一、甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞转化生长因子-β_1基因转录的影响(论文文献综述)
李义,杨彦君,彭松云,程志刚,钟凯,殷天坪,唐良华[1](2022)在《苗药九仙罗汉接骨汤干预胫骨骨折模型大鼠的成骨分化及骨折愈合》文中指出背景:九仙罗汉接骨汤具有活血散瘀、接骨消肿、止痛的作用,但目前其对胫骨骨折的具体作用机制尚未完全掌握。目的:探究苗药九仙罗汉接骨汤介导BMPs/Smad信号通路对胫骨骨折大鼠成骨分化及骨折愈合能力的影响。方法:60只SD大鼠随机分为模型组、苗药组、三七组,采用改良钻孔法建立不完全性胫骨骨折模型。造模成功当天,苗药组给予苗药九仙罗汉接骨汤煎剂(2 mL/kg)灌胃;三七组给予同体积三七粉液(1 mL/kg)灌胃;模型组给予同等计量蒸馏水灌胃,1次/d,共28 d。28 d后麻醉下取大鼠胫骨组织,茜素红染色测骨髓间充质干细胞成骨分化;三点弯曲试验测胫骨生物力学指标;苏木精-伊红染色测骨组织形态;ELISA检测血清中血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1表达水平;RT-PCR和Western blot检测骨形态发生蛋白2、转化生长因子β、Smad1、Smad2的mRNA和蛋白水平;实验已经过贵州中医药大学第二附属医院动物伦理委员会批准(2018-072)。结果与结论:(1)与模型组比较,苗药组与三七组骨髓间充质干细胞成骨分化后细胞多层重叠生长且形成灶状,有大量的钙结节形成,且苗药组较三七组效果更佳;(2)与模型组相比,三七组与苗药组骨形态发生蛋白2、转化生长因子β、Smad1、Smad2的mRNA和蛋白水平均有所上升(P <0.05);(3)三七组与苗药组最大载荷、刚度水平较模型组均有所升高(P <0.05);(4)模型组骨小梁较细,髓腔间空隙大,杂乱无章,较为松散,有大量的未钙化软骨细胞;三七组与苗药组大鼠骨组织形态较为接近,均表现为骨小梁较粗,髓腔空隙减小,分布较为有序,软骨细胞骨化较多;(5)与模型组相比,三七组与苗药组血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子1表达水平有一定程度的提升(P <0.05);(6)模型组大鼠存在明显骨折线,三七组与苗药组标本骨折断端均达到完全愈合,但与三七组相比,苗药组标本骨折断端骨痂密度稍高;(7)结果说明,苗药九仙罗汉接骨汤可促进成骨细胞分化,加速骨折愈合,其作用机制可能是通过激活BMPs/Smad信号通路来实现。
赵久梅,王哲,李学英[2](2021)在《调控软骨形成的信号通路及相关因子在骨髓间充质干细胞骨向分化中的作用》文中指出骨髓间充质干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的成体干细胞,可以通过定向诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等,是目前骨再生医学和细胞治疗研究最多的理想种子细胞。在骨缺损的修复过程中,骨髓间充质干细胞内成软骨相关基因表达升高进而分化为软骨细胞,后期随着成骨细胞和破骨细胞的形成及血管长入,软骨基质逐步降解并被骨基质所替换。软骨细胞参与了骨缺损前期的修复过程,调控软骨形成的信号通路及相关因子不仅调控骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化,同时在成骨细胞分化过程中也发挥着重要的作用。对调控软骨形成的信号通路及相关因子在骨髓间充质干细胞骨向分化中的调控作用和研究现状进行了总结,以期为临床寻找更好的治疗骨缺损的方法提供理论依据和研究方向。
刘鹏[3](2021)在《含稀土碳酸化羟基磷灰石材料的制备及其应用于骨修复的实验研究》文中指出由口腔颌面部肿瘤、创伤、先天性疾病以及炎症导致的骨组织缺损是口腔诊疗中的常见问题,同时也是口腔医生修复骨缺损时所面临的难题之一。颌骨缺损严重影响咀嚼、吞咽、语言等重要生理功能,骨缺损治疗效果不佳或骨缺损修复失败都会直接影响患者的生活质量。口腔种植修复是目前牙列缺失和牙列缺损的主要治疗方式。充足的骨量是保证种植成功的关键之一,但在复杂的咬合关系及不同的口腔环境影响下,牙齿缺失患者往往伴有不同程度的缺牙区牙槽骨萎缩,易引发种植失败的问题。自体骨虽被临床认为是骨移植的“金标准”,但第二术区的开辟造成的创伤较为严重,来源限制,无法随意塑形,且自体骨移植后会发生一定的并发症。异体骨也受限于原料需求和排异反应等造成价格昂贵,并且存在修复风险。“骨组织工程”概念的提出即是针对以上问题,提出的以种子细胞、细胞因子、支架为媒介代替传统的骨移植的治疗方法。利用骨修复材料与种子细胞及细胞因子的相互配合,实现骨缺损的高水平修复是针对较大骨缺损量的骨缺损治疗的必由之路。近年来随着细胞工程和基因编辑技术的发展,组织工程中种子细胞和细胞因子的研究取得了很大进展,骨组织工程里可选用的支架体系种类繁多,但其各自存在的无法避免的问题使得其应用仍然非常受限。例如,金属支架的生物惰性、力学不匹配、高分子材料降解速率可控性差、引发排异反应、传统陶瓷支架的脆性、较差的骨传导性等问题。寻找合适的材料体系,设计并制备出符合不同成骨需求的个性化支架,是骨组织工程在口腔颌骨修复从理念走向临床应用的关键。羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)是骨骼和牙齿组织中天然存在的无机矿物成份,由HA制备成的支架一直被骨组织工程修复领域所推崇。然而,实验室中常用的HA主要是Ca10(PO4)6(OH)2及其它形式的磷酸钙材料,这与骨组织中的HA结晶性差、存在多种离子的梯度取代、在不同骨位置的成份差异等的实际需求相差较大。在文献里已报道的应用中,未掺杂的纯HA存在脆性大、降解效果差、与新生骨组织存在界面等问题,仍然是限制其作为骨组织工程支架的瓶颈之一。如何设计并制备出具有与人体骨组织中的矿物相类似的仿生HA骨粉材料,并且根据不同部位的骨缺损需求,个性化订制骨修复材料,是推动骨组织工程在临床应用的关键。在骨骼和牙齿中的HA主要为存在金属离子梯度掺杂的碳酸根取代的HA,碳酸根的质量分数为3-8wt%,其中碳酸根主要取代磷酸根的晶体学位置,称为B-型羟基磷灰石。碳酸根取代可以使HA结晶度变差,结构更松散,从而有利于破骨和骨重建,其松散的结构更利于与胶原及其它蛋白的结合从而降低材料的脆性,使之具有更强的塑性。因此,开发出碳酸根取代的HA材料,实现碳酸根的浓度可控取代,对于从支架方面推动骨组织工程应用于口腔临床骨缺损治疗具有重要意义。稀土元素由于其特征的光谱性质,可作为生物材料的荧光标记物,尤其是其离子半径与Ca2+离子接近,有很多文献已将其应用于骨植入材料在体内演化情况的荧光标记。另外,也有文献报道低剂量的稀土离子掺杂不但可以调节HA的结晶度,而且还能通过缓释的稀土离子激活钙通道,从而促进间充质细胞向成骨细胞的分化。基于以上关于HA应用于骨组织工程支架的研究现状,我们提出以碳酸根的可控取代和稀土的可控掺杂为源头,制备出系列具有不通碳酸根和稀土离子含量的B-型羟基磷灰石仿生骨粉材料,采用3D打印的方式,将其制备成支架,在细胞和动物水平上评价其促成骨效果,为骨组织工程研究提供更接近于骨组织的可个性化订制的支架体系,从而推动解决口腔颌骨修复所面临的的复杂的成骨环境和特异性成骨需求的问题。本论文主要分为(1)材料设计与可控制备,(2)细胞水平评价小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的增殖、分化与关键蛋白表达,(3)动物水平评价新生骨组织形成、钙化及新骨在支架中的生长等三个部分,分别简述如下:(1)碳酸化及稀土掺杂的HA仿生骨粉的制备根据在生理环境下的钙离子、磷酸根离子、碳酸根离子的热力学平衡条件,利用Pourbaix计算并得到了B-型羟基磷灰石的矿化条件及调节参数,制备出了系列碳酸根取代的羟基磷灰石(carbonated hydroxyapatite,CHA)纳米材料,通过控制反应条件和初始碳酸根浓度,可调节产物HA中碳酸根的比例。在此基础上,将与Ca2+离子具有相近离子半径但是不同电荷的稀土离子掺杂进入HA及CHA晶格中,从而制备出系列稀土离子掺杂的HA及CHA材料。结构分析表明具有三角形构象的碳酸根阴离子在取代具有四面体构象的磷酸根离子时,以相对于c-轴呈30 o角的方式扭曲叠加在磷酸根四面体的一个较长P-O键参与的面上。随着碳酸化程度的增加,纳米棒的长径比从3.6降为2.9。稀土离子的种类可以影响B-型羟基磷灰石纳米棒的形貌,并且碳酸化并不会影响稀土在HA中的配位环境及发光性质。采用该方法得到的B-型羟基磷灰石材料与人体骨组织中的矿化成份接近,并且稀土元素可以均匀地掺杂在材料的晶格中,既可以利用其特征荧光光谱标记其在体内的变化过程,又可以作为潜在的成骨细胞分化促进剂来激活成骨过程,以实现更好的促成骨效果。(2)细胞实验检测稀土掺杂及碳酸根取代的HA材料的生物学性能选取HA、1mol%铕(europium,Eu)掺杂的HA(Eu-HA)、1mol%铽(terbium,Tb)掺杂的HA(Tb-HA)、碳酸根取代度为3.3wt%的羟基磷灰石(CHA)、1mol%Eu-掺杂的CHA(Eu-CHA)、1mol%Tb-掺杂的CHA(Tb-CHA)六组材料为代表,研究了它们对于MC3T3-E1细胞的形态、增殖及成骨分化的影响。采用三维打印机将以上材料打印成支架,通过系统的细胞增殖、分化及蛋白表达测试,评价其作为骨修复材料应用于骨组织工程的潜力。六组材料都是潜在的骨修复材料,其中Tb的掺入可促进MC3T3-E1细胞的黏附增殖,尤其是Tb-CHA,在ALP染色和定量、茜素红染色、成骨相关蛋白表达实验结果中,表现出了最佳的促成骨效果,明显优于Tb-HA、HA和CHA;Eu的掺入减缓了MC3T3-E1细胞的增殖、黏附及成骨分化。(3)稀土掺杂及碳酸根取代的HA支架促大鼠颅骨缺损修复的实验研究通过以上研究,我们发现在体外促进成骨细胞增殖、黏附和成骨分化方面,掺杂Tb的材料优于掺杂Eu的材料,CHA优于HA,故我们采用大鼠颅骨缺损模型,分别植入HA支架、Tb-HA支架、CHA支架和Tb-CHA支架材料,评价骨缺损的修复。经影像学及HE染色分析结果可知,术后4周,各组对骨缺损的修复均不明显。术后8周,空白对照组缺损处仅表现为少量的新骨形成,HA组未见明显愈合,Tb-HA可见缺损部位实现了一部分修复,HE染色切片可见新生骨;与HA组相比,CHA组对骨缺损进行了一定程度的修复;Tb-CHA组显示出最强的成骨效果,且可降低局部炎症反应。综上所述,本论文从应用于骨组织工程修复骨缺损支架的源头出发,通过对HA材料矿化机制的深入分析,设计并制备出了系列与人体骨组织成份最为接近的CHA材料,并且将稀土离子选择性地标记在HA结构的Ca1晶体学位置;采用3D打印技术,将模型材料打印成支架,分别在细胞水平上和动物水平上,通过系列实验手段检测了材料对MC3T3-E1细胞的增殖、分化能力、蛋白表达水平和新骨生长情况的影响,发现了碳酸根取代和稀土Tb3+离子掺杂都可促进HA材料的骨缺损修复效果。本论文的研究将从源头上把以HA为主的骨组织工程支架材料引导为碳酸根取代的HA和异价金属离子掺杂HA,利用这种碳酸根和稀土离子调控的成骨性能差异,借助3D打印设备,根据不同位置的成骨需要个性化的设计支架,订制具有不同成骨需求的支架材料,从而为像口腔颌面部骨组织这种复杂的骨缺损疾病提供个性化的修复植入材料。
