一、骨髓移植中的细胞因子（论文文献综述）
万江波[1]（2017）在《IL-10基因修饰的树突状细胞诱导1型调节T细胞在防治GVHD和保存GVL中的研究》文中研究说明背景和目的:Allo-HSCT是有望治愈血液系统恶性肿瘤的根本手段,但是对于allo-HSCT患者来说,GVHD是主要的移植相关死因。然而,来自异基因供体T淋巴细胞还可以产生GVL效应,从而减少移植后白血病的复发。因此,如何在防治GVHD的同时保留GVL效应是目前改善allo-HSCT治疗效果的关键。Tregs在针对自身和外来抗原产生的外周免疫耐受中发挥重要作用。它分为两大类,即nTregs和iTregs,后者主要为Tr1细胞。nTregs在机体内含量极少,体外大量扩增难度大,难以大规模生产而满足临床需求。本研究拟用IL-10基因修饰的DCs诱导产生Tr1细胞,并对其在体外对T细胞增殖,混合淋巴细胞反应以及小鼠骨髓移植模型中对GVHD以及移植动物的生存进行了观察。研究方法:构建携带IL-10基因的慢病毒载体转染受体DCs,应用DCLV-IL-10与供体CD4+T细胞共培养后免疫磁珠分选,获得纯化的Tr1细胞,并应用流式细胞和ELISA方法分析Tr1细胞生物特性;同时利用体外淋巴细胞增殖实验和混合淋巴细胞反应观察其特异性免疫抑制效应,在白血病小鼠骨髓移植模型中,观察其对GVHD的发生和GVL效应的影响。结果:1.携带IL-10的慢病毒载体的构建并转染DCs,DCLV-IL-10保留成熟DCs的表型,并分泌高水平的IL-10。2.受体DCLV-IL-10与供体幼稚CD4+T细胞共培养,能诱导产生大量的表达特征性CD49b、LAG-3、CD4和CD25免疫表型,同时表达IL-10和IFN-γ,而不表达Foxp3的T细胞,符合Tr1细胞的免疫特征。3.诱导产生的Tr1细胞分泌高水平的IL-10、IFN-γ以及低水平的IL-4、IL-2,对于其发挥免疫调节功能具有重要的作用;4.体外试验显示诱导产生的Tr1细胞抑制CD4+和CD8+T细胞增殖以及混合淋巴细胞反应,并呈剂量依赖趋势,此效应能被抗IL-10抗体所中和,提示其免疫抑制作用主要依靠IL-10;5.在C57BL/6→BALB/c小鼠骨髓移植模型中,输注Tr1细胞能显着减轻受体小鼠临床和病理GVHD的程度,延长生存期;6.在C57BL/6→BALB/c小鼠白血病骨髓移植模型中,输注Tr1细胞受体小鼠T细胞维持对A20淋巴瘤细胞的杀伤效应,出现Th1向Th2细胞转化,同时其生存期也明显延长,提示Tr1细胞在抑制GVHD的同时也保留了异基因供体T细胞的GVL效应。结论:1.应用IL-10基因修饰的受体DCs与供体CD4+T细胞共培养,体外大规模诱导符合临床应用的Tr1细胞是可行的,同时受体DCLV-IL-10诱导产生的Tr1细胞,在体外具有特异性的免疫抑制功能。2.受体DCLV-IL-10诱导产生的Tr1细胞,在小鼠白血病异基因骨髓移植模型中,输注Tr1细胞明显延长无病生存期,提示Tr1细胞在明显减轻GVHD程度的同时能够保留GVL效应。
崔雪涛[2]（2007）在《IL-2在骨髓移植中研究进展》文中进行了进一步梳理细胞因子通常以非特异方式发挥作用,而且,很微量的细胞因子就会产生显着的生物学作用。其中,IL-2是一个研究较早,应用较广的一种。本文就IL-2在骨髓移植中的作用进行文献复习,得出相应结论:认为血浆中的IL-2的浓度与急性GVHD的严重程度有密切相关,在动物实验中已经证实了应用大剂量IL-2治疗时,减少了GVHD的发生;在临床上,随着重组细胞因子的问世,应用IL-2相关制剂能够有效地抑制骨髓移植中的排斥反应。
郑伟燕[3]（2001）在《霉酚酸酯对小鼠异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主病的预防作用及机理研究》文中认为同种异体骨髓移植（Allo-BMT）技术在近二三十年得到飞速发展，为一系列造血系统或非造血系统疾病的患者提供了新的希望。Allo-BMT的最大局限在于供受者之间HLA不合程度增高，移植物抗宿主病（GVHD）的风险增大，受者移植后的无病存活率受到影响。其中急性移植物抗宿主病（aGVHD）是移植早期死亡的主要原因，而慢性移植物抗宿主病（cGVHD）则降低了受者的生存质量和长期生存率。组织配型技术的提高以及多种免疫抑制剂的联合应用，使Allo-BMT后GVHD的发生率明显降低。环孢菌素A（CSA）联合短程氨甲喋呤（MTX）作为aGVHD的标准预防方案，在临床上推广应用，大大降低了aGVHD的发生率和严重程度。即便如此，在HLA主要位点完全相合的Allo-BMT，aGVHD的发生率可达30％-60％，由其直接或间接引起的死亡占BMT后死亡率的50％左右。