一、人类胚胎心血管发生发育的形态学研究（论文文献综述）
寇瑶[1]（2021）在《3nm氧化铁纳米颗粒对斑马鱼胚胎发育的毒性作用机制的研究》文中指出氧化铁纳米颗粒（ferric oxide nanoparticles,FeNPs）在生物医药领域具有广阔的应用前景,可作为药物载体、分子探针和造影剂等参与疾病治疗和临床诊断。亚五FeNPs是指粒径小于5 nm的FeNPs,特点是超小尺寸、分布窄、生物相容性好并具有超顺磁性,有广阔的应用潜力:可作为T1造影剂,提供高灵敏度肿瘤成像;在外部磁场的作用下,可靶向肿瘤组织,进行磁热治疗;也可用于细胞磁标记示踪与多模态分子影像探针构建等,且由于超小粒径的尺寸效应,可快速被肾脏和肝脏清除。为推进亚五氧化铁纳米颗粒的实际应用,我们以模式动物斑马鱼的胚胎作为研究对象,探讨了其对胚胎的发育毒性作用,对其进行生物安全评估。斑马鱼是进行脊椎动物研究的模式生物,其透明的胚胎和体外受精的受精方式对发育生物学的研究性实验提供了极大的便利,近年来荧光蛋白特异性标记的转基因斑马鱼品系的构建,进一步增强了斑马鱼作为模式生物的优势。我们以不同尺寸的6 nm和12 nm FeNPs作为参照,以斑马鱼胚胎作为研究对象,探讨了超小尺寸的3 nm FeNPs的发育毒性,主要结论如下:1、3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎活力的影响:（1）斑马鱼胚胎死亡率随着FeNPs浓度增大,作用时间增长而增加;（2）斑马鱼胚胎的死亡率与FeNPs粒径成反比,即;（3）斑马鱼胚胎总畸形率随FeNPs浓度升高而增加,随粒径减小而增加,畸形具体表现为小头畸形、小眼畸形、心包水肿、卵黄囊肿、脊椎弯曲、尾部发育异常和发育迟缓甚至发育失败;（4）3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎具有氧化损伤作用;（5）3 nm FeNPs可介导胚胎细胞的凋亡,其主要的作用部位为消化系统。2、3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎器官发育的影响:（1）FeNPs对心脏发育的影响:以心脏转基因荧光斑马鱼Tg（cmlc2:EGFP）作为对象,3 nm FeNPs对心脏的毒性作用表现在使心脏发育迟缓,心脏体积较小,心室肥大;（2）FeNPs对血管发育的影响:以血管转基因荧光斑马鱼Tg（flk1:EGFP）作为对象,3 nm FeNPs对血管的毒性作用表现在血管发育不全,脑部血管收缩,尾部静脉血管分布异常,躯干节间血管闭塞,主动脉总体收缩等血液循环系统发育异常;（3）FeNPs对肝脏发育的影响:以肝脏转基因荧光斑马鱼Tg（lfabp:m Cherry）作为对象,FeNPs暴露后的胚胎肝脏体积明显减小;（4）FeNPs对肾脏发育的影响:以肾脏转基因荧光斑马鱼Tg（wt1b:EGFP）作为对象,FeNPs暴露2 dpf后发现FeNPs对肾脏的发育毒性具体表现为前肾肾小球缩小,肾小管颈部位明显缺失,肾小管近曲小管曲状折叠消失等肾脏发育畸形;（5）FeNPs对软骨发育的影响:3 nm FeNPs暴露后的幼鱼的头部骨骼变小,舌骨小角角度呈现弧形,梅克尔骨变短,角腮骨形态紊乱,咽尺等发育不明显,胸鳍发育缺陷。3、3 nm FeNPs对斑马鱼神经肌肉和运动系统发育的影响:（1）FeNPs对神经发育的影响:以Tg（eef1a1l1:EGFP）转基因荧光鱼作为对象,发现中枢神经系统和周围神经系统明显萎缩,神经系统发育出现异常;（2）FeNPs对骨骼肌发育的影响:使用偏振光检测胚胎骨骼肌发育,发现3 nm处理组肌肉组织呈现双折射平均强度仅为对照组的42%,骨骼肌发育不全,肌纤维束紊乱;（3）斑马鱼胚胎的运动轨迹分析:在明暗交替环境下的自由游泳实验中,发现3 nm FeNPs处理的斑马鱼幼鱼的运动能力下降,游泳距离相对于对照组下降了65%,移动速度减少了82%。4、为研究3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎发育不同阶段发育毒性的分子机制,我们收集了终浓度40 mg/L 3 nm FeNPs处理的48 hpf、72 hpf、96 hpf和120 hpf的胚胎,对其进行转录组测序并分析,得到如下结果:（1）48 hpf组的胚胎眼部和感知系统的发育信号受到纳米颗粒的显着作用,并且对心脏和血管发育也有影响;（2）72 hpf组的表达差异基因集中在眼部发育和对光照的感知方面,包括神经突触、光刺激的感知、突触信号、光转导、视黄醇代谢等;（3）96 hpf时,处理组斑马鱼胚胎表达差异基因集中于感官知觉、光刺激的感知、凋亡、溶酶体、吞噬体、铁凋亡等;（4）120 hpf处理组的表达差异基因集中于铁稳态、三价铁结合、铁凋亡、细胞坏死、谷胱甘肽代谢等。5、转录组数据的加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）对上述3 nm FeNPs处理的48 hpf、72 hpf、96 hpf和120 hpf的胚胎的转录组数据进一步挖掘,筛选出关键基因:plcd1a和prkcdb。plcd1a与神经信号传导、神经传递激素、神经肌肉信号相关,影响GTPase蛋白偶联Wnt/Ca2+信号转导,从而作用于神经肌肉系统的信号传递,这与我们使用转基因荧光鱼所发现的表型一致,即3 nm FeNPs影响了胚胎的神经肌肉系统发育和运动能力;prkcdb表达量的升高会造成下游erk升高,导致ROS升高,细胞内过氧化产生,与前文结论一致,即3 nm FeNPs对胚胎活性的影响表现在对细胞的氧化胁迫和炎性反应。综上所述,本文系统研究了3 nm FeNPs的发育毒性及其作用机理,发现3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎的胚胎活性、心脏发育、血管发育、肝脏发育、肾脏发育、软骨发育、神经肌肉系统和运动能力都有影响,并在转录组水平上探讨了3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎的器官发育的分子机制。本研究对亚五氧化铁纳米颗粒的脊椎动物体内毒理学研究奠定了基础,以期推动临床研究的进行。
胡梦妍[2]（2021）在《以斑马鱼为模型研究脑心通治疗心肌病的分子机制》文中进行了进一步梳理心肌病是由各种病因引起的一组非均质性的心肌病变,是由于心脏腔室结构改变和心肌功能受损所导致的心脏功能进行性障碍,临床主要表现为心脏异常增大、心律失常及心脏收缩功能减弱、最终导致心力衰竭。心肌病常根据表型的不同可分为肥厚型心肌病、扩张型心肌病、限制型心肌病、致心律失常性右心室心肌病和未分类心肌病。脑心通（NXT）作为一种复方中药制剂,具有益气活血、化瘀通络等药理作用,可广泛应用于气滞血瘀、脉络瘀阻所引起的心慌、心悸、血脉不畅等综合症,同时还具有治疗心肌缺血、减少血小板聚集及降低血脂等多种药理作用,临床上已被广泛应用于治疗冠心病、心绞痛等多种心脑血管疾病,但其对于治疗心肌病的药物作用靶点及作用机制还未完全阐明,因此,我们通过构建斑马鱼心肌病模型,以研究NXT治疗心肌病的分子机制及药物作用靶点。本研究以斑马鱼为模型,利用心血管毒性药物特非那定（TFD）成功构建斑马鱼扩张型心肌病模型,并用NXT予以治疗。通过测量斑马鱼心囊面积、心脏窦静脉和球状动脉（SV-BA）之间的距离、胚胎心率及血流速度,发现NXT能显着恢复TFD导致的斑马鱼心率减慢,心脏异常扩大以及血流停滞等心肌病病症,表明NXT对TFD诱导的斑马鱼心肌病具有一定的治疗作用。利用Tg（cmlc2:e GFP）心脏转基因斑马鱼,通过手动碎裂解剖的方法从斑马鱼胚胎中分离出胚胎心脏,进行RNA-seq分析,以研究NXT治疗心肌病的分子机制及药物作用靶点。通过对TFD组和TFD+NXT组的转录组分析发现,共计961个差异表达基因（DGES）,其中441个基因上调,520个基因下调。通过GO分析,发现差异基因主要富集于心血管系统发育,包括心脏发育、血液循环、心肌细胞和组织发育等过程中,KEGG分析发现,差异基因在信号通路方面的富集主要集中在心肌收缩、心肌细胞肾上腺素能信号传导通路及ECM-受体相互作用途径中。RNA-seq数据分析以及q RT-PCR验证表明,NXT药物的治疗作用与心肌信号通路以及心血管发育方向密切相关。通过对斑马鱼胚胎心脏转录组的深入分析,其中,与心肌病相关并参与心脏发育生物过程的基因HEG1及其介导的HEG1-CCM通路引起了我们的关注。通过q RT-PCR验证HEG1-CCM通路,发现NXT处理后,TFD引起的HEG1-CCM通路（heg1,ccm1,ccm2,ccm2l,klf2a）基因的异常表达都得到了一定的恢复,由此猜测,HEG1-CCM通路可能是NXT治疗心肌病的作用靶点之一。为了验证这一猜想,本研究利用斑马鱼先天性心肌病模型heg1△25突变体,予以NXT处理来进一步验证。通过对斑马鱼胚胎心率、SV-BA间距、心囊面积及血流速度的测量发现,NXT可以显着恢复heg1△25突变体斑马鱼心脏异常增大、心率降低以及心脏功能障碍所引起的血流停滞。通过Tg(heg1△25;cmlc2:e GFP)心脏转基因斑马鱼和Tg(heg1△25;fik1:e GFP)血管转基因斑马鱼进一步验证NXT对heg1△25突变体斑马鱼心脏血管的恢复作用,发现NXT处理heg1△25突变体斑马鱼后,heg1△25突变体斑马鱼胚胎心脏的异常膨大、房室位置的不对称以及血管内皮细胞的异常增多都得到了明显的改善。此外,通过q RT-PCR验证发现,NXT处理后,heg1△25突变体斑马鱼心肌组织特异性标志物cmlc2、myh6、myh7以及血管标志物vegfc、scl、flt4的异常表达都恢复到正常至接近正常水平。实验结果显示,NXT对heg1△25突变体斑马鱼先天性心肌病有一定的治疗作用,HEG1-CCM信号转导可能是NXT治疗心肌病的分子靶点之一。最后,通过对NXT主要活性成分的分析,芍药苷、丹酚酸B、阿魏酸、羟基红花黄色素A和藁本内酯被确认为NXT的主要成分。其中,选择具有心脏保护、血管扩张及抑制血栓形成作用的主要成分芍药苷和丹酚酸B,单独或联合给药处理心肌病斑马鱼来进一步验证。通过对斑马鱼胚胎心率、SV-BA间距、心包面积及血流速度的测量发现,芍药苷及丹酚酸B单独或联合给药均可改善斑马鱼心肌病异常扩大的心脏、心率降低、血流减慢等症状。q RT-PCR验证发现,芍药苷及丹酚酸B单独或联合给药能修复心肌病斑马鱼心血管分子标志物的表达水平。实验结果显示,NXT的主要活性成分芍药苷和丹酚酸B对斑马鱼心肌病具有显着治疗作用。本研究通过TFD诱导的斑马鱼扩张型心肌病模型和heg1突变体斑马鱼先天性扩张型心肌病模型,发现NXT对斑马鱼心肌病具有良好的治疗作用,其治疗作用是通过调节心肌收缩通路和心脏发育过程来起到心肌和心血管保护作用,作用机制与HEG1-CCM通路有关。本研究为NXT药物作用机制的研究提供了一定的科学理论依据。