黄秋霞[4](2020)在《基于Cx43蛋白研究肾主骨生长发育理论与相关实验》文中进行了进一步梳理目的阐明肾主骨生长发育的中医理论内涵及现代医学研究情况。以Cx43蛋白及其介导的GJIC功能为切入点探讨肾主骨生长发育的理论实质,并通过大鼠BMSCs体外培养软骨向诱导分化实验,进行实验研究,论证左归丸对Cx43蛋白的调控作用及机制。方法1、理论研究:理论研究从理论渊源、理论内涵、理论运用角度,阐明祖国医学对“肾主骨生长发育”理论的认识。根据现代医学肾主骨生长发育研究情况,探讨其理论的现代医学实质。2、实验研究:SPF级2月龄SD雄性大鼠中药浓缩剂灌胃,通过血清药理学方法,制备体积分数为10%的含药血清培养液,进行共培养。采用密度梯度离心法制取BMSCs培养传代,加入诱导液进行成软骨诱导。实验分组:设立正常对照A组(培养基加入灌服生理盐水动物血清配制的诱导液)、左归丸含药血清B组(培养基加入左归丸含药血清配制的诱导液),左归丸含药血清+缝隙连接阻滞C组(同B组+AGA)。细胞分组处理后,每3d换液一次,诱导培养21d。培养过程中进行细胞形态学观察;第14天采用RT-PCR技术检测Cx43、GDF-5mRNA表达、免疫荧光染色检测Cx43蛋白表达,划痕染料标记示踪法检测细胞GJIC功能;第21天免疫组化学检测II型胶原蛋白的表达情况。各指标检测,行组间对比。所得数据均用sx?表示,用SPSS 17.0软件处理,单因素方差分析组间比较,采用t检验。P<0.O5表示差异有统计学意义。结果1、理论研究:肾主骨生长发育理论源于《内经》“肾主骨”理论,“肾主藏精,生髓养骨”是其理论核心。“气-血-精-髓”联系密切,它们是形成骨外在形态的重要物质成分。肾阴、肾阳均以肾中精气为基础,相互协调,维持骨正常的生长发育。肾化生精髓为骨生长发育提供物质基础;病理情况下肾虚影响骨骼的生长发育、骨骼的运动功能、产生各种骨骼疾病。现代医学研究证明中医肾与骨之间存在密切的联系,肾主骨生长发育的过程,具体体现为调控NEI网络、各种骨骼细胞、微环境间的动态平衡。其中BMSCs、Cx43蛋白及其介导的GJIC功能研究是肾主骨生长发育的实质研究中重要的内容。2、实验研究:软骨向分化诱导培养的细胞由初期的梭型,逐渐变成圆形或类圆形,胞浆丰富,分泌大量基质,分化为软骨细胞。左归丸含药血清能明显促进Cx43mRNA、GDF-5mRNA表达,B组与A组比较,P<0.O5。Cx43蛋白荧光反应沉积物主要在细胞膜表面、胞质、胞核附近区域表达,平均积分光密度值组间对比,左归丸含药血清能明显促进细胞Cx43蛋白表达,B组与与A组比较,P<0.O5。GJIC染料标记检测中,可见绿色荧光在划痕两侧扩散,荧光定量分析存在组间差异,B组与A组、C组比较,P<0.O5。细胞II型胶原蛋白表达于细胞外基质和细胞浆中,阳性反应物平均光密度,组间比较,差异具有统计学意义,B组与A组比较,P<0.O5。加用AGA后,Cx43 mRNA及蛋白、GDF-5mRNA表达无明显影响,但II型胶原蛋白表达减少,定量分析显示,B组显着高于A组、C组,P<0.O5。结论现代医学从多方面证明了中医肾与骨之间存在密切联系,Cx43蛋白可能是是肾主骨生长发育的重要物质基础,是肾精重要的功能层次体现。左归丸含药血清能增加BMSCs成软骨向诱导分化过程中Cx43蛋白的表达及GJIC功能,发育基因GDF-5在此过程中发挥协同作用。这可能是其促进BMSCs成软骨分化成熟过程中的重要机制。
吴应彬[5](2020)在《鸡胚蛋外敷疗法对股骨骨不连大鼠BMP-2、IGF-1影响的实验研究》文中提出目的:通过观察鸡胚蛋(孵化11-13天)外敷疗法对骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响,探索鸡胚蛋外敷对股骨骨不连大鼠骨缺损区修复的作用机制。方法:选取SD大鼠35只,空白组10只,造模25只,其中5只验证造模,剩余模型大鼠随机分为实验组(外敷鸡胚蛋)及对照组,每组10只。在干预后3,8周对实验组及对照组随机选取5只大鼠进行X射线检查,观察骨痂形成情况;HE染色光镜观察骨缺损区组织学情况;在干预后3,8周对空白组、对照组、实验组采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定骨折端软组织BMP-2、IGF-1含量变化。结果:X片检查:干预3周后,对照组大鼠骨折断端骨折线清晰,部分见骨膜反应,未见明显骨痂及骨桥;实验组大鼠骨折断端见少许骨痂阴影,骨折线较对照组模糊。干预8周后,对照组大鼠骨折断端骨折线明显,见少量骨痂形成,未见骨桥形成,髓腔未通;实验组大鼠骨折断端见骨桥形成,髓腔再通,骨折端塑性良好(P<0.01)。组织形态学检测:干预3周后,对照组及实验组骨组织均未见明显骨愈合,但实验组骨组织修复趋势比对照组好;干预8周后,所有对照组骨不连区域均未见愈合,实验组4例骨组织基本完整,仅1例表现为延迟愈合。BMP-2、IGF-1含量检测:干预3周后,实验组BMP-2及IGF-1浓度均较对照组、空白组显着升高(P<0.05);干预8周后,空白组BMP-2浓度较对照组高(P<0.05),但与试验组间浓度差异无统计学意义(P>0.05);8周后IGF-1浓度在3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:鸡胚蛋外敷可以促进股骨骨不连SD模型大鼠骨愈合,调节骨缺损区域软组织BMP-2及IGF-1浓度水平。
高飞[6](2020)在《AGEs通过Wnt/β-catenin通路抑制BMSCs成骨分化及PTH的干预作用》文中认为糖尿病及骨质疏松症都是发病率很高的慢性进展性疾病,二者均影响患者生活质量,是造成患者致残及致死的主要原因之一。晚期糖基化终末产物(AGEs)是体内各脏器蛋白质在非催化酶参与的Maillard反应中,形成的多种结构稳定而不可逆的化合物。高血糖时,晚期糖基化终末产物生成加速,是造成多种糖尿病慢性并发症及原发性骨质疏松症的主要成因。一定条件下,骨髓间充质干细胞(MSCs)可以诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。来源于链尿霉素诱导的糖尿病鼠的骨髓间充质干细胞更趋向于衰老,增殖及分化能力减弱。体外实验中,AGEs抑制MSCs的增殖、自我更新及分化。AGEs增加晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达,抑制MSCs的矿化及成熟。体内、外实验均证明AGEs-RAGE可从多个方面影响骨质量,是糖尿病致骨质疏松的主要成因之一。Wnt/β-catenin信号通路调节骨形成与骨分化,促进骨髓间充质干细胞成骨,抑制成脂。细胞外的Wnt糖化蛋白与细胞表面受体结刺激细胞内事件合后发生,最具代表性的Wnt信号通路是经典的Wnt/β–catenin信号通路。既往研究多集中于AGEs或RAGE作用于骨髓间充质干细胞株或成骨细胞系的机制研究,然而,AGEs在原代培养的骨髓间充质干细胞增殖中的作用及机制报道不多。本研究探讨晚期糖基化终末产物在原代培养骨髓间充质干细胞层面抑制成骨分化机制及甲状旁腺素(PTH)的干预作用及机制,为糖尿病致骨质疏松的防治提供理论基础。第一部分大鼠BMSCs的分离、培养与鉴定目的:诱导、纯化BMSCs,观察BMSCs的成骨细胞、成脂细胞分化能力,进行BMSCs表面标记物的鉴定。方法:取4周龄健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,脱颈处死后,分离双下肢,提取骨髓间充质干细胞,接种于培养瓶中,于37℃、5%CO2的孵育箱中孵育。采用1:2的比例传代培养,在倒置显微镜下观察第三代骨髓间充质干细胞贴壁细胞的形态改变以及生长变化;连续观察1周,通过血细胞计数板计数绘制细胞生长曲线;流氏细胞仪进行第三代BMSCs细胞表型鉴定;茜素红染色及油红O染色观察BMSCs成骨细胞、成脂细胞诱导分化能力。结果:原代BMSCs形态以梭形细胞为主,呈现放射状的集落细胞单位排列,伴随传代增加,细胞形态较前变短,且见伸出足突。细胞生长曲线提示传代培养的骨髓间充质干细胞符合正常细胞的生长特征且细胞生长能力良好。第三代骨髓间充质干细胞CD29,CD44,CD90表达为阳性,CD34,CD45表达隐阴性。骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化后,茜素红染色、Von Kossa染色呈阳性。骨髓间充质干细胞经成脂诱导分化后,油红O染色呈阳性。结论:全骨髓贴壁培养法培养骨髓间充质干细胞,其操作步骤简单,且满足大量分离、纯化、扩增要求。培养成熟的细胞符合骨髓间充质干细胞的生物学特征,经诱导分化后具有成骨及成脂分化潜能。第二部分Wnt/β–catenin信号通路介导AGEs抑制BMSCs成骨分化目的:AGEs通过Wnt/β-catenin信号通路介导抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化。方法:不同浓度AGEs(0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml)干预骨髓间充质干细胞细胞72小时,CKK-8法鉴定细胞增殖水平。选择0.2mg/ml AGEs和小牛血清白蛋白干预,细胞培养至3-7天CCK法测定细胞增殖情况,成骨液诱导第7天RT-PCR测定Col-Ⅰ及LRP5mRNA表达,Western-blot检测AGEs对BMSCs成骨分化过程中B-cateninm、OSX、RUNX2、RAGE表达量的影响,28天茜素红染色比较矿化结节形成差异。