一、氨基苄青霉素钠(无菌粉)冷冻干燥工艺（论文文献综述）
吴凯[1]（2021）在《废弃丁羟推进剂粘合体系生物降解方法及机理》文中研究表明丁羟推进剂因优良的力学、安全及能量特性,自问世至今,广泛应用于各类武器弹药与航天发动机。随着武器系统与航天技术的更新换代,推进剂连同弹体与发动机一起淘汰,加之本身自然老化问题不可避免,势必产生大量推进剂废弃物。由于报废的丁羟推进剂中仍含有品质较好的含能固相组分,如高氯酸铵、铝粉、黑索今等,必要的回收可实现循环利用。然而,作为回收剩余废料,丁羟推进剂的粘合体系已丧失复用价值。它本质上是一种超高分子量的交联型聚烯聚氨酯,理化性质稳定,直接排放于环境,长期无变化,破坏自然生态。因而,必须采取有效手段进行环境无害化处理。本研究就此展开探索,基于生物降解技术绿色安全、节能低耗的特点及其在聚合物方面的研究应用,尝试以微生物处理粘合体系废弃物,进行了以下一系列较为系统的研究。以据某丁羟推进剂粘合体系配方制备的片材为降解底物,以活性污泥与受污染土壤制备的菌源富集液为降解介质,考察了HTPB/TDI粘合体系（HTPB为丁羟,TDI为甲苯-2,4-二异氰酸酯）的生物降解性,通过FT-IR、TG及SEM分析了降解效果。结果表明,粘合体系可发生一定程度的降解,片材60 d重量损失率近43%。造成降解的主要因素是粘合体系中增塑剂组分己二酸二辛脂的分解,本质组分HTPB基聚氨酯难以生物降解。为采用生物降解技术有效处理粘合体系废弃物,针对HTPB基聚氨酯难降解原因,探讨了解聚、环氧化及紫外光照射三种预处理方式,并通过FT-IR与GPC表征了预处理效果。结果表明,解聚使体型结构的HTPB基聚氨酯转化为线型产物,分子量大幅降低,接近HTPB水平,难降解的氨酯键也被消除。此基础上,环氧化实现了解聚产物中碳碳双键的部分转化,将强电负性元素氧引入,改善了亲水性,也产生了生物敏感的含氧基团。两步预处理提高了产物作为微生物碳源被降解的能力。紫外光照射对于粘合体系,转化双键的作用确实存在,但仅发生于材料表面,且不会改变原有体型结构;对于解聚产物,氧化效率较低,且会引起产物固化交联,使分子量增加。紫外光照射并不适于本研究生物降解的预处理。以解聚与环氧化预处理后的产物为生物降解底物,从菌源富集液中筛选了降解效用菌。通过监测100 d重量损失率,评价了所筛菌株的降解能力。选取了最优的两株菌株,通过GC-MS与SDS-PAGE分析了降解产物与降解过程中存在的酶蛋白,并就降解历程与机理进行了讨论。结果表明,经过初筛、驯化、复筛及分离得到的3株真菌与5株细菌均可以环氧化产物为唯一碳源生长,均具有一定的降解能力,100 d使环氧化产物产生11%-29%不等的重量损失。其中,Burkholderia contaminans与Candida palmioleophila分别达29%与25%。两株菌株60 d降解产物表现出相似的特点,以碳原子数不等的烷烃为主,伴有少量酯、醇、酮等生成。受环氧化产物刺激,分别产生了至少6种与4种诱导酶。降解的机理可概述为生物酶催化下的水解反应与自由基反应联合效用,具体地:环氧化产物分子链首先受到环氧基水解酶攻击,环氧基发生一系列转化,一方面原位形成醇、酮,一方面断链形成酯与碳碳键链段。碳碳键链段接着在自由基反应催化酶作用下,氧化分解产生烷基自由基,并进行有规律地重组结合,生成碳数较高的正构体与较低的异构体烷烃,实现生物降解的主过程。此外,降解中还存在碳碳双键还原与环氧化产物分子链上残留的原HTPB基聚氨酯硬段结构分解的行为。随后的研究中,通过两株菌株对解聚产物与HTPB基聚氨酯的降解实验,进一步验证了解聚与环氧化两步预处理在改善粘合体系生物降解性上的作用。以蛋白胨与淀粉为初级碳源,以司盘80与十二烷基苯磺酸钠为表面活性剂,对两株菌株降解条件进行了优化。结果表明,仅当蛋白胨浓度5 g/L时,Burkholderia contaminans具有一定的共代谢作用,环氧化产物降解失重较无蛋白胨作初级碳源时有所增加,可能是由于该菌消化蛋白胨产生的蛋白酶对氨酯键产生分解作用。司盘80可改善Candida palmioleophila及其酶与环氧化产物的界面结合,促进降解,使40 d降解失重略高于无span-80的情况。本研究在粘合体系本质组分HTPB基聚氨酯难以生物降解的情况下,通过“解聚+环氧化”的预处理实现了粘合体系的生物降解,并取得相对不错的效果,为丁羟推进剂组分回收剩余废料的处理提供了一种技术思路,搭建了方法框架,奠定了一定理论与实践基础。同时,通过对比三大类聚氨酯生物降解特性,讨论本研究中从粘合体系到小分子烷烃产物的降解历程与机理及其与以往聚氨酯生物降解研究发现的异同,完善了聚氨酯生物降解理论。
韩帅波[2]（2021）在《盐环境来源微生物多相分类及嗜盐古菌基因组适应性与演化研究》文中研究指明盐环境中的微生物因其独特的生理代谢类型和特殊的生命演化地位,受到人们的广泛关注。新疆阿尔金山无人区由于高山阻隔,气候恶劣,人迹罕至,其中古老而原始的微生物资源一直以来鲜有报道。本文以新疆阿尔金山高海拔盐湖为重点,以包括其在内的8个盐湖（阿牙克库木湖、卡尔敦湖、龙尾错、销库尔咸湖、玛纳斯湖、巴里坤湖、运城盐湖和吉林碱湖）为研究对象,研究盐湖中的微生物群落结构并挖掘其中嗜盐微生物资源,对分离到的6株嗜盐微生物进行了多相分类学研究。此外,对38株嗜盐古菌模式菌株进行了全基因组测序,并对其中一株的基因组环境适应性和基因演化进行了深入探讨。本论文运用非培养的宏基因组方法,对阿牙克库木湖和玛纳斯湖的微生物群落结构进行分析,发现在阿牙克库木湖中,细菌是优势类群,红杆菌目在目水平丰度最高,而在玛纳斯湖中,嗜盐古菌是优势类群,盐红菌属在属水平丰度最高。运用可培养的方法,共分离纯化得到403株嗜盐微生物,包括191株嗜盐古菌和212株嗜盐细菌,其中嗜盐古菌疑似新分类单元8个,嗜盐细菌疑似新分类单元17个。在群落分析中,发现玛纳斯湖和运城盐湖,销库尔咸湖与运城盐湖的嗜盐古菌群落结构较为类似;卡尔敦湖、阿牙克库木湖和龙尾错这三个高海拔盐湖的细菌群落结构相似,优势类群均为海杆菌属菌株,而海杆菌属的物种大部分直接或间接来自海洋,在远离海洋、人迹罕至的高原盐湖中发现如此之多的海杆菌属菌株,可能是继喜马拉雅山脉发现海洋鱼类化石后,青藏高原海洋起源假说的又一力证,在地球物种演化研究上具有一定的科学意义。对分离自不同盐环境的6株嗜盐微生物进行了多相分类学研究,建立了2个新属（Salilacivita gen.nov.和Ayaqqumibacter gen.nov.）和6个新种（Salilacivita planktonica、Ayaqqumibacter halotolerans、Wenzhouxiangella salilacus、Rhodohalobacter barkolensis、Marinobacterium zhoushanense和Terasakiella brassicae）。在属和种的水平增加了新的分类单元,丰富了嗜盐微生物资源,为后续的研究提供物种材料和参考信息。对38株嗜盐古菌模式菌株进行了全基因组测序,共获得9个高质量基因组完成图和29个草图,极大地丰富了嗜盐古菌模式菌株的基因组数据资源,并对其中Salinigranum rubrum GX10T基因组的环境适应性与基因演化进行了深入分析。菌株GX10T的基因组由一个环状染色体和5个环状质粒组成。在其基因组中存在大量K+和Na+转运蛋白编码基因以及相容性溶质的吸收和合成相关的基因,使其能够保持细胞内外的渗透压平衡。偏酸性的蛋白质等电点使得其细胞内的生物大分子在高盐环境下依旧能够保持稳定的结构。该菌株拥有光修复、切除修复、错配修复和重组修复等完善的DNA修复系统,可以对紫外辐射导致的受损DNA进行修复。该菌株基因组中含有大量重金属抗性和代谢相关的基因,可能有助于降低重金属对菌体的毒害作用。其基因组中含有多个CRISPR位点和多种类型的Cas蛋白编码基因,共同组成CRISPR-Cas系统,来降解侵入细胞内的噬菌体和外源DNA,维持基因组的稳定。运用基于系统发育树的方法,对该菌株中的新基因进行注释和分析,发现大部分新基因形成于热原菌纲和嗜盐菌纲的物种分化过程中。此外,该菌株基因组也还存在有编码丝氨酸蛋白酶、α-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、脂肪酶、酯酶、内切葡聚糖酶等工业用酶和PHA合成途径的全部基因,表明菌株GX10T还具有较大的生物技术应用潜力。新疆高海拔盐湖嗜盐微生物资源的研究鲜有报道,本研究通过非培养和可培养方法揭示了其微生物群落组成以及特有的群落类型,加深了对特殊环境下微生物分布的认识。对6株疑似新分类单元进行了多相分类学研究,丰富了嗜盐微生物物种资源。对38株嗜盐古菌模式菌株进行全基因组测序,为后续分类学、比较基因组学和生物技术利用奠定数据基础。对菌株S.rubrum GX10T的环境适应性和基因演化分析,则进一步加深了对生命在极端环境下生存机制和演化历史的理解。
王凯凯[3]（2021）在《代谢工程改造大肠杆菌和凝结芽孢杆菌生产生物活性物质》文中提出生物活性物质,如N-乙酰氨基葡萄糖等,具有消炎、抗氧化作用,且在人体免疫调节方面也发挥着重要的作用。目前这些物质大多是利用化学方法进行生产,但该方法具有生产原料受限、污染环境等缺陷,难以满足生产需求。随着合成生物学的迅猛发展,使得利用宿主固有的遗传特性,通过代谢工程改造获得高产生物活性物质的工程菌株成为可能。大肠杆菌和凝结芽孢杆菌作为常见的原核微生物,具有代谢周期短、生长速度快、易于高密度发酵等诸多优势,是工业生产生物活性物质的理想底盘宿主。但由于凝结芽孢杆菌转化方法效率较低以及大肠杆菌部分基因的编辑效率也相对较低,使得对它们的代谢改造受到了一定限制。因此,本研究对大肠杆菌的基因编辑方法进行了优化,构建了产N-乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌工程菌株并进行了摇瓶发酵,同时优化了凝结芽孢杆菌的电转化方法并建立了接合转移方法,基于建立的转化方法对其代谢改造方法进行了探索。结果如下:优化大肠杆菌CRISPR-Cas9系统的Cas9蛋白和同源臂-gRNA之间的比例,提高了大肠杆菌MG1655（DE3）的基因编辑效率。单基因敲除效率最高可达100%,单基因替换效率最高可达94%。同时对pNW33N质粒、p JZ23-1质粒（携带有CRISPR-Cas9系统）转化凝结芽孢杆菌时的培养条件、抗生素浓度、电转化参数等关键因素进行了研究。结果表明,当筛选平板的氯霉素浓度为7μg/m L时,电转化效率最高可达2.3×105cfu/μg,接合转移方法转化效率最高可达2.2×103 cfu/m L。基于建立和优化的凝结芽孢杆菌的转化方法,导入CRISPR-Cas9系统并进行基因编辑,结果表明除异丙基苹果酸合酶基因（Isopropylmalate synthase,leuA）在编辑后出现了野生型和突变型混合菌株外,其余基因敲除的尝试均未成功。在大肠杆菌MG1655（DE3）的代谢改造中,基于优化的CRISPR-Cas9系统敲除代谢关键基因阻断了糖酵解途径（EMP途径）和磷酸戊糖途径（PPP途径）,并对代谢改造突变体的碳源利用及生长特性进行了研究。将N-乙酰氨基葡萄糖合成关键酶基因在代谢改造的大肠杆菌底盘工程菌中进行表达,并对发酵条件进行了优化,在摇瓶发酵试验中获得了较高的N-乙酰氨基葡萄糖的积累。具体为:通过敲除EMP途径关键基因pfkA、pfkB以及PPP途径关键基因zwf,获得果糖-6-磷酸积累的底盘工程菌,并在底盘工程菌中过表达谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶GlmS、果糖-1-磷酸酶YqaB、葡萄糖胺-6-磷酸-N-乙酰转移酶Gna-1以及甘油激酶GlpK,获得产N-乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌工程菌株。通过RT-qPCR分析了底盘工程菌代谢途径断点上下游基因的表达状况。试验结果显示,EMP途径阻断的宿主其fbaB、zwf基因表达量都上调了约6倍,表明宿主在生长压力下碳流绕过代谢断点进入了下游EMP途径并增加了PPP途径的通量。而EMP和PPP双途径阻断的宿主fruK基因上调23倍,猜测碳流可能由果糖-1-磷酸途径合成果糖-1,6-二磷酸进入EMP途径。在MK培养基中,EMP途径阻断的产物合成菌株摇瓶发酵N-乙酰氨基葡萄糖的产量达到31 mg/L,EMP、PPP双途径阻断的产物合成菌株中N-乙酰氨基葡萄糖的产量为14 mg/L。发酵培养基优化结果表明,在MK培养基中添加10%LB（MK1培养基）可有效提高突变株的生长速率和生物量。突变株经12 h发酵,生物量基本与野生株保持一致。EMP途径阻断的产物合成菌株N-乙酰氨基葡萄糖的合成量为0.69 g/L,相比于培养优化之前产量提升了约22倍,乙酸生成量相比于野生株降低了55%;EMP、PPP双途径阻断的产物合成菌株N-乙酰氨基葡萄糖的合成量提高了约200倍,由14 mg/L增加至2.8 g/L,同时乙酸生成量相比于野生株降低了64%,并且积累的乙酸可被菌体重吸收,重吸收率高达87.5%。综上,本研究基于优化的CRISPR-Cas9系统对大肠杆菌MG1655（DE3）菌株的EMP和PPP途径进行了系统的代谢改造,建立了具有优良性状的底盘工程菌株,并通过引入N-乙酰氨基葡萄糖合成途径和甘油利用基因,使菌体可同时利用甘油、葡萄糖进行生长和产物合成,提高了产物转化效率。本研究为N-乙酰氨基葡萄糖的规模化生产和推进其在饲料、医药中的应用奠定了一定的理论基础,同时拓宽了微生物代谢改造生产生物活性物质的思路。另外,本研究也对凝结芽孢杆菌的代谢改造方法进行了探索。建立和优化了凝结芽孢杆菌的质粒转化方法,为凝结芽孢杆菌的代谢改造奠定了基础。
