一、二甲基甲酰胺对体外培养大鼠肝细胞酶组织化学和电镜观察（论文文献综述）
陈建时[1]（2021）在《阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化的保护作用和机制研究》文中指出研究背景：百草枯（Paraquat,PQ）是目前仍广泛使用的速效触杀型季胺盐类灭生性除草剂,对人畜具有高毒性。经口摄入是人百草枯中毒的主要方式,部分患者患有严重的抑郁状态。百草枯中毒死亡率极高,即使部分患者经血液灌流、糖皮质激素、抗氧化剂、免疫抑制剂等综合治疗而存活,一般也遗留包括严重肺纤维化以及其他器官功能障碍等后遗症。急性百草枯中毒（Acute Paraquat Poisoning,APP）已成为死亡绝对数第一的农药中毒类型。肺是急性百草枯中毒后损伤的最主要靶器官,肺组织内百草枯的浓度可达血浆浓度的10-90倍。百草枯中毒后机体释放大量炎症细胞因子并促进氧化应激发生,后者又可以通过各种信号通路来进一步刺激炎症细胞因子的产生。因而,百草枯肺毒性的早期表现为急性肺泡炎。随着病程进展,肌成纤维细胞渗入肺泡腔和肺泡间隔,同时出现肌成纤维细胞的分化,进行性加重并快速进展为不可逆性肺纤维化。肺纤维化所致的严重低氧血症是百草枯中毒患者死亡的最主要原因。目前,百草枯中毒的肺损伤和纤维化确切机制尚未完全阐明,临床上尚无特效解毒剂或治疗方法,百草枯中毒诊治的研究仍是目前难以攻克的课题。因此,深入探讨急性百草枯中毒的病理生理机制并寻找新的、安全有效的治疗策略,对于改善百草枯中毒的治疗和预后具有十分重要的意义。肺也是抗抑郁药的储存库。作为三环类抗抑郁药物（Tricyclic Antidepressant,TCAs）的经典代表,阿米替林（Amitriptyline,AMT）不仅具有抗抑郁的作用,而且目前研究认为其具有多效性。研究发现,阿米替林通过改变细胞因子活性、抑制白细胞介素-1（IL-1）、核因子-κB（NF-κB）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等促炎细胞因子的释放、增加免疫抑制和白细胞介素-10（IL-10）的释放,具有有效的抗炎作用。通过抑制自然杀伤细胞的活性以及一氧化氮（NO）、前列腺素E2（PGE2）和透明质酸的产生,阿米替林亦显示出较强的抗氧化特性。近年来,随着TCAs在抗纤维化方面研究的深入,结果清楚的表明阿米替林同时具有抗纤维化作用。阿米替林可通过多种机制下调肾小管肌成纤维细胞分化,减少肝胶原沉积、降低纤维化介质、TGF-β1和TNF-αmRNA表达,保护肾脏和肝纤维化的发生。进一步研究还发现,阿米替林能下调囊性纤维化（Cystic Fibrosis,CF）小鼠模型肺动脉压,改善肺功能;同时能显着抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化改变。阿米替林以抗炎、抗氧化为基础的脏器保护和抗纤维化作用基本明确,但其能否在治疗百草枯中毒所致的肺纤维化中起作用尚不可知。我们的课题通过单剂量灌胃给药法建立百草枯中毒动物模型,应用阿米替林药物干预百草枯中毒小鼠肺纤维化模型,通过观察肺组织病理学改变、肺水肿程度、炎症因子、纤维化相关因子以及上皮-间质转化（Epithelial-MesenchymalTransition,EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和α-SMA蛋白）、Caveolin-1蛋白的表达,研究阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化是否具有保护作用。此外,我们还研究了阿米替林对纤维化小鼠血气分析和生存率的影响。应用体外细胞试验及siRNA转染技术沉默Caveolin-1基因,研究阿米替林对百草枯诱导的A549细胞EMT相关蛋白表达和细胞凋亡率的影响,拟探讨阿米替林对A549细胞EMT作用的可能机制,以期为临床应用阿米替林治疗百草枯所致肺纤维化提供有力的实验依据。第一部分:百草枯诱导的小鼠肺纤维化模型的建立：目的:研究单次灌胃给药法建立稳定的急性百草枯中毒肺纤维化小鼠模型,探讨合适的染毒剂量。方法:40只正常C57BL/6小鼠随机被分为4组,每组10只:即对照组（Ctrl组）、低剂量百草枯染毒组（L-PQ组）、中剂量百草枯染毒组（M-PQ组）和高剂量百草枯染毒组（H-PQ组）。分别以1ml生理盐水以及按10mg/kg、50mg/kg、150mg/kg百草枯加生理盐水稀释成1ml,经口一次性灌胃后21天为实验观察期,期间记录四组小鼠一般状态和生存情况。至实验终点,取存活小鼠肺组织行HE染色和Masson染色观察肺组织病理改变,计算各组Ashcroft评分评价纤维化程度。结果:1.一般状态和生存情况:百草枯染毒小鼠早期有明显的消化道症状,中后期以呼吸道症状和体征为主,且染毒剂量越高,临床表现越显着。百草枯染毒小鼠体重下降波谷在第7天左右,此后逐渐回升,其中M-PQ组较H-PQ组回升更明显。至第21天,四组间小鼠体重比较有显着性差异（p<0.05）。与染毒前相比,H-PQ组较M-PQ组体重下降更显着（p<0.01）。H-PQ组死亡小鼠均在实验14天内,其余各组无死亡病例。2.肺组织病理学:Ctrl组小鼠肺体积正常,组织结构清晰完整,无炎症或纤维化改变。L-PQ组肺间质以炎症改变为主,可见胶原纤维增生及成纤维细胞。M-PQ组和H-PQ组肺体积缩小,肺泡内渗出,肺泡间隔水肿,炎性细胞浸润,成纤维细胞明显增殖,可见排列紊乱且粗大的胶原纤维增生,H-PQ组还可见肺组织实变及肺泡结构塌陷。Ctrl组、L-PQ组、M-PQ组和H-PQ组Ashcroft评分分别为0.30±0.13分、3.09±0.28分、5.38±0.44分和6.74±0.35分,各组间比较差异均有统计学意义（P<0.01）。结论:50mg/kg百草枯单次灌胃给药后第21天C57BL/6小鼠肺纤维化模型建立成功。150mg/kg百草枯的高剂量灌胃给药法可用于造模小鼠生存率的研究。第二部分:阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化的保护作用：目的:探讨阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化模型是否具有保护作用。方法:58只正常C57BL/6小鼠随机分为6组。对照组（Ctrl组）、百草枯染毒组（PQ组）、百草枯染毒+阿米替林干预组（PQ+AMT组）以及阿米替林组（AMT￥组）各8只;高剂量百草枯染毒组（H-PQ组）和高剂量百草枯染毒+阿米替林干预组（H-PQ+AMT组）各13只。PQ染毒和H-PQ染毒小鼠分别予50mg/kg和150mg/kg百草枯造模,方法同第一部分。对照组及药物干预组分别以lml生理盐水和20 mg/kg阿米替林每天一次灌胃给药至第21天为观察终点。通过观察各组小鼠一般状态和高剂量百草枯染毒小鼠生存情况;小鼠肺组织病理组织学及超微结构;ELISA检测肺组织匀浆TNF-cu IL-ip以及TGF-pl、IL-17水平,并检测血清TGF-pi和EL-17水平;Ashcroft评分与肺组织TGF-pi、IL-17水平的相关性分析;利用免疫组化和Western-Blot法研宄阿米替林对肺组织EMT标志物:E-cadherin、N-cadherin、a-SMA蛋白以及Caveolin-1蛋白表达的影响等综合评价阿米替林对小鼠肺纤维化的保护作用。此外,我们还通过抽取小鼠腹主动脉血行血气分析研究了阿米替林对纤维化小鼠氧合、代谢等内环境的影响。结果:1.一般状态:Ctrl组与AMT组小鼠毛色、反应和呼吸均无异常;PQ+AMT组小鼠消化道及呼吸道症状较PQ组轻,毛色光泽。PQ组与PQ+AMT组第21天体重分别为20.28±1.23g和21.4Ul.51g,均分别低于Ctrl组（p＜O.Ol）,但两组间差异无统计学意义（P＝0.12）。生存率分析:百草枯剂量为50mg/kg的实验小鼠无死亡病例。H-PQ组和H-PQ+AMT组小鼠21d生存率分别为53.85%和84.62%,两组无显着性差异（p=0.095）,阿米替林干预不能改善其近期生存率。2.双肺大体形态和肺系数:PQ+AMT组小鼠肺体积较PQ组稍大,肺表面淤血程度较轻,湿度适中。PQ+AMT组和PQ组小鼠肺系数分别为0.79±0.10%和1.07±0.15%,均高于Ctrl组（0.60±0.07%）,差异有统计学意义（p=0.017&p<0.01）;且PQ+AMT组肺系数低于PQ组（p<0.01）,其余各组间比较无显着性差异,提示阿米替林灌胃可降低百草枯诱导的纤维化小鼠肺系数。3.超微结构观察:细胞线粒体肿胀,线粒体脊丢失,基质间隙增宽、肺泡间隔增厚以及肺泡间隔内弹性纤维、胶原纤维和网状纤维增生明显是PQ组肺组织细胞超微结构改变的典型表现。PQ+AMT组肺组织超微结构变化较PQ组轻,对照组和AMT组肺组织细胞超微结构完整。4.血气分析结果:单因素方差分析提示四组间PH值比较无显着性差异（p=0.45）。PQ组PaC02、Lac水平均较Ctrl组、PQ+AMT组和AMT组稍高,但差异均无统计学意义（p=0.093&p=0.97）。PQ组Sa02（86.71%±4.87%）和Pa02（87.84±9.99mmHg）较Ctrl组（93.4%±l.99%&110.53±8.37mmHg）均显着下降（p=0.003&p=0.0002）。PQ+AMT组SaO2（91.15%±1.71%）和PaO2（105.15±7.61mmHg）均较PQ组高,差异也有统计学意义（p=0.03&;p=0.002）。5.肺组织病理学改变:PQ组纤维化病变多位于胸膜下和血管周围,成纤维细胞明显增殖,胶原纤维排列紊乱且粗大;PQ+AMT组病理改变较PQ组轻,肺间质以炎症改变为主,可见胶原纤维和成纤维细胞增生。PQ组与PQ+AMT组AshcrofH平分分别为5.53±0.57分和3.91±0.24分,差异有统计学意义（p<0.05）。6.阿米替林抑制百草枯诱导的小鼠肺组织炎症反应:PQ组小鼠肺组织TNF-tx水平为194.49±22.57ng/L显着高于Ctrl组（91.98±8.79ng/L）、PQ+AMT组（111.70±8.25ng/L）和AMT组（82.78±8.52ng/L）,差异均有统计学意义（p<0.01）。PQ组小鼠肺组织IL-lβ水平也分别高于其余各组（p<0.01）。其中PQ+AMT组IL-1β水平为8.98±1.42ng/L,较PQ组（10.70±1.71ng/L）显着下降（p=0.046）;Ctrl组和AMT组间比较无显着性差异（p>0.05）。7.阿米替林下调百草枯诱导的小鼠肺组织羟脯氨酸含量:PQ组肺组织羟脯氨酸含量为1171.68士142.19μg/g,分别高于Ctrl组（746.36±18.20μg/g）、PQ+AMT组（839.3±40.99μg/g）和AMT组（747.24±39.32pg/g）。其中PQ组与PQ+AMT组间比较差异有统计学意义（p<0.01）。8.阿米替林下调肺组织TGF-β1和IL-17水平并下调血清TGF-β1水平。ELISA法检测肺组织TGF-β1水平显示:PQ+AMT组为263.48±8.57ng/L,较PQ组（327.91±4.59ng/L）低,差异显着（p<0.01）;PQ+AMT组血清TGF-pi水平为131.76±6.31ng/L,较PQ组（140.69±6.83ng/L）低,差异也有统计学意义（p=0.047）。其余各组间比较均无显着性差异。肺组织IL-17水平检测显示PQ+AMT组（27.70±2.78ng/L）较PQ组（43.08±0.85ng/L）低（p<0.01）。PQ+AMT组与PQ组血清EL-17水平分别为19.32±0.53ng/L和19.71±0.59ng/L,差异无统计学意义（p=0.19）;其余各组间血清IL-17水平比较也无统计学意义（p>0.05）。Pearson相关性分析显示:Ashcroft评分越高,肺组织TGF-β1和IL-17水平也越高,呈正相关性。9.阿米替林抑制百草枯诱导的肺纤维化小鼠肺组织细胞上皮-间质转化并上调Caveolin-1蛋白。免疫组化结果显示:PQ组小鼠肺组织E-cadherin蛋白表达下降,N-cadherin、α-SMA蛋白表达增多,肺间质纤维明显增生。阿米替林干预下PQ染毒小鼠肺组织E-cadherin蛋白表达较PQ组高,而α-SMA和N-cadherin蛋白表达下降,肺间质纤维增生缓解。Ctrl组和AMT组肺泡细胞膜和细胞浆阳性表达Caveolin-1蛋白,PQ组大部分肺泡组织呈弱阳性或阴性表达。阿米替林千预下PQ染毒小鼠肺组织Cavedin-1蛋白表达强于PQ组,且肺间质纤维化弱于PQ组。Western-blot结果显示:对照组和AMT组小鼠肺组织E-cadherin蛋白表达水平较高,PQ组和PQ+AMT组表达较Ctrl组下调,差异均有统计学意义（p<0.01）;PQ+AMT组E-cadherin蛋白表达较PQ组高,但差异无统计学意义（p=0.85）。