褚新月[3]（2021）在《诱导性心脏祖细胞的生成及其3D水凝胶培养体系的构建》文中提出心脏疾病是造成人类死亡的主要原因之一,其发病率仅次于癌症,特别是由于冠状动脉阻塞而导致的心肌梗死（Myocardial infarction,MI）,常造成心肌细胞（Cardiomyocytes,CMs）的不可逆损伤或死亡。由于出生后CMs的再生能力很差,目前对于MI仍无有效的根治方法。移植外源性CMs治疗MI需要大量的细胞,容易造成免疫排斥反应,且细胞来源受限。胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ESCs）和诱导性多能干细胞（Induced pluripotent stem cells,i PSCs）能够分化成为心脏细胞,但由于其体内分化方向难以控制,容易产生异质细胞,甚至引发肿瘤。采用间接谱系转化技术,将体细胞重编程为诱导性心脏祖细胞（Induced cardiac progenitor cells,iCPCs）,因其具有“自我更新”和心脏谱系细胞分化潜能,能够提供大量细胞资源、有效降低致瘤性和分化细胞异质性,具有广阔的应用前景。传统二维（Two-dimension,2D）细胞培养系统因无法精确模拟体内状态,造成大量心脏疾病研究结果无法在实验动物和临床试验中复制重现。运用细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）构建的三维（Three-dimension,3D）培养体系（例如:水凝胶）能够模拟细胞的体内微环境,更有利于开展心脏疾病的研究。壳聚糖是一种由葡萄糖胺和乙酰葡萄糖胺组成的天然多糖,具有无毒、可降解、抗菌和抗真菌等特性,有望降低ECM引入的污染问题,并提升水凝胶的稳定性。因此,本研究通过过表达五种心脏转录因子（Gata4、Nkx2.5、Tbx5、Baf60c和Mesp1）,将人胚肾293T细胞（Human embryonic kidney 293T cells,HEK-293T细胞）重编程成为iCPCs;应用胶原蛋白、壳聚糖和ECM构建出3D水凝胶细胞培养体系,并探讨了iCPCs在该体系中的细胞行为和诱导分化特性,为心脏疾病的机理研究、药物筛选、模型构建和细胞治疗等奠定了基础。试验一iCPCs的生成与鉴定应用间接谱系转化技术,通过Lipofectamine LTX介导心脏转录因子Gata4、Nkx2.5、Tbx5、Baf60c和Mesp1在HEK-293T细胞中过表达,将其重编程成为iCPCs,并通过形态学观察、免疫细胞化学染色、实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-qPCR）和诱导分化等方法对所得细胞进行鉴定。结果表明:（1）HEK-293T细胞经重编程后,所得细胞具有与心脏祖细胞（Cardiac progenitor cells,CPCs）相似的形态学特征,细胞呈圆形或椭圆形,无突起;呈现出CPCs特异性标志蛋白:Gata4、Nkx2.5和Irx4的免疫细胞化学染色阳性反应,且各自的阳性细胞率分别为61.36±1.08%、60.97±1.28%和61.73±1.18%;与HEK-293T细胞相比,iCPCs中Irx4、Tbx20、Mesp1和Nkx2.5基因的相对表达量极显着上调（P<0.01）,而Fsp1和Col5A1基因的相对表达量极显着下调（P<0.01）;（2）iCPCs经心脏谱系诱导分化液处理后,能够生成呈短圆柱形、细胞核位于细胞中央的CMs,呈多边形、细胞边缘不规则的内皮细胞（Endotheliocytes,ECs）,以及呈长梭形、无横纹的平滑肌细胞（Smooth muscle cells,SMCs）;分化细胞呈现出CMs特异性标志蛋白——Cardiac actin、ECs特异性标志蛋白—CD31或SMCs特异性标志蛋白—SM-MHC的免疫细胞化学染色阳性反应,其各自的阳性细胞率分别为49.37±84%、48.61±0.74%和47.57±0.77%;分化细胞中c Tn T和Actinin-α1（CMs标志基因）、PEACAM1（ECs的标志基因）和MYL2（SMCs的标志基因）的相对表达量分别极显着高于iCPCs对照组（P<0.01）。因此,过表达Gata4、Nkx2.5、Tbx5、Baf60c和Mesp1能够将HEK-293T细胞重编程成为CPC样细胞,所得iCPCs具备分化成为CMs、ECs和SMCs的能力。试验二iCPCs的3D水凝胶培养体系构建采用胶原蛋白、壳聚糖和ECM,按照不同体积比:4:0:3（对照组）、4:1:3（壳聚糖处理组1）、4:2:3（壳聚糖处理组2）和4:3:3（壳聚糖处理组3）制备水凝胶,通过检测其形态结构、孔隙率、溶胀度和降解率,筛选细胞回收条件,探讨水凝胶对iCPCs行为和分化的影响,旨在构建iCPCs的3D水凝胶培养体系。结果表明:（1）经扫描电子显微镜观察,不同比例组成的3D水凝胶均显示出立体网络结构。对照组水凝胶显示出较大孔径的结构,胶原蛋白分布较为疏松;壳聚糖处理组1的水凝胶呈现出较为致密的结构,孔径大小均一,表面粗糙,各孔隙相互贯通;壳聚糖处理组2和3的水凝胶表现出更小的孔径结构,胶原纤维分布杂乱无序,有大小不等的隆起;（2）壳聚糖处理组1形成水凝胶的孔隙率（99±0.30%）、溶胀度（97±0.87%）、降解率（44±0.03%）以及iCPCs的增殖倍数（58±0.24）和存活率（73±0.60%）均分别极显着高于对照组、壳聚糖处理组2和3（P<0.01）;（3）0.30%胰蛋白酶和0.25%胶原蛋白酶消化同种3D水凝胶回收的细胞数之间无显着性差异（P>0.05）,但均极显着高于0.45%胃蛋白酶处理组（P<0.01）;经不同浓度的胰蛋白酶、胶原蛋白酶和胃蛋白酶消化3D水凝胶后,壳聚糖处理组1的回收细胞数均分别极显着高于其余比例组成的3D水凝胶处理组（P<0.01）;（4）在3D水凝胶中,iCPCs及其诱导分化细胞的形态学特征与2D培养细胞无明显差异,体积稍小;与2D培养体系相比,在3D水凝胶中,iCPCs来源分化细胞:Cardiac actin+CMs、CD31+ECs和SM-MHC+SMCs的数量均极显着上升（P<0.01）,分化细胞的c Tn T、actininα1、PEACAM1和SMCs基因的相对表达量也极显着上调（P<0.01）。因此,宜采用壳聚糖处理组1的方案制备水凝胶进行iCPCs的3D培养,使用0.25%胶原蛋白酶或0.30%胰蛋白酶消化水凝胶回收细胞,3D水凝胶比2D培养体系更有利于iCPCs体外分化成为CMs、ECs和SMCs。结论:利用Lipofectamine LTX介导五种心脏转录因子（Gata4、Nkx2.5、Tbx5、Baf60c和Mesp1）的过表达,可以将HEK-293T细胞重编程成为iCPCs,所得iCPCs具备分化成为CMs、ECs和SMCs的能力;宜采用胶原蛋白、壳聚糖和ECM,按照4:1:3的比例,构建出机械性能强和稳定性高的3D水凝胶,该细胞培养体系支持iCPCs的存活和增殖行为,0.25%胶原蛋白酶或0.30%胰蛋白酶适宜用于消化水凝胶回收细胞;3D水凝胶比2D培养体系更有利于iCPCs分化成为心脏谱系细胞:CMs、ECs和SMCs。iCPCs的生成和3D水凝胶培养体系的建立为解析心脏发育、损伤和修复机制,构建心脏疾病模型,筛选和开发药物,研发细胞治疗新策略等提供了研究平台。
张晶莹[4]（2020）在《以斑马鱼胚胎为例探究低浓度砷的心脏毒性效应及机制》文中认为砷（Arsenic,As）是一种类金属元素,有剧毒,普遍分布在自然界中。近年来随着社会经济的发展,工农业生产生活向空气、土壤和水体中排放了大量含砷物质,这些来源通过各种途径汇集到水环境中,使得水体中的砷污染愈发严重,已经引起了人们的广泛关注。水体中砷主要以无机砷的形式存在,且价态主要为三价砷（AsIII）和五价砷（AsV）。目前已有大量的研究报道了高浓度砷对鱼类的危害,而关于低浓度砷对鱼类的危害鲜有报道,但现在越来越多的证据表明低浓度砷对水生生物具有一定的潜在环境风险。因此,本研究以斑马鱼早期发育阶段为研究对象探究地浓度砷对鱼类的毒性影响,以期进一步探讨和完善低浓度无机砷对水生生物生长发育的毒理学效应。实验数据显示:（1）通过急性毒性暴露实验,我们发现:暴露斑马鱼胚胎120 hpf,≥25μg L-1的AsIII明显抑制了斑马鱼的存活率（p<0.05）,而斑马鱼胚胎的畸形率在≥50μg L-1开始出现显着性增加（p<0.05）,畸形的主要的形态学变化为心包囊肿、脊柱弯曲和尾部弯曲。此外,通过观察胚胎的胎动我们发现,随着AsIII暴露浓度升高,暴露组胎动显着降低（p<0.05）。不同于AsIII,仅有50μg L-1的As V对斑马鱼的存活率表现出明显的抑制效应（p<0.05）,而处理组中胎动显着性降低,与AsIII相比基本指标的毒性相对较弱。结果表明,水环境中低浓度无机砷对斑马鱼早期发育阶段具有一定的发育毒性,且价态不同,带来的毒性也会有一定的差异。（2）通过氧化应激相关实验,我们发现:随着AsIII浓度的升高,SOD（Superoxide dismutase）活性显着性升高（p<0.05）,脂质过氧化产物MDA（Malondialdehyde）的含量随之显着增加（p<0.05）;除此之外,25μg L-1 AsIII诱导抗氧化系统相关基因Cu/Zn-SOD的mRNA表达,随后随着AsIII浓度浓度的增加表达量显着性降低（p<0.05）,同时≥75μg L-1 AsIII的暴露导致HSP70的mRNA表达显着性增加（p<0.05）。对于AsV暴露组来说,与毒性较高的AsIII暴露效果不同的是,SOD活性的显着性增加现象在≥50μg L-1时开始出现,且MDA含量的显着性增加出现不稳定的趋势表现,但是依然可以看出AsV对斑马鱼胚胎造成的氧化应激压力;在抗氧化系统相关基因表达量上,实验数据显示AsV浓度在≥25μg L-1就对Cu/Zn-SOD以及Mn-SOD产生显着性的诱导效应,对HSP70的mRNA表达造成先诱导后抑制的影响,对MT-1和MT-2的mRNA表达均呈现抑制影响。结果表明,水环境中低浓度无机砷可诱导斑马鱼早期发育阶段产生过量ROS并造成氧化损伤,破坏抗氧化系统。（3）通过对心脏相关发育指标检测发现,AsIII和AsV的暴露,均能产生心脏发育畸形,造成心率紊乱现象的出现,并诱导斑马鱼幼鱼心脏产生凋亡。随着暴露浓度的升高,两种价态处理组心脏凋亡细胞逐渐增多。除上述指标以外,心脏发育相关基因的表达均受到不同程度的抑制或激活影响。≥25μg L-1的AsIII对GATA4 mRNA的表达水平产生抑制,相反激活GATA1、Mdm2以及MMP-2的mRNA表达;而As V暴露组在≥25μg L-1时对GATA1和Mdm2的mRNA表达水平均产生先激活后抑制的影响,而抑制GATA4和MMP-2的mRNA表达。表明水环境中无机砷暴露,即使是低浓度的AsV,也会致使斑马鱼胚胎心脏发育异常,诱导其产生心脏毒性效应。（4）通过凋亡相关实验,我们发现:随着AsIII和AsV浓度的增大,Caspase-3酶活性均出现了显着性升高的现象。线粒体依赖的凋亡信号途径中,关键基因Bax、Bcl-2、Bid和Caspase-9、Caspase-3的mRNA表达水平显示出不同程度的上调,且两种价态无机砷暴露均破坏了Bcl-2/Bax的平衡;此外,AsIII诱导Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达量增加,AsV对Casepase-3以及Bax蛋白表达量均产生抑制影响,而激活Bcl-2蛋白的表达。结果表明,斑马鱼胚胎在低浓度无机砷的暴露下,心脏凋亡的发生可能是由于低浓度无机砷的暴露激活了心脏的线粒体依赖的凋亡起始通路。研究通过利用不同层次（包括个体、细胞、分子水平）的生物实验技术探讨了无机砷对斑马鱼早期发育尤其是心脏发育的毒性效应和相关机制,为进一步研究水体环境中低浓度无机砷的环境毒理学机理提供实验室数据支持。
