一、玻璃纤维诱导的转化细胞活化癌基因的研究（论文文献综述）
袁嘉玮,李雨辰,唐楷杰,侯妮[1]（2021）在《细胞竞争和肿瘤》文中认为"细胞竞争"是使细胞在组织内竞争生存及其空间,导致"优势细胞取代劣势细胞"的一系列细胞相互作用。一些细胞竞争促进肿瘤的进展,而另一些会抑制肿瘤的发生和发展,比如"上皮抗癌"。对具体肿瘤细胞竞争及其调节机制的研究,将为预防和治疗肿瘤提供新策略。该文针对目前细胞竞争对肿瘤发生发展的主要作用和影响因素的研究现状予以回顾,并基于此提出了防治肿瘤的新展望,以期对肿瘤的预防和治疗提供借鉴。
梁晓晖,石海莲,吴晓俊[2]（2021）在《糖代谢重编程与“炎-癌转化”及抗炎中药靶向肿瘤糖代谢抗肿瘤作用机制研究进展》文中提出炎症与肿瘤的病理进程关系密切。越来越多的研究表明,炎症信号通路广泛参与调控肿瘤细胞的糖代谢。葡萄糖主要通过糖酵解、线粒体有氧磷酸化等途径代谢生成ATP。有些肿瘤细胞倾向于通过糖酵解获能,而有些肿瘤细胞中线粒体氧化磷酸化反应对细胞生长和氧化应激也发挥重要作用。炎症促进糖代谢重编程介导"炎-癌转化"的分子机制涉及炎症介质和炎症因子异常表达。中药中多种生物活性物质如皂苷、黄酮、生物碱、多酚和醌类等可显着抑制炎症,并能调控肿瘤糖代谢,抑制肿瘤细胞增殖和生长。本文就"炎-癌转化"与肿瘤糖代谢重编程之间的关系和抗炎中药及单体成分靶向肿瘤糖代谢抗肿瘤的作用机制予以综述,为抗炎中药靶向肿瘤糖代谢发挥抗肿瘤作用研究提供参考。
段续接,杨惠,刘淑英[3]（2021）在《JSRV Env通过Akt/mTOR信号通路调控绵羊绒毛膜滋养层细胞增殖》文中研究指明利用已构建的JSRV Env慢病毒载体转染绵羊绒毛膜滋养层细胞（STCs）,探讨Akt/mTOR信号通路的激活及其对细胞增殖的影响。以STCs为空白组,空病毒载体转染STCs为对照组,JSRV Env慢病毒载体转染STCs为试验组,通过Western blot检测Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白的表达,并在JSRV Env转化细胞中加入mTOR抑制剂雷帕霉素（rapamycin）,利用噻唑蓝（MTT）比色法比较分析细胞增殖情况。激光共聚焦观察显示JSRV Env慢病毒转染STCs 72 h后,因稳定表达了Env蛋白而出现大量红色荧光信号;Western blot结果显示,与空白组和对照组相比,试验组有p-Akt和p-mTOR的显着表达（P<0.05）;MTT比色法分析结果显示,与空白组和对照组相比,试验组的细胞增殖能力显着上调（P<0.05）。JSRV Env转化细胞中加入雷帕霉素后,MTT比色法分析结果显示,与JSRV Env慢病毒转染STCs组相比,细胞增殖能力显着下调（P<0.05）;Western blot结果显示,雷帕霉素作用72 h后mTOR表达显着下调（P<0.05）。综上可知,JSRV Env慢病毒激活了STCs中的Akt/mTOR信号通路,参与调控细胞增殖。研究结果为进一步探究JSRV Env诱导细胞转化、参与细胞增殖等生物学作用的探讨提供了基础的参考资料。
李昕宇[4]（2021）在《小鼠Kupffer细胞的转分化研究》文中认为研究背景及目的:KCs是肝脏长期驻留的巨噬细胞,在慢性肝损伤期间KCs被激活并分泌促炎症和促纤维化细胞因子,作用于HSCs转分化形成肌成纤维细胞,最终产生胶原沉积,学术界广泛认可,HSCs是肝脏中胶原沉积的主要来源,也是肝纤维化病理过程的核心环节,而KCs除了能辅助HSCs参与纤维化以外,是否有其他途径产生胶原沉积尚未阐明。HSCs转分化成为肌成纤维细胞是肝纤维化的关键步骤,除了HSCs转分化以外,肝脏中还存在大量其他细胞转分化的现象,例如有实验研究证明了动物模型中肝细胞和胆管细胞相互转化。在肝外组织中的巨噬细胞,例如皮肤、心肌、肾脏等组织中巨噬细胞可更进一步转分化为纤维细胞并分泌胶原蛋白,和伤口损伤愈合修复密切相关。通过上述类比,提出KCs可以发生转分化的猜想,KCs转分化为类成纤维细胞后可能产生胶原沉积,甚至有可能参与肝组织损伤修复乃至肝纤维化形成。KCs的转分化理论提供了不同于传统纤维化理论着眼于HSCs的不同视角,把肝硬化的过程视为河流,HSCs的转分化可视作主干道,而KCs则可作为支流,提供了未来肝纤维化治疗的新思路和新靶点,同时给成纤维细胞提供了新的来源,完善了对肝纤维化的认识。材料和方法:首先本研究在两个不同的体外实验模型中进行平行实验:体外肝脏非实质细胞培养和精密肝切片培养。具体步骤如下:（1）构建特异性追踪KCs谱系的动物模型Emr1Cre+/-::Ribo Tag+/-的小鼠追踪KCs谱系。（2）分离KCs后进行体外培养。（3）使用精密肝切片培养技术进行精密肝片培养。（4）使用免疫荧光成像分析培养后的KCs表达的蛋白。（5）利用多聚体免疫共沉淀富集KCs,提取RNA,合成c DNA。（6）实时定量PCR（Fludigm）。其次在小鼠肝切片中进行胶原沉积研究,使用氯膦酸盐脂质体耗竭KCs,进行精密肝切片培养,对肝切片进行Masson三色染色和RT-PCR基因表达分析。最后使用IL1r敲除小鼠和Nlrp3基因敲除小鼠,使用精密肝切片培养技,实时定量PCR分析基因表达,使用LDH检测套盒定量分析肝片中细胞死亡情况。结果:（1）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs的特征基因以及调控其表达的转录因子表达下调。（2）随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs中纤维化相关的基因以及调控其表达的转录因子表达上调。上述效应在非实质细胞培养和肝组织切片培养之间是高度一致的。（3）清除KCs后肝切片中胶原沉积减少。（4）Il-1r敲除小鼠的肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。（5）Nlrp3敲除小鼠肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。结论:KCs转分化在体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均有发生。KCs的转分化在体外培养中相对保守反应,转分化为类似成纤维细胞样的细胞,可以分泌胶原沉积相关蛋白。
杨斓[5]（2021）在《基于生物信息学和网络药理学整合策略的人参平肺散干预特发性肺纤维化的机制研究》文中研究说明目的:特发性肺纤维化是一种慢性的致命性肺部疾病,主要影响老年群体,至今为止,其发病机制尚不完全明确,药物治疗手段有限。本研究应用生物信息学方法,通过特发性肺纤维化病人的转录组学数据探索疾病机制,比较与联系不同病人群体的疾病机制特征;从网络药理学的研究角度阐释古方人参平肺散对特发性肺纤维化的网络调控机制特点,比较与联系不同病人群体的作用机制;通过计算机模拟分子对接研究和体外实验研究,验证人参平肺散及其拆方干预特发肺纤维化的作用机制。方法:1.从美国国立生物技术信息中心GEO数据库下载GSE150910临床试验中肺移植手术病例的RNA测序原始数据,使用基因集富集分析（GSEA）挖掘特发性肺纤维化潜在的调控基因集,使用Reactome通路数据库富集分析关键通路与反应,使用R语言差异基因分析特发性肺纤维化与正常健康人的差异表达基因,分析关键基因的表达状态。2.使用加权基因共表达网络（WGCNA）分析挖掘特发性肺纤维化不同病人群体关联的基因模块,使用Reactome通路数据库富集分析不同病人群体的关键通路与反应,比较分析其共性与不同,使用文氏图分析分布在不同特征关联基因模块中的差异表达基因。