因此，预防和治疗aGVHD成为提高同种异体骨髓移植（Allo-BMT）成功率的关键。 霉酚酸酯（MMF）是霉酚酯酸（MPA）的酯类前体，MPA选择性抑制次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（IMPDH）。该酶是鸟嘌呤核苷酸经典合成途径中的限速酶。IMPDH受抑导致鸟嘌呤核苷酸生成减少，进而DNA、RNA合成受阻。MPA对鸟嘌呤核苷酸合成的另一途径，即补救合成途径没有影响。中性粒细胞可同时通过补救途径，合成鸟嘌呤核苷酸，而T、B淋巴细胞则更依赖于经典途径合成，故MPA对淋巴细胞的嘌呤合成具有选择性抑制作用。MMF在人类实体脏器移植抗排斥方面有独特的功效，1995年美国FDA批准MMF应用于临床肾移植抗排异治疗，证明MMF较传统硫唑嘌呤治疗有明显的优越性。MMF用于预防和治疗异基因骨髓移植中急性GVHD，在国际是仅见数篇报道。本单位黄河等从1998年开始在非亲缘异基因骨髓移植在应用MMF联合CSA、MTX预防aGThD，取得良好效果。但MMF在aGVHD动物模型中的作用及机理研究至今罕见报道。本研究目的在于建立小鼠异基因骨髓移植－急性移植物抗宿主病动物模型，观察霉酚酸酯（MMF）以及不同的联合用药方案（MMF＋CSA＋MTX，CSA＋MTX）对aGVHD的预防作用，并进一步探讨MMF预防aGVHD的可能作用机制，为临床应用提供实验依据。第一部分： 霉酚酸酯（MMF）对小鼠异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主炳 ＊cvnn)的预防作用目的：探讨新型免疫抑制剂一霉酚酸酯（MMF）对小鼠异基因骨髓移植（allo－BMT）中急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用。方法：建立主要组织相容性抗原（MHC）完全不合的两个纯种近交系小鼠悦鼠：C57BL／6)（H／X雌性；受鼠：BALB／C（HPX雄性］异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病bllo书MT伯）动物模型。根据 aGVHD的发生强度分：小鼠中度 aGVHD模型（A型，移植小鼠的平均生存时间为刀天）：小鼠重度＊GVH D模型旧型，移植小鼠的平均生存时间为 6天）。分组：AI组（6只），MMF（30mg／kg／d）；AZ组（6 ．q），CSA＋MTX；A3组（6只），MMF（30mg／kg／d）联合 CSA＋MTX；A4组（6只），对照组，移植后未用 aGVHD预防方案山 组（9只），MMF（30mg／kg／d）旧 组（9 ．q），CSA＋MTX；m组（9只），＊＊F（3om叭咖）联合mA十＊TX；M组（9只），＊＊F（朋m咖叩）联合 CSA＋MTX；BS组（9 ．q），MMF（10ng／kg／d）联合 CSA＋MTX；B6对照组（9只），移植后未用 aGWID预防方案。以小鼠 aGVHD症状，移植小鼠中位生存时间（MST）、生存率（＋35天）、外周血象的恢复情况，以及GVHD病理分级作为钾价指标。结果：在小鼠中度aGVHD移植模型中，移植小鼠于2周后，逐渐出现消瘦、反应迟钝、脱毛、腹泻、耳廓充血增厚、双眼分泌物增多（结膜炎）等aGVHD症状，不用aGVllD预防方案的移植小鼠（A4组），则aGVHD持续发展，死亡率达100％，MST为ZI天。AI－A3组小鼠经单用或联用MMF、CSA、MTX等免疫抑制剂后，在不同程度上减轻甚至防止了aGVHD的发生，在移植后＋35天，小鼠的生存率分别为50％、50％、33％从3组的生存率较川人 组低，但差异无显着性（P＞oj）5)。 3在小鼠重度aGVHD移植模型中，移植小鼠于＋3－＋5天即出现少食少动、消瘦、腹泻、弓背体位、毛发紊乱无光泽等aGVHD症状，不用aGVHD预防方案的移植小鼠旧6组)死广高峰在＋5／7天，死亡率达 100％。应用 ，删P预防方案的 BIE组小鼠aGVHD程度明显减轻，表现为消瘦、腹泻、腹胀、脱毛、耳廓增厚充血。双眼分泌物增多（结膜炎）等aGVHD症状，MST较B6组显着延长（分别延长3．4天，丑4无，9刀天，6．1天，吕．瑟天，P＜0．05）。m－扔组的＊盯较＊组显着延长（P＜O．oj）；B3E 组的MST较BZ组稍延长，但无显着性差异；B3、BS组的MST较B4组延长，差异有显着性（P＜0．05）；m组与m组的＊盯无显着性差异。外周血象变化：发生重度 aGVHD的移植小鼠旧6组)，MST仅为 6天，故观察不到其血象回升过程。中度和重度aGVHD应用预防案组的移植小鼠（AI．A3，BI．5组），＋5天左右白细胞开始?