马心蕊[5]（2020）在《溢油分散剂处理原油对海水青鳉胚胎发育的毒性效应》文中研究说明随着经济的蓬勃发展,石油作为现代社会主要的能源和材料,其开采量和运输量也越来越大。而石油可能通过多种途径进入海洋水体引发油污染,严重威胁海洋生态环境及海洋生物。为了缓解油污染造成的影响,溢油分散剂常被应用于处理海洋溢油事故。而溢油分散剂处理油污染可能会提高石油烃类化合物进入水体的浓度,进而增强了油类对海洋生物的毒性效应,故溢油分散剂的使用仍存在争议。本文选定海洋新型模式生物—海水青鳉（Orvzias melastigma）胚胎作为受试生物,采用半静态暴露的方式,研究了马瑞原油的水容组分（water-accommodated fracti on,WAF）、使用G M-2溢油分散剂后的化学增强水容组分（chemically enhanced WAF,CEWAF）0-14 dpf（day post fertilization,dpf）暴露对海水青鳉胚胎的影响。并通过致死率、孵化率、心率、形态学得分以及畸形评分探究使用溢油分散剂处理前后溢油污染对海水青鳉早期生命阶段的发育毒性效应的差异。具体研究结果如下:结果表明,WAF、CEWAF以及GM-2溢油分散剂暴露均使海水青鳉胚胎出现显着地发育延迟和发育异常。形态学得分系统结果显示鱼鳔发育、卵黄吸收及胚胎的孵化对暴露较为敏感。自10 dpf起,WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎心率呈现低稀释比组（0%-60%）促进、高稀释比组（80%和100%）抑制的影响。本研究将海水青鳉胚胎的行动分为身体尾部扭动、胸鳍摆动以及眼睛转动,三项的频率总计呈现低稀释比组减少、高稀释比组增多的趋势。而畸形评分系统结果表明卵黄吸收异常、心血管出血、心包水肿和.卵黄水肿较易于发生。100%稀释比组中,WAF、CEWAF以及GM-2暴露的海水青鳉胚胎畸形率依次为61.89±7.08%、75.17±9.81%以及43.00 ± 3.89%。暴露至14 dpf时,CEWAF的LC50为8.05 mg·L-1,LC20为1.80 mg· L-1。WAF胚胎死亡率未达50%,其LC20为2.41 mg·L-1,而GM-2暴露胚胎死亡率未达20%。通过采用紫外分光光度法测定总石油烃浓度,以及气相色谱—质谱联用技术（GC-MS）对16种优先控制多环芳烃进行检测后发现,相较于WAF,CEWAF中总石油烃浓度和多环芳烃含量都显着增加,其中3-5环的苯并蒽、苯并芘和苯并荧蒽等水溶性很小而“三致”作用较强的多环芳烃含量的增加倍数相对更为显着,分析其机制可能是溢油分散剂中的表面活性剂对原油中脂溶性较大的多环芳烃有更强的增溶作用,导致使用溢油分散剂后的CEWAF 比 WAF的生物毒性效应有所增强。研究结果可为溢油污染对海洋生物的损害评估以及溢油分散剂的使用管理提供理论基础。
奥瑞芳[6]（2020）在《利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制》文中认为目的:神经管畸形（neural tube defects,NTDs）是一种由多种因素引发的疾病,给社会和家庭带来沉重的经济和精神负担,严重影响着人口质量,但其发生机制并未完全阐明。体外全胚胎培养（Whole embryo culture,WEC）是可以实现高度模拟子宫内胚胎暴露于特定环境的一项技术,通过精准控制遗传和环境因素、精确定位神经管闭合相对狭窄的窗口期、缩小与母婴遗传相关敏感性差异等优势,为研究神经管畸形发病机制提供了便利途径。卵黄囊血循环建立早于神经系统和心血管系统形成,它的发育程度决定着胚胎发育速度,有研究表明卵黄囊发育与胚胎畸形率呈负相关,课题组拟利用WEC平台研究NTDs的发生机制,为干预神经管畸形发生提供新思路。本研究目的主要内容有:1利用小鼠体外WEC平台将E（embryo,E）7.0胎鼠体外培养5天,并在神经管闭合阶段详尽研究其形态学发生。2利用小鼠体外WEC平台分别建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制;3利用小鼠体外WEC平台建立高糖诱导NTDs模型并探讨二甲双胍干防效果及机制。方法:1将E 7.0胎鼠体外培养5天和E 8.5胎鼠体外培养2天。1.1采用乙醚麻醉大鼠,腹主动脉采血,即刻离心取上清,制备WEC所需培养基。1.2打开孕鼠腹腔取出子宫,分别提取E 7.0和E8.5胚胎,保持外胎盘锥、脏层卵黄囊、羊膜以及胚胎的完整性;对于E 10.5提取需要保持卵黄囊、胚胎以及脐带的血循环的完整性。1.3将胚胎移入培养基中,充好相应混合气体,37℃滚动无菌培养,观察胚胎卵黄囊血循环及胚胎发育情况。2应用小鼠WEC平台分别建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制。2.1提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,培养基中加入VAP 0.6 mM/ml,连续培养24h后,应用Van-Maele-Fabry评分系统对卵黄囊循环评分并记录NTDs发生率;提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,加入95%酒精6μl/ml连续培养24h,观察胚胎发育情况拍照,对卵黄囊循环评分并记录NTDs发生率;提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后培养基中分别加入0、5、10、15μM-stavudine,续培养48h,观察胚胎发育情况拍照,并对体节、头臀长、卵黄囊大小以及NTDs发生率进行记录,同时应用Van-Maele-Fabry对胚胎各器官及卵黄囊血循环进行评分。最后应用免疫组化技术以及WB在培养结束后对胚胎分别进行增殖和凋亡的定性和定量检测。2.2对丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型的卵黄囊进行组织结构、增殖与凋亡的定性与定量分析。3利用小鼠WEC平台建立高糖诱导神经管畸形模型并应用二甲双胍进行干预。3.1提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,对照培养基含葡萄糖100μg/ml（正常血清血糖浓度）,高糖处理组的培养基中加入300μg/ml葡萄糖（模仿糖尿病血清血糖浓度）,记录胚胎神经管畸形发生率,并应用免疫组化以及WB技术对卵黄囊以及胚胎头部进行PCNA和CC3定性和定量检测。3.2提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,对照培养基含葡萄糖100μg/ml,二甲双胍处理组浓度分别100μg/ml和200μg/ml,连续培养24h后记录胚胎神经管畸形发生率,评估卵黄囊直径以及血循环的发育状况。3.3提取E 8.5胚胎37℃孵育半小时后,对照培养基含葡萄糖100μg/ml,高糖处理组的培养基中加入300μg/ml葡萄糖,二甲双胍干预组加入二甲双胍浓度为100μg/ml h或200μg/ml到高糖条件的培养基中,连续培养24h,观察胚胎神经管闭合情况拍照,记录胚胎发生神经管畸形率,同时对胚胎应用WB技术进行PCNA和CC3定量检测。结果:1成功将E 7.0胚胎体外培养5天和仔细观察E 8.5体外培养两天胚胎发育变化。1.1我们详细描述了提取E 7.0、E 8.5和E 10.5小鼠胚胎的方法和制备即刻离心血清的技术,展示了E 7.0体外培养5天的胚胎每24h记录的结果;1.2 E 8.5连续培养2天的胚胎,每隔4h我们记录一次胚胎形态,有包含卵黄囊以及去除卵黄囊两种形态,同时制作了胚胎转体、神经管、前后肢芽评分图,尤其是卵黄囊血循环建立彩色评分图。2利用小鼠体外WEC平台建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制。2.1卵黄囊血循环评分结果显示:与对照组相比,E 8.5胚胎经VAP培养24h后导致胚胎卵黄囊血循环评分显着下降,外观苍白、血管网稀疏、大血管稀少,斑片状分布,胚胎发育迟缓,胚胎NTDs率升高。与对照组相比,E 8.5胚胎经酒精培养24h后胚胎卵黄囊血循环在形态学方面:血循环建立差,血管极未形成,丰富的血管树状丛未形成,斑块状分布,整体表面苍白,且评分降低,胚胎NTDs发生率升高。E 8.5胚胎在stavudine浓度分别为0、5、10、15μM续培养48h后胚胎体节、头臀长、卵黄囊大小随着浓度的增加而减少,随着处理浓度的增加而胚胎死亡率增加,并对胚胎器官进行评分。而在5μM-stavudine处理组胚胎NTDs发生率显着升高。与对照组相比,免疫组化和WB结果表明用VAP、酒精、5μM-stavudine、分别诱导NTDs胚胎均显示增殖下降,凋亡增加。2.2丙戊酸、酒精、stavudine诱导的NTDs胚胎的卵黄囊在增殖与凋亡与其诱导的NTDs胚胎变化趋势方面基本保持一致。3利用小鼠WEC平台建立高糖诱导神经管畸形模型并应用二甲双胍对高糖诱导NTDs进行干预。