PQ组肺组织(α-SMA和N-cadherin蛋白表达较Ctrl组高,差异有统计学意义（p<0.01）;PQ+AMT组中该两种蛋白的表达均较PQ组显着下调（p<0.01&p=0.012）。百草枯诱导下Caveolin-l蛋白表达较Ctrl组显着下降（p<0.01）,且显着低于PQ+AMT组和AMT组（p=0.047&;p=0.004）。结论:1.阿米替林改善百草枯诱导的纤维化小鼠一般状态和肺组织病理,但不能改善高剂量诱导小鼠的21d生存率。2.阿米替林改善纤维化小鼠Pa02、Sa02水平,这可能与阿米替林通过保护细胞线粒体结构和功能完整有关。3.阿米替林可抑制百草枯诱导的小鼠肺纤维化,且Caveolin-1蛋白表达受阿米替林干预的调节。阿米替林能一定程度抑制肺组织炎症并改善肺组织纤维化病理。第三部分:阿米替林通过上调Caveolin-1抑制百草枯诱导的A549细胞上皮-间质转化：目的:探索阿米替林对百草枯诱导的A549细胞发生EMT和细胞凋亡的影响,初步探究其可能的作用机制。方法:培养A549细胞。1.CCK8法检测不同剂量阿米替林（1.0、5.0、25μmol/L）作用A549细胞48h的细胞活性;不同剂量阿米替林及不同剂量百草枯（50、100、200μmol/L）处理A549细胞不同时间,提取细胞总RNA,RT-PCR法测定细胞内E-cadherin、N-cadherin表达水平。2.不同剂量阿米替林（1.0、5.0、25μmol/L）作用百草枯（lOOμmol/L）诱导的A549细胞48h,提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹法测定细胞内E-cadherin、N-cadherin、α-SMA和Caveolin-1蛋白表达水平;流式细胞仪检测不同剂量阿米替林对百草枯诱导的A549细胞凋亡率的影响。3.25μmol/L阿米替林作用于lOOμmol/L百草枯诱导的经Caveolin-I siRNA基因预转染的A549细胞48h,提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹法测定细胞内E-cadherin、N-cadherin和α-SMA蛋白表达水平;同时流式细胞仪检测A549细胞凋亡率。结果:1.不同剂量阿米替林对A549细胞活性（p=0.123）以及E-cadherin、N-cadherin表达水平均无显着影响。和对照组相比,百草枯处理后A549细胞凋亡率显着增加（15.02±0.44%vs3.76±0.29%,p<0.01）;同时,百草枯显着下降A549细胞E-cadherin并上调N-cadherin表达,两者均随着百草枯浓度的增加而明显下调或提高,差异显着。但M-PQ组和H-PQ组间分别比较E-cadherin和N-cadherin表达均无显着性差异（p=0.07&p=0.34）。2.和PQ组相比,不同浓度阿米替林显着降低了PQ诱导的A549细胞凋亡率和N-cadherin、α-SMA蛋白表达,增加了E-cadherin蛋白表达,同时阿米替林呈剂量依赖性提高A549细胞Caveolin-1蛋白表达。3.与PQ+AMT+siControl组相比,预转染Caveolin-I siRNA的A549细胞α-SMA和N-cadherin蛋白表达升高而E-cadherin蛋白表达降低,表明Caveolin-1参与EMT过程并调控E-cadherin、N-cadherin和α-SMA等EMT相关蛋白的表达。阿米替林干预百草枯诱导转染Caveolin-1 siRNA的A549细胞（即PQ+AMT+siCaveolin-1组）凋亡率较PQ+AMT+siControl组无显着性差异（p=0.604）。结论:1.25μmol/L的阿米替林对A549细胞无显着毒性。2.阿米替林呈剂量依赖性上调Caveolin-1抑制百草枯诱导A549细胞的EMT过程。3.百草枯呈浓度依赖性诱导A549细胞发生凋亡,阿米替林能下调其细胞凋亡率,但和Caveolin-1无关。
邢彦彦[2]（2020）在《猪膀胱脱细胞基质膜在大鼠卵巢自体移植中的应用与研究》文中研究表明由于恶性肿瘤发病率逐年增加,发病年龄逐渐降低以及推迟生育年龄等原因,对生育力保存的需求急剧增加。相较于卵子和胚胎冻存,卵巢组织冻存后移植能够恢复卵巢内分泌功能和生育能力,并允许多个周期受孕,是目前最有希望的女性生育力保存方法,卵巢组织冷冻保存和移植获得的婴儿诞生,是人类生殖医学的里程碑,之后,各地相继有卵巢组织移植后婴儿出生的报道,并在近两年呈指数增加,迄今为止,全世界共有约130余例婴儿由卵巢组织冷冻移植后诞生。许多学者认为卵巢组织移植可作为一种行之有效的技术应用。卵巢组织冷冻有程序化冷冻和玻璃化冷冻两种方法。程序化冷冻已在临床上用于卵子和胚胎冷冻30余年。玻璃化冷冻在卵巢组织冷冻中是否优于程序化冷冻目前尚无定论,然而其用于卵子和胚胎冷冻的优越性已经被证明。由于玻璃化冷冻具有不需要昂贵仪器、冷冻过程中无冰晶形成等优点,有光明的应用前景。在过去的十年中,许多实验研究了不同的动物模型如狗、山羊、大鼠、小鼠等卵巢组织冷冻移植情况,然而,研究结果具有较大差异,基于这些实验结果,很难估计玻璃化冷冻过程造成的卵巢组织损伤程度。除物种差异外,移植物的大小、冷冻保护剂的选择等均会对移植效果产生影响。现有的关于冷冻及移植过程中卵泡丢失率的报道结果相差悬殊,缺乏详细分析。文献报道,相较于卵巢组织冷冻复苏,卵巢组织移植过程中可能丢失的卵泡更多,其原因主要为移植物在血供重新建立前缺血缺氧,然而在卵巢移植过程中卵泡丢失的具体程度仍缺乏详尽分析。卵巢组织移植较其他生育力保存方法有不可替代的优越性,因此,有良好的临床应用前景。然而,卵巢移植过程中的大量卵泡丢失,严重制约卵巢移植技术的发展。因此,如何促进新生血管形成,及早恢复移植物血供,是移植成功的关键。猪膀胱脱细胞基质膜（Urinary Bladder Matrix,UBM）是细胞外基质膜（Extracelluar Matrix,ECM）的一种,具有完整的活体组织细胞外基质的三维超微结构,以及生长因子、糖胺聚糖、粘连蛋白等生物活性成分,其中确认与组织粘附、促结合、抗凋亡、促增殖的成分有42种,目前已在临床上用于皮肤、脂肪、肌肉等组织的修复。干细胞在缺血及损伤性疾病的治疗中应用广泛。研究表明,干细胞能够促进血管形成和组织修复。脂肪间充质干细胞来源方便、增殖力强,不具有成瘤性,使用安全。近年来,有数篇关于干细胞用于卵巢移植的研究。这些研究证实,脂肪间充质干细胞在改善卵巢移植效果方面有良好的应用前景。然而,移植后的干细胞存活率较低,这阻碍了干细胞治疗技术的推广和应用。有文献研究表明,应用合适的生物支架可以提高干细胞存活率。而UBM能促进干细胞增殖和分化,我们尝试将干细胞接种在UBM上后用于大鼠卵巢自体移植,验证应用UBM是否会增加脂肪间充质干细胞的作用,进一步改善卵巢移植效果。第一部分大鼠卵巢玻璃化冷冻及自体移植对卵巢组织的影响目的:观察大鼠卵巢玻璃化冷冻复苏及自体移植过程对卵巢组织的影响,探讨冷冻和移植操作对卵巢产生影响的作用机制。方法:SD雌性大鼠随机分为正常对照组、冷冻组、移植组,移植组大鼠将两侧卵巢组织取出,一分为二分别移植于同侧肾背膜下,冷冻组将大鼠卵巢组织玻璃化冷冻复苏,将各组卵巢组织石蜡切片并HE染色,观察卵泡形态并卵泡计数;采用Tunel荧光染色技术,观察细胞凋亡情况;免疫组化方法观察各组VEGF阳性面积比。结果:正常对照组、冷冻组及移植组分别计数卵泡1231、1077、575个,移植组减少明显,移植组形态异常卵泡数较正常对照组增加明显（P<0.05）。凋亡检测中,冷冻组和移植组凋亡率较正常对照组显着增加（P<0.05）。VEGF在3组卵巢组织中均有表达,但冷冻组及移植组表达较正常对照组减少,差异有统计学意义。结论:卵巢组织冷冻或自体移植过程中均伴有卵泡丢失、VEGF表达下降。提高移植卵巢组织的VEGF表达,可能对促进移植物血管形成、提高卵巢移植效率有积极作用。第二部分UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用目的:验证UBM能促进移植卵巢新生血管形成,减少移植组织卵泡数量的丢失,改善移植效果,探讨其促进血管生成的作用机制。方法:1.8周龄SD大鼠行卵巢自体移植,根据术中处理方法不同分为5组:正常对照组、自体移植组、自体移植+UBM（UBM组）、自体移植+VEGF组（VEGF组）、去势组,其中,正常对照组用于卵泡计数比较,去势组仅用于血清激素水平比较。在自体移植后28天,行卵巢组织HE染色,观察细胞形态、卵泡计数;术后28天,ELISA测定血清FSH、AMH水平;分别于移植后7天和28天CD31染色,观察血管生成情况;自体移植后7天,Tunel及Masson染色观察凋亡和纤维化情况。2.将第3代人脐静脉内皮细胞分为对照组和UBM组,分别接种在六孔板上,UBM组预先将UBM铺在六孔板底,观察细胞增殖情况,并于接种后第1、3、5天行CCK8实验,检测细胞增殖情况;同时进行Western-blot和RT-PCR检测,探讨UBM体外促进血管生成的作用机制。3.8周龄SD大鼠行卵巢自体移植术,依据术中处理方法不同分为自体移植组和自体移植+UBM组（UBM组）,卵巢自体移植后7天,微血管CT成像比较两组移植卵巢血管生成情况,取出卵巢组织,行Western-blot和RT-PCR检测,探讨UBM在体内促进血管生成的作用机制。结果:1.自体移植组、UBM组、VEGF组卵泡均较正常对照组减少,（P<0.05）;UBM组原始卵泡及生长卵泡数量较单纯移植组均增加;UBM组FSH显着低于自体移植组及VEGF组（P<0.05）,AMH激素水平测定结果同FSH基本一致;同单纯移植组及VEGF组相比,UBM组CD31阳性表达率显着增加（P<0.05）;Tunel染色显示,与单纯移植组相比,UBM组、VEGF组凋亡细胞均减少（P<0.05）,且UBM组凋亡率最低,差异有统计学意义（P<0.05）;Masson染色结果:与单纯移植组相比,UBM组、VEGF组相对纤维化明显减少,且UBM组纤维化面积最小,差异有统计学意义（P<0.05）。2.CCK8实验:人脐静脉内皮细胞在UBM上增殖与对照组相比无统计学差异（P>0.05）;Western-blot和RT-PCR结果提示,UBM组人脐静脉内皮细胞KDR、Notch1、Ang2表达增加;术后7天,Western-blot和RT-PCR结果提示,UBM组KDR、Notch1、Ang2表达增加。体内和体外实验均表明,UBM上调KDR、Notch1、Ang2表达,促进血管形成。结论:UBM通过上调KDR、Notch1、Ang2表达,激活血管生成信号通路,通过促进血管形成改善卵巢移植效果,值得进一步研究和推广。第三部分脂肪间充质干细胞联合UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用目的:验证脂肪间充质干细胞能促进移植卵巢新生血管形成,改善移植效果;证明应用脂肪间充质干细胞联合UBM能进一步改善卵巢移植效果。方法:1.分离并制备大鼠脂肪间充质干细胞,经成脂、成骨实验鉴定其有多向分化的能力,通过流式细胞技术对其表面抗原进行测定。2.SD大鼠行卵巢自体移植,根据术中处理方法不同分为5组:正常对照组、自体移植组、自体移植+ADMSCs组（ADMSCs组）、自体移植+ADMSCs组+UBM组（联合组）、去势组,其中,正常对照组用于卵泡计数比较,去势组仅用于血清激素水平比较。在自体移植后28天,行卵巢组织HE染色,观察细胞形态、卵泡计数;术后28天,ELISA测定血清FSH、AMH水平;分别于移植后7天和28天CD31染色,观察血管生成情况;自体移植后7天,Masson染色观察纤维化情况。结果:1.成功制备大鼠脂肪间充质干细胞。2.同单纯移植组相比,ADMSCs组原始卵泡及生长卵泡数量均增加显着（P<0.05）,联合组原始卵泡数及生长卵泡个数较ADMSCs组均增加,差异有统计学意义（P<0.05）;同自体移植组相比,ADMSCs组及联合组FSH水平显着均降低（P<0.05）,AMH激素水平测定结果同FSH基本一致;CD31结果提示:ADMSCs组、联合组新生血管数量均较单纯移植组增加;Masson染色结果:联合组纤维化面积较单纯移植组减少明显,差异有统计学意义。结论:应用脂肪间充质干细胞可改善卵巢移植效果,UBM可促进脂肪间充质干细胞在移植部位的附着、定植,ADMSCs联合UBM可显着增加移植卵巢组织血供。
