肌酐(SCR)、UACR、24h-UTP水平均显着高于DM组,EGFR水平显着低于DM组,差异具有显着统计学意义(P<0.01)。与治疗前对比,治疗后DN组患者的UACR、24h-UTP 水平均显着降低,差异具有显着统计学意义(P<0.01)。SCR略为升高,而EGFR略为降低,但与治疗前相比,无显着性差异(P>0.05)。与表3数据进行比较,可以发现DN组虽经治疗后UACR、24h-UTP均有所改善,SCR和EGFR略微改善,但与DM组相比,仍有显着性差异(P<0.01)。结论 芪葵颗粒可改善糖尿病肾病患者SCR、UACR、24h-UTP及EGFR功能治疗,对糖尿病肾病具有临床治疗作用。后续对芪葵颗粒有效成分金丝桃苷进行药理学研究具有临床支持。第二部分:金丝桃苷通过miR-499-5p/NRIPI对高糖干预的HK-2细胞的保护作用及机制目的:通过观察金丝桃苷对高糖诱导的HK-2细胞影响,探讨金丝桃苷对高糖干预的HK-2细胞凋亡和炎症反应的影响及相关机制。方法:HK-2细胞株作为正常肾小管细胞的模型,在高糖条件(含45.0 mmol/L葡萄糖培养基)中进行培养,以建立体外糖尿病肾病模型。TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡。用ELISA试剂盒检测炎症反应。Western blotting检测凋亡相关基因和炎性细胞因子的蛋白水平。机制分析包括荧光素酶报告实验和RNA pulldown实验来检测分子间的结合关系。结果:首先,分别通过CCK-8、TUNEL及流式细胞术测定对照组(Control)、高糖模型组(HG)、治疗组(HG+Hyperoside)条件下HK-2细胞的存活情况。数据表明,高糖处理可诱导细胞凋亡,金丝桃苷可减少细胞凋亡且具有剂量依赖性。Western blot分析显示,金丝桃苷可使HG诱导的Bax表达增加和Bcl-2表达降低。检测HG处理的HK-2细胞中IL-10、IL-6和IL-1β的蛋白水平。HG可上调IL-6、IL-1β蛋白水平,下调IL-10蛋白水平,金丝桃苷可拮抗HG对IL-10、IL-6、IL-1β的影响。用ELISA试剂盒检测这些促炎细胞因子的浓度。结果表明,金丝桃苷逆转了 HG对HK-2细胞炎症反应的刺激作用。接下来,我们发现在HK-2细胞中miR-499-5p被HG下调,并进一步被金丝桃苷剂量依赖性上调。RT-qPCR检测miR-4995p对HG处理的HK-2细胞的基因敲除效应。miR-4995p的表达被miR-499-5p抑制剂有效地下调。miR-499-5p抑制剂可挽救金丝桃苷对HG处理的HK-2细胞的抗凋亡作用。Western blot和ELISA结果表明,抑制miR-499-5p可挽救金丝桃苷诱导的HK-2细胞IL-10水平的升高,以及IL-6和IL-1β水平的降低。根据Starbase预测,NRIP1被确定为miR-499-5p的下游靶点。HG诱导HK-2细胞NRIP1表达上调,金丝桃苷处理呈剂量依赖性降低NRIP1的表达。miR-499-5p抑制剂促进HK-2细胞NRIP1 mRNA和蛋白水平,与HG处理无关。从Starbase预测了 miR-499-5p和NRIP1的结合序列。NRIP1的结合位点发生突变,用于下一步的荧光素酶报告分析。转染miR499-5p抑制剂增强了 HK-2细胞中pmirGLO-NRIP1-Wt质粒的荧光素酶活性,而对pmirGLO-NRIP1Mut质粒的荧光素酶活性没有显着影响。RNA Pulldown实验数据表明,与 bio-miR-499-5p Mut 相比,BIO-miR-499-5p Wt 下拉的产物中 NRIP1含量丰富,表明miR-499-5p与NRIP1存在相互作用。进行抢救试验显示,抑制NRIP1可以挽救miR-499-5p对HK-2细胞的促凋亡作用。沉默的miR-499-5p对IL-10、IL-6和IL-1β蛋白水平的刺激作用可通过下调NRIP1来恢复结论:金丝桃苷通过miR-499-5p/NRIP1轴减轻HG诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应。第三部分:金丝桃苷通过靶向miR-499-5p/APC轴改善STZ诱导的糖尿病肾病目的:本研究旨在进一步探讨金丝桃苷通过靶向miR-499-5p/APC轴改善STZ诱导的糖尿病肾病的作用机制。方法:HK-2细胞株作为正常肾小管细胞的模型,在高糖条件(含45.0 mmol/L葡萄糖培养基)中进行培养,以建立体外糖尿病肾病模型。TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡。用ELISA试剂盒检测炎症反应。Western blotting检测凋亡相关基因和炎性细胞因子的蛋白水平。机制分析包括荧光素酶报告实验和RNA下拉实验来检测分子间的结合关系。采用SPF级C57BL/6雄性小鼠,高脂高糖饮食及STZ诱导建立糖尿病肾病小鼠模型。通过给予不同剂量金丝桃苷进行治疗,测定各剂量组小鼠尿蛋白和血糖、体重、收缩压、血肌酐和肾小球滤过率。用RT-qPCR检测miR-499-5p和APC水平,评价miR-499-5P和APC对小鼠血糖的影响。组织学免疫染色观察肾组织结构,测定PAS 阳性小鼠肾小球面积指数和系膜扩张指数,对小鼠肾小球和肾间质胶原沉积进行定量。用免疫印迹法检测各组Bax、Bcl-2、胶原Ⅰ、胶原Ⅳ和纤维连接蛋白的蛋白水平。用ELISA法检测各组细胞因子(肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1、白细胞介素-1-β)的含量。利用TargetScan(http://www.targetscan.org))数据库来预测含有APC3‘非编码区结合位点的潜在miRNA。结果:用高糖(25 mmol/L)处理足细胞模拟细胞损伤,以正常葡萄糖(5.5mmol/L)作对照。高糖显着上调细胞外基质(包括胶原Ⅰ、胶原Ⅳ和纤维连接蛋白)的表达,金丝桃苷则抑制其升高。此外,在高糖环境下炎症细胞因子TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1和IL-1β的蛋白水平升高。同时金丝桃苷可以降低高糖模型中炎症反应。金丝桃苷可拮抗HG诱导的足细胞Bax的升高、Bcl-2的降低、Caspase-3活性的降低。采用高脂饮食和链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)注射诱导糖尿病肾病小鼠模型,糖尿病肾病小鼠血糖升高,然后用金丝桃苷或胰岛素治疗后降低。根据PAS和Masson‘s三色染色的结果,我们发现金丝桃苷治疗可以对抗STZ介导的肾小球面积和大小的增加。注射链脲佐菌素后,糖尿病大鼠肾小球表面积明显增加,肾小球系膜扩张,肾小管-肠系膜胶原大量积聚。然而,这种作用被金丝桃苷处理明显取消。Western blot分析发现,金丝桃苷治疗可减轻糖尿病肾病小鼠肾组织中细胞外基质(胶原Ⅰ、胶原Ⅳ和纤维连接蛋白)的积聚。此外,Western blot和ELISA分析表明,金丝桃苷治疗可以抑制STZ诱导的炎症反应。最后,与Sham+DMSO组相比,STZ介导的Bax的升高和Bcl-2蛋白水平的降低被Hyproside治疗所拮抗,与Sham+DMSO组相比,STZ介导了 Bax的升高和Bcl-2蛋白水平的降低。RT-qPCR分析表明,miR-499-5p在金丝桃苷处理的足细胞中比其他miRNAs显示更多的上调。然后,RT-qPCR发现miR-499-5p水平被高糖降低,然后通过体内金丝桃苷处理恢复。