3.1与对照组相比,培养基内加入300μg/ml葡萄糖模仿体内高血糖状态,导致胚胎神经管畸形发生率明显增加,卵黄囊血循环评分下降。卵黄囊和胚胎的免疫组化定性研究PCNA阳性细胞数下降而CC3阳性细胞数增加,WB实验也证实了一致结果。3.2二甲双胍浓度实验表明:对照组与二甲双胍在浓度为100μg/ml时胚胎神经管延迟闭合的发生率无区别,卵黄囊直径以及血循环评分也无统计学意义的差异;在二甲双胍浓度为200μg/ml时胚胎卵黄囊直径以及血循环评分与对照组无统计学差异,但是神经管未闭合率增加,有统计学意义。3.3探索二甲双胍干预高糖诱导神经管畸形发生结果显示:高糖条件下二甲双胍浓度为100μg/ml胚胎神经管畸形发生率明显下降,且卵黄囊血循环明显改善,评分上升,WB实验结果表明二甲双胍100μg/ml治疗组胚胎PCNA和CC3表达与正常组相似,而高糖组与二甲双胍治疗组相比:PCNA含量下降,CC3含量增加。二甲双胍浓度为200μg/ml可干预高糖诱导胚胎NTDs发生,包括卵黄囊发育障碍,但是偶有心包膨大发生。结论:1成功利用WEC平台将E 7.0胚胎体外培养5天,符合相关评分标准,对E 8.5胚胎体外培养24小时详细观察胚胎发育形态学变化。2丙戊酸、酒精和stavudine通过增殖和凋亡诱导胚胎NTDs发生,且均伴有卵黄囊发育障碍,在形态学、组织结构学、增殖与凋亡方面均发生不同程度的改变。3成功建立高糖诱导胚胎神经管畸形模型,该条件下卵黄囊与NTDs胚胎均有增殖和凋亡水平的改变。二甲双胍在一定范围内不影响胚胎及其卵黄囊发育的形态学变化,浓度为100μg/ml的二甲双胍可以干预高糖诱导神经管畸形的发生和改善卵黄囊血循环障碍,在增殖与凋亡蛋白的表达水平接近正常胚胎。
谭昊[7]（2020）在《基于OCT技术的生物体心脏生理特性分析及微血管造影成像》文中指出据世界心脏联盟统计,心血管疾病已经成为当今世界上威胁人类生命健康的重大疾病之一,被普遍认为第二次卫生革命的头号敌人。心血管疾病是指心脏、微血管、动静脉等循环系统的疾病,包括心律失常、先天性心率不齐、心力衰竭、冠心病等。心率和血压作为人体重要的生理参数,能够反映心血管的功能状况。现阶段,并未有根治心血管疾病的良好方法,治疗主要依赖普通的药物管理和预防两方面。因此,为了探索治愈心血管疾病的方法,了解心血管疾病发作的机理,需要从模式生物入手,充分掌握其生长发育过程中心血管功能参数的变化。飞蝗具备其余模式生物无可比拟的优势,可成为研究心血管发育和基因功能的强劲模型。光学相干层析成像（Optical Coherence Tomography,OCT）技术是具备无创、实时、高分辨率等特点的新型成像技术。利用弱相干光的干涉特性,以及采集样品组织的后向散射光来重建样品内部结构,得到高分辨率成像。OCT技术在生物体发育中形态学成像和功能学成像均有所应用,但在昆虫领域研究较少,尤其是对于整个生命周期中心脏功能特性的监测。因此,本文使用OCT技术监测昆虫在完整发育过程中心脏功能特性的变化,对心血管疾病的工作展开提供较大的帮助。本文首次使用OCT技术观察了飞蝗在整个生命周期（胚胎期、蝗蝻期、成虫期）中心脏发育的过程,记录了不同发育时期下生理参数的变化。其次,生命节律作为生命现象的基本特征之一,使人的生命活动呈现周期性和节奏性,而生物钟和心血管的生理功能息息相关。基于此,本文对成年飞蝗的昼夜节律进行研究,心率变化基本呈现昼高夜低的现象。最后,外界温度和光照对人体的生物钟系统均会产生影响,适宜的温度和光照对可以调节人体的生命节律。因此本文对飞蝗在不同温度和光照周期条件下的生理参数变化进行监测。清晰且高分辨率的微血管造影成像对早期心血管疾病的预防与检测是极其重要的。基于此,本文对散斑方差算法作出优化,即在数据处理之前进行动态血流和静态组织分类。为了验证此算法的可行性,对裸鼠血管区域进行造影成像,并对造影成像的图像效果进行量化分析。
甘露[8]（2020）在《电离辐射诱导的斑马鱼胚胎发育毒性及苯乙双胍的辐射防护作用研究》文中研究表明随着核科学与核技术在医药卫生、工农业以及生命科学等领域的广泛应用,辐射不仅给人类带来了便利,同时也增加了人们暴露于辐射产生的风险。电离辐射可对机体造成放射性损伤,尤其是心脑血管系统的损伤。因此,加深对因辐射引起的机体损伤机制的了解,更有助于寻求合理的防护措施以及安全有效的辐射防护剂提供理论依据。本文采用斑马鱼这一新型模式生物为研究对象,探讨不同电离辐射对胚胎发育的影响,同时对辐射损伤的分子机制进行了探讨,并选用苯乙双胍进行干预,评价了其对辐射引起的斑马鱼胚胎神经发育毒性的保护作用及可能机制。本文研究发现:（1）斑马鱼胚胎对不同剂量的X射线辐照应答效应不同,低剂量的射线辐照对胚胎的发育影响不大,但高剂量（4 Gy以上）辐照导致胚胎死亡率、畸形率明显升高,自主运动能力和心率下降,对胚胎的发育造成明显影响。辐照导致胚胎细胞内ROS含量显着升高,细胞凋亡明显增加,且细胞凋亡数随着照射剂量的增大而增加。随后,我们采用RT-qPCR对凋亡相关信号通路上的重要基因（bax,bcl-2,caspase-9,caspase-3,p53,puma,Apaf-1,mdm2）的表达量进行了检测,初步探讨了辐射引起细胞凋亡的可能途径。结果显示,高剂量X射线照射导致促凋亡基因bax,caspase-9,caspase-3,p53以及puma的表达量显着升高,而抗凋亡基因bcl-2,mdm2的表达量显着下降。（2）不同的辐射类型可以诱导基因表达模式的明显差异。接下来,我们利用相同的2 Gy物理剂量照射,探讨碳离子和质子诱导的发育毒性的分子机制。此外,我们聚焦于与发育密切相关的Wnt信号通路并采用Wnt信号通路激动剂HLY78进行干预,评价Wnt信号通路在辐射引起的发育毒性中的可能作用。结果显示,碳离子辐射后,Wnt信号显着下调,而使用HLY78重新激活的Wnt信号能够缓解辐射诱导的发育毒性。然而,质子辐射后,Wnt信号并未显着下调,而HLY78对质子辐射诱导的发育毒性影响很小。这些结果说明HLY78对碳离子辐射诱导的斑马鱼胚胎发育毒性具有显着的保护作用,但对质子辐射诱导的发育毒性没有明显的作用。因此,Wnt信号可能是参与碳离子诱导的发育毒性而不是质子诱导的发育毒性的初始分子途径。（3）电离辐射引起的神经系统毒性是放射性损伤中最为严重的后果,基于前期的研究基础,我们从一系列的化合物中选取了对胚胎发育无毒性的苯乙双胍进行干预,以评价其对辐射引起的斑马鱼胚胎神经发育毒性的保护作用。结果显示,苯乙双胍能有效降低因X射线辐照引起的胚胎死亡率和畸形率的升高,同时增加辐照后胚胎及幼鱼的自主运动和游泳的能力。辐照引起胚胎细胞内氧化还原状态失衡,抗氧化酶（SOD,CAT）活性降低,MDA含量增加,同时,脑内重要的神经递质乙酰胆碱酯酶（AChE）活性降低,苯乙双胍预处理可以明显逆转这些变化的发生。我们又对与神经发育和凋亡相关的多个基因（sod2,bdnf,ache,p53,bax和bcl-2）的表达水平进行了评价,辐照引起抗凋亡基因sod2,bdnf,ache和bcl-2的表达显着下降,促凋亡基因p53和bax的表达显着升高。在蛋白水平,辐照显着上调了P53、Bax和γ-H2AX（DNA损伤的生物标志物）的表达,下调了Bcl-2和BDNF的表达,苯乙双胍预处理后明显改变了上述现象对胚胎发育起到了保护作用。说明苯乙双胍可通过抑制辐照引起的氧化应激和随后发生的细胞凋亡起到保护胚胎免受辐射引起的发育毒性。
田雨苏[9]（2020）在《壬基酚致红鲫鱼胚胎发育畸形的转录组分析及功能基因挖掘》文中研究说明壬基酚（nonylphenol,NP）是广泛存在于水体中的环境激素,能对生物体的生长发育造成影响。为了探究壬基酚对水生生物发育的影响及其机制,本研究以红鲫鱼（Carassius auratus red var.）为研究对象,观察红鲫鱼胚胎在NP胁迫下发生的形态学变化。对正常神经胚期胚胎（NCK）、正常21体节期胚胎（SCK）和暴露5μmol/LNP中发育畸形的神经胚期胚胎（NNP）、畸形21体节期胚胎（SNP）进行转录组测序。利用同源克隆及RACE技术获得影响胚胎发育候选基因的cDNA序列;使用qRT-PCR进行候选基因的表达分析,并进行候选基因甲基化检测分析。结果发现在NP胁迫下红鲫鱼胚胎出现脊柱弯曲及血栓等畸形现象。RNA-seq共得到89 166条高质量unigenes,NCK、SCK、NNP和SNP两两比较的差异表达基因共13554个。利用qRT-PCR验证了25个差异表达基因,说明了转录组测序结果可靠。挑选出候选基因Sox8和GATA1,Sox8基因cDNA序列长度为2 163 bp,编码391个氨基酸;GATA1基因的cDNA序列长度为2 730 bp,编码443个氨基酸。qRT-PCR分析结果显示:Sox8在红鲫鱼脑中表达量最高,在肝脏和垂体中表达量极低;GATA1在精巢中表达量最高,在肝脏和卵巢中表达量极低。NP对红鲫鱼胚胎中Sox8基因的表达量影响最大的时期是咽囊期,GATA1基因的表达量影响最大的时期是体节期,3μmol/L NP处理对红鲫鱼胚胎中Sox8和GATA1基因的表达量影响最大。甲基化分析结果发现,对照组中GATA1 mRNA表达与GATA1基因5’ UTR区甲基化程度显着正相关;NP处理组GATA1基因的甲基化程度高于对照组。