张红印[4]（2021）在《酸枣仁蛋白的提取及其生物活性研究》文中指出酸枣仁（Semen Ziziphi Spinosae,Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bunge）Huex H.F.Chou）为鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子。主产于我国西北地区、黄河流域。酸枣仁生物活性多样、临床疗效显着,在中医临床和保健食品开发上应用较为广泛。作为首批药食同源物质,酸枣仁资源的开发与利用一直备受关注,相关研究表明,酸枣仁中含有丰富的蛋白质资源,蛋白含量约为27%,然而,目前对酸枣仁蛋白的研究较少,还未见对其功能特性和生物活性相关的深入研究,因此,为有效开发利用酸枣仁蛋白资源,探索更多潜在药用价值,对酸枣仁蛋白进行系统的生物活性研究,有十分重要的意义。目的:对酸枣仁蛋白进行提取工艺优化和生物活性研究,揭示酸枣仁蛋白的生物活性作用机制,发掘新的具有良好食物特性和保健功能的植物蛋白资源,为酸枣仁药材资源的充分利用及其相关的保健食品开发提供实验依据和数据支持。方法:1酸枣仁蛋白提取工艺参数优化:以蛋白提取率和蛋白含量为评价指标,对设计的不同提取工艺路线进行筛选,并采用单因素法和响应面法对最佳提取工艺进行提取工艺参数优选。2酸枣仁蛋白结构、理化性质和功能特性研究:采用UV、FTIR、CD和荧光光谱等光谱方法分析酸枣仁蛋白的结构组成,检测酸枣仁蛋白的蛋白分子量、氨基酸组成、溶解度、热稳定性、乳化性、持油性和持水性等理化性质和功能特性,评价酸枣仁蛋白的食品加工特性。3酸枣仁蛋白的免疫活性研究:通过体内、体外药理活性实验评价酸枣仁蛋白免疫活性,建立CTX诱导的小鼠免疫低下模型,检测小鼠脏器指数、免疫因子分泌、脾淋巴细胞增值、巨噬细胞吞噬能力和NK细胞杀伤力等指标,并对小鼠脾脏、胸腺等免疫器官进行HE染色和免疫组化分析;建立LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型,检测细胞炎症因子分泌,并基于MAPK和NF-κB信号通路探讨酸枣仁蛋白调节免疫活性作用机制。4酸枣仁蛋白的分离纯化及活性研究:采用离子交换层析和凝胶层析法,对酸枣仁蛋白进行分离纯化研究,探索具有显着生物活性的酸枣仁蛋白分离组分,并采用小鼠RAW 264.7巨噬细胞、人宫颈癌细胞Hela和人肝癌细胞Hep G2,评价酸枣仁蛋白分离组分的增强免疫和抗肿瘤活性。5酸枣仁蛋白酶解工艺优选及生物活性研究:以水解度和清除DPPH自由基能力为指标,筛选酸枣仁蛋白酶解最适酶解蛋白酶,在此基础上,以水解度为评价指标优选最适酶解工艺参数;对所得的酸枣仁蛋白酶解物进行免疫活性评价;并基于体外抗氧化试验和体内、体外抗疲劳活性试验,比较酸枣仁蛋白和酸枣仁蛋白酶解物的生物活性差异。结果:1通过比较不同蛋白提取方法,确定了碱提酸沉法为酸枣仁蛋白的最佳提取方法,并采用单因素考察和响应面法对该方法进行参数优选,确定了最佳提取工艺为液料比1:20（g/m L）、p H=10、提取温度51℃、提取时间49 min,蛋白质提取率为79.71%。对该工艺参数进行了试验验证,结果表明该工艺参数准确可行。2对酸枣仁蛋白的理化性质和功能特性进行了系统的研究,结果显示酸枣仁蛋白的二级结构主要由β-折叠构成,热变性温度为110.5℃,酸枣仁蛋白主要由分子量小于40 k Da的亚基组成,其中25、35 k Da亚基含有糖蛋白结构。氨基酸分析结果显示酸枣仁蛋白具有理想的氨基酸组成,多种必需氨基酸含量符合WHO/FAO对成人摄入量的要求。酸枣仁蛋白的持油性为2.38 g/g,持水性为3.63 g/g,并具有与大豆蛋白相似的溶解性。酸枣仁蛋白的乳化、起泡性能,随着p H值的变化呈先减小后增大的趋势。3基于CTX诱导的小鼠免疫低下模型和LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型研究了酸枣仁蛋白的免疫调节活性。结果表明,酸枣仁蛋白能够缓解CTX诱导的小鼠免疫功能降低,保护免疫器官生长状态,提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,增加小鼠血清中Ig M、Ig A、Ig G、TNF-α和IL-6等炎症相关因子的分泌,并调节免疫活性器官中CD4+、CD8+的表达;同时,酸枣仁蛋白能够促进RAW 264.7细胞得生长分化,刺激NO和炎症因子分泌,并基于MAPK和NF-κB信号通路研究了酸枣仁蛋白对RAW 264.7细胞炎症模型的调节免疫活性作用机制,结果显示,酸枣仁蛋白可通过调节MAPK和NF-κB信号通路调节JNK、ERK和IKBα蛋白表达抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症产生。4通过Sephadex G50和DEAE-Sepharose Fast Flow层析,分离纯化得到了S1F2G1和S1F2G2两个酸枣仁蛋白分离纯化组分,对各组分进行免疫活性评价,结果显示S1F2G1组分对RAW 264.7细胞具有较好的增殖活性,并能刺激细胞炎症因子分泌,其作用效果强于酸枣仁蛋白,进一步Western Blot试验表明,S1F2G1组分能够调节MAPK和NF-κB信号通路中免疫调节蛋白的表达。此外,通过CCK8法研究了各组分对肿瘤细胞活力的影响,结果显示S1F2G1组分对Hela和Hep G2细胞有较好的抑制活性,当给药浓度为400μg/m L时的抑制率分别为71.67%和54.69%。5以水解度和DPPH自由基清除率为评价指标,比较了不同蛋白酶的酶解活性,确定碱性蛋白酶为酸枣仁蛋白最适酶解蛋白酶,在此基础上优选提取工艺参数,得到了酸枣仁蛋白酶解最佳工艺为底物浓度5%,酶与底物浓度比2%,酶解温度50℃,酶解p H值8.0,酶解时间180 min;对酸枣仁蛋白酶解物进行体外免疫活性研究,结果显示,酸枣仁蛋白酶解物具有较好的免疫调节活性,并能显着抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞中ROS的产生（p<0.01）;酸枣仁蛋白及酶解物的抗氧化和抗疲劳活性表明,与酸枣仁蛋白比较,酸枣仁蛋白酶解物在超氧阴离子、羟基自由基、DPPH和ATBS+自由基清除能力等抗氧化活性检测指标均有明显提高;酸枣仁蛋白酶解物能够有效缓解运动疲劳小鼠各项检测指标,促进C2C12细胞的增殖、增加C2C12肌管中的ATP储存量和培养基中葡萄糖的消耗（p<0.01）。结论:本论文通过对酸枣仁蛋白提取工艺、结构、理化性质、功能特性的研究,获得了提取工艺稳定可行、理化性质明确、功能特性优良的酸枣仁蛋白;免疫活性研究表明,酸枣仁蛋白能够调节CTX诱导的小鼠免疫低下模型中免疫器官淋巴细胞CD4+和CD8+的表达,抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型中MAPK和NF-κB信号通路JNK、ERK、IKBα蛋白的表达,达到调节免疫的目的;在此基础上,针对具有良好免疫调节活性的酸枣仁蛋白,采用现代蛋白分离技术及酶解技术,对其进行了进一步的分离纯化及酶解研究,从中得到了免疫活性较好的酸枣仁蛋白纯化组分S1F2G1和酸枣仁蛋白酶解物,深入的实验研究表明S1F2G1组分对Hela和Hep G2肿瘤细胞具有较好的抑制作用,提示S1F2G1组分可通过MAPK和NF-κB通路的表达进而提高免疫活性而达到抗肿瘤作用;其酶解产物可在有效的免疫活性基础上发挥抗氧化及抗疲劳作用,其综上所述,酸枣仁蛋白是一种具有良好生物活性、可靠的新的植物蛋白资源和食品与功能性食品原料。
王颖[5]（2021）在《诱导肺部Th17应答的重组双亚单位铜绿假单胞菌疫苗设计、构建及其保护机制研究》文中提出研究背景:铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）是战创伤感染、院内获得性感染最常见的病原菌之一。为应对PA感染高发和高度耐药的问题,在研发新型抗生素的同时,研发PA疫苗亦迫在眉睫。迄今为止虽有多个PA疫苗进入了临床试验阶段,但仍没有PA疫苗获批上市。综合分析,现阶段PA疫苗主要依赖血清特异性抗体发挥保护效果,而无法在感染入侵的第一线发挥作用。此外,PA基因组的高度多样性也可能是现阶段疫苗研发失败的原因。因此高效诱导广谱的粘膜保护应答是成功研制PA疫苗的关键。疫苗诱导的Th17（T helper cell 17）应答在抵抗肺部病原体感染的过程中发挥关键作用。Th17应答不依赖血清特异性抗体,而主要通过募集中性粒细胞和巨噬细胞等途径发挥广谱保护效果。组织驻留记忆T细胞（Tissue resident memory T cell,TRM）长期存在于非淋巴器官,在局部粘膜组织（如皮肤、呼吸道等）发挥免疫监察和快速应对病原体感染的作用。PA感染后细胞因子IL-17A显着升高,抗体中和IL-17A后PA感染症状显着加重。减毒PA疫苗能够通过诱导Th17应答发挥抵御多种血清型PA感染的保护作用。因此我们推测鉴定可诱导粘膜Th17应答的保护性抗原,将是成功研制PA疫苗的关键。研究目的:1.基于重组PA蛋白抗原库筛选高效诱导肺部Th17应答的保护性抗原。2.明确保护性抗原中诱导Th17应答的优势表位,并以此为基础设计和构建亚单位疫苗,并研究其保护效果和机制。3.探索TRM细胞在PA疫苗介导的免疫保护中的作用及其机制。研究方法:1.制备10个纯度高、稳定性好的可溶PA抗原并经滴鼻免疫小鼠,利用流式细胞术检测肺部Th17（CD3+CD4+IL-17A+）细胞的比例和数量,评价候选抗原诱导肺部Th17应答水平的能力;采用致死剂量PA攻毒免疫后小鼠,评价候选抗原的保护效果。2.通过抗原特异性CD4+T细胞过继实验、IL-17A KO小鼠及IL-17A中和实验明确新抗原re Pcr V和re Amp C的免疫保护效果与Th17应答的关系。3.将抗原re Pcr V分别滴鼻免疫和肌注免疫小鼠,攻毒后从生存率、肺组织病理改变、细菌定植以及促炎细胞因子浓度方面比较两种免疫方式的保护效果;检测免疫后血清中anti-re Pcr V抗体效价及其OPK活性;利用流式细胞术检测肺部re Pcr V特异性Th17比例和数量。4.利用ELISpots鉴定re Pcr V和re Amp C中诱导Th17应答的优势表位,再构建并制备双亚单位抗原PVAC;将PVAC滴鼻免疫小鼠,检测其抗体效价和肺部Th17应答水平;用四株不同血清型PA临床菌株评价PVAC的广谱保护效果。5.将re Pcr V滴鼻免疫小鼠,利用流式细胞术、免疫荧光检测小鼠肺部IL-17A+CD4+TRM(CD44highCD4+CD69+CD62L-IL-17A+)的数量和比例;利用FTY720清除循环淋巴细胞后,攻毒后观察小鼠生存率、感染症状等指标变化,评价IL-17A+CD4+TRM的保护效果;亚致死剂量PA攻毒免疫后小鼠,检测感染后IL-17A+CD4+TRM比例及数量变化,抗体中和IL-17A和IFN-γ实验研究IL-17A+CD4+TRM的保护机制。研究结果:第一部分:铜绿假单胞菌诱导Th17应答的保护性抗原筛选1.诱导Th17应答水平排名前三的抗原是re Opr L、re Amp C和re Pcr V,其免疫后小鼠生存率分别为50%、50%和100%,其余候选抗原组小鼠生存率与对照组比均无显着差异。re Amp C和re Pcr V为本研究首次发现可诱导Th17应答的保护性抗原。2.Re Pcr V滴鼻免疫组（I.n）小鼠生存率显着高于肌注免疫组（I.m）。与I.m组相比,I.n组肺部炎症较轻、细菌定植量和促炎细胞因子水平较低,表明re Pcr V滴鼻免疫保护效果优于肌注免疫。虽然I.n组血清anti-re Pcr V Ig G效价显着低于I.m组,但两种免疫血清的OPK活性无显着差异;I.n组诱导肺部re Pcr V特异性Th17细胞的比例及数量显着高于I.m组。第二部分:re Pcr V和re Amp C保护效果依赖于Th17应答1.过继re Pcr V或re Amp C滴鼻免疫小鼠来源的CD4+T细胞给naive小鼠,攻毒后发现其肺部细菌定植量、肺部炎症改变和炎症因子水平显着低于对照组;经re Pcr V或re Amp C免疫的IL-17A KO小鼠,攻毒后生存率分别为30%和10%,显着低于野生型小鼠;经re Pcr V或re Amp C免疫小鼠使用抗体中和IL-17A后,攻毒后的生存率分别降低至30%和0%,显着低于对照组。2.Re Amp C滴鼻免疫小鼠的血清特异性抗体无显着OPK活性。