一、昆虫细胞系的发展:历史回顾（论文文献综述）
张寰,张永安,秦启联,王玉珠,曲良建,李瑄,苗麟,殷珍仙,张爱君,温发园[1]（2007）在《昆虫细胞系的培养和建立技术》文中研究说明迄今已经报道的昆虫细胞系有800株以上。昆虫细胞系在昆虫病理学、寄生虫学、内分泌学、遗传学和分子生物学等基础和应用研究中得到越来越广泛的应用。本文结合我们研究的结果和实践经验,概括了国内外昆虫细胞系建立技术的研究进展,包括昆虫细胞培养的发展、昆虫细胞系建立技术、不同昆虫组织来源细胞系的建立方法和过程,以及对昆虫细胞系特征的鉴定等方面。
张欣[2]（2006）在《两种鞘翅目昆虫细胞培养及昆虫细胞系染色体分析》文中认为昆虫细胞培养技术作为细胞工程基础之一，是现代实验生物学上极有价值的手段之一，广泛应用于生物学、医学及农业的各个领域。本文针对我国目前还没有鞘翅目昆虫细胞系建立成功的现状，利用两种鞘翅目昆虫的各种组织进行了鞘翅目昆虫细胞体外培养的尝试，为建立新的鞘翅目昆虫细胞系提供了理论基础和借鉴经验。并对十株昆虫细胞系的染色体进行了分析，为昆虫细胞培养的研究提供了重要的理论依据，充实了昆虫细胞系库的参考数据。主要试验结果如下： 1．鞘翅目昆虫细胞培养： 本研究摸索了喙尾琵琶甲的各种组织及黄粉虫脂肪体原代培养的各种条件，得出各种组织在原代培养时适宜的培养条件：（1）喙尾琵琶甲新孵幼虫培养：0.5％的洗必泰乙醇溶液浸泡处理卵5min能得到较好的消毒及孵化效果；采用组织块法处理能获得较好的效果；比较适合于在改良Grace培养基中生长。（2）喙尾琵琶甲胚胎细胞培养：较适合于在改良Grace培养基中生长。（3）喙尾琵琶甲血淋巴细胞培养：在75％酒精消毒8min且从其背血管取血能获得较好的消毒效果和较大的取血量，较适合于在Schneider培养基中生长。（4）喙尾琵琶甲精巢细胞培养：采用组织块法和胰蛋白酶消化法处理组织得到的结果区别不大；较适合于在Schneider培养基中生长。（5）喙尾琵琶甲卵巢细胞培养：采用胰蛋白酶消化法处理能获得较好的效果；细胞MGM-450、Schneider、Grace及改良Grace四种培养基生长情况差别不大。（6）黄粉虫脂肪体细胞培养：采用组织块法和胰蛋白酶消化法处理组织得到的结果区别不大；较适合于在Schneider培养基中生长。总的来说，原代培养的细胞在体外有一定的生长现象，细胞在体外最长存活20个月以上。目前仍有21株细胞在培养和观察中，其中有4株分别来源于喙尾琵琶甲精巢及黄粉虫脂肪体的细胞经过了一定次数的传代培养成为有限细胞系。 2．昆虫细胞系染色体分析： 对十株分别来源于鳞翅目和双翅目的昆虫细胞系进行了染色体分析，得出了各种细胞染色体分析所需要的秋水仙素浓度与处理时间以及低渗浓度和处理时间的范围。实验结果显示两个目细胞系染色体表现出很大的差异性，鳞翅目细胞表现为典型的鳞翅目昆虫传代细胞的核型特征：染色体数目众多，异倍化严重，染色体形态较小，多为弥散型的着丝粒的短杆状、颗粒状、点状或圆球状：而双翅目细胞也有其共同的特性：染色体形态较大，缢痕也较为明显，多为杆状的中部着丝粒染色体或亚中部着丝粒染色体，其数目较为恒定，常集中于几个数目，大多数与其来源虫种的染色体及倍性保持一致性。
张欣,冯颖,丁伟峰,马涛[3]（2011）在《离体昆虫细胞对AcNPV和BmNPV的敏感性测定与分析》文中研究指明采用来源于3个目14种昆虫的离体细胞系对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcNPV（Autographa californica nuclear polyhedrosis virus）和家蚕核型多角体病毒BmNPV（Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus）进行敏感性测定。试验结果表明:各昆虫细胞系对两种病毒的敏感性不同,来源于双翅目及直翅目的细胞系均不能被这两种病毒感染;AcNPV可侵染来源于鳞翅目的Sf21、Sf9、HighFive、RIRI-PX及HZ,宿主范围较广;而BmNPV仅能侵染BmN细胞,宿主专一。AcNPV对Sf9细胞的感染率最高,接种病毒10 d后感染率平均达84.0%,而RIRI-PX的AcNPV病毒产量最高,形成的多角体数目为43.9PIBs/感染细胞。接种BmNPV10 d后,BmN的感染率为72.2%,形成的多角体数目为23.1.PIBs/感染细胞。