3.基于网络药理学的研究策略,使用已发表研究、TCMSP、SwissTargetPrediction和Pharmapper等资源平台预测古方人参平肺散的潜在靶点,以GSEA分析得到的基因集作为疾病靶点,通过蛋白质相互作用网络和Reactome通路数据库预测人参平肺散干预特发性肺纤维化疾病的网络调控机制;以WGCNA分析得到的高、中年特征关联基因模块为疾病靶点,通过蛋白质相互作用网络和Reactome通路数据库分别预测人参平肺散对高、中年特征的网络调控机制。4.选择前述人参平肺散的网络调控机制中较为突出的TGF-β信号通路为研究对象。选择人参平肺散中的代表成分如 Ginsenoyne D、Ginsenoside 20-Glc-Rf、Notoginsenoside R1、Ginsenoside Rg1、6-Acetylacetonide、Caffeic acid、Timosaponin A1、Timosaponin B Ⅱ、Resveratrol、Rosmarinic acid、Xuelianlactone、Tectorigenin、sarsasapogenin、isomeranzin、glycyrol和Liquiritigenin作为配体,以TGF-β信号通路相关的靶点蛋白HDAC1、XPO1、HS90B、HS90A、A4、1433G、FYN、SRC、EGFR、LRRK2、ESR1、TGFB1、SMAD2、SMAD3和COL1A1为靶点,使用AutoDock进行拟分子虚对接,验证人参平肺散主要成分与靶点蛋白的结合能力。5.采用体外实验方法探讨人参平肺散全方及各拆方组（补益组、清肺组、化痰组）对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞MRC-5表型转化的影响。使用PCR和Western Blot方法检测TGF-β通路的成分Smad2/3、上皮间质转化标志α-SMA、细胞外基质1型胶原COL1A1和NADPH 4型氧化酶NOX4的基因、蛋白表达水平的变化。结果:1.GSEA分析得到9个基因集,分别为HALLMARK上皮间质转化、Kras下游信号、糖酵解、血管生成、G2/M检查点、凝血、Myc靶点V2版、E2F靶点和细胞连接基因集,以及对应的485个领先基因;疾病机制主要富集于细胞外基质、细胞衰老、细胞有丝分裂周期异常、凝血、DNA修复缺陷、细胞连接、糖类代谢和程序性死亡缺陷等;信号通路集中于Ras下游的PIK3/AKT、MAPK6/MAPK4通路,Ras家族通路Rho GTPase,酪氨酸激酶受体通路,TGF β家族和TP53转录调控通路等;衰老相关性分泌表型（SASP）因子主要为白介素4和白介素13家族。差异基因分析显示衰老表型相关基因CCND2、CDKN2A、TERT、GDF15、E2F8等均在疾病组显着上调。2.WGCNA分析富集得到疾病机制主要有细胞外基质、细胞应激、免疫、有丝分裂异常、凝血、细胞连接、肌肉收缩和糖脂蛋白代谢等机制,与GSEA分析的富集结果大部分吻合。WGCNA分析得到高龄特征（65岁以上）相关基因1076个,中年特征（55-65岁）相关基因422个,两组的机制都富集在细胞外基质、免疫系统、Ras下游信号系统、TP53细胞周期调控和TGF-β信号通路等。不同的是细胞周期异常、固有免疫和获得性免疫等反应在中年特征中更为显着;细胞衰老、未折叠蛋白质反应和内质网应激等在高龄特征中更显着富集。与高、中年特征关联的差异基因分别有203个和39个,其中有4组差异基因具有高度相关性,且与高龄特征相关,分别是（1）CDH2、SFRP1、SERPINE2、CXCL12、SFRP4和GEM,与上皮间质转化活动密切相关。（2）GREM1、VCAM1、PTHLH和RGS4,与上皮间质转化活动密切相关;（3）SLC7A5和HIF1A,与G2/M检查点活动有关;（4）UGT2B17和SLC12A3,与Kras下游信号密切相关。3.靶点整理共获取人参平肺散的药理靶点608个,与GSEA分析得到的基因集进行蛋白质相互作用网络分析得到核心靶点152个,机制主要涉及蛋白质翻译后修饰、细胞周期、DNA修复、TP53和FOXO为代表的转录调控活动、氧化应激和致癌基因诱导的衰老、SASP、固有凋亡途径、分子伴侣介导的自噬、细胞因子、固有免疫系统、雌激素受体介导的信号系统、Ras下游信号和TGF-β1信号通路等。人参平肺散成分与中、高年特征相关基因的核心干预靶点各有83个和90个,分别富集后,机制都主要涉及蛋白质翻译后修饰、细胞周期、TP53为主的转录调控活动、DNA修复、分子伴侣介导的自噬、氧化应激诱导的细胞衰老、SASP、免疫反应、Ras下游信号通路和TGF-β信号通路等。不同之处在于高龄组中金属蛋白酶的泛素化反应,SKP2介导的p27/p21的降解反应,获得性免疫反应尤为显着,此外致癌基因诱导的衰老、SASP和固有凋亡等也显着富集。中年组中FOXO、E2F6为主的转录调控活动和Toll样受体3层级反应为主的固有免疫反应尤为突出,此外囊泡运输、血小板聚集、焦亡和坏死也富集明显。4.经过计算机模拟对接验证,除了人参成分Ginsenoyne D的结合分数略低以外,其它成分与TGF-β通路成分HDAC1、XPO1、TGFB1、SMAD2和SMAD3蛋白的结合分数都达到了-5 kcal mol-1 以下。除知母成分Timosaponin AI、Timosaponin BⅡ对HS90A蛋白,人参成分Ginsenoyne D对HS90B和EGFR蛋白,桑白皮成分Xuelianlactone对LRRK2蛋白的结合分数较低,其它成分对TGF-β通路的间接作用靶点HS90B、HS90A、A4、1433G、FYN、SRC、EGFR、LRRK2和ESR1蛋白结合能力都达到了-5 kcal mol-1以下。所有成分与COL1A1蛋白结合能力都达到了-5 kcal mol-1以下。5.体外实验发现与模型组相比,全方组和各拆方组可明显降低α-SMA和COL1A1的mRNA和蛋白表达水平,提示全方组和各拆方组可以影响α-SMA和COL1A1基因的转录水平和转录后调控;全方组和清肺组可显着降低p-SMAD2的mRNA和蛋白表达水平,提示全方组和清肺组对该基因的转录水平和转录后调控都有明显疗效,补益组和化痰组对该基因的转录无明显调控作用;全方组和清肺组可显着降低p-SMAD3的mRNA和蛋白表达水平,补益组可显着降低mRNA水平,但蛋白表达无差异,说明全方组和清肺组对该基因的转录水平和转录后调控都有明显疗效,补益组对该基因的转录水平有明显调控作用,化痰组对该基因的转录无明显调控作用;全方组及各拆方组均可显着降低NOX4的mRNA和蛋白表达水平,说明全方组和各拆方组可以影响该基因的转录水平和转录后调控。结论:1.研究发现特发性肺纤维化病人的疾病机制与上皮间质转化、凝血、血管生成和糖酵解有关,并存在p16、TERT、CCND2和GDF15等细胞衰老表型,推测可能与Kras、Myc致癌基因诱导的衰老机制有关。研究既肯定了以往特发性肺纤维化异常基因与机制的研究,也发现了新的疾病机制特点和分子标志,如细胞周期异常、固有免疫和获得性免疫反应在55-65岁人群更为显着,细胞衰老、线粒体应激和未折叠蛋白质反应在65岁以上人群更为显着,得到了具有高度关联性,且与65岁以上特征相关的差异基因如GREM1、VCAM1、PTHLH和RGS4等。这些结果可能成为疾病的潜在靶点。2.