张石蕾[3]（2020）在《肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体抗肝纤维化的作用及机制研究》文中认为目的:构建CPhGs脂质体,并表征其特性;考察CPhGs和CPhGs脂质体体外释放行为及体内药代动力学特征;采用体内实验,探讨CPhGs脂质体对BSA诱导的大鼠免疫性肝纤维化模型的防治作用及作用机制;采用体外实验,观察CPhGs脂质体对HSCs增殖、细胞凋亡、细胞周期及胶原分泌的影响,并进一步通过观察CPhGs脂质体对rrPDGF-BB刺激HSCs增殖的影响,从细胞和分子水平上探讨CPhGs脂质体对MAPK和FAK/PI3K/Akt信号传导通路的影响,揭示其抗肝纤维化的作用靶点,并阐明其发挥作用的分子机制。方法:（1）采用薄膜分散一次包封法、薄膜分散二次包封法、逆向蒸发法、真空冷冻干燥薄膜分散二次包封法制备CPhGs脂质体,使用透射电镜观察其形态,Malvern激光粒度分析仪测量其粒径,Zeta电位、HPLC法测量药物包封率、载药率,评价并确定其最佳制备方法。（2）以原料药为对照组,采用HPLC检测并阐明CPhGs脂质体的体外释药规律,LC-MS法测定CPhGs脂质体中松果菊苷在大鼠血浆中的血药浓度,分析药代动力学特征。（3）使用BSA建立免疫性肝纤维化大鼠模型,体内观察CPhGs脂质体及CPhGs原料药对BSA诱导的大鼠免疫性肝纤维化的影响,分析血清学指标、肝组织病理、免疫组化指标以及ECM蛋白、MAPK通路、炎症蛋白表达水平的变化,评价CPhGs脂质体抗肝纤维化的作用及可能的分子机制。（4）体外观察CPhGs脂质体对HSCs的增殖和细胞凋亡、细胞周期及对细胞活力、细胞毒性的影响,从细胞学水平阐述CPhGs脂质体抗肝纤维化的作用,研究CPhGs脂质体对rrPDGF-BB/FAK/PI3K/Akt信号通路的影响,探讨其抗肝纤维化的作用靶点,从分子水平阐明其作用机制。结果:（1）采用薄膜分散一次包封法制备的3个不同批次CPhGs脂质体包封率平均值为28.55%,载药率为2.73%;采用薄膜分散二次包封法制备的3个不同批次CPhGs脂质体包封率平均值为38.46%,载药率为3.71%;采用逆向蒸发法制备的3个不同批次CPhGs脂质体包封率平均值为33.88%,载药率为3.28%,薄膜分散二次包封法制备的CPhGs脂质体包封率和载药率均是最高;在以薄膜分散二次包封法制备的CPhGs脂质体基础上,利用真空冷冻干燥法制备了CPhGs脂质体冻干粉,复溶后CPhGs脂质体冻干粉外观形态良好,冻干前后纳米粒的粒径和包封率变化均不大,说明其稳定性良好,为后续实验提供足够的样品量。（2）体外释药结果显示,最适合CPhGs和CPhGs脂质体的模型分别是一级动力学和Higuchi方程,CPhGs脂质体没有显示任何突释效应;大鼠体内的药物代谢动力学相关参数表明,CPhGs原料药和CPhGs脂质体组在相同剂量灌胃给药的情况下,CPhGs脂质体给药后Cmax明显提高（P<0.05）,CPhGs脂质体组给药0.75h之后的血药浓度均远远大于原料药组（CPhGs脂质体组35.95±3.95 ng/ml vs CPhGs原料药组27.14±0.93 ng/ml）,给予CPhGs原料药后大鼠血浆中松果菊苷的浓度较低,CL为2.07±0.39 ml/h/kg,t1/2显着延长（CPhGs脂质体组5.33±0.43h vs CPhGs原料药组2.07±0.61h,P<0.05）,MRT显着延长（CPhGs脂质体组5.87±0.32h vs CPhGs原料药组2.80±0.47h,P<0.05）,Tmax显着增加（CPhGs脂质体组1.60±0.55h vs CPhGs原料药组0.60±0.22h,P<0.05）;CPhGs脂质体组大鼠血浆中24h内药时曲线下面积较CPhGs原料药组显着提高,为原料药组的273.30%。（3）体内药效学实验结果表明,CPhGs脂质体和CPhGs原料药干预均可使肝纤维化模型大鼠肝脏、脾脏指数降低,其中CPhGs脂质体组大鼠肝脏、脾脏指数与CPhGs原料药组相比显着降低;并且,相同剂量的CPhGs脂质体组大鼠血清ALT、AST、ALP、TBIL、TBA、γ-GT、TGF-β、肝纤维化四项LN、HA、PCⅢ、IV-C以及肝组织HYP含量总体上较CPhGs原料药组有明显的下降,大鼠肝脏病理损伤情况也有所改善;免疫组化和WB实验结果均显示CPhGs脂质体组ECM标志性分子α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显着降低;与模型组、CPhGs原料药组以及空白脂质体组大鼠相比,CPhGs脂质体给药组大鼠肝组织MAPK信号通路相关蛋白p-ERK 1/2、p-JNK 1/3和p-P38以及炎症相关蛋白NF-κB、AP-1、Cox-2、HMGB1有所下调,IκBα有所上调。（4）体外药效学实验结果表明,CPhGs脂质体对HSCs的增殖抑制率随着药物浓度的升高逐渐升高,24h的IC50值为42.535μg/ml;CPhGs脂质体（29.45、14.72、7.36μg/ml）对HSCs没有明显的毒性作用（P>0.05）。流式细胞仪检测结果显示,浓度为29.45μg/ml的CPhGs脂质体可诱导HSCs晚期凋亡,晚期凋亡细胞比例高于早期凋亡细胞比例;在浓度为14.72μg/ml和7.36μg/ml的CPhGs脂质体组中,早期凋亡细胞比例要明显高于晚期凋亡细胞;细胞周期结果显示,与正常对照组相比,不同浓度的CPhGs脂质体处理HSCs后,G0/G1期细胞比例明显升高（P<0.05）,S期细胞比例明显降低（P<0.05）,G2/M期细胞比例明显降低（P<0.05）。与rrPDGF-BB组比较,不同浓度CPhGs脂质体组均可抑制rrPDGF-BB诱导的HSCs的增殖;荧光定量PCR结果显示,与rrPDGF-BB组相比,29.45、14.72、7.36μg/ml CPhGs脂质体组CollagenⅠ、α-SMA、TIMP-1的mRNA表达水平均降低,MMP-1 mRNA表达水平均增多（P<0.05）。在rrPDGF-BB刺激活化的HSCs中,CollagenⅠ和α-SMA mRNA表达水平显着提升,经三个剂量组的CPhGs脂质体干预均可以减少CollagenⅠ、α-SMA、TIMP-1的mRNA表达水平,尤其是29.45μg/ml高剂量CPhGs脂质体组效果最为明显。WB分析结果显示,与正常对照组比较,模型组CollagenⅠ、α-SMA蛋白表达水平显着升高（P<0.05）;与模型组比较,CPhGs脂质体7.36μg/ml、14.72μg/ml和29.45μg/ml三个剂量组中CollagenⅠ、α-SMA蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;三个剂量组的CPhGs脂质体处理HSCs 24小时后,HSCs中p-PI3K和p-Akt水平持续下降;和rrPDGF-BB刺激组相比,rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达组中FAK蛋白表达水平显着升高（P<0.05）,而rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达对照组中FAK蛋白表达水平无显着变化;和rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达组相比,rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达对照组和rrPDGF-BB刺激+FAK基因过表达+CPhGs脂质体给药组磷酸化PI3K和磷酸化Akt蛋白表达水平显着下降（P<0.01）。结论:采用薄膜分散二次包封法制备得到CPhGs脂质体纳米粒,形态圆整、包封率较高、粒径分布小、稳定性好;体外释药实验结果表明,本研究所制备的CPhGs脂质体纳米粒在一定程度上有缓释作用,并且明显改变了CPhGs的药物动力学行为,减缓了药物的消除时间,提高了药物的生物利用度;CPhGs脂质体能不同程度降低肝纤维化大鼠的肝、脾指数,改善血清肝功能酶指标,降低血清肝纤维化标志物含量,减轻肝细胞变性及炎性细胞浸润,抑制胶原纤维的合成与沉积,通过MAPK通路及炎症因子蛋白表达抑制肝纤维化的发展变化;CPhGs脂质体给药组能在无细胞毒性的基础上明显减少HSCs的活化,剂量依赖性地抑制rrPDGF-BB刺激的HSCs的细胞增殖,能通过PDGF/FAK/PI3K/Akt通路对rrPDGF-BB刺激的HSCs中ECM蛋白表达产生调控。研究结果为CPhGs脂质体纳米粒在抗肝纤维化方面的应用提供了科学依据。
雷程[4]（2020）在《去氢骆驼蓬碱诱导NRK细胞及人结肠癌细胞自噬的研究》文中研究说明目的:结肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病机制已有较多的研究,但仍不十分明了,需要继续探索并寻找新的治疗手段。近年来,自噬在结肠癌发生发展中的作用日益受到关注,天然药物单体成分通过自噬途径起到抗肿瘤作用的研究也越来越深入。p62蛋白是一个参与自噬的关键蛋白,深入研究p62蛋白以及自噬与结肠癌的关系,有助于阐明结肠癌发病机制,寻找新的治疗策略。骆驼蓬是具有新疆地域特色的维吾尔医传统药材,从中提取的骆驼蓬总生物碱及去氢骆驼蓬碱具有丰富的生物学活性,探讨其对细胞的自噬诱导作用及分子机制,对开发新的抗结肠癌的治疗药物具有积极的意义。方法:1)收集60例散发的结肠癌病人临床资料（包括:性别、年龄、民族、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型和分化程度、肿瘤浸润深度、淋巴结转移等）和手术标本,应用免疫组织化学和免疫印迹的方法检测自噬标志性蛋白p62在肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达;应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）的方法对标本中p62mRNA的表达水平进行检测;将癌组织中p62的表达情况与病人的临床病理学特征进行了统计分析,探讨两者之间的相关性。2)将GFP-LC3质粒转染入大鼠肾上皮细胞（NRK细胞）,构建稳定表达GFP-LC3融合蛋白的NRK细胞,对其给予不同浓度的骆驼蓬总碱及去氢骆驼蓬碱,在激光共聚焦显微镜下观察自噬体形成情况;用免疫印迹的方法检测骆驼蓬总碱及去氢骆驼蓬碱作用后的NRK细胞中自噬标志性蛋白LC3和p62的表达量,并应用自噬抑制剂bafA1与3-MA对p62的表达进行干预;用骆驼蓬总碱及去氢骆驼蓬碱作用于稳定表达LC3-GFP和Lamp-1-mCherry的双稳转NRK细胞系,对细胞内“自噬流”进行观察;应用电镜对骆驼蓬总碱及去氢骆驼蓬碱作用后的NRK细胞内形成的自噬体直接观察;检测p-p70s6k的表达,对骆驼蓬总碱和去氢骆驼蓬碱诱导NRK细胞自噬的信号通路进行验证。3)将不同浓度的去氢骆驼蓬碱作用于人结肠癌SW480细胞,观察LC3蛋白的表达,并应用bafA1与3-MA进行干预,观察LC3蛋白表达的变化;通过细胞增殖抑制实验,检测去氢骆驼蓬碱对SW480细胞增殖的抑制效果,并使用bafA1进行了干预,检测自噬在其中发挥的作用。结果:1)结肠癌组织中p62的转录及表达水平均高于癌旁正常组织（P<0.05）。p62的表达与病人性别、年龄、民族、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型和分化程度、肿瘤浸润深度无显着相关性,与淋巴结转移有关（P<0.05）,p62高表达的病人淋巴结转移率增高,提示预后不良。2)骆驼蓬总生物碱和去氢骆驼蓬碱作用于NRK细胞后自噬体形成增多,且数量随药物浓度的增加而增加;自噬体和溶酶体融合未受到抑制,细胞内自噬流通畅;自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达增加,p62表达降低,去氢骆驼蓬碱引发的自噬可被bafA1与3-MA所抑制;细胞内p-p70s6k表达未下降,提示mTOR未被抑制。3)去氢骆驼蓬碱作用于SW480细胞后,LC3-Ⅱ表达增加,且可被bafA1所抑制。与对照组相比,去氢骆驼蓬碱具有明显的抑制SW480细胞克隆形成的作用,联合使用bafA1可减弱抑制作用,提示抑制自噬减弱其抗肿瘤作用。结论:1)p62蛋白在结肠癌组织中的的转录和表达的异常增高与淋巴结转移相关,提示自噬可能参与了结肠癌的进展。2)从形态和功能两个层面证实骆驼蓬总生物碱和去氢骆驼蓬碱可以诱导NRK细胞自噬活性增强。骆驼蓬总生物碱和去氢骆驼蓬碱所诱导的细胞自噬可能是非mTOR依赖的。3)去氢骆驼蓬碱可以诱导人结肠癌SW480细胞自噬,且可被巴佛洛霉素A1所抑制。去氢骆驼蓬碱具有明显的抑制SW480细胞增殖的作用,诱导自噬可能是其抗肿瘤机制之一。
