一、玉米赤霉烯酮免疫检测技术研究——兔抗玉米赤霉烯酮抗体研制（论文文献综述）
魏振,王秋玲,石继超,龙淼[1]（2022）在《玉米赤霉烯酮检测方法研究现状》文中提出玉米赤霉烯酮是一种常见的饲料霉菌毒素,是世界范围内污染农作物最严重的霉菌毒素之一。当畜禽采食了被玉米赤霉烯酮污染的饲料后,会对机体造成生殖毒性、肝肾毒性、细胞毒性、免疫毒性,甚至还可在机体组织中残留,通过动物性食品危及人类的健康,所以,精准的检测出饲料及饲料原料和食品中玉米赤霉烯酮毒素含量,对于保证食品安全具有重要的意义。因此,论文对国内外玉米赤霉烯酮目前检测方法如免疫分析法、分子印迹固相萃取、QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱、生物传感器等优点及存在的问题进行综述,为以后开发出更经济、更快捷、更精确、更安全、更易推广的玉米赤霉烯酮检测方法提供参考。
张浩楠,高建伟[2]（2021）在《玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定》文中指出为了降低基层检测部门检测谷物中玉米赤霉烯酮（ZEN）的成本,研制国产化检测试剂盒非常必要,而试剂盒的研制离不开完全抗原的支持。本试验的主要内容是将ZEN肟化,生成玉米赤霉烯酮肟（ZENO）,再用DCC-NHS活性酯法将ZENO与牛血清白蛋白（BSA）、鸡卵白蛋白（OVA）偶联合成ZEN完全抗原,最后透析将未偶联的小分子ZEN除去,得到的即为完全抗原。包被原ZEN-BSA浓度为1.62 mg·mL-1,免疫原ZEN-OVA浓度为1.33mg·mL-1。采用UV法、SDS-PAGE法对完全抗原进行鉴定,同时建立间接ELISA方法验证包被原ZEN-BSA。结果表明:采用活性酯法合成的ZEN完全抗原在319nm处出现新的吸收峰,且SDS-PAGE图表明ZEN-BSA分子量集中在60～70kDa,ZEN-OVA分子量集中在40～50kDa,不同于BSA和OVA分子量,但相差不大。根据紫外扫描图计算得到ZEN-BSA结合比为7.0∶1,ZEN-OVA结合比为6.1∶1。根据免疫学方法可知,OD450nm值随着毒素浓度的增加而减小。本试验利用3种方法对ZEN完全抗原进行鉴定,证明ZEN完全抗原偶联成功。
李静芝[3]（2021）在《食品中伏马毒素B1和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光传感技术研究》文中认为目的真菌毒素在很多谷物及其制品中常共同存在,对人和动物均有急慢性毒性、致癌、致畸等作用,因此仅检测其中一种毒素的方法已不能满足需求。上转换纳米颗粒（Upconversion nanoparticles,UCNPs）因其大的反斯托克斯位移、发射峰窄和不易光漂白等优势,在食品污染物的高灵敏检测中展现出良好应用前景。因此本研究将以UCNPs为核心,建立两种同时检测食品中FB1和ZEN的上转换荧光传感技术,实现两种毒素的高灵敏同时检测,以期为食品安全检测提供新的思路。方法1.伏马毒素B1和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光免疫传感技术研究。构建了一种基于BA法（生物素-亲和素）的上转换荧光免疫分析技术同时检测两种真菌毒素。以96孔酶联板作为检测平台,对UCNPs表面修饰链霉亲和素获得上转换荧光探针,其可与生物素标记的单克隆抗体特异性识别,随着反应体系中待测目标物浓度的升高,荧光强度与其呈现一定的线性关系,以此实现目标物的检测。2.伏马毒素B1和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光结合磁分离传感技术研究。建立了一种基于磁分离和双色上转换的高灵敏免疫荧光传感器,用于同时检测FB1和ZEN。首先采用改良的溶剂热法合成两种UCNPs,表面氨基化修饰后,分别与两种毒素抗原偶联形成上转换荧光探针;将环氧基磁珠分别与毒素抗体偶联获得磁珠捕获探针。根据免疫竞争原理,随着反应体系中待测目标物浓度的升高,上清中荧光强度的变化与其呈现一定的线性关系,据此实现两种目标物的高灵敏检测。结果1.FB1和ZEN同时检测的上转换荧光免疫传感技术研究:本方法中用808 nm激发的六方相UCNPs,其粒径均一,分散性良好,平均直径50 nm。在最佳检测条件下,上转换荧光强度随着目标物浓度的增加而降低,FB1和ZEN在0.2 ng/m L～80 ng/m L,0.5 ng/m L～125 ng/m L的线性范围内,检出限分别达到0.16 ng/m L、0.20 ng/m L。本方法可用于玉米粉和牛奶的加标回收,平均回收率在97.81%～114.52%之间,RSD<5.0%。2.FB1和ZEN同时检测的上转换荧光结合磁分离传感技术研究:本方法中用980 nm激发的两种六方相的UCNPs,分散性良好、粒径均一,平均直径为30nm。在最佳优化条件下,上转换荧光强度随着目标物浓度的增大而增加,FB1和ZEN的线性范围在0.05 ng/m L～5 ng/m L之间,检出限分别为0.016 ng/m L、0.012ng/m L。该方法已成功用于真实样品检测中,平均回收率在85.97%～113.82%之间,RSD<5.0%。结论本文围绕上转换纳米颗粒这一新型纳米材料,以两种真菌毒素为检测对象,成功构建了两种上转换荧光传感技术,实现了FB1和ZEN的同时检测。此外,本研究建立的两种检测方法在灵敏度、准确性和简便性等方面均有一定程度的提升,为实现食品中污染物多靶标高灵敏检测提供了新的思路。
李茜[4]（2020）在《玉米赤霉烯酮对小鼠B淋巴细胞体外活化的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEA）是一种由镰刀菌属真菌产生的具有雌激素效应的霉菌毒素,普遍存在于全球各地被污染的谷物及谷物产品中,具有生殖、内分泌、免疫等多种毒性作用,甚至可导致肿瘤的发生,严重影响动物和人类的健康。近年来,玉米赤霉烯酮免疫毒性导致的动物疾病抵抗力下降、传染病易感性升高等现象越来越受到人们的重视,但相关分子机制尚未完全探明。本试验以小鼠脾脏B淋巴细胞为研究对象,通过体外试验研究了 ZEA对体液免疫中起关键作用的B淋巴细胞增殖活化、分泌功能和相关信号通路的影响,旨在揭示ZEA对动物免疫功能影响的机制。1.ZEA对小鼠B淋巴细胞活性及增殖的影响使用免疫磁珠阴性分选法从6-8周龄Balb/c小鼠脾脏中获取原代脾脏B淋巴细胞,以 0（对照组）,0.1,1.0,2.5,5.0,10μg/mL 的脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）分别处理B淋巴细胞24 h,48h,CCK-8法检测LPS激活脾脏B淋巴细胞的效果,筛选合适的活化剂浓度;以0（对照组）,5,10,20,40,80μmol/L的ZEA分别处理未添加/添加活化剂LPS（5μg/mL）的B淋巴细胞24h,CCK-8法检测ZEA对脾脏B淋巴细胞活性和增殖的影响。结果显示,24 h时5 μg/mL LPS刺激小鼠脾脏B淋巴细胞活性显着上升（p<0.05）。ZEA染毒未活化的B淋巴细胞浓度达到80 μmol/L时致B淋巴细胞活性显着下降（P<0.05）。添加LPS的ZEA染毒试验中,24 h时20 μmol/L ZEA处理组细胞活性显着低于对照组（p<0.05）,40、80μmol/LZEA处理组细胞活性极显着低于对照组（p<0.01）;48 h时10μmol/L ZEA处理组细胞活性较对照组显着下降（p<0.05）,20、40、80μmol/LZEA处理组细胞活性极显着低于对照组（p<0.01）,呈剂量-效应依赖关系。结果说明,LPS能够刺激小鼠脾脏B淋巴细胞活化增殖,ZEA对小鼠B淋巴细胞有毒性作用,ZEA可以抑制小鼠B淋巴细胞增殖活化的能力。2.ZEA对小鼠B淋巴细胞活化分泌功能的影响以分选的小鼠脾脏B淋巴细胞为材料,设立空白对照组（不含LPS）、LPS（5μg/mL）对照组、ZEA（20 μmol/L）+LPS（5 μg/mL）处理组、ZEA（40 μmol/L）+LPS（5 μg/mL）处理组共四组,染毒处理24 h后,利用流式细胞术检测B淋巴细胞表面抗原CD40、CD80、CD86的表达水平,流式液相多重蛋白定量技术检测细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α的分泌水平;利用ELISA试剂盒法检测细胞培养上清液中抗体IgG,IgM的表达水平。结果显示,与空白对照组比较,LPS对照组CD40、CD80表达量均显着升高（p<0.05）,CD86表达量极显着升高（p<0.01）;与LPS对照组比较,随着ZEA染毒浓度的升高,各染毒组CD40、CD80的分泌量呈现下降趋势,40μmol/L ZEA处理组CD40和CD80的表达量显着降低（p<0.05）,CD86的表达量变化不明显（p>0.05）。与空白对照组相比,LPS对照组IL-6、IL-10、TNF-α的分泌量均有极显着上升（p<0.01）;与LPS对照组比较,各浓度ZEA处理组IL-6、IL-10、TNF-α的分泌量均极显着下降（p<0.01）,且呈剂量-效应依赖关系。与空白对照组相比,LPS对照组抗体IgG分泌量极显着升高（p<0.01）;与LPS对照组比较,随着ZEA染毒浓度的升高,染毒组IgG的分泌量呈下降趋势,20 μmol/LZEA处理组IgG分泌量较LPS对照组显着降低（p<0.05）,40μmol/L ZEA处理组IgG分泌量较LPS对照组极显着降低（p<0.01）。与空白对照组相比,LPS对照组抗体IgM分泌量显着升高（P<0.05）;与LPS对照组比较,ZEA处理组IgM分泌量变化不明显（p>0.05）。结果说明,ZEA可以减少B淋巴细胞表面抗原的表达量,抑制B淋巴细胞有关细胞因子的表达,降低B淋巴细胞分泌相关抗体的能力。3.ZEA对小鼠B淋巴细胞活化相关信号通路的影响以分选的小鼠脾脏B淋巴细胞为材料,设立空白对照组（不含LPS）、LPS（5 μg/mL）对照组、ZEA（20μmol/L）+LPS（5 μg/mL）处理组、ZEA（40 μmol/L）+LPS（5μg/mL）处理组,共同处理24 h后,利用western blot方法检测细胞凋亡信号通路相关蛋白JNK、ERK1/2、P38和NF-κB表达水平的变化情况。结果显示,与空白对照组相比,LPS对照组JNK、ERK1/2、P38和NF-κB蛋白表达量均上升,其中NF-κB蛋白表达量呈显着性升高（p<0.05）。与LPS对照组比较,20 μmol/LZEA处理组J-NK蛋白表达量升高显着（p<0.05）,40μmol/LZEA处理组升高极显着（p<0.01）;各染毒处理组ERK1/2蛋白表达量均升高（p<0.05）;40 μmol/LZEA处理组P38蛋白和NF-κB蛋白表达量均显着性下降（p<0.05）。结果说明,ZEA能够激活JNK、ERK通路蛋白的表达,抑制P38、NF-κB通路蛋白的表达。结论:ZEA可通过抑制多种细胞因子分泌、抗体的分泌和细胞表面抗原的表达,同时干扰维持细胞正常功能的相关通路关键蛋白表达等途径,影响小鼠体液免疫中B淋巴细胞的活化,影响B淋巴细胞正常功能的发挥,致使动物机体发生免疫抑制。