人参平肺散可能通过蛋白质翻译后修饰、细胞周期、DNA修复、基因转录调控、氧化应激和致癌基因诱导的细胞衰老和免疫反应等机制干预特发性肺纤维化;可能通过金属蛋白酶降解,SKP2介导的p27/p21的降解反应和获得性免疫反应等机制干预65岁以上的病人;可能通过FOXO、E2F6的转录调控活动和固有免疫反应等机制干预55-65岁的病人。这些结果可能为进一步的实证研究提供理论依据。3.人参平肺散的代表成分与TGF-β信号通路中的成分蛋白和间接反应蛋白结合能力良好,为实证研究提供了理论基础。本章体外实验显示,人参平肺散全方和各拆方组可下调TGF-β1诱导的成纤维细胞间质标志α-SMA的升高,从而抑制成纤维细胞的表型转化。人参平肺散全方及拆方组均可减少TGF-β1诱导的成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白COL1A1的表达,从而抑制细胞外基质的沉积。人参平肺散全方和各拆方组均可下调TGF-β1诱导的成纤维细胞的促ROS生成酶NOX4的升高,从而抑制氧化应激压力。此外,人参平肺散全方和清肺组均可以抑制TGFβ的通路成分SMAD2/3的磷酸化。综上所述,人参平肺散可改善TGF-β1诱导后肺成纤维细胞的表型转化,可能是通过下调TGF-β通路中的SMAD2/3的磷酸化从而抑制了间质转化、细胞外基质沉积和氧化应激而作用。这些结果为进一步的实证研究提供了一定的依据。
李霞[6]（2021）在《环形泰勒虫转化宿主细胞的靶向代谢组学及牛p70S6K基因实时荧光定量PCR方法的建立》文中研究表明
李阿敏[7]（2021）在《煤尘暴露致人支气管上皮细胞肿瘤样转化效应及其机制研究》文中指出背景及目的煤炭目前仍然是不可替代的重要能源之一。流行病学研究显示煤矿工人的肺癌发病率高于普通人群,这表明煤炭矿区环境污染物可能会增加罹患肺癌的风险。本课题以人支气管上皮细胞为模型,研究煤尘（coal dust,CD）暴露的潜在致癌效应及毒理机制;为煤尘风险评估和实施暴露控制提供实验证据。研究方法（1）回顾及总结煤尘暴露与肺癌风险之间关系的流行病学证据,以评估煤尘暴露是否与增加的肺癌风险相关。（2）将人支气管上皮细胞（BEAS-2B）暴露于煤尘条件下传代培养,细胞水平利用苏木素-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining,HE）、噻唑蓝比色法（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）、克隆形成实验、划痕愈合实验、间接免疫荧光、彗星实验、蛋白质免疫印迹和高通量测序技术（Next Generation Sequencing,NGS）检测煤尘暴露后的细胞（BEAS-2BCD）的形态变化、增殖活力、迁移能力、DNA修复能力和基因组稳定性;动物水平将BEAS-2BCD细胞异种移植于BALB/c裸鼠,观察BEAS-2BCD细胞的体内成瘤潜能。综合评估煤尘暴露后的BEAS-2BCD细胞是否发生肿瘤样转化。（3）将煤尘短时暴露BEAS-2B细胞,通过HE染色、线粒体膜电位荧光探针、活性氧（reactive oxygen species,ROS）荧光探针、间接免疫荧光和蛋白质免疫印迹探讨煤尘暴露引起的应激损伤机制;在此损伤机制的研究基础上,利用蛋白质免疫印迹、细胞免疫化学染色、逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）、Annexin V-FITC/PI染色以及流式细胞术探究煤尘慢性暴露诱导BEAS-2BCD细胞肿瘤样转化的可能毒理机制。研究结果（1）Meta分析结果显示煤尘暴露与肺癌的相对风险（relative risk,RR）为1.46（95%CI 1.29-1.66）,表明煤尘暴露者发生肺癌的危险性为非暴露者的1.46倍,提示煤尘暴露与肺癌呈正相关关系,煤尘暴露是肺癌的一个危险因素。（2）煤尘暴露条件下培养30代后的人支气管上皮细胞（BEAS-2BCD）肿瘤样转化相关生物学表征:1)形态表征:BEAS-2BCD细胞体积增大,胞核增大,核质比例失常,核深染,核仁增多,较正常BEAS-2B细胞形态发生了显着异化。2)功能表征:BEAS-2BCD细胞培养24h、48h、72h、96h的平均活力分别为0.64、0.75、0.78、0.85,较正常培养相同代数的 BEAS-2B 细胞（0.46、0.65、0.67、0.73）显着增高（p<0.05）。同时,BEAS-2BCD细胞31.10%的平均克隆形成率较BEAS-2B细胞（10.13%）提高三倍之多（p<0.01）。并且,BEAS-2BCD细胞24h的平均迁移率（50.83%）也显着高于BEAS-2B细胞（17.71%）（p<0.01）。提示BEAS-2BCD细胞的增殖活力及迁移能力显着增强。此外,顺铂处理24h时,BEAS-2BCD细胞内DNA断裂的γ-H2AX焦点均数（18个/细胞）明显少于BEAS-2B细胞（26个/细胞）（p<0.05）;去除顺铂并继续培养12h和24h时,BEAS-2BCD的γ-H2AX焦点均数分别为9个/细胞和4个/细胞,均显着少于BEAS-2B细胞（22个/细胞和15个/细胞）（p<0.05）。彗星实验显示顺铂处理24h及去除顺铂12h和24h时,BEAS-2BCD细胞的DNA损伤率（15%、8%、3%）亦明显低于BEAS-2B细胞（19%、14%、10%）（p<0.05）。同时蛋白质印迹显示BEAS-2BCD细胞内DNA修复酶ATM/ATR和DNA-PKcs磷酸化水平均高于BEAS-2B细胞（p<0.05）。以上结果证实BEAS-2BCD细胞DNA修复能力显着增强,提示其对外界环境的适应性及抗凋亡能力显着提高;3)基因组转录表征:NGS检测结果显示BEAS-2BCD细胞基因组不稳定。促增殖、迁移,抗凋亡相关基因（CXCR4、CASC9、CNPY2、CRNDE、FAM83A、EGFR、BCAT1、HMGA1、NSUN2、ANKHD1、ZNF326 等）表达显着增加;原癌基因（MET、MYC、FYN、ABL2、ATF1、SET、ETS2等）显着高表达,抑癌基因（ADARB1、GLIPR1、CDO1、CTDSPL、DLC1、TOM1L2 等）表达明显降低;细胞跨膜信号转导（整合素、EGFR、VEGF、PDGF等）、胞内信号传导（PI3K/AKT、MAPK、mTOR等）相关通路显着上调。表明煤尘暴露后的BEAS-2BCD细胞较BEAS-2B细胞具有显着增强的新陈代谢活动、自我更新能力、增殖、迁移、血管生成、损伤修复抗凋亡等肿瘤样转化相关生物学活性。4)体内成瘤表征:动物实验结果显示BEAS-2BCD细胞的新生物形成率为20%,终点体积为726.0mm3,肺腺癌细胞株H358阳性对照组的新生物形成率为60%,平均体积为2088.2mm3。新生物组织HE染色显示BEAS-2BCD组细胞呈混合性生长,细胞间伴有较多组织细胞反应,细胞核异型较明显。Ki-67免疫组化可见BEAS-2BCD组Ki-67阳性细胞比例较高,已接近H358阳性对照组,提示BEAS-2BCD细胞的增殖能力较强。BEAS-2BCD细胞荷瘤模型的建立,表明该细胞具有体内成瘤潜能。（3）机制研究结果显示煤尘短时暴露引起了 BEAS-2B细胞线粒体膜去极化（0h:3.79%,6h:6.45%,12h:17.34%,24h:25.03%）。ROS 生成显着增加（0h:4.08;6h:21.13,12h:75.46,24h:30.75）;线粒体凋亡通路蛋白 Caspase-9、Caspase-3和DFF45活化,两者共同诱导DNA断裂效应。