通过TargetScan推测了 miR-499-5P与APC的3’UTR之间的结合序列,通过转染miR-499-5p模拟物和抗miR-499-5p分别过表达和下调miR-499-5p的表达水平。用足细胞进行荧光素酶报告实验表明,野生型pGLO-APC-3’UTR的荧光素酶活性被异位miR-499-5p显着降低,而被miR-499-5p沉默的野生型pGLO-APC-3’UTR的荧光素酶活性显着升高,而突变体pGLOAPC-3’UTR的荧光素酶活性没有明显的变化。RT-qPCR和Western blot分析表明,miR-4995p扩增能提高mRNA和蛋白质水平,而miR-499-5p抑制能降低mRNA和蛋白质水平。最后,miR-499-5p抑制取消了金丝桃苷对足细胞APC mRNA水平的抑制作用。小鼠分别注射AA V-miR-499-5P和AA V-APC后,左肾组织miR-499-5p和APC水平显着升高,右肾无明显分化。miR-499-5p过表达和APC过表达对糖尿病肾病小鼠的血糖、体重、血肌酐和血压均无明显影响。miR-499-5p对GFR的抑制作用被APC过表达所抵消。与DN+Mock+载体组比较,AA vmir-499-5P组肾小球肥大程度减轻,肾小球表面积减少。这种影响被APC的过度表达所抵消。在糖尿病肾病小鼠中,通过AA V-APC治疗,miR-499-5P对肾小球表面积和系膜伸展的抑制作用以及肾小管间质胶原堆积的减少都得到了恢复。在糖尿病肾病小鼠中,miR-499-5P对肾小球表面积和系膜伸展的抑制作用以及肾小管间质胶原堆积的减少都得到了恢复。同样,Western blot分析表明,miR-499-5p导致的肾组织ECM减少也被APC过表达所抵消。此外,注射AA V-miR-499-5p可降低糖尿病肾病小鼠血清中炎症细胞因子的含量。然而,这一结果被APC的过度表达所抵消。AAV-miR-499-5p诱导的Bax降低和Bcl-2升高可被糖尿病肾病小鼠肾组织中APC的过表达所抵消。最后,miR-499-5p的过表达破坏了高糖处理对尿蛋白的促进作用,可被异位APC逆转。结论:金丝桃苷在体外可抑制HG诱导的ECM聚集、炎症反应和细胞凋亡。金丝桃苷治疗改善了 STZ诱导的小鼠的糖尿病症状,减轻了糖尿病肾病小鼠的肾脏损伤和纤维化。金丝桃苷在体外和体内均能抑制APC水平。而APC被miR499-5p直接靶向和负调控。miR-499-5P通过靶向APC减轻糖尿病肾病小鼠的肾功能障碍。APC的过表达逆转了miR-499-5p对肾脏损伤和纤维化的影响。
李玲[8](2021)在《基于PD-L1、HER2联合靶点研究归芪白术方对胃癌细胞增殖和T细胞活性的影响》文中指出研究目的:前期研究证实归芪白术方辅助治疗胃癌(Gastric Cancer,GC)有效改善机体不良反应,提高患者的生存质量,但发挥作用的物质基础和分子机制尚不清楚。本研究运用化学信息学-分子对接-分子动力学结合蛋白检测方法及细胞生物学方法,揭示归芪白术方通过健脾扶正促进免疫活性(靶向免疫检查点PD-L1(程序性死亡受体配体1,Programmed cell death ligand 1)调节免疫细胞功能)同时兼备化瘀祛邪抑制肿瘤增殖(靶向HER2(人表皮生长因子受体2,Human epidermal growth factor receptor 2)抑制肿瘤细胞增殖)的药效物质基础,以及探讨该复方“多点显效,协同增效”的功效特点。研究方法:1.结合临床治疗靶向及数据库筛选归芪白术方治疗GC的作用靶点。使用化学信息学方法构建归芪白术方小分子成分结构库,筛选促进肿瘤细胞增殖的HER2和抑制淋巴细胞活性的PD-L1作为研究靶蛋白;确定靶蛋白(HER2/PD-L1)晶体结构及活性位点,应用分子对接技术,筛选能够与靶蛋白有效结合的代表性靶向成分,并进行分子动力学模拟、结合自由能计算和微量热泳动实验(Microscale thermophoresis,MST),验证其与靶蛋白结合的亲和力,酶活实验检测中药(Traditional Chinese Medicine,TCM)小分子对HER2的作用。2.检测靶向HER2的中药小分子在不同GC细胞株的抗肿瘤效果;使用靶向HER2的中药小分子干预EGF(表皮细胞生长因子,Epidermal growth factor)刺激的胃癌MKN-45细胞,检测其对GC细胞增殖、克隆形成能力以及对PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT))通路相关蛋白及基因表达的影响;使用抑制PD-L1的中药小分子干预可溶性PD-L1刺激的人外周血T淋巴细胞,检测其对T细胞增殖、细胞因子IFN-γ/IL-2(干扰素γ(Interferon-gamma,IFN-γ)/白介素2(Interleukin-2,IL-2))表达量、PD-1+(程序性死亡受体1,Programmed cell death protein 1)T细胞数量及T细胞功能相关蛋白、基因表达的影响。3.构建人胃癌MKN-45细胞和人外周血T淋巴细胞共培养体系;使用抑制PD-L1的中药小分子formononetin,靶向HER2的中药小分子quercetin,以及quercetin和formononetin配伍干预共培养体系,检测中药小分子干预对T细胞增殖、细胞因子(IFN-γ/IL-2)表达量、T细胞凋亡的影响,观察中药小分子对共培养体系中T细胞功能抑制的干预作用;同时检测中药小分子对GC细胞增殖、凋亡的影响,研究其对GC细胞增殖的抑制作用。研究结果:1.筛选得到HER2和PD-L1作为研究归芪白术方治疗GC物质基础及作用机制的有效靶点。2.归芪白术方中有385个中药小分子与HER2蛋白对接得分值≤-4,189个中药小分子与PD-L1蛋白对接得分值≤-4。选择对接得分较高的中药小分子进行MST,黄芪中的daidzein(大豆苷元)、黄芪/甘草中的quercetin(槲皮素)与HER2具有较高结合亲和力,Kd值分别为3.7μM/490 n M;黄芪/甘草中的isorhamnetin(异鼠李素)/formononetin(刺芒柄花素)与PD-L1具有较高结合亲和力,Kd值分别为667 n M/355 n M。50 ns分子动力学模拟结果显示quercetin与HER2结合模式较稳定,结合自由能为-26.55 Kcal/mol,formononetin与PD-L1结合模式较稳定,结合自由能为-19.41 Kcal/mol。酶活性检测结果显示quercetin能够明显抑制HER2激酶活性,IC50为570.7 n M,daidzein对HER2没有明显的抑制作用。3.通过单独干预EGF刺激的胃癌MKN-45细胞和PD-L1刺激的人外周血T淋巴细胞,发现quercetin能够抑制EGF诱导的GC细胞增殖和克隆形成(P<0.05),同时抑制HER2、PI3K、AKT蛋白及基因的表达(P<0.05)。Quercetin可通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制GC细胞增殖;formononetin能够一定程度降低PD-1在T淋巴细胞的表达,提高细胞上清液中细胞因子(IFN-γ/IL-2)的表达量,提高PI3K、AKT、p-zap70(T细胞受体相关蛋白激酶70,Zeta chain of T cell receptor associated protein kinase 70)等蛋白的表达(P<0.05),解除PD-L1导致的T淋巴细胞功能抑制,是通过阻断PD-1/PD-L1信号通路及活化下游PI3K/AKT信号通路实现的。