唐晓倩[5]（2020）在《农产品典型真菌毒素生物识别材料与快速检测方法研究》文中研究说明真菌毒素危害大、防控难,威胁农产品质量安全。开展农产品真菌毒素现场快速检测技术研究,及时发现污染,是防止真菌毒素进入食物链的重要手段。目前快检技术主要面临的挑战表现在:部分真菌毒素高亲和力抗体匮乏、多种类风险因子同步检测难、速测产品抗干扰性差。针对上述问题,本学位论文研制出高灵敏高特异性单克隆抗体、纳米抗体,改良了核酸模拟抗体（适配体）等生物识别材料;并基于三种识别材料依次建立了系列真菌毒素快速检测技术,用于粮油、乳品、水果等不同农产品中典型真菌毒素的高灵敏检测。论文最后,系统分析了这三类主要识别材料的应用特性及在快检产品开发中应用前景。具体研究结果如下:（1）研制出伏马毒素B1（FB1）、二乙酰镳草镰刀菌烯醇（DAS）等系列单克隆抗体（mAb）,建立了粮油中FB1灰度成像、真菌毒素与农残同步侧向流层析,及基于新型纳米仿生催化材料的DAS免疫气压传感检测方法。（1）研制出FB1单克隆抗体7A11,半抑制浓度（IC50）为0.66 ng/mL。建立了两类结果输出方式的现场快速检测方法:基于纳米金比色定性方法与灰度成像定量方法,定量线性范围为0.24～15.0 ng/mL。可用于大米、玉米、花生、小麦等农产品中FB1检测,为粮油产品中FB1现场快速筛查提供了经济、快速、可定量的选择方案。（2）研制出甲萘威单克隆抗体1D2与克百威单克隆抗体G11,IC50值分别为0.80 ng/mL和127.6 ng/mL,特异性良好。针对农产品中不同种类小分子污染物并存的现状,以黄曲霉毒素、甲萘威和克百威为例,建立了时间分辨荧光免疫层析（TRFICA）同步快速分析方法。研究表明,该方法对黄曲霉毒素、甲萘威、克百威检测限依次为0.03、0.02、60.2 ng/mL,克服了真菌毒素与农药残留检测方法不同步、灵敏度低的难题。（3）研制出特异性DAS单克隆抗体5E7,亲和力常数Ka值达5.4×108,IC50值为3.08ng/mL;合成并表征了Au@PtNPs纳米颗粒及其与抗体标记探针,由此建立了免疫气压生物传感方法。研究结果表明,该方法检测限达0.46 ng/mL。攻克了DAS识别材料特异性差,缺乏灵敏、准确、便携现场快速筛查方法的技术瓶颈。（2）构建了噬菌体展示纳米抗体文库,研制出黄曲霉毒素M1（AFM1）抗独特型纳米抗体（AIdnb）;将纳米抗体用作替代抗原分别开发了牛奶中AFM1电化学检测方法和多种真菌毒素TRFICA同步检测方法。（1）研制的AFM1抗独特型纳米抗体VHH 4-1-1表征结果显示,其对AFM1的IC50值为8.54 ng/mL;采用重氮盐电接枝方法,将VHH 4-1-1修饰在丝网印刷碳电极表面;再采用计时电流法,建立了基于纳米抗体替代抗原的免疫竞争电化学传感方法。研究结果表明,所建立方法对牛奶中AFM1的检测限为0.18 ng/mL,检测范围为0.25～5.0 ng/mL,特异性良好。为食品安全检测领域提供了新型绿色检测方法。（2）为研究抗独特型纳米抗体在TRFICA上作为无毒替代抗原的可行性,采用黄曲霉毒素B1（AFB1）抗独特型纳米抗体phage 2-5和ZEN抗独特型纳米抗体phage 8#为核心识别材料,分别研究了固定化AIdnb的TRFICA竞争分析模式（AIdnb-TRFICA）和固定化mAb的TRFICA竞争分析模式（mAb-TRFICA）。比对两种竞争分析模式的结果表明,AIdnb-TRFICA的灵敏度较高,检测AFB1、ZEN的IC50值分别为0.46和0.86ng/mL,是mAb-TRFICA的18.3和20.3倍。由此采用AIdnb-TRFICA建立了同步检测方法,对AFB1、ZEN检测限达0.13 ng/mL和0.20 ng/mL。结果表明,建立的AIdnb-TRFICA可用于粮食中多种真菌毒素的同步检测,为绿色无毒现场快速、准确定量检测提供了新方法。（3）改良修饰了展青霉素适配体探针,研究建立了基于适配体的苹果汁中展青霉素侧向流层析快速检测方法。以地高辛标记的展青霉素适配体互补链作为捕获探针,生物素标记的适配体作为识别探针,构建了基于“地高辛抗体-捕获探针-识别探针-纳米金信号因子”复合物侧向流层析检测方法,对展青霉素的检测限达2.3 ng/mL,检测范围为2.7～139.8 ng/mL,具有良好的特异性。检测结果与高效液相比对验证表明,该方法可用于苹果汁中展青霉素的快速检测,克服了缺少展青霉素高亲和识别元件导致的现场高灵敏检测技术缺乏的瓶颈难题。（4）系统分析了上述核酸适配体、单克隆抗体、纳米抗体等真菌毒素主要生物识别材料的特性开发与应用前景。研究比较了本文研制的适配体、单克隆抗体与纳米抗体与已报道同类抗体的灵敏度和特异性,结果表明,伏马毒素7A11为迄今报道灵敏度最高,DAS的5E7特异性最好,AFM1抗独特型纳米抗体为首次报道,为快速检测技术提供了高质量核心生物识别材料。通过比较研究各类识别材料发现:适配体的展青霉素分析方法虽然获得了灵敏、准确的定量检测结果,然而适配体与展青霉素的最佳孵育时间长达40 min,为了实现快速检测,该适配体结构仍需进一步优化以缩短反应时间。因此,在缺乏高亲和力抗体时,适配体可作为识别材料的有效选择。本文研制的FB1、DAS、甲萘威、克百威单克隆抗体具有良好的亲和力与特异性,在纳米金、TRFICA及气压传感器检测方法的建立与应用中均实现了灵敏、准确、快速的定量检测。因此,单克隆抗体仍是目前快速检测技术中识别材料的主流选择。纳米抗体是近年来发展起来的新兴识别材料,本文研制的抗独特型纳米抗体对2C9抗体具有特异性识别作用,经纳米抗体修饰后的丝网印刷碳电极具有出色的稳定性。另外,纳米抗体可吸附在硝酸纤维素膜表面,用作无毒替代抗原,在TRFICA方法建立中获得了较高的检测灵敏度,实现了真菌毒素的无毒快速现场检测。因此,纳米抗体在农产品快速检测应用中,既具备单克隆抗体的高亲和性与特异性,又表现出了适配体的稳定与易于修饰的特性。重要的是纳米抗体可作为替代抗原建立无毒快速检测技术,也是其他识别材料无法替代的独有特性。在未来发展方向中,纳米抗体可通过体外亲和力定向改造与结构功能化进一步提高亲和力,拓展新的检测方法与检测模式,在农产品危害物的快速检测领域将具有更为广阔的应用前景。综上所述,研制的系列单克隆抗体、纳米抗体等生物识别材料解决了农产品快速检测中部分真菌毒素高亲和力抗体匮乏难题,并被成功应用于真菌毒素的生物传感检测方法的构建;建立的真菌毒素与农药残留时间分辨荧光同步检测技术解决了多种类风险因子同步检测难的技术瓶颈;而基于纳米抗体无毒抗原生物传感方法的研究解决了农产品快检方法抗干扰性差的难题。因此,本文研制的基于三种识别材料的真菌毒素生物传感方法为目前农产品中面临的挑战提供了解决方案的方法参考。
吕俊美[6]（2020）在《玉米赤霉烯酮及其衍生物单克隆抗体的制备及免疫试纸检测方法的建立》文中研究指明玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）主要是由禾谷镰刀菌产生的一种广泛存在于谷物和粮食作物中的真菌毒素。它的衍生物有多种,常见的有5种。ZEN能对粮食造成污染问题,并对动物具有雌激素作用,给养殖业带来一系列的经济损失。因此,建立一种快速,简便,特异的检测方法十分必要。本研究制备了ZEN人工抗原,对动物进行免疫后通过细胞融合技术筛选出ZEN mAb,建立了ZEN免疫试纸检测方法。为我国食品安全检测和粮食中ZEN的残留检测提供了技术支持。主要研究内容和结论如下:1将ZEN分子进行化学修饰,引入能与载体蛋白偶联的基团（-COOH）合成酯ZEN-CMO,采用混合酸酐法（MA）将半抗原ZEN-CMO与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）偶联,合成抗原ZEN-BSA;通过羧甲基羟胺半盐酸盐与ZEN产生肟化反应对ZEN分子进行修饰,合成酯ZEN-CMO,采用碳二亚胺法（EDC）与载体蛋白鸡血清白蛋白（OVA）偶联合成包被抗原。对人工抗原ZEN-BSA进行理化性质检测,经紫外（UV）,红外（IR）,蛋白凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定,检测结果显示,人工抗原合成成功;将ZEN-BSA对4周龄雌性Balb/C小鼠进行免疫,制备多克隆抗体（pAb）,经ELISA检测免疫小鼠pAb的效价达到1︰2.56×105,间接ELISA检测半数抑制浓度IC50值为38.9 ng/mL,与α-ZER,α-ZOL的交叉反应率为100%,与β-ZER的交叉反应率为30%,与ZAN的交叉反应率为20%,与β-ZOL的交叉反应率为10%。与AFB1,ABG1,ABG2,DON,T-2,FB1等其他真菌毒素没有交叉反应。2将合成的人工抗原ZEN-BSA免疫雌性Balb/C小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA检测,挑选细胞融合备用小鼠。利用细胞融合技术将3号小鼠的脾细胞与SP2/0细胞在PEG-1500的作用下进行细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株制备ZEN mAb,并对其免疫特性进行分析。结果显示:细胞融合后,筛选出三株杂交瘤细胞株分别将其命名为1B12,3A5,4G10。其中,3A5株最好,对三株杂交瘤细胞株进行核型鉴定,获得的3株杂交瘤细胞株染色体的数目平均是98.7条。通过体外培养法和体内诱生腹水法制备出的抗体具有较高的效价,经9次传代培养抗体分泌稳定,细胞培养上清效价是1︰128,腹水抗体效价是1︰5.12×105,IC50为7.93 ng/mL。可100%识别ZEN,与α-ZER、α-ZOL、β-ZER、β-ZOL、ZAN的交叉反应率分别为100%、100%、22.91%、16.28%、9.42%。3A5株杂交瘤细胞分泌的ZEN mAb的亲和常数为6.79×109 L/mol,说明该株杂交瘤细胞株亲和力高。制备出了效价高、敏感性好、特异性强的ZEN mAb,为ZEN免疫试纸检测方法的建立奠定了基础。3利用ZEN单克隆抗体3A5制备了ZEN icELISA试剂盒,通过对试剂盒进行优化后,线性回归方程曲线良好,回归方程为y=-41.014x+111.14,R2=0.9809,IC50是30.9 ng/mL,检测范围是5.75165.96 ng/mL。具有良好的准确度及精密度,可室温保存一年及以上。采用柠檬酸三钠还原法以氯金酸为材料制备胶体金,采用Mey氏系列稳定法对抗体进行标记,建立ZEN胶体金免疫试纸的检测方法。经紫外（UV）和透射电镜扫描后,检测结果表明,胶体金的粒径为25±1.0 nm,说明该胶体金制备成功;确定ZEN mAb的最佳标记浓度是4.5μg/mL;成功研制出ZEN免疫胶体金试纸条（ZEN-Strip）,ZEN-Strip具有快速（5-10 min）、灵敏（3.91 ng/mL）、特异（只与ZEN反应,与其他生物毒素无CR）、广谱（可同时检测其衍生物α-ZER、β-ZER、α-ZOL、β-ZOL、ZAN）、简便（不需其他仪器与试剂）等优势,具有良好的市场应用价值和发展前景。