毛亮[10]（2020）在《γ辐射对斑马鱼胚胎生物节律的影响》文中研究说明目的:本项目通过研究不同剂量（0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy）辐射下斑马鱼胚胎个体和分子水平的生物效应,探寻斑马鱼在行为、激素水平、转录组、基因表达上的差异,探究并分析γ辐射对斑马鱼胚胎生物节律的影响和作用机制,从生物节律的角度探寻γ辐射的危害,为γ辐射生物毒性的防治提供科学依据。方法:用AB系斑马鱼作为生物模型,在斑马鱼胚胎发育至5.5小时的时候对其用生物辐照仪进行不同辐照剂量的辐照,同剂量率的情况下累积剂量分别为0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy。于不同水平下观察辐射的生物学效应。1.形态学观察:显微镜下胚胎大体形态学观察,并且计算统计72 hpf胚胎存活率、孵化率和畸形率;2.行为学指标监测:使用斑马鱼行为记录仪在幼鱼5 dpf时进行活动行为观测,记录分析其活动振幅、时相、行为周期;3.褪黑素检测:使用ELISA试剂盒于一天中不同时刻检测72 hpf胚胎褪黑素浓度;4.生物节律重点基因mRNA表达水平检测:RT-PCR技术检测不同剂量组的斑马鱼胚胎生物节律重点基因mRNA表达;5.CLOCK蛋白表达检测:Western blot检测不同剂量辐照下斑马鱼胚胎CLOCK蛋白表达。结果:1.使用生物辐照仪,以0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy剂量的γ辐射分别对发育至5.5小时的斑马鱼胚胎进行辐照后,于72 hpf时收集斑马鱼胚胎,在荧光正置显微镜下观察,进行统计和拍照。结果显示:0.1 Gy和1.0 Gy辐照下的72 hpf斑马鱼胚胎死亡率升高,0.1 Gy剂量组的斑马鱼胚胎孵化率有明显上升,而在1.0 Gy辐照下的斑马鱼胚胎畸形率有所上升,但表现为轻型症状包括尾部脊柱的弯曲和卵黄囊肿胀等。2.以0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy、的γ辐射分别对发育至5.5小时的斑马鱼胚胎进行辐照后,在斑马鱼幼鱼发育至5 dpf时进行收集,运用斑马鱼行为记录仪对斑马鱼幼鱼的活动振幅、时相、行为周期进行观测统计。结果显示:0.1 Gy和1.0 Gy剂量组的斑马鱼活动振幅降低、时相前移和周期缩短。3.以0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy的γ辐射分别对发育至5.5小时的斑马鱼胚胎进行辐照后,在不同时间点T0、T6、T12、T18分别收集发育至72 hpf的斑马鱼胚胎,每组40枚在破碎离心后使用ELISA试剂盒进行褪黑素浓度检测。结果显示:当辐射的剂量到0.1Gy和1.0 Gy时,会导致各时间点的斑马鱼胚胎的褪黑素分泌减少,也就是说一定剂量的辐照会使斑马鱼胚胎的褪黑素分泌减少,这个效果在全天不同时间都存在,并在辐照剂量为0.1 Gy和1.0 Gy时更为显着,并且减少幅度在一天中褪黑素分泌最为旺盛的晚上零点达到最高。4.以0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy的γ辐射分别对发育至5.5小时的斑马鱼胚胎进行辐照后,收集发育至72 hpf的斑马鱼胚胎,运用RT-PCR技术对斑马鱼胚胎arntl1（bmal1）、clock1a、per1b、per2、cry2、nrld2a和arntl1a的mRNA表达水平进行检测。结果显示:arntl1（bmal1）、clock1a和per1b的表达在1.0 Gy剂量的辐照下存在明显的上调,per2和cry2的表达在0.1 Gy剂量的辐照下存在明显的下调,且cry2在0.01 Gy剂量的辐照下就已存在下调的的情况,而nrld2a和arntl1a在各剂量下都没有明显的表达变化。5.以0 Gy、0.01 Gy、0.1 Gy、1.0 Gy的γ辐射分别对发育至5.5小时的斑马鱼胚胎进行辐照,在72 hpf收集各组斑马鱼胚胎,通过Western blot技术对胚胎中CLOCK蛋白的表达情况进行检测。结果显示:在0.1 Gy和1.0 Gy组的斑马鱼胚胎CLOCK蛋白表达量上调。结论:1.0.1 Gy和1.0 Gy剂量的γ辐射对斑马鱼胚胎造成确切损伤,但引起的轻微畸形或许不是死亡率增加的主要原因。2.0.1 Gy剂量的γ辐射会促进斑马鱼胚胎的孵化,低剂量的辐射应激效应能有效刺激生命过程,但这也会导致微观上的各种损害。3.1.0 Gy剂量的γ辐照会引起部分时钟基因和蛋白表达上调,影响褪黑素分泌直接导致斑马鱼行为节律紊乱,对机体健康造成损害。4.生物钟核心环路上的不同基因对γ辐射具有不同的敏感性。
二、人类胚胎心血管发生发育的形态学研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人类胚胎心血管发生发育的形态学研究（论文提纲范文）
（1）3nm氧化铁纳米颗粒对斑马鱼胚胎发育的毒性作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 纳米颗粒的概述 |
| 1.2 铁氧纳米颗粒的研究 |
| 1.2.1 铁氧纳米颗粒的特性 |
| 1.2.2 铁氧纳米颗粒在生物医药领域的应用 |
| 1.3 超小亚五铁氧纳米颗粒的研究现状 |
| 1.4 斑马鱼在毒理学研究中的应用 |
| 1.4.1 模式生物斑马鱼 |
| 1.4.2 以斑马鱼作为血管和血细胞发育毒性的研究工具 |
| 1.4.3 以斑马鱼作为神经发育毒性的研究工具 |
| 1.4.4 以斑马鱼作为肝脏及肾脏发育毒性的研究工具 |
| 1.4.5 以斑马鱼作为肝脏及肾脏发育毒性的研究工具 |
| 1.4.6 以斑马鱼作为骨骼发育毒性的研究工具 |
| 1.5 斑马鱼胚胎在纳米毒理学中的应用 |
| 1.6 转录组测序技术和加权共表达网络分析 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 第二章 不同尺寸氧化铁纳米颗粒的毒理学研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 溶液配制 |
| 2.2.4 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 不同尺寸的FeNPs制备与表征 |
| 2.3.2 FeNPs对斑马鱼胚胎的处理 |
| 2.3.3 胚胎活力统计分析 |
| 2.3.4 氧化胁迫和细胞凋亡检测 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 3 nm FeNPs的表征 |
| 2.4.2 FeNPs对斑马鱼胚胎活力的影响 |
| 2.4.3 FeNPs导致的斑马鱼胚胎的畸形率 |
| 2.4.4 FeNPs对斑马鱼胚胎的氧化胁迫作用 |
| 2.4.5 FeNPs处理斑马鱼胚胎后的凋亡检测 |
| 2.5 小结和讨论 |
| 第三章 不同尺寸FeNPs对斑马鱼器官发育的形态学影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 血红蛋白染色 |
| 3.3.2 原位杂交 |
| 3.3.3 油红染色 |
| 3.3.4 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 FeNPs对斑马鱼的心脏发育的影响 |
| 3.4.2 FeNPs对斑马鱼的血管发育的影响 |
| 3.4.3 FeNPs对斑马鱼的肝脏发育的影响 |
| 3.4.4 FeNPs对斑马鱼肾脏发育的影响 |
| 3.4.5 FeNPs对斑马鱼软骨发育的影响 |
| 3.5 小结和讨论 |
| 第四章 FeNPs对斑马鱼神经肌肉和运动系统发育的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 图像数据分析 |
| 4.3.2 行为学分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 FeNPs影响斑马鱼胚胎的神经发育 |
| 4.4.2 3 nm FeNPs影响斑马鱼胚胎骨骼肌发育 |
| 4.4.3 不同粒径FeNPs对斑马鱼自发运动的影响 |
| 4.4.4 斑马鱼胚胎的运动轨迹分析 |
| 4.5 小结和讨论 |
| 第五章 3 nm FeNPs对不同时期的斑马鱼胚胎的转录组水平的毒性分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 样品准备 |
| 5.2.2 高通量测序流程 |
| 5.2.3 RNA-Seq数据过滤与分析 |
| 5.2.4 实时定量荧光PCR |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 总RNA质检结果 |
| 5.3.2 RNA-Seq数据过滤和Reads的表达分布 |
| 5.3.3 斑马鱼胚胎发育不同时期的差异基因表达及分析 |
| 5.3.4 实时定量PCR验证数据可靠性 |
| 5.4 小结和讨论 |
| 第六章 加权共表达网络分析挖掘3 nm FeNPs对斑马鱼胚胎发育的毒性的关键基因 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 差异表达基因共表达模块的构建 |
| 6.4.2 模块内基因GO功能和KEGG pathway富集分析 |
| 6.4.3 关键hub基因的筛选 |
| 6.4.4 特定模块的共表达网络分析 |
| 6.5 小结与讨论 |
| 6.5.1 hub基因plcd1a对神经肌肉的毒性分析 |
| 6.5.2 hub基因prkcdb涉及的涉及的过氧化损伤和炎性反应 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 本文的主要结论 |
| 7.2 本文的创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 转录组测序Clean reads的数量 |
| 附录二 转录组测序Clean reads参考基因组比对 |
| 附录三 引物序列表 |
| 攻读博士学位期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）以斑马鱼为模型研究脑心通治疗心肌病的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 心血管疾病 |
| 1.1.1 心血管疾病的常见原因 |
| 1.1.2 心血管疾病-心肌病 |
| 1.2 中医药治疗心血管病的研究 |
| 1.2.1 中药治疗心血管疾病的研究 |
| 1.2.2 脑心通胶囊 |
| 1.2.3 脑心通治疗心血管疾病的研究 |
| 1.3 理想的模式动物-斑马鱼 |
| 1.3.1 斑马鱼的基本生物学特征 |
| 1.3.2 斑马鱼在心血管领域的研究与应用 |
| 1.4 高通量测序技术的应用 |
| 1.5 立题依据及研究意义 |
| 第二章 实验材料 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验耗材 |
| 2.3 实验相关材料和试剂 |
| 2.4 实验相关试剂配置 |
| 第三章 NXT对 TFD诱导的斑马鱼心肌病治疗作用的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 NXT样品的制备 |
| 3.2.2 斑马鱼培养及胚胎收集 |
| 3.2.3 斑马鱼心肌病模型的构建 |
| 3.2.4 药物处理 |
| 3.2.5 心囊面积和静脉窦-动脉球间距(SV-BA)测量 |
| 3.2.6 心率和血流速度统计 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 斑马鱼扩张型心肌病模型的构建 |