唐晓琼[4]（2006）在《骨髓间充质干细胞的IDO对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应影响的实验研究》文中进行了进一步梳理近30年来,异基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation ,Allo-BMT）已经成功应用于治疗恶性血液病、严重免疫缺陷病和骨髓造血功能衰竭等疾病。至今为止,急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-host disease ,aGVHD）仍是移植相关死亡的主要原因,是移植的主要障碍。特别是在接受HLA配型不全相合的无关供者移植的患者中,常发生严重的急性GVHD。虽然应用免疫抑制药物和T细胞去除的方法能有效的控制GVHD,但治疗的同时会引起严重的并发症,比如感染和增加疾病复发风险。因此许多研究者一直致力于寻找一些防止GVHD发生并能避免免疫抑制引起的并发症的方法。骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells , MSCs）是骨髓中能分化为成骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞,具有多向分化潜能的细胞。研究已经证实MSCs能产生许多促进造血细胞归巢、增殖和分化的细胞因子,因此在促进造血恢复中发挥重要的作用。而且,MSCs不表达MHC II类分子或共刺激分子,具有较弱的抗原性。研究也表明MSCs具有免疫调节的特性,可以减轻GVHD。但对于MSCs发挥免疫负调节作用、减轻GVHD的机制仍不清楚。吲哚胺2,3-过氧化酶（indoleamine 2,3-dioxygenase IDO）是色氨酸沿犬尿氨酸代谢途径降解的限速酶.可以降解T细胞周围的色氨酸。而T细胞的细胞周期中有一个对周围色氨酸水平极为敏感的调节点,色氨酸的缺乏使其停滞在mid-G1期,从而抑制活化的T细胞的增殖。在IFN-γ的作用下,机体内的多种细胞如成纤维细胞、上皮细胞、巨噬细胞均可产生IDO。近来,人们还发现母胎界面滋养层细胞中IDO在避免胎儿受母体排斥中具有重要作用。因此,抗原提呈细胞上的IDO被公认为抑制机体T细胞对异体抗原发生免疫应答的主要机制之一。基于此,我们试图体外分离培养及扩增小鼠的MSCs,检测IFN-γ作用下的MSCs上IDO mRNA和IDO蛋白的表达,以及IDO在MSCs介导同种混合淋巴细胞增殖反应的作用;通过建立小鼠异基因骨髓移植模型,观察具有IDO表达的MSCs在小鼠异基因骨髓移植中抑制同种异体免疫反应、降低GVHD发生的体内效果,探讨MSCs的IDO活性参与MSCs发挥免疫负调节作用的机理,为临床MSCs防治GVHD提供可靠的实验依据。第一部分小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性的研究目的:探讨小鼠骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）的体外分离、纯化、扩增和多向分化条件。方法:获取小鼠骨髓细胞,以IMDM作为培养基进行培养和纯化细胞,瑞氏染色和电镜观察形态;FACS检测其免疫表型和细胞周期;体外诱导成骨细胞、脂肪细胞、神经样细胞分化,Von Kossa染色、油红O染色、免疫组织化学法检测细胞向成骨、成脂肪细胞、神经样细胞分化情况。结果:小鼠骨髓来源的细胞呈纤维样贴壁生长,瑞氏染色和电镜观察具有MSCs特征;FACS检测结果显示,表达MSCs相关的抗原CD29、CD44、CD105,而CD31、CD13、CD34、CD45、I-ab为阴性;体外诱导成骨细胞、脂肪细胞、神经样细胞分化成功。结论:体外成功地分离及培养了小鼠MSCs。第二部分IDO在小鼠骨髓间充质干细胞的表达及对T细胞增殖的影响目的:探讨γ-干扰素（IFN-γ）作用下小鼠MSCs上吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达情况及其活性对异基因T淋巴细胞增殖的影响。方法:以不同浓度的IFN-γ（0、20、50、100、200 U/ml）作用小鼠MSCs,以RT-PCR和Western blot分别检测IDO mRNA和IDO蛋白表达,以反相高效液相色谱法（HPLC）检测IDO活性;分别以丝裂霉素C灭活的C57BL/ 6鼠脾细胞为刺激细胞,BALB/C鼠脾细胞为反应细胞建立混合淋巴细胞培养体系（MLRs）。有或无1-甲基色氨酸（1-MT）存在下, MSCs/ MLRs共培养体系中C57BL/ 6鼠MSCs为1×105、5×104、1×104、5×103（MSCs:反应T细胞数量比为1:5,1:10,1:50,1:100）。以MTT法检测T淋巴细胞增殖率,HPLC法检测各MLRs体系上清中IDO活性。