任显凤[7]（2020）在《粮油黄曲霉与毒素同步检测及木霉阻控技术研究》文中研究说明黄曲霉毒素（Aflatoxin）是目前发现毒性最强的一类真菌毒素,能引起肝脏的急性或慢性损害,对人和动物具有严重的致癌、致畸、致突变作用。黄曲霉毒素主要由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（A.parasiticus）代谢产生,在世界范围内广泛污染花生、玉米、小麦、大米、棉花、坚果等农产品,其中以花生和玉米受污染最为严重。在我国黄曲霉污染广泛,而寄生曲霉污染罕见。农产品黄曲霉及其毒素污染不仅会对人、畜的健康构成威胁,还会大大降低农产品的营养价值和经济价值,严重损害经济效益,是农产品质量与安全的重大风险隐患。本文研究建立了粮油类农产品黄曲霉及其毒素快速同步检测和基于木霉菌的高效生物防控技术,对及早发现污染并科学监管,保障粮油质量安全具有重要意义。检测技术是及时发现污染、采取有效防控的“眼睛”,目前已有许多检测农产品中黄曲霉毒素的技术方法,如高效液相色谱分析、酶联免疫吸附分析、免疫传感器分析、免疫层析等,但是多组分同步检测尤其是小分子污染物与食源性微生物同步检测技术相对十分缺乏。生物防控具有环境友好、高效、安全等特点,近年来在食物病原菌及毒素污染防控领域备受青睐。但是,现阶段粮油产品黄曲霉及其毒素污染的生物防控领域仍面临诸多挑战,如缺乏高效的生防菌剂、生防作用机理不明、缺失实践应用等。针对以上问题,本论文作了如下研究,具体研究内容和结论如下:1.建立了RT-PCR同步检测粮油产品中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的技术方法。依据免疫反应中纳米抗体V2-5和V8#分别与黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮竞争结合单克隆抗体1C11和2D3的原理;首先,依据编码纳米抗体的特异DNA序列设计引物,实现噬菌体中特异DNA序列扩增;然后,将免疫反应和PCR扩增反应相结合,建立了RT-PCR同步检测黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的技术。研究结果显示,该方法检测黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的检测限分别为0.03 ng/mL和0.09 ng/mL,加标回收率分别为80–118%和76.7–111%。最后,该检测技术被成功应用到玉米、大米、小麦、饲料中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的同步检测,且样品中毒素的检测结果与高效液相色谱法的检测结果一致。研究结果表明,通过纳米抗体噬菌体建立的两种毒素RT-PCR同步检测技术可为粮油产品污染物同步检测分析提供新的途径。2.创建了RT-PCR同步检测玉米中黄曲霉毒素及其产毒菌的技术方法。黄曲霉毒素属于剧毒、致癌的小分子物质,主要由曲霉属、黄绿组的黄曲霉和寄生曲霉代谢产生。噬菌体V2-5展示的纳米抗体可特异性识别黄曲霉毒素的单克隆抗体1C11,黄曲霉毒素合成关键基因nor-1（aflD）可作为黄曲霉、寄生曲霉的生物标志物,基于RT-PCR中Taqman检测原理并根据噬菌体V2-5和nor-1特异基因序列设计两对特异引物,最终实现黄曲霉毒素及其产毒菌的RT-PCR同步检测。结果显示该方法检测黄曲霉毒素及黄曲霉菌的检测限分别为0.02 ng/mL和8×102孢子/g。进一步用该检测方法检测了25份自然污染的玉米中黄曲霉素及其产毒菌的含量,检测结果与高效液相色谱法和平板计数法的检测结果一致。研究结果表明,以黄曲霉毒素与黄曲霉为例创建的RT-PCR同步检测技术,首次突破了粮油产品中小分子污染物与食源性微生物一直难以同步测定的瓶颈难题。3.筛选了可高效抑制黄曲霉生长和产毒的木霉菌株T60和T44,并初步探明其抑制机理。通过双重培养实验和木霉菌代谢产物的抑菌活性研究,评估了20株不同来源的木霉菌对黄曲霉的拮抗活性及其代谢产物对黄曲霉生长和产毒的抑制效果。首先,双重培养实验的研究结果发现深绿木霉（T.atroviride）T32和T50、哈茨木霉（T.harzianum）ITEM908和T61、多孢木霉（T.polysporum）T60和绿色木霉（T.viride）T62生长迅速,可通过对营养物质的竞争、生存空间的竞争和重寄生作用,完全抑制黄曲霉菌生长。其次,通过木霉菌代谢产物抑菌活性研究发现:CDA（Czapex Dox Agar）培养基培养木霉菌3–5天后,有15株木霉菌分泌到CDA中的代谢产物显着抑制黄曲霉生长,T60分泌的代谢产物可完全抑制黄曲霉生长,抑制率为100%;用花生培养基培养木霉菌株3–5天后,有14株木霉菌分泌到花生培养基中的代谢产物显着抑制黄曲霉产生黄曲霉毒素B1（AFB1）,哈茨木霉（T.harzianum）T44分泌的代谢产物抑制黄曲霉产毒的抑制率高达85±6%。研究结果表明:木霉菌可通过其拮抗活性和其代谢产物的抑菌活性抑制黄曲霉;其中部分木霉菌的代谢产物对黄曲霉具有很强的抑制作用,作为候选生防菌剂具有很高的应用价值。4.筛选出可高效降解黄曲霉毒素的里氏木霉（T.reesei）CGMCC3.5218,初步探明木霉菌降解黄曲霉毒素的作用机制并成功应用到粮油产品中黄曲霉毒素的降解。首先,实验比较了65株木霉菌对液体培养基中AFB1（50 ppb）的降解效果,筛选的CGMCC3.5218在含AFB1的液体培养基生长5天后,对浓度为50 ppb、500 ppb、10 ppm、15 ppm的AFB1的降解率分别为100%、95%、88%和66%;其在含浓度为500 ppb的AFB2、AFG1、AFG2的液体培养基生长7天后,对三种毒素的降解率分别为86%、88%和87%。进一步研究发现:CGMCC3.5218对AFB1的降解主要是细胞外代谢产物的酶促降解作用且活性酶为耐高温的非金属结合蛋白。最后,对CGMCC3.5218降解AFB1的培养条件进行优化,结果显示最适培养温度为28–37℃,培养基最适pH为4.5–8.3,多种含碳氮的培养基均适合做培养基质;在优化的培养条件下,CGMCC3.5218可高效降解花生粕、玉米和饲料中的黄曲霉毒素,可将自然污染的玉米中浓度为1657μg/kg的黄曲霉毒素降至安全水平（20μg/kg）。因此,里氏木霉CGMCC3.5218作为有效降解粮油产品中黄曲霉毒素的生物菌剂具有很高的应用价值。综上,本研究为粮油产品黄曲霉及其毒素污染的及时发现和有效防控提供了新方法,对抑制粮油产品黄曲霉及其毒素污染和保障消费安全具有重要理论意义与实用价值。
李安平[8]（2019）在《霉变饲料中添加脱毒剂对蛋雏鸡健康的影响》文中进行了进一步梳理霉菌毒素一方面可破坏和降低原料或饲料中的养分,引起饲粮的适口性降低和营养价值下降,另一方面可对人和动物健康产生危害。家禽生产易受霉菌毒素危害,而系统地阐述霉菌毒素对家禽生产的报道较少。因此,本试验在调研饲料中主要霉菌毒素污染的基础上,饲喂蛋雏鸡霉菌毒素污染的饲料,通过脏器组织病理学、血液生化指标和基因m RNA表达的检测,探究染毒饲料对蛋雏鸡生长性能、抗氧化能力和免疫功能的影响和分子机制。将不同剂量的霉菌毒素和脱毒剂添加至基础日粮中,通过不同饲喂方式饲喂不同日龄的蛋雏鸡,结果发现,高水平霉菌毒素能染毒对蛋雏鸡食欲具有明显的抑制作用,单次、隔日霉菌毒素染毒对蛋雏鸡食欲影响均较大,浓度越高越明显;另外,高浓度毒素加脱毒剂转换正常日粮方式较正常日粮转换高浓度毒素加脱毒剂方式对蛋雏鸡食欲的影响小,在中高浓度霉菌毒素饲料中添加脱毒剂能提高蛋雏鸡的食欲。因此,霉菌毒素水平、雏鸡日龄、染毒次数和脱毒剂均对畜禽采食量具有明显的影响,毒素水平越高、雏鸡日龄越小、染毒次数越多和未使用脱毒剂均可降低蛋雏鸡的食欲。通过饲喂雏鸡含不同剂量霉菌毒素的饲料,探究其对蛋雏鸡生长性能和各个脏器组织的损伤,结果发现:中高水平的霉菌毒素能降低雏鸡的末体重、平均日增重、耗料量,提高料重比,降低了蛋雏鸡的生产性能,而霉菌毒素脱毒剂能提高蛋雏鸡的末体重、平均日增重、耗料量,降低料重比,提高了蛋雏鸡的生产性能;中高水平的霉菌毒素能显着增加蛋雏鸡腺胃指数和肌胃指数,引起蛋雏鸡肌胃、腺胃、肠等组织发生损伤,而霉菌毒素脱毒剂能显着降低蛋雏鸡腺胃、肌胃等脏器指数,减轻雏鸡肌胃、腺胃、肠道等组织损伤。因此,饲料中中高剂量的霉菌毒素染毒会使蛋雏鸡的生长性能降低,使雏鸡的消化道、免疫器官和肝脏等器官发生坏死、变性等损伤;而在染毒日粮中添加脱毒剂可减轻毒素对动物的不良影响。最后,通过喂雏鸡含不同剂量霉菌毒素的饲料,探究其对蛋雏鸡抗氧化功能、免疫功能和抗氧化酶、促炎与抗炎因子m RNA表达的影响,结果发现:在饲料中不同浓度霉菌毒素共同作用时,会损伤蛋雏鸡的免疫系统,降低雏鸡血清中T-AOC、CAT水平,使SOD活力下降,血清中MDA水平增加,降低了肝脏、腺胃、回肠、法氏囊、脾脏内抗氧化酶m RNA表达,提高了抗炎和促炎因子m RNA表达,会抑制免疫球蛋白和免疫因子的合成,降低IL-6、INF-γ、Ig G、Ig M在血清中的浓度,使血清中的ND、IBD抗体水平下降;另外,脱毒剂3、4组的抗氧化指标、免疫指标、抗体水平明显优于1、2组,而且能增加肝脏、腺胃、回肠、法氏囊、脾脏内抗氧化酶和抗炎因子的m RNA表达,降低促炎因子m RNA表达。因此,不同水平的霉菌毒素能剂量依赖性的降低抗氧化酶的活性和m RNA表达,增加抗炎和促炎因子的m RNA表达,浓度越高抑制作用越大;脱毒剂能在一定程度上促进各组织中抗氧化酶的m RNA表达,降低霉菌毒素刺激引起的促炎因子的m RNA表达,增加抗炎因子的m RNA表达。总之,霉菌毒素能剂量依赖性的降低蛋雏鸡的生长性能、抗氧化能力和免疫能力,促进脏器组织的氧化损伤和炎症的发生,脱毒剂能在一定程度上减霉菌毒素的免疫毒性和细胞毒性,保护蛋雏鸡健康,而且脱毒剂3、4的脱毒效果优于其他两种。
金玉[9]（2019）在《基于球形纳米金和金纳米花标记的免疫层析法检测三种霉菌毒素》文中研究表明本文应用柠檬酸钠还原法和金种子生长法分别制备了球形纳米金（gold nanospheres,AuNSs）和金纳米花（gold nanoflowers,AuNFs）颗粒,结合本实验室制备的抗原和抗体,建立了基于球形纳米金标记抗原的免疫层析法检测呕吐毒素;建立了基于金纳米花标记的免疫层析法检测玉米赤霉烯酮;并建立了基于金纳米花标记的免疫层析法高灵敏定量检测黄曲霉毒素M1。1.基于球形纳米金标记抗原的免疫层析法检测呕吐毒素用球形纳米金标记抗原的方法制备了用于检测粮食和饲料中呕吐毒素的纳米金免疫层析检测卡（deoxynivalenol gold nanosphere immunochromatographic test card,DON-GICT）,经过系统的参数优化研究,DON-GICT检测DON标准品灵敏度达到50ng/mL,检测时间为10min左右,对实际样品的检测限为1000μg/kg且有较好的抗基质干扰效果。检测34份粮食和饲料样品,7份样品显示阳性,其余样品显示为阴性,与商业化DON-ELISA检测结果相比,总符合率为94.1%。2.金纳米花的制备及免疫层析法检测玉米赤霉烯酮以透射电镜等手段为表征,通过正交试验法优化,制备了粒径为（116.7±2.0）nm、分支多的1#金纳米花,并进一步优化了金纳米花标记玉米赤霉烯酮单克隆抗体的条件,建立了检测粮食和饲料中的玉米赤霉烯酮的免疫层析法（zearalenone gold nanoflower immunochromatographic test card,ZEN-GFICT）。检测结果显示:ZEN-GFICT在采用对比法和消线法判断结果时,检测灵敏度分别为0.5和6ng/mL,是传统ZEN纳米金免疫层析检测卡的6倍（对比法）和4.5倍（消线法）。21份样品的ZEN-GFICT判断结果（对比法和消线法）与ELISA试剂盒检测结果相比,总符合率均为90.5%。3.基于金纳米花标记的免疫层析法高灵敏定量检测黄曲霉毒素M1建立了用非线性四参数拟合曲线定量检测牛奶中黄曲霉毒素M1的金纳米花免疫层析法（aflatoxin M1 gold nanoflower immunochromatographic test card AFM1-GFICT）,研究了pH、缓冲液种类、离子强度和表面活性剂对免疫层析反应的影响,确定了AFM1定量免疫层析检测卡读取信号值的时间段为20-25min。AFM1检测范围为20-1000pg/mL,非线性四参数拟合曲线相关系数R2=0.9993,最低检测限为12.3 pg/mL。检测在空白牛奶样品加入AFM1标准品浓度为0.1,0.3和0.5μg/kg的回收率为80.4%-118.2%,变异系数（n=10）为4.27%-9.43%。15份牛奶样品的AFM1-GFICT和商业化AFM1-ELISA检测结果相比,线性拟合相关系数R2=0.9768。