给予RAGE中和抗体阻断RAGE信号通路后观察AGEs对ALP、LRP5、RUNX2、OSX和RAGEmRNA及B-cateninm、OSX、RUNX2、RAGE蛋白表达的影响。给予Wnt/β-catenin通路促进剂Wnt3a后观察β-catenin、OSX、RAGE蛋白表达的影响。结果:在BMSCs培养基中分别加入不同浓度AGEs后与相应浓度的BSA组比较,BMSCs的OD值都有所降低,且在0.05mg/ml0.2mg/ml范围内(P<0.05)。0.2mg/ml的AGEs及相应浓度的BSA作用细胞3-7天,AGEs组较BSA组BMSCs的增殖情况有差异(P<0.05)。AGEs组作用于BMSCs28天后较对照组矿化结节的形成数量减少。选用含0.2mg/ml AGEs的成骨诱导液培养细胞7天后,Western-blot检测显示AGEs增加RAGE蛋白表达,抑制β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达(P<0.05)。给予RAGE中和抗体阻断RAGE信号通路后减少RAGE表达,增加ALP、Runx2、OSXmRNA表达(P<0.05)。Western-blot结果显示AGEs增加RAGE蛋白表达,抑制β-catenin蛋白表达(P<0.05)。给予Wnt/β-catenin通路促进剂Wnt3a后增加了β-catenin、OSX蛋白表达,抑制了RAGE蛋白表达(P<0.05)。28天茜素红染色比较矿化结节提示AGEs组明显抑制了钙结节的形成,而间断加入Wnt3a后可以部分对抗AGEs的成骨分化抑制作用。结论:Wnt/β–catenin信号通路介导AGEs抑制大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化。抗RAGE中和性抗体阻断AGEs与RAGE的结合后,骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的能力增强。Wnt3a促进Wnt/β–catenin通路作用,部分拮抗AGEs的成骨分化抑制作用。第三部分AGEs对BMSCs增值、成骨分化影响及PTH干预作用目的:在给予AGEs刺激因素的基础上,加入外源性的PTH,检测细胞增殖及分化,观察PTH是否可拮抗AGEs的作用。方法:AGEs作用于BMSCs7天后,采用RT-PCR检测ALP、COL-ⅠmRNA;Western Blot检测β-catenin、OSX、RUNX2、RAGE蛋白;AGEs作用于BMSCs 28天后,茜素红染色和Von Kossa染色检测AGEs对于BMSCs矿化的影响。PTH预处理BMSCs,给予AGEs作为干预因素,RT-PCR法检测ALP、COL-ⅠmRNA,Western Blot技术检测B-cateninm、OSX、RUNX2、RAGE蛋白,第28天茜素红染色,观察矿化结节形成情况。结果:PTH干预后,抑制了AGEs的作用,与AGEs组相比RAGE蛋白表达减少,β-catenin、OSX、RUNX2蛋白表达增高(P<0.05)。10-8mmol/L PTH干预后部分逆转AGEs成骨分化,定量分析茜素红染色钙结节的形成表明在28天AGEs抑制88%细胞矿化(P<0.05),PTH可以修复23%AGEs对骨髓间充质干细胞的负性作用(P<0.05)。结论:PTH通过Wnt/β–catenin信号通路部分逆转AGEs对BMSCs增殖、成骨分化的负性作用。
张萌萌,张秀珍,邓伟民,张智海,徐辉,葛继荣,王永福,黄宏兴,史晓林,张东伟,毛未贤,马倩倩,高远,郭郡浩,张红红,张晓梅,印平,赵方,晁爱军,张岩,李英华,李毅中,赵国阳,董红宇,吴岩,吴涤,邹军,周惠琼[7](2019)在《骨代谢生化指标临床应用专家共识(2019)》文中提出骨代谢生化指标包括钙磷代谢调节指标、骨形成标志物、骨吸收标志物、激素与细胞因子。骨代谢生化指标分别来源于骨、软骨、软组织、皮肤、肝、肾、小肠、血液及内分泌腺体等,是由成骨细胞或破骨细胞分泌的酶和激素,以及骨基质的胶原蛋白代谢产物或非胶原蛋白。骨代谢生化指标可及时反映骨转换状态,灵敏度高、特异性强,用于骨质疏松诊断分型、预测骨折风险、抗骨质疏松治疗疗效评价,以及代谢性骨病的鉴别诊断。并且在骨质疏松流行病学、发病机制、骨质疏松药物的研究方面具有重要的临床意义。
柴勇[8](2019)在《雌雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的比较及右归丸干预作用的研究》文中研究指明目的对比观察去卵巢大鼠与去睾丸大鼠骨微观结构和生物力学性能的异同点、以及右归丸对其干预作用的异同点,并从MAPK(Erk1/2)/c-Fos/AP-1信号通路的角度,部分揭示差异产生的机制。为中医治疗骨质疏松症提供进一步的实验依据,并进一步丰富“肾主骨”理论的科学内涵。方法选用同月龄(3月龄)SD大鼠156只,SPF级,雌雄各半。先将大鼠按照体重随机分为8个组,分别是:雌性基础组与雄性基础组,雌性空白对照组与雄性空白对照组,雌性假手术组与雄性假手术组,每组各12只;雌性造模组与雄性造模组,每组各42只。使用3%的戊巴比妥钠按照0.15ml/100g体重的剂量对雌、雄造模组大鼠进行麻醉,之后分别施以双侧卵巢切除手术或睾丸切除手术(去势);手术过程中,雌性造模组死亡5只,雄性造模组死亡4只;雌、雄假手术组大鼠的手术过程与雌、雄造模组大鼠相同,但是不切除卵巢或睾丸,仅切除卵巢或睾丸周围少许的脂肪组织。在进行上述手术的前一天,将雌、雄基础组大鼠麻醉后处死,取双侧股骨,用于Micro CT骨组织形态指标与电子万能试验机骨生物力学指标的检测,将测得的数据作为其它各分组实施处理因素之前的基础值。手术3个月后,将雌性造模组37只大鼠按照体重再随机分为3个组,分别是:卵巢切除组(OVX组)13只,OVX+戊酸雌二醇组(雌激素组,即阳性对照组)12只,OVX+右归丸组(雌性右归丸组)12只;将雄性造模组38只大鼠按照体重再随机分为3个组,分别是睾丸切除组(ORX组)13只,ORX+甲睾酮组(雄激素组,即阳性对照组)13只,ORX+右归丸组(雄性右归丸组)12只。分组结束后,对各给药组大鼠进行灌胃给药:雌性右归丸组与雄性右归丸组给予右归丸水煎液,给药浓度、体积分别为:1.024g生药/ml、1ml/100g体重,给药剂量为10.24g生药/kg体重(此剂量是以往研究已被证实的有效剂量,相当于成人临床用药的等效剂量,为成人临床用量的6.5倍);雌激素组大鼠给予戊酸雌二醇(E2)药液,给药浓度,体积分别为:0.0184mg/ml、1ml/100g体重,给药剂量为0.184mg/kg体重;雄激素组大鼠给予甲睾酮(T)药液,给药浓度、体积分别为:0.184mg/ml、1ml/100g体重,给药剂量为1.84mg/kg体重。以上各组给药,一天一次,连续6天,休息1天后,再连续给药6天,如此连续给药3个月。雌、雄空白对照组,雌、雄假手术组,OVX组与ORX组则按照上述方法给予等体积的纯净水进行灌胃。灌胃期间,每周对大鼠进行一次体重称量,根据体重变化调整给药体积。给药结束后,将实验各组大鼠麻醉后迅速处死,取双侧股骨,用于Micro CT骨组织形态指标与电子万能试验机骨生物力学指标的检测;取胫骨,制作脱钙骨冰冻切片,用于MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1三者蛋白表达的检测。采用SPSS 20.0软件进行统计学处理。实验结果以均数±标准差(x±s)表示。若数据呈正态分布,则采用单因素方差分析(ANOVA)进行处理;方差齐性的,组间两两比较采用LSD检验;方差不齐的,采用Dunnett’s T3(3)检验。若数据呈非正态分布,则采用非参数检验Kruskal-Wallis单因素ANOVA(k样本)(W)进行处理;组间两两比较,采用其项下的Stepwise step-down检验。结果1雌雄去势大鼠股骨松质骨形态结构的比较及右归丸对其的干预作用1.1雌雄去势大鼠股骨松质骨BV/TV变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨松质骨的BV/TV大幅度增加;而OVX组和ORX组的呈现负增长,即大幅度的减少,分别与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的BV/TV均呈现负增长,与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异;但其减少的程度要明显低于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组BV/TV的减少程度明显大于ORX组;而雌性右归丸组的减少程度明显小于雄性右归丸组。1.2雌雄去势大鼠股骨松质骨Conn.Dn变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨松质骨的Conn.Dn大幅度增加;而OVX组和ORX组的呈现负增长,即大幅度的减少,分别与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的Conn.Dn均呈现负增长,与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异;但其减少的程度要明显低于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组Conn.Dn的减少程度明显大于ORX组;而雌性右归丸组的减少程度明显小于雄性右归丸组。1.3雌雄去势大鼠股骨松质骨Cb.C变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨松质骨的Cb.C呈现负增长,即减少;而OVX组和ORX组的增加,分别与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的Cb.C也增加,与它们相应的假手术组比较,具有显着性差异;但其增加的程度要明显小于它们相应的OVX组和ORX组。与ORX组比较,OVX组Cb.C的增加程度明显要大;雌性右归丸组的Cb.C较雄性右归丸组虽有减少的趋势,但无统计学意义。1.4雌雄去势大鼠股骨松质骨DA的比较及右归丸对其的干预作用OVX组、雌激素组和雌性右归丸组大鼠股骨松质骨DA显着低于雌性假手术组;而雌激素组和雌性右归丸组的DA显着高于OVX组。与雄性假手术组比较,ORX组、雄激素组和雄性右归丸组的DA明显降低;而与ORX组比较,雄激素组、雄性右归丸组的DA均显着提高。ORX组的DA明显高于OVX组;雄性右归丸组的与雌性右归丸组比较,无显着性差异。