第三部分:诱导Th17应答的表位筛选及融合疫苗构建和保护效果评价1.Re Pcr V中诱导Th17应答的优势表位分别为Pcr V8-25、Pcr V29-46、Pcr V43-60、Pcr V57-74、Pcr V64-81、Pcr V78-95、Pcr V92-109、Pcr V106-123、Pcr V197-214、Pcr V218-235;Re Amp C中诱导Th17应答的优势表位为Amp C64-81、Amp C78-95、Amp C99-116、Amp C155-172、Amp C169-186、Amp C183-200、Amp C204-221、Amp C281-298。2.成功构建并在大肠杆菌中表达多表位融合疫苗抗原PVAC（取re Pcr V N端[27Glu-126Gly]用GSGGSG Linker连接至re Amp C全长）,经纯化后获得纯度为87.6%的PVAC蛋白;PVAC免疫后血清抗体效价及肺部Th17应答水平均显着高于未免疫组;PVAC免疫小鼠后分别使用致死剂量的临床菌株PA 464、PA XN-1、PA ZNJ004和PA 451（血清型分别为F、I、J和A型）攻毒,小鼠生存率分别为70%、60%、100%和50%,均显着高于未免疫组。第四部分:TRM在re Pcr V滴鼻免疫增强保护的作用机制研究1.Re Pcr V滴鼻免疫后肺CD4+IL-17A+TRM细胞的比例显着高于未免疫组,但CD4+IFN-γ+TRM细胞的比例无显着变化;免疫荧光结果显示,re Pcr V免疫组小鼠肺CD69+IL-17A+细胞较未免疫组明显增多;RT-PCR结果表明,re Pcr V免疫后肺CD4+T细胞Hobit、Blimp-1和RORγt的m RNA水平显着高于未免疫组,而T-bet的m RNA水平与未免疫组相比无显着差异。2.FTY720耗竭循环淋巴细胞后致死剂量PA攻毒小鼠,结果显示re Pcr V免疫组小鼠生存率为50%,显着高于未免疫组;亚致死剂量攻毒后免疫组小鼠的疾病评分、体重变化、肺部细菌定植量及炎症病理评分均显着低于未免疫组;re Pcr V免疫组小鼠肺部CD4+IL-17A+TRM细胞的比例显着高于未免疫组,免疫荧光观察发现re Pcr V滴鼻免疫组小鼠肺部CD69+IL-17A+细胞相较未免疫组明显增多;抗体中和IL-17A后re Pcr V免疫组小鼠生存率为0%,显着低于非特异性抗体处理组,而抗体中和IFN-γ后re Pcr V免疫组小鼠生存率无显着变化。研究结论及意义:1.首次发现滴鼻免疫re Pcr V和re Amp C能够诱导小鼠肺部保护性Th17应答。2.与肌注免疫相比,re Pcr V滴鼻免疫可增强免疫保护效果,与其诱导的肺部Th17应答相关。3.鉴定出re Pcr V和re Amp C中诱导Th17应答的优势表位,以此为基础成功构建并制备双亚单位融合抗原PVAC,并证明其可抵御四种不同血清型PA菌株的肺部感染。4.Re Pcr V滴鼻免疫可诱导小鼠肺部IL-17A+CD4+TRM细胞产生并在抗PA感染中发挥作用。5.PVAC在一定程度上解决了传统PA疫苗很难诱导粘膜应答和基因组高度变异的难题,为下一步成功研发PA疫苗打下坚实的基础,也为及其它呼吸道感染病原体疫苗的研发提供了思路。
齐金铭[6]（2021）在《基于β-葡聚糖与甘露聚糖修饰的寨卡病毒重组蛋白疫苗》文中研究指明寨卡病毒（ZIKV）是一种单股正链RNA病毒,因严重威胁全球公共卫生而受到广泛关注。寨卡病毒可造成先天性小头畸形,以及成人严重的神经系统疾病格林-巴利综合征等。由于寨卡病毒既通过蚊媒传播,又可通过非媒介传播途径传播,控制寨卡疾病的传播比较困难,且感染寨卡病毒后有较高的致病风险和严重的健康威胁。因此,研制安全有效的寨卡病毒疫苗显得极其重要和紧迫。重组蛋白疫苗是一种包含病毒抗原蛋白的新型疫苗,因其良好的安全性受到研究者们的广泛青睐。但由于病毒抗原本身的免疫原性较弱,需要添加佐剂以及选择合适的递送系统,使其可以诱导强大的体液免疫与细胞免疫。E蛋白作为寨卡病毒的关键结构蛋白,是研制寨卡疫苗的理想抗原。为增强E蛋白的免疫原性,需要在抗原中加入佐剂。β-葡聚糖作为一种多糖佐剂,可以激活巨噬细胞并触发细胞免疫反应,将E蛋白与β-葡聚糖共价偶联是一种提高E蛋白免疫原性的策略。然而,E蛋白的抗原表位和β-葡聚糖的免疫调节位点在偶联物中会被屏蔽,此外,偶联物也可能会引发对β-葡聚糖的非预期免疫反应。因此,将酸敏感的腙键和硫醇敏感的二硫键用作E蛋白和β-葡聚糖之间的连接键,得到偶联物E-PS-4。当偶联物进入免疫细胞后,在溶酶体中的低pH及细胞质中高水平谷胱甘肽的作用下,导致腙键水解和二硫键还原,使E蛋白与β-葡聚糖充分解离,克服了抗原表位和免疫调节位点被屏蔽的缺点。与不含腙键和/或二硫键的偶联物相比,E-PS-4刺激产生了高水平的E蛋白特异性IgG,是E蛋白组的27倍,且β-葡聚糖特异性IgG滴度降低了 8倍,并且可诱导分泌高水平的IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-10。此外,E-PS-4可促进树突状细胞的活化,且对器官没有明显的毒副作用。药代动力学研究表明,E-PS-4在血清中的半衰期延长为E蛋白的3.3倍,清除速率降为1/5。因此,E蛋白通过腙键和二硫键与β-葡聚糖结合,可以刺激机体产生较强的细胞和体液免疫反应。EDⅢ蛋白是寨卡病毒E蛋白的第三结构域,包含了大部分中和抗体表位,且不会引起抗体依赖增强（ADE）效应。然而,EDⅢ蛋白必须与佐剂和抗原递送系统一起使用,以提高其免疫原性。血红蛋白（Hb）可以调节炎症和细胞因子水平,并激活巨噬细胞。甘露聚糖（Mannan）是组成真菌细胞壁的多糖,具有免疫调节活性。因此,我们将EDⅢ、血红蛋白和甘露聚糖共价结合,血红蛋白和甘露聚糖均作为佐剂,先进行共价结合,偶联物（HM）作为递送系统,以二硫键为连接键与EDⅢ偶联,得到偶联物HM-EDⅢ-2。通过细胞内高水平谷胱甘肽环境下二硫键的断裂,可以实现EDⅢ与HM在细胞内的有效分离。结构分析表明,与HM偶联后,可以基本维持EDⅢ的二级和三级结构。免疫学研究表明,与EDⅢ相比,HM-EDⅢ-2的EDⅢ特异性IgG滴度增长了 29倍,并可分泌高水平的IFN-γ、IL-2、IL-5和IL-10细胞因子,并且对器官没有明显的毒性。此外,药代动力学研究显示,HM-EDⅢ-2在血清中的半衰期延长为EDⅢ组的2倍,清除速率降为1/10。因此,HM-EDⅢ-2可以增强对EDⅢ的体液和细胞免疫应答。我们的研究有望为开发一种安全有效的寨卡病毒疫苗提供一种途径。
周天姣[7]（2021）在《生慧颗粒的制备工艺与益智延寿药效物质基础研究》文中研究说明第一部分生慧颗粒制备工艺研究目的:目前我国人口老龄化形势日益严峻,作为常见的老年病,阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）的发病率呈现上升趋势,由于其难治性和发病机制不确定性,必将长期成为医学研究的热点。生慧汤载于清代名医陈士铎的《辩证录?健忘门》,全方由熟地黄、石菖蒲、山茱萸、远志、柏子仁（去油）、酸枣仁、茯神、人参、白芥子九味中药组成,具有益气养血,交通心肾的功效,临床上常用于治疗老年性痴呆。我校老年医学研究所多年的临床实践证明,生慧汤具有良好的改善学习记忆能力和防治失眠的功效。原方为汤剂,未建立起一套控制质量的规范,且具服用量大、不易携带等缺点,因此本研究团队运用传统工艺及现代分析技术将其开发为医院制剂,以期克服汤剂所存在的不足之处。生慧汤水提物收膏率较高,故选择将其制成颗粒剂,生产过程简单、易于贮藏运输、患者服用的顺应性高、作用迅速,利于医院药剂室使用,能较好满足其临床运用的目的。方法:生慧颗粒制备工艺研究包括提取工艺、纯化工艺、浓缩干燥工艺、成型工艺的研究。采用正交试验法,以莫诺苷和马钱苷的总含量及干膏得率为评价指标优选水提工艺,并进行验证试验。为减少日服剂量,同时考虑到实际生产中经济便捷的要求,选择静置纯化,在室温与冷藏两种情况下,分析静置时间对评价指标的影响,并对浓缩干燥工艺进行考察。在成型工艺中,以吸湿率、成型性、流动性为评价指标,优选辅料种类、辅料用量与制粒条件。按照最佳制备工艺制备生慧颗粒,根据2015版《中国药典》四部制剂通则0104对生慧颗粒进行相应的检查。优选出的最佳制备工艺参数为:全方药材浸泡1小时,补足药材吸水量,加至10倍量的水,提取2次,每次1.5小时;提取液在室温下（25℃）静置12小时,吸取上清液,浓缩至相对密度为1.07-1.08（60℃）的清膏,加入0.5-1倍左右干膏量的糊精,混匀,置60℃减压干燥箱中干燥,研磨至粉,喷洒80%乙醇过1号筛制软材,置60℃干燥,用1号筛与5号筛整粒,制备的颗粒均符合2015版《中国药典》四部制剂通则0104的各项检查。结果:结论:本试验优选的制备工艺切实可行,验证三批小试结果均符合规定,小试工艺条件经中试进一步调整后,可过渡到产业化生产。第二部分基于系统生物学的生慧颗粒益智药效物质与机理研究目的:本部分基于网络药理学与秀丽隐杆线虫试验,对生慧颗粒防治AD的药效物质基础、作用机制进行了初步研究,以期为生慧颗粒的临床应用提供科学依据以及为中药复方防治AD开拓新思路。方法:1.生慧颗粒防治AD的网络药理学研究:首先通过TCMSP等中药数据库对方中9味中药的化学成分进行系统的整理分析,随后运用UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS色谱技术进行定性分析,以现有的对照品结合色谱图、质谱离子片段的保留时间和相关文献筛选出与AD靶点密切相关的活性成分;由薄层色谱（TLC）-生物自显影技术快速检测生慧颗粒中抗氧化活性成分;通过计算AD与非AD患者基因表达差异探索生慧颗粒成分作用的核心靶点,由KEGG与GO富集分析寻找生慧颗粒防治AD的多种潜在作用机制。2.生慧颗粒的药理学研究:选择秀丽隐杆线虫作为试验模式生物,通过百草枯氧化胁迫试验筛选生慧颗粒具有抗氧化活性的最佳药物浓度;通过寿命试验考察生慧颗粒抗衰老、延寿药理作用;通过趋化以及短期联想学习记忆试验,以期证实生慧颗粒的提高学习记忆能力、改善健忘的功效;运用UHPLC-QQQ-MS色谱技术检测秀丽隐杆线虫给药后神经递质的含量变化,以期阐释生慧颗粒具有增强学习记忆能力作用机制。结果:1.利用网络药理学分析得到93种化学成分,结合UHPLC-LTQ-Orbitrap色谱技术,筛选出其中5种与AD靶点密切相关的共同活性化合物,即芦丁、芥子酸、金丝桃苷、槲皮苷、山萘酚;由TLC-生物自显影试验证实生慧颗粒中这五种成分具有抗氧化活性,同时一些具有较强抗氧化作用的未知成分尚需要通过富集、结构鉴定加以确认;由Drug Bank分析,一共得到202个靶点,其中169个靶点与AD相关,19个靶点与AD直接作用,联合蛋白互作网络（PPI）结果发现,ADRA1B、ADRA1A、ADRA1D、ADRB2、F2、GABRA2、GABRA1、CHRM2、CHRM1、CHRM3这10个靶点主要与神经元-突触有关;由生物过程和信号通路富集分析得到生慧颗粒防治AD可能与调节肾上腺素能受体、神经元-突触通路、胆碱能通路有关。2.百草枯氧化胁迫试验优选的最佳药物浓度为40 mg/ml。以最佳浓度开展的寿命试验结果表明,生慧颗粒与化合物芥子酸均能显着延长野生型秀丽隐杆线虫的生存时间;短期联想学习记忆试验结果表明,生慧颗粒组比空白组的联想记忆能力更强,至遗忘的时间点更远;UHPLC-QQQ-MS色谱技术检测神经递质试验结果表明,与空白组相比给药组的肾上腺素（Epi）、谷氨酸（Glu）水平显着降低,多巴胺（DA）、γ-氨基丁酸（GABA）水平显着升高。结论:1.芦丁、芥子酸、金丝桃苷、槲皮苷、山萘酚为生慧颗粒中与AD靶点密切相关的主要活性成分,其良好的抗氧化活性可能是生慧颗粒防治AD的主要药效物质基础。2.生慧颗粒可能通过调节肾上腺素能受体等生物过程,影响核心靶蛋白的表达,作用于神经元-突触通路、胆碱能通路发挥药效。3.生慧颗粒对秀丽隐杆线虫具有抗氧化应激、延寿、增强联想记忆能力的药理活性。4.生慧颗粒可以调节秀丽隐杆线虫的DA、Glu、GABA和Epi等神经递质水平,这可能是使其学习记忆能力提高的因素之一。