张寰[4]（2006）在《昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究》文中指出昆虫细胞系具有非常广泛而重要的科学和应用价值。本研究参考动物细胞培养中植块培养的方法，从昆虫幼虫脂肪体细胞的原代培养入手，系统研究了以昆虫脂肪体组织为实验材料建立昆虫细胞系的方法，并初步探讨了昆虫细胞在体外增殖的机制，试图为更多昆虫脂肪体细胞系的建立提供有效的技术手段。研究中选用健康的光肩星天牛（Anoplophora glabripennis）幼虫脂肪体组织为实验材料进行原代培养，通过比较不同虫龄、不同取材部位的大小和完整性、不同培养表面、不同培养液种类和pH、不同血液中酚氧化酶原抑制物的种类和添加比例、原代培养物的贴壁处理等因素对原代培养结果的影响，以及传代方式、条件、时机等对传代培养结果的影响，试图探索出一套特有的昆虫脂肪体细胞建系方法。实验结果表明，由脂肪体组织建立昆虫细胞系，最佳的取材为末龄或进入预蛹期幼虫体内完整的脂肪体组织，优先使用一次性塑料培养瓶，原代细胞培养液的最佳配制比例为：TNM-FH（80％），胎牛血清（10％），苯基硫脲（10％），pH6．2～6．8。决定昆虫脂肪体细胞是否成系的关键因素包括：原代培养的组织能否同培养器皿表面紧密接触（贴壁），紧密贴壁的组织块倾向于游离出分裂能力较强的细胞群；在新生细胞长满瓶底时，处理好第一次或前几次转瓶、传代的步骤非常重要。最佳的初次传代方式是轻轻摇晃，将较易脱壁的细胞以较高的密度传入新的培养瓶中，同时注意不要扰动原组织块，减小对细胞的剪切力。原代培养换液量也需要根据细胞的生长状况而定，一般为换液量的50％。 运用上述方法，本研究共建立了7株昆虫幼虫脂肪体细胞系（IOZCAS-Spex-Ⅱ，IOZCAS-Spex-Ⅲ，IOZCAS-Spex-Ⅳ，IOZCAS-Spex-Ⅴ，IOZCAS-Spex-Ⅵ，IOZCAS-Spex-Ⅶ，IOZCAS-Ha-Ⅰ），其中6株来自甜菜夜蛾（Spodoptera exigua），1株来自棉铃虫（Helicoverpa aimigera）。7株细胞系的细胞均以圆形为主；新建立的细胞系IOZCAS-Spex-Ⅱ和IOZCAS-Ha-Ⅰ的第10代细胞群体倍增时间分别为108．8h和65．2h；IOZCAS-Spex-Ⅱ和IOZCAS-Ha-Ⅰ染色体符合典型的鳞翅目染色体数目较多的特点，多数细胞为多倍体。使用DAF-PCR的方法，鉴定了新建立的细胞系分别来自其同源的昆虫，而与实验室保存的其它昆虫细胞系PCR扩增谱带不同。细胞长期冻存在-80℃的环境下，并保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，且多次复苏成功。新建细胞系均对同源核型多角体病毒敏感，但敏感程度各不相同，对其它非同源种类的核型多角体病毒不敏感。对已建的细胞系IOZCAS-Spex-Ⅱ进行了单细胞克隆，当前正在进行放大培养。 使用5’-BrdU掺入法标记了光肩星天牛脂肪体细胞在体内和体外的短期增殖情况，
张欣,冯颖,丁伟峰,马涛,马艳[5]（2008）在《7种鳞翅目昆虫细胞系染色体分析》文中研究表明采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规G iem sa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对7种鳞翅目昆虫细胞系进行了染色体分析,得出了各种细胞系染色体分析所需要的秋水仙素浓度与处理时间以及低渗浓度和处理时间的范围;7种鳞翅目细胞系染色体均表现出典型的鳞翅目昆虫传代细胞的核型特征:染色体数目众多,异倍化严重,多为弥散型的着丝粒的短杆状、颗粒状、点状或圆球状。
王俊平,檀建新,王勤英,陆秀君,李国勋[6]（2002）在《昆虫组织培养研究进展》文中认为昆虫组织培养目前已在生物学领域成为重要的研究工具。特别是成功的筛选出对杆状病毒敏感的细胞系及空斑技术的应用 ,使病毒的基础研究达到分子水平 ,如病毒的遗传改良、DNA的复制、蛋白质的合成及病毒的物理图谱等。近年来 ,人们已成功地利用昆虫组织培养进行病毒杀虫剂的大量生产 ,用于害虫生物防治 ,更显示出昆虫组织培养的重要意义。为此 ,本文对昆虫组织培养的研究进展作简单阐述