煤尘暴露培养10代、20代和30代的BEAS-2B细胞内DNA修复酶ATM/ATR和DNA-PKcs,及相关联的通路蛋白AKT、mTOR、p70S6K、4E-BP1、EGFR和ERK磷酸化水平较正常BEAS-2B细胞显着增高,提示DNA断裂损伤激活了煤尘暴露细胞内同源重组（Homologous recombination,HR）和非同源末端连接（Non-homologous end-joining,NHEJ）两条DNA修复途径及其相关联的信号通路AKT/mTOR和EGFR/ERK。AKT、EGFR、ERK 抑制剂（MK-2206 2HC1、Gefitinib、LY3214996）的应用能显着降低BEAS-2BCD细胞的增殖活力、迁移能力,抑制细胞的周期进展并促进细胞的凋亡效应。其中ERK抑制剂（LY3214996）还显着降低了下游原癌基因转录因子MYC、ATF1和ETS2的磷酸化水平。以上结果表明AKT/mTOR和EGFR/ERK信号通路的异常活化在BEAS-2BCD细胞肿瘤样转化相关生物学活性中可能发挥重要作用。结论及意义（1）煤尘暴露可增加肺癌风险,是肺癌的危险因素之一。（2）煤尘暴露能诱导人支气管上皮细胞过度增殖、迁移、抗凋亡、基因组不稳定以及体内成瘤潜能等肿瘤样转化。（3）煤尘暴露可通过线粒体膜去极化,ROS生成和线粒体凋亡通路活化,驱动DNA损伤,激活DNA修复途径及其相关联的信号通路AKT/mTOR和EGFR/ERK等,可能是诱发人支气管上皮细胞肿瘤样转化重要的毒理机制之一。本研究结果为煤尘暴露的潜在致肺癌作用提供了新的实验证据,为进一步阐明相关肺癌致病机理提供了研究思路,具有一定的职业危害防控价值。图26表13参214
张慧[8]（2021）在《突变型p53对ALV-J复制与致瘤作用的影响及其机制研究》文中认为J亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）是一种来自内源性与外源性的重组病毒,主要诱发髓细胞瘤和血管瘤,使鸡群发生严重的免疫抑制及高死亡率。p53是生物体内普遍存在的一种抑癌基因,负责调控机体稳态。但p53发生突变时,其抑癌作用丧失,能够促进肿瘤细胞增殖和转化,增加肿瘤发生的风险。本实验室在进行ALV-J致病机制的研究中发现,p53基因突变是引起J亚群禽白血病发生的重要因素之一。当细胞和雏鸡在感染ALV-J后,p53基因的转录水平会出现异常升高且突变率达60%以上。本实验室选取了p53的高突变位点区构建质粒并转染至DF-1细胞,发现C末端1011-1025位碱基缺失的p53基因能够通过激活其他癌基因（p21、bcl-2、p27、c-myc）引起细胞周期阻滞,抑制细胞凋亡以促进ALV-J复制。但是面对复杂的机体内部环境,突变型p53在体内是否也具有促进ALV-J复制的能力尚不清楚。因此,本试验选择SPF鸡的种蛋,于鸡胚3日龄时经卵黄囊分别注射野生型（wtp53）和突变型（mtp53）p53重组慢病毒构建转基因鸡模型。利用活体GFP荧光信号成像分析、荧光定量PCR及Western Blot证实,wtp53及mtp53在鸡体内均处于持续过表达状态,表达部位主要集中于脑、心脏、肝脏、肾脏,且ALV-J感染成功。为了探究p53突变对机体的损害作用,本研究对过表达wtp53和mtp53鸡的体重、免疫器官指数和细胞因子表达水平进行检测。结果发现,相较于对照组和wtp53组,mtp53过表达明显抑制了鸡增重及脾脏、胸腺、法氏囊免疫器官的发育,导致血清中IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ细胞因子的表达量出现降低（P<0.05）。荧光定量分析心脏和肾脏中肿瘤相关基因表达情况,发现mtp53在整个实验过程中诱导了c-myc、bcl-2、p21、p27的高表达（P<0.001）。为了进一步解释p53突变影响ALV-J复制、发挥致瘤作用的具体机制,对注射了wtp53和mtp53慢病毒的16日龄鸡胚的尿囊腔接种ALV-J。结果发现mtp53过表达促进了ALV-J感染鸡泄殖腔排毒量的持续升高;5w后,mtp53过表达鸡的病毒血症数值明显高于wtp53过表达鸡。在鸡10日龄、30日龄、60日龄、90日龄时定期剖杀,结果显示在感染ALV-J情况下,相较于对照组和wtp53组,mtp53过表达明显抑制了鸡增重及脾脏、胸腺免疫器官的发育,且自30日龄起,mtp53过表达抑制IL-2、IL-8、TNF-α、IFN-γ细胞因子的表达,以90日龄最为明显（P<0.001）。组织荧光定量PCR检测结果表明,mtp53过表达显着促进了ALV-J复制（P<0.001）;病理组织学结果也证实,mtp53过表达增强了ALV-J的致瘤作用,在肝脏、肾脏、法氏囊、脑等器官内造成明显肿瘤病变,并提前了肿瘤的发生时间。荧光定量分析感染ALV-J鸡心脏和肾脏中肿瘤相关基因的表达情况,结果显示,随着鸡日龄增加和病毒增殖能力的增强,mtp53促进了c-myc、bcl-2、p21、p27的表达（P<0.001）。流式细胞术检测脾细胞凋亡情况,结果显示,相较于wtp53组,mtp53组明显抑制脾细胞凋亡,降低约10%左右。综上所述,鸡体内mtp53过表达提高ALV-J感染鸡的泄殖腔排毒及病毒血症,显着促进ALV-J在鸡体内的复制,增强ALV-J致病性。mtp53通过抑制免疫器官发育,减少细胞因子的分泌,同时诱导肿瘤相关基因c-myc、bcl-2、p21、p27的表达,抑制脾细胞凋亡,促进ALV-J的致瘤作用。p53基因突变及过表达在ALV-J感染致瘤中发挥关键作用,为ALV-J的防控提供了新思路。
乔丽丽[9]（2020）在《Notch信号的关键靶标PLEC在调节鳞状上皮稳态和参与食管鳞癌致癌机理中的研究》文中指出食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是常见的消化系统恶性肿瘤,其恶性程度高,预后较差。ESCC的发生是环境因素和遗传因素共同作用的结果。环境因素主要包括化学致癌物暴露、吸烟、饮酒等。在遗传方面,多项高通量全基因组或外显子测序揭示了多个ESCC中重要改变的基因,如TP53、Notch1、CDKN2A、PIK3CA等,这些基因涉及了多种驱动过程如基因组不稳定性、分化、增殖、细胞周期、表观遗传学改变等,其中分化发挥着非常重要的作用,但是其分子机制还不完全清楚。Notch信号是调节鳞状上皮分化的关键通路之一,其中Notch1起主导作用。Notch1还参与多种分化相关骨架蛋白以及细胞形态的调节。在鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,SCC）中,Notch 信号发挥了双刃剑作用,一方面 Notch作为抑癌基因发挥作用,另一方面,Notch信号还会被激活,促进SCC的进展。Plectin（PLEC）是一种细胞骨架交联蛋白,其与三种主要的胞浆骨架系统包括中间纤维、微管和肌动蛋白相互作用,参与细胞形态及机械动力学调节。有研究发现,PLEC突变与恶性肿瘤的发生有关。然而,PLEC在ESCC中的作用尚不清楚,它作为一种重要的骨架交联蛋白,与鳞状上皮分化稳态和Notch之间的关系尚未明确。本研究中,通过生物信息学分析发现PLEC在人ESCC组织中频繁突变,可能与Notch信号有关。随后,通过体外钙离子诱导分化模型确认PLEC是Notch信号的一个下游靶标,参与了食管鳞状上皮的分化稳态。在分化上皮中,plectin呈明显胞膜和少量胞浆定位,通过与细胞角蛋白及desmoplakin相互作用来维持上皮细胞的形态和功能。