4.靶向HER2和PD-L1的中药小分子配伍干预GC细胞与T淋巴细胞共培养体系,结果显示formononetin、quercetin以及formononetin和quercetin配伍干预能够解除T淋巴细胞增殖抑制、减少T淋巴细胞凋亡、提高细胞因子(IFN-γ/IL-2)表达量、降低PD-1在T淋巴细胞的表达(P<0.05),并抑制GC细胞增殖(P<0.05)、促进GC细胞凋亡、降低靶蛋白(HER2/PD-L1)在GC细胞的表达,且中药小分子配伍干预效果更好,表明中药小分子配伍干预可以提高共培养体系中的T淋巴细胞活性并且抑制胃癌MKN-45细胞增殖。研究结论:1.分子对接结果从大数据角度初步表明归芪白术方的药效物质基础中既具有可以与促进肿瘤细胞增殖靶蛋白HER2结合的小分子成分,也具有与抑制淋巴细胞活性靶蛋白PD-L1结合的小分子成分,通过“多点显效,协同增效”的功效特点,在阻断HER2抑制肿瘤细胞增殖的同时干预PD-L1通路促进免疫细胞活性;2.细胞生物学研究揭示了归芪白术方“多点显效,协同增效”促进免疫活性并抑制肿瘤的物质基础及健脾化瘀法治疗GC的作用机制;3.揭示中药归芪白术方通过健脾化瘀法治疗胃癌的科学内涵,为归芪白术方的有效性提供更具体的化学、生物信息学支撑,为归芪白术方的开发与转化提供依据,同时为中药复方的现代化研究提供方法学参考。
朱长乐[9](2020)在《清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究》文中认为本论文分为综述和实验研究两部分综述综述一对中药复方及中药单体治疗急性肺损伤的国内外相关文献进行了综述。综述二对急性肺损伤的病因、临床表现等相关文献进行了综述,并对急性肺损伤的发病机制进行了重点综述。实验研究实验研究分为两部分,第一部分主要研究了清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用,分为四个实验;第二部分主要研究了黄芩苷对急性肺损伤的干预作用,分为五个实验。第一部分:清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用实验一目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:气道滴注LPS可显着上调大鼠肺重量的湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,增加肺泡毛细血管膜通透性,促进炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的释放,诱导中性粒细胞的聚集浸润,引起肺泡壁增厚、支气管上皮细胞水肿。清金化痰汤可显着降低肺重量湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,减轻ALI大鼠的肺泡毛细血管膜通透性,减少蛋白质由毛细血管、间质向肺泡的渗透,减少中性粒细胞聚集,抑制炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。实验二目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:气道滴注LPS可显着促进TLR4、MYD88、NLRP3的蛋白表达的升高和NF-κB磷酸化。清金化痰汤可显着降低TLR4、MYD88、NLRP3蛋白的表达,抑制了 NF-κB的磷酸化,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。实验三目的:探索清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响。方法:使用冻干机将含药血清冻干为含药血清冻干粉。以空白含药血清冻干粉、清金化痰汤含药血清冻干粉、克拉霉素含药血清冻干粉干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:清金化痰汤含药血清冻干粉和克拉霉素含药血清冻干粉可以引起细胞明显的水肿,细胞内可见黑色颗粒物质,并且无明显抑制炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO分泌的作用,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。实验四目的:分析中药复方清金化痰汤的主要化学成分及入血成分。方法:大鼠灌胃纯水、清金化痰汤和克拉霉素7天后采血、离心,制备含药血清。采用液质联用技术检测并分析各药物及其含药血清的主要化学成分。结果:清金化痰汤中含有9个化学成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、绿原酸、咖啡酸、芦丁、连翘苷、大黄酸、甘草酸铵、齐墩果酸,其中3个为入血成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、甘草酸铵。第二部分:黄芩苷对急性肺损伤的干预作用实验五目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:黄芩苷标准品浓度在10μg/ml及以下时,对细胞存活率无明显影响,细胞生长状态较好,细胞扁平,呈多边形。黄芩苷用药对炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO的表达有一定的抑制作用。实验六目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响。方法:以黄岑苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞培养上清中的炎症因子的含量、观察细胞形态、用Transwell小室检测上皮细胞趋化中性粒细胞的作用。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可显着促进细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF的分泌,刺激支气管上皮细胞趋化中性粒细胞,诱导上皮细胞损伤。黄芩苷可显着地抑制IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF等炎症因子的分泌,减少中性粒细胞的迁移数量。实验七目的:探索黄芩苷对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞中TLR4、MYD88、TRIF、NF-κB、NLRP3蛋白含量及mRNA表达情况。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可激活TLR4信号通路,显着上调TLR4、MyD88、NLRP3蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,黄芩苷可显着地下调TLR4、MyD88、p-NF-κB和NLRP3蛋白含量和mRNA的表达,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。实验八目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:LPS干预上调了 BALF和血清中的炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,增加了肺泡毛细血管膜通透性。