张欣,冯颖,丁伟峰,马涛,刘荣,马艳[7]（2011）在《常用农药对5种昆虫细胞系的毒力测定及分析》文中研究表明自20世纪60年代Grace建立了第一个能够稳定传代的昆虫细胞系以来（Grace,1962）,经过几十年的研究和发展,昆虫细胞培养已在细胞系建立、培养技术和方法、昆虫细胞培养技术的利用等方面取得了很大的进展,昆虫细胞被广泛地应用于医学、农学及生物学的各个领域（宋德伟等,2004;张佑红等,2006;Maramorosch et al.,1992）。目前,全世界
张欣,冯颖,马涛,马艳,丁伟峰[8]（2007）在《五种双翅目昆虫细胞系染色体分析》文中认为采用直接法制备传代细胞染色体标本、常规Giemsa染色、显微镜下计数中期分裂相染色体数目的方法对5个双翅目昆虫细胞系进行了染色体分析。结果显示:C6/36染色体众数为6,为二倍体细胞系;SL2染色体众数为812,超二倍体细胞系;L-2/M delta 2-3染色体众数为820,超二倍体细胞系;Aedes albopictus Skuse染色体众数为6,为二倍体细胞系;NIH-SaPe-4染色体众数为10条,为二倍体或亚二倍体细胞系。与来源细胞相比,以上5种细胞染色体数目没有发生根本性的改变。
邵红莲[9]（2006）在《棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究及棉铃虫细胞系的建立》文中研究表明棉铃虫是鳞翅目夜蛾科昆虫，因摄食杂，食量大，繁殖力强，严重危害我国农业经济。用化学药物控制害虫，害虫会逐渐产生抗药性，给防治带来更大的困难，同时化学药物也给人类健康带来不利。通过体内、体外研究方法，深入掌握害虫发育规律及机理，从生物学角度设计扰乱害虫生长或借用天然病原体控制害虫的生物防治具有针对性强，特异性高，对人类及环境无污染等优点，具有广阔的发展前景。 本论文在实验室前期工作基础上，进行了两种棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂的实验研究，为筛选新的重组病毒候选基因提供实验证据。论文还探索建立了三种体外连续传代的棉铃虫细胞系，为进一步在体外研究棉铃虫活体细胞的激素调控、病毒感染、细胞凋亡等分子生物学机制奠定了基础。现将论文内容概括如下： 第一部分：棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究 杆状病毒中绝大部分是昆虫特异性病原，因不感染脊椎动物，是理想的控制害虫的生物“工具”。然而根据研究得知，野生型杆状病毒具有杀虫谱窄，杀虫速度慢的缺点。遗传改造病毒，选用外源基因构建重组病毒，使重组病毒感染虫体后除了病毒的毒杀作用外还通过外源基因的持续表达双重干扰昆虫，以加快害虫的死亡、提高害虫的死亡率，大大减少农林业的经济损失。已报道了多种基因重组病毒，如蝎毒素、螨毒素、利尿激素、保幼激素酯酶等基因的重组病毒，其杀虫效果虽都优于相应的野生型病毒，但仍不理想。新的安全高效的基因重组病毒候选基因需要探索和发现。 棉铃虫激素接受子3（Helicoverpa hormone receptor 3，HHR3）是蜕皮激素直接诱导的棉铃虫蜕皮调节转录因子激素接受子3，是棉铃虫蜕皮级联反应过程的关键调控因子，HCB（Helicoverpa armigera cathepsin B-like proteinase）是参与棉铃虫胚胎发育及成虫脂肪体降解的半胱氨酸蛋白酶。实验室前期工作已将两个基因分别定点插入双启动子表达载体pFastBacDUAL（即p10启动子和多角体蛋白基因启动子，其中p10启动子下游已插入了绿色荧光蛋白基因）的多角体蛋白基因启动子下游，本论文在紧接侯选基因后面再插入来自AcMNPV的多角体基因，转座获得阳性重组菌株后，分别
张佑红,朱雄伟,陈燕[10]（2006）在《昆虫细胞培养及其应用进展》文中研究指明综述了昆虫细胞培养基的现状和发展、无血清培养基的开发、昆虫细胞系的建立以及昆虫细胞在生物农药和重组蛋白中的应用.