孙烁[8]（2021）在《多孔聚醚醚酮微球的制备、表面改性及在骨修复中的应用》文中研究表明研究目的:制备基于聚醚醚酮材料的多孔微球并进行表面改性处理,探究其在骨修复中的应用。材料与方法:1、前期工作中,利用液-液相置换法已制备出表面光滑的PEEK微球。本研究对光滑PEEK微球进行羟化处理,制备出多孔PEEK微球,对其进行电镜观察、傅里叶红外分析、压汞仪、水接触角、蛋白吸附能力和浸提液细胞毒性测试。进一步利用矿化培养和反复脱细胞技术,将矿化细胞外基质包被于多孔PEEK微球表面。使用电镜对矿化细胞外基质进行形貌观察,利用能量散射X线光谱仪和热重分析仪分别对其进行定性和定量检测。2、对多孔PEEK微球和表面包被矿化细胞外基质的多孔PEEK微球进行体外生物形容性和体内成骨性能瓶评估。通过钙黄绿素染色和电镜观察不同微球表面MC3T3-E1细胞黏附和细胞外基质分泌情况,DAPI染色和CCK法评估微球对于细胞增殖的影响。利用碱性磷酸酶染色和活性检测、茜素红染色和钙定量检测、Runx2和Col-1两种成骨相关基因表达情况评估微球体外成骨活性。构建大鼠颅骨缺损模型,通过Mirco-CT重建分析和组织切片苏木精-伊红和马松染色进一步评估微球的体内成骨效果。3、利用多巴胺（dopamine,DA）涂层的黏附特性,将胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor 1,IGF-1）和骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）同时固定于多孔PEEK微球。对于黏附DA涂层后的微球进行颜色和表面形貌观察,利用X线光电子能谱分析表面元素组成和比例,接触角评估亲水性。酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）对微球表面黏附的生长因子量和14天内的释放行为进行分析。利用碱性磷酸酶染色和活性检测、茜素红染色和钙定量检测、Runx2、OPN和OCN三种成骨相关基因表达情况评估微球体外成骨活性。构建大鼠颅骨缺损模型,通过Mirco-CT重建分析和组织切片苏木精-伊红和马松染色进一步评估微球的体内成骨效果。结果:1、电镜观察表明,经过羟化处理后,多孔PEEK微球球形度保持良好,表面孔隙结构分布均匀。傅里叶红外分析显示,多孔微球表面羰基峰强度降低且出现新的羟基峰。压汞仪检测显示,多孔微球的孔隙率大于90%,平均孔径为569.72nm。同光滑微球相比,多孔微球的水接触角显着降低,蛋白吸附能力有所提升。经矿化培养和反复脱细胞处理后,微球表面经元素分析发现有氮、钙和磷元素的出现。通过电镜观察发现,随着脱细胞次数的增加,多孔微球表面包被的矿化细胞外基质更致密且分布更加均匀。热重分析仪的结果显示,随着脱细胞次数的增加,微球在400℃下的质量损失可从6.41%升至12.38%。多孔PEEK微球的浸提原液和稀释一倍后,其细胞存活率分别大于85%和95%。2、微球与MC3T3-E1细胞共培养后,在各观察时间点,钙黄绿素、DAPI染色、CCK检测和电镜观察显示,同光滑微球相比,多孔微球表面的细胞数目更多,细胞多呈扁平球状且伪足更多,细胞黏附状态更佳且细胞外基质的分泌更旺盛。随着脱细胞次数的增加,微球表面黏附的细胞量和CCK法检测细胞增殖的吸光度值不断提高。经碱性磷酸酶染色和茜素红染色,多孔微球表面的着色较光滑微球明显加深,碱性磷酸酶的活性、钙定量分析、Runx2和Col-1的表达水平也显着提高。多孔微球表面在包被矿化细胞外基质后,其上述体外成骨能力检测指标均进有明显提升。Micro-CT重建显示,包被矿化细胞外基质的微球组,4周时颅骨缺损区域已基本被覆盖,8周时其骨密度明显高于其它两组,骨组织分数分别为42.19±2.80%和65.19±1.63%,同样显着高于其它两组。组织切片染色发现,光滑微球周围以纤维组织包裹为主,且不能与周围新生组织形成强有力的键合,导致切片中出现较多的微球缺失。多孔微球周围则以新生骨组织为主,与周围新生组织键合紧密,没有出现微球缺失的情况。表面包被矿化细胞外基质的微球周围以成熟骨组织为主,结构致密且周围有较多新生血管。3、多孔微球表面黏附DA涂层后,颜色由之前的白色变为均一的灰黑色,电镜观察则无明显变化。元素分析表明黏附DA涂层后,微球表面出现氮元素,定量分析表明,DA涂层黏附IGF-1后,氮元素占比由1.58%升至1.71%。DA涂层可以将多孔微球的水接触角由65.88±4.55°降至51.08±3.7°。ELISA检测证实,DA涂层可将生长因子固定于多孔PEEK微球且在14天内具有较为缓慢的释放曲线。微球与MC3T3-E1细胞共培养后,在各观察时间点,钙黄绿素、DAPI染色、CCK检测显示,含有IGF-1的微球组细胞黏附状态更佳且细胞数目更多,CCK检测表明,双生长因子组的增值率略低于IGF-1组,差异无显着性,但显着高于其它各组。经碱性磷酸酶染色和茜素红染色,含BMP-2的微球组着色明显加深,但单一BMP-2组与双生长因子差异不明显。含有双生长因子微球的碱性磷酸酶活性、钙定量分析、14天时Runx2、OPN和OCN的表达水平也显着高于其它各组。MicroCT重建显示,双生长因子组在8周时不仅能将缺损区域完全覆盖,且其骨密度较高,骨缺损区域的中央几乎与缺损边缘等高。冠状位CT影像上可观察到在可透射线PEEK微球的上方有骨性连接,形成“骨桥”结构,将骨缺损边缘和中央区的新生骨进行连接。双生长因子组在8周时的骨组织分数为85.79±6.20%,显着高于其它各组。组织切片染色观察可见,双生长因子组骨组织结构致密且以成熟骨组织为主,血管更为密集。结论:1、光滑PEEK微球经过羟化处理后可制备出表面孔隙结构均一的多孔PEEK微球。2、通过改变接收液的温度和成分比例可以调控微球表面的孔径大小。3、利用矿化培养和脱细胞技术,可以在多孔PEEK微球表面成功包被矿化细胞外基质,且随着脱细胞次数的增加其质量分数更高、分布更均匀。4、多孔微球同光滑微球比更有利于细胞的黏附、增殖,促进了细胞外基质的分泌。5、多孔PEEK微球在表面包被矿化细胞外基质后,进一步促进了细胞的黏附和增殖,提高了碱性磷酸酶的活性、钙质沉积能力和成骨相关基因表达水平,大鼠颅骨缺损的修复效果更优异。6、DA涂层可将IGF-1和BMP-2两种生长因子固定于多孔PEEK微球,在14天内均有较为缓慢的释放行为。7、负载双生长因子的微球同单一种类生长因子相比,其体外成骨诱导能力和大鼠颅骨缺损修复效果均有所提高。本研究的创新之处:1、通过羟化处理,一步法实现微球表面化学和物理双改性。2、利用矿化培养和反复脱细胞技术在微球表面成功包被矿化细胞外基质。3、IGF-1和BMP-2联用促进骨修复效果,可降低单一生长因子使用剂量。
肖玲玲[9]（2021）在《基于蛋白质及稀土调控的生物医用粘合剂》文中指出传统的高强度粘合剂如氰基丙烯酸酯,聚氨酯等在工业和日常生活中均有重要的应用,但是这些材料也存在明显的不足。它们在自然环境中极难降解或易产生有毒降解物,在人体环境下降解产物易诱发组织细胞产生炎症反应,生物相容性差,并且在聚合过程中会因化学交联大量放热刺激损伤细胞,降低了它们在生物领域的应用价值。为了解决这一问题,海洋类生物如贻贝、沙塔蠕虫等由于其优良的潮湿环境粘附性能而受到广泛关注,但目前这类生物基仿生材料的粘合强度仍低于传统的高分子粘合剂,使其在生物医学和高技术领域的应用受到了限制。因此,开发一种可降解、生物相容性好、无毒、高粘合强度的生物基医用粘合剂具有十分重要的意义。本课题中,以类弹性蛋白序列为基础,通过基因工程技术对蛋白进行改造,构建了具有高黏附性的非交联体系的蛋白粘合剂材料。另外,以鱼鳔为原材料制备了多糖—蛋白混合体系生物医用粘合剂材料,为生物粘合剂发展提供了新策略。主要研究内容如下:首先以类弹性蛋白序列为基础,以带电荷的赖氨酸或谷氨酸残基取代其（VPGXG）n重复序列中的第四个氨基酸设计出目的蛋白一级结构。通过基因工程技术构建出表达载体质粒,使重组基因在大肠杆菌内表达,经过分离纯化后得到超电荷蛋白。探究了超电荷蛋白与几种表面活性剂形成的复合物的粘合特性及生物相容性。这类粘合剂在铁片、玻璃片等底片上的剪切黏合强度可以达到10MPa以上,并且具有良好的生物相容性及可降解性,能促进大鼠皮肤伤口的修复和愈合。为了进一步提高粘合剂的粘合强度,在含有邻苯二酚基团的表面活性剂中引入稀土铽离子和酚羟基形成配位交联,得到了稀土复合粘合剂。剪切粘合强度测试表明,稀土铽离子掺杂后的粘合剂的粘合性能较掺杂前有了明显提升。这表明稀土离子在提高生物医用粘合剂的机械强度上有潜在价值。其次,在上述重组蛋白的基础上,引入了一段具有温度响应性的类弹性蛋白片段,通过基因工程的方法在大肠杆菌中表达出融合的目的蛋白V40K72。由于目的蛋白本身带有较多正电荷,可以和带负电的十二烷基苯磺酸钠（SDBS）形成团聚体。该团聚体具有明显的温度诱发的相变性能,在潮湿环境下,剪切粘合强度随温度的变化而显着变化。最后,我们以鱼鳔为原材料制备了具有高粘合强度的鱼鳔胶。在玻璃、木材、云母等底片上,鱼鳔胶均展现了优良的粘合性能,剪切粘合强度最高可达到18MPa以上。以带有皮下脂肪组织的新鲜猪皮作为底片,鱼鳔胶的粘合强度也可达到150kPa以上。动物皮肤伤口活体实验表明,鱼鳔胶粘合的大鼠伤口愈合天数明显短于氰基丙烯酸酯医用胶,并且可以减少瘢痕的形成,生物相容性好。相对于其他的工程化蛋白类的胶黏剂,鱼鳔胶成本低廉,在动物活体皮肤组织和硬底片上均有良好的粘合性能。
苏月莹[10]（2021）在《基于咪唑类季铵盐细菌表面涂层的构建及其群体感应介导的抗菌作用机制探究》文中研究指明病原微生物的识别和灭活一直是预防与控制微生物引起的传染性疾病的一个巨大挑战。近年来,阳离子聚合物因其易修饰、两亲性和显着的广谱抗菌效果而引起了研究者们的高度重视。然而,广谱抗生素的滥用可能会大大提高细菌耐药性的可能性。因此研发靶向抗菌药物或者赋予抗菌药物以靶向特异性来调节菌群平衡,对于解决细菌耐药性问题和更好地维持人类微生态环境的平衡具有深远的意义。基于此,本论文进行了如下研究:我们将咪唑类季铵盐和葫芦脲[7]通过主客体相互作用形成复合物p BPI?CB[7]（PC）,接着利用原子自由基聚合（ATRP）将其接枝在大肠杆菌（E.coli）细胞表面构建了一种原位聚合体系,得到E.coli@PC（E@PC）复合物。此外,以100 nm和500 nm的二氧化硅（Si O2）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）、耐氨苄青霉素钠大肠杆菌（E.coli p UC19）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）为模板,采用与制备E@PC相同的方法,制得四种相应的复合物Si@PC、S@PC、EA@PC、MS@PC。以E.coli、S.aureus为实验指示菌,采用平板计数法和活死细胞染色法,验证了E@PC的抗菌性能。通过主客体作用,证明了E@PC能够按需可逆地开启和关闭抗菌活性。最后,利用细菌形态的变化、细胞膜电位的改变、DNA及离子泄漏情况对E@PC的抗菌作用机制进行了系统的探究。通过平板计数法和最小抑菌浓度（MIC）法,探究了以细菌模板制得的四种“细菌@PC”对模板菌的特异性识别和强效抗菌性能。此外,本文采用一步失活法敲除了E.coli产生群体感应（QS）信号和编码鞭毛蛋白的相关基因,并以敲除基因的E.coli为指示菌,探究了其对E@PC的敏感性,研究表明复合物E@PC对模板菌的特异性杀菌是源于细菌之间的QS。
二、氨基苄青霉素钠(无菌粉)冷冻干燥工艺（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、氨基苄青霉素钠(无菌粉)冷冻干燥工艺（论文提纲范文）
（1）废弃丁羟推进剂粘合体系生物降解方法及机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词一览表 |
| 1.绪论 |
| 1.1 丁羟推进剂概述 |
| 1.2 聚氨酯概述 |
| 1.2.1 聚氨酯的交联固化反应 |
| 1.2.2 聚氨酯的分子结构特点 |
| 1.2.3 聚氨酯的老化降解 |
| 1.3 废弃丁羟推进剂的处理方法 |
| 1.4 废弃聚氨酯的处理方法 |
| 1.5 聚氨酯生物降解研究进展 |
| 1.5.1 国外方面 |
| 1.5.2 国内方面 |
| 1.6 可生物降解材料的评价方法 |
| 1.6.1 生物降解实验方法 |
| 1.6.2 生物降解分析方法 |
| 1.7 本课题的研究意义与内容 |
| 1.7.1 研究意义 |
| 1.7.2 研究内容 |
| 2.HTPB/TDI粘合体系的生物降解性 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料、仪器及方法 |
| 2.2.1 材料与仪器 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 粘合体系胶片的重量损失 |
| 2.3.2 粘合体系胶片的FT-IR分析 |
| 2.3.3 粘合体系胶片的TG分析 |
| 2.3.4 粘合体系胶片的SEM分析 |
| 2.3.5 HTPB基聚氨酯难以生物降解的原因分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 3.HTPB/TDI粘合体系的预处理 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 HTPB/TDI粘合体系的解聚 |
| 3.2.1 材料与仪器 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.2.3 结果与讨论 |
| 3.3 端羟基解聚产物的环氧化 |
| 3.3.1 材料与仪器 |
| 3.3.2 方法 |
| 3.3.3 结果与讨论 |
| 3.4 紫外光照射预处理 |
| 3.4.1 材料、仪器及方法 |
| 3.4.2 结果与讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 4.预处理物降解效用菌的筛选及降解能力 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料、仪器及方法 |