结果: IFN-γ作用后, MSCs出现IDO mRNA、IDO蛋白表达以及功能性的IDO活性,且IDO mRNA、IDO蛋白表达量和IDO活性与IFN-γ浓度呈剂量依赖性;当MSCs为1×105、5×104、1×104（即MSCs:反应T细胞为1:5,1:10,1:50）时,与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率显着降低（P<0.05）,IDO活性显着升高（P<0.05）;加入1-甲基色氨酸（1-MT）后,T淋巴细胞的增殖率及IDO活性均恢复。当MSCs为5×103（即MSCs:反应T细胞为1:100）时,与对照组比较,T淋巴细胞的增殖率轻度升高（P>0.05）,IDO活性无明显变化（P>0.05）。结论: MSCs上的IDO表达与T淋巴细胞的增殖密切相关,MSCs在体外可能通过IDO活性发挥免疫抑制作用。第三部分小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立目的:建立小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型,为下一步异基因骨髓移植中aGVHD研究提供理想的实验参照。方法:采用近亲系的雄性C57BL/6（H-2b）小鼠为供鼠、60Co致死量照射的雌性BALB/C（H-2d）小鼠为受鼠建立异基因骨髓移植模型,以混合移植2:1的异基因骨髓细胞与外周脾细胞作为aGVHD组,同时设立空白对照组（无骨髓细胞及外周脾细胞植入）和单纯Allo-BMT组（无外周脾细胞植入）。根据临床表现、存活期及病理改变等判断GVHD程度。结果:单纯Allo-BMT组无典型的急性GVHD表现;aGVHD组受鼠GVHD的临床评分在10分左右,存活期6-24天,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论:成功地建立了小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型。第四部分MSCs的IDO对小鼠异基因骨髓移植中aGVHD效应的影响目的:观察具有IDO表达的MSCs在小鼠异基因骨髓移植中降低aGVHD发生的体内效果,探讨MSCs上的IDO活性参与其发挥免疫抑制作用的机制。方法:采用近亲系的雄性C57BL/6（H-2b）小鼠为供鼠、60Co致死量照射的雌性BALB/C（H-2d）小鼠为受鼠建立不同的移植组:aGVHD组（A组）、大剂量MSCs组（B组）、小剂量MSCs组（C组）和1-MT预处理组（D组）。根据临床表现和病理改变判断GVHD程度,并比较不同移植组的存活率、GVHD发生情况和Th1类细胞因子（IL-2、IFN-γ）和Th2类（IL-4、IL-10）细胞因子分泌情况。结果: B组受鼠,GVHD的临床评分在4分左右,无组织病理改变,全部长期存活,与A组比较差异显着（P<0.05）。与A组比较,B组受鼠血清中Th1类细胞因子显着降低,Th2类细胞因子显着升高（P<0.05）。A、C、D三组之间的GVHD临床评分、病理变化、生存率及细胞因子水平无统计学差异（P>0.05）。结论:在小鼠Allo-BMT中,同种异基因MSCs的IDO活性可促进Thl向Th2的偏离,进而产生抑制GVHD效应,推测MSCs在体内同样通过IDO活性发挥免疫抑制作用。
杨志刚[5]（2005）在《自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中作用及其机制的研究》文中研究表明异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）是目前根治白血病的唯一有效手段,但仍然存在如移植物抗宿主病（GVHD）、移植排斥和免疫重建等移植相关障碍,尤其是如何在防止GVHD的同时诱导足够强的移植物抗白血病（GVL）作用,是目前临床aUo-HSCT中亟待解决的难题。本研究针对这些影响allo-HSCT疗效的关键问题立题,建立NK细胞体外分离和培养扩增的方法和小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）模型,研究NK细胞在allo-HSCT中的移植免疫和抗肿瘤免疫效应及机制。实验结果证实,在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞有效抑制GVHD和移植排斥,提高造血干细胞植入水平,促进造血、免疫重建并显着提高受者的生存率;并发现同种异基因反应性NK细胞对小鼠B16-F1肿瘤细胞具有明显的移植物抗肿瘤（GVT）作用。实验结果与临床alIo-HSCT中亟需攻克的关键障碍紧密相关,不仅对NK细胞效应机制的研究具有重要的理论意义,而且对NK细胞应用于allo-HSCT和治疗异基因肿瘤的临床实践有重要的指导作用。俘舍攀悦论文:.移带价细砚在刁、双异玉因开倪移祖中作用及其机侧的研究中大摘界效靶细胞25:1时杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%、83.86%,明显高于脾MNC（41.01%）。MACS法纯化前后细胞总数和CD3一NKI.1+细胞百分率分别为l.oxl08、l.sxlo‘和2.54%、93.60%;但纯化后细胞在体外培养20d只扩增到1.9xl扩。