黄芩苷干预可显着降低大鼠肺组织重量的湿/干比和BALF的蛋白质浓度,抑制大量中性粒细胞浸润到肺泡间质和肺泡间隙,减轻支气管上皮细胞的水肿,抑制上皮细胞的黏液分泌,抑制BALF和血清中炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。实验九目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:LPS干预促进TLR4信号通路和MAPK信号通路的激活。黄芩苷可以显着地抑制TLR4、MYD88、P-NF-κB、NLRP3、P-ERK和P-p38蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.气道滴注5mg/kg的LPS溶液可诱导大鼠的肺泡毛细血管通透性增加、炎症因子分泌增加、肺组织病理变化,符合急性肺损伤的病理改变,可以用于急性肺损伤的实验研究。2.清金化痰汤能够通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活,抑制炎症因子分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加和大鼠的急性肺损伤。3.清金化痰汤的主要化学成分之一黄芩苷可显着抑制LPS诱导BEAS-2B细胞的损伤以及炎症因子的分泌。4.黄芩苷可以抑制LPS诱导的急性大鼠肺损伤模型炎症因子的分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加、肺水肿和大鼠的急性肺损伤。5.黄芩苷可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活与转录,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症风暴的爆发。6.黄芩苷能够通过抑制MAPK信号通路的激活,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症反应的扩大。
徐颖[10](2020)在《壳寡糖对大鼠酒精性肠道损伤的影响研究》文中提出饮酒导致的疾病和健康问题,特别是酒精性肝损伤等一直受到广泛关注,而很多伤害都与肠道屏障的健康状况息息相关。酒精可以通过破坏黏膜结构、氧化应激反应和炎症反应等方面损伤肠道屏障,使有害物质进入体内,进而损伤器官组织。壳寡糖(COS)作为一种天然的碱性低聚物,以其来源广、无毒害、易生物降解和解酒护肝等生理活性越来越受到重视。本论文以COS为主要研究对象,探究其对大鼠酒精性肠道损伤的干预作用,以期为COS功能的开发,以及开发安全有效的肠道保护产品提供理论支持。本论文的主要研究内容与结果如下:(1)通过对Wistar大鼠进行连续42 d的灌胃酒精处理建立肠道损伤模型,灌胃酒精前分别灌胃180 mg/kg谷氨酰胺、22.5 mg/kg、45 mg/kg和90 mg/kg COS。通过测定饲养过程中大鼠体重、进食量以及饲养结束大鼠器官指数和小肠重/长的值,并对小肠进行病理组织学检查,分析大鼠的生长状况以及小肠伸缩性和形态。结果表明:酒精对小肠中十二指肠的损伤较空肠和回肠严重。COS可以增加大鼠体重、降低酒精对器官的损伤,还可以改善大鼠饮酒后十二指肠和回肠伸缩性的变化,缓解大鼠的肠道不适;同时,通过维持绒毛形态、增加绒毛长度、降低肌层厚度,使绒毛长度与隐窝深度比值增加,缓解酒精对大鼠小肠结构和功能的损伤。(2)在大鼠酒精性肠道损伤模型中探讨了COS对肠粘膜屏障的保护作用。通过测定大鼠血浆中D-乳酸(D-LA)、内毒素(LPS)含量和二胺氧化酶(DAO)活性,以及小肠紧密连接蛋白的表达情况,探究壳寡糖的肠黏膜屏障保护效果。结果表明:COS的干预可以显着降低大鼠血浆中D-LA、LPS含量以及DAO活性,降低由酒精引起的肠粘膜通透性的增加。COS可以通过提高Occludin和ZO-1、降低Claudin-4的基因和蛋白表达水平,修复小肠上皮细胞间的紧密连接结构。(3)在大鼠酒精性肠道损伤模型中探讨了COS对小肠氧化应激的干预作用。通过测定小肠总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及丙二醛(MDA)和蛋白质羰基含量表征小肠的氧化损伤情况。结果表明:COS摄入可以提高小肠组织的总抗氧化能力,显着提高大鼠小肠组织的SOD和GSH-Px活性,显着降低组织中MDA和蛋白质羰基含量,缓解灌胃酒精导致的小肠的氧化损伤。(4)在大鼠酒精性肠道损伤模型中探讨了COS对炎症反应的干预作用及机制。通过测定血浆中促炎因子含量,探究COS的抗炎水平;测定小肠中NO含量和iNOS活性,以及炎症相关因子的表达,探究壳寡糖对肠道炎症的调节作用。结果表明:COS可以下调血浆中IL-6、IL-1β和TNF-α水平,缓解全身炎症;此外,COS可以通过下调小肠IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达以及降低iNOS活性下调小肠组织NO含量,缓解肠道炎症;同时,COS可以下调TLR4、TLR2和TRAF6 mRNA的表达量,下调TLR4和核内磷酸化NF-κB p65的蛋白表达,表明COS可能通过调控抑制TLR4蛋白表达、抑制NF-κB通路的激活实现缓解小肠炎症的作用。
二、固真方对免疫抑制动物白细胞介素-2基因转录的作用研究(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、固真方对免疫抑制动物白细胞介素-2基因转录的作用研究(论文提纲范文)
(2)围产期奶牛亚临床酮病的临床特征及甘草酸单铵盐的预防效果(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
符号及缩略语 |
第一部分 文献综述 |
第一章 奶牛围产期代谢紊乱的研究进展 |
1.1 奶牛围产期 |
1.2 奶牛围产期能量代谢特点 |
1.3 奶牛围产期氧化应激与炎症 |
1.4 奶牛围产期亚临床酮病的危害 |
1.5 改善围产期奶牛健康状况的措施 |
第二章 甘草酸的作用 |
2.1 甘草酸对肝脏脂质代谢的影响 |
2.2 甘草酸对肝脏氧化应激的影响 |
2.3 甘草酸对肝脏炎症和免疫调节的影响 |
2.4 甘草酸对肝脏的保护作用 |
2.5 甘草酸对肝脏的抗病毒作用 |
2.6 本文的研究目的与意义 |
第二部分 试验研究 |
第一章 亚临床酮病对围产期奶牛生产性能和血清生化指标的影响 |
1 试验材料 |
1.1 试验动物和药品 |
1.2 试验日粮与饲养管理 |
2 方法 |
2.1 试验设计 |
2.2 体况评分变化的记录 |
2.3 奶牛泌乳量和乳成分的测定 |
2.4 奶牛产后常见疾病发病记录 |
2.5 血液生化指标的测定 |
2.6 数据统计与分析 |
3 结果 |
3.1 围产期奶牛亚临床酮病的发病特征 |
3.2 奶牛产后体况评分的变化 |
3.3 奶牛泌乳量和乳成分的特征 |
3.4 奶牛血清脂代谢相关指标的变化 |
3.5 奶牛血清肝功能相关指标的变化 |
3.6 奶牛血清蛋白指标的变化 |
3.7 奶牛血清肾功能相关指标的变化 |
3.8 血清中Ca、P含量的变化 |
3.9 SCK奶牛血清糖代谢相关激素水平的变化 |
3.10 SCK奶牛血清抗氧化相关指标的变化 |
3.11 SCK奶牛血清炎症相关指标的变化 |
3.12 SCK奶牛血清免疫蛋白相关指标的变化 |
4 讨论 |