牛瑞[10]（2019）在《玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫亲和柱及免疫磁珠的制备与应用》文中提出玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是由镰刀菌属真菌产生的强效雌激素代谢产物,作为分布最广的真菌毒素之一,它引起了全世界各种谷物的重要病害。ZEN可以与雌激素受体结合,扰乱人体激素平衡并导致许多生殖系统疾病,如宫颈癌、乳腺癌等。因此非常有必要发展有效的ZEN净化前处理以及分析检测方法用于农产品及其制品中ZEN的检测。本研究将壳聚糖微球和壳聚糖磁珠分别与ZEN多克隆抗体偶联制备以壳聚糖微球为载体的免疫亲和柱和壳聚糖免疫磁珠,同时对他们的性能和应用前景进行了评价。主要研究内容和结果如下:1.采用自制免疫原ZEN-KLH免疫新西兰大白兔成功制备ZEN多克隆抗体,抗体的半数抑制浓度IC50为1.82 ng/mL,与其结构类似物β-ZOL、α-ZAL、β-ZAL和其他三种真菌毒素DON、OTA、AFB1的交叉反应率均小于0.8%,表明抗体具有较高的亲和性和特异性,达到了制备免疫亲和吸附剂的要求;与α-ZOL的交叉反应率高达91.9%,该抗体可以用来同时富集纯化以及检测样品中的ZEN和α-ZOL。2.采用膜乳化法制得粒径均一的壳聚糖微球,其平均粒径为109?m,粒径分布跨度Span值为1.55,与平均粒径为86.6μm,Span值为1.50的市售Sepharose4B相比,壳聚糖微球的平均粒径略大,而粒径分布则与Sepharose 4B几乎一致,说明制备的壳聚糖微球粒径均一性较好。3.将ZEN抗体与壳聚糖微球、Sepharose 4B偶联制备获得两种免疫亲和柱,性能比较评价结果显示,以壳聚糖为载体的免疫亲和柱的柱容量为6.54μg ZEN/mL凝胶,而以Sepharose 4B为载体的免疫亲和柱的柱容量为3.06μg ZEN/mL凝胶;对免疫亲和柱重复性进行评价,发现以壳聚糖为载体的免疫亲和柱的回收率为84.9%96.2%,柱间相对标准偏差（RSD）为4.5%,以Sepharose 4B为载体的免疫亲和柱的回收率为80.4%100.5%,RSD为8.6%;将免疫亲和柱配合HPLC用于实际样品（ZEN加标浓度为50μg/kg和100μg/kg）中ZEN的加标回收检测,结果表明使用壳聚糖微球为载体的免疫亲和柱时,ZEN的回收率为92.6%100.2%,RSD小于4.4%,而在使用Sepharose 4B为载体的免疫亲和柱时,ZEN的回收率为88.3%107.3%,RSD小于7.9%。4.使用水热合成法（油浴回流法）制备壳聚糖磁珠,并用环氧氯丙烷将其与抗体偶联,对壳聚糖免疫磁珠的用量与吸附时间进行优化后并对其性能和实际应用进行评价,结果显示壳聚糖免疫磁珠的最大吸附载量为42.11μg ZEN/g;对不同浓度的ZEN标准溶液进行加标回收检测时,测得ZEN的回收率为92.4%108.2%,相对标准偏差（RSD）为5.8%,结果表明其重复性较好,平均回收率高于以上两种免疫亲和柱,并且能够实现目标物质的快速净化分离（小于3 min）;将其应用于实际样品（玉米粉中ZEN加标量为50μg/kg和100μg/kg）中ZEN的净化前处理中并用HPLC检测时,测得ZEN的回收率为91.7%104.3%,RSD小于2.9%。
二、玉米赤霉烯酮免疫检测技术研究——兔抗玉米赤霉烯酮抗体研制（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、玉米赤霉烯酮免疫检测技术研究——兔抗玉米赤霉烯酮抗体研制（论文提纲范文）
（1）玉米赤霉烯酮检测方法研究现状（论文提纲范文）
| 1 国内外对ZEN检测限量 |
| 2 检测方法 |
| 2.1 免疫分析法 |
| 2.2 分子印迹固相萃取 |
| 2.3 QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱 |
| 2.4 生物传感器 |
| 2.5 其他 |
| 3 展望 |
（2）玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试剂 |
| 1.1.2 仪器与设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 ZEN半抗原合成 |
| 1.2.2 包被原ZEN-BSA合成 |
| 1.2.3 免疫原ZEN-OVA合成 |
| 1.2.4 全抗原鉴定 |
| 1.2.5 检测样品中的ZEN含量 |
| 1.2.6 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 偶联物蛋白含量测定 |
| 2.2 紫外吸收光谱法验证人工抗原 |
| 2.3 SDS-PAGE鉴定抗原 |
| 2.4 间接竞争ELISA法验证人工抗原 |
| 2.5 检测粮食样品中的ZEN |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（3）食品中伏马毒素B1和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光传感技术研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 食品中真菌毒素概述 |
| 1.2 FB1 和ZEN的研究 |
| 1.2.1 FB1 简介 |
| 1.2.2 ZEN简介 |
| 1.2.3 FB1 和ZEN目前现有的检测方法 |
| 1.3 稀土上转换纳米颗粒 |
| 1.3.1 上转换纳米颗粒的组成 |
| 1.3.2 上转换纳米颗粒的发光机理 |
| 1.3.3 上转换纳米颗粒合成方法 |
| 1.3.4 上转换纳米颗粒表面改性方法 |
| 1.3.5 上转换纳米颗粒生物应用 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 1.5 研究内容 |
| 1.6 技术路线图 |
| 第二章 伏马毒素B1 和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光免疫传感技术研究 |
| 2.1 实验仪器与试剂 |
| 2.1.1 实验主要仪器 |
| 2.1.2 实验主要试剂 |
| 2.1.3 实验主要溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 制备上转换荧光探针 |
| 2.2.2 实验条件优化 |
| 2.2.3 检测性能评估 |
| 2.3 实验结果与讨论 |
| 2.3.1 材料表征 |
| 2.3.2 实验可行性验证 |
| 2.3.3 实验条件优化 |
| 2.3.4 检测性能评估 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 伏马毒素B1 和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光结合磁分离传感技术研究 |
| 3.1 实验仪器与试剂 |
| 3.1.1 实验主要仪器 |
| 3.1.2 实验主要试剂 |
| 3.1.3 实验主要溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 上转换纳米颗粒合成 |
| 3.2.2 上转换纳米颗粒表面修饰 |
| 3.2.3 制备探针 |
| 3.2.4 实验条件优化 |
| 3.2.5 检测性能评估 |
| 3.3 实验结果与讨论 |
| 3.3.1 材料的表征 |
| 3.3.2 探针的表征 |
| 3.3.3 实验条件优化 |
| 3.3.4 检测性能评估 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（4）玉米赤霉烯酮对小鼠B淋巴细胞体外活化的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 上篇 文献综述 |
| 第1章 玉米赤霉烯酮研究进展 |
| 1 玉米赤霉烯酮来源与理化特性 |
| 2 玉米赤霉烯酮的污染状况 |
| 3 玉米赤霉烯酮对动物的毒性 |
| 3.1 ZEA的生殖毒性 |
| 3.2 ZEA的免疫毒性 |
| 3.3 ZEA的内分泌毒性 |
| 3.4 ZEA的遗传毒性 |
| 4 玉米赤霉烯酮对动物毒性的机理 |
| 5 玉米赤霉烯酮的防控 |
| 5.1 ZEA的脱毒措施 |
| 5.2 ZEA中毒的治疗 |
| 第2章 体液免疫应答与B淋巴细胞活化 |
| 1 B淋巴细胞介导的体液免疫概述 |
| 2 B淋巴细胞活化 |
| 2.1 T细胞依赖性抗原 |
| 2.2 T细胞不依赖性抗原 |
| 3 脂多糖对B淋巴细胞的活化作用 |
| 3.1 细胞因子的作用 |
| 3.2 CD分子的作用 |
| 3.3 免疫球蛋白的作用 |
| 4 B淋巴细胞相关信号途径 |
| 5 本研究的目的及意义 |
| 下篇 实验部分 |
| 第3章 ZEA对B淋巴细胞活化增殖的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 溶液及试剂的配制 |
| 2.2 原代B淋巴细胞的分离与培养 |
| 2.3 CCK-8法检测LPS对小鼠未活化B淋巴细胞活化增殖的影响 |
| 2.4 CCK-8法检测ZEA对小鼠B淋巴细胞活化增殖的影响 |
| 2.5 CCK-8法检测ZEA对LPS刺激小鼠B淋巴细胞活化增殖的影响 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 细胞提取结果及纯度鉴定 |
| 3.2 LPS对小鼠B淋巴细胞活化增殖的影响 |
| 3.3 ZEA对小鼠B淋巴细胞活化增殖的影响 |
| 3.4 ZEA对小鼠B淋巴细胞细胞活化增殖的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第4章 ZEA对B淋巴细胞活化分泌功能的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠淋巴细胞分离 |
| 2.2 流式液多重蛋白定量技术检测细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α的分泌 |
| 2.3 流式细胞术检测ZEA对小鼠B淋巴细胞表面抗原的影响 |
| 2.4 ELISA试剂盒法检测ZEA对小鼠B淋巴细胞分泌抗体IgG和IgM的影响 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 ZEA对小鼠B淋巴细胞表面抗原CD40表达的影响 |
| 3.2 ZEA对小鼠B淋巴细胞表面抗原CD80表达的影响 |
| 3.3 ZEA对小鼠B淋巴细胞表面抗原CD86表达的影响 |
| 3.4 ZEA对小鼠B淋巴细胞细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α分泌的影响 |
| 3.5 ZEA对小鼠B淋巴细胞抗体IgG分泌的影响 |