周飞飞[5]（2020）在《光响应型组织黏附性水凝胶用于软组织修复再生的研究》文中认为软组织是人体内一类比较重要的组织,包括皮肤、肌肉、肌腱、韧带、软骨、血管等。软组织易发生损伤,如软骨缺损,肌肉损伤和皮肤创伤等,目前软组织损伤修复还重要依赖于自愈,尚无理想的治疗手段,这严重影响着人们的日常生活和工作。对于软组织损伤中的软骨缺损,由于软骨无血管,无神经,无淋巴且自愈能力差,可选择的治疗方法非常有限。目前临床上仅采用一些传统疗法如骨髓刺激技术和关节置换术等,但均治标不治本。严重的肌肉损伤往往伴随着不可控的出血,如果得不到及时处理,会严重威胁着病人的生命。大面积皮肤创伤（如三度烧伤和真皮层的全层缺损）也因皮肤自我修复能力有限,很难愈合。自体皮肤移植是临床上常用的用来治疗大面积皮肤创伤的方法,但往往会因为供体不足或植皮坏死而受限或失败。组织工程（支架材料,种子细胞和生物活性分子）的出现为解决软组织损伤修复难的问题提供了更好的选择,在治疗软组织损伤方面有着广阔前景。人体软组织的细胞外基质都是水凝胶状态,本课题从仿生角度针对不同类型的软组织损伤修复进行水凝胶材料研发及其功能验证。本研究的目标在于研发修复三种不同软组织的胶体材料和方法:（1）开发一种更有效和简便的修复软骨缺损的方法;（2）研发一种能够快速交联,强湿面黏附且适用于出血状态下心血管组织修复的方法;（3）胶体材料进行快速打印制备功能性活体软组织,用以解决临床供体不足问题。所以,本研究内容共分为三部分:（1）光响应型组织黏附性水凝胶用于软骨缺损修复;（2）超快速光响应型组织黏附性水凝胶用于出血状态下的心脏缺损修复;（3）3D打印超快速光响应型组织黏附性水凝胶用于皮肤缺损的复杂结构修复。1.光响应型组织黏附性水凝胶用于软骨缺损修复由于自愈能力差,关节软骨修复仍是临床治疗中的主要挑战。目前可选择治疗手段非常有限,传统疗法如骨髓刺激技术和关节置换术可有效缓解疼痛,但它们不能再生成具有正常形态和功能的健康透明软骨。因此,急需研发出一种治疗方法,可以一步实现软骨缺损的简便有效和永久性修复。受天然关节软骨的基质成分和微观结构的启发,本文中开发了一种具有强机械性能和强组织黏附性的可注射水凝胶（M-O-G）。组成水凝胶的基体材料都是天然高分子或其衍生物,类似于正常的软骨细胞外基质（ECM）。这种水凝胶表现出优异的可调机械性能（机械强度≈270kPa,可压缩性≈70%）和快速恢复能力。此外,还表现出强的组织黏附性,加强了材料与组织的整合,更加有利于界面组织的修复。体内修复实验结果表明,该水凝胶具有良好的生物相容性能够更好修复软骨缺损和促进修复组织和正常组织的界面愈合。这种水凝胶有望用于临床软骨再生和其他生物医学领域的疾病治疗。2.超快速光响应型组织黏附性水凝胶用于出血状态下的心脏缺损修复在外科手术中和严重创伤后,不可控制的出血是目前面临的一个主要问题。现有的止血胶很难控制住动脉和心脏创伤的出血,因其对表面湿润和非静止的组织黏附能力弱。本文中研发出了 一种模拟细胞外基质（ECM）成分的光响应性组织黏附水凝胶（GelMA/HA-NB）。在紫外光照射后,这种基质水凝胶可以快速成胶,黏附在动脉和心脏上,封堵住出血口,可承受高达290mmHg的压力,显着大于正常的血压（收缩压60-160mmHg）。最重要的是,这种水凝胶可以封堵长度为4～5 mm伤口的猪颈动脉高压出血,也可以封堵直径6mm心脏穿刺大出血,用这种水凝胶进行止血处理后的猪依旧可以正常生存。以上结果表明这种水凝胶具有良好的止血性能,并且胶体本身可以作为生物材料支架引导组织修复再生,与目前临床胶体产品比较具有显着的性能优势。3.3D打印超快速光响应型组织黏附性水凝胶用于皮肤缺损的复杂结构修复由于缺乏合适的机械性能和生物活性功能,对于现有的生物打印技术来说,制备适合植入的人造器官仍然是一大挑战。此外,无法构建具有相互贯穿孔道的3D支架结构来进行远程大规模物质运输,也限制了 3D打印的临床应用。本文中提出了一种高效的方法,结合仿生光固化生物墨水,功能性细胞以及基于数字光处理（DLP）的3D打印技术来制备具有物理防御和合适机械性能的功能性活体皮肤（FLS）。FLS具有相互贯穿的孔道,可促进细胞迁移,增殖和新生组织形成。仿生光固化生物墨水GelMA/HA-NB,由甲基丙烯酰化明胶（GelMA）和N-（2-氨基乙基）-4-（4-（羟甲基）-2-甲氧基-5-亚硝基苯氧基）丁酰胺（NB）连接的透明质酸组成（HA-NB）,已证明其具有快速的成胶动力学,可调的机械性能,良好的生物相容性和组织黏附力。将人皮肤成纤维细胞（HSF）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）精准打印在FLS中,该方法快速,具有高细胞活力,模拟天然皮肤生理结构来设计仿生皮肤模型,能有效促进新血管形成和皮肤再生。由于其合适的机械性能和组织黏附性,该人造仿生皮肤易于植入并固定在伤口处。另外,体内研究表明仿生皮肤在皮肤刺激试验中具有实时防御功能,在大型动物体内可以显着促进皮肤的完美修复。这项研究为未来的临床应用提供了 一种快速有效,批量生产功能性仿生器官的方法。
张田慧[6]（2019）在《活性氧响应性高分子材料和多功能可注射水凝胶用于脊髓损伤治疗》文中进行了进一步梳理脊髓损伤（SCI）可引起患者严重的神经功能障碍或永久性残疾。治疗脊髓损伤的研究大致可分为两个主要领域:神经保护和神经再生。神经保护疗法侧重于阻止继发性损伤的进一步发展,而神经再生疗法则侧重于通过修复断裂的脊髓神经回路来恢复受损或失去的功能。大量的研究报告显示活性氧（ROS）在脊髓损伤后过量产生,并在继发性损伤的级联反应中发挥关键性作用,清除ROS可以防止或减轻SCI后的继发性损伤。为此,本论文首先设计合成了一系列ROS响应性的高分子材料,并研究其氧化响应性性质及用作活性氧响应性药物载体的潜力。将其中一种活性氧响应性的材料制备成脂质聚合物纳米粒子探索其脊髓损伤后清除ROS的神经保护治疗效果。同时,针对脊髓损伤修复过程中存在的多重再生障碍,设计、制备了一种同时担载神经干细胞、西妥昔单抗和FTY720药物的多功能可注射水凝胶,系统研究了其在脊髓损伤后的神经再生作用。具体研究内容和主要结论如下:（1）设计合成了一种用苯硼酸频哪醇酯连接的ROS响应性PEG化脂质材料mPEG2k-PBPE-DSA。首先通过Passerini反应合成了含有苯硼酸频哪醇酯的末端带有炔基的聚乙二醇单甲醚衍生物mPEG2k-PBPE-alkynyl,然后与叠氮化双硬脂酸甘油酯（N3-DSA）通过Cu（Ⅰ）催化的点击反应,制备成具有H2O2响应性的mPEG2k-PBPE-DSA。在含有 H2O2 的水溶液中,mPEG2k-PBPE-alkynyl 可以被H2O2氧化,并且氧化程度随H2O2的浓度增加而加快。基于原位1HNMR和质谱分析,证明了 mPEG2k-PBPE-DSA的氧化断裂机理。另外,mPEG2k-PBPE-DSA可以在水溶液中自组装成稳定的纳米胶束。该胶束可以被MCF-7细胞内吞,对巨噬细胞RAW264.7有很好的生物相容性。DLS结果显示H2O2条件下mPEG2k-PBPE-DSA纳米粒子的粒径逐渐减小,证明该纳米胶束可以在H2O2存在时被氧化最终解体。此外,体外药物释放实验表明担载尼罗红模型药物的纳米粒子能够实现药物的氧化响应性控制释放。上述实验表明,mPEG2k-PBPE-DSA有望用作活性氧响应性纳米药物载体。（2）将1,4二噻烷结构引入聚氨基酸侧链,合成了一种新型ROS响应性聚氨基酸材料。首先,通过缩合反应制备1,4-二噻烷修饰的L-谷氨酸酯（DTG）,并合成相应的α-氨基-N-羧基内酸酐单体（DTGNCA）;再利用端氨基聚乙二醇单甲醚mPEG5k-NH2引发开环聚合,合成具有1,4-二噻烷侧链的聚谷氨酸嵌段共聚物mPEG-b-PDTG。该两亲性聚合物在水环境中自组装成球状纳米粒子。用DLS,红外和浊度实验研究纳米粒子的H202响应行为。结果显示,在H202水溶液中,1,4-二噻烷的硫醚结构被氧化成亚砜,从而使聚合物由两亲性变成亲水性,导致纳米粒子解体。纳米粒子的氧化速率随H202浓度的增加而加快,而无H2O2存在时,纳米粒子保持稳定。同时,体外药物释放实验表明担载尼罗红模型药物的纳米粒子能够实现药物的氧化响应性控释。上述实验表明,含1,4二噻烷侧基的聚氨基酸材料有望用作ROS响应性纳米药物载体。（3）开发了活性氧响应性脂质聚合物纳米粒子作为活性氧清除剂,以减轻急性脊髓损伤后的继发性损伤。采用简单的硫醇-炔点击聚合法制备了一种高密度硫醚基聚合物,即聚丙二醇（甲硫基）乙酸酯-乙二醇二（β-巯基丙酸酯）[poly（PMT-co-EGDM）],并用卵磷脂（lethicin）和 PEG-DSPE 的混合物进一步包封,形成活性氧响应性脂质聚合物纳米粒子,称为PELPNPs。体外实验表明该PELPNPs能清除过量产生的ROS,减轻炎症反应,保护胶质细胞和神经元免受H2O2诱导的氧化损伤。动物实验结果表明,PELPNPs通过对神经元和髓鞘的有效保护,减少了损伤面积,明显改善了 SCI大鼠的运动功能的恢复。此外,我们还对PELPNPs的作用机理进行了验证研究,而且其在体内外均表现出良好的生物相容性和生物安全性。因此,我们提出的具有ROS清除功能的脂质聚合物纳米粒子在SCI的抗氧化治疗方面具有较大的潜力。（4）用氧化葡聚糖（o-Dex）和末端肼解的四臂聚乙二醇（4-arm-PEG-NHNH2）,通过醛基和肼形成腙键作为交联点,制备出可注射的共价适应性水凝胶Gel4P-hy-D。该水凝胶快速成胶,模量和脊髓组织相似,且有一定的膨胀性和粘附性,适用于受损脊髓处的填充。我们用Gel4P-hy-D水凝胶搭载神经干细胞（NSCs）,同时加入促进NSCs向神经元分化的西妥昔单抗和抑制胶质瘢痕的药物FTY720,制备成具有多功能的可注射水凝胶（G-N-C-F）。体外和体内实验研究结果表明,西妥昔单抗和FTY720对神经再生具有协同作用。将G-N-C-F注射到急性脊髓横断损伤大鼠的损伤部位,验证其对脊髓再生和功能恢复的治疗作用。实验结果证明,植入G-N-C-F的大鼠可以增加脊髓损伤中心的神经元数量,减少胶质瘢痕的产生,促进轴突再生,从而更好的重建受损神经网络,最终有助于脊髓损伤大鼠运动功能的恢复。对比实验说明多功能的可注射水凝胶的组织修复效果优于单一功能的水凝胶。该多功能的可注射水凝胶为SCI的神经再生治疗提供了新的思路,有望用于SCI的临床研究。
李文强[7]（2019）在《PLLA/POSS/pDNAs多孔复合纳米纤维的制备及其促进血管化与组织再生的生物学评价》文中指出组织修复与再生过程中,血管化至关重要。研制一种具有类似血管结构、合适的力学强度、良好的生物相容性、可完全生物降解的促血管化材料具有重要的科学意义和良好的应用前景。1、本研究以左旋聚乳酸（PLLA）为基体材料,引入功能化的聚倍半硅氧烷（POSS）,利用溶液共混和高压静电纺丝法,将含有不同数量PLLA尾链的POSS纳米粒子与PLLA复合制备得到多孔纳米纤维,并对其力学性能和生物相容性进行了系统研究与评价。结果表明,含有8条PLLA尾链的POSS纳米粒子能够显着提高PLLA的韧性,且可大幅度提高复合纤维的力学强度。此外,8个PLLA尾链的POSS复合多孔纳米纤维能够促进人体脐静脉内皮细胞的增殖、铺展和粘附,具有较好的生物相容性。2、将含有8条PLLA尾链的POSS杂化粒子和血管生成素DNA质粒（pANG）与N-三甲基壳聚糖氯化物（TMC）的复合粒子掺入PLLA基质中,通过静电纺丝制备了一种基因活性纳米纤维,并将其用于组织修复与再生的研究中。结果显示,PLLA/POSS/pANG纳米纤维可以实现基因质粒的持续稳定性释放,且具有较高的转染效率。体外实验结果表明,PLLA/POSS/pANG活性纳米纤维可以促进细胞的增殖、铺展以及黏着斑蛋白的表达。利用大鼠皮肤烫伤模型来评价基因纤维促愈合能力,结果表明PLLA/POSS/pANG基因活性纤维可有效促进血管生成和皮肤伤口的愈合。3、为了加速伤口愈合和缺损组织修复,将pANG和碱性成纤维细胞生长因子质粒DNA（pbFGF）同时负载到PLLA/POSS中,得到PLLA/POSS/pANG/pbFGF双基因活性纳米纤维（Fab）,并将其用于治疗深度皮肤组织损伤。体外细胞实验表明,相比单基因活性纤维,Fab双基因纳米纤维表现出最高的黏着斑蛋白表达量和细胞增殖率。体内实验结果表明,Fab纳米纤维具有更好的促进新血管再生的能力。同时,Fab不仅可以有效抑制炎症反应,还可以加速伤口愈合。体内体外结果均显示,pANG和pbFGF双基因在缺损组织修复和血管再生方面具有显着高效的协同促进作用。4、为了进一步研究双基因纳米纤维对骨缺损的修复能力,制备了一种负载pANG与骨形态蛋白质粒DNA（pBMP-2）的PLLA/POSS双基因纳米纤维（pNF）。将pNF与聚乙二醇二丙烯酸酯/壳聚糖凝胶（PEGDA/CS）进行复合,得到了一种具有双基因活性的三维支架材料,并将其用于颅骨修复与再生的研究中。结果表明,复合纤维的加入不影响PEGDA/CS凝胶的机械性能。此外,将PEGDA/CS/pNF双基因纤维支架植入大鼠颅骨缺损位置12周,取得了良好的愈合效果,不仅证明了PEGDA/CS/pNF双基因支架能够诱导新骨的生长与血管再生,也证实了双基因纳米纤维可以作为一种促血管化材料应用于骨组织的修复与再生中。5、体内动态环境下实现血管化是组织修复过程中不可忽略的问题。本研究将两个靶向多肽REDV（Arg-Glu-Asp-Val）和CPP-LSN（cell-penetrating peptideslocalization signals of nuclear）修饰在两性共聚物PEI-PLMD-PEI两端并自组装形成带正电荷的纳米粒子REDV/CL-PEI-PLMD-PEI（R/CL-PPP）,通过静电作用使其与pANG结合,将其负载到PLLA/POSS多孔纤维内部从而得到靶向多孔纳米纤维（TF）和纤维束（TFB）。结果表明,流动剪切力和双靶向基因纳米粒子协同促进了基因的转染、细胞的粘附和铺展。此外,TFB纤维束对HUVECs的生长具有一定的引导作用。综上所述,PLLA/POSS/pDNAs多孔复合纳米纤维具有良好的力学性能和生物相容性,可以稳定、持续、长效地释放基因,在临床治疗缺损组织修复和血管再生方面具有较大的潜在应用价值。