4.1 围产期奶牛亚临床酮病对生产性能的影响 |
4.2 SCK对围产期奶牛血清生化指标的影响 |
5 小结 |
第二章 甘草酸单铵盐对体外奶牛肝细胞脂肪变性的保护作用 |
1 试验材料 |
1.1 试验动物、仪器及试剂 |
1.2 主要试剂的配制方法 |
2 方法 |
2.1 犊牛原代肝细胞的分离培养与形态观察 |
2.2 油酸钠诱导体外奶牛肝细胞脂肪变性模型的建立 |
2.3 肝细胞的分组与处理 |
2.4 MAG对肝细胞中脂肪沉积的影响 |
2.5 DAPI染色观察细胞核形态的变化 |
2.6 CCK-8法检测肝细胞增殖活性 |
2.7 微量法检测培养液中ALT、AST活性 |
2.8 肝细胞和培养液中氧化抗氧化指标的检测 |
2.9 荧光定量PCR检测脂代谢相关基因的表达 |
2.10 肝细胞蛋白质样品的提取 |
2.11 蛋白浓度测定及Western-blotting分析 |
2.12 数据统计分析 |
3 结果 |
3.1 犊牛原代肝细胞的培养 |
3.2 油酸钠诱导体外肝细胞脂肪变性模型的建立 |
3.3 MAG对油酸钠诱导肝细胞内脂肪沉积的影响 |
3.4 MAG对油酸钠诱导肝细胞凋亡的影响 |
3.5 MAG对肝细胞增殖活性的影响 |
3.6 MAG对肝细胞培养上清中ALT、AST活性的影响 |
3.7 MAG对油酸钠诱导奶牛肝细胞氧化抗氧化指标的影响 |
3.8 MAG对肝细胞脂代谢相关基因转录水平的影响 |
3.9 MAG对肝细胞炎症相关基因转录和蛋白表达水平的影响 |
3.10 MAG对肝细胞凋亡相关基因转录和蛋白表达水平的影响 |
4 讨论 |
4.1 MAG对油酸钠诱导肝细胞脂肪沉积的影响 |
4.2 MAG对油酸钠诱导肝细胞脂肪变性氧化应激的影响 |
4.3 MAG对油酸钠诱导肝细胞脂肪变性炎症相关基因转录与蛋白表达的影响 |
4.4 MAG对油酸钠诱导肝细胞脂肪变性凋亡相关基因转录与蛋白表达的影响 |
5 小结 |
第三章 甘草酸单铵盐对围产期奶牛生产性能和血清生化指标的影响 |
1 试验材料 |
1.1 试验动物 |
1.2 试验日粮与饲养管理 |
2 方法 |
2.1 试验设计 |
2.2 体况评分变化的记录 |
2.3 奶牛泌乳量和乳成分的测定 |
2.4 奶牛产后常见疾病发病记录 |
2.5 血液生化指标的测定 |
2.6 数据统计与分析 |
3 结果 |
3.1 MAG对体况评分的影响 |
3.2 MAG对泌乳量和乳成分的影响 |
3.3 MAG对产后常见疾病发病率的影响 |
3.4 MAG对脂肪代谢相关指标的影响 |
3.5 MAG对肝功能相关指标的影响 |
3.6 MAG对肝脏合成相关蛋白水平的影响 |
3.7 MAG对肾功能相关生化指标的影响 |
3.8 MAG对血清Ca和P水平的影响 |
3.9 MAG对血清糖代谢相关激素水平的影响 |
3.10 MAG对血清抗氧化相关指标的影响 |
3.11 MAG对血清炎症相关指标的影响 |
3.12 MAG对血清免疫相关指标的影响 |
4 讨论 |
4.1 MAG对围产期奶牛生产性能的影响 |
4.2 MAG对奶牛脂肪代谢的影响 |
4.3 MAG对奶牛肝功能的影响 |
4.4 MAG对奶牛肾功能生化指标的影响 |
4.5 MAG对奶牛血清Ca和P含量影响 |
4.6 MAG对血清免疫球蛋白含量的影响 |
4.7 MAG对牛氧化应激和炎症的影响 |
4.8 MAG对能量代谢相关激素的影响 |
5 小结 |
参考文献 |
全文结论 |
攻读学位期间发表的学术论文 |
致谢 |
(3)从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
文献综述 |
综述一 肺结节病的中医药研究进展 |
1 病名探讨 |
2 病因 |
3 病机 |
4 中医药治疗 |
5 结语 |
参考文献 |
综述二 肺结节病的西医学研究进展 |
1 病因 |
2 发病机制 |
3 临床表现和辅助检查 |
4 诊断 |
5 治疗 |
6 动物模型 |
参考文献 |
第一部分 糖皮质激素治疗肺结节病的Meta分析 |
前言 |
1 资料和方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 研究意义及不足 |
参考文献 |
第二部分 从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论研究 |
前言 |
研究一 三焦理论演变 |
1 三焦形质的演变 |
2 三焦功能的演变 |
3 三焦辨证 |
4 小结 |
研究二 姜良铎教授三焦“膜性四通管道”理论 |
1 三焦“膜性四通管道”的形质 |
2 三焦“膜性四通管道”的生理功能 |
3 三焦“膜性四通管道”的病因病机 |
4 治疗原则 |
5 小结 |
研究三 从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病 |
1 从三焦理论认识肺结节病基本病机 |
2 姜良铎教授论治肺结节病 |
3 通化方的由来 |
4 小结 |
参考文献 |
第三部分 通化方治疗肺结节病的临床研究 |
前言 |
1 临床资料 |
2 研究方法 |
3 研究结果 |
4 讨论 |
5 小结 |
参考文献 |
第四部分 “通化方”治疗肺结节病作用机制的网络药理学研究 |
前言 |
研究一 肺结节病相关基因 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 小结 |
研究二 通化方有效活性成分和基因靶点 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 小结 |
研究三 通化方-肺结节病-靶点调控网络及PPI网络 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 小结 |
研究四 靶点基因生物功能注释分析 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 小结 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
结语 |
1 结论 |
2 创新性 |
3 不足与展望 |
致谢 |
附录 纳入研究资料提取表 |
病例报告表 |
在学期间主要研究成果 |
个人简历 |
(4)从数据挖掘和网络药理学探讨“湿瘀”理论与清热利湿方治疗痛风性关节炎作用机制(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一 中医学对痛风的认识 |
1 中医学对痛风病名的认识 |
2 中医学对痛风病因病机的认识 |
3 痛风的中医药治疗进展 |
4 网络药理学在中医药领域的应用 |
5 小结 |
参考文献 |
综述二 痛风性关节炎现代医学研究进展 |
1 流行病学 |
2 病因及诱因 |
3 痛风性关节炎炎性机制 |
4 痛风性关节炎治疗 |
5 小结 |
参考文献 |
第二部分 基于数据挖掘分析痛风证候特点及朱跃兰教授治疗痛风性关节炎用药规律 |
前言 |
资料与方法 |
1 临床资料 |
2 研究方法 |
研究结果 |
1 一般情况 |
2 整体数据挖掘结果 |
3 分层数据挖掘结果 |
讨论 |
1 痛风性关节炎患者一般情况分析 |
2 痛风证候特点分析 |
3 朱跃兰教授遣方用药规律分析 |
4 “湿瘀”理论梳理与清热利湿方 |
小结 |
参考文献 |
第三部分 基于网络药理学探讨清热利湿方治疗痛风性关节炎的作用机制 |
前言 |