二、昆虫细胞系的发展:历史回顾（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、昆虫细胞系的发展:历史回顾（论文提纲范文）
（1）昆虫细胞系的培养和建立技术（论文提纲范文）
| 1 历史回顾 |
| 2 昆虫细胞系的建立技术和鉴定方法 |
| 2.1 昆虫细胞系原代培养的主要步骤及特点 |
| 2.2 昆虫细胞系的组织来源 |
| 2.3 昆虫细胞系的传代培养 |
| 2.4 昆虫细胞系的特征和鉴定 |
| 3 问题与展望 |
（2）两种鞘翅目昆虫细胞培养及昆虫细胞系染色体分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.1.1 研究背景 |
| 1.1.2 本研究的目的和意义 |
| 1.1.2.1 建立鞘翅目昆虫细胞系的目的和意义 |
| 1.1.2.2 细胞系染色体分析的目的和意义 |
| 1.1.3 项目来源与经费支持 |
| 1.2 国内外研究现状及评述 |
| 1.2.1 昆虫细胞培养技术及其概况 |
| 1.2.2 影响昆虫细胞培养的因素 |
| 1.2.2.1 培养条件 |
| 1.2.2.2 培养基 |
| 1.2.2.3 污染 |
| 1.2.2.4 接种密度 |
| 1.2.3 昆虫细胞培养的研究及应用进展 |
| 1.2.3.1 特异性昆虫细胞系的建立 |
| 1.2.3.2 无血清昆虫培养基的开发 |
| 1.2.3.3 昆虫细胞的大规模培养 |
| 1.2.3.4 昆虫杆状病毒表达系统 |
| 1.2.3.5 生物杀虫剂 |
| 1.2.3.6 化学药物及微生物杀虫剂的毒力检测 |
| 1.2.3.7 昆虫抗菌肽 |
| 1.3 研究目标和主要研究内容 |
| 1.3.1 研究目标 |
| 1.3.2 主要研究内容 |
| 1.3.2.1 鞘翅目昆虫细胞培养 |
| 1.3.2.2 昆虫细胞系染色体分析 |
| 第二章 两种鞘翅目昆虫细胞培养 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.1.1 试虫 |
| 2.1.1.2 主要试剂 |
| 2.1.1.3 主要仪器 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.2.1 培养基的配制 |
| 2.1.2.1.1 Schneider培养基的配制 |
| 2.1.2.1.2 MGM-450培养基的配制 |
| 2.1.2.1.3 Grace培养基的配制(1000ml) |
| 2.1.2.1.4 改良Grace培养基的配制(1000ml) |
| 2.1.2.2 细胞培养方法 |
| 2.1.2.2.1 喙尾琵琶甲新孵幼虫细胞 |
| 2.1.2.2.2 喙尾琵琶甲胚胎细胞 |
| 2.1.2.2.3 喙尾琵琶甲成虫血淋巴细胞 |
| 2.1.2.2.4 喙尾琵琶甲成虫精巢细胞 |
| 2.1.2.2.5 喙尾琵琶甲成虫卵巢细胞 |
| 2.1.2.2.6 黄粉虫幼虫脂肪体细胞 |
| 2.1.2.2.7 细胞的维持培养与观察 |
| 2.1.2.2.8 细胞的传代 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 喙尾琵琶甲新孵幼虫细胞 |
| 2.2.1.1 灭菌方法的确定 |
| 2.2.1.2 培养方法 |
| 2.2.1.3 培养基 |
| 2.2.1.4 细胞培养结果 |
| 2.2.2 喙尾琵琶甲胚胎细胞 |
| 2.2.2.1 培养基 |
| 2.2.2.2 细胞培养的结果 |
| 2.2.3 喙尾琵琶甲成虫血淋巴细胞 |
| 2.2.3.1 灭菌时间 |
| 2.2.3.2 培养方法 |
| 2.2.3.3 培养基 |
| 2.2.3.4 细胞培养结果 |
| 2.2.4 喙尾琵琶甲成虫精巢细胞 |
| 2.2.4.1 培养方法 |
| 2.2.4.2 培养基 |
| 2.2.4.3 细胞培养的结果 |
| 2.2.5 喙尾琵琶甲成虫卵巢细胞 |
| 2.2.5.1 培养方法 |
| 2.2.5.2 培养基 |
| 2.2.5.3 细胞培养结果 |
| 2.2.6 黄粉虫幼虫脂肪体细胞 |
| 2.2.6.1 培养方法 |
| 2.2.6.2 培养基 |
| 2.2.6.3 细胞培养的结果 |
| 2.2.7 细胞维持培养与观察的结果 |
| 2.2.8 传代培养细胞的结果 |
| 2.3 小结与讨论 |
| 2.3.1 小结 |
| 2.3.2 讨论 |
| 2.3.2.1 培养组织的处理方法 |
| 2.3.2.2 培养基的选择 |
| 2.3.2.3 培养的维持 |
| 2.3.2.4 细胞系建立的可能性 |
| 第三章 昆虫细胞系染色体分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.1.1 试验细胞 |
| 3.1.1.2 主要试剂 |
| 3.1.1.3 主要仪器 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.2.1 昆虫细胞系染色体制片的方法 |
| 3.1.2.2 昆虫细胞系染色体分析的方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 Ae(按大蚕蛾卵巢细胞) |