通过慢病毒shRNAs敲降PLEC会引起细胞形态变化,损害上皮稳态。此外,通过对大鼠食管上皮细胞进行三维类器官培养,发现PLEC缺失还会显着抑制类器官的形成,从而进一步说明了 PLEC在正常上皮中的重要性。接下来,本研究探索了 PLEC在ESCC发生发展中的作用。首先,通过qRT-PCR和组织芯片-免疫组织化学的方法揭示PLEC在ESCC组织中存在不同的表达模式,并且其表达与Notch1的表达呈正相关。其次,通过功能性实验证实,在ESCC中,PLEC发挥了抑癌或促癌的双重作用,这种差异性作用与PLEC的基因背景、定位以及肿瘤的分化有关。在Notch或PLEC突变的ESCC巾,PLEC功能异常或表达下降会促进肿瘤发生;而在PLEC野生型、分化良好的ESCC中,PLEC表达主要参与分化、抑制肿瘤发生,但对于PLEC野生型、分化差的ESCC,PLEC的高表达发挥了促癌作用。综上所述,PLEC作为Notch信号的一个关键靶基因,参与了食管上皮分化稳态的维持,并在ESCC发生和发展中发挥着重要作用,本研究将为ESCC发病机制的完善和治疗靶标的探寻提供新的指导和方向。
蔺莉[10]（2020）在《幽门螺杆菌慢性感染与MNNG协同诱导胃黏膜上皮恶性转化的细胞分子机制研究》文中研究说明【背景】胃癌是常见的消化道恶性肿瘤,发病率、死亡率呈逐年上升趋势,在我国发病率与死亡率均位居癌症总发病率和死亡率的第三位。幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）被认为是胃癌的一类致癌因子,细菌毒力因子及引发的慢性炎症都参与了胃黏膜细胞恶性转化的过程。H.pylori单独的致癌性并不强,许多内外协同因素可能会增强H.pylori的致癌性,比如亚硝酸盐的协同作用。H.pylori感染与胃癌的关系以及H.pylori诱发胃粘膜上皮细胞恶性转变的细胞分子机制仍不明确。阐明H.pylori长期慢性感染的致病机制对于胃癌的早期预防、早期诊断和早期治疗具有重要意义。【目的】模拟H.pylori临床感染过程建立H.pylori慢性感染的胃黏膜上皮细胞模型和小鼠模型,探讨H.pylori慢性感染或协同亚硝基化合物（MNNG）诱导黏膜上皮细胞恶性转化的细胞分子机制。【方法】1以人永生化胃黏膜上皮细胞GES-1为靶细胞,选取CagA+H.pylori J99株单独或联合MNNG连续感染诱导12个月,建立H.pylori慢性感染细胞模型,光镜及电镜观察细胞形态变化;MTT比色法、细胞克隆形成、Annexin V/PI双染色法检测细胞增殖和凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;ELISA法检测IL-8的浓度;克隆球形成和细胞表面标志测定细胞的肿瘤干细胞（CSC）样和上皮-间质转化（EMT）样改变;实时荧光定量RT-PCR、Western blotting和免疫荧光染色检测相关基因mRNA和蛋白质的表达。2以C57BL/6J小鼠为对象,使用CagA+H.pylori SS1株单独或联合MNNG灌胃,反复感染胃黏膜12个月,建立H.pylori慢性感染动物模型,定期处死部分小鼠,采集胃黏膜标本和血清,快速尿素酶和Warthin-Starry银染色法观察H.pylori的感染状况;ELISA检测血清中IL-8的浓度;电镜和HE染色光镜观察胃黏膜组织形态学变化;Western blotting和免疫组织化学染色检测细胞增殖、细胞凋亡、EMT和CSC等相关蛋白的表达。3收集72例临床病理学明确诊断、手术切除的胃癌标本,获取胃癌组织和癌旁组织,快速尿素酶法和Warthin-Starry银染色分为H.pylori感染组（40例）和H.pylori非感染组（32例）。HE染色光镜观察胃黏膜组织形态学变化,免疫组织化学染色检测胃癌和癌旁组织中IL-8和Wnt2表达。结合患者临床病理资料,分析H.pylori感染与临床表现、IL-8和Wnt2之间的相互关系;以生存曲线和生存回归分析H.pylori感染、IL-8表达、Wnt2表达与胃癌患者预后的相关性。【结果】1 CagA+H.pylori长期慢性感染后,随着感染时间的延长,胃黏膜上皮GES-1细胞异常增殖、抵抗凋亡、耐药性增高、IL-8表达和分泌加强,迁移和侵袭能力增强,CSCs样和间质细胞样的标志物显着增高。同时,NF-κB和Wnt/β-catenin信号途径均被活化。联合应用MNNG可显着加强H.pylori慢性感染对GES-1细胞的诱导效应。提示在NF-κB和Wnt/β-catenin通路的共同调控下,CagA+H.pylori长期慢性感染诱发胃粘膜上皮细胞发生CSC样和间质细胞样改变。2 CagA+H.pylori SS1株能够成功感染小鼠胃黏膜,在H.pylori长期、反复、慢性感染刺激下,小鼠胃黏膜逐渐发生了异常增生、粘膜内囊肿及腺瘤样息肉变、癌前病变等病理学改变,IL-8表达和释放增高、炎性反应明显;Cyclin D1、Bcl2和Bax蛋白表达显示粘膜细胞异常增生和凋亡降低。同GES-1一样,小鼠胃黏膜上皮细胞CSCs样和间质细胞样的标志物增高,NF-κB和Wnt/β-catenin通路被异常激活。协同MNNG作用显着提高H.pylori的感染效应。提示CagA+H.pylori长期慢性感染致小鼠胃黏膜Wnt/β-catenin/IL-8通路异常活化,粘膜细胞发生炎性反应、呈现CSC样、EMT样及癌前病变病理改变。3临床胃癌患者癌组织IL-8和Wnt2的表达明显高于癌旁正常黏膜组织,H.pylori感染胃癌组织IL-8和Wnt2的表达显着高于未感染者,且IL-8表达与Wnt2的表达呈正相关。早期及无淋巴结转移者IL-8和Wnt2表达阳性率均低于进展期及有淋巴结转移者;IL-8和Wnt2阳性表达的胃癌患者生存率显着低于阴性表达者。【结论】CagA+H.pylori慢性感染协同MNNG激活胃黏膜细胞Wnt/β-catenin/NF-κB/IL-8调控通路,诱导胃黏膜上皮细胞异常增殖及肿瘤干细胞样和间质细胞样改变,促发胃黏膜炎性反应和癌前恶性转化。临床H.pylori感染阳性胃癌活化Wnt/β-catenin和NF-κB通路降低患者生存率。
二、玻璃纤维诱导的转化细胞活化癌基因的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、玻璃纤维诱导的转化细胞活化癌基因的研究（论文提纲范文）
（1）细胞竞争和肿瘤（论文提纲范文）
| 1 细胞竞争 |
| 2 细胞竞争促进肿瘤的进展 |
| 3 抑制肿瘤的细胞竞争 |
| 3.1 正常上皮细胞清除转化细胞 |
| 3.2 EDAC的分子机制 |
| 3.3 细胞竞争(如EDAC)的影响因素 |
| 4 基于细胞竞争的预防和治疗肿瘤的潜在策略 |
| 4.1 维持和增强EDAC,预防和治疗肿瘤 |
| 4.2 抑制肿瘤细胞的优势竞争，预防和治疗肿瘤 |
| 4.3 揭开肿瘤细胞的劣势本相，从而治疗肿瘤 |
（2）糖代谢重编程与“炎-癌转化”及抗炎中药靶向肿瘤糖代谢抗肿瘤作用机制研究进展（论文提纲范文）
| 1“炎-癌转化” |
| 2 炎症促进糖代谢重编程介导“炎-癌转化” |
| 2.1 炎症介质介导“炎-癌转化”过程相关细胞糖代谢重编程 |
| 2.1.1 白细胞介素1亚家族 |
| 2.1.2 白细胞介素6 |
| 2.1.3 肿瘤坏死因子α和白细胞介素17 |
| 2.1.4 谷氨酰胺转氨酶2 |
| 2.2 炎症因子介导“炎-癌转化”过程相关细胞糖代谢重编程的作用机制 |