| 4.2.1 材料与仪器 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 降解效用菌的初筛、驯化与复筛、分离与纯化 |
| 4.3.2 降解效用菌对环氧化产物的降解 |
| 4.3.3 降解效用菌的鉴定 |
| 4.4 本章小结 |
| 5.效用菌对预处理物的降解产物及机理分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料、仪器及方法 |
| 5.2.1 材料与仪器 |
| 5.2.2 方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 降解产物的GC-MS分析 |
| 5.3.2 酶蛋白的提取及SDS-PAGE分析 |
| 5.3.3 降解机理讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 6.效用菌对解聚产物与HTPB基聚氨酯的降解 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料、仪器及方法 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 效用菌对解聚产物的降解能力 |
| 6.3.2 效用菌对HTPB基聚氨酯的降解能力 |
| 6.4 本章小结 |
| 7.效用菌降解条件的优化 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 实验材料、仪器及方法 |
| 7.2.1 材料与仪器 |
| 7.2.2 方法 |
| 7.3 结果与讨论 |
| 7.3.1 复合碳源条件下环氧化产物的降解 |
| 7.3.2 表面活性剂条件下环氧化产物的降解 |
| 7.4 本章小结 |
| 8.结论与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文及所取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）盐环境来源微生物多相分类及嗜盐古菌基因组适应性与演化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 盐环境与微生物 |
| 1.1.1 盐环境的多样性 |
| 1.1.2 盐环境中微生物的多样性 |
| 1.1.3 微生物的耐盐或嗜盐机制 |
| 1.1.4 嗜盐微生物的应用 |
| 1.2 微生物多相分类学 |
| 1.2.1 微生物分类学的发展 |
| 1.2.2 微生物多相分类学的研究内容 |
| 1.2.3 组学时代微生物多相分类学的挑战 |
| 1.3 高通量测序技术 |
| 1.3.1 测序技术的发展历程 |
| 1.3.2 微生物基因组研究 |
| 1.3.4 宏基因组研究 |
| 1.4 嗜盐古菌 |
| 1.4.1 古菌——生命的第三域 |
| 1.4.2 嗜盐古菌概述 |
| 1.4.3 嗜盐古菌的基因组研究 |
| 1.4.4 基因组中新基因的起源与演化 |
| 1.5 本研究的目的、意义与内容概述 |
| 第二章 典型盐湖的微生物多样性和群落结构研究 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 环境和样品 |
| 2.1.2 培养基 |
| 2.1.3 菌株的分离与保藏 |
| 2.1.4 16S r RNA基因序列分析 |
| 2.1.5 多样性指数计算方法 |
| 2.1.6 宏基因组分析方法 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 阿牙克库木湖群落结构分析 |
| 2.2.2 玛纳斯湖群落结构分析 |
| 2.2.3 其他盐湖可培养微生物多样性 |
| 2.2.4 盐湖可培养微生物多样性指数分析 |
| 2.2.5 盐湖可培养微生物群落结构比较 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 6 株盐环境来源微生物多相分类学研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 菌株来源 |
| 3.1.2 菌株的培养与保藏 |
| 3.1.3 多相分类学研究方法 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 菌株WM3~T的多相分类学研究结果 |
| 3.2.2 菌株B3~T的多相分类学研究结果 |
| 3.2.3 菌株15181~T的多相分类学研究结果 |
| 3.2.4 菌株15182~T的多相分类学研究结果 |
| 3.2.5 菌株63075~T的多相分类学研究结果 |
| 3.2.6 菌株W635~T的多相分类学研究结果 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 嗜盐古菌基因组适应性与演化研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 菌株来源 |
| 4.1.2 测序方案的选择 |
| 4.1.3 菌株Salinigranum rubrum GX10~T基本信息 |
| 4.1.4 菌株GX10~T培养基和培养条件 |
| 4.1.5 基因组DNA的提取和检测 |
| 4.1.6 测序和组装 |
| 4.1.7 基因组注释及分析 |
| 4.1.8 菌株GX10~T新基因注释与分析 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 测序所获得的基因组 |
| 4.2.2 菌株GX10~T基因组DNA提取结果 |
| 4.2.3 菌株GX10~T测序和组装结果 |
| 4.2.4 菌株GX10~T基因组基本特征 |
| 4.2.5 菌株GX10~T基因COG功能注释 |
| 4.2.6 菌株GX10~T对高盐环境的适应分析 |
| 4.2.7 菌株GX10~T对强辐射环境适应机制分析 |
| 4.2.8 菌株GX10~T CRISPR-Cas系统相关基因 |
| 4.2.9 菌株GX10~T基因组中重金属抗性与代谢相关的基因 |
| 4.2.10 菌株GX10~T新基因的起源与演化 |
| 4.2.11 菌株GX10~T基因组中嗜盐酶相关基因 |
| 4.2.12 菌株GX10~T基因组中PHA合成相关基因 |
| 4.3 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 Ⅰ 细菌多相分类学鉴定方法 |
| 附录 Ⅱ 嗜盐古菌模式菌株基因组圈图 |
| 附录 Ⅲ 新基因注释用到的代码 |
| 攻读学位期间发表的学术论文(含待发表) |
| 致谢 |
（3）代谢工程改造大肠杆菌和凝结芽孢杆菌生产生物活性物质（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 凝结芽孢杆菌概述 |
| 1.1.1 凝结芽孢杆菌的生理特性 |
| 1.1.2 凝结芽孢杆菌的应用 |
| 1.2 大肠杆菌概述 |
| 1.2.1 大肠杆菌基因组特性 |
| 1.2.2 大肠杆菌的应用 |
| 1.3 基因编辑技术 |
| 1.3.1 ZFN基因编辑技术 |
| 1.3.2 TALEN基因编辑技术 |
| 1.3.3 CRISPR-Cas基因编辑技术 |
| 1.4 N-乙酰氨基葡萄糖概述 |
| 1.4.1 N-乙酰氨基葡萄糖的结构及性质 |
| 1.4.2 代谢工程改造微生物合成N-乙酰氨基葡萄糖研究进展 |
| 1.5 生物活性物质的检测方法 |
| 1.5.1 离子交换色谱法(IC)及衍生技术 |
| 1.5.2 气相色谱/质谱联用法(GC/MS) |
| 1.5.3 高效液相色谱法(HPLC)及衍生技术 |
| 1.6 本研究的内容与意义 |
| 1.6.1 本研究的内容 |
| 1.6.2 本研究的意义 |
| 第二章 大肠杆菌和凝结芽孢杆菌CRISPR-Cas9 基因编辑工具的建立 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌株及质粒 |
| 2.1.2 培养基及试剂的配制 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 引物设计、基因合成及核酸测序 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大肠杆菌CRISPR-Cas9 基因编辑工具的建立 |
| 2.2.2 凝结芽孢杆菌CRISPR-Cas9 基因编辑工具的建立 |
| 2.3 实验结果与分析 |
| 2.3.1 大肠杆菌CRISPR-Cas9 基因编辑方法的建立 |
| 2.3.2 凝结芽孢杆菌CRISPR-Cas9 基因编辑方法的建立 |
| 2.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第三章 代谢工程改造大肠杆菌生产N-乙酰氨基葡萄糖 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验菌株与质粒 |
| 3.1.2 培养基及试剂的配制 |
| 3.1.3 试剂及试剂盒 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.1.5 引物设计、基因合成及核酸测序 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 质粒构建与转化 |
| 3.2.2 工程菌株构建 |
| 3.2.3 菌体生长曲线绘制 |
| 3.2.4 碳源利用测定 |
| 3.2.5 大肠杆菌MG1655-?pfk A?pfk B?zwf菌株和MG1655-?pfk A?pfk B菌株RT-qPCR表征 |
| 3.2.6 产N-乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌菌株发酵及产物检测 |
| 3.3 实验结果与分析 |
| 3.3.1 产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌底盘细胞的构建 |
| 3.3.2 基因敲除对碳源分解代谢的影响 |
| 3.3.3 RT-qPCR检测突变株代谢通路中的关键基因 |
| 3.3.4 产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌工程菌株的构建 |
| 3.3.5 产N-乙酰氨基葡萄糖大肠杆菌工程菌株发酵结果 |
| 3.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第四章 N-乙酰氨基葡萄糖合成菌株的发酵条件优化 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验菌株与质粒 |
| 4.1.2 引物 |
| 4.1.3 试剂及试剂盒 |
| 4.1.4 实验仪器 |
| 4.1.5 培养基及化学试剂的配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 发酵培养基优化 |
| 4.2.2 荧光定量RT-qPCR |
| 4.2.3 葡萄糖、甘油、乙酸、N-乙酰氨基葡萄糖的HPLC检测 |
| 4.3 实验结果与分析 |
| 4.3.1 发酵培养基对大肠杆菌生长的影响 |
| 4.3.2 大肠杆菌发酵液中N-乙酰氨基葡萄糖产量及碳源利用 |
| 4.3.3 荧光定量PCR |
| 4.4 讨论 |
| 本章小结 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）酸枣仁蛋白的提取及其生物活性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 酸枣仁药材的现代研究进展 |
| 1.1 化学成分 |
| 1.1.1 萜类化合物 |
| 1.1.2 黄酮类化合物 |
| 1.1.3 生物碱类化合物 |
| 1.1.4 脂肪酸和挥发油类成分 |
| 1.1.5 其他成分 |
| 1.2 酸枣仁药理作用研究进展 |
| 1.2.1 镇静催眠作用 |
| 1.2.2 抗抑郁、抗焦虑作用 |
| 1.2.3 对心血管系统作用 |
| 1.2.4 抗炎和抗氧化作用 |
| 2 植物蛋白的研究进展 |
| 2.1 植物蛋白的提取 |
| 2.1.1 碱提酸沉法 |
| 2.1.2 酶法提取 |
| 2.1.3 有机溶剂提取法 |
| 2.1.4 盐溶提取法 |
| 2.1.5 其他提取方法 |
| 2.2 植物蛋白的纯化 |
| 2.2.1 盐析法 |
| 2.2.2 等电点沉淀法 |
| 2.2.3 透析法 |
| 2.2.4 超滤法 |
| 2.2.5 分子筛层析法 |
| 2.2.6 离子交换层析法 |
| 2.3 植物蛋白的理化性质与功能特性研究 |
| 2.4 植物蛋白的生物活性研究 |