| 3.2.1.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.1.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.2 SES-MaBr-2(甘蓝夜蛾龄幼虫脂肪体细胞) |
| 3.2.2.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.2.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.3 Sf9(草地夜蛾卵巢细胞克隆株) |
| 3.2.3.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.3.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.4 Sf21(草地夜蛾卵巢细胞) |
| 3.2.4.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.4.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.5 NIAS-MaBr-92(甘蓝夜蛾5龄幼虫血球细胞) |
| 3.2.5.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.5.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.6 C6/36(白纹伊蚊幼虫细胞) |
| 3.2.6.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.6.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.7 SL2(黑腹果蝇胚胎细胞) |
| 3.2.7.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.7.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.8 L-2/M(黑腹果蝇胚胎细胞) |
| 3.2.8.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.8.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.9 Aedes albopictus(白纹伊蚊新孵幼虫细胞) |
| 3.2.9.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.9.2 染色体分析的结果 |
| 3.2.10 NIH-SaPe-4(麻蝇成虫卵巢内发育成胚细胞) |
| 3.2.10.1 不同预处理的结果 |
| 3.2.10.2 染色体分析的结果 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 3.3.1 小结 |
| 3.3.2 讨论 |
| 3.3.2.1 制片条件 |
| 3.3.2.2 染色体分析的结果 |
| 第四章 结论与讨论 |
| 4.1 结论 |
| 4.1.1 鞘翅目昆虫细胞培养 |
| 4.1.1 昆虫细胞系染色体分析 |
| 4.2 讨论 |
| 4.2.1 鞘翅目昆虫细胞培养 |
| 4.2.1.1 培养条件的讨论 |
| 4.2.1.2 培养方法的讨论 |
| 4.2.1.2.1 取材及组织的处理 |
| 4.2.1.2.2 接种密度的控制 |
| 4.2.1.2.3 培养的维持 |
| 4.2.1.3 培养现象的讨论 |
| 4.2.1.3.1 结晶体的出现 |
| 4.2.1.3.2 细胞停止增殖的问题 |
| 4.2.2 昆虫细胞系的染色体分析 |
| 4.2.2.1 培养细胞系染色体异倍化原因探讨 |
| 参考文献 |
| 图版 |
| 致谢 |
| 附录 |
（3）离体昆虫细胞对AcNPV和BmNPV的敏感性测定与分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 供试细胞系 |
| 1.1.2 供试病毒 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 病毒对细胞的感染 |
| 1.2.2 病毒感染滴度 (TCID50) 测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 离体昆虫细胞系对AcNPV和BmNPV的敏感性 |
| 2.2 感染离体昆虫细胞系的病毒产量及病毒感染滴度 (TCID50) 测定 |
| 2.2.1 AcNPV感染离体昆虫细胞系的敏感性及病毒感染滴度 (TCID50) 测定 |
| 2.2.2 BmNPV感染离体昆虫细胞系的敏感性及病毒感染滴度 (TCID50) 测定 |
| 3 结论与讨论 |