| 3.6 ZEA对小鼠B淋巴细胞抗体IgM分泌的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第5章 ZEA对B淋巴细胞活化相关信号通路蛋白的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 免疫磁珠阴性分选B淋巴细胞 |
| 2.2 蛋白样品制备 |
| 2.3 蛋白质免疫印迹(Western Blot) |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 ZEA对JNK信号通路蛋白表达的影响 |
| 3.2 ZEA对ERK信号通路蛋白ERK1/2表达的影响 |
| 3.3 ZEA对P38信号通路蛋白表达的影响 |
| 3.4 ZEA对NF-κB信号通路蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（5）农产品典型真菌毒素生物识别材料与快速检测方法研究（论文提纲范文）
| 附件 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 食品中真菌毒素研究现状 |
| 1.1.1 毒性 |
| 1.1.2 限量 |
| 1.1.3 常规检测方法 |
| 1.2 真菌毒素生物传感分析技术及研究进展 |
| 1.2.1 识别元件 |
| 1.2.2 纳米材料与纳米结构用于信号响应及信号放大 |
| 1.2.3 真菌毒素的生物传感检测方法 |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 1.4 本课题的主要研究内容 |
| 1.5 本课题的技术路线 |
| 第二章 基于单抗的光学与气压生物传感方法研究 |
| 第一节 伏马毒素单克隆抗体研制与灰度成像快速检测技术研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 实验仪器及耗材 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 融合用细胞、实验动物及器材 |
| 2.2.4 主要溶液与培养基的配制 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 伏马毒素B_1完全抗原的合成 |
| 2.3.2 伏马毒素B_1的动物免疫与杂交瘤细胞的制备 |
| 2.3.3 伏马毒素B_1抗原免疫效果评价 |
| 2.3.4 伏马毒素B_1阳性杂交瘤筛选方法 |
| 2.3.5 伏马毒素B_1抗体的生产 |
| 2.3.6 伏马毒素B_1抗体的特异性鉴定 |
| 2.3.7 伏马毒素B_1的酶联免疫吸附方法的建立 |
| 2.3.8 伏马毒素B_1的酶联免疫方法标准曲线的建立 |
| 2.3.9 纳米金探针的制备 |
| 2.3.10 伏马毒素B_1灰度成像纳米金试纸条的原理 |
| 2.3.11 灰度成像纳米金试纸条标准曲线的建立 |
| 2.3.12 灰度成像纳米金试纸条的检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 伏马毒素B_1抗原的免疫学鉴定 |
| 2.4.2 伏马毒素B_1杂交瘤细胞的筛选结果 |
| 2.4.3 伏马毒素B_1单克隆抗体7A11的特异性鉴定 |
| 2.4.4 伏马毒素B_1的ic ELISA条件的优化 |
| 2.4.5 伏马毒素B_1灰度成像方法的建立 |
| 2.4.6 伏马毒素B_1灰度成像方法与ic ELISA方法评价 |
| 第二节 基于单抗的真菌毒素与其他危害物同步检测技术研究 |
| 2.5 引言 |
| 2.6 材料 |
| 2.6.1 实验仪器及耗材 |
| 2.6.2 主要试剂及溶液 |
| 2.6.3 融合用细胞、实验动物及器材 |
| 2.6.4 主要溶液与培养基的配制 |
| 2.7 方法 |
| 2.7.1 甲萘威、克百威杂交瘤细胞制备 |
| 2.7.2 甲萘威、克百威阳性杂交瘤筛选 |
| 2.7.3 甲萘威、克百威单抗制备与纯化 |
| 2.7.4 Eu/Tb(Ⅲ)标记探针的制备 |
| 2.7.5 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法建立 |
| 2.7.6 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法原理 |
| 2.7.7 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法评价 |
| 2.8 结果 |
| 2.8.1 甲萘威、克百威杂交瘤筛选结果 |
| 2.8.2 甲萘威、克百威单克隆抗体特性表征 |
| 2.8.3 Eu/Tb(Ⅲ)纳米探针的表征 |
| 2.8.4 样品前处理方法 |
| 2.8.5 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法的优化 |
| 2.8.6 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法特异性评价 |
| 2.8.7 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法定量曲线 |
| 2.8.8 时间分辨荧光免疫纸层析同步传感方法回收率和实际样品检测 |
| 第三节 二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体研制与气压法免疫传感方法研究 |
| 2.9 引言 |
| 2.10 材料 |
| 2.10.1 实验仪器及耗材 |
| 2.10.2 实验试剂 |
| 2.10.3 融合用细胞、实验动物及器材 |
| 2.10.4 主要溶液与培养基的配制 |
| 2.11 方法 |
| 2.11.1 二乙酰镳草镰刀菌烯醇完全抗原的合成 |
| 2.11.2 二乙酰镳草镰刀菌烯醇动物免疫与杂交瘤细胞的制备 |
| 2.11.3 二乙酰镳草镰刀菌烯醇阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 2.11.4 二乙酰镳草镰刀菌烯醇单抗制备与纯化 |
| 2.11.5 铂金纳米仿生催化材料与识别探针的合成 |
| 2.11.6 气压免疫传感器的构建 |
| 2.11.7 气压免疫传感检测体系的优化 |
| 2.11.8 小麦样品的前处理 |
| 2.11.9 免疫气压法实际样品应用 |
| 2.11.10 高效液相色谱质谱联用法检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇 |
| 2.12 结果 |
| 2.12.1 二乙酰镳草镰刀菌烯醇免疫效果与杂交瘤细胞研制 |
| 2.12.2 铂金纳米仿生催化材料与识别探针的鉴定 |
| 2.12.3 电化学方法对铂金纳米仿生催化材料催化活性的鉴定 |
| 2.12.4 铂金纳米催化材料探针标记条件的优化 |
| 2.12.5 免疫气压传感检测原理 |
| 2.12.6 免疫气压传感检测条件优化 |
| 2.12.7 免疫气压传感特异性 |
| 2.12.8 免疫气压传感回收率测定 |
| 2.12.9 免疫气压传感的应用 |
| 2.13 讨论 |
| 2.13.1 伏马毒素B_1与二乙酰镳草镰刀菌烯醇两种毒素半抗原设计与合成 |
| 2.13.2 真菌毒素单克隆抗体的研制 |
| 2.13.3 灰度成像纳米金免疫层析技术 |
| 2.13.4 气压免疫传感器的设计与条件优化 |
| 2.14 小结 |
| 第三章 基于纳米抗体无毒替代抗原传感分析方法研究 |
| 第一节 黄曲霉毒素M_1纳米抗体研制与丝网印刷电化学传感方法研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.2.1 实验仪器及耗材 |
| 3.2.2 主要试剂 |
| 3.2.3 实验溶液 |
| 3.2.4 引物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 免疫羊驼与血清效价测定 |
| 3.3.2 总RNA的提取 |
| 3.3.3 cDNA第一链合成 |
| 3.3.4 重链可变区基因片段扩增 |
| 3.3.5 纳米抗体基因与pComb3X质粒的酶切与连接 |
| 3.3.6 重组的噬菌粒电转 |
| 3.3.7 纳米抗体文库的库容量与多样性鉴定 |
| 3.3.8 噬菌体展示文库的构建与滴度测定 |
| 3.3.9 噬菌体展示纳米抗体文库的构建 |
| 3.3.10 阳性纳米抗体竞争筛选和富集 |
| 3.3.11 阳性纳米抗体的鉴定 |
| 3.3.12 纳米抗体的表达与纯化 |
| 3.3.13 纳米抗体的特性鉴定 |
| 3.3.14 黄曲霉毒素M_1免疫传感器的构建 |
| 3.3.15 工作电极修饰的表征方法 |
| 3.3.16 无毒替代抗原免疫传感方法条件优化 |
| 3.3.17 免疫传感标准曲线与加标回收 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 羊驼血总RNA的提取与重链基因扩增 |
| 3.4.2 纳米抗体片段和载体pComb3X酶切鉴定 |
| 3.4.3 噬菌体纳米抗体文库的多样性鉴定 |
| 3.4.4 阳性噬菌体的筛选 |
| 3.4.5 阳性噬菌体的鉴定 |
| 3.4.6 纳米抗体VHH4-1-1和VHH2-3-1 的表达 |
| 3.4.7 纳米抗体VHH4-1-1和VHH2-3-1 特异性测定 |
| 3.4.8 丝网印刷碳电极检测原理 |
| 3.4.9 工作电极的修饰与电极表征 |
| 3.4.10 免疫电极的制备及工作条件优化 |
| 3.4.11 电化学传感器特异性、稳定性与准确度评价 |
| 第二节 基于无毒抗原AFB_1与ZEN时间分辨荧光混合污染检测技术 |
| 3.5 引言 |
| 3.6 材料 |
| 3.6.1 实验仪器及耗材 |
| 3.6.2 主要试剂 |
| 3.7 实验步骤 |
| 3.7.1 纳米抗体phages2-5和phages8#的纯化 |
| 3.7.2 Eu/Tb(Ⅲ)纳米颗粒探针的合成与鉴定 |
| 3.7.3 两种竞争模式的建立与优化 |
| 3.7.4 基于无毒替代抗原混合毒素时间分辨同步检测方法优化 |
| 3.8 结果与讨论 |
| 3.8.1 Eu/Tb(Ⅲ)纳米颗粒与探针的鉴定 |
| 3.8.2 Eu/Tb(Ⅲ)纳米探针偶联条件优化 |
| 3.8.3 两种竞争模式的结果比对 |
| 3.8.4 时间分辨荧光多毒素同步检测技术原理 |
| 3.8.5 基于无毒替代抗原时间分辨荧光检测技术准确度、重复性评价 |
| 3.8.6 玉米实际样品的检测 |
| 3.9 讨论 |
| 3.9.1 抗独特型纳米抗体替代抗原用于电化学免疫传感器 |
| 3.9.2 抗独特型纳米抗体替代抗原用于时间分辨荧光免疫层析技术 |
| 3.10 小结 |
| 第四章 基于适配体展青霉素侧向层析分析方法研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料 |
| 4.2.1 实验仪器及耗材 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 主要溶液 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 适配体序列及前处理方法 |
| 4.3.2 适配体试纸条的制备 |