黄沪涛,张平,李克勇,王洁,郑光,张雪涛[8]（2018）在《二甲基甲酰胺中毒对机体健康损害的研究进展》文中进行了进一步梳理二甲基甲酰胺（N,N-Dimethylformamide,DMF）是重要的化工原料和性能优良的溶剂,广泛应用于工业企业。DMF可经呼吸道和皮肤进入机体,造成以肝脏最为突出的,以及肾脏、心脏等多器官的损害,发生DMF急性中毒或慢性损伤。就DMF中毒的接触方式、潜伏期、各器官（系统）损害的临床表现以及中毒治疗的研究进展作一综述,以期提高临床对于二甲基甲酰胺中毒的认识。
韦佼君[9]（2018）在《聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究》文中认为药物筛选和组织修复是生物医学领域中的重要研究课题。在药物筛选方面,体外检测药物的药效和毒性是药物进入临床研究前的一个重要环节。细胞二维（2D）培养是目前常用的体外药物筛选模型,但通过该模型得到的检测结果与动物实验结果,甚至是临床实际效果相差甚远。在组织修复领域,通常采用器官移植的方式来实现组织或器官修复,而大部分替代的组织器官主要来源于器官捐献、自身组织或动物组织等。然而采用器官移植的方法修复组织,常常受限于器官供体的数量有限,移植后与宿主发生免疫排斥反应以及使用自身组织修复容易造成机体的二次伤害等。因此构建具有与组织器官相似功能结构的类组织,则能够为药物筛选提供理想的体外模型以及替代器官移植实现组织修复。因此本论文旨在一方面以短纤维作为支架培养肝细胞球体、肿瘤细胞球体以及间充质干细胞球体,用于药物筛选、类肿瘤组织模拟、软骨修复和治疗关节炎,另一方面以可注射短纤维作为药物控释载体通过瘤内注射的方式治疗肿瘤,并且实现药物的局部缓释。建立一种可靠的,肝细胞球状体大小可控的以及可适用于高通量筛选的体外肝模型用于药物筛选仍存在巨大的挑战挑战性。本论文设计将短纤维作为支架,用于制备尺寸可控的,且具有肝特异性功能和表型的肝细胞球体。短纤维的长度、半乳糖和RGD的接枝密度能够调控细胞球体的大小及功能,长度为50 μm、PSMA混纺比例为95%、半乳糖和RGD接枝密度分别为135.7±4.5 nmol/mg和14.8±0.5 pmol/mg的短纤维培养得到的肝细胞球体具有最佳的肝特异性功能表达。短纤维分布在整个细胞球体中,与肝细胞紧密地相互作用从而形成较为致密的细胞球体。与不含支架的肝细胞球体相比,在对五种药物（甲苯磺丁脲、S-华法林、咪达唑仑、睾酮和对乙酰氨基酚）代谢清除率的考察过程中,含短纤维的细胞球体作为药物模型具有更高的代谢清除率,能够更好地预测体内药物清除率,其体内体外相关值（R2）为0.886。此外,这些肝细胞球体的药物代谢能力还表现在对药物代谢酶的诱导剂和抑制剂具有高度敏感,并且在20天的培养过程中一直保持对药物的响应性,为确定药物-药物的相互作用提供了一种有效的体外模型。因此,通过与短纤维共培养得到的肝细胞球体是一种能够在体外长时间维持肝细胞功能的简便操作方法,可推广至传统的多孔板和微芯片设备中培养,后用于高通量药物筛选。肝脏能够调节葡萄糖代谢和脂代谢。利用半乳糖修饰的PSMA/PS短纤维（gSF）作为支架分别与小鼠原代肝细胞（rPH）和肝癌细胞系（HepG2）共培养获得肝细胞球体模拟肝组织用于糖脂代谢的研究。与HepG2细胞球体相比,rPH细胞球体在葡萄糖消耗、糖原合成、糖异生、对胰岛素和胰高血糖素等葡萄糖调节激素的敏感性方面,表现出较强的葡萄糖代谢能力。HepG2细胞球体则显示出比rPH细胞球体更强的胆固醇和甘油三酯合成水平。通过对磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和腺苷5’-单磷酸激活的蛋白激酶（AMPK）的活性表征,验证了上述实验结果。采用该模型研究药物的敏感性,含半乳糖修饰的短纤维肝细胞球体对升血糖药物（地塞米松）、降血糖药物（二甲双胍）、胰岛素增敏剂（吡格列酮）以及降脂药物（二甲双胍和洛伐他汀）均表现出较好的响应性。因此rPH和HepG2细胞球体可分别用作体外葡萄糖和脂质代谢研究模型,并且可用于筛选代谢紊乱疾病（如糖尿病和肥胖症等）的治疗药物。在全身性给药后,只有一小部分药物进入肿瘤,有许多障碍因素阻止药物向肿瘤内渗透。为克服这些障碍,通过在瘤内注射含抗癌药物的载药短纤维,使药物在靶点部位积累,从而达到治疗效果。制备了 5（FF-5）、20（FF-20）和50 μm（FF-50）的载HCPT短纤维,分散到2%海藻酸钠溶液中,注射性好。FF-5、FF-20和FF-50的药物释放曲线趋势相似,但纤维长度越长药物释放速度越慢。体外细胞毒性实验表明,FF-5和FF-20比FF-50会引起更高的细胞毒性和细胞凋亡率。短纤维瘤内注射小鼠H22皮下肿瘤后,长度越长的短纤维在瘤内的滞留效果更好。然而,载HCPT的纤维膜虽然在瘤内的滞留效果最好,但其抗肿瘤活性较低。与FF-5和FF-50相比,FF-20在瘤内释放HCPT在肿瘤内具有最佳的空间分布效果,这对动物存活、肿瘤生长抑制和肿瘤细胞凋亡诱导等具有显着的影响。上述结果表明肿瘤内注射载药短纤维是一种有效的治疗实体肿瘤的策略,通过调控载药短纤维在肿瘤内的滞留效果以及释放药物在肿瘤组织内的空间分布,来降低药物的全身毒性并提升治疗效果。为构建类肿瘤模型,以聚乳酸-聚乙二醇共聚物/聚环氧乙烷（PELA/PEO）混纺短纤维作为支架,携载促乳腺癌细胞系（MCF-7）增殖的17β-雌二醇（E2）药物,与细胞共培养构建MCF-7球体。PEO的含量和E2载药量会影响药物的释放速度、细胞的活力、增殖及粘附。结果表明PEO添加比例为3%、E2载药量0.01%的短纤维与MCF-7共培养6天后,即可得到直径为250 μm的成熟类恶性肿瘤细胞球体。该细胞球体在结构和因子表达上与恶性肿瘤类似,即中心细胞生长密集、内部缺氧,与恶性肿瘤的相似性较高;通过表征E-钙粘蛋白表达、恶性因子分泌、上皮-间充质转化相关基因表达等,证明该细胞球体具有恶性侵袭转移的倾向;癌症干细胞（CSC）表型基因表达和体内肿瘤构建表明该细胞球体具有较强的致瘤性。所有结果表明MCF-7球体与恶性实体瘤类似,因此可以作为体外类肿瘤模型用于新药的研发和肿瘤疾病的研究。采用组织工程的方法修复软骨缺损,将载有软骨诱导药物kartogenin（KGN）的PELA短纤维作为支架与骨髓间充质干细胞（BMSC）共培养得到有软骨分化潜能的细胞球体,为避免细胞流失,以可注射水凝胶包裹BMSC球体填充软骨缺损部位。结果表明KGN的载药浓度、水凝胶的机械性能和注射过程会影响BMSC球体的活力和分化能力,其中通过调节凝胶的浓度、反应比例以及在凝胶中添加短纤维可有效调控凝胶的机械强度。最终凝胶浓度为3%,巯基/丙烯双键（HS/Acr）反应比例为1/1.2,短纤维掺杂浓度为1%,以及KGN短纤维载药量为0.1%的复合支架在体外诱导BMSC分化成软骨细胞的效果最理想;体内缺损软骨修复结果表明,该复合凝胶携载BMSC球体治疗6周后缺损部位被大量的成熟新生软骨填充,12周后缺损部位得到了完全的修复。随后将该组织工程软骨与抗关节炎药物塞来昔布（CLX）结合并治疗骨关节炎,将CLX载入增强凝胶力学强度的短纤维上,调节药物浓度对BMSC无毒副作用;结果表明二者的协同作用能够较大程度地抑制关节炎的发展,12周后关节炎症状缓解并且病变引起的软骨缺损得到了修复。综上所述,本论文以短纤维作为可注射的药物控释载体用于瘤内注射治疗皮下肿瘤;作为体外三维培养细胞球体的支架,分别构建了肝脏、肿瘤以及软骨相关的细胞球体,可有效用于药物代谢模型、降糖降脂药物的筛选、类肿瘤的构建、软骨组织的修复和关节炎治疗;研究结果为体外药物筛选模型、器官修复和疾病治疗等提供了新思路和手段。
张宝良[10]（2018）在《脑源性线粒体对脑创伤后神经元及血管内皮细胞功能影响的初步研究》文中研究指明目的:随着现代社会大型交通工具发展,创伤性颅脑损伤（Traumatic brain inj ury,TBI）发生率逐渐增高,严重影响人们工作生活,社会影响巨大。最大限度地提高脑外伤后恢复的程度是神经外科目前临床工作努力地方向,因而探索脑创伤后神经血管单元的修复机制一直是脑外伤研究的难点和重点。近期有研究者发现神经元可以释放并转移受损的线粒体到神经元周围星形胶质细胞内被进一步处理。除此外也有报道星形胶质细胞也可以释放含有功能线粒体的囊泡进入受损神经元,促进神经元的修复。但该项研究的研究者也同时表示,因为含有线粒体囊泡不仅含有DNA、RNA等遗传物质,还含有某些重要蛋白质,所以该研究并不能完全证实线粒体本身单独的作用。因此我们设计了本课题,用以研究纯化后脑源性线粒体能否被某些脑内细胞再次摄取并利用,从而改善受体细胞的能量代谢及其相应功能,并且据此我们推测这种交换线粒体的能力可能代表着中枢神经系统内部细胞间能量传递的一种潜在模式。进而为我们寻找脑创伤后神经血管功能修复提供了一条崭新的思路。方法:（1）我们采用国际通用且稳定的胶质细胞瘤化细胞系（C6）探索其可否释放含有线粒体的囊泡,以及囊泡的功能。进一步分离细胞系来源线粒体。（2）由于细胞系来源线粒体数量有限,我们利用新鲜鼠脑分离具有活性的正常功能线粒体,通过nanosight及流式细胞术鉴定其大小功能与数量;通过percol l浓度梯度离心方法获得超纯线粒体,接着透射电子显微镜、流式细胞术等方法观察检测线粒体形态特征以及浓度;应用O2K、线粒体膜电位检测仪鉴定纯化线粒体功能及活性。（3）我们利用低氧培养箱建立神经元损伤模型及脑微血管内皮细胞损伤模型,探讨采用脑源性线粒体共孵育干预后,两种细胞的活力以及氧耗等的变化。（4）通过本实验室先进的脑皮质损伤仪（e CCI）来制备颅脑创伤小鼠模型。将纯化线粒体注射到小鼠创伤灶区域,注射之后我们检测血脑屏障伊文思蓝的渗漏情况;应用免疫组织化学荧光染色和western blot的方法检测CCI小鼠创伤灶内新生血管、细胞凋亡及血管内皮紧密连接相关蛋白等的变化,检测CCI小鼠长时程抑制（long-term depression,LTD）等改变,以及wester n blot技术揭示神经元细胞GAP以及突出蛋白Ⅰ的表达变化情况,探究脑外伤后外源线粒体对小鼠认知功能的影响。结果:采用体外培养细胞的方式获得纯化线粒体的方案,由于得率较低,大批量培养细胞导致实验过于繁琐并且极易出现细胞污染或者细胞状态不佳等,我们采用离体脑组织分离纯化线粒体。并且成功的应用percoll密度梯度离心的方法获取超纯线粒体,成功测得线粒体大小及浓度。通过透射电子显微镜、wester n blot的方法鉴定纯化分离好的线粒体;利用荧光染料metotraker对线粒体进行标记,证实神经元及内皮细胞能够摄入外源功能线粒体;体外实验证实新鲜纯化线粒体既能够促进损伤神经元活力增加以及synaptophysinⅠ及GAP的表达增高又可以增加内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、OCLN表达增。体内实验证实新鲜纯化线粒体既能够降低创伤性颅脑损伤后血脑屏障的伊文氏蓝渗透率以及脑水肿程度;又能够改善创伤灶区海马长时程抑制电生理学现象,从而改善CCI小鼠的认知功能。结论:我们采用新鲜纯化的线粒体改善脑外伤后神经元以及内皮细胞的能量代谢,改善神经元的突触可塑性,提高了脑外伤后的认知功能。中枢神经系统内部细胞之间存在通过转移线粒体可以实现能量传递的机制。由于自身线粒体获得相对容易,而且安全,相信通过进一步的基础和临床研究能够为我们打开一扇通往脑外伤康复的大门。
二、二甲基甲酰胺对体外培养大鼠肝细胞酶组织化学和电镜观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、二甲基甲酰胺对体外培养大鼠肝细胞酶组织化学和电镜观察（论文提纲范文）
（1）阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化的保护作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 第一部分 百草枯诱导的小鼠肺纤维化模型的建立 |
| 研究背景 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化的保护作用 |
| 研究背景 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 第三部分 阿米替林通过上调Caveolin-1抑制百草枯诱导的A549细胞上皮-间质转化 |