1.5雌雄去势大鼠股骨松质骨Tb.Pf的比较及右归丸对其的干预作用与雌性假手术组大鼠股骨松质骨Tb.Pf 比较,OVX组、雌激素组和雌性右归丸组的皆明显提高;而与OVX组比较,雌激素组和雌性右归丸组的Tb.Pf皆显着降低。ORX组、雄激素组和雄性右归丸组的Tb.Pf较雄性假手术组的均明显提高,而雄激素组和雄性右归丸组的Tb.Pf较ORX组的均明显降低。ORX组的Tb.Pf显着低于OVX组;雄性右归丸组的与雌性右归丸组比较,无显着性差异。2雌雄去势大鼠股骨皮质骨生物力学性能的比较及右归丸对其的干预作用大鼠股骨最大载荷(ML)、断裂强度(BS)和弹性模量(EM)变化率能够反映股骨皮质骨生物力学性能情况。2.1雌雄去势大鼠股骨皮质骨ML变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌、雄假手术组大鼠股骨皮质骨ML大幅度增加;而OVX组和ORX组的ML虽也有增加,但增加的程度要显着小于它们相应的假手术组。雌激素组、雌性右归丸组ML的增加程度明显大于OVX组,而与雌性假手术组比较,差异不明显。雄激素组、雄性右归丸组ML的增加程度明显大于ORX组,但明显小于雄性假手术组。OVX组ML的增加程度明显小于ORX组;雌性右归丸组的亦明显小于雄性右归丸组。2.2雌雄去势大鼠股骨皮质骨BS变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌、雄性假手术组大鼠股骨皮质骨BS大幅度增加;而OVX组和ORX组的呈现负增长,即减少,分别与它们相应的假手术组比较,差异显着。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的BS均增加,增加的程度与它们相应的假手术组比较,无显着性差异,但明显大于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组BS的减少程度明显大于ORX组;而雌性右归丸组的与雄性右归丸组比较,无显着性差异。2.3雌雄去势大鼠股骨皮质骨EM变化率的比较及右归丸对其的干预作用在实验结束后,雌性假手术组和雄性假手术组大鼠股骨皮质骨EM大幅度增加;而OVX组和ORX组的EM呈现负增长,即减少,与它们相应的假手术组比较,具有明显差异。雌激素组、雌性右归丸组以及雄激素组、雄性右归丸组的EM均增加,增加的程度与它们相应的假手术组比较,无显着性差异,而明显大于它们相应的OVX组和ORX组。OVX组EM减少的程度与ORX组比较,无显着性差异;雌性右归丸组EM增加的程度与雄性右归丸组比较,亦无显着性差异。3雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用3.1雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erkl/2)蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用OVX组大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度显着高于雌性假手术组,雌激素组和雌性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度与雌性假手术组比较,无显着性差异;与OVX组比较,雌激素组和雌性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度显着减少。ORX组MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度与雄性假手术组的相比,明显增加,雄激素组和雄性右归丸组的与之相比,无显着性差异;与ORX组比较,雄激素组和雄性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度明显减少。ORX组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度与OVX组的比较,明显减少。雄性右归丸组的MAPK(Erk1/2)蛋白表达阳性密度明显高于雌性右归丸组。3.2雌雄去势大鼠胫骨骨髓中c-Fos蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用与雌性假手术组比较,OVX组大鼠胫骨骨髓中c-Fos蛋白表达阳性密度显着增加,雌激素组和雌性右归丸组的无显着性变化;与OVX组比较,雌激素组和雌性右归丸组的c-Fos蛋白表达阳性密度显着减少。ORX组和雄性右归丸组的c-Fos蛋白表达阳性密度较雄性假手术组的明显增加,雄激素组的与雄性假手术组比较,无显着性差异;与ORX组比较,雄激素组和雄性右归丸组的c-Fos蛋白表达阳性密度皆明显减少。ORX组的c-Fos蛋白表达阳性密度较OVX组显着减少。雄性右归丸组的较雌性右归丸组的明显增加。3.3雌雄去势大鼠胫骨骨髓中AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用OVX组大鼠胫骨骨髓中AP-1蛋白表达阳性密度显着高于雌性假手术组,雌激素组和雌性右归丸组的与雌性假手术组比较,无显着性差异;雌激素组、雌性右归丸组的AP-1蛋白表达阳性密度显着低于OVX组。与雄性假手术组的AP-1蛋白表达阳性密度比较,ORX组、雄性右归丸组的明显增加,雄激素组的无显着性差异;与ORX组的AP-1蛋白表达阳性密度比较,雄激素组和雄性右归丸组的均明显减少。ORX组的AP-1蛋白表达阳性密度显着低于OVX组。雄性右归丸组的则显着高于雌性右归丸组。以上指标,雌性假手术组与雌性空白对照组比较以及雄性假手术组与雄性空白对照组比较,均无显着性差异,从而排除了手术因素对实验的影响。结论(1)雌、雄大鼠去势后,均发生了骨质疏松症;但两者在微观结构方面存在明显差异,体现在:雌性去势大鼠股骨松质骨的BV/TV、Conn.Dn的减少程度以及Cb.C的增加程度明显大于雄性去势大鼠;DA明显低于而Tb.Pf明显高于雄性去势大鼠。右归丸对去势所致的雌、雄大鼠骨质疏松症均具有明显的治疗作用,但在微观结构的改善方面存在一定的差异,体现在:右归丸对雌性去势大鼠BV/TV、Conn.Dn的改善程度要优于对雄性去势大鼠的改善程度;而对DA、Cb.C、Tb.Pf的改善作用,两者无明显差异。(2)雌、雄大鼠去势后,皮质骨的生物力学性能均明显下降,但存在明显差异,体现在:雌性大鼠最大载荷、断裂强度的下降程度明显大于雄性大鼠,而弹性模量雌、雄之间无明显差异。右归丸对此均具有明显的增加作用,但存在一定的差异,体现在:右归丸对雄性去势大鼠最大载荷的增加程度要明显大于雌性去势大鼠;而对断裂强度、弹性模量的增加作用,两者无明显差异。(3)MAPK(Erk1/2)/c-Fos/AP-1信号通路在骨质疏松症发生中起重要作用。雌、雄大鼠去势后,骨髓(松质骨部分)中的MAPK(Erk1/2)、c-Fos和AP-1蛋白表达明显增强,而雌性去势大鼠的这三个关键因子的表达明显强于雄性去势大鼠,这是去势所致雌、雄大鼠松质骨在微观结构方面存在性别差异的机制之一。右归丸能通过抑制这一通路达到治疗去势所致骨质疏松症的作用;其对雌性去势大鼠的抑制作用要明显强于雄性去势大鼠,这是右归丸对雌性去势大鼠松质骨微观结构的改善程度要优于对雄性去势大鼠的机制之一。
郝媌[9](2018)在《基于和络泄浊,培土宁风法探讨和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制》文中研究表明目的提出慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱“肾络瘀滞,脾虚风动”的中医病机理论假说,探讨以“和络泄浊,培土宁风”法为治则的和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的干预机制及效验机理。方法采用5/6肾切除及高磷饮食制备慢性肾衰钙磷代谢紊乱大鼠模型。65只SPF级雄性Wistar大鼠按抽签法随机分为正常组(n=8只)、假手术组(n=8只)和模型组(n=49只)。将造模4周后存活大鼠60只随机分为如下7组进行药物干预:A.正常组(n=8);B.假手术组(n=8);C.模型组(n=10);D.骨化三醇西药组(n=8);E.中药低剂量组(n=8);F.中药中剂量组(n=9);G.中药高剂量组(n=9),持续给药8周。动态观察大鼠一般情况,记录精神状态、摄食、活动度、毛色、尿量、粪质与体重的动态变化。HE和PAS染色观察肾组织形态学改变。检测各组血清肌酐(Creatinine,Scr)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白定量、血钙(Ca2+)、血磷(P3+)、血清甲状旁腺激素(Parathyroid hormone,PTH)血清碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)等。酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清Ⅰ型前胶原N端前肽(N-terminal propeptide of type 1 precollagen,PINP)水平。取各组大鼠肾组织通过光镜观察其病理组织学变化。免疫组化法分别检测大鼠肾脏Klotho蛋白、骨形态发生蛋白-7(Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7)、Wnt4、β-catenin及骨钙素(Osteocalcin,OC)、PINP蛋白表达水平;实时定量PCR检测大鼠肾脏Klotho、BMP-7、Wnt4、β-catenin基因表达情况;Western blot检测大鼠肾脏Klotho蛋白、BMP-7及骨组织成纤维细胞生长因子23(Fibroblast Growth Factor-23,FGF23)、OC的蛋白表达水平。结果1.模型组大鼠肾小球结构紊乱、系膜细胞增生,基质增多,部分肾小球硬化,肾小管代偿性扩张或灶状萎缩,肾间质内有大量炎性细胞浸润及局灶性纤维组织增生,而和肾络宁风颗粒中药中、高剂量组肾小球增生硬化程度及肾间质内炎性细胞浸润情况较模型组有改善。2.与模型组相比,和肾络宁风颗粒中高剂量组血Scr、BUN等水平明显降低,血Ca2+水平明显上升,体重增加,血PTH、ALP及PINP水平均有下降(P<0.01);与西药组比较,和肾络宁风颗粒中高剂量组在降低血Scr、BUN和P3+水平有统计学差异(P<0.05),在提高血Ca2+、降低血PTH、ALP及PINP水平方面二者具有同等疗效(P>0.05)。