| 3.3.2 NXT治疗心肌病斑马鱼最佳浓度的筛选 |
| 3.3.3 NXT可恢复TFD诱导的斑马鱼心肌病症 |
| 3.4 实验小结与讨论 |
| 第四章 斑马鱼胚胎心脏转录组分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 药物处理 |
| 4.2.2 斑马鱼胚胎心脏的分离 |
| 4.2.3 RNA的提取 |
| 4.2.4 RNA质检 |
| 4.2.5 文库构建及高通量测序 |
| 4.2.6 数据过滤与分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 斑马鱼胚胎心脏的分离及RNA提取 |
| 4.3.2 RNA-Seq数据过滤和分析结果 |
| 4.3.3 差异分析 |
| 4.3.4 富集分析 |
| 4.4 实验小结与讨论 |
| 第五章 DCM相关基因的分析与验证 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 斑马鱼Total RNA的提取 |
| 5.2.2 cDNA合成 |
| 5.2.3 实时荧光定量PCR |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 斑马鱼心脏中与人类同源的DCM基因 |
| 5.3.2 NXT靶向节点筛选和通路验证 |
| 5.4 实验小结与讨论 |
| 第六章 NXT通过HEG1-CCM通路治疗心肌病的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 heg1~(Δ25)突变体斑马鱼心肌病模型的构建 |
| 6.2.2 heg1~(Δ25)突变体斑马鱼心肌病模型药物处理 |
| 6.2.3 心囊面积和静脉窦-动脉球间距(SV-BA)测量 |
| 6.2.4 心率和血流速度统计 |
| 6.2.5 斑马鱼Total RNA的提取 |
| 6.2.6 cDNA合成 |
| 6.2.7 实时荧光定量PCR |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 HEG1及HEG1-CCM可能是NXT治疗心肌病的分子靶点之一 |
| 6.3.2 NXT治疗heg1~(Δ25)斑马鱼先天性心肌病最佳浓度的筛选 |
| 6.3.3 NXT可恢复heg1~(Δ25)突变体斑马鱼心肌病症 |
| 6.4 实验小结与讨论 |
| 第七章 NXT主要成分对斑马鱼心肌病治疗作用的研究 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 方法 |
| 7.2.1 色谱分析条件 |
| 7.2.2 斑马鱼培养及胚胎收集 |
| 7.2.3 斑马鱼心肌病模型的构建 |
| 7.2.4 药物处理 |
| 7.2.5 心囊面积和静脉窦-动脉球间距(SV-BA)测量 |
| 7.2.6 心率和血流速度统计 |
| 7.3 实验结果 |
| 7.3.1 脑心通胶囊多指标成分含量测定 |
| 7.3.2 芍药苷及丹酚酸B可改善斑马鱼心肌病症状 |
| 7.3.3 芍药苷及丹酚酸B能恢复心肌病斑马鱼心血管分子标志物的表达水平 |
| 7.4 实验小结与讨论 |
| 总结、讨论与展望 |
| 实验结果总结 |
| 讨论 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
| 作者简介 |
（3）诱导性心脏祖细胞的生成及其3D水凝胶培养体系的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.iCMs的生成 |
| 1.1 体外重编程 |
| 1.2 体内重编程 |
| 2.iCPCs的生成 |
| 2.1 体外重编程 |
| 2.2 体内重编程 |
| 2.3 转录因子 |
| 2.3.1 Gata4 |
| 2.3.2 Nkx2.5 |
| 2.3.3 Tbx5 |
| 2.3.4 Mesp1 |
| 2.3.5 Baf60c |
| 3.壳聚糖-3D水凝胶 |
| 3.1 壳聚糖的结构和理化性质 |
| 3.2 壳聚糖的生物学特性及应用 |
| 3.3 壳聚糖-3D水凝胶在心脏组织工程中的应用 |
| 4.总结和展望 |
| 第2章 试验部分 |
| 引言 |
| 试验一 iCPCs的生成与鉴定 |
| 1.材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 主要仪器与设备 |
| 1.3 主要药品与试剂 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 2.方法 |
| 2.1 HEK-293T细胞的培养 |
| 2.1.1 HEK-293T细胞的复苏 |
| 2.1.2 HEK-293T细胞的传代培养 |
| 2.1.3 HEK-293T细胞的冻存 |
| 2.2 免疫细胞化学染色 |
| 2.3 质粒构建 |
| 2.4 质粒DNA的提取 |
| 2.5 质粒DNA的酶切验证 |
| 2.5.1 1 %琼脂糖凝胶的制备 |
| 2.5.2 样品准备 |
| 2.5.3 酶切及琼脂糖凝胶电泳检测 |
| 2.6 细胞转染 |
| 2.7 iCPCs的鉴定 |
| 2.7.1 形态学观察 |
| 2.7.2 免疫细胞化学染色 |
| 2.7.3 RT-qPCR |
| 2.8 iCPCs的体外分化和鉴定 |
| 2.8.1 形态学观察 |
| 2.8.2 免疫细胞化学染色 |
| 2.8.3 RT-qPCR |
| 2.9 数据统计分析 |
| 3.结果与分析 |
| 3.1 HEK-293T细胞的体外培养 |
| 3.1.1 形态学观察 |
| 3.1.2 免疫细胞化学染色 |
| 3.2 质粒DNA提取 |
| 3.2.1 菌液电泳 |
| 3.2.2 酶切验证 |
| 3.2.3 HEK-293T细胞的转染 |
| 3.3 iCPCs的鉴定 |
| 3.3.1 形态学观察 |
| 3.3.2 免疫细胞化学染色 |
| 3.3.3 RT-qPCR |
| 3.4 iCPCs的体外诱导分化 |
| 3.4.1 形态学观察 |
| 3.4.2 免疫细胞化学染色 |
| 3.4.3 iCPCs及其体外诱导分化所得细胞的阳性率 |
| 3.4.4 RT-qPCR |
| 4.讨论 |
| 4.1 iCPCs的体外生成 |
| 4.2 iCPCs的体外诱导分化 |
| 5.小结 |
| 试验二 iCPCs的3D水凝胶培养体系构建 |
| 1.材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 主要仪器与设备 |
| 1.3 主要药品与试剂 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 2.方法 |
| 2.1 3D水凝胶的构建及性能表征 |
| 2.1.1 3D水凝胶的制备 |
| 2.1.2 3D水凝胶支架的电镜观察 |
| 2.1.3 3D水凝胶支架孔隙度的测定 |
| 2.1.4 3D水凝胶溶胀率的测定 |
| 2.1.5 3D水凝胶体外降解率的测定 |
| 2.2 3D水凝胶的细胞培养 |
| 2.2.1 不同比例组成3D水凝胶对iCPCs增殖的影响 |
| 2.2.2 不同比例组成3D水凝胶对iCPCs存活的影响 |
| 2.2.3 3D水凝胶培养iCPCs回收条件的研究 |
| 2.3 iCPCs在3D水凝胶中的形态学观察 |
| 2.4 iCPCs在3D水凝胶中的诱导分化 |
| 2.4.1 形态学观察 |
| 2.4.2 免疫细胞化学染色 |
| 2.4.3 RT-qPCR |
| 2.5 数据统计分析 |
| 3.结果与分析 |
| 3.1 3D水凝胶支架的超微结构 |
| 3.2 3D水凝胶支架孔隙率、溶胀率和降解率的测定 |
| 3.2.1 孔隙率的测定 |
| 3.2.2 溶胀率的测定 |
| 3.2.3 降解率的测定 |
| 3.3 不同比例组成3D水凝胶对iCPCs细胞行为的影响 |
| 3.3.1 细胞增殖 |
| 3.3.2 存活率 |
| 3.4 3D水凝胶中iCPCs回收条件的研究 |
| 3.5 3D水凝胶中iCPCs的形态学观察 |
| 3.6 iCPCs在3D水凝胶中的诱导分化 |
| 3.6.1 形态学观察 |
| 3.6.2 免疫细胞化学染色 |
| 3.7 3D水凝胶中iCPCs诱导分化所得细胞的比率 |
| 3.8 RT-qPCR |
| 4.讨论 |
| 4.1 不同凝胶比例组成对3D水凝胶物理特性的影响 |
| 4.2 不同比例组成3D水凝胶对iCPCs行为的影响 |
| 4.3 3D水凝胶支架中iCPCs回收条件的研究 |
| 4.4 3D水凝胶对iCPCs诱导分化的影响 |
| 5.小结 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 附录 缩略词表 |
| 在读期间发表论文及参加课题参研情况一览表 |
| 致谢 |
（4）以斑马鱼胚胎为例探究低浓度砷的心脏毒性效应及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 砷的概述 |
| 1.1.1 砷的基本性质及来源 |
| 1.1.2 水环境中砷污染现状 |
| 1.2 无机砷的毒性及其研究现状 |
| 1.3 斑马鱼相关介绍 |
| 1.4 斑马鱼心脏发育的研究 |
| 1.5 氧化应激机制 |
| 1.6 细胞凋亡及线粒体信号凋亡通路的介绍 |
| 1.7 研究目的及意义 |
| 1.8 实验内容与技术路线 |
| 1.8.1 实验内容 |
| 1.8.2 技术路线 |
| 2 低浓度无机砷对斑马鱼胚胎发育的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器 |
| 2.2.2 斑马鱼饲养与胚胎收集 |
| 2.2.3 急性暴露实验设计 |
| 2.2.4 形态学观察 |
| 2.2.5 超氧化物歧化酶SOD活性和丙二醛MDA含量的检测 |
| 2.2.6 抗氧化系统相关基因表达量的检测 |
| 2.2.7 数据统计与分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 基础发育指标及形态学影响 |
| 2.3.2 行为学影响 |
| 2.3.3 抗氧化系统的影响 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 低浓度无机砷对斑马鱼胚胎心脏发育的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验试剂与仪器 |