（4）昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| 正文图表目录 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 动物细胞培养技术概况 |
| 1.3 昆虫细胞系建立技术研究进展 |
| 1.3.1 昆虫细胞培养的特点 |
| 1.3.2 昆虫细胞系的建立和昆虫细胞培养液的发展 |
| 1.3.3 昆虫细胞系建立技术 |
| 1.3.4 昆虫细胞系的特征和鉴定 |
| 1.3.5 污染的避免 |
| 1.4 昆虫脂肪体细胞系建立研究进展 |
| 1.5 甜菜夜蛾细胞系建立研究进展 |
| 1.6 棉铃虫细胞系建立研究进展 |
| 1.7 昆虫细胞系的应用 |
| 1.7.1 大规模生产昆虫病毒杀虫剂 |
| 1.7.2 构建重组杆状病毒杀虫剂 |
| 1.7.3 构建杆状病毒表达载体系统 |
| 1.7.4 其他方面 |
| 1.8 细胞增殖检测方法研究进展 |
| 1.9 问题与展望——关于建立昆虫细胞系方法的讨论 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 供试昆虫种类及来源 |
| 2.1.2 供试病毒种类及来源 |
| 2.1.3 供比较的细胞系及来源 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 耗材 |
| 2.1.6 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 原代培养过程 |
| 2.2.2 传代培养方法 |
| 2.2.3 条件培养液的制备 |
| 2.2.4 细胞形状大小的观察和测量 |
| 2.2.5 细胞生长曲线 |
| 2.2.6 细胞核型分析 |
| 2.2.7 DAF-PCR鉴定细胞 |
| 2.2.8 细胞的冻存和复苏 |
| 2.2.9 原代病毒种子液的制备(SeNPV，HaNPV，SpltNPV) |
| 2.2.10 多角体产量的测定 |
| 2.2.11 50%组织培养感染剂量(TCID_(50))的测定 |
| 2.2.12 SeNPV活性的生物测定 |
| 2.2.13 病毒离体传代 |
| 2.2.14 5'-BrdU掺入法标记检测细胞增殖 |
| 第三章 结果与分析 |
| 3.1 昆虫脂肪体细胞体外增殖方法的建立 |
| 3.1.1 原代培养液的选择和确定 |
| 3.1.2 原代培养材料的选择 |
| 3.1.3 不同的处理对原代培养细胞体外增殖的影响 |
| 3.1.4 不同处理对传代细胞体外持续增殖的影响 |
| 3.2 昆虫脂肪体细胞体外增殖的检测及机理的初步探讨 |
| 3.2.1 昆虫体内脂肪体组织细胞增殖 |
| 3.2.2 昆虫脂肪体组织离体培养细胞增殖 |
| 3.2.3 传代处理对昆虫脂肪体组织增殖细胞的影响 |
| 3.3 几株昆虫脂肪体细胞系的建立、鉴定及特征 |
| 3.3.1 甜菜夜蛾幼虫脂肪体细胞系的建立、鉴定及对SeNPV的敏感性 |
| 3.3.2 棉铃虫幼虫脂肪体细胞系的建立、鉴定及对HaNPV的敏感性 |
| 3.3.3 其它几种昆虫幼虫脂肪体细胞系建立的探索 |
| 第四章 结论与讨论 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 讨论 |
| 4.2.1 本研究中建立的6株甜菜夜蛾和1株棉铃虫幼虫脂肪体细胞系的意义 |
| 4.2.2 关于原代培养过程中组织贴壁这一关键步骤的讨论 |
| 4.2.3 从贴壁组织中游离出的细胞来源的讨论 |
| 4.2.4 不同种类昆虫脂肪体组织游离出细胞的可能性 |
| 4.2.5 原代培养不同组织材料的选择 |
| 4.2.6 关于传代过程中细胞持续增殖的讨论 |
| 4.2.7 传代细胞对病毒敏感与否的问题 |
| 4.2.8 染色体异倍化的问题 |
| 4.2.9 条件培养液的作用 |
| 4.2.10 细胞培养过程中需要注意的问题——关于经验的讨论 |
| 4.3 下一步的工作计划 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一 试剂配制及仪器型号 |
| 附录二 专有名词、缩写及昆虫学名 |
| 附录三 导师简介 |
| 附录四 作者在读期间发表的学术论文、申请专利情况及参加的科研项目 |
（5）7种鳞翅目昆虫细胞系染色体分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 供试细胞系 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 染色体分析方法 |
| 1.2.1 终止培养 |
| 1.2.2 低渗处理 |
| 1.2.3 固定 |
| 1.2.4 重复固定 |
| 1.2.5 制片 |
| 1.2.6 染色 |
| 1.2.7 观察与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 Ae |
| 2.2 SES-MaBr-2 |
| 2.3 NIAS-MaBr-92 |
| 2.4 Sf21 |
| 2.5 Sf9 |
| 2.6 NIAS-Px-58 |
| 2.7 FRI-SpIm-1229 |
| 3 结论与讨论 |
（6）昆虫组织培养研究进展（论文提纲范文）