| 研究背景 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 综述: 阿米替林抗纤维化作用的实验研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和参加科研情况 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
（2）猪膀胱脱细胞基质膜在大鼠卵巢自体移植中的应用与研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 大鼠卵巢组织玻璃化冷冻及自体移植对卵巢组织的影响 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 脂肪间充质干细胞联合UBM在大鼠卵巢自体移植中的作用 |
| 前言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 综述 女性生育力保存研究进展 |
| 参考文献 |
| 论文发表与获奖情况 |
| 致谢 |
（3）肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体抗肝纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体的制备及评价研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器与材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体对BSA致大鼠肝纤维化的保护作用研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器与材料 |
| 1.2 CPhGs脂质体的制备方法 |
| 1.3 空白脂质体的制备 |
| 1.4 肝纤维化大鼠模型的建立与分组 |
| 1.5 血清肝功能指标的检测 |
| 1.6 血清TGF-β、肝纤四项及肝组织HYP检测 |
| 1.7 肝组织标本大体观 |
| 1.8 肝组织病理学检测 |
| 1.9 免疫组化 |
| 1.10 聚合酶链式反应 |
| 1.11 蛋白免疫印迹 |
| 1.12 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体对HSCs增殖、凋亡、周期的影响及分子机制研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器与材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（4）去氢骆驼蓬碱诱导NRK细胞及人结肠癌细胞自噬的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分:结肠癌组织中p62的表达及临床意义 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 内容与方法 |
| 1.3 质量控制 |
| 1.4 统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第二部分:去氢骆驼蓬碱诱导NRK细胞自噬的研究 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 内容与方法 |
| 1.3 质量控制 |
| 1.4 统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第三部分:去氢骆驼蓬碱诱导人结肠癌细胞自噬和增殖抑制的研究 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 内容与方法 |
| 1.3 质量控制 |
| 1.4 统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（5）光响应型组织黏附性水凝胶用于软组织修复再生的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 绪论 |
| 第一章 光响应型组织黏附性水凝胶用于软骨缺损修复 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验试剂和仪器 |
| 1.2.1 材料和试剂 |
| 1.2.2 实验动物 |
| 1.2.3 相关试剂的配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 合成GelMA和ODex |
| 1.3.2 合成光引发剂苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基次膦酸锂(LAP) |
| 1.3.3 傅立叶变换红外光谱(FTIR)检测合成的材料 |
| 1.3.4 制备GelMA和GelMA-ODex-Gelatin(M-O-G)水凝胶 |
| 1.3.5 扫描电镜观察分析 |
| 1.3.6 水凝胶的溶胀比测试 |
| 1.3.7 流变力学测试 |
| 1.3.8 力学性质评价 |
| 1.3.9 乳附爆破力测试 |
| 1.3.10 细胞包裹和增殖实验 |
| 1.3.11 细胞粘附实验 |
| 1.3.12 细胞划痕实验 |
| 1.3.13 体内水凝胶降解实验 |
| 1.3.14 骨软骨缺损修复实验 |
| 1.3.15 兔子膝关节样本的ICRS评估 |
| 1.3.16 Safranin-O染色 |
| 1.3.17 免疫组织化学 |
| 1.3.18 软骨修复力学测试 |
| 1.3.19 统计学分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 合成ODex和GelMA并表征 |
| 1.4.2 制备和表征GelMA和M-O-G水凝胶 |
| 1.4.3 不同浓度的GelMA和M-O-G水凝胶的力学特性 |
| 1.4.4 不同浓度的GelMA和M-O-G水凝胶的组织整合性 |
| 1.4.5 评估GelMA-75和M-O-G-75水凝胶的生物相容性和降解性 |
| 1.4.6 用GelMA-75和M-O-G-75水凝胶进行体内软骨缺损修复 |
| 1.5 讨论 |
| 第二章 超快速光响应型组织黏附性水凝胶用于出血状态下的心脏缺损修复 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验试剂和仪器 |
| 2.2.1 材料和试剂 |
| 2.2.2 实验仪器及材料 |
| 2.2.3 实验动物 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 NB和HA-NB的合成 |
| 2.3.2 GelMA的合成 |
| 2.3.3 光引发剂LAP的合成 |
| 2.3.4 不同水凝胶的制备 |
| 2.3.5 黏附机理研究 |
| 2.3.6 SEM分析 |
| 2.3.7 水凝胶溶胀率(SR)测定 |
| 2.3.8 水凝胶流变力学测试 |
| 2.3.9 黏附爆破力测试 |
| 2.3.10 黏合强度测试 |
| 2.3.11 剥离附着力测试 |
| 2.3.12 体外剪切力测试 |
| 2.3.13 压缩力学测试 |
| 2.3.14 水凝胶细胞毒性验证 |
| 2.3.15 细胞增殖实验 |
| 2.3.16 细胞黏附实验 |
| 2.3.17 水凝胶体内降解 |
| 2.3.18 水凝胶体内生物相容性评估 |
| 2.3.19 兔肝脏和动脉的体内止血 |
| 2.3.20 猪颈动脉和心脏止血实验 |
| 2.3.21 心肌酶谱分析 |
| 2.3.22 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 GelMA/HA-NB/LAP水凝胶的合成及物理表征 |
| 2.4.2 GelMA/HA-NB/LAP水凝胶的黏附力和机械强度研究 |
| 2.4.3 水凝胶与组织之间的黏附机理探究 |
| 2.4.4 评估GelMA/HA-NB/LAP水凝胶的体外生物相容性 |
| 2.4.5 评估GelMA/HA-NB/LAP水凝胶的体内降解性能和生物相容性 |
| 2.4.6 兔子的肝和股动脉出血止血 |
| 2.4.7 猪的颈动脉和心脏出血止血 |
| 2.4.8 猪的生理指标检测 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 3D打印超快速光响应型组织黏附性水凝胶用于皮肤缺损的复杂结构修复 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验试剂和仪器 |
| 3.2.1 材料和试剂 |
| 3.2.2 实验仪器及材料 |
| 3.2.3 实验动物 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 NB和HA-NB的合成 |
| 3.3.2 GelMA的合成 |
| 3.3.3 光引发剂的合成 |
| 3.3.4 不同水凝胶的制备 |
| 3.3.5 流变力学测试 |
| 3.3.6 压缩力学测试 |
| 3.3.7 基于DLP的3D打印 |
| 3.3.8 活/死染色和细胞活力测定 |
| 3.3.9 细胞迁移和增殖测定 |
| 3.3.10 体内生物相容性评估 |
| 3.3.11 皮肤刺激性分析对人造FLS防御功能的评估 |
| 3.3.12 大鼠全层皮肤缺损再生实验 |
| 3.3.13 猪全层皮肤缺损再生实验 |
| 3.3.14 组织学评估 |
| 3.3.15 透射电子显微镜(TEM)分析 |
| 3.3.16 皮肤成熟度定量 |
| 3.3.17 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 仿生生物墨水GelMA/HA-NB/LAP的力学性能表征 |
| 3.4.2 基于DLP的3D打印具有复杂结构的仿生皮肤 |
| 3.4.3 最佳仿生皮肤下层结构孔径的筛选 |
| 3.4.4 仿生皮肤支架的体外生物相容性评估 |
| 3.4.5 仿生皮肤支架对细胞迁移的影响 |
| 3.4.6 生物墨水的体内生物相容性评估 |
| 3.4.7 仿生皮肤支架在大鼠全层皮肤缺损模型中的应用 |
| 3.4.8 仿生皮肤支架在猪全层皮肤缺损模型中的应用 |
| 3.5 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 可注射水凝肢用于软组织修复再生的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 |
（6）活性氧响应性高分子材料和多功能可注射水凝胶用于脊髓损伤治疗（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 脊髓 |
| 1.2 脊髓损伤 |
| 1.3 脊髓损伤的分类和病理 |
| 1.3.1 原发性损伤和继发性损伤(二次损伤) |
| 1.3.2 脊髓损伤的病理 |
| 1.4 脊髓损伤模型 |
| 1.5 脊髓损伤的治疗手段 |
| 1.5.1 临床前研究 |
| 1.5.2 脊髓损伤的抗氧化治疗 |
| 1.5.3 纳米材料在SCI治疗中的应用 |
| 1.5.4 细胞治疗 |
| 1.5.5 作为组织工程的生物材料用于SCI治疗 |
| 1.5.6 生物材料和细胞移植结合治疗脊髓损伤 |
| 1.6 本论文的选题目的和主要研究内容 |
| 第二章 苯硼酸频哪醇酯连接的PEG化-脂质材料的合成及其用作活性氧响应性药物载体的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 材料与测试 |
| 2.2.2 mPEG_(2K)-COOH的合成 |
| 2.2.3 丙炔基异氰乙酰酰胺的合成 |
| 2.2.4 3-叠氮-1,2-丙二醇的合成 |
| 2.2.5 mPEG_(2K)-PBPE-alkynyl的合成 |
| 2.2.6 N_3-DSA的合成 |
| 2.2.7 mPEG_(2K)-PBPE-DSA的合成 |
| 2.2.8 mPEG_(2K)-PBPE- alkynyl的氧化行为 |
| 2.2.9 尼罗红标记纳米胶束的制备和尼罗红的释放实验 |
| 2.2.10 mPEG_(2K)-PBPE-DSA的临界胶束浓度(CMC)的测定 |
| 2.2.11 细胞毒性测定 |
| 2.2.12 mPEG_(2K)-PBPE-DSA胶束的细胞内吞 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 mPEG_(2K)-PBPE-alknyl的合成与表征 |