| 2.2.1 微RNA上调HK2 |
| 2.2.2 p53抑制NF-κκB |
| 2.2.3 低氧诱导因子1α表达上调 |
| 2.2.4 c-Myc表达失调 |
| 3 靶向肿瘤糖代谢的抗炎中药 |
| 3.1 具有抗肿瘤活性的抗炎中药 |
| 3.2 抗炎中药的活性单体成分 |
| 4 结语 |
（3）JSRV Env通过Akt/mTOR信号通路调控绵羊绒毛膜滋养层细胞增殖（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要材料与试剂 |
| 1.1.2 仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 绵羊绒毛膜滋养层细胞解冻复苏与体外培养 |
| 1.2.2 JSRV过表达慢病毒及空病毒载体转染STCs |
| 1.2.3 细胞蛋白提取及蛋白免疫印迹试验 |
| 1.2.4 MTT比色法检测细胞增殖情况 |
| 1.2.5 JSRV Env过表达慢病毒转染STCs并加入雷帕霉素 |
| 2 结果 |
| 2.1 JSRV Env慢病毒感染STCs细胞 |
| 2.2 Western blot检测STCs细胞中Akt/mTOR信号通路蛋白表达量 |
| 2.3 Western blot检测加入雷帕霉素后的mTOR表达量 |
| 2.4 MTT测定细胞增殖 |
| 3 讨论 |
（4）小鼠Kupffer细胞的转分化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩写词对照表 |
| 前言 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肝脏概述 |
| 1.2 肝脏纤维化 |
| 1.2.1 肝细胞的死亡与凋亡 |
| 1.2.2 肝纤维化发展 |
| 1.2.3 肝纤维化中肌成纤维细胞的组成 |
| 1.3 KCs在肝脏学中的研究进展 |
| 1.3.1 KCs的起源 |
| 1.3.2 KCs在肝脏结构中的定位 |
| 1.3.3 KCs的免疫作用 |
| 1.3.4 KCs的异质性 |
| 1.3.5 KCs的可塑性 |
| 1.3.6 KCs与肝脏疾病 |
| 1.4 细胞谱系追踪技术 |
| 1.4.1 细胞谱系追踪技术的基本原理 |
| 1.4.2 细胞谱系追踪的标记方法 |
| 1.4.3 细胞谱系追踪在肝脏研究中的应用 |
| 1.4.4 细胞谱系追踪的未来 |
| 1.6 细胞的转分化 |
| 1.6.1 细胞转分化概述 |
| 1.6.2 自然发生的转分化 |
| 1.6.3 实验性转分化 |
| 1.6.4 肝脏中的转分化 |
| 1.6.5 转分化应用于再生医学的优点和局限性 |
| 第2章 KCs在体外非实质细胞培养过程中的形态和表型变化研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 2.2.4 主要实验试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 非实质细胞分离 |
| 2.3.2 收集培养的非实质细胞 |
| 2.3.3 多聚体免疫共沉淀 |
| 2.3.4 RNA提取 |
| 2.3.5 基因表达分析 |
| 2.3.6 免疫荧光成像 |
| 2.3.7 统计学方法 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 精密肝切片培养实验过程中,KCs特征性基因表达下调 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 3.2.4 主要实验试剂配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 在精密肝切片培养和体外非实质细胞培养实验中,KCs中纤维化相关基因表达分析研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 KCs在培养过程中转录因子基因表达研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 主要实验耗材与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.4 结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 KCs与肝片中胶原沉积的初步探索研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.1.1 实验动物 |
| 6.1.2 实验试剂 |
| 6.1.3 主要实验耗材与设备 |
| 6.1.4 主要实验试剂配制 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 KCs耗竭 |
| 6.2.2 肝片培养、基因分析等方法同前所述 |
| 6.3 结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 本实验创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）基于生物信息学和网络药理学整合策略的人参平肺散干预特发性肺纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 综述 |
| 综述一 特发性肺纤维化发病机制的研究进展 |
| 综述二 生物信息学和网络药理学的主要研究方法及原理 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 基于特发性肺纤维化转录组数据的生物信息学研究 |
| 第一节 特发性肺纤维化的基因集富集研究 |
| 1 特发性肺纤维化的GSEA基因集富集分析 |
| 2 特发性肺纤维化关键基因的差异表达基因分析 |
| 3 讨论 |
| 第二节 特发性肺纤维化不同临床特征的加权基因共表达网络研究 |
| 1 特发性肺纤维化的基因共表达特征 |
| 2 特发性肺纤维化不同临床特征的基因共表达特征 |
| 3 特发性肺纤维化的分子特征 |
| 4 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 人参平肺散干预特发性肺纤维化的网络药理学研究 |
| 第一节 人参平肺散干预特发性肺纤维化的网络调控机制研究 |
| 第二节 人参平肺散干预中、高年龄特发性肺纤维化的网络调控机制比较研究 |
| 1 人参平肺散成分干预特发性肺纤维化高龄特征的网络机制 |
| 2 人参平肺散成分干预特发性肺纤维化中年特征的网络机制 |
| 3 讨论 |
| 第三节 人参平肺散对特发性肺纤维化调控机制的虚拟对接研究 |
| 1 以TGF β信号通路为例的通路靶点选择 |
| 2 人参平肺散靶点的计算机模拟对接研究 |
| 3 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 人参平肺散干预TGF-β_1诱导肺成纤维细胞MRC-5细胞表型转化的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 本章小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 主要内容和结果 |