| 1 昆虫细胞培养基 |
| 1.1 昆虫细胞培养基的选择 |
| 1.2 无血清昆虫细胞培养基发展 |
| 2 昆虫细胞系的建立 |
| 2.1 昆虫细胞系的原代培养和传代培养 |
| 2.2 成熟组织细胞系的建立 |
| 2.3 细胞系的鉴定 |
| 3 昆虫细胞系的应用 |
| 3.1 利用昆虫细胞系大规模培养生产昆虫病毒杀虫剂 |
| 3.2 昆虫细胞系-杆状病毒表达系统 |
| 3.3 昆虫细胞系的其他应用 |
| 4 展望 |
（7）常用农药对5种昆虫细胞系的毒力测定及分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试细胞系及培养 |
| 1.2 供试农药及有机溶剂的配制 |
| 1.3 毒力测定及分析方法 |
| 1.4 形态学观察 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 4种农药及二甲苯对SL2细胞的毒力 |
| 2.2 4种农药及二甲苯对C6/36细胞的毒力 |
| 2.3 4种农药及二甲苯对NIH-SaPe-4细胞的毒力 |
| 2.4 4种农药及二甲苯对NIAS-MaBr-85细胞的毒力 |
| 2.5 4种农药及二甲苯对Sf9细胞的毒力 |
| 2.6不同药剂及细胞系的多重比较分析 |
| 3 讨论 |
（8）五种双翅目昆虫细胞系染色体分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 供试细胞系 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 染色体分析方法 |
| 1.2.1 终止培养 |
| 1.2.2 低渗处理 |
| 1.2.3 固定 |
| 1.2.4 重复固定 |
| 1.2.5 制片 |
| 1.2.6 染色 |
| 1.2.7 观察与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 C6/36 |
| 2.2 SL2 |
| 2.3 L-2/M delta 2-3 |
| 2.4 Aedes albopictus Skuse |
| 2.5 NIH-SaPe-4 |
| 3 讨论 |
（9）棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究及棉铃虫细胞系的建立（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究 |
| 第一章 综述:昆虫杆状病毒研究进展 |
| 1 杆状病毒的类型存在形式、结构及感染宿主后的传播过程 |
| 2 杆状病毒表达系统的研究 |
| 3 重组杆状病毒生物杀虫剂 |
| 第二章 棉铃虫激素接受子3基因重组病毒杀虫剂研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验用品、仪器 |
| 2.1.2 昆虫和病毒 |
| 2.1.3 试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 重组表达载体Bacmid-GFP-HHR3-Polh~+的构建 |
| 2.2.2 Bacmid-GFP-HHR3-Polh~+转染Sf21细胞 |
| 2.2.3 重组病毒感染体外培养的Sf21细胞 |
| 2.2.4 重组病毒在Sf21细胞中的外源基因表达检测 |
| 2.2.5 重组病毒AcMNPV-GFP-HHR3-Polh~+感染棉铃虫幼虫 |
| 2.2.6 重组病毒感染棉铃虫幼虫后外源基因的表达检测 |
| 2.2.7 重组病毒AcMNPV-GFP-HHR3-Polh~+杀虫生物活性检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 重组表达载体构建和验证 |
| 3.2 重组病毒感染Sf21细胞后外源基因的重组表达 |
| 3.3 重组病毒感染棉铃虫幼虫后外源基因的重组表达 |
| 3.4 重组病毒杀虫效果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 棉铃虫组织蛋白酶B(HCB)基因重组病毒杀虫剂研究 |
| 前言 |
| 第一节 HCB在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的试表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 重组表达载体转染Sf21细胞 |
| 2.2 转染上清液感染Sf21细胞 |
| 2.3 Sf21细胞中的HCB基因的重组表达检测 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 重组表达载体的外源基因插入位置 |
| 3.2 PCR鉴定重组病毒基因组中的HCB目的基因 |
| 3.3 SDS-PAGE检测HCB的表达 |
| 3.4 免疫印迹结果 |
| 3.5 蛋白酶活性检测 |
| 第二节 棉铃虫组织蛋白酶B基因重组病毒杀虫剂研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 重组表达载体Bacmid-GFP-HCB-Polh~+的构建 |