| 2.4.1 免疫调节作用 |
| 2.4.2 抗氧化作用 |
| 2.4.3 降血脂、降血糖作用 |
| 2.4.4 抗肿瘤作用 |
| 3 立题依据和技术路线 |
| 实验研究 |
| 第一章 酸枣仁蛋白的提取工艺研究 |
| 1 仪器和材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 酸枣仁药材质量检测研究 |
| 2.1.1 基于2020 版《中国药典》的酸枣仁药材检测 |
| 2.1.2 基于中药材DNA条形码鉴定方法的酸枣仁药材检测 |
| 2.2 SZSP提取工艺研究 |
| 2.2.1 不同提取方法的比较研究 |
| 2.3 SZSP提取率 |
| 2.4 SZSP等电点的测定 |
| 2.5 SZSP提取工艺参数优选 |
| 2.5.1 单因素考察 |
| 2.5.2 响应面优化SZSP提取试验 |
| 2.6 数据处理及分析 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 酸枣仁药材质量检测结果 |
| 3.1.1 基于2020 版《中国药典》的检测结果 |
| 3.1.2 酸枣仁药材鉴别检测研究结果 |
| 3.2 SZSP的等电点 |
| 3.3 SZSP单因素考察结果 |
| 3.3.1 p H值对SZSP提取率的影响 |
| 3.3.2 提取温度对SZSP提取率的影响 |
| 3.3.3 提取时间对SZSP提取率的影响 |
| 3.3.4 料液比对SZSP提取率的影响 |
| 3.4 响应面试验 |
| 3.4.1 响应面试验设计及结果 |
| 3.4.2 回归模型建立与方差分析 |
| 3.4.3 响应面交互作用分析结果 |
| 3.4.4 SZSP提取率的最佳条件和模型验证 |
| 4 小结 |
| 第二章 酸枣仁蛋白的理化性质和功能特性研究 |
| 1 仪器和材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 酸枣仁和SZSP的营养成分分析 |
| 2.1.1 凯氏定氮法检测蛋白含量 |
| 2.1.2 酸枣仁和SZSP水分、灰分和脂肪含量的测定 |
| 2.2 SZSP氨基酸的测定 |
| 2.3 SZSP SDS-PAGE电泳测定 |
| 2.3.1 SDS-PAGE电泳试剂配制 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳胶块配制及考马斯亮蓝染色 |
| 2.3.3 SDS-PAGE电泳胶块配制及糖蛋白染色 |
| 2.4 SZSP结构光谱检测 |
| 2.4.1 圆二色谱(CD)检测 |
| 2.4.2 傅立叶变换红外吸收光谱(FTIR)检测 |
| 2.4.3 内源荧光光谱光谱检测 |
| 2.4.4 紫外吸收光谱检测 |
| 2.5 SZSP的热稳定性检测 |
| 2.6 SZSP的表面疏水性的测定 |
| 2.7 SZSP的游离巯基和二硫键含量的测定 |
| 2.8 SZSP的 Zeta电位分析 |
| 2.9 SZSP溶解度的测定 |
| 2.10 SZSP持油性和持水性测定 |
| 2.11 SZSP起泡性和起泡稳定性测定 |
| 2.12 SZSP乳化性和乳化稳定性测定 |
| 2.13 SZSP最小凝胶浓度检测 |
| 2.14 数据处理及分析 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 SZSP的主要化学成分 |
| 3.2 SZSP的氨基酸组成 |
| 3.3 SZSP的 SDS-PAGE结果分析 |
| 3.4 SZSP结构光谱检测结果 |
| 3.4.1 圆二色谱(CD)检测结果 |
| 3.4.2 傅立叶变换红外吸收光谱(FTIR)检测结果 |
| 3.4.3 内源荧光光谱光谱检测结果 |
| 3.4.4 紫外吸收光谱检测结果 |
| 3.5 热稳定性分析结果 |
| 3.6 表面疏水性检测结果 |
| 3.7 游离巯基和二硫键含量检测结果 |
| 3.8 Zeta电位分析结果 |
| 3.9 溶解度检测结果 |
| 3.10 持水性和持油性检测结果 |
| 3.11 起泡性和起泡稳定性检测结果 |
| 3.12 乳化性和乳化稳定性检测结果 |
| 3.13 最小凝胶浓度检测结果 |
| 4 小结 |
| 第三章 酸枣仁蛋白的免疫活性研究 |
| 1 仪器和材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SZSP对环磷酰胺诱导的免疫力低下小鼠免疫调节的研究 |
| 2.1.1 实验室动物给药及分组 |
| 2.1.2 免疫器官指数检测 |
| 2.1.3 小鼠血清中免疫因子检测 |
| 2.1.4 小鼠免疫器官生化分析 |
| 2.1.5 小鼠腹腔巨噬细胞的制备 |
| 2.1.6 脾淋巴细胞的制备 |
| 2.1.7 小鼠巨噬细胞分泌NO和细胞因子检测 |
| 2.1.8 中性红法检测小鼠巨噬细胞吞噬能力 |
| 2.1.9 小鼠脾淋巴细胞的增殖能力检测 |
| 2.1.10 小鼠NK细胞杀伤力检测 |
| 2.1.11 小鼠血清溶血素检测 |
| 2.1.12 小鼠免疫器官形态学检测 |
| 2.1.13 小鼠免疫器官免疫组织化学检测 |
| 2.2 SZSP对小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)免疫活性的影响 |
| 2.2.1 RAW264.7 细胞培养 |
| 2.2.2 SZSP对 RAW264.7 细胞增值的影响 |
| 2.2.3 SZSP对 RAW264.7 细胞分泌NO的影响 |
| 2.2.4 SZSP对 RAW264.7 细胞的细胞因子分泌量的影响 |
| 2.2.5 SZSP对 LPS诱导的RAW264.7 细胞的细胞因子分泌量的影响 |
| 2.2.6 Western Blot检测 |
| 2.2.7 SZSP激活MAPK通路诱导巨噬细胞表达细胞因子的检测 |
| 2.2.8 SZSP激活NF-κB通路诱导巨噬细胞表达细胞因子的检测 |
| 2.3 数据处理及分析 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 SZSP对环磷酰胺诱导的免疫力低下小鼠免疫调节结果 |
| 3.1.1 SZSP对免疫抑制小鼠体重和免疫器官指数的影响 |
| 3.1.2 SZSP对免疫抑制小鼠免疫因子分泌的影响 |
| 3.1.3 SZSP对免疫抑制小鼠LDH、ACP分泌的影响 |
| 3.1.4 SZSP对免疫抑制小鼠血清溶血素水平的影响 |
| 3.1.5 SZSP对免疫抑制小鼠原代巨噬细胞吞噬活性和炎症因子分泌的影响 |
| 3.1.6 SZSP对免疫抑制小鼠脾淋巴细胞的增殖能力的影响 |
| 3.1.7 SZSP对免疫抑制小鼠NK细胞杀伤力的影响 |
| 3.1.8 SZSP对免疫抑制小鼠免疫器官组织病理学变化的影响 |
| 3.1.9 SZSP对免疫抑制小鼠免疫器官CD4~+和CD8~+免疫组织化学检测结果 |
| 3.2 SZSP对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)免疫活性的影响 |
| 3.2.1 SZSP对 RAW264.7 细胞增殖的影响 |
| 3.2.2 SZSP对 RAW264.7细胞形态变化的影响 |
| 3.2.3 SZSP对 RAW264.7细胞分泌NO、IL-6和TNF-α的影响 |
| 3.2.4 SZSP对 RAW264.7 细胞吞噬能力的影响 |
| 3.2.5 SZSP对 LPS诱导的RAW264.7 细胞分泌NO、IL-6和TNF-α的影响 |
| 3.2.6 SZSP对 MAPK通路调节免疫活性的研究 |
| 3.2.7 SZSP对 NF-κB通路调节免疫活性的研究 |
| 4 小结 |
| 第四章 酸枣仁蛋白分离纯化及其活性研究 |
| 1 仪器和材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 样品预处理 |
| 2.2 凝胶柱预处理 |
| 2.2.1 葡聚糖凝胶(Sephadex)G-50 预处理、装柱与平衡 |
| 2.2.2 DEAE-Sepharose Fast Flow装柱与平衡 |
| 2.3 SZSP的分离纯化 |
| 2.3.1 第一次Sephadex G-50 层析 |
| 2.3.2 DEAE-Sepharose Fast Flow层析 |
| 2.3.3 第二次Sephadex G-50 层析 |
| 2.4 SDS-PAGE电泳的检测 |
| 2.5 SZSP组分对RAW264.7、Hela和 Hep G2 细胞活性的影响 |
| 2.5.1 小鼠RAW264.7 巨噬细胞的培养 |
| 2.5.2 Hela细胞和Hep G2 细胞的培养 |
| 2.5.3 CCK-8 法检测细胞活性 |
| 2.5.4 SZSP纯化组分对LPS诱导的RAW264.7 细胞激活MAPK和 NF-κB信号通路检测 |
| 2.6 数据处理及分析 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 Sephadex G-50 层析 |
| 3.2 DEAE Sepharose Fast Flow层析 |
| 3.3 第二次Sephadex G50 层析 |
| 3.4 SDS-PAGE电泳的检测结果 |
| 3.5 细胞活性检测结果 |
| 3.5.1 酸枣仁分离纯化蛋白对RAW264.7 细胞活力影响 |
| 3.5.2 酸枣仁分离纯化蛋白对Hela细胞活力影响 |
| 3.5.3 酸枣仁分离纯化蛋白对Hep G2 细胞活力影响 |
| 3.6 S1F2G1 分离蛋白组分对LPS诱导的RAW264.7 细胞MAPK和 NF-κB通路的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 酸枣仁蛋白酶解物的生物活性研究 |
| 1 仪器和材料 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 SZSP酶解工艺研究 |
| 2.1.1 酶解蛋白酶种类的筛选 |
| 2.1.2 SZSP酶解工艺的参数优选 |
| 2.1.3 SZSP酶解工艺的确定及工艺验证 |
| 2.1.4 SZSPH分子量分布的测定 |
| 2.2 SZSPH对 RAW264.7 细胞免疫调节活性的影响 |
| 2.2.1 SZSPH对 RAW264.7 细胞活力及炎症因子分泌的影响 |
| 2.2.2 SZSPH对 RAW264.7 细胞内活性氧(ROS)的影响 |
| 2.3 SZSPH体外抗氧化活性实验 |
| 2.3.1 超氧阴离子清除率测定实验 |
| 2.3.2 羟基自由基清除率实验 |
| 2.3.3 DPPH自由基清除能力的测定 |
| 2.3.4 ABTS~+由基清除能力的测定 |
| 2.4 SZSPH抗疲劳活性研究 |
| 2.4.1 SZSPH对 C2C12 细胞(小鼠成肌细胞)的活性影响 |
| 2.4.2 SZSPH对小鼠体内抗疲劳作用的研究 |
| 2.5 数据处理及分析 |
| 3 实验结果与讨论 |
| 3.1 蛋白酶的确定及参数优选 |
| 3.1.1 酶解蛋白酶的确定 |
| 3.1.2 SZSP酶解工艺的参数优选结果 |
| 3.1.3 酶解工艺的验证 |
| 3.1.4 SZSPH的分子量分布检测结果 |
| 3.2 SZSPH的 SDS-PAGE电泳检测结果 |
| 3.3 SZSPH对 RAW264.7 细胞活力及炎症因子分泌的影响 |
| 3.4 SZSPH对 RAW264.7 细胞内ROS的影响 |
| 3.5 SZSPH的体外抗氧化活性 |
| 3.5.1 SZSPH对清除超氧阴离子自由基能力的影响 |
| 3.5.2 SZSPH对羟基自由基清除率的影响 |
| 3.5.3 SZSPH对 DPPH自由基清除活性的影响 |
| 3.5.4 SZSPH对 ABTS~+自由基清除活性的影响 |
| 3.6 SZSPH抗疲劳活性研究 |
| 3.6.1 SZSPH对 C2C12 细胞的影响 |
| 3.6.2 SZSPH对运动疲劳小鼠活性的影响 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（5）诱导肺部Th17应答的重组双亚单位铜绿假单胞菌疫苗设计、构建及其保护机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 铜绿假单胞菌的感染特点及其防治手段 |
| 1.2 PA疫苗研究进展 |
| 1.3 肺粘膜免疫特点及研究进展 |