| 2 创新点 |
| 3 问题与展望 |
| 附录 中英文缩略词对照表 |
| 攻读博士期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）煤尘暴露致人支气管上皮细胞肿瘤样转化效应及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 一. 研究背景与意义 |
| 二. 国内外煤尘致病现状与存在问题 |
| 1. 煤尘致呼吸系统疾病现状 |
| 2. 煤尘暴露与肺癌 |
| 3. 煤尘致病机制研究进展 |
| 4. 煤尘致肺组织的遗传物质不稳定 |
| 三. 研究内容、技术路线及研究意义 |
| 1. 主要研究内容 |
| 2. 研究的技术路线 |
| 3. 主要研究意义 |
| 四. 参考文献 |
| 第一部分 煤尘暴露与肺癌风险的Meta分析 |
| 一. 材料与方法 |
| 1. 文献检索 |
| 2. 文献筛选与数据提取 |
| 3. 文献质量评价 |
| 4. 统计学分析 |
| 二. 结果 |
| 1. 文献纳入结果 |
| 2. 纳入研究的基本信息与质量评价 |
| 3. 综合分析 |
| 4. 敏感度分析和发表偏倚评价 |
| 5. 亚组分析 |
| 三. 讨论 |
| 四. 结论 |
| 五. 参考文献 |
| 第二部分: 煤尘暴露致人支气管上皮细胞肿瘤样转化效应研究 |
| 一. 材料与方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 二. 结果 |
| 1. 煤尘的理化性质 |
| 2. 煤尘暴露致BEAS-2B~(CD)细胞形态学异常 |
| 3. 煤尘暴露致BEAS-2B~(CD)细胞增殖活力、迁移及DNA修复能力显着增强 |
| 4. 煤尘暴露致BEAS-2B~(CD)细胞基因组不稳定 |
| 5. 煤尘暴露致BEAS-2B~(CD)细胞内病理性信号通路显着上调 |
| 6. 煤尘暴露赋予BEAS-2B~(CD)细胞体内成瘤潜能 |
| 三. 讨论 |
| 四. 结论 |
| 五. 参考文献 |
| 第三部分 煤尘暴露致人支气管上皮细胞肿瘤样转化机制研究 |
| 一. 材料与方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 二. 结果 |
| 1. 煤尘暴露BEAS-2B细胞触发线粒体损伤 |
| 2. 线粒体损伤诱导DNA断裂 |
| 3. DNA断裂激活HR/NHEJ修复酶及其相关联的AKT/mTOR和EGFR/ERK信号通路 |
| 4. AKT/mTOR和EGFR/ERK信号通路增强BEAS-2B~(CD)细胞增殖活力、迁移能力并激活原癌基因转录因子 |
| 5. 抑制AKT/mTOR和EGFR/ERK信号通路降低BEAS-2B~(CD)细胞增殖活力、周期进展、迁移能力并促进细胞凋亡 |
| 三. 讨论 |
| 四. 结论 |
| 五. 参考文献 |
| 结论 |
| 主要创新点 |
| 综述 线粒体功能异常与肿瘤的发生与发展 |
| 1. 线粒体代谢与肿瘤 |
| 2. 线粒体动力学与肿瘤 |
| 3. 线粒体凋亡与肿瘤 |
| 4. 线粒体基因组不稳定与肿瘤 |
| 5. 线粒体ROS与肿瘤 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介及读研期间主要科研成果 |
（8）突变型p53对ALV-J复制与致瘤作用的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 J亚群禽白血病病毒 |
| 1.1.1 ALV-J病原学特点 |
| 1.1.2 ALV-J的病毒基因组结构 |
| 1.1.3 ALV-J理化性质 |
| 1.1.4 ALV-J的复制过程 |
| 1.1.5 ALV-J流行病学 |
| 1.1.6 ALV-J的致病性 |
| 1.1.7 ALV-J诊断方法 |
| 1.2 p53 基因 |
| 1.2.1 p53 基因结构 |
| 1.2.2 p53 蛋白 |
| 1.2.3 p53 的调控作用 |
| 1.2.4 p53 基因突变 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 2 材料方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞、病毒与实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 试验仪器和设备 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 细胞复苏与传代培养 |
| 2.2.2 ALV-J扩增和病毒效价测定 |
| 2.2.3 ALV-J gp85 重组蛋白的表达鉴定与纯化 |
| 2.2.4 gp85 多克隆抗体的制备 |
| 2.2.5 gp85 多抗血清辛酸-硫酸铵法纯化 |
| 2.2.6 gp85 多抗特异性的检测 |
| 2.2.7 p53 重组慢病毒感染DF-1 细胞验证表达情况 |
| 2.2.8 动物实验方案 |
| 2.2.9 p53 体内过表达模型的建立 |
| 2.2.10 ALV-J体内过表达模型的建立 |
| 2.2.11 免疫器官指数 |
| 2.2.12 采集全血检测细胞因子和p53 抗体水平 |
| 2.2.13 采集棉拭子检测排毒情况 |
| 2.2.14 采集抗凝血检测病毒血症情况 |
| 2.2.15 病理组织学观察 |
| 2.2.16 细胞RNA基因组提取 |
| 2.2.17 荧光定量分析 |
| 2.2.18 Western blot分析 |
| 2.2.19 鸡脾脏淋巴细胞凋亡情况 |
| 2.2.20 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 ALV-J效价验证 |
| 3.2 gp85 蛋白多克隆抗体制备 |
| 3.2.1 gp85 重组质粒的构建及鉴定 |
| 3.2.2 pET-His-gp85 原核重组蛋白的表达鉴定 |
| 3.2.3 pET-His-gp85 重组蛋白的纯化结果 |
| 3.2.4 gp85 蛋白多克隆抗体效价测定 |
| 3.2.5 gp85 蛋白多克隆抗体IFA鉴定结果 |
| 3.3 构建体内p53 过表达的ALV-J感染模型 |
| 3.3.1 DF-1 细胞验证慢病毒表达情况 |
| 3.3.2 p53 重组慢病毒和ALV-J注射鸡胚 |
| 3.4 野生型和突变型p53 重组慢病毒对SPF鸡生长的影响 |
| 3.4.1 p53 重组慢病毒过表达检测结果 |
| 3.4.2 体重及免疫器官指数检测结果 |
| 3.4.3 血清中细胞因子的检测结果 |
| 3.4.4 各组织器官中肿瘤相关基因的表达检测结果 |
| 3.5 野生型和突变型p53 在体内对ALV-J感染和致瘤作用的比较研究结果 |
| 3.5.1 p27 抗原检测结果 |
| 3.5.2 体重及免疫器官指数检测结果 |
| 3.5.3 临床症状及剖检病变 |
| 3.5.4 组织病理学观察 |
| 3.5.5 p53 重组慢病毒过表达检测结果 |
| 3.5.6 各组织器官中ALV-J的复制情况 |
| 3.5.7 各组织器官中肿瘤相关基因的表达检测结果 |
| 3.5.8 血清中细胞因子的表达检测结果 |