3.和肾络宁风颗粒中剂量组Wnt、β-catenin蛋白表达明显下降,基因表达下调,较模型组有差异(P<0.01),与西药组亦有统计学意义(P<0.05)。4.和肾络宁风颗粒中高剂量组Klotho蛋白及BMP-7基因表达上调,蛋白表达增加,FGF23蛋白和OC和PINP蛋白表达均明显降低,与模型组比较有统计意义(P<0.05);与西药组对比,和肾络宁风颗粒在降低FGF23蛋白表达方面差异显着(P<0.01),上调BMP-7蛋白与基因表达(P<0.05),在调控Klotho蛋白及基因表达的上调和对OC、PINP蛋白表达的抑制作用方面两者疗效相当(P>0.05)。结论和肾络宁风颗粒能够减轻慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱大鼠肾小球硬化等病理损害,改善体质状况;能够有效降低血肌酐、尿素氮,提升血钙水平,控制血磷、PTH及ALP,提高肾功能、改善矿物质代谢紊乱,且与中药浓度剂量呈一定正相关性。和肾络宁风颗粒能够抑制FGF23高表达,上调Klotho蛋白及基因表达,以调控Klotho/FGF23轴的动态平衡。并通过降低血P3+、PTH及SHPT水平,及协同促进BMP-7蛋白及基因表达等多种途径影响Wnt/β-catenin信号转导通路的活性,下调β-catenin,有效阻断β-catenin的靶基因转录,影响Wnt/β-catenin信号转导通路的激活。以进一步控制ALP的活性,降低OC、PINP异常表达和血清PINP浓度,从而抑制成骨细胞的异常分化和骨重建,调节骨代谢,发挥生物学效应。和肾络宁风颗粒发挥以调控Klotho/FGF23轴为主的综合作用改善慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱及继发骨性营养不良,在一定程度上延缓病情进展。
刘金豹[10](2018)在《基于Wnt/β-Catenin信号通路的补肾活血胶囊治疗激素性股骨头坏死临床与实验研究》文中研究指明目的:1.通过临床疗效评价方法和影像学评价方法,观察补肾活血胶囊治疗激素性股骨头坏死的临床疗效。2.通过补肾活血胶囊对SD大鼠激素性股骨头坏死组织和体内外骨髓间充质干细胞的干预,以及检测Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子(Wnts、β-Catenin)及其下游促增殖(CyclinD1)、成骨-成脂分化(Runx2、Osterix、PPARγ)、血管内皮生长因子(VEGF)等特异性转录因子的基因和蛋白表达情况,探讨补肾活血胶囊基于Wnt/β-Catenin信号通路促进激素性股骨头坏死骨修复机制。方法:1.临床研究:2015年9月至2016年10月在山东中医药大学附属医院骨科门诊就诊的ARCO分期I、II期激素性股骨头坏死患者80例,随机分为对照组和治疗组,每组40例。对照组给与仙灵骨葆治疗,治疗组给与补肾活血胶囊治疗,分别于治疗前及治疗后3个月、6个月、9个月和12个月采用临床评价方法(Harris量表、WOMAC量表)和影像学评价方法(股骨头坏死面积评价、股骨头塌陷评价法)及肝肾功能检测评估补肾活血胶囊治疗早期激素性股骨头坏死的临床疗效及药物安全性。2.动物实验研究:1)在体实验:120只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和治疗组,每组各40只。模型组给予地塞米松磷酸钠臀肌注射。治疗组同时给于补肾活血汤灌胃干预,其它两组采用生理盐水干预。6周后各组随机取5只大鼠股骨头用于HE染色动态观察各组股骨头变化及造模情况。12周后给予所有大鼠处死获取标本(血液、股骨头组织、骨髓间充质干细胞)用于检测。通过血生化检测(TC、TG、Ca、ALP)及HE染色观察各组股骨头坏死及修复情况;通过RT-PCR和Western Blot检测股骨头组织上述相同时间点Wnt/β-Catenin信号通路主要因子及其下游成骨-成脂、成血管分化等特异性转录因子(Wnt10b、β-Catenin、Runx2、Osterix、PPAR-γ、VEGF)基因和蛋白表达水平;通过CCK-8、茜素红染色、油红O染色、ALP定量检测三组大鼠P3代骨髓间充质干细胞增殖功能变化和经典成骨、成脂诱导剂诱导后rBMSCs成骨-成脂分化功能变化情况,并通过RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子及其下游促增殖、成骨-成脂分化特异性转录因子(Wnt3a、β-Catenin、CyclinD1、Runx2、Osterix、PPAR-γ)蛋白和基因表达水平,从组织、细胞、蛋白、核酸层面揭示和探讨补肾活血胶囊基于Wnt/β-Catenin信号通路促进激素性股骨头坏死骨修复机制。2)离体实验:采用体外分离、培养、纯化、鉴定SD大鼠BMSCs,P3代用于实验,给予10-6mol/L地塞米松磷酸钠及不同梯度浓度的补肾活血汤含药血清干预分为对照组、低浓度含药血清组、中浓度含药血清组、高浓度含药血清组、激素组、低浓度含药血清+激素组、中浓度含药血清+激素组、高浓度含药血清+激素组八组,通过CCK-8、茜素红染色、ALP定量检测、RT-PCR、Western Blot等方法检测rBMSCs增殖、成骨分化情况及Wnt/β-Catenin信号通路核心蛋白、成骨-成脂分化特异性转录因子(β-Catenin、Runx2、PPAR-γ)基因和蛋白表达水平,进一步揭示和探讨补肾活血胶囊基于Wnt/β-Catenin信号通路对体外大剂量激素干预的rBMSCs成骨-成脂分化功能影响。结果:1.临床实验结果:Harris量表、WOMAC量表评分结果显示两组患者在治疗前差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗后组间比较:治疗后3个月差异无统计学意义(P>0.05);随后6个月、9个月及12个月差异有统计学意义(P<0.05);组内比较:对照组、治疗组患者治疗后3个月、6个月、9个月、12个月较治疗前比较结果差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者在治疗前MRI计算坏死面积结果差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者在治疗后3个月、6个月、9个月、12个月组间及组内比较MRI计算坏死面积结果差异无统计学意义(P>0.05)。股骨头塌陷评价法结果显示至实验结束治疗组21髋出现股骨头塌陷;对照组31髋出现股骨头塌陷,结果差异有统计学意义(P<0.05)。股骨头塌陷曲线结果显示,治疗组的股骨头中位塌陷时间为9个月大于对照组6个月,Log-rank检验P<0.05,有统计学意义。肝功能、肾功能检测无明显损害。2.动物实验结果:1)在体实验结果:(1)血生化指标检测结果模型组与对照组相比,血TC、TG上调明显,血Ca、ALP下调明显,有统计学意义(P<0.05);治疗组与模型组相比,血TC、TG下调明显,血Ca、ALP上调明显,有统计学意义(P<0.05)。(2)股骨头组织检测结果HE染色结果:模型组与对照组相比,骨小梁面积减少、脂肪空泡面积和空骨陷窝率增加,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组与模型组相比,骨小梁面积增加,脂肪空泡面积和空骨陷窝率降低,差异均有有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western Blot结果:模型组与对照组相比,Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子及下游成骨、成血管特异性转录因子(Wnt10b、β-Catenin、Runx2、Osterix、VEGF)的基因和蛋白表达下调(P<0.05);成脂特异性转录因子(PPAR-γ)的基因和蛋白表达上调(P<0.05)。治疗组与模型组相比,Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子及下游成骨、成血管特异性转录因子(Wnt10b、β-Catenin、Runx2、Osterix、VEGF)的基因和蛋白表达上调(P<0.05);成脂特异性转录因子(PPAR-γ)的基因和蛋白表达下调(P<0.05)。(3)三组大鼠BMSCs功能检测结果体外培养表面抗原鉴定结果:三组大鼠P3代rBMSCs表面抗原FITC单染结果表明,模型组各表面抗原(CD45、CD73、CD90、CD105)较对照组差异有统计学意义(P<0.05);治疗组各表面抗原较模型组差异有统计学意义(P<0.05)。增殖情况检测结果:模型组与对照组相比,CCK-8检测细胞数量增殖结果及RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路主要相关蛋白及下游细胞周期蛋白(Wnt3a、β-Catenin、CyclinD1)基因和蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组与模型组相比,CCK-8检测细胞数量增殖结果及RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路主要相关蛋白及下游细胞周期蛋白(Wnt3a、β-Catenin、CyclinD1)基因和蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。三组rBMSCs体外成骨-成脂诱导后检测结果:模型组与对照组相比,茜素红染色及定量、ALP定量检测结果及RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子及下游成骨特异性转录因子(Wnt10、β-Catenin、Runx2、Osterix、)基因和蛋白表达下调;油红O染色及定量、RT-PCR及Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路下游成脂特异性转录因子(PPAR-γ)基因和蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组与模型组相比,茜素红染色及定量、ALP定量检测结果及RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子及下游成骨特异性转录因子(Wnt10、β-Catenin、Runx2、Osterix、)基因和蛋白表达上调;油红O染色及定量、RT-PCR及Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路下游成脂特异性转录因子(PPAR-γ)基因和蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。