结论:用两步猫附分离法扩增并分离小鼠NK细胞,23周内可获得大量NK细胞,纯度达55%60%;效靶细胞为25:1时对YAC一1细胞的杀伤率约为80%。 第二章小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立 目的:建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（GVHD）模型;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法:以近交系的c57BL/6（H-Zb小鼠为供鼠、BALB/c似一2勺小鼠为受鼠进行异基因骨髓移植,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果:单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD,20Ok的小鼠长期存活（超过120天）,无急性GVHD表现;混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓细胞4xlo“与外周淋巴细胞1:1混合组小鼠全部在移植后514天出现典型的弓背体位,存活期624天,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论:以供鼠骨髓细胞4、106与外周淋巴细胞1:1混合进行的异基因骨髓移植,100%引出致死性的急性GVHD。第三章NK细胞对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应的影响 目的:研究自然杀伤仍服）细胞在异基因骨髓移植（all。一BMT）中对移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法:以近交系小鼠c57BL/6（H一Zb为供鼠、BALB/c（H-Zd）为受鼠进行allo-BMT,在allo-BMT同时输入不同数量的供鼠外周T细胞和（或）NK细胞,根据临床表现和病理检查判断GVHD程度,并比较不同移植组的存活率和GVHD发生情况。结果:输注lxl06供鼠NK细胞的移植组40%小鼠出现GV}ID,输注2 x 106供鼠NK细胞的移植组仅30%出现GVHD,输注NK细胞的两组分别与异基因骨髓移植组（80%急性GVHD、20%慢性GVHD）和骨髓+T细胞组（100%急性GvHD）比较,GVHD发生率显着下降、程度明显减轻;长俘士拳悦论文:.落杀价翻硬在小双葬王因.从移植甲他用及其祝侧的研充甲文摘葬期存活（超过120天）率在输注高浓度NK细胞组为80%,输注低浓度NK细胞组为70%,均较异基因骨髓移植组（20%）和骨髓+T细胞组（0 .0%）显着增高伊<0.01）。结论:在小鼠all。一BMT中,同种异基因反应性NK细胞可抑制GvHD效应,延长存活期。第四章NK细胞在小鼠异基因骨髓移植模型中抗肿瘤作用的研究 目的:利用小鼠异基因骨髓移植（all。一BM叮）模型,研究同种异基因反应性NK细胞对B 16-FI和S一180肿瘤细胞成瘤小鼠的移植物抗肿瘤（GvT）作用。方法:用B16一Fl和s一180细胞株分别在近交系的c57BL/6(H一Zb和BALB/c（H一2与小鼠建立肿瘤模型。以接受致死量全身照射（,D的荷瘤小鼠为受鼠,分别以BALBlc件2与和c57B珑似一扔小鼠为供鼠进行allo-BMT,并在all。一B研后输注供鼠外周T细胞或NK细胞治疗肿瘤,比较不同组的成瘤情况、抑瘤率和20天存活率,并根据临床表现、白细胞计数和病理检查判断受鼠是否死于GVHD或骨髓造血功能衰竭。结果:对S一180细胞成瘤受鼠,各组的抑瘤率和加天存活率无差异,全部受鼠在移植后17天内死亡;其中T细胞治疗组小鼠有急性GVHD表现。对B16-FI细胞成瘤受鼠,NK细胞治疗组的抑瘤率（71.05%）和20天存活率（100%）显着高于单纯骨髓移植组（46.58%和50%）,NK细胞治疗组和单纯骨髓移植组的20天存活率均高于不接受扭I和aU。一BMT的生物对照组0.0%）,且无GVHD表现;而T细胞治疗组小鼠全部移植十9十15死于急性GVHD。结论:在小鼠ail小BMT中,同种异基因反应性NK细胞对B16一Fl肿瘤细胞有显着GVT作用而且不引起GVHD效应,可以延长荷瘤受鼠的生存期;对S一180肿瘤细胞,同种异基因反应性NK细胞无GVT作用。 第五章NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥 和造血及免疫重建的影响 目的:研究自然杀伤价服）细胞在小鼠异基因骨髓移植（a no一BMT）中?
汪月增[6]（1994）在《某些细胞因子在骨髓移植中的应用》文中研究说明某些细胞因子在骨髓移植中的应用汪月增迄今已发现并克隆了２０多种细胞因子，它们在体内构成复杂的免疫网络，参与多种生理及病理过程。在骨髓移植中应用较多的有重组的粒／巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和巨噬细胞集落刺...