| 2.3.2 mPEG_(2K)-PBPE-alknyl在H_2O_2下的氧化 |
| 2.3.3 mPEG_(2K)-PBPE-alknyl在H_2O_2下的氧化断裂机理 |
| 2.3.4 mPEG_(2K)-PBPE-DSA的合成与表征 |
| 2.3.5 mPEG_(2K)-PBPE-DSA胶束的制备和基本性质表征 |
| 2.3.6 mPEG_(2K)-PBPE-DSA胶束的氧化响应性 |
| 2.3.7 mPEG_(2K)-PBPE-DSA胶束的内吞 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 含1,4-二噻烷侧基聚氨基酸的合成及其用作活性氧响性药物载体的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 使用仪器 |
| 3.2.3 2-羟甲基-1,4二噻烷(DTM)的合成 |
| 3.2.4 Boc-Glu(Odt)-Otbu的合成 |
| 3.2.5 2-羟甲基-1,4二噻烷酯谷氨酸(DTG)的合成 |
| 3.2.6 2-羟甲基-1,4二噻烷酯谷氨酸NCA (DTG-NCA)的合成 |
| 3.2.7 mPEG-b-PDTG的合成 |
| 3.2.8 mPEG-b-PDTG胶束的制备 |
| 3.2.9 mPEG-b-PDTG的临界胶束浓度(CMC)的测定 |
| 3.2.10 mPEG-b-PDTG胶束的氧化行为 |
| 3.2.11 DTM的氧化 |
| 3.2.12 尼罗红标记纳米胶束的制备和尼罗红的释放实验 |
| 3.2.13 细胞毒性测定 |
| 3.2.14 mPEG-b-PDTG胶束的细胞内吞 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 mPEG-b-PDTG的合成与表征 |
| 3.3.2 mPEG-b-PDTG胶束的制备和基本性质表征 |
| 3.3.3 mPEG-b-PDTG胶束的在H_2O_2下的粒径变化 |
| 3.3.4 mPEG-b-PDTG胶束的在H_2O_2下的浊度变化 |
| 3.3.5 mPEG-b-PDTG在H_2O_2下的结构变化 |
| 3.3.6 mPEG-b-PDTG胶束在H_2O_2下的尼罗红释放 |
| 3.3.7 mPEG-b-PDTG的细胞毒性 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 活性氧响应性脂质-聚合物纳米粒子用于脊髓损伤后的神经保护 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 细胞和动物 |
| 4.2.3 丙炔(甲硫基)乙酸酯(PMT)的合成 |
| 4.2.4 poly(PMT-co-EDM)的合成 |
| 4.2.5 脂质聚合物纳米粒子(PELPNPs)的制备和表征 |
| 4.2.6 PELPNPs的细胞内吞 |
| 4.2.7 poly(PMT-co-EGDM)的氧化 |
| 4.2.8 PELPNPs的ROS响应性 |
| 4.2.9 DCFH-DA法测定PELPNPs清除ROS的能力 |
| 4.2.10 H_2O_2诱导星形胶质细胞死亡 |
| 4.2.11 PELPNPs的细胞保护能力 |
| 4.2.12 诱导型一氧化氮合酶(iNOS)免疫染色的体外实验 |
| 4.2.13 体外酶联免疫吸附实验(ELISA) |
| 4.2.14 大鼠脊髓挫伤模型和分组给药 |
| 4.2.15 药代动力学 |
| 4.2.16 PELPNPs的体内分布 |
| 4.2.17 行为学评估 |
| 4.2.18 组织准备 |
| 4.2.19 免疫组化和免疫荧光 |
| 4.2.20 TEM观察脊髓的超微结构 |
| 4.2.21 脊髓内ROS水平检测 |
| 4.2.22 ELISA法检测脊髓内的炎症因子 |
| 4.2.23 PELPNPs的体外细胞毒性评价 |
| 4.2.24 PELPNPs的体内毒性评价 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 poly(PMT-co-EGDM)的制备与表征 |
| 4.3.2 PELPNPs的制备与性质表征 |
| 4.3.3 PELPNPs的H_2O_2响应性 |
| 4.3.4 DCFH-DA实验证明PELPNPs的活性氧清除能力 |
| 4.3.5 PELPNPs对细胞的保护能力 |
| 4.3.6 PELPNPs的体外抗炎实验 |
| 4.3.7 PELPNPs的药物代谢动力学和组织分布 |
| 4.3.8 PELPNPs有助于SCI大鼠的运动功能恢复 |
| 4.3.9 不同制剂组SCI大鼠脊髓的解剖特征 |
| 4.3.10 PELPNPs体内活性氧清除、抗氧化应激和抗炎作用 |
| 4.3.11 PELPNPs的生物安全性 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 可注射的水凝胶搭载神经干细胞原位移植对脊髓损伤的修复作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 材料与测试 |
| 5.2.2 4-arm-PEG-NHNH_2的合成 |
| 5.2.3 氧化葡聚糖(o-Dex)的合成 |
| 5.2.4 水凝胶的制备 |
| 5.2.5 水凝胶的动态流变学分析 |
| 5.2.6 水凝胶的微观结构 |
| 5.2.7 水凝胶的体外降解 |
| 5.2.8 水凝胶在体内降解过程及生物相容性评价 |
| 5.2.9 神经干细胞的转染 |
| 5.2.10 动物实验 |
| 5.2.11 运动功能评价 |
| 5.2.12 脊髓组织的组织学和免疫荧光分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 材料的合成 |
| 5.3.2 水凝胶的制备 |
| 5.3.3 水凝胶基本性质的表征 |
| 5.3.4 水凝胶的体外降解行为 |
| 5.3.5 水凝胶的体内降解及组织相容性评价 |
| 5.3.6 绿色荧光蛋白标记神经干细胞 |
| 5.3.7 在Gel4P-hy-D水凝胶中培养NSCs |
| 5.3.8 多功能的可注射水凝胶支架用于大鼠脊髓损伤的修复 |
| 5.3.9 大鼠运动功能评价 |
| 5.3.10 HE染色 |
| 5.3.11 NSCs在体内的分化 |
| 5.3.12 多功能的可注射水凝胶支架有助于髓鞘和轴突的生长 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 全文总结和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（7）PLLA/POSS/pDNAs多孔复合纳米纤维的制备及其促进血管化与组织再生的生物学评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 组织修复与再生的研究与进展 |
| 1.1.1 组织修复与再生概述 |
| 1.1.2 生物材料在组织修复与再生中的应用 |
| 1.1.3 生物材料在组织修复与再生应用中的难点 |
| 1.2 血管化的研究进展 |
| 1.2.1 体内血管的形成过程 |
| 1.2.2 细胞活性支架促进血管化 |
| 1.2.3 构建特殊结构的生物材料促进血管化 |
| 1.2.4 生长因子及细胞因子促进血管化 |
| 1.2.5 人工血管 |
| 1.2.6 血管化目前存在的问题 |
| 1.3 基因治疗在血管化中的应用 |
| 1.3.1 基因治疗血管化的概述 |
| 1.3.2 基因载体 |
| 1.3.3 基因载体的分类 |
| 1.3.4 靶向转染基因载体 |
| 1.4 复合纳米纤维在基因递送中的应用 |
| 1.4.1 复合纳米纤维用于pDNA递送的优势 |
| 1.4.2 基因复合纳米纤维的制备方法 |
| 1.4.3 基因活性复合纳米纤维的分类 |
| 1.4.4 基因活性纳米纤维的研究现状 |
| 1.4.5 纳米纤维作为基因传递的载体目前存在的问题 |
| 1.5 POSS改性高分子杂化材料 |
| 1.5.1 POSS的结构与特性 |
| 1.5.2 POSS改性高分子材料的研究进展 |
| 1.5.3 PLLA/POSS纳米杂化材料的研究进展 |
| 1.6 本论文研究意义及创新点 |
| 1.6.1 本论文选题的科学意义 |
| 1.6.2 本论文的研究内容 |
| 1.6.3 本论文的创新点 |
| 第二章 POSS/PLLA复合纳米纤维的制备、表征及其细胞相容性评价 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 |
| 2.2.2 POSS-OH_(32)和POSS-OH_8的合成制备方法 |
| 2.2.3 POSS-PLLA_8和POSS-PLLA_(32)的合成 |
| 2.2.4 PLLA/POSS-PLLA_(8/32)复合纳米纤维的制备与表征 |
| 2.2.5 复合纳米纤维体外细胞活性 |
| 2.2.6 纤维表面细胞形貌 |
| 2.2.7 激光共聚焦显微镜观察 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 复合物的红外分析 |
| 2.3.2 复合纳米纤维基本特征 |
| 2.3.3 复合纳米纤维的亲水性 |
| 2.3.4 复合纳米纤维的力学性质 |
| 2.3.5 复合纳米纤维的体外生物学评价 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 PLLA/POSS/pANG复合纳米纤维的基因缓释性能及其促血管化与组织修复的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验材料与仪器 |
| 3.2.2 pANG/TMC复合纳米粒子的制备与表征 |
| 3.2.3 PLLA/POSS/pANG复合多孔纳米纤维的制备 |
| 3.2.4 PLLA/POSS/pANG复合多孔纳米纤维的表征 |
| 3.2.5 PLLA/POSS/pANG体外释放基因 |
| 3.2.6 体外转染HUVECs与细胞实验 |
| 3.2.7 体内动物实验 |
| 3.2.8 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 TMC的表征 |
| 3.3.2 复合纳米纤维的表征 |
| 3.3.3 pANG的体外释放动力学 |
| 3.3.4 体外基因转染效率 |
| 3.3.5 体外细胞评价 |
| 3.3.6 体内伤口愈合 |
| 3.3.7 组织学分析 |
| 3.3.8 免疫组织化学与免疫荧光分析 |
| 3.3.9 Rt-qPCR和 Western Blot |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 双基因负载PLLA/POSS/pANG/pbFGF纳米纤维促进血管化和组织修复的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验材料与仪器 |
| 4.2.2 复合纳米纤维的制备 |
| 4.2.3 基因活性复合纤维的表征 |
| 4.2.4 复合纳米纤维对HUVECs的转染效率 |
| 4.2.5 复合纳米纤维与HUVECs的相互作用 |
| 4.2.6 体内动物实验 |
| 4.2.7 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 复合纳米纤维的表征 |
| 4.3.2 细胞在复合纳米纤维上的转染效率 |
| 4.3.3 细胞的形态、增殖和黏着斑的表达 |
| 4.3.4 伤口愈合观察 |
| 4.3.5 组织学研究 |
| 4.3.6 免疫组织化学和免疫荧光检测 |
| 4.3.7 免疫组织化学分析炎症因子 |
| 4.3.8 Rt-qPCR和蛋白质免疫印迹分析 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 PEGDA/CS/pNF基因纳米纤维复合支架促进颅骨修复的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验部分 |
| 5.2.1 PEGDA的合成与表征 |
| 5.2.2 PEGDA/CS/pNF复合支架的制备 |
| 5.2.3 复合水凝胶的性能评价 |
| 5.2.4 动物实验的分组 |
| 5.2.5 大鼠颅骨缺损模型的建立 |
| 5.2.6 影像学观察 |
| 5.2.7 组织学观察 |