2)离体实验结果:(1)CCK-8测增殖率结果:八组细胞增殖曲线除激素组外,其余七组细胞生长曲线呈“S”型。不同浓度的补肾活血方含药血清处理的rBMSCs增殖能力均强于对照组,不同浓度的补肾活血方含药血清和10-6mmol/L地塞米松磷酸钠干预的rBMSCs增殖能力均强于激素组(P<0.05),并随浓度梯度的增高而增强。(2)茜素红染色及定量、ALP定量检测结果:不同浓度的补肾活血方含药血清处理的rBMSCs茜素红染色及定量、ALP定量检测结果均高于对照组,不同浓度的补肾活血方含药血清和10-6mmol/L地塞米松磷酸钠干预的rBMSCs茜素红染色及定量、ALP定量检测结果均高于激素组(P<0.05),并随浓度梯度的增高而增高。(3)RT-PCR及Western Blot结果:不同浓度的补肾活血方含药血清处理的rBMSCs经RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路核心蛋白及下游成骨分化特异性转录因子(β-Catenin、Runx2)基因和蛋白表达均高于对照组,成脂分化特异性转录因子(PPAR-γ)基因和蛋白表达均低于对照组;不同浓度的补肾活血方含药血清和10-6mmol/L地塞米松磷酸钠干预的rBMSCs经RT-PCR、Western Blot检测Wnt/β-Catenin信号通路核心蛋白及下游成骨分化特异性转录因子(β-Catenin、Runx2)基因和蛋白表达均高于激素组,成脂分化特异性转录因子(PPAR-γ)基因和蛋白表达均低于激素组。差异均有统计学意义(P<0.05),并随浓度梯度的递变而递变。结论:1.临床研究结果表明,补肾活血胶囊对激素性股骨头坏死疗效显着,可以明显改善SONFH患者临床症状并延缓股骨头坏死塌陷时间,并无明显肝肾功能损害。2.动物实验血生化及HE染色结果表明补肾活血胶囊能够促进SD大鼠激素性股骨头坏死骨组织修复。3.补肾活血胶囊促进SD大鼠激素性股骨头坏死组织骨修复机制可能与调控体内Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子(Wnt10b、β-Catenin)及下游成骨-成脂分化相关特异性转录因子和血管内皮生长因子(Runx2、Osterix、PPAR-γ、VEGF)的基因和蛋白表达有关。4.补肾活血胶囊促进体内外大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化,抑制成脂分化机制也可能与调控Wnt/β-Catenin信号通路主要相关因子(Wnts、β-Catenin)及下游成骨-成脂分化相关特异性转录因子和细胞周期蛋白D1(Runx2、Osterix、PPAR-γ、CyclinD1)的基因和蛋白表达有关。
二、甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞转化生长因子-β_1基因转录的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞转化生长因子-β_1基因转录的影响(论文提纲范文)
(2)调控软骨形成的信号通路及相关因子在骨髓间充质干细胞骨向分化中的作用(论文提纲范文)
1 软骨形成相关转录因子 |
1.1 Sox9 |
1.2 Runx2 |
2 软骨形成相关生长因子 |
2.1 骨形态发生蛋白 |
2.2 转化生长因子β |
2.3 成纤维细胞生长因子 |
3 软骨形成相关信号通路 |
3.1 Ihh/PTHr P通路 |
3.2 Notch通路 |
3.3 Wnt/β-catenin通路 |
4 结论与展望 |
4.1 结论 |
4.2 展望 |
(3)含稀土碳酸化羟基磷灰石材料的制备及其应用于骨修复的实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
abstract |
缩略词表 |
第一章 绪论 |
1.1 口腔颌面部骨的形成和缺损修复 |
1.1.1 口腔颌面部骨的形成与自修复过程 |
1.1.2 口腔颌面部骨缺损疾病的治疗方法 |
1.2 口腔颌面部骨组织工程概述 |
1.2.1 骨组织工程中的种子细胞 |
1.2.2 骨组织工程中常用的生长因子及其功能简介 |
1.2.3 骨组织工程中常用的支架体系 |
1.3 骨缺损修复材料简介 |
1.3.1 骨修复材料的研究现状及性能要求 |
1.3.2 天然及人工合成的骨修复材料 |
1.3.3 骨组织中的羟基磷灰石 |
1.3.4 用于骨再生的支架材料 |
1.3.5 稀土在生物医学材料中的作用 |
1.4 本论文的设计思路和技术路线 |
1.4.1 设计思路 |
1.4.2 技术路线 |
第二章 碳酸化及稀土掺杂的羟基磷灰石仿生骨粉的制备 |
2.1 引言 |
2.2 实验仪器与试剂 |
2.2.1 仪器 |
2.2.2 试剂 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 钙-磷-碳酸体系的热力学平衡相图计算 |
2.3.2 碳酸化羟基磷灰石纳米骨粉的制备 |
2.3.3 碳酸化羟基磷灰石纳米骨粉的结构表征 |
2.3.4 碳酸根取代度的确定 |
2.3.5 形貌与化学组成分析 |
2.3.6 碳酸化羟基磷灰石纳米骨粉的稀土荧光标记检测 |
2.4 结果与讨论 |
2.4.1 模拟生物矿化环境下的钙-磷-碳酸根热力学平衡相图与矿化因素 |
2.4.2 碳酸化羟基磷灰石材料的结构 |
2.4.3 碳酸化及矿化环境调控对羟基磷灰石形貌的影响 |
2.4.4 碳酸根取代度的确定 |
2.4.5 稀土离子标记的碳酸化羟基磷灰石可控制备及光谱性质 |
2.5 本章小结 |
第三章 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞实验检测稀土掺杂及碳酸根取代的羟基磷灰石材料的生物学性能 |
3.1 引言 |
3.2 实验部分 |
3.2.1 实验试剂 |
3.2.2 实验仪器 |
3.3 实验方法 |
3.3.1 MC3T3-E1 细胞培养 |
3.3.2 使用荧光染色观察细胞形态 |
3.3.3 使用CCK-8 法检测细胞增殖 |
3.3.4 使用活细胞/死细胞染色检测细胞的生长活性 |
3.3.5 使用碱性磷酸酶染色检测ALP活性 |
3.3.6 使用ALP定量检测试剂盒检测ALP活性 |
3.3.7 茜素红染色检测细胞形成的钙结节 |
3.3.8 Western blot检测各组材料对细胞成骨分化的影响 |
3.3.9 使用三维打印机打印支架 |
3.3.10 支架的形貌及成份表征 |
3.3.11 扫描电镜检测细胞在支架上的黏附 |
3.3.12 使用CCK-8 检测细胞在支架上的增殖 |
3.3.13 使用活细胞/死细胞染色检测细胞在支架上的生长活性 |
3.3.14 使用ALP染色检测支架上细胞的ALP活性 |
3.3.15 统计学分析 |
3.4 结果与讨论 |
3.4.1 MC3T3-E1 细胞的培养 |
3.4.2 各组材料浸提液对细胞形态的影响 |
3.4.3 各组材料浸提液对细胞增殖的影响 |
3.4.4 各组材料浸提液对细胞生长活性的影响 |
3.4.5 各组材料浸提液对细胞ALP染色的影响 |
3.4.6 各组材料浸提液对细胞ALP活性影响的定量分析 |
3.4.7 各组材料浸提液对细胞体外矿化的影响 |
3.4.8 各组材料浸提液对细胞分泌成骨特异性蛋白的影响 |
3.4.9 三维打印支架的宏观外形 |
3.4.10 三维打印支架的微观形貌、组分表征 |
3.4.11 细胞在各组三维打印支架上的黏附 |
3.4.12 细胞在各组三维打印支架上的增殖 |
3.4.13 细胞在各组三维打印支架上的生长活性 |
3.4.14 细胞在各组三维打印支架上的ALP活性 |
3.5 本章小结 |
第四章 稀土掺杂及碳酸根取代的羟基磷灰石支架促大鼠颅骨缺损修复的实验研究 |
4.1 引言 |
4.2 实验材料 |
4.2.1 试剂 |
4.2.2 仪器 |
4.3 实验方法 |
4.3.1 大鼠颅骨缺损模型建立及分组 |
4.3.2 术后大体观察 |
4.3.3 术后影像学观察 |
4.3.4 组织学观察染色 |
4.3.5 Masson染色 |
4.3.6 体内生物安全性评价 |
4.4 结果与讨论 |
4.4.1 大鼠临界骨缺损模型的建立 |
4.4.2 动物处死后标本的获取 |
4.4.3 动态Micro-CT观察缺损颅骨的修复 |
4.4.4 术后组织学检测 |
4.4.5 Masson染色表征 |
4.4.6 支架促血管再生 |
4.4.7 支架的体内安全性结果分析 |
4.4.8 支架促成骨性能讨论 |
4.5 本章小结 |
第五章 结论与展望 |
5.1 本论文的主要创新点 |
5.2 全文结论 |
5.3 展望 |
参考文献 |
作者简介及科研成果 |
致谢 |
(4)基于Cx43蛋白研究肾主骨生长发育理论与相关实验(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略词表 |
前言 |
第一部分 理论研究 |
1 祖国医学对肾主骨生长发育理论的认识 |
1.1 理论渊源 |
1.2 理论内涵 |
1.3 理论运用 |
2 现代医学肾主骨生长发育相关研究 |
2.1 肾主骨生长发育研究概况 |
2.2 BMSCs与肾主骨生长发育研究 |
2.3 Cx43 与肾主骨生长发育研究 |
第二部分 实验研究 左归丸对大鼠BMSCs成软骨分化过程中Cx43 表达的影响研究 |
1 材料与方法 |
1.1 中药 |
1.2 含药血清制备 |
1.3 主要仪器与试剂 |
1.4 大鼠BMSCs分离培养 |
2 指标检测 |
2.1 培养细胞形态学观察 |
2.2 Cx43、GDF-5mRNA表达检测 |
2.3 Cx43 蛋白表达及定量检测 |
2.4 细胞GJIC功能检测 |
2.5 Ⅱ型胶原蛋白表达 |
2.6 统计学处理 |
3 结果 |
3.1 培养细胞形态学观察 |
3.2 Cx43、GDF-5mRNA表达结果 |
3.3 Cx43 蛋白表达结果 |
3.4 细胞GJIC功能检测结果 |