| 4.3.3 适配体试纸条原理 |
| 4.3.4 适配体试纸条的检测步骤 |
| 4.3.5 适配体的选择 |
| 4.3.6 适配体检测模式的选择 |
| 4.3.7 适配体浓度的优化 |
| 4.3.8 适配体试纸条条件优化 |
| 4.3.9 适配体检测缓冲液条件优化 |
| 4.3.10 适配体试纸条方法的鉴定 |
| 4.3.11 适配体试纸条检测样品前处理 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 适配体与竞争模式的选择 |
| 4.4.2 生物素-适配体与地高辛-互补链的浓度优化 |
| 4.4.3 适配体试纸条条件优化 |
| 4.4.4 适配体检测缓冲液配方优化 |
| 4.4.5 适配体试纸条的性能参数评价 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 三类生物识别材料用于农产品快速检测的性能比较 |
| 5.1 系列生物识别材料的研制 |
| 5.1.1 两种展青霉素适配体的比对结果 |
| 5.1.2 四类单克隆抗体的筛选结果 |
| 5.1.3 四种单抗与国内外报道同类抗体特性进行比较 |
| 5.1.4 抗独特型纳米抗体的筛选结果 |
| 5.1.5 适配体、单抗、纳抗的研制比较 |
| 5.2 系列生物传感器的开发 |
| 5.2.1 建立的生物传感器涉及到的农产品类别 |
| 5.2.2 建立的生物传感器固定化技术的选择 |
| 5.2.3 建立的生物传感器识别元件的选择 |
| 5.2.4 检测方法的选择 |
| 5.3 农产品中生物传感器发展趋势展望 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）玉米赤霉烯酮及其衍生物单克隆抗体的制备及免疫试纸检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 玉米赤霉烯酮的污染现状 |
| 1 ZEN的来源,种类及理化性质 |
| 1.1 ZEN的来源 |
| 1.2 ZEN的种类 |
| 1.3 ZEN的理化性质 |
| 2 ZEN的污染现状 |
| 3 ZEN的毒性用 |
| 3.1 生殖毒性 |
| 3.2 免疫毒性 |
| 3.3 遗传毒性 |
| 3.4 细胞毒性 |
| 4 各国食品中玉米赤霉烯酮的残留量标准 |
| 5 小结 |
| 第二章 ZEN的检测技术研究进展 |
| 1 理化检测法 |
| 1.1 薄层层析法(TLC) |
| 1.2 高效液相色谱法(HPLC) |
| 1.3 气相色谱-质谱联用法(GC/MS) |
| 2 免疫学检测方法 |
| 2.1 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 2.2 酶联免疫分析法(EIA) |
| 2.3 免疫荧光技术 |
| 2.4 免疫胶体金技术(GICA) |
| 3 生物传感器 |
| 3.1 电化学生物传感器 |
| 3.2 荧光生物传感器 |
| 3.3 细胞传感器 |
| 4 小结 |
| 第三章 ZEN人工抗原的制备与鉴定 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 溶液 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 试验动物 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 人工抗原的制备 |
| 2.2 人工抗原ZEN-BSA理化性质的鉴定 |
| 2.3 人工抗原ZEN-BSA免疫学特性的鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 人工抗原紫外鉴定结果 |
| 3.2 人工抗原红外鉴定结果 |
| 3.3 人工抗原SDS-PAGE鉴定结果 |
| 3.4 pAb间接竞争ELISA结果 |
| 3.5 pAb血清敏感性测定 |
| 3.6 pAb血清特异性测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 人工抗原的合成 |
| 4.2 封闭液马血清的非特异性反应 |
| 4.3 抗血清的效价 |
| 5 小结 |
| 第四章 ZEN单克隆抗体的制备及免疫学特性分析 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 试验试剂 |
| 1.2 溶液 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试验动物与细胞 |
| 2 ZEN mAb的制备及鉴定 |
| 2.1 杂交瘤细胞株的建立 |
| 2.2 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 2.3 ZEN mAb的免疫学特性鉴定 |
| 2.4 ZEN mAb的制备 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 细胞融合备用小鼠的选择 |
| 3.2 杂交瘤细胞株的筛选与鉴定 |
| 3.3 ZEN mAb的免疫学特性 |
| 4 讨论 |
| 4.1 免疫方案的选择 |
| 4.2 杂交瘤细胞亚克隆的培养 |
| 4.3 ZEN mAb的交叉反应性 |
| 5 小结 |
| 第五章 ZEN免疫检测试纸方法的建立及初步应用 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂及溶液 |
| 1.2 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 ZEN ic-ELISA试剂盒的组装 |
| 2.2 样品前处理 |
| 2.3 试剂盒的操作步骤 |
| 2.4 ZEN icELISA试剂盒性能测定 |
| 2.5 胶体金溶液的制备 |
| 2.6 金标抗体的制备 |
| 2.7 ZEN胶体金免疫试纸的研制 |
| 2.8 ZEN胶体金免疫试纸的性能测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 包被原、ZEN mAb和酶标二抗最佳工作浓度的确定 |
| 3.2 试剂盒性能的测定 |
| 3.3 胶体金颗粒的特征鉴定 |
| 3.4 金标抗体的制备 |
| 3.5 ZEN胶体金免疫试纸的性能测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 制备胶体金的方法 |
| 4.2 胶体金的制备条件的优化 |
| 4.3 待检样品提取条件的优化 |
| 5 小结 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（7）粮油黄曲霉与毒素同步检测及木霉阻控技术研究（论文提纲范文）
| 博士学位论文评阅 人、答辩委员会签名表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 黄曲霉毒素概述 |
| 1.1.1 黄曲霉毒素种类及其理化性质 |
| 1.1.2 黄曲霉毒素毒性及其危害 |
| 1.1.3 黄曲霉毒素限量标准 |
| 1.1.4 黄曲霉毒素生物合成 |
| 1.2 黄曲霉毒素检测技术研究进展 |
| 1.2.1 黄曲霉毒素薄层层析及仪器分析技术 |
| 1.2.2 黄曲霉毒素免疫分析技术 |
| 1.2.3 黄曲霉毒素生物传感器分析技术 |
| 1.2.4 黄曲霉毒素噬菌体展示介导免疫PCR检测技术 |
| 1.3 黄曲霉菌检测技术研究进展 |
| 1.3.1 黄曲霉菌概述 |
| 1.3.2 黄曲霉菌检测技术方法 |
| 1.4 黄曲霉及其毒素污染生物防控研究现状 |
| 1.4.1 生防微生物种类 |
| 1.4.2 生物防控作用机理 |
| 1.4.3 生防效果影响因子 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 |
| 1.6 本课题的主要研究内容 |
| 第二章 粮油黄曲霉毒素与玉米赤霉烯酮RT-PCR同步检测技术研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 仪器与耗材 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 主要缓冲液 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 纳米抗体噬菌体扩增 |
| 2.3.2 同步免疫反应条件优化 |
| 2.3.3 双重RT-PCR反应条件优化 |
| 2.3.4 RT-PCR同步检测AFT和 ZEN的技术评价 |
| 2.3.5 实际样品中AFT和 ZEN的 RT-PCR同步检测 |
| 2.3.6 样品中毒素的HPLC法测定 |
| 2.4 结果与分析 |
| 2.4.1 RT-PCR同步检测AFT和 ZEN的原理 |
| 2.4.2 同步免疫反应的条件优化 |
| 2.4.3 扩增效率评估 |
| 2.4.4 RT-PCR同步检测AFT和 ZEN的技术评价 |
| 2.4.5 实际样品中AFT和 ZEN的 RT-PCR同步检测 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 包被羊抗鼠抗体IgG的优势 |
| 2.5.2 噬菌体介导的RT-PCR同步检测技术优势及应用前景 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 玉米黄曲霉毒素及其产毒菌RT-PCR同步检测技术研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 仪器与耗材 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 主要缓冲液及培养基 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 纳米抗体噬菌体扩增 |
| 3.3.2 Nor-1参考基因制备 |
| 3.3.3 双重RT-PCR的反应条件优化 |
| 3.3.4 玉米中黄曲霉毒素RT-PCR检测标准曲线建立 |
| 3.3.5 玉米中黄曲霉菌RT-PCR检测标准曲线建立 |
| 3.3.6 黄曲霉毒素检测可靠性验证 |
| 3.3.7 黄曲霉菌检测可靠性验证 |
| 3.3.8 实际样品分析 |
| 3.4 结果与分析 |
| 3.4.1 双重RT-PCR反应条件优化 |
| 3.4.2 双重RT-PCR扩增效率 |
| 3.4.3 RT-PCR检测黄曲霉毒素的技术评价 |
| 3.4.4 RT-PCR检测黄曲霉菌的技术评价 |
| 3.4.5 RT-PCR技术在实际样品中同步检测的应用 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 基于nor-1基因检测黄曲霉菌的特异性和可靠性 |
| 3.5.2 噬菌体介导的RT-PCR同步检测小分子污染物和微生物的优势及应用前景 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 花生黄曲霉及其毒素污染木霉菌阻控技术研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 仪器与耗材 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 菌株来源及活化 |