| 2.2 Bacmid-GFP-HCB-Polh~+转染Sf21细胞、转染液感染Sf21细胞 |
| 2.3 重组病毒感染的Sf21细胞中外源基因的表达检测 |
| 2.4 重组病毒AcMNPV-HCB-GFP-Polh~+感染棉铃虫幼虫 |
| 2.5 重组病毒感染棉铃虫幼虫后外源基因的表达检测 |
| 2.6 重组病毒杀虫生物活性检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 重组表达载体构建结果和验证 |
| 3.2 Sf21感染细胞内GFP和polyhedrin的重组表达 |
| 3.3 Sf21感染细胞内HCB的表达 |
| 3.4 重组病毒感染棉铃虫幼虫外源基因的表达 |
| 3.5 重组病毒杀虫效果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 棉铃虫表皮、精巢、卵巢细胞系建立 |
| 第一章 综述:昆虫细胞培养研究进展 |
| 1 体外培养、细胞系的概念及细胞系的鉴定 |
| 2 昆虫细胞培养基的发展和国内外建立昆虫细胞系的情况 |
| 3 昆虫细胞系的应用 |
| 4 棉铃虫细胞系的建立及研究意义 |
| 第二章 棉铃虫表皮细胞系的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 棉铃虫表皮细胞原代培养 |
| 2.2 传代培养 |
| 2.3 细胞的冻存 |
| 2.4 细胞的复苏 |
| 2.5 细胞生长曲线和群体倍增时间的测定 |
| 2.6 染色体分析 |
| 2.7 病毒敏感性检测 |
| 2.8 同工酶检测 |
| 2.9 细胞克隆化培养 |
| 3 结果 |
| 3.1 棉铃虫表皮细胞系SDU-Ha-Epi的形成 |
| 3.2 细胞的保存、复苏 |
| 3.3 细胞生长规律和群体倍增时间 |
| 3.4 染色体分析 |
| 3.5 病毒敏感性 |
| 3.6 同工酶检测结果 |
| 3.7 细胞克隆化培养 |
| 4 讨论 |
| 第三章 棉铃虫精巢及卵巢细胞系建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 原代培养方法 |
| 2.2 传代培养 |
| 2.3 细胞冻存和复苏 |
| 2.4 精巢细胞系细胞生长曲线和群体倍增时间的测定 |
| 2.5 精巢细胞系染色体分析 |
| 2.6 精巢细胞系病毒敏感性检测 |
| 2.7 精巢细胞系细胞克隆化培养 |
| 3 结果 |
| 3.1 棉铃虫精巢细胞系SDU-Ha-Spe的形成 |
| 3.2 精巢细胞系细胞的保存、复苏 |
| 3.3 精巢细胞系细胞生长规律和群体倍增时间 |
| 3.4 精巢细胞系染色体分析 |
| 3.5 精巢细胞系病毒敏感性 |
| 3.6 精巢细胞系细胞克隆化培养 |
| 3.7 棉铃虫卵巢细胞系SDU-Ha-Ova的建立 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 已发表和拟发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（10）昆虫细胞培养及其应用进展（论文提纲范文）
| 0 引 言 |
| 1 昆虫细胞培养基 |
| 1.1 昆虫细胞培养基的发展 |
| 1.2 无血清培养基 |
| 2 昆虫细胞系 |
| 2.1 昆虫细胞原代培养 |
| 2.2 成熟组织细胞 |
| 3 昆虫细胞培养的应用 |
| 3.1 昆虫细胞作为荷载体生产生物农药 |
| 3.2 昆虫细胞-杆状病毒表达系统生产重组蛋白 |
| 4 昆虫细胞培养展望 |
四、昆虫细胞系的发展:历史回顾（论文参考文献）
- [1]昆虫细胞系的培养和建立技术[J]. 张寰,张永安,秦启联,王玉珠,曲良建,李瑄,苗麟,殷珍仙,张爱君,温发园. 昆虫学报, 2007(08)
- [2]两种鞘翅目昆虫细胞培养及昆虫细胞系染色体分析[D]. 张欣. 中国林业科学研究院, 2006(11)
- [3]离体昆虫细胞对AcNPV和BmNPV的敏感性测定与分析[J]. 张欣,冯颖,丁伟峰,马涛. 林业科学研究, 2011(03)
- [4]昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究[D]. 张寰. 中国林业科学研究院, 2006(12)
- [5]7种鳞翅目昆虫细胞系染色体分析[J]. 张欣,冯颖,丁伟峰,马涛,马艳. 林业科学研究, 2008(04)
- [6]昆虫组织培养研究进展[J]. 王俊平,檀建新,王勤英,陆秀君,李国勋. 河北农业大学学报, 2002(S1)
- [7]常用农药对5种昆虫细胞系的毒力测定及分析[J]. 张欣,冯颖,丁伟峰,马涛,刘荣,马艳. 林业科学, 2011(04)
- [8]五种双翅目昆虫细胞系染色体分析[J]. 张欣,冯颖,马涛,马艳,丁伟峰. 林业科学研究, 2007(04)
- [9]棉铃虫功能基因重组病毒杀虫剂研究及棉铃虫细胞系的建立[D]. 邵红莲. 山东大学, 2006(05)
- [10]昆虫细胞培养及其应用进展[J]. 张佑红,朱雄伟,陈燕. 武汉化工学院学报, 2006(03)