3.5 Ⅱ型胶原蛋白表达结果 |
讨论 |
1 左归丸选方意义 |
1.1 左归丸方义 |
1.2 左归丸与骨发育相关研究 |
2 左归丸对BMSCs成软骨分化及Cx43 表达的影响 |
3 左归丸对Cx43 表达影响的相关机制研究 |
3.1 GDF-5 与骨发育的相关研究 |
3.2 Cx43与GDF-5 协同促进软骨发育 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
1 综述 肾主骨生长发育理论相关研究进展 |
参考文献 |
2 发表论文 |
致谢 |
(5)鸡胚蛋外敷疗法对股骨骨不连大鼠BMP-2、IGF-1影响的实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
中英文缩略词表 |
1.引言 |
2. |
2.1 现代医学研究 |
2.1.1 流行病学 |
2.1.2 不连的定义及诊断 |
2.1.3 骨不连的分型 |
2.1.4 现代医学对骨不连的病因学认识 |
2.1.4.1 全身因素 |
2.1.4.2 局部因素 |
2.1.5 现代医学对骨不连的治疗概况 |
2.1.5.1 保守治疗 |
2.1.5.2 手术治疗 |
2.1.5.3 生物因子疗法 |
2.2 中医对骨不连的研究 |
2.2.1 中医对骨不连的认识 |
2.2.2 骨不连的中医病因病机 |
2.2.3 骨不连的中医传统疗法 |
2.2.3.1 内治法 |
2.2.3.2 外治法 |
3.实验研究 |
3.1 实验材料 |
3.1.1 实验动物 |
3.1.2 主要实验药品及试剂 |
3.1.3 主要实验仪器及设备 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 造模方法 |
3.2.2 分组与干预 |
3.2.3 检测指标 |
3.2.3.1 X射线检测 |
3.2.3.2 组织形态学检测 |
3.2.3.3 骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic proteins-2, BMP-2)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factors-1,IGF-1)含量检测 |
3.3 统计学方法 |
3.4 实验结果 |
3.4.1 骨组织影像学观察 |
3.4.2 骨组织病理学观察 |
3.4.3 骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic proteins, BMP-2)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factors,IGF-1)含量检测 |
4.讨论 |
4.1 实验结果分析 |
4.2 骨不连模型选择及制备 |
4.3 骨折不愈合的分子发病机制 |
4.4 鸡胚蛋促进骨折愈合的机理 |
4.5 透皮给药机制 |
5.结论 |
6.不足与展望 |
致谢 |
参考文献 |
文献综述:骨不连非手术治疗进展 |
参考文献 |
附录:骨折不愈合评分系统(Non-union scoringsystem,NUSS) |
(6)AGEs通过Wnt/β-catenin通路抑制BMSCs成骨分化及PTH的干预作用(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
常用缩写词中英文对照表 |
第一部分 大鼠BMSCs的分离、培养与鉴定 |
前言 |
1 对象与方法 |
1.1 标本来源 |
1.2 主要仪器和试剂 |
1.3 实验方法 |
1.4 统计学处理 |
2 结果 |
2.1 观测 BMSCs 的形态学 |
2.2 BMSCs的细胞生长曲线 |
2.3 BMSCs表面标记物的表达 |
2.4 BMSCs 成骨诱导分化鉴定 |
2.5 成脂诱导分化鉴定 BMSCs |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
第二部分 Wnt/β–catenin信号通路介导AGEs抑制BMSCs成骨分化 |
前言 |
1 材料和方法 |
1.1 主要仪器和试剂 |
1.2 实验方法 |
1.3 统计学处理 |
2 结果 |
2.1 AGEs对 BMSCs增殖的影响 |
2.2 AGEs对 BMSCs成骨分化过程中矿化(钙结节的形成)的影响 |
2.3 AGEs对 Col-ⅠmRNA、LRP5 mRNA表达的影响 |
2.4 AGEs对大鼠骨髓间充质干细胞B-cateninm、OSX、RUNX2、RAGE蛋白表达影响 |
2.5 促进B-cateninm信号通路观察AGEs对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及矿化的影响 |
2.6 抑制RAGE表达后AGEs对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
第三部分 AGEs对 BMSCs增殖、成骨分化影响及PTH的干预作用 |
前言 |
1 材料和方法 |
1.1 主要仪器和试剂 |
1.2 方法 |
1.3 统计学处理 |
2 结果 |
2.1 不同实验组对细胞ALP、COL-1mRNA表达水平影响 |
2.2 Western-blot检测B-cateninm、OSX、RUNX2、RAGE的表达量 |
2.3 茜素红染色,观察PTH预处理后AGEs对 MSCs成骨分化过程中矿化的影响 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
综述 |
1.AGEs |
1.1 AGEs的来源 |
1.2 AGE的受体 |
2.RAGE |
3.AGE和 RAGE不利的影响: |
3.1 非受体介导途径 |
3.2 受体介导的机制 |
4.AGEs 与骨质疏松症的关系 |
4.1 AGEs介导骨胶原蛋白交联 |
4.2 AGEs与成骨细胞 |
4.3 AGEs与破骨细胞 |
4.4 AGEs与骨髓间充质干细胞 |
5.RAGE异变体的产生 |
6.预防 AGE-RAGE 的相互作用 |
7.预防AGE对骨的不利影响 |
8.小结与展望 |
参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(7)骨代谢生化指标临床应用专家共识(2019)(论文提纲范文)
1 钙磷代谢调节指标 |
1.1 甲状旁腺素 |
1.2 降钙素 |
1.3 维生素D3 |
2 骨形成标志物 |
2.1 骨特异性碱性磷酸酶 |
2.2 骨钙素 |
2.3 Ⅰ型前胶原C-端前肽/N-端前肽 |
2.4 骨保护素 |
3 骨吸收标志物 |
3.1 抗酒石酸酸性磷酸酶 |
3.2 I型胶原交联C-末端肽 |
3.3 I型胶原交联N-末端肽 |
4 激素与细胞因子 |
4.1 生长激素 |
4.2 雌激素 |
4.3 睾酮 |
4.4 白细胞介素-1 |
4.5 白细胞介素-6 |
4.6 转化生长因子β |
4.7 肿瘤坏死因子 |
4.8 胰岛素样生长因子 |
(8)雌雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的比较及右归丸干预作用的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
缩略词中英文对照表 |
文献综述 中医药防治骨质疏松症的研究进展 |
参考文献 |
前言 |
材料与方法 |
1 材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验药物 |
1.3 实验主要试剂 |
1.4 实验主要仪器 |
2 方法 |
2.1 实验动物分组及处理 |
2.1.1 卵巢切除手术(OVX)的具体方法 |
2.1.2 睾丸切除手术(ORX)的具体方法 |
2.2 取材 |
2.3 脱钙骨冰冻切片的制作 |
2.4 指标检测 |
2.4.1 骨组织形态指标的检测 |
2.4.2 骨生物力学指标的检测 |
2.4.3 胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1蛋白表达的检测 |
2.5 统计学分析 |
结果 |
1 雌雄去势大鼠股骨松质骨形态结构的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.1 雌雄去势大鼠股骨松质骨BV/TV变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.2 雌雄去势大鼠股骨松质骨Conn.Dn变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.3 雌雄去势大鼠股骨松质骨Cb.C变化率的比较及右归丸对其的干预作用 711.4 雌雄去势大鼠股骨松质骨DA的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.4 雌雄去势大鼠股骨松质骨DA的比较及右归丸对其的干预作用 |
1.5 雌雄去势大鼠股骨松质骨Tb.Pf的比较及右归丸对其的干预作用 |
2 雌雄去势大鼠股骨皮质骨生物力学性能的比较及右归丸对其的干预作用 |
2.1 雌雄去势大鼠股骨皮质骨ML变化率的比较及右丸对其的干预作用 |
2.2 雌雄去势大鼠股骨皮质骨BS变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
2.3 雌雄去势大鼠股骨皮质骨EM变化率的比较及右归丸对其的干预作用 |
3 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)、c-Fos、AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
3.1 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中MAPK(Erk1/2)蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
3.2 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中c-Fos蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