| 4.3.2 木霉菌与黄曲霉菌相互作用关系研究 |
| 4.3.3 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌生长的影响研究 |
| 4.3.4 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌产毒的影响研究 |
| 4.3.5 统计分析 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 木霉菌与黄曲霉菌生长速率 |
| 4.4.2 木霉菌与黄曲霉菌相互作用关系 |
| 4.4.3 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌生长的影响 |
| 4.4.4 木霉菌代谢产物对黄曲霉菌产毒的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 粮油黄曲霉毒素污染木霉菌降解技术研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 仪器与耗材 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 主要溶液和培养基 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 木霉菌株来源及鉴定 |
| 5.3.2 不同木霉菌降解AFB1的能力差异分析 |
| 5.3.3 超高效降解黄曲霉毒素的木霉菌株筛选 |
| 5.3.4 里氏木霉CGMCC3.5218降解黄曲霉毒素的作用机理研究 |
| 5.3.5 里氏木霉CGMCC3.5218 降解实际样品中AFT的应用研究 |
| 5.3.6 统计分析 |
| 5.4 结果与分析 |
| 5.4.1 不同木霉菌降解AFB1的能力差异 |
| 5.4.2 超高效降解AFB1的木霉菌株筛选 |
| 5.4.3 里氏木霉CGMCC3.5218降解黄曲霉毒素的作用机理 |
| 5.4.4 里氏木霉CGMCC3.5218降解粮油产品中黄曲霉毒素的应用 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 不同木霉菌降解AFB1的能力差异 |
| 5.5.2 里氏木霉CGMCC3.5218对AFB1的作用机理 |
| 5.5.3 里氏木霉CGMCC3.5218的应用前景 |
| 5.6 小结 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（8）霉变饲料中添加脱毒剂对蛋雏鸡健康的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 霉菌毒素种类 |
| 1 黄曲霉毒素 |
| 2 呕吐毒素 |
| 3 玉米赤霉烯酮 |
| 4 伏马毒素 |
| 5 赭曲霉毒素 |
| 第二章 饲料中霉菌毒素的污染情况、限量标准以及检测方法 |
| 1 检测方法 |
| 1.1 酶联免疫吸附法(ELISA) |
| 1.2 薄层色谱法(TLC) |
| 1.3 高效液相色谱法(HPLC) |
| 1.4 气质联用(GC-MS)和液质联用(HPLC-MS) |
| 1.5 胶体金标记技术 |
| 2 限量标准及污染情况 |
| 2.1 黄曲霉毒素的污染及限量标准 |
| 2.2 呕吐毒素和T-2 毒素的污染及限量标准 |
| 2.3 玉米赤霉烯酮的污染及限量标准 |
| 2.4 赭曲霉毒素的污染及限量标准 |
| 2.5 伏马毒素的污染及限量标准 |
| 第三章 霉菌毒素的危害 |
| 1 黄曲霉毒素的危害 |
| 1.1 黄曲霉毒素对免疫功能的影响 |
| 1.2 黄曲霉毒素对细胞的影响 |
| 1.3 黄曲霉毒素对生产健康的影响 |
| 2 玉米赤霉烯酮的危害 |
| 2.1 玉米赤霉烯酮对免疫功能的影响 |
| 2.2 玉米赤霉烯酮对细胞的影响 |
| 2.3 玉米赤霉烯酮对生产健康的影响 |
| 3 呕吐毒素的危害 |
| 3.1 呕吐毒素对免疫功能的影响 |
| 3.2 呕吐毒素对细胞的影响 |
| 3.3 呕吐毒素对生产健康的影响 |
| 4 赭曲霉毒素的危害 |
| 4.1 赭曲霉毒素对免疫功能的影响 |
| 4.2 赭曲霉毒素对生产健康的影响 |
| 5 伏马毒素的危害 |
| 5.1 伏马毒素对免疫功能的影响 |
| 5.2 伏马毒素对生产健康的影响 |
| 第四章 霉菌毒素的防控 |
| 1 霉菌毒素的预防措施 |
| 1.1 选用抗病品种农作物,加强作物田间管理 |
| 1.2 农作物收获和储藏过程中的预防措施 |
| 2 饲料中霉菌毒素的脱毒方法 |
| 2.1 机械脱毒法 |
| 2.2 物理脱毒法 |
| 2.3 化学脱毒法 |
| 2.4 吸附剂吸附法 |
| 2.5 生物脱毒法 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第一章 饲料中霉菌毒素对蛋雏鸡采食量的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 基础日粮组成 |
| 1.4 实验动物分组与处理 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 3日龄雏鸡染毒试验结果 |
| 2.2 40日龄雏鸡染毒试验结果 |
| 2.3 7日龄雏鸡染毒试验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 霉变饲料中添加脱霉剂对蛋雏鸡生长性能和脏器损伤的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 动物分组与处理 |
| 1.4 生长性能的检测 |
| 1.5 剖检与脏器指数测定 |
| 1.6 脏器组织病理学观察 |
| 1.7 数据统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 霉菌毒素及其脱毒剂对雏鸡生长性能的影响 |
| 2.2 霉菌毒素及其脱毒剂对雏鸡脏器指数的影响 |
| 2.3 器官组织损伤的病理学观察 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 霉变饲料中添加脱毒剂对蛋雏鸡抗氧化功能和免疫功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 饲养管理和免疫 |
| 1.3 仪器及试剂 |
| 1.4 基础日粮和DON霉变饲料 |
| 1.5 检测指标和方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同剂量DON对蛋雏鸡血液中抗氧化指标影响 |
| 2.2 不同类型脱毒剂对蛋雏鸡血液中抗氧化指标影响 |
| 2.3 不同剂量DON对蛋雏鸡免疫指标影响 |
| 2.4 不同类型脱毒剂对蛋雏鸡免疫指标影响 |
| 2.5 不同剂量DON对蛋雏鸡抗体滴度影响 |
| 2.6 不同类型脱毒剂对蛋雏鸡抗体滴度影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同剂量DON及添加脱毒剂对蛋雏鸡血液中抗氧化指标影响 |
| 3.2 不同剂量DON及添加脱毒剂对蛋雏鸡免疫指标影响 |
| 3.3 不同剂量DON及添加脱毒剂对蛋雏鸡抗体滴度影响 |
| 4 小结 |
| 第四章 霉变饲料中添加脱霉剂对雏鸡抗氧化酶和炎性因子mRNA表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 脏器组织的采集 |
| 1.3 引物的设计及合成 |
| 1.4 总RNA提取 |
| 1.5 反转录(cDNA的合成) |
| 1.6 荧光定量PCR检测 |
| 1.7 目的基因相对表达量计算 |
| 1.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 肝脏抗氧化酶与炎性因子m RNA表达结果 |
| 2.2 腺胃抗氧化酶与炎性因子m RNA表达结果 |
| 2.3 回肠抗氧化酶与炎性因子m RNA表达结果 |
| 2.4 法氏囊抗氧化酶与炎性因子m RNA表达结果 |
| 2.5 脾脏抗氧化酶与炎性因子m RNA表达结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 攻读博士期间发表的主要论文 |
| 致谢 |
（9）基于球形纳米金和金纳米花标记的免疫层析法检测三种霉菌毒素（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 霉菌毒素概述 |
| 1.2.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON) |
| 1.2.2 玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN) |
| 1.2.3 黄曲霉毒素M_1(aflatoxin M_1,AFM_1) |
| 1.3 纳米金粒子概述 |
| 1.3.1 纳米金粒子的理化性质、结构及其分类 |
| 1.3.2 球形纳米金和金纳米花的制备方法 |
| 1.4 纳米金免疫层析法 |
| 1.4.1 纳米金免疫层析法的结构和主要技术模型 |
| 1.4.2 纳米金免疫层析法的优点 |
| 1.4.3 纳米金免疫层析法在霉菌毒素检测中的应用 |
| 1.5 纳米金免疫层析法的发展现状和趋势 |
| 1.6 本研究的目的和内容 |
| 1.6.1 研究目的 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 第2章 基于球形纳米金标记抗原的免疫层析法检测呕吐毒素 |
| 2.1 实验材料与仪器 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验器材 |
| 2.1.3 溶液配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 球形纳米金的制备 |
| 2.2.2 金标DON-BSA标记物和金标鸡IgY抗体标记物的制备 |
| 2.2.3 DON球形纳米金免疫层析检测卡(DON-GICT)的制备 |
| 2.2.4 DON-GICT反应体系优化 |
| 2.2.5 免疫层析检测卡抗原抗体用量优化 |
| 2.2.6 DON-GICT分析性能评估 |
| 2.2.7 样品前处理优化 |
| 2.2.8 DON-GICT检测实际样本并与ELISA试剂盒对比 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 AuNSs、AuNS-DON-BSA和 AuNS-Ck-IgY表征 |
| 2.3.2 DON-GICT关键参数优化 |
| 2.3.3 DON抗体和AuNS-DON-BSA标记物用量优化 |
| 2.3.4 DON-GICT灵敏度、精密性、稳定性和交叉反应检测 |
| 2.3.5 样品前处理优化 |
| 2.3.6 DON-GICT检测实际样品 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 金纳米花的制备及免疫层析法检测玉米赤霉烯酮 |