杨洁,刘嬿,聂晓绚,任亚娜,范华骅[7]（2009）在《Vα14iNKT细胞对异基因骨髓移植GVHD具有抑制作用》文中指出研究初步探讨了在同种异基因骨髓移植中过继性输注体外扩增的Vα14iNKT细胞对急性GVHD的抑制作用。小鼠脾细胞体外经α-GalCer和IL-2的联合刺激扩增得到Vα14iNKT细胞。建立C57BL/6→DBA/2小鼠急性GVHD模型,即急性GVHD组。在此模型基础上,过继性输注供鼠Vα14iNKT细胞,即实验组。对各组受鼠GVHD发病情况、相关病理学检查、生存情况及血清中Th1/Th2型细胞因子的变化情况进行比较。结果是在体外刺激下,Vα14iNKT细胞能分泌Th1/Th2型细胞因子。体内实验发现,与急性GVHD组相比,实验组受鼠在移植后GVHD各项病症明显减轻,生存期显着延长。另外,通过对血清中细胞因子的测定发现,在骨髓移植后第7天,实验组IL-4分泌量显着高于急性GVHD组;而IFN-γ水平无显着性差异。表明体外诱导的供者Vα14iNKT细胞能通过调节Th1/Th2型细胞因子的产生有效地抑制急性GVHD。这为体外扩增的供者iNKT抑制GVHD的作用机制及NKT细胞疗法的临床运用提供了新的思路。
吴祖泽[8]（1982）在《造血干细胞的性能及其在造血障碍疾病治疗中的应用》文中研究指明五十年代后期,在骨髓移植的实验研究基础上,开始了人的骨髓移植,并用于治疗放射事故病人、免疫缺损、再生障碍性贫血以及白血病等患者,特别是在孪生子之间的骨髓移植中取得了良好的疗效。但是,在同种骨髓移植中遇到了严重的、甚至是致死性的威胁,即移植物抗宿主（GVH）反应的发生可以导致骨髓移植的失败。这是六十年代临床骨髓移植治疗进入停滞状态的主要原因。Bortin总结了1967年以前的骨髓移植
芦笛[9]（2019）在《间充质干细胞在急性移植物抗宿主病和异体皮片移植排斥反应中对B细胞的免疫调节作用研究》文中研究表明目的 间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSC）因其广泛而强大的免疫调节作用,被应用于移植中,以减轻移植后免疫抑制剂的用量。在急性移植物抗宿主病（acute graft-versus-hostdisease,aGVHD）中,MSC对B细胞的免疫调节作用尚未十分明确。我们试图通过检测小鼠aGVHD中B细胞活化标志和共刺激分子的表达以及相关细胞因子的分泌情况,研究MSC在aGVHD中的作用以及对B细胞的作用。MSC在体内输注后,能够到达次级淋巴器官的MSC寥寥无几,这造成MSC在体内的免疫调节作用明显不如在体外的作用。为了增加MSC靶向迁移到次级淋巴器官,我们尝试将MSC过表达CCR7,探索过表达CCR7的MSC能否减轻大鼠同种异体皮片移植的排斥反应,并探究这种MSC对排斥反应中B细胞的作用。为临床减轻移植免疫排斥反应提供理论支持。方法 第一部分:从C57小鼠的股骨、胫骨中,采用全骨髓贴壁法分离获得骨髓MSC,并鉴定细胞表面标志物、多能诱导分化（成脂、成骨和成软骨）。第二部分:建立小鼠aGVHD模型,实验组同时合并输注1×106个MSC,观察小鼠平均生存时间,术后第五天取受体脾细胞对P815细胞的杀伤作用,术后6h、12h、24h、3d、5d取受体脾细胞检测淋巴细胞亚群的变化及B细胞其活化标志（CD69）和B细胞共刺激分子（CD86）的表达水平,检测B细胞刺激因子IL-4和Bregs调节因子IL-10的mRNA含量。第三部分:采用免疫磁珠分选系统获得B220-的脾单个核细胞,并用此种细胞建立小鼠B220-aGVHD模型,实验组同时合并输注1×106个MSC,观察小鼠平均生存时间,术后24h受体脾细胞检测淋巴细胞亚群的活化标志（CD69）和B细胞共刺激分子（CD86）的表达水平。第四部分:包装表达大鼠CCR7的慢病毒,测定包装的慢病毒滴度;用此慢病毒转染MSC细胞,检测MSC-CCR7的免疫表型、增殖、多向分化能力等生物学特性。第五部分:建立大鼠异体背部皮片移植模型,分为三组,空白对照组,MSC-CCR7输注组和MSC-GFP输注组,移植术前24h内空白对照组仅输注0.5mlPSB,另两组输注2×106对应细胞;术后7天打开包扎,观察皮片成活时间,并于D7、D10、D14行皮片活检;D3、D7、D10、D14取淋巴结和脾脏行流式细胞学,检测T细胞活化（CD3+CD69）、Treg亚群、B细胞活化（CD45R+CD69）及共刺激分子（CD86、CD40）表达情况;D3、D7、D10、D14取血浆,流式检测血浆中细胞因子（IL-2、IL-6、IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ、TNF-α）的含量。结果 第一部分:全骨髓贴壁法可以分离出小鼠骨髓间充质干细胞;第二部分:aGVHD+MSC组较aGVHD组生存时间延长;移植术后D5,aGVHD+MSC组脾单个核细胞对P815细胞的杀伤性小于aGVHD组;MSC输注抑制了供者源性B细胞表面CD69和CD86的表达,B细胞中的IL-4的mRNA水平显着降低,IL-10的水平在D5显着升高。第三部分:分选后的脾单个核细胞几乎不含B细胞;B220-aGVHD组、B220-aGVHD+MSC较aGVHD组和aGVHD+MSC组生存时间明显延长,术后24h CD69+在CD3 阳性T淋巴细胞上的表达明显降低低。