| 第二章 铜绿假单胞菌诱导Th17 应答的保护性抗原筛选 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 Th17 应答在rePcrV和 reAmpC介导的保护效果中的作用机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 诱导Th17 应答的表位筛选及多表位融合疫苗构建和保护效果评价 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 TRM在 rePcrV滴鼻免疫增强保护的作用机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 吸入性疫苗递送研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果及课题参与情况 |
| 致谢 |
（6）基于β-葡聚糖与甘露聚糖修饰的寨卡病毒重组蛋白疫苗（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 寨卡病毒 |
| 1.1.1 传播背景 |
| 1.1.2 传播途径 |
| 1.1.3 临床症状 |
| 1.1.4 病毒结构 |
| 1.2 寨卡病毒疫苗 |
| 1.2.1 灭活疫苗 |
| 1.2.2 减毒活疫苗 |
| 1.2.3 DNA疫苗 |
| 1.2.4 mRNA疫苗 |
| 1.2.5 腺病毒重组疫苗 |
| 1.2.6 病毒样颗粒(VLPs) |
| 1.2.7 重组蛋白疫苗 |
| 1.3 疫苗佐剂 |
| 1.3.1 铝盐佐剂 |
| 1.3.2 水油乳剂 |
| 1.3.3 脂质体颗粒 |
| 1.3.4 免疫刺激复合物(ISCOMs) |
| 1.3.5 TLR激动剂 |
| 1.3.6 联合佐剂 |
| 1.3.7 多糖佐剂 |
| 1.4 递送系统 |
| 1.4.1 免疫应答原理 |
| 1.4.2 微粒形成策略 |
| 1.5 论文立题依据及策略 |
| 1.5.1 立题背景 |
| 1.5.2 研究策略 |
| 第2章 寨卡病毒E蛋白与EDⅢ蛋白的表达与纯化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与设备 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验设备 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 构建重组质粒ZKsE-pET21a |
| 2.3.2 质粒ZKsE-pET21a鉴定 |
| 2.3.3 寨卡病毒E蛋白的诱导表达 |
| 2.3.4 寨卡病毒E蛋白表达菌株的包涵体复性 |
| 2.3.5 寨卡病毒E蛋白的分离纯化与分析鉴定 |
| 2.3.6 EDⅢ蛋白的表达与纯化 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 质粒ZKsE-pET21a鉴定 |
| 2.4.2 E蛋白的诱导表达 |
| 2.4.3 E蛋白的纯化与鉴定 |
| 2.4.4 EDⅢ蛋白的诱导与表达 |
| 2.4.5 EDⅢ蛋白的纯化与鉴定 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 基于β-葡聚糖修饰的寨卡病毒E蛋白疫苗 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与设备 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 基于β-葡聚糖修饰的E蛋白疫苗的制备与纯化 |
| 3.3.2 尺寸排阻色谱分析 |
| 3.3.3 动态光散射分析 |
| 3.3.4 E-PS样品定量分析 |
| 3.3.5 圆二色光谱表征 |
| 3.3.6 荧光光谱表征 |
| 3.3.7 红外光谱表征 |
| 3.3.8 E-PS样品的裂解效率测定 |
| 3.3.9 免疫原性评价 |
| 3.3.10 脾细胞分泌细胞因子检测 |
| 3.3.11 体外评价E-PS样品对DC细胞成熟的影响 |
| 3.3.12 药代动力学评价 |
| 3.3.13 毒性评价 |
| 3.3.14 数据统计分析 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 基于β-葡聚糖修饰的E蛋白疫苗的纯化与鉴定 |
| 3.4.2 尺寸排阻色谱分析 |
| 3.4.3 动态光散射分析 |
| 3.4.4 E-PS样品定量分析 |
| 3.4.5 远紫外圆二色光谱表征 |
| 3.4.6 荧光光谱表征 |
| 3.4.7 红外光谱表征 |
| 3.4.8 E-PS样品的裂解速率测定 |
| 3.4.9 免疫原性的评价 |
| 3.4.10 脾细胞分泌细胞因子检测 |
| 3.4.11 体外评价E-PS样品对DC细胞成熟的影响 |
| 3.4.12 药代动力学评价 |
| 3.4.13 毒性评价 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 基于血红蛋白与甘露聚糖修饰的寨卡病毒EDⅢ蛋白疫苗 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与设备 |
| 4.2.1 实验试剂 |
| 4.2.2 实验设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 蛋白载体HM的制备与纯化 |
| 4.3.2 HM-EDⅢ样品的制备与纯化 |
| 4.3.3 尺寸排阻色谱分析 |
| 4.3.4 动态光散射分析 |
| 4.3.5 HM-EDⅢ样品定量分析 |
| 4.3.6 圆二色光谱表征 |
| 4.3.7 外源荧光光谱表征 |
| 4.3.8 红外光谱表征 |
| 4.3.9 免疫原性评价 |
| 4.3.10 脾细胞分泌细胞因子检测 |
| 4.3.11 药代动力学评价 |
| 4.3.12 毒性评价 |
| 4.3.13 数据统计分析 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 蛋白载体HM的纯化与鉴定 |
| 4.4.2 HM-EDⅢ样品的纯化与鉴定 |
| 4.4.3 尺寸排阻色谱分析 |
| 4.4.4 动态光散射分析 |
| 4.4.5 HM-EDⅢ样品定量分析 |
| 4.4.6 圆二色光谱表征 |
| 4.4.7 外源荧光光谱表征 |
| 4.4.8 红外光谱表征 |
| 4.4.9 免疫原性的评价 |
| 4.4.10 脾细胞分泌细胞因子检测 |
| 4.4.11 药代动力学评价 |
| 4.4.12 毒性评价 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 本论文的研究结果 |
| 5.2 本论文创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（7）生慧颗粒的制备工艺与益智延寿药效物质基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 |
| 前言 |
| 第一章 生慧颗粒的制备工艺研究 |
| 1 仪器与材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 材料 |
| 2 生慧颗粒水提工艺研究 |
| 2.1 药材浸泡时间及吸水率试验 |
| 2.2 生慧颗粒水提工艺的优选 |
| 3 纯化工艺研究 |
| 3.1 纯化工艺设计 |
| 3.2 纯化工艺试验及试验结果 |
| 3.3 纯化工艺验证试验 |
| 4 浓缩工艺 |
| 5 干燥工艺 |
| 6 制剂成型工艺研究 |
| 6.1 制剂处方设计 |
| 6.2 剂型选择 |
| 6.3 制粒工艺优选 |
| 6.4 生慧颗粒性能指标检查 |
| 7 生慧颗粒制备工艺及工艺流程图 |
| 7.1 生慧颗粒的制备工艺 |
| 7.2 工艺流程图 |
| 8 中试放大试验 |
| 9 小结与讨论 |
| 结语与创新 |
| 参考文献 |
| 第二部分 |
| 前言 |
| 第一章 基于网络药理学的生慧颗粒药效物质基础与机制研究 |
| 1 仪器与材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 建立生慧颗粒化学成分数据库 |
| 2.2 生慧颗粒成分定性分析 |
| 2.3 体外抗氧化活性试验 |
| 2.4 生慧颗粒防治 AD 的相关基因预测 |
| 2.5 核心靶点生物功能与信号通路富集分析 |
| 2.6 成分-靶点网络可视化 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 生慧颗粒活性化合物的预测 |
| 3.2 生慧颗粒化学成分定性鉴别 |
| 3.3 生慧颗粒抗氧化活性成分分析 |
| 3.4 生慧颗粒防治AD的相关基因预测 |
| 3.5 生慧颗粒与AD基因数据集及其PPI网络分析 |
| 3.6 GO与 KEGG富集分析 |
| 4 小结与讨论 |
| 第二章 基于秀丽隐杆线虫的生慧颗粒药效学评价 |
| 1 仪器与材料 |
| 1.1 仪器 |
| 1.2 试验材料 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 大肠杆菌OP50 的培养 |
| 2.2 秀丽隐杆线虫固体培养 |
| 2.3 秀丽隐杆线虫液体培养 |
| 2.4 秀丽隐杆线虫同步化 |
| 2.5 秀丽隐杆线虫冻存与复苏 |
| 2.6 秀丽隐杆线虫氧化胁迫试验 |
| 2.7 秀丽隐杆线虫寿命试验 |
| 2.8 秀丽隐杆线虫趋化试验 |
| 2.9 秀丽隐杆线虫短期联想学习记忆试验 |
| 2.10 秀丽隐杆线虫神经递质的定量分析 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 生慧颗粒抗氧化药效评价 |
| 3.2 生慧颗粒延寿药效评价 |
| 3.3 生慧颗粒对线虫趋化行为影响 |
| 3.4 生慧颗粒对线虫短期联想学习记忆能力的影响 |
| 3.5 UHPLC-QQQ-MS 色谱分析秀丽隐杆线虫给药后神经递质变化 |
| 4 小结与讨论 |
| 结语与创新 |
| 参考文献 |
| 附录 Ⅰ 综述 生慧汤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 Ⅱ |
| 致谢 |
（8）多孔聚醚醚酮微球的制备、表面改性及在骨修复中的应用（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 骨再生的策略 |
| 1.2.1 骨结构的生物学原理 |
| 1.2.2 骨再生的机制 |
| 1.2.3 骨植入材料的设计 |
| 1.3 骨植入物的分类 |
| 1.3.1 自体移植物 |
| 1.3.2 同种异体移植物 |
| 1.3.3 异种骨移植 |
| 1.3.4 已塑形骨组织工程材料 |
| 1.3.5 可注射骨植入材料 |
| 1.4 多孔微球在骨修复中的应用 |
| 1.4.1 多孔微球的特征 |
| 1.4.2 制备多孔微球的材料与方法 |
| 1.4.3 多孔微球的应用 |
| 1.5 本论文的研究目标、内容及创新 |
| 1.5.1 研究目标 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 研究创新点 |
| 第2章 表面包被矿化细胞外基质的多孔PEEK微球的制备与表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 液-液相分离的原理 |
| 2.3.2 表面光滑PEEK微球的制备 |
| 2.3.3 表面多孔PEEK微球的制备 |
| 2.3.4 表面光滑与多孔PEEK微球的表征 |
| 2.3.5 PEEK微球蛋白吸附能力测试 |
| 2.3.6 PEEK微球的亲水性能表征 |
| 2.3.7 表面包被矿化细胞外基质的多孔PEEK微球的制备与表征 |
| 2.3.8 浸提液细胞毒性检测 |
| 2.3.9 统计分析 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 光滑PEEK微球的表面与剖面微结构 |
| 2.4.2 多孔PEEK微球的表面与剖面微结构 |
| 2.4.3 多孔PEEK微球的FTIR表征 |
| 2.4.4 PEEK微球的亲水性表征 |
| 2.4.5 多孔PEEK微球的蛋白吸附能力分析 |
| 2.4.6 矿化细胞外基质的形貌观察和元素分析 |
| 2.4.7 表面包被矿化细胞外基质PEEK微球的热失重分析 |
| 2.4.8 浸提液细胞毒性 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 表面包被矿化细胞外基质的多孔PEEK微球的体外生物相容性评估和体内成骨性能评估 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验仪器和材料 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞黏附形态荧光染色观察 |
| 3.3.2 细胞增殖检测 |