| 3.2.2 急性暴露处理和样品收集 |
| 3.2.3 心脏发育表型的记录及48hpf心率的测定 |
| 3.2.4 吖啶橙染色 |
| 3.2.5 心脏发育相关基因表达量的测定 |
| 3.2.6 数据统计与分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 低浓度无机砷对心脏发育表型及心率的影响 |
| 3.3.2 低浓度无机砷对斑马鱼胚胎心脏部位凋亡情况的影响 |
| 3.3.3 低浓度无机砷对斑马鱼胚胎心脏发育相关基因表达量的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 低浓度无机砷对斑马鱼胚胎心脏凋亡通路机制的探究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 |
| 4.2.2 Caspase-3 活性的测定 |
| 4.2.3 凋亡通路相关基因表达量的检测 |
| 4.2.4 凋亡通路相关蛋白表达量的检测 |
| 4.2.5 数据统计与分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 低浓度无机砷对Caspase-3 活性的影响 |
| 4.3.2 低浓度无机砷对心脏凋亡通路相关基因表达的影响 |
| 4.3.3 低浓度无机砷对心脏凋亡通路相关基因蛋白表达的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 研究结论与展望 |
| 5.1 研究结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）溢油分散剂处理原油对海水青鳉胚胎发育的毒性效应（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 海洋石油污染的来源与现状 |
| 1.2 石油污染的迁移转化 |
| 1.3 石油污染对海洋生态环境的影响研究进展 |
| 1.4 石油污染对海洋生物的影响研究进展 |
| 1.4.1 石油污染对海洋生物毒性的影响 |
| 1.4.2 石油污染对浮游生物及水生植物的影响 |
| 1.4.3 石油污染对底栖生物的影响 |
| 1.4.4 石油污染对鱼类的影响 |
| 1.5 溢油分散剂使用与研究现状 |
| 1.5.1 溢油分散剂产品与使用情况 |
| 1.5.2 溢油分散剂的毒理学研究 |
| 1.6 海水青鳉及其胚胎在毒理学中的研究现状 |
| 1.6.1 海水青鳉及其胚胎的研究概况 |
| 1.6.2 海水青鳉及其胚胎在毒理学中应用 |
| 1.7 研究内容、目的及技术路线 |
| 1.7.1 研究内容 |
| 1.7.2 研究目的 |
| 1.7.3 技术路线 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 受试生物 |
| 2.1.2 受试油品与溢油分散剂 |
| 2.1.3 实验海水及试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 受试液的制备 |
| 2.3 海水青鳉胚胎的暴露实验 |
| 2.4 致死与亚致死形态学评估 |
| 2.5 数据分析 |
| 3 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎生长发育的影响 |
| 3.1 实验结果 |
| 3.1.1 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎GMS的影响 |
| 3.1.2 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎发育的影响 |
| 3.1.3 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎心率的影响 |
| 3.1.4 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎行动的影响 |
| 3.1.5 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎孵化的影响 |
| 3.2 讨论 |
| 3.3 小结 |
| 4 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎畸形和致死的影响 |
| 4.1 实验结果 |
| 4.1.1 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎畸形的影响 |
| 4.1.2 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎GTS的影响 |
| 4.1.3 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎畸形率的影响 |
| 4.1.4 WAF、CEWAF以及GM-2对海水青鳉胚胎致死率的影响 |
| 4.1.5 WAF与CEWAF对海水青鳉胚胎致死率的拟合 |
| 4.2 讨论 |
| 4.3 小结 |
| 5 使用溢油分散剂对生物毒性效应的影响机制分析 |
| 5.1 检测分析方法 |
| 5.1.1 总石油烃(TPH)浓度的测定 |
| 5.1.2 多环芳烃(PAHs)组分含量的测定 |
| 5.2 检测分析结果 |
| 5.2.1 WAF与CEWAF的总石油烃浓度测定 |
| 5.2.2 WAF与CEWAF的多环芳烃组分及含量测定 |
| 5.3 使用溢油分散剂的生物毒性效应影响机制探讨 |
| 5.4 小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读硕士学位期间的科研成果 |
（6）利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 小鼠体外WEC平台的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 E7.0 小鼠体外培养5天 |
| 2.2 E8.5+48hrs卵黄囊血循环以及胚胎发育 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 利用WEC建立丙戊酸、酒精以及stavudine致 NTDs模型并研究其机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器与器械 |
| 1.4 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 VPA、Alcohol以及stavudine诱导胚胎形态学异常 |
| 2.2 组织切片分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎头部结构变化 |
| 2.3 免疫组化检测 VPA、Alcohol 与 stavudine 诱导胚胎增殖与凋亡表达水平 |
| 2.4 VPA、Alcohol 以及 stavudine 诱导 NTDs 胚胎 PCNA 与 CC3 蛋白水平变化 |
| 2.5 组织切片分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎卵黄囊结构变化 |
| 2.6 定性分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎卵黄囊PCNA与 CC3 蛋白水平变化 |
| 2.7 定性分析VPA、Alcohol和 stavudine诱导NTDs胚胎头部PCNA与 CC3 蛋白水平变化 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 利用小鼠WEC建立高糖诱导神经管畸形模型及二甲双胍干预的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂、实验设备及试剂配制 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 高糖诱导神经管畸形模型建立 |
| 2.2 Metformin 干预高血糖诱导的胚胎 NTDs 的发生 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）基于OCT技术的生物体心脏生理特性分析及微血管造影成像（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 心血管疾病的研究意义及背景 |
| 1.2 医学影像技术之光学相干层析成像技术 |
| 1.2.1 OCT技术的发展历史及研究现状 |
| 1.2.2 OCT技术成像原理 |
| 1.2.3 OCT技术分类 |
| 1.2.4 系统关键性能参数 |
| 1.2.5 应用领域 |
| 1.3 选题背景及意义 |
| 1.4 论文结构安排 |
| 第二章 OCT技术在发育生物学中的应用 |
| 2.1 OCT在发育生物学中的应用现状 |
| 2.1.1 形态学成像的应用 |
| 2.1.2 功能成像的应用 |
| 2.2 生物体心血管功能发育的评估方法 |
| 2.2.1 评价心血管功能发育的重要参数 |
| 2.2.2 评估心血管功能发育的方法 |
| 2.2.3 OCT监测心血管发育的原理 |
| 2.3 OCT微血管造影成像原理及分类 |
| 2.3.1 OCT微血管造影成像原理 |
| 2.3.2 OCTA技术分类 |
| 2.3.3 OCTA技术面临的问题及解决办法 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 OCT对生物体心脏功能的活体监测 |
| 3.1 模式生物的选取 |
| 3.1.1 飞蝗简介 |
| 3.1.2 飞蝗作为模式生物的优势 |
| 3.2 OCT实验装置及监测方法 |
| 3.2.1 实验对象的制备 |
| 3.2.2 OCT装置及测量方法 |
| 3.3 飞蝗发育周期中心脏功能的监测 |
| 3.3.1 胚胎期 |
| 3.3.2 蝗蝻期及成虫期 |
| 3.4 生物节律对心脏功能的影响 |
| 3.5 外界环境对心脏功能的影响 |
| 3.5.1 温度对心脏功能的影响 |