| 3.1 实验材料与仪器 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验器材 |
| 3.1.3 溶液配置 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 球形纳米金种子(AuNSs)和金纳米粒子(AuNPs)的制备. |
| 3.2.2 金纳米粒子(AuNPs)的表征 |
| 3.2.3 金纳米花ZEN单克隆抗体标记物和球形纳米金ZEN单克隆抗体标记物的制备 |
| 3.2.4 ZEN金纳米花免疫层析检测卡和球形纳米金免疫层析检测卡的制备 |
| 3.2.5 ZEN-GFICT和 ZEN-GICT的灵敏度测试 |
| 3.2.6 样品提取和检测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 正交实验结果方差分析和统计分析 |
| 3.3.2 AuNPs的表征 |
| 3.3.3 1#AuNFs标记ZEN-Mab的pH和蛋白浓度优化 |
| 3.3.4 ZEN-GFICT关键参数优化 |
| 3.3.5 ZEN-GFICT和 ZEN-GICT灵敏度测试 |
| 3.3.6 ZEN-GFICT重复性和稳定性的评价 |
| 3.3.7 ZEN-GFICT与商业化ZEN-ELISA检测结果的比较 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章基于金纳米花标记的免疫层析法高灵敏定量检测黄曲霉毒素M_1 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验器材 |
| 4.1.3 溶液配置 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 球形纳米金(AuNSs)和金纳米花(AuNFs)的制备 |
| 4.2.2 金纳米花和球形纳米金的AFM_1抗体标记物的制备 |
| 4.2.3 AFM_1 金纳米花免疫层析检测卡和球形纳米金免疫层析检测卡的制备 |
| 4.2.4 AFM_1-GFICT和 AFM_1-GICT标准曲线的建立 |
| 4.2.5 AFM_1-GFICT分析性能评估 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 AuNFs和 AuNPs的表征 |
| 4.3.2 AuNFs标记AFM_1-Mab的 pH和蛋白浓度优化 |
| 4.3.3 AFM_1-GFICT关键参数优化 |
| 4.3.4 AFM_1-GFICT和 AFM_1-GICT定量标准曲线的建立 |
| 4.3.5 AFM_1-GFICT检测性能评估 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果及所获荣誉 |
| 致谢 |
（10）玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫亲和柱及免疫磁珠的制备与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 真菌毒素概述 |
| 1.2 玉米赤霉烯酮的研究进展 |
| 1.2.1 玉米赤霉烯酮简介 |
| 1.2.2 玉米赤霉烯酮的理化性质 |
| 1.2.3 玉米赤霉烯酮的毒性 |
| 1.2.4 玉米赤霉烯酮的污染现状与限量标准 |
| 1.2.5 玉米赤霉烯酮的检测方法 |
| 1.3 样品前处理净化技术 |
| 1.3.1 固相萃取 |
| 1.3.2 免疫亲和柱法 |
| 1.3.3 免疫磁珠分离法 |
| 1.4 壳聚糖 |
| 1.4.1 壳聚糖简介 |
| 1.4.2 壳聚糖微球及其在色谱分离中的应用 |
| 1.4.3 壳聚糖免疫磁珠 |
| 1.5 论文的主要研究内容与意义 |
| 第二章 玉米赤霉烯酮抗体的制备与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 试剂与仪器 |
| 2.2.1 试剂 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.2.4 实验动物 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.3.1 玉米赤霉烯酮半抗原的制备与鉴定 |
| 2.3.2 人工免疫原和包被抗原的制备与鉴定 |
| 2.3.3 动物免疫 |
| 2.3.4 ZEN多克隆抗体的效价测定 |
| 2.3.5 ZEN多克隆抗体纯化与浓度测定 |
| 2.3.6 纯化后ZEN多克隆抗体的SDS-PAGE分析 |
| 2.3.7 ZEN多克隆抗体和包被原(ZEN-BSA)工作浓度的确定 |
| 2.3.8 ZEN多克隆抗体IC50 的测定 |
| 2.3.9 ZEN多克隆抗体交叉反应率的测定 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 ZEN半抗原的鉴定 |
| 2.4.2 人工免疫原(ZEN-KLH)和包被抗原(ZEN-BSA)的鉴定 |
| 2.4.3 ZEN多克隆抗体的效价 |
| 2.4.4 ZEN多克隆抗体SDS-PAGE纯度鉴定 |
| 2.4.5 包被原和多克隆抗体工作浓度的确定 |
| 2.4.6 ZEN多克隆抗体的抑制曲线及IC50 的测定 |
| 2.4.7 ZEN多克隆抗体的特异性测定 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 壳聚糖微球为载体玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的制备与评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 试剂与仪器 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 相关溶液的配制 |
| 3.2.3 主要仪器设备 |
| 3.3 试验方法 |
| 3.3.1 膜乳化法制备壳聚糖微球 |
| 3.3.2 膜乳化法制备微球条件的优化 |
| 3.3.3 壳聚糖微球表征 |
| 3.3.4 ZEN免疫亲和吸附剂的制备 |
| 3.3.5 ZEN免疫亲和吸附剂偶联率的测定 |
| 3.3.6 ZEN多克隆抗体IAC柱的使用步骤 |
| 3.3.7 ZEN多克隆抗体IAC柱使用方法的优化 |
| 3.3.8 壳聚糖微球和Sepharose4B对 ZEN的非特异性吸附 |
| 3.3.9 ZEN多克隆抗体IAC柱评价方法的建立 |
| 3.3.10 ZEN多克隆抗体IAC柱的性能评价 |
| 3.3.11 ZEN多克隆抗体IAC柱的实际应用 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 膜乳化法制备微球条件的优化 |
| 3.4.2 壳聚糖微球表征 |
| 3.4.3 壳聚糖微球、Sepharose4B的非特异性吸附率 |
| 3.4.4 免疫亲和吸附剂偶联率的测定 |
| 3.4.5 ZEN多克隆抗体IAC柱评价方法的建立 |
| 3.4.6 ZEN多克隆抗体IAC柱使用条件的优化 |
| 3.4.7 ZEN多克隆抗体IAC柱的柱容量测定 |
| 3.4.8 ZEN多克隆抗体IAC柱之间的重复性 |
| 3.4.9 ZEN多克隆抗体IAC柱在实际样品中的应用 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠的制备与应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 试剂与仪器 |
| 4.2.1 试剂 |
| 4.2.2 相关溶液的配制 |
| 4.2.3 主要仪器设备 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 壳聚糖磁珠Fe3O4@CTS的制备 |
| 4.3.2 壳聚糖磁珠表征 |
| 4.3.3 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠的制备 |
| 4.3.4 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠的使用方法 |
| 4.3.5 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠用量以及吸附时间的优化 |
| 4.3.6 壳聚糖磁珠对ZEN的非特异性吸附 |
| 4.3.7 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠的稳定性 |
| 4.3.8 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠的最大吸附载量 |
| 4.3.9 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠的加标回收率 |
| 4.3.10 玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫磁珠在实际样品中的应用 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 壳聚糖磁珠表征 |
| 4.4.2 壳聚糖磁珠与抗体偶联方法选择及其偶联率与偶联量 |
| 4.4.3 壳聚糖免疫磁珠用量以及吸附时间优化 |
| 4.4.4 壳聚糖免疫磁珠的非特异性吸附 |
| 4.4.5 壳聚糖免疫磁珠的稳定性 |
| 4.4.6 壳聚糖免疫磁珠的最大吸附载量 |
| 4.4.7 壳聚糖免疫磁珠标准溶液回收率 |
| 4.4.8 壳聚糖免疫磁珠在实际样品中的应用 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 主要结论与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读学位期间发表的论文 |
四、玉米赤霉烯酮免疫检测技术研究——兔抗玉米赤霉烯酮抗体研制（论文参考文献）
- [1]玉米赤霉烯酮检测方法研究现状[J]. 魏振,王秋玲,石继超,龙淼. 动物医学进展, 2022
- [2]玉米赤霉烯酮完全抗原的制备及鉴定[J]. 张浩楠,高建伟. 黑龙江农业科学, 2021(06)
- [3]食品中伏马毒素B1和玉米赤霉烯酮同时检测的上转换荧光传感技术研究[D]. 李静芝. 兰州大学, 2021(11)
- [4]玉米赤霉烯酮对小鼠B淋巴细胞体外活化的影响及机制研究[D]. 李茜. 扬州大学, 2020
- [5]农产品典型真菌毒素生物识别材料与快速检测方法研究[D]. 唐晓倩. 中国农业科学院, 2020
- [6]玉米赤霉烯酮及其衍生物单克隆抗体的制备及免疫试纸检测方法的建立[D]. 吕俊美. 河南科技学院, 2020(10)
- [7]粮油黄曲霉与毒素同步检测及木霉阻控技术研究[D]. 任显凤. 中国农业科学院, 2020
- [8]霉变饲料中添加脱毒剂对蛋雏鸡健康的影响[D]. 李安平. 吉林大学, 2019
- [9]基于球形纳米金和金纳米花标记的免疫层析法检测三种霉菌毒素[D]. 金玉. 江西科技师范大学, 2019(02)
- [10]玉米赤霉烯酮壳聚糖免疫亲和柱及免疫磁珠的制备与应用[D]. 牛瑞. 江苏大学, 2019(02)