第四部分:采用脂质体转染慢病毒包装+PEG6000浓缩,可以获得高滴度的病毒（CCR7病毒滴度为5.6×109/ml,GFP病毒滴度为6.0×1010/ml）;用此慢病毒转染后的MSC-CCR7细胞,荧光下呈绿色,流式检测CCR7 阳性;MSC,MSC-CCR7,MSC-GFP表面标志物符合间充质干细胞标准,均能成脂、成骨诱导;三种细胞MTT法测得生长速率无统计学差异。第五部分:MSC-CCR7输注组异体皮片存活时间较MSC-GFP输注组和空白对照组长（P<0.05）;外观出现急性排斥反应的最初征象较其余两组晚;同一取材时间点,MSC-CCR7输注组的病理表现最轻;MSC-CCR7输注组活化的T、B细胞细胞含量、B共刺激分子CD86和CD40的表达均较其他两组低,Treg含量较其他两组高;MSC-CCR7输注组IFN-y、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α先升高又降低,IL-17、IL-10持续升高;MSC-GFP输注组和空白对照组IL-4先下降后升高,IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-17、TNF-α先升高又降低,IL-10持续升高。结论①采用全骨髓贴壁+连续传代法可以获取符合间充质干细胞标准的小鼠骨髓间充质干细胞;②共输注MSC可以延长aGVHD模型小鼠的生存时间,减轻脾单个核细胞对供体细胞的杀伤性;③共输注MSC可以通过通过减少T细胞活化比例、减少B细胞共刺激分子分泌水平、降低B细胞刺激因子IL-4、升高Breg诱导因子IL-10,抑制aGVHD发生发展;④B细胞的缺失进一步延长了 aGVHD小鼠的平均生存时间;⑤清除B细胞、输注MSC均可减轻24h活化的T细胞所占T细胞的比例;⑥采用慢病毒转染+药筛的方式,获得较纯的高表达CCR7基因且仍符合间充质特性干细胞的细胞,;⑦过表达CCR7的间充质干细胞可以延长大鼠异体皮片移植的生存时间,减轻大鼠异体皮片移植的排斥反应;⑧输注的MSC-CCR7通过降低、延缓T细胞活化、B细胞活化和抗原呈递作用,增加Treg细胞比例,增加抗炎类细胞因子分泌,降低促炎类细胞因子分泌,减轻异体皮片移植的排斥反应。
谭艳芳,殷小成[10]（2010）在《骨髓间充质干细胞在异基因骨髓移植中的研究进展》文中研究表明骨髓间充质干细胞（MSCs）是骨髓基质细胞的前体细胞,分泌多种造血相关因子,表达多种黏附因子,同时具有免疫调节功能,在造血微环境发挥重要作用。因此,利用MSCs做滋养层,体外扩增造血干细胞（HSC）,临床联合移植MSCs和HSC,提高造血重建的能力,减少或减轻移植物抗宿主病（GVHD）的发生,具有很广阔的研究前景。
二、骨髓移植中的细胞因子（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、骨髓移植中的细胞因子（论文提纲范文）
（1）IL-10基因修饰的树突状细胞诱导1型调节T细胞在防治GVHD和保存GVL中的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 :IL-10慢病毒载体的构建及转染DCs |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 主要材料和仪器 |
| 1.2 主要方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二部分 :IL-10 基因修饰的DCs诱导Tr1 细胞 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 主要试剂和仪器 |
| 1.2 主要方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第三部分 :IL-10 基因修饰的DCs诱导Tr1 细胞对移植动物GVHD的发生以及生存的影响 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 主要材料和仪器 |
| 1.2 主要方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 :博士期间发表的学术论文 |
| 异基因造血干细胞移植中防治移植物抗宿主病并保留移植物抗白血病效应的研究进展 |
| 参考文献 |
（3）霉酚酸酯对小鼠异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主病的预防作用及机理研究（论文提纲范文）
| 一、 中文摘要 |
| 二、 英文摘要 |
| 三、 论文正文 |
| 第一部分： 霉酚酸酯（MMF）对小鼠异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主病的预防作用 |
| 1、 前言 |
| 2、 材料与方法 |
| 3、 实验结果 |
| 4、 讨论 |
| 5、 结论 |
| 第二部分： 霉酚酸（MPA）对外周血T淋巴细胞体外活化的抑制作用 |
| 1、 前言 |
| 2、 材料与方法 |
| 3、 实验结果 |
| 4、 讨论 |
| 5、 结论 |
| 6、 参考文献 |
| 7、 附图 |
| 四、 综述 |
| 1、 Allo-BMT/aGVHD的动物模型及研究进展 |
| 2、 恶性淋巴瘤的生物学治疗进展 |
| 五、 致谢 |
（4）骨髓间充质干细胞的IDO对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应影响的实验研究（论文提纲范文）