资料与方法 |
1 清热利湿方活性成分的筛选 |
2 活性成分潜在靶点收集与筛选 |
3 痛风性关节炎相关靶点的获取及筛选 |
4 清热利湿方主要活性成分与痛风性关节炎共同靶点的获取 |
5 核心靶点蛋白相互作用网络构建 |
6 GO功能富集分析和KEGG通路富集分析 |
结果 |
1 清热利湿方药效成分筛选 |
2 清热利湿方药效成分靶点预测及筛选 |
3 痛风性关节炎相关靶点及中药与疾病共同靶点的筛选 |
4 核心靶点蛋白相互作用(PPI)网络的构建分析及关键蛋白的筛选 |
5 GO富集分析 |
6 KEGG通路富集分析 |
讨论 |
小结 |
参考文献 |
第四部分 清热利湿方对急性痛风性关节炎大鼠治疗效果及作用机制研究 |
前言 |
材料与方法 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
结果 |
1 大鼠一般情况 |
2 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠关节功能障碍指数的影响 |
3 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠关节炎症指数的影响 |
4 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度的影响 |
5 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠血清炎症因子水平的影响 |
6 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织病理学的影响 |
7 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠踝关节组织TLR2、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达的影响 |
8 清热利湿方对痛风性关节炎大鼠踝关节组织TLR2、TLR4、NF-κB、NLRP3mRNA表达的影响 |
讨论 |
1 痛风性关节炎动物模型选择 |
2 清热利湿方治疗急性痛风性关节炎大鼠的抗炎作用 |
3 清热利湿方治疗急性痛风性关节炎大鼠的作用机制 |
小结 |
参考文献 |
结语 |
致谢 |
附录 |
个人简历 |
(5)健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎的Meta分析和网络药理学研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一: 溃疡性结肠炎的西医研究进展 |
参考文献 |
综述二: 溃疡性结肠炎的中医研究进展 |
参考文献 |
第二部分 研究部分 |
前言 |
研究一: 健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎的Meta分析 |
资料与方法 |
1 研究对象 |
2 纳入排除标准 |
3 检索策略 |
4 文献筛选 |
5 资料提取 |
6 中药名称规范 |
7 质量评价 |
8 统计学方法 |
结果与分析 |
1 文献筛选结果 |
2 纳入研究的基本特征 |
3 纳入研究的中药使用情况 |
4 方法学质量评价 |
5 Meta分析结果 |
讨论 |
1 立题依据 |
2 研究结果 |
3 存在的不足 |
4 展望 |
结论 |
参考文献 |
研究二: 健脾清肠法核心药物组合的网络药理学研究 |
资料与方法 |
1 核心药物组合活性成分及靶点筛选 |
2 UC相关靶点筛选 |
3 核心药物-UC共同靶点筛选 |
4 蛋白互作网络构建 |
5 基因本体分析和通路富集分析 |
6 成分-靶点-通路网络图构建 |
结果与分析 |
1 核心药物组合活性成分及靶点筛选 |
2 UC相关靶点筛选 |
3 核心药物-UC共同靶点筛选 |
4 共同靶点PPI网络图构建 |
5 GO分析和通路富集分析 |
6 成分-靶点-通路网络图构建 |
讨论 |
1 有效成分 |
2 关键靶点 |
3 GO分析 |
4 KEGG通路富集分析 |
结论 |
参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(6)敦煌疗癣加味膏治疗慢性湿疹临床疗效观察(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略词表 |
前言 |
第一部分 研究内容与方法 |
1 研究目的 |
2 一般资料 |
2.1 病例来源 |
2.2 诊断标准 |
2.3 纳入标准 |
2.4 排除标准 |
2.5 剔除标准 |
3 研究方案 |
3.1 试验药物 |
3.2 用药方法 |
3.3 观察方法 |
3.4 评分标准 |
3.5 疗效评价 |
3.6 不良反应 |
3.7 复发率 |
3.8 统计学处理 |
3.9 伦理学原则 |
第二部分 研究结果 |
1 病例脱落统计 |
2 一般资料比较 |
2.1 两组患者年龄情况比较 |
2.2 两组患者性别情况比较 |
2.3 两组患者病程情况比较 |
3 两组治疗前症状积分比较 |
4 两组治疗前后症状积分比较 |
4.1 对照组治疗前后症状积分比较 |
4.2 治疗组治疗前后症状积分比较 |
5 两组治疗前后瘙痒积分比较 |
6 两组治疗前后红斑积分比较 |
7 两组治疗前后丘疹积分比较 |
8 两组治疗前后鳞屑积分比较 |
9 两组治疗前后苔藓化积分比较 |
10 两组治疗2 周后各指标疗效评价 |
11 两组治疗4 周后各指标疗效评价 |
12 两组总体临床疗效比较 |
13 不良反应比较 |
14 复发率 |
15 临床观察结论 |
15.1 两组组内比较 |
15.2 两组组间比较 |
讨论 |
1 中医学对湿疹的认识 |
2 现代医学对湿疹认识 |
3 敦煌疗癣加味膏简介 |
4 对照药物湿疹膏简介 |
5 敦煌疗癣加味膏治疗慢性湿疹的疗效探讨 |
结语 |
1 结论 |
2 存在的问题与展望 |
参考文献 |
附录 |
附录1 敦煌疗癣加味膏临床研究患者知情同意书 |
附录2 临床病例观察表 |
附录3 |
第三部分:文献综述 湿疹的概述及临床治疗的研究进展 |
1 湿疹病因病机研究进展 |
1.1 传统医学对湿疹病因病机的认识 |
1.2 现代医学对湿疹病因病机的研究 |
2 临床治疗研究进展 |
2.1 中医药对于湿疹治疗的研究进展 |
2.2 现代医学对于湿疹治疗研究进展 |
参考文献 |
在学校期间主要研究成果 |
1.发表论文 |
2.参与课题 |
3.获奖情况 |
致谢 |
(7)金丝桃苷通过靶向miR-499-5p改善STZ诱导的糖尿病肾病作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
1 糖尿病肾病的流行病学特点 |
2 糖尿病肾病的病理生理及发病机制 |
2.1 促炎细胞因子在糖尿病肾病中的作用 |
2.2 代谢与生化因子 |
2.3 自噬 |
2.4 纤维化 |
3 参考文献 |
第一章 芪葵颗粒对糖尿病肾病患者临床疗效研究 |
1 前言 |
2 方法与材料 |
2.1 研究对象 |
2.2 样本量估算 |
2.3 诊断标准 |
2.4 治疗方案 |
2.5 方法与材料 |
2.6 统计分析 |
3 结果 |
3.1 一般资料汇总 |
3.2 血糖及血脂数据分析 |
3.3 SCR、UACR、24h-UTP及EGFR数据分析 |