| 5.2.8 免疫组织化学与免疫荧光分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 复合凝胶支架的表征 |
| 5.3.2 复合凝胶支架表面形貌分析 |
| 5.3.3 micro-CT成像与分析 |
| 5.3.4 组织学分析 |
| 5.3.5 免疫组织化学染色 |
| 5.3.6 免疫荧光染色 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 双靶向基因纳米纤维与流动剪切力协同促进内皮化和血管化的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料和方法 |
| 6.2.1 制备功能化PLLLA/POSS多孔纳米纤维 |
| 6.2.2 功能化多孔纳米纤维的表征 |
| 6.2.3 流动模型的建立 |
| 6.2.4 功能化多孔纳米纤维体外释放复合纳米粒子 |
| 6.2.5 功能化多孔纳米纤维体外转染实验 |
| 6.2.6 表征功能化多孔纳米纤维表面的细胞行为 |
| 6.2.7 血管化免疫荧光表达 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 靶向基因活性纳米纤维的制备与表征 |
| 6.3.2 靶向基因活性纤维的转染 |
| 6.3.3 靶向基因活性纳米纤维体外预成血管 |
| 6.3.4 靶向基因活性纳米纤维促血管生长因子的表达 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 全文总结及展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间取得的主要成果 |
| 致谢 |
（8）二甲基甲酰胺中毒对机体健康损害的研究进展（论文提纲范文）
| 1 DMF中毒的接触方式及潜伏期 |
| 2 DMF中毒的主要临床表现 |
| 2.1 消化系统损害 |
| 2.1.1 肝脏 |
| 2.1.2 胃肠道 |
| 2.2 泌尿系统损害 |
| 2.3 心血管系统损害 |
| 2.4 血液系统损害 |
| 2.5 生殖系统影响 |
| 2.6 其他症状 |
| 2.7 慢性中毒 |
| 2.8 DMF的潜在致癌性 |
| 3 DMF中毒的治疗 |
| 4 结论与展望 |
（9）聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 三维类组织的体外构建 |
| 1.1.1 体内组织和器官的结构特点 |
| 1.1.2 体外构建三维类组织的方法 |
| 1.1.3 体外构建三维类组织的应用 |
| 1.2 细胞球体 |
| 1.2.1 细胞球体的特点 |
| 1.2.2 细胞球体的构建方式 |
| 1.2.3 细胞球体用于药物筛选体外模型 |
| 1.2.4 细胞球体用于组织修复和细胞治疗 |
| 1.3 电纺丝纤维的生物医学应用 |
| 1.3.1 电纺纤维的特点 |
| 1.3.2 电纺纤维作为药物载体的研究现状 |
| 1.3.3 电纺纤维作为组织工程的支架 |
| 1.4 课题的立题意义和研究内容 |
| 1.4.1 研究目的和意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 论文的创新点 |
| 第二章 短纤维培养原代肝细胞球体用于体外药物筛选 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 短纤维的制备 |
| 2.1.3 短纤维表面修饰半乳糖和RGD |
| 2.1.4 短纤维的表征 |
| 2.1.5 短纤维与原代肝细胞的共培养 |
| 2.1.6 原代肝细胞球体的表征 |
| 2.1.7 原代肝细胞球体功能的测定 |
| 2.1.8 原代肝细胞球体药物代谢表征 |
| 2.1.9 药物代谢的诱导和抑制实验 |
| 2.1.10 数据统计分析 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 短纤维的表征 |
| 2.2.2 短纤维长度对肝细胞球体功能的影响 |
| 2.2.3 短纤维长度对原代肝细胞球体形貌的影响 |
| 2.2.4 半乳糖和RGD接枝密度对肝细胞球体功能的影响 |
| 2.2.5 表征原代肝细胞球体 |
| 2.2.6 原代肝细胞球体用于药物代谢研究 |
| 2.2.7 诱导剂和抑制剂对原代肝细胞球体药物代谢的影响 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 原代肝细胞和HepG2细胞球体作为体外葡萄糖和脂质代谢模型 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 短纤维的制备和表征 |
| 3.1.3 原代肝细胞和人肝癌细胞球体培养 |
| 3.1.4 肝细胞球体的表征 |
| 3.1.5 肝细胞球体的功能和活力表征 |
| 3.1.6 肝细胞球体研究葡萄糖代谢 |
| 3.1.7 肝细胞球体研究脂质代谢 |
| 3.1.8 肝细胞球状体的酶活性分析 |
| 3.1.9 肝细胞球体的激素响应和药物敏感性表征 |
| 3.1.10 肝细胞球体葡萄糖代谢和脂质代谢相关基因的表达 |
| 3.1.11 数据统计分析 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 肝细胞球体的表征 |
| 3.2.2 肝细胞球体肝特异性功能的表征 |
| 3.2.3 肝细胞球状体的葡萄糖代谢 |
| 3.2.4 肝细胞球体对葡萄糖代谢激素的响应 |
| 3.2.5 肝细胞球体的脂质代谢表征 |
| 3.2.6 肝细胞球体的PEPCK和AMPK酶活性 |
| 3.2.7 肝细胞球体对血糖调节药物和降脂药物的响应 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 瘤内注射载药短纤维的抗肿瘤效果 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 载药短纤维的制备 |
| 4.1.3 载药短纤维的表征 |
| 4.1.4 载药短纤维的体外药物释放 |
| 4.1.5 载药短纤维的细胞毒性和细胞凋亡 |
| 4.1.6 瘤内注射载药短纤维对肿瘤进行治疗 |
| 4.1.7 载药短纤维的体内抗肿瘤效果 |
| 4.1.8 药物和短纤维在组织及肿瘤内的分布 |
| 4.1.9 肿瘤组织学分析 |
| 4.1.10 数据统计分析 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 载药短纤维的表征 |
| 4.2.2 载药短纤维的体外药物释放 |
| 4.2.3 载药短纤维的细胞毒性和细胞凋亡 |
| 4.2.4 短纤维释放的药物在组织中的分布 |
| 4.2.5 纤维释放药物和载药短纤维在肿瘤中的空间分布 |
| 4.2.6 载药短纤维抑制肿瘤生长 |
| 4.2.7 载药短纤维对动物存活率和体重的影响 |
| 4.2.8 载药短纤维对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响 |
| 4.3 本章小结 |
| 第五章 体外三维培养MCF-7细胞球体构建类肿瘤模型 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 载药短纤维的制备 |
| 5.1.3 载药短纤维的表征 |
| 5.1.4 载药短纤维促肿瘤细胞增殖 |
| 5.1.5 肿瘤细胞球体的培养 |
| 5.1.6 肿瘤细胞球体的表征 |
| 5.1.7 肿瘤细胞球体的基因表达分析 |
| 5.1.8 肿瘤细胞球体的致瘤性 |
| 5.1.9 数据统计分析 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 药物浓度对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 5.2.2 载药短纤维的表征 |
| 5.2.3 载药短纤维对肿瘤细胞增殖的影响 |
| 5.2.4 肿瘤细胞球体的表征 |
| 5.2.5 肿瘤细胞球体的组织学评价 |
| 5.2.6 肿瘤细胞球体的增殖效果 |
| 5.2.7 肿瘤细胞球体恶性肿瘤因子基因的表达 |
| 5.2.8 表征肿瘤细胞球体的上皮间充质转化和癌症干细胞表型 |
| 5.2.9 肿瘤细胞球体在体内的成瘤表征 |
| 5.3 本章小结 |
| 第六章 可注射凝胶携载干细胞球体和短纤维用于软骨缺损和关节炎的治疗 |
| 6.1 实验部分 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 载药短纤维的制备 |
| 6.1.3 短纤维的表征 |
| 6.1.4 水凝胶的制备 |
| 6.1.5 可注射凝胶的表征 |
| 6.1.6 载药短纤维及凝胶包裹载药短纤维的药物释放 |
| 6.1.7 干细胞球的体外培养 |
| 6.1.8 干细胞球体的体外软骨分化 |
| 6.1.9 软骨缺损和关节炎的治疗 |
| 6.1.10 软骨缺损的修复效果和组织学评价 |
| 6.1.11 修复缺损软骨的生物化学和生物力学分析 |
| 6.1.12 检测关节炎中的炎症表达 |
| 6.1.13 数据统计分析 |
| 6.2 结果与讨论 |
| 6.2.1 水凝胶的表征 |
| 6.2.2 短纤维增强水凝胶力学强度的表征 |
| 6.2.3 水凝胶的形貌表征 |
| 6.2.4 短纤维和水凝胶性质对BMSC分化成软骨的影响 |
| 6.2.5 考察骨髓间充质干细胞体外软骨分化效果 |
| 6.2.6 缺损软骨修复效果的评估 |
| 6.2.7 修复软骨组织的生物化学和生物力学分析 |
| 6.2.8 塞来昔布体外药物释放及细胞毒性 |
| 6.2.9 关节炎中炎症的抑制效果 |
| 6.2.10 骨关节炎的治疗效果 |
| 6.3 本章小结 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（10）脑源性线粒体对脑创伤后神经元及血管内皮细胞功能影响的初步研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、线粒体囊泡以及线粒体的提取及功能的测定 |
| 1.1 线粒体囊泡以及线粒体的获得 |
| 1.1.1 对象和方法 |
| 1.1.2 统计学方法 |
| 1.1.3 结果 |
| 1.2 线粒体功能的测定 |
| 1.2.1 对象和方法 |
| 1.2.2 结果 |
| 二、外源性线粒体对神经元及内皮细胞功能的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论与小节 |
| 三、外源性线粒体对颅脑创伤后神经功能预后的影响 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 四、展望 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 线粒体迁移 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、二甲基甲酰胺对体外培养大鼠肝细胞酶组织化学和电镜观察（论文参考文献）
- [1]阿米替林对百草枯诱导的小鼠肺纤维化的保护作用和机制研究[D]. 陈建时. 山东大学, 2021(11)
- [2]猪膀胱脱细胞基质膜在大鼠卵巢自体移植中的应用与研究[D]. 邢彦彦. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [3]肉苁蓉苯乙醇总苷脂质体抗肝纤维化的作用及机制研究[D]. 张石蕾. 新疆医科大学, 2020(07)
- [4]去氢骆驼蓬碱诱导NRK细胞及人结肠癌细胞自噬的研究[D]. 雷程. 新疆医科大学, 2020(07)
- [5]光响应型组织黏附性水凝胶用于软组织修复再生的研究[D]. 周飞飞. 浙江大学, 2020(01)
- [6]活性氧响应性高分子材料和多功能可注射水凝胶用于脊髓损伤治疗[D]. 张田慧. 中国科学技术大学, 2019(02)
- [7]PLLA/POSS/pDNAs多孔复合纳米纤维的制备及其促进血管化与组织再生的生物学评价[D]. 李文强. 暨南大学, 2019(03)
- [8]二甲基甲酰胺中毒对机体健康损害的研究进展[J]. 黄沪涛,张平,李克勇,王洁,郑光,张雪涛. 职业卫生与应急救援, 2018(05)
- [9]聚合物短纤维作为可注射药物载体和细胞球培养支架的研究[D]. 韦佼君. 西南交通大学, 2018
- [10]脑源性线粒体对脑创伤后神经元及血管内皮细胞功能影响的初步研究[D]. 张宝良. 天津医科大学, 2018(01)