| 3.5.2 光照周期对心脏功能的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 微血管网络光学相干造影成像 |
| 4.1 光学相干血流造影成像机制 |
| 4.2 基于空间投影的微血管造影 |
| 4.2.1 散斑方差算法 |
| 4.2.2 模型的训练 |
| 4.2.3 实验结果 |
| 4.3 本章小结 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（8）电离辐射诱导的斑马鱼胚胎发育毒性及苯乙双胍的辐射防护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 斑马鱼在人类疾病模型构建中的应用 |
| 1.1.1 斑马鱼独特的生物学特性及优势 |
| 1.1.2 斑马鱼在人类造血系统的中研究 |
| 1.1.3 斑马鱼在构建人类肾病模型中的应用 |
| 1.1.4 斑马鱼在人类心血管疾病模型构建中的应用 |
| 1.1.5 斑马鱼在人类脑部疾病模型构建中的应用 |
| 1.1.6 斑马鱼在人类肝脏疾病模型构建中的应用 |
| 1.2 斑马鱼作为模式生物在放射生物学研究中的应用 |
| 1.3 WNT信号通路与神经发生相关研究进展 |
| 1.3.1 Wnt信号通路简介 |
| 1.3.2 Wnt信号通路与神经发生 |
| 1.3.3 Wnt信号通路在神经系统疾病中的作用 |
| 1.4 苯乙双胍的研究进展 |
| 1.4.1 双胍类化合物的发现 |
| 1.4.2 苯乙双胍的抗肿瘤作用 |
| 1.4.3 苯乙双胍的其他药理学作用 |
| 1.5 本研究的研究目的及拟解决的问题 |
| 第2章 X射线辐照对斑马鱼胚胎发育的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 仪器与设备 |
| 2.2.3 斑马鱼的饲养及胚胎的收集 |
| 2.2.4 辐照条件 |
| 2.2.5 死亡率和形态学分析 |
| 2.2.6 行为学分析 |
| 2.2.7 活性氧的检测 |
| 2.2.8 细胞凋亡检测 |
| 2.2.9 基因表达分析 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 X射线对斑马鱼胚胎死亡率和畸形率的影响 |
| 2.3.2 X射线对斑马鱼胚胎自主运动和心率的影响 |
| 2.3.3 X射线引起斑马鱼胚胎ROS生成的增加 |
| 2.3.4 X射线诱导斑马鱼胚胎细胞凋亡 |
| 2.3.5 X射线对斑马鱼胚胎凋亡相关基因表达量的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 碳离子束和质子束辐照对斑马鱼胚胎发育的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料和方法 |
| 3.2.1 实验试剂与药品 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.2.3 实验分组及实验条件 |
| 3.2.4 斑马鱼胚胎死亡率、孵化率和形态学的分析 |
| 3.2.5 斑马鱼胚胎自主运动、心率的分析 |
| 3.2.6 斑马鱼和幼鱼行为能力的分析 |
| 3.2.7 斑马鱼相关基因表达的分析 |
| 3.2.8 斑马鱼胚胎相关蛋白表达分析 |
| 3.2.9 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 HLY78对碳离子和质子辐照后斑马鱼胚胎死亡率、孵化率的影响 |
| 3.3.2 HLY78对碳离子和质子辐照后斑马鱼胚胎畸形率的影响 |
| 3.3.3 HLY78对碳离子和质子辐照后斑马鱼胚胎自主运动、心率的影响 |
| 3.3.4 HLY78对碳离子和质子辐照后斑马鱼幼鱼行为能力的影响 |
| 3.3.5 HLY78对碳离子和质子辐照后斑马鱼相关基因表达的影响 |
| 3.3.6 HLY78对碳离子和质子辐照后斑马鱼相关蛋白表达分析 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 苯乙双胍对X射线辐照引起的斑马鱼胚胎神经发生毒性的保护作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料和方法 |
| 4.2.1 实验试剂与药品 |
| 4.2.2 实验分组及实验条件 |
| 4.2.3 死亡率、孵化率和形态学分析 |
| 4.2.4 自主运动、心率和幼鱼行为能力分析 |
| 4.2.5 生化指标检测 |
| 4.2.6 基因表达分析 |
| 4.2.7 蛋白表达分析 |
| 4.2.8 数据分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 苯乙双胍对辐照后斑马鱼胚胎孵化率、死亡率和畸形率的影响 |
| 4.3.2 苯乙双胍对辐照后斑马鱼胚胎自主运动、心率和幼鱼行为的影响 |
| 4.3.3 苯乙双胍对辐照后斑马鱼胚胎生化指标的影响 |
| 4.3.4 苯乙双胍对辐照后斑马鱼胚胎基因表达的影响 |
| 4.3.5 苯乙双胍对辐照后斑马鱼胚胎蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介及攻读博士学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（9）壬基酚致红鲫鱼胚胎发育畸形的转录组分析及功能基因挖掘（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 环境激素与壬基酚 |
| 1.1.1 壬基酚对生物生殖功能的影响 |
| 1.1.2 壬基酚对生物胚胎发育的影响 |
| 1.1.3 壬基酚对生物基因表达的影响 |
| 1.2 转录组测序 |
| 1.2.1 转录组 |
| 1.2.2 转录组测序 |
| 1.2.3 转录组测序在水生生物中的应用 |
| 1.3 GATA1基因 |
| 1.3.1 GATA基因的结构 |
| 1.3.2 GATA1基因的功能 |
| 1.4 Sox8基因 |
| 1.4.1 Sox基因家族 |
| 1.4.2 Sox8基因功能 |
| 1.5 实验材料的选择 |
| 1.5.1 鱼类作为实验材料的优势 |
| 1.5.2 红鲫鱼作为壬基酚干扰实验材料的优势 |
| 1.6 研究内容与意义 |
| 第2章 实验材料及方法 |
| 2.1 实验材料与器材 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验器材与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 胚胎毒性实验及形态学观察 |
| 2.2.2 转录组测序 |
| 2.2.3 基因克隆 |
| 2.2.4 基因表达分析 |
| 2.2.5 实验数据统计方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 胚胎毒性实验及形态学观察 |
| 3.1.1 胚胎毒性实验 |
| 3.1.2 形态学观察 |
| 3.2 转录组测序 |
| 3.2.1 测序数据的组装与质量分析 |
| 3.2.2 差异表达基因的筛选 |
| 3.2.3 差异表达基因的GO富集分析 |
| 3.2.4 KEGG代谢通路显着性富集分析 |
| 3.2.5 差异表达基因实时荧光定量PCR验证 |
| 3.3 基因克隆 |
| 3.3.1 Sox8和GATA1的序列分析 |
| 3.3.2 多序列比对和系统发育分析 |
| 3.4 基因表达分析 |
| 3.4.1 两个基因在健康的红鲫鱼各组织的表达情况 |
| 3.4.2 壬基酚处理后基因在不同发育时期胚胎中的表达情况 |
| 3.4.3 壬基酚处理组与对照组GATA1甲基化水平 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读学位期间发表的论文与科研成果清单 |
| 致谢 |
（10）γ辐射对斑马鱼胚胎生物节律的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略语索引 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 电离辐射的研究现状 |
| 1.2 生物节律的研究现状 |
| 1.3 斑马鱼在生物医学研究中的应用 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 γ辐射对斑马鱼胚胎生命功能的影响 |
| 3.2 γ辐射对斑马鱼胚胎行为节律的影响 |
| 3.3 γ辐射对斑马鱼胚胎褪黑素分泌的影响 |
| 3.4 γ辐射对斑马鱼胚胎时钟基因mRNA表达的影响 |
| 3.5 γ辐射对斑马鱼胚胎时钟蛋白CLOCK表达的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 论文发表与申请参与的科研项目 |
| 致谢 |
四、人类胚胎心血管发生发育的形态学研究（论文参考文献）
- [1]3nm氧化铁纳米颗粒对斑马鱼胚胎发育的毒性作用机制的研究[D]. 寇瑶. 西北大学, 2021(11)
- [2]以斑马鱼为模型研究脑心通治疗心肌病的分子机制[D]. 胡梦妍. 西北大学, 2021(12)
- [3]诱导性心脏祖细胞的生成及其3D水凝胶培养体系的构建[D]. 褚新月. 西南大学, 2021
- [4]以斑马鱼胚胎为例探究低浓度砷的心脏毒性效应及机制[D]. 张晶莹. 浙江师范大学, 2020(01)
- [5]溢油分散剂处理原油对海水青鳉胚胎发育的毒性效应[D]. 马心蕊. 大连海事大学, 2020(01)
- [6]利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制[D]. 奥瑞芳. 山西医科大学, 2020(11)
- [7]基于OCT技术的生物体心脏生理特性分析及微血管造影成像[D]. 谭昊. 河北大学, 2020(08)
- [8]电离辐射诱导的斑马鱼胚胎发育毒性及苯乙双胍的辐射防护作用研究[D]. 甘露. 中国科学院大学(中国科学院近代物理研究所), 2020(01)
- [9]壬基酚致红鲫鱼胚胎发育畸形的转录组分析及功能基因挖掘[D]. 田雨苏. 湖南科技大学, 2020(06)
- [10]γ辐射对斑马鱼胚胎生物节律的影响[D]. 毛亮. 南华大学, 2020