3.4 治疗前后糖尿病肾病患者SCR、UACR、24h-UTP及EGFR改善情况比较 |
4 讨论 |
5 结论 |
6 参考文献 |
第二章 金丝桃苷通过miR-499-5p/NRIP1对高糖干预的HK-2细胞的保护作用及机制 |
1 前言 |
2 方法与材料 |
2.1 试剂材料 |
3 研究方案 |
3.1 生物信息学分析 |
3.2 细胞培养 |
3.3 细胞的传代 |
3.4 细胞分组及给药治疗 |
3.5 细胞转染 |
3.6 检测方法 |
3.7 统计分析 |
4 结果 |
4.1 金丝桃苷对高糖条件下HK-2细胞活力的影响 |
4.2 金丝桃苷对高糖条件下HK-2细胞炎症因子表达水平的影响 |
4.3 金丝桃苷上调miR-499-5p |
4.4 金丝桃苷上调miR-499-5p减轻HG诱导的细胞凋亡 |
4.5 金丝桃苷上调miR-499-5p减轻HG诱导的炎症反应 |
4.6 miR-499-5p靶向HK-2细胞中的NRIP1 |
4.7 miR-499-5p与NRIP1存在相互作用 |
4.8 金丝桃苷通过miR-499-5p/NRIP1途径抑制HG诱导的HK-2细胞凋亡 |
4.9 金丝桃苷通过miR-499-5p/NRIP1途径抑制HG诱导的HK-2细胞炎症反应 |
5 讨论 |
6 结论 |
7 参考文献 |
第三章 金丝桃苷通过靶向miR-499-5p/APC轴改善STZ诱导的糖尿病肾病 |
1 前言 |
2 方法与材料 |
2.1 试剂材料 |
2.2 仪器设备 |
2.3 实验动物 |
3 研究方案 |
3.1 质粒构建 |
3.2 体内研究方案 |
3.3 检测方法 |
3.4 统计分析 |
4 结果 |
4.1 金丝桃苷抑制高糖诱导的细胞外基质(ECM)积聚、炎症反应和细胞凋亡 |
4.2 金丝桃苷治疗改善链脲佐菌素诱导的小鼠糖尿病症状 |
4.3 金丝桃苷治疗减轻糖尿病肾病小鼠肾损伤和肾纤维化 |
4.4 金丝桃苷在体内外对APC水平的抑制作用 |
4.5 miR-499-5p直接靶向和负调控APC |
4.6 miR-499-5P和APC对小鼠糖尿病症状无影响 |
4.7 APC过表达逆转miR-499-5p在肾损伤和纤维化中的作用 |
5 讨论 |
6 结论 |
7 全文总结 |
8 参考文献 |
综述糖尿病肾病:表观遗传学和microRNA之间的调节相互作用 |
1 miRNA:生物发生与功能 |
1.1 miRNAs在肾脏生理学中的作用 |
1.2 糖尿病肾病中的miRNA |
2 表观遗传学 |
2.1 简介 |
2.2 表观遗传学与糖尿病肾病 |
3 结束语 |
4 参考文献 |
攻读学位期间发表文章情况 |
中英文对照缩略词表 |
致谢 |
(8)基于PD-L1、HER2联合靶点研究归芪白术方对胃癌细胞增殖和T细胞活性的影响(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
缩略词表 |
第一章:基于分子对接虚拟筛选归芪白术方中可与胃癌治疗靶点结合的小分子成分 |
1.1 材料与方法 |
1.1.1 实验软件和数据库 |
1.1.2 主要试剂、仪器 |
1.1.3 胃癌靶向治疗靶点筛选 |
1.1.4 归芪白术方中药小分子结构库构建及类药性分析 |
1.1.5 靶蛋白活性位点 |
1.1.6 分子对接 |
1.1.7 微量热泳动实验测定虚拟筛选获得成分与靶蛋白的亲和力 |
1.1.8 分子动力学模拟和结合自由能计算 |
1.1.9 靶向成分的毒性预测 |
1.1.10 靶向HER2的小分子成分对HER2激酶活性的检测 |
1.2 结果 |
1.2.1 胃癌治疗靶点筛选 |
1.2.2 归芪白术方小分子成分类药性分析 |
1.2.3 靶蛋白晶体结构确定 |
1.2.4 分子对接 |
1.2.5 MST测定虚拟筛选获得小分子成分与靶蛋白的亲和力 |
1.2.6 分子动力学模拟和结合自由能计算结果 |
1.2.7 代表性成分quercetin、daidzein、formononetin和 isorhamnetin毒性预测 |
1.2.8 Quercetin和daidzein对HER2激酶活性影响 |
1.3 讨论 |
1.3.1 HER2与PD-L1在胃癌表达的相关性分析 |
1.3.2 归芪白术方治疗胃癌的物质基础分析 |
1.3.3 分子对接-MST-分子动力学模拟-HER2激酶活性检测结果分析 |
1.4 小结 |
第二章:归芪白术方代表性中药小分子成分对胃癌细胞和T淋巴细胞的作用及机制 |
2.1 材料和试剂 |
2.1.1 实验细胞株 |
2.1.2 试剂与耗材 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 靶向HER2的代表性成分quercetin和daidzein抗胃癌细胞增殖实验 |
2.2.2 胃癌细胞株的选择 |
2.2.3 靶向HER2的代表性成分quercetin和daidzein对胃癌细胞的干预作用 |
2.2.4 人外周血T淋巴细胞的分离与活化 |
2.2.5 抑制PD-L1的代表性成分formononetin和isorhamnetin对PD-L1干预T细胞的作用 |
2.3 结果 |
2.3.1 靶向HER2的代表性成分quercetin和daidzein对不同胃癌细胞的抗增殖作用 |
2.3.2 胃癌细胞株的选择 |
2.3.3 靶向HER2的代表性成分quercetin和daidzein对胃癌MKN-45细胞干预作用 |
2.3.4 T淋巴细胞的分离与活化 |
2.3.5 PD-L1刺激T淋巴细胞及干预实验 |
2.4 讨论 |
2.4.1 靶向HER2的代表性成分quercettin、daidzein抑制胃癌细胞增殖结果分析 |
2.4.2 代表性成分Formononetin、isorhamnetin对T淋巴细胞活性的恢复作用 |
2.4.3 健脾扶正、化瘀祛邪治疗胃癌的中医认识 |
2.5 小结 |
第三章:归芪白术方体外有效的代表性中药小分子对胃癌细胞和T淋巴细胞共培养体系的调节作用 |
3.1 材料和试剂 |
3.1.1 细胞株 |
3.1.2 试剂与仪器 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 胃癌MKN-45和T淋巴细胞共培养体系构建 |
3.2.2 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预T淋巴细胞与胃癌MKN-45 细胞共培养体系 |
3.2.3 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预共培养体系后细胞形态学观察和T淋巴细胞、胃癌MKN-45 细胞增殖情况 |
3.2.4 流式细胞术检测体外有效的代表性成分quercetin和 formononetin配伍干预共培养体系后T淋巴细胞和胃癌MKN-45 细胞凋亡情况 |
3.2.5 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预共培养体系后T淋巴细胞PD-1 表达情况 |
3.2.6 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预共培养体系后细胞上清液中细胞因子表达情况 |
3.2.7 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预共培养体系后T淋巴细胞和胃癌MKN-45 细胞相关蛋白表达情况 |
3.3 结果 |