| 3.5.9 流式细胞术检测感染ALV-J鸡脾脏淋巴细胞凋亡结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 mtp53对ALV-J复制的影响 |
| 4.2 mtp53在ALV-J致瘤中的作用 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（9）Notch信号的关键靶标PLEC在调节鳞状上皮稳态和参与食管鳞癌致癌机理中的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 基金资助 |
| 博士在读期间即将发表的英文文章 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）幽门螺杆菌慢性感染与MNNG协同诱导胃黏膜上皮恶性转化的细胞分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 幽门螺杆菌感染与胃癌 |
| 1 幽门螺杆菌致病机制 |
| 1.1 幽门螺杆菌的生物学特征 |
| 1.2 幽门螺杆菌的毒力因子 |
| 1.3 慢性炎症与胃癌 |
| 2 胃癌发病的危险因素 |
| 2.1 遗传 |
| 2.2 食物因素 |
| 2.3 幽门螺杆菌感染 |
| 2.4 幽门螺杆菌感染与亚硝酸盐的协同作用 |
| 3 幽门螺杆菌感染在胃癌发生发展中的作用 |
| 4 幽门螺杆菌感染与胃癌干细胞 |
| 4.1 肿瘤干细胞 |
| 4.2 胃癌干细胞(gastric CSCs,GCSCs) |
| 4.3 上皮间质样转化(EMT)与胃癌干细胞 |
| 5 幽门螺杆菌感染激活的相关信号通路 |
| 5.1 Wnt/β-catenin信号通路 |
| 5.2 Sonic hedgehog(Shh)信号通路 |
| 5.3 Nuclear factor kappa B(NF-κB)信号通路 |
| 5.4 Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs) |
| 6 H.pylori感染与胃黏膜病理性损伤 |
| 6.1 H.pylori共存性胃炎(coexisting gastritis) |
| 6.2 与H.pylori相关的胃黏膜病变 |
| 7 结语 |
| 第二章 CagA~+H.pylori慢性感染协同亚硝基化合物诱导胃黏膜上皮细胞发生间质样和干细胞样改变 |
| 材料与方法 |
| 1 主要试剂 |
| 2 主要仪器 |
| 3 实验方法 |
| 结果 |
| 1 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导GES-1 细胞异常增殖 |
| 2 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导GES-1 细胞凋亡抵抗 |
| 3 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导GES-1 细胞发生EMT,迁移、侵袭能力增强 |
| 4 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导GES-1 细胞出现肿瘤干细胞样特性 |
| 5 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导后GES-1 细胞致炎因IL-8 分泌增高 |
| 6 Wnt/β-catenin/NF-κB/IL-8 通路调控CagA~+H.pylori诱导的GES-1 细胞EMT和CSCs样特性 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三章 CagA~+H.pylori慢性感染协同亚硝基化合物诱导小鼠胃黏膜上皮异常增生和癌前病变 |
| 材料与方法 |
| 1 主要试剂 |
| 2 主要仪器 |
| 3实验动物及幽门螺杆菌SS1 |
| 4 实验方法 |
| 结果 |
| 1 小鼠CagA~+H.pylori慢性感染模型的建立 |
| 2 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导后小鼠胃黏膜的变化 |
| 3 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导后小鼠胃黏膜发生EMT和 CSCs样转化 |
| 4 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导后小鼠胃黏膜炎性反应 |
| 5 CagA~+H.pylori慢性感染协同MNNG诱导激活胃黏膜细胞的Wnt/β-catenin和NF-κB信号通路 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第四章 幽门螺杆菌感染患者胃癌组织IL-8和Wnt2的表达及临床意义 |
| 材料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 2 临床标本获取 |
| 3 实验研究 |
| 结果 |
| 1 胃癌组织和癌旁组织H.pylori感染状况 |
| 2 胃癌组织中IL-8 的表达与H.pylori感染的相关性 |
| 3 胃癌组织中Wnt2 蛋白的表达与H.pylori感染的相关性 |
| 4 胃癌组织中IL-8与Wnt2表达相关性 |
| 5 H.pylori、IL-8和Wnt2 与胃癌临床、病理指标的关系 |
| 6 H.pylori感染、IL-8和Wnt2 的表达与胃癌的预后分析 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间完成的科研成果 |
| 致谢 |
四、玻璃纤维诱导的转化细胞活化癌基因的研究（论文参考文献）
- [1]细胞竞争和肿瘤[J]. 袁嘉玮,李雨辰,唐楷杰,侯妮. 中国细胞生物学学报, 2021(11)
- [2]糖代谢重编程与“炎-癌转化”及抗炎中药靶向肿瘤糖代谢抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 梁晓晖,石海莲,吴晓俊. 中国药理学与毒理学杂志, 2021
- [3]JSRV Env通过Akt/mTOR信号通路调控绵羊绒毛膜滋养层细胞增殖[J]. 段续接,杨惠,刘淑英. 动物医学进展, 2021(09)
- [4]小鼠Kupffer细胞的转分化研究[D]. 李昕宇. 吉林大学, 2021(01)
- [5]基于生物信息学和网络药理学整合策略的人参平肺散干预特发性肺纤维化的机制研究[D]. 杨斓. 南京中医药大学, 2021
- [6]环形泰勒虫转化宿主细胞的靶向代谢组学及牛p70S6K基因实时荧光定量PCR方法的建立[D]. 李霞. 宁夏大学, 2021
- [7]煤尘暴露致人支气管上皮细胞肿瘤样转化效应及其机制研究[D]. 李阿敏. 安徽理工大学, 2021
- [8]突变型p53对ALV-J复制与致瘤作用的影响及其机制研究[D]. 张慧. 山东农业大学, 2021(01)
- [9]Notch信号的关键靶标PLEC在调节鳞状上皮稳态和参与食管鳞癌致癌机理中的研究[D]. 乔丽丽. 北京协和医学院, 2020
- [10]幽门螺杆菌慢性感染与MNNG协同诱导胃黏膜上皮恶性转化的细胞分子机制研究[D]. 蔺莉. 兰州大学, 2020(01)