3.3 雌雄去势大鼠胫骨骨髓中AP-1蛋白表达的比较及右归丸对其的干预作用 |
讨论 |
1 从“性别差异”角度探讨中医“肾主骨”理论与骨质疏松症的关系 |
2 雌雄去势大鼠骨微观结构的比较 |
3 雌雄去势大鼠骨生物力学性能的比较 |
4 右归丸对雌、雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的干预作用 |
4.1 右归丸对雌、雄去势大鼠骨微观结构的干预作用 |
4.2 右归丸对雌、雄去势大鼠骨生物力学性能的干预作用 |
5 机制探讨 |
结论 |
参考文献 |
致谢 |
个人简介 |
附图 |
(9)基于和络泄浊,培土宁风法探讨和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制(论文提纲范文)
提要 |
abstract |
引言 |
慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱“肾络瘀滞,脾虚风动” 病机假说的构建与论治 |
1.慢性肾衰钙磷代谢紊乱以“肾络瘀滞,脾虚风动”为主要病机 |
1.1 肾络瘀滞是致病的内在因素 |
1.2 脾虚风动为发病的重要条件 |
2.慢性肾衰钙磷代谢紊乱从“和络泄浊,培土宁风”法论治 |
2.1 “培土宁风”法内涵发微 |
2.2 脾气亏虚与风邪辨治关系的文献梳理 |
2.3 对“和络泄浊,培土宁风”法治则探讨 |
2.4 和肾络宁风颗粒组方依据及药物组成分析 |
和肾络宁风颗粒对 CRF 钙磷代谢紊乱干预机制的实验研究 |
实验一 和肾络宁风颗粒对CRF钙磷代谢紊乱大鼠肾功能、矿骨代谢血清学指标及形态结构的影响 |
1.实验材料 |
2.实验方法 |
3.观察指标 |
4.统计学处理 |
5.结果 |
实验二 和肾络宁风颗粒对CRF钙磷代谢紊乱大鼠Wnt/β-catenin信号转导通路的影响 |
1.实验材料 |
2.实验方法 |
3.检测指标 |
4.统计学处理 |
5.结果 |
实验三 和肾络宁风颗粒对CRF钙磷代谢紊乱大鼠Klotho、BMP-7、FGF23、OC、PINP蛋白表达的影响 |
1.实验材料 |
2.实验方法 |
3.检测指标 |
4.统计学处理 |
5.结果 |
讨论 |
1.慢性肾衰钙磷代谢紊乱大鼠造模方法的选择及评价 |
1.1 慢性肾衰动物模型方法学研究及比较 |
1.2 高磷饮食对慢性肾衰动物大鼠肾性骨病模型影响的研究 |
2.现代医学对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的认识及探讨 |
2.1 对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的基本认识 |
2.2 参与诱导慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱相关标志蛋白的研究与探讨 |
2.3 参与介导慢性肾衰钙磷代谢紊乱的Wnt/β-catenin信号转导通路研究 |
3.和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预作用探讨 |
3.1 和肾络宁风颗粒的辨治特色及现代药理学分析 |
3.2 和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制探讨 |
3.3 小结 |
结语 |
参考文献 |
综述 |
综述一 慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱西医治疗研究进展 |
参考文献 |
综述二 慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱中医药治疗研究现状 |
参考文献 |
附录1 |
附录2 |
致谢 |
查新报告 |
论文着作 |
科研课题 |
(10)基于Wnt/β-Catenin信号通路的补肾活血胶囊治疗激素性股骨头坏死临床与实验研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
本文主要英文缩略词索引 |
引言 |
临床研究 |
一、临床资料 |
(一)一般资料 |
(二)诊断标准 |
(三)分期标准 |
(四)病例纳入标准及排除标准 |
二、研究方法 |
(一)分组情况 |
(二)随访时间 |
(三)疗效及安全性评价方法 |
三、统计学分析 |
四、实验结果 |
讨论 |
结论 |
动物实验研究 |
第一部分 补肾活血方基于Wnt/β-Catenin 信号通路对SD大鼠激素性股骨头坏死骨修复机制在体研究 |
实验一 补肾活血方基于Wnt/β-Catenin通路对SD大鼠激素性股骨头坏死骨组织修复机制研究 |
一、实验材料 |
(一)实验动物及药物 |
(二)主要实验试剂、仪器及主要溶液配制 |
二、试验方法 |
(一)分组和造模 |
(二)血清学指标检测 |
(三)股骨头组织获取及HE染色 |
(四)实时定量RT-PCR |
(五)Western Blot实验 |
三、统计学分析 |
四、实验结果 |
(一)三组大鼠基本情况 |
(二)股骨头大体形态及质地 |
(三)血生化指标检测结果 |
(四)HE染色结果 |
(五)RT-PCR结果 |
(六)Western Blot结果 |
实验二 补肾活血方基于Wnt/β-Catenin通路对SD大鼠激素性股骨头坏死体内BMSCs功能影响机制研究 |
一、实验材料 |
(一)实验动物及药物 |
(二)主要实验试剂、仪器及主要溶液配制 |
二、试验方法 |
(一)分组和造模 |
(二)三组大鼠BMSCs体外分离、培养、纯化与鉴定 |
(三)三组大鼠BMSCs细胞增殖功能改变 |
(四)三组大鼠BMSCs细胞成骨分化功能改变 |
(五)三组大鼠BMSCs细胞成脂分化功能改变 |
三、统计学分析 |
四、实验结果 |
(一)三组大鼠BMSCs细胞培养结果 |
(二)三组大鼠BMSCs细胞表面抗原鉴定结果 |
(三)三组大鼠BMSCs细胞增殖检测结果 |
(四)三组大鼠BMSCs细胞成骨能力检测结果 |
(五)三组大鼠BMSCs细胞成脂能力检测结果 |
讨论 |
一、补肾活血胶囊的中医理论基础及药理作用 |
二、SD大鼠SONFH模型的建立与补肾活血方疗效 |
(一)造模实验动物的选择 |
(二)SONFH模型建立方法的选择 |
(三)补肾活血方治疗SD大鼠SONFH疗效 |
三、补肾活血方基于Wnt/β-Catenin通路治疗激素性股骨头坏死骨修复机制探讨 |
(一)关于Wnt/β-Catenin通路作用研究 |
(二)补肾活血方对SONFH特异性转录因子表达影响 |
四、补肾活血方基于Wnt/β-Catenin通路对激素性股骨头坏死体内BMSCs功能改变机制探讨 |
(一)三组大鼠BMSCs分离、培养、纯化及鉴定方法选择 |
(二)三组大鼠BMSCs增殖活性改变及机制探讨 |
(三)三组大鼠BMSCs成骨-成脂分化功能改变及机制探讨 |
结论 |
第二部分 补肾活血方含药血清基于Wnt/β-Catenin信号通路对激素干预骨髓间充质干细胞功能影响离体研究 |
一、实验材料 |
(一)实验动物及药物 |
(二)主要实验试剂、仪器及主要溶液配制 |
二、试验方法 |
(一)SD大鼠BMSCs体外分离培养与鉴定 |
(二)补肾活血胶囊含药血清制备 |
(三)体外激素干预浓度选择 |
(四)实验分组 |
(五)CCK-8 测细胞增殖率 |
(六)茜素红染色及定量 |
(七)ALP定量检测 |
(八)RT-PCR实验 |
(九)Western Blot实验 |
三、统计学分析 |
四、实验结果 |
(一)细胞形态学观察结果 |
(二)表型鉴定结果 |
(三)增殖率检测结果 |
(四)茜素红染色及定量检测结果 |
(五)ALP定量检测结果 |
(六)RT-PCR结果 |
(七)Western Blot实验结果 |
讨论 |
一、补肾活血方含药血清的制备 |
二、地塞米松对体外BMSCs成骨-成脂分化调控作用 |
三、不同浓度的补肾活血方含药血清对体外激素干预的BMSCs细胞增殖影响 |
四、基于Wnt/β-Catenin通路探讨不同梯度补肾活血方含药血清对激素干预的rBMSCs体外成骨-成脂分化的影响 |
结论 |
结语 |
参考文献 |
综述 |
综述参考文献 |
附录 |
致谢 |
查新报告 |
论文着作 |
四、甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞转化生长因子-β_1基因转录的影响(论文参考文献)
- [1]苗药九仙罗汉接骨汤干预胫骨骨折模型大鼠的成骨分化及骨折愈合[J]. 李义,杨彦君,彭松云,程志刚,钟凯,殷天坪,唐良华. 中国组织工程研究, 2022(33)
- [2]调控软骨形成的信号通路及相关因子在骨髓间充质干细胞骨向分化中的作用[J]. 赵久梅,王哲,李学英. 中国生物工程杂志, 2021(10)
- [3]含稀土碳酸化羟基磷灰石材料的制备及其应用于骨修复的实验研究[D]. 刘鹏. 吉林大学, 2021(01)
- [4]基于Cx43蛋白研究肾主骨生长发育理论与相关实验[D]. 黄秋霞. 湖北中医药大学, 2020(11)
- [5]鸡胚蛋外敷疗法对股骨骨不连大鼠BMP-2、IGF-1影响的实验研究[D]. 吴应彬. 成都中医药大学, 2020(02)
- [6]AGEs通过Wnt/β-catenin通路抑制BMSCs成骨分化及PTH的干预作用[D]. 高飞. 山西医科大学, 2020(11)
- [7]骨代谢生化指标临床应用专家共识(2019)[J]. 张萌萌,张秀珍,邓伟民,张智海,徐辉,葛继荣,王永福,黄宏兴,史晓林,张东伟,毛未贤,马倩倩,高远,郭郡浩,张红红,张晓梅,印平,赵方,晁爱军,张岩,李英华,李毅中,赵国阳,董红宇,吴岩,吴涤,邹军,周惠琼. 中国骨质疏松杂志, 2019(10)
- [8]雌雄去势大鼠骨微观结构和生物力学性能的比较及右归丸干预作用的研究[D]. 柴勇. 中国中医科学院, 2019(01)
- [9]基于和络泄浊,培土宁风法探讨和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制[D]. 郝媌. 山东中医药大学, 2018(01)
- [10]基于Wnt/β-Catenin信号通路的补肾活血胶囊治疗激素性股骨头坏死临床与实验研究[D]. 刘金豹. 山东中医药大学, 2018(01)
标签:右归丸论文; 转化生长因子-β论文; wnt信号通路论文; 骨缺损论文; 细胞生长因子论文;