3.3.1 胃癌MKN-45细胞与T淋巴细胞共培养体系的建立 |
3.3.2 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预共培养体系 |
3.4 讨论 |
3.4.1 胃癌MKN-45 细胞与T淋巴细胞共培养体系构建结果分析 |
3.4.2 体外有效的代表性成分quercetin和formononetin配伍干预共培养体系结果分析 |
3.5 小结 |
结论与展望 |
参考文献 |
论文综述 HER2、PD-L1生物学特性及在胃癌的相关性和应用研究 |
参考文献 |
在学期间主要研究成果 |
致谢 |
附件 |
(9)清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略语 |
文献综述 |
综述一 中医药防治急性肺损伤的研究进展 |
1 中医对急性肺损伤的认识 |
2 急性肺损伤的病因病机 |
3 中药复方药干预急性肺损伤的研究 |
4 中药单体干预急性肺损伤的研究 |
5 结语 |
参考文献 |
综述二 急性肺损伤发病机制及治疗药物的研究进展 |
1 病因与临床表现 |
2 病理特征 |
3 ALI的发病机制 |
4 ALI的治疗药物 |
5 结语 |
参考文献 |
实验研究 |
第一部分 清金化痰汤干预急性肺损伤的研究 |
前言 |
实验一 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验二 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠TLR4信号通路的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验三 清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验四 质谱分析清金化痰汤及其含药血清的主要成分 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
第二部分 黄芩苷对急性肺损伤干预作用的研究 |
前言 |
实验五 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验六 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验七 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验八 黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验九 黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
结论 |
创新点 |
不足及展望 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
(10)壳寡糖对大鼠酒精性肠道损伤的影响研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
中英文缩略语对照表 |
1 绪论 |
1.1 酒精与肠道损伤的研究进展 |
1.1.1 酒精与肠道消化吸收作用 |
1.1.2 酒精与肠道机械屏障 |
1.1.3 酒精与肠道生物屏障 |
1.1.4 酒精与肠道免疫屏障 |
1.1.5 酒精与氧化应激 |
1.1.6 酒精与炎症反应 |
1.1.7 酒精性肠道损伤治疗现状 |
1.2 壳寡糖及其生物活性研究进展 |
1.2.1 吸收代谢 |
1.2.2 保护肠道 |
1.2.3 抗氧化活性 |
1.2.4 其他 |
1.3 立题意义 |
1.4 研究内容 |
2 材料与方法 |
2.1 实验材料及仪器 |
2.1.1 主要原料与试剂 |
2.1.2 主要仪器 |
2.1.3 实验动物 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 动物分组和给药方法 |
2.2.2 大鼠体重、进食量、脏器指数及小肠重/长比的测定 |
2.2.3 血浆中DAO、D-LA和内毒素检测 |
2.2.4 血浆中炎性因子检测 |
2.2.5 小肠组织氧化指标检测 |
2.2.6 小肠病理学组织切片和HE染色 |
2.2.7 基因表达的检测 |
2.2.8 Western Blot检测蛋白表达 |
2.2.9 数据处理与统计方法 |
3 结果与讨论 |
3.1 壳寡糖对大鼠生状况以及肠道伸缩性和形态的影响 |
3.1.1 壳寡糖对大鼠体重和进食量的影响 |
3.1.2 壳寡糖对大鼠脏器指数的影响 |
3.1.3 壳寡糖对大鼠小肠重/长比的影响 |
3.1.4 壳寡糖对大鼠小肠病理学切片影响 |
3.2 壳寡糖对肠粘膜屏障保护作用 |
3.2.1 壳寡糖对大鼠血浆中D-LA和DAO水平的影响 |
3.2.2 壳寡糖对大鼠血浆中内毒素水平的影响 |
3.2.3 壳寡糖对大鼠小肠紧密连接结构的影响 |
3.3 壳寡糖对大鼠小肠氧化应激反应的影响 |
3.3.1 壳寡糖对大鼠小肠T-AOC及SOD和GSH-Px活力的影响 |
3.3.2 壳寡糖对大鼠小肠MDA和蛋白质羰基含量的影响 |
3.4 壳寡糖对大鼠炎症反应的影响 |
3.4.1 壳寡糖对大鼠血浆中炎性因子含量的影响 |
3.4.2 壳寡糖对大鼠小肠组织炎症反应的影响 |
主要结论与展望 |
主要结论 |
展望 |
致谢 |
参考文献 |
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
四、固真方对免疫抑制动物白细胞介素-2基因转录的作用研究(论文参考文献)
- [1]壮医立体综合疗法对类风湿关节炎患者外周血circRNA及IL-1、IL-6表达影响的研究[D]. 唐秀松. 广西中医药大学, 2021
- [2]围产期奶牛亚临床酮病的临床特征及甘草酸单铵盐的预防效果[D]. 田超. 扬州大学, 2021
- [3]从三焦“膜性四通管道”论治肺结节病的理论及临床研究[D]. 满君. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]从数据挖掘和网络药理学探讨“湿瘀”理论与清热利湿方治疗痛风性关节炎作用机制[D]. 王玉天. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]健脾清肠法治疗溃疡性结肠炎的Meta分析和网络药理学研究[D]. 王婷玉. 北京中医药大学, 2021(08)
- [6]敦煌疗癣加味膏治疗慢性湿疹临床疗效观察[D]. 何鑫瑜. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [7]金丝桃苷通过靶向miR-499-5p改善STZ诱导的糖尿病肾病作用机制研究[D]. 周静波. 南京中医药大学, 2021(01)
- [8]基于PD-L1、HER2联合靶点研究归芪白术方对胃癌细胞增殖和T细胞活性的影响[D]. 李玲. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [9]清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究[D]. 朱长乐. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]壳寡糖对大鼠酒精性肠道损伤的影响研究[D]. 徐颖. 江南大学, 2020(01)