| 3.3.3 电镜下观察细胞形态和细胞外基质 |
| 3.3.4 脱细胞-再种植后的黏附荧光染色与增殖检测 |
| 3.3.5 碱性磷酸酶染色及活性检测 |
| 3.3.6 茜素红染色及钙定量检测 |
| 3.3.7 Runx2和Col-I实时荧光定量PCR检测 |
| 3.3.8 大鼠颅骨缺损模型的构建 |
| 3.3.9 Micro-CT数据重建及分析 |
| 3.3.10 组织切片染色观察 |
| 3.3.11 统计分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 细胞黏附形态和细胞外基质的分泌 |
| 3.4.2 细胞增殖 |
| 3.4.3 脱细胞-再种植后的黏附与增殖分析 |
| 3.4.4 碱性磷酸酶染色及活性分析 |
| 3.4.5 茜素红染色及定量分析 |
| 3.4.6 成骨相关基因分析 |
| 3.4.7 Micro-CT重建及分析评价 |
| 3.4.8 组织切片H&E及Masson染色分析 |
| 3.5 结论 |
| 第4章 多孔PEEK微球表面聚多巴胺涂层黏附IGF-1 和BMP-2 双生长因子的骨修复研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料和仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 仪器设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 DA涂层及负载双生长因子的多孔PEEK微球的制备 |
| 4.3.2 DA涂层多孔PEEK微球的表征 |
| 4.3.3 ELISA法检测微球生长因子负载量及缓释行为 |
| 4.3.4 负载双生长因子多孔PEEK微球的体外生物相容性研究 |
| 4.3.5 负载双生长因子多孔PEEK微球的体内骨修复研究 |
| 4.3.6 统计分析 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 DA涂层多孔PEEK微球的表征 |
| 4.4.2 ELISA法检测微球生长因子负载量并评估缓释行为 |
| 4.4.3 体外成骨性能评估 |
| 4.4.4 负载双生长因子多孔PEEK微球的大鼠颅骨缺损修复 |
| 4.5 结论 |
| 第5章 结论 |
| 本研究的特色与创新之处 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）基于蛋白质及稀土调控的生物医用粘合剂（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 合成或半合成有机高分子医用粘合剂 |
| 1.2.1 氰基丙烯酸酯类医用粘合剂 |
| 1.2.2 聚氨酯类医用粘合剂 |
| 1.2.3 光催化交联医用粘合剂 |
| 1.2.4 牛血清白蛋白-戊二醛双组分粘合剂 |
| 1.3 海洋类仿生医用粘合剂 |
| 1.3.1 贻贝类 |
| 1.3.2 沙塔蠕虫类 |
| 1.3.3 石蛾幼虫类 |
| 1.4 其他生物大分子医用粘合剂 |
| 1.4.1 纤维蛋白粘合剂 |
| 1.4.2 胶原蛋白粘合剂 |
| 1.4.3 类弹性蛋白粘合剂 |
| 1.5 选题目的及意义 |
| 第2章 稀土调控的重组蛋白复合医用粘合剂 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.2.3.1 超电荷蛋白基因的分子克隆 |
| 2.2.3.2 超电荷蛋白的原核表达及纯化 |
| 2.2.3.3 蛋白表征 |
| 2.2.3.4 表面活性剂的合成 |
| 2.2.3.5 超电荷蛋白粘合剂的制备 |
| 2.2.3.6 摩尔比为1:1的SUP-NDP配合物的NMR研究 |
| 2.2.3.7 剪切粘合强度测试 |
| 2.2.3.8 细胞毒性（MTT)实验 |
| 2.2.3.9 大鼠活体伤口愈合实验 |
| 2.2.4 结果与讨论 |
| 2.2.4.1 超电荷蛋白的原核表达、纯化及表征 |
| 2.2.4.2 表面活性剂的合成 |
| 2.2.4.3 超电荷蛋白-表面活性剂粘合剂的制备及分析 |
| 2.2.4.4 剪切粘合强度测试 |
| 2.2.4.5 潮湿条件粘合性、细胞相容性、器官止血及伤口闭合 |
| 2.3 小结 |
| 第3章 粘合强度可控的工程化蛋白相变粘合剂 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.3.1 质粒构建 |
| 3.2.3.2 蛋白表达与纯化 |
| 3.2.3.3 SDS-PAGE及蛋白质免疫印迹分析 |
| 3.2.3.4 V40K72-SDBS和K72-SDBS复合粘合剂的制备 |
| 3.2.3.5 剪切粘合强度测试 |
| 3.2.3.6 紫外-可见光谱测试 |
| 3.2.3.7 V40K72-SDBS复合凝聚体的流变学测量 |
| 3.2.3.8 计算机模拟策略 |
| 3.2.4 结果与讨论 |
| 3.2.4.1 蛋白的原核表达、纯化及表征 |
| 3.2.4.2 V40K72-SDBS粘合剂的制备及紫外-可见光谱测试 |
| 3.2.4.3 剪切粘合强度及流变学测试 |
| 3.2.4.4 计算机模拟 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 鱼鳔来源的生物粘合剂在伤口愈合中的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 仪器设备 |
| 4.2.3 实验方法 |
| 4.2.3.1 鱼鳔胶的制备 |
| 4.2.3.2 热重分析及扫描电子显微镜分析 |
| 4.2.3.3 剪切粘合强度测试 |
| 4.2.3.4 细胞活力评估 |
| 4.2.3.5 钙黄绿素-AM/PI活死细胞染色 |
| 4.2.3.6 伤口愈合实验 |
| 4.2.3.7 组织学及免疫荧光分析 |
| 4.2.4 结果与讨论 |
| 4.2.4.1 鱼鳔胶的制备及分析 |
| 4.2.4.2 剪切粘合强度测试 |
| 4.2.4.3 细胞相容性测试及活体伤口愈合实验 |
| 4.2.4.4 组织学及免疫荧光分析 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（10）基于咪唑类季铵盐细菌表面涂层的构建及其群体感应介导的抗菌作用机制探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 微生物污染与防治 |
| 1.2 新型抗菌剂及分类 |
| 1.2.1 金属及金属氧化物纳米粒子 |
| 1.2.2 二维纳米材料 |
| 1.2.3 抗菌肽 |
| 1.2.4 壳聚糖 |
| 1.2.5 季铵盐 |
| 1.3 靶向抗菌材料 |
| 1.4 细胞表面工程及应用 |
| 1.4.1 细菌表面合成无机纳米粒子 |
| 1.4.2 细菌模板表面修饰聚合物 |
| 1.4.3 细菌表面涂层的应用 |
| 1.5 群体感应与群体猝灭 |
| 1.5.1 N-酰基高丝氨酸内酯(AHL) |
| 1.5.2 自动诱导多肽或寡肽(AIP) |
| 1.5.3 自动诱导物-2(AI-2) |
| 1.6 本文的选题依据及研究意义 |
| 第二章 基于咪唑季铵盐细菌表面涂层的构建 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 试剂及仪器 |
| 2.2.2 BVI的合成 |
| 2.2.3 pBVI的合成 |
| 2.2.4 SiO_2的合成 |
| 2.2.5 E.coli表面p BVI涂层的制备 |
| 2.2.6 BPI的合成 |
| 2.2.7 细菌表面PC涂层的制备 |
| 2.2.8 细菌形貌的分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 BVI和 pBVI的 ~1H NMR表征 |
| 2.3.2 E@Bi BB的 XPS表征 |
| 2.3.3 E@Bi BB的 STEM-Mapping表征 |
| 2.3.4 不同包覆程度的E@p BVI的形貌表征 |
| 2.3.5 不同包覆程度的 E@p BVI的 DLS和 Zeta电位表征 |
| 2.3.6 BPI和 BPI?CB[7]的~1H NMR表征 |
| 2.3.7 E@PC的形貌表征 |
| 2.3.8 E@PC的 DLS和 Zeta电位表征 |
| 2.3.9 SiO_2及Si@PC的合成表征 |
| 2.3.10 S@PC的合成表征 |
| 2.3.11 EA@PC的合成表征 |
| 2.3.12 MS@PC的合成表征 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 细菌表面涂层的可控抗菌开关及抗菌机理 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 试剂及仪器 |
| 3.2.2 E@PC的抗菌性能测试 |
| 3.2.2.1 试剂的配制 |
| 3.2.2.2 菌液的制备 |
| 3.2.2.3 抗菌实验步骤 |
| 3.2.3 E@PC的抗菌开关实验 |
| 3.2.4 细菌细胞膜通透性的测定 |
| 3.2.5 细菌形态变化的测定 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 不同包覆程度E@p BVI的抗菌性能 |
| 3.3.2 主客体作用对抗菌性能的调控 |
| 3.3.3 E@PC对 E.coli的可控循环抗菌开关 |
| 3.3.4 E@PC对 E.coli和 S.aureus抗菌性能测试 |
| 3.3.5 E.coli和 S.aureus的形貌分析 |
| 3.3.6 细菌细胞膜去极化分析 |
| 3.3.7 DNA泄露 |
| 3.3.8 离子泄露 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 细菌表面涂层群体感应介导的抗菌作用机制探究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 试剂及仪器 |
| 4.2.2 最小抑制浓度(MIC)测定 |
| 4.2.3 BW25113/pKD4 感受态细胞的制备及转化 |
| 4.2.3.1 CaCl_2法制备感受态 |
| 4.2.3.2 CaCl_2法转化 |
| 4.2.3.3 电击法制备感受态 |
| 4.2.3.3 电击法转化 |
| 4.2.4 一步失活法构建缺失突变体 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 细菌@PC对 E.coli的抗菌测试 |
| 4.3.2 细菌@PC对 S.aureus的抗菌测试 |
| 4.3.3 细菌@PC对模板菌的特异性识别 |
| 4.3.4 细菌@PC对耐药菌的抗菌测试 |
| 4.3.5 BW缺失突变体的验证 |
| 4.3.6 细菌@PC对BW的抗菌测试 |
| 4.3.7 细菌@PC对Δlux S的抗菌测试 |
| 4.3.8 细菌@PC对Δfli C的抗菌测试 |
| 4.3.9 细菌@PC基于QS的特异性识别 |
| 4.3.10 细菌@PC与 P.aeruginosa之间的QS测试 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、氨基苄青霉素钠(无菌粉)冷冻干燥工艺（论文参考文献）
- [1]废弃丁羟推进剂粘合体系生物降解方法及机理[D]. 吴凯. 中北大学, 2021
- [2]盐环境来源微生物多相分类及嗜盐古菌基因组适应性与演化研究[D]. 韩帅波. 浙江大学, 2021(01)
- [3]代谢工程改造大肠杆菌和凝结芽孢杆菌生产生物活性物质[D]. 王凯凯. 中国农业科学院, 2021(09)
- [4]酸枣仁蛋白的提取及其生物活性研究[D]. 张红印. 长春中医药大学, 2021(01)
- [5]诱导肺部Th17应答的重组双亚单位铜绿假单胞菌疫苗设计、构建及其保护机制研究[D]. 王颖. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [6]基于β-葡聚糖与甘露聚糖修饰的寨卡病毒重组蛋白疫苗[D]. 齐金铭. 中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所), 2021(01)
- [7]生慧颗粒的制备工艺与益智延寿药效物质基础研究[D]. 周天姣. 湖北中医药大学, 2021(09)
- [8]多孔聚醚醚酮微球的制备、表面改性及在骨修复中的应用[D]. 孙烁. 吉林大学, 2021(01)
- [9]基于蛋白质及稀土调控的生物医用粘合剂[D]. 肖玲玲. 中国科学技术大学, 2021(09)
- [10]基于咪唑类季铵盐细菌表面涂层的构建及其群体感应介导的抗菌作用机制探究[D]. 苏月莹. 内蒙古大学, 2021(12)