| 一、摘要 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 三、正文 |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 小鼠骨髓间充质干细胞的IDO 表达及对T 细胞增殖的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 MSCs 的IDO 对小鼠异基因骨髓移植中GVHD 效应的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 四、综述 吲哚胺2，3-过氧化酶（IDO）与移植免疫耐受 |
| 五、攻读博士学位期间发表论文题录 |
| 六、致谢 |
（5）自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 绪论 |
| 第一章 小鼠NK细胞的体外培养扩增与初步分离 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二章 小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 图版 |
| 第三章 NK细胞对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第四章 NK细胞在小鼠异基因骨髓移植模型中抗肿瘤作用的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 图版 |
| 第五章 NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 图版 |
| 结论与建议 |
| 在学期间发表论文 |
| 致谢 |
（9）间充质干细胞在急性移植物抗宿主病和异体皮片移植排斥反应中对B细胞的免疫调节作用研究（论文提纲范文）
| 英文缩写表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 小鼠骨髓MSC生物学特性鉴定 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 MSC在小鼠aGVHD模型中对B细胞的影响的研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 MSC在缺失B细胞的小鼠aGVHD模型中的作用 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 细胞膜表达CCR7的MSC生物学特性鉴定 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 静脉输注MSC-CCR7对大鼠异体皮片移植排斥反应的影响机制 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 博士在读期间发表论文 |
| 致谢 |
（10）骨髓间充质干细胞在异基因骨髓移植中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 MSCs的生物学特性 |
| 2 MSCs在异基因骨髓移植中的潜在应用 |
| 2.1 MSCs支持造血干细胞的体外扩增 |
| 2.2 MSCs促进异基因移植物的植入 |
| 2.3 MSCs促进异基因骨髓移植后造血重建 |
| 2.4 MSCs抑制异基因骨髓移植后的GVHD |
| 2.4.1 MSCs独特的免疫学特性 |
| 2.4.2 MSCs体外抑制异体T细胞增殖的作用 |
| 2.4.3 MSCs对抗原呈递细胞 (APC) 、树突状细胞 (DC) 的作用 |
| 2.4.4 MSCs对Th1、Th2细胞的作用 |
| 3 MSCs 在异基因造血干细胞移植中的临床应用 |
| 4 问题与展望 |
四、骨髓移植中的细胞因子（论文参考文献）
- [1]IL-10基因修饰的树突状细胞诱导1型调节T细胞在防治GVHD和保存GVL中的研究[D]. 万江波. 上海交通大学, 2017(05)
- [2]IL-2在骨髓移植中研究进展[J]. 崔雪涛. 航空航天医药, 2007(02)
- [3]霉酚酸酯对小鼠异基因骨髓移植中急性移植物抗宿主病的预防作用及机理研究[D]. 郑伟燕. 浙江大学, 2001(01)
- [4]骨髓间充质干细胞的IDO对小鼠异基因骨髓移植中GVHD效应影响的实验研究[D]. 唐晓琼. 华中科技大学, 2006(03)
- [5]自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中作用及其机制的研究[D]. 杨志刚. 暨南大学, 2005(03)
- [6]某些细胞因子在骨髓移植中的应用[J]. 汪月增. 中华血液学杂志, 1994(06)
- [7]Vα14iNKT细胞对异基因骨髓移植GVHD具有抑制作用[J]. 杨洁,刘嬿,聂晓绚,任亚娜,范华骅. 现代免疫学, 2009(03)
- [8]造血干细胞的性能及其在造血障碍疾病治疗中的应用[J]. 吴祖泽. 牡丹江医专学报, 1982(02)
- [9]间充质干细胞在急性移植物抗宿主病和异体皮片移植排斥反应中对B细胞的免疫调节作用研究[D]. 芦笛. 中国人民解放军医学院, 2019(02)
- [10]骨髓间充质干细胞在异基因骨髓移植中的研究进展[J]. 谭艳芳,殷小成. 现代肿瘤医学, 2010(02)