一、EXPRESSION OF ANDROGEN RECEPTOR IN THE DEVELOPING RAT EPIDIDYMIS AND ITS REGULATION BY ANDROGENS（论文文献综述）
伊茹汗[1]（2020）在《GPx5在骆驼附睾上的时空表达研究》文中研究指明哺乳动物精子通过附睾的运输、保护和储存过程中,获得受精能力,是精子成熟和储存的主要场所。精子也和其他任何一种细胞一样面对氧化损伤。精子对脂质过氧化、DNA损伤的进攻极为敏感,从而影响活力及受精能力。附睾为精子提供免受外界压力的环境并促进其成熟。附睾含有一系列抗氧化剂,包括谷胱甘肽过氧化物酶5（GPx5）,GPx5可以保护精子免受氧化应激,维持公畜生殖道内自由基正常水平,促进精子发育成熟,其在提高雄性动物繁殖力上发挥着重要作用。国内现没有关于GPx5基因在骆驼附睾中的研究,因此,本研究以骆驼为研究对象,检测了不同年龄段（三岁、五岁、六岁）骆驼附睾不同部位GPx5的表达规律。研究结果如下:1.采用荧光定量PCR技术检测GPx5基因在不同年龄骆驼附睾不同部位上的mRNA水平表达情况。结果表明:各年龄阶段（三岁、五岁、六岁）骆驼附睾表达量存在差异。在三岁骆驼、五岁骆驼及六岁骆驼附睾头部为GPx5 mRNA的主要表达部位,表达量极显着高于附睾体部和附睾尾部（P<0.01）。五岁骆驼附睾头部表达量极显着高于三岁骆驼和六岁骆驼（P<0.01）,三岁骆附睾头部表达量与六岁头部表达量无显着差异（P>0.05）。三岁骆驼,五岁骆驼,六岁骆驼附睾体跟附睾尾仅检测到微量GPx5基因表达。2.利用Western blot技术检测不同年龄骆驼附睾不同部位上的蛋白水平表达情况。免疫印迹结果表明:GPx5蛋白在各年龄阶段（三岁、五岁、六岁）骆驼附睾不同部位均有表达。骆驼不同年龄,附睾相同部位的表达量也有明显差异。通过进一步灰度分析结果显示,三岁骆驼,五岁骆驼,六岁骆驼附睾头是GPx5蛋白主要表达区域,五岁骆驼GPx5蛋白在附睾头的表达量均极显着高于三岁骆驼和六岁骆驼（P<0.01）,而三岁骆驼附睾头GPx5蛋白表达量与六岁骆驼附睾头GPx5蛋白表达量差异不显着（P>0.05）。各年龄段相同部位的比较中,可以看到,五岁骆驼附睾各部位相对表达量都显着高于其他两个年龄段（P<0.05）。3.采用免疫组化技术检测GPx5蛋白在不同年龄骆驼附睾不同部位上的蛋白分布情况。免疫组化结果表明:三岁骆驼,五岁骆驼,六岁骆驼GPx5蛋白主要在附睾头上皮细胞质及静纤毛上,附睾体和附睾尾在上皮细胞的静纤毛中均少量表达。而且在三岁,五岁和六岁年龄阶段骆驼附睾腔中精子上都存在GPx5阳性信号。结果显示,GPx5蛋白主要在骆驼附睾头部上皮细胞质及静纤毛表达,附睾体跟附睾尾少量表达。
钟淑贤[2]（2020）在《龟板酊调控Wnt/β-catenin信号诱导毛囊干细胞防治雄激素性脱发》文中研究指明目的:本研究通过配制以龟板有效成分甾酮（（+）-Cholesten-3-one,简称S9）为主要成分的龟板酊,作用于雄激素性脱发模型小鼠,观察龟板酊对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长的疗效,并从Wnt/β-catenin信号通路和毛囊干细胞角度探讨其作用机制,为治疗雄激素脱发的新药研究提供思路。方法:1.使用二氢睾酮（Dihydrotestosterone,DHT）5mg/kg/d背部皮下注射的方法制作雄激素性脱发模型小鼠,将小鼠分为五个组:空白组（简称B）、模型组（简称M）、基质组（简称MA）、阳性对照组（简称PC）、实验组（简称E）。干预措施:五组均脱毛。空白组不干预;模型组每天注射DHT;基质组每天注射DHT+每天两次外用基质液;阳性对照组每天注射DHT+每天一次外用5%米诺地尔溶液;实验组每天注射DHT+每天两次外用龟板酊。观察小鼠毛发生长情况,包括脱毛区皮肤开始变黑的时间和毛发长出皮表的时间对比。2.实验第21d,取各组小鼠脱毛区皮肤组织进行苏木精-伊红染色（Hematoxylin-Eosin,HE）,观察药物对毛囊的影响,包括毛囊数量和终毛/毳毛比值的比较。3.实验第21d,取各组小鼠脱毛区皮肤组织进行免疫印迹（Western blot,WB）和免疫荧光（Immunofluorescence,IF）检测,检测 Wnt1Ob、GSK-3 β、DKK1、CD34、Integrin β1蛋白的定量表达和 Wnt10b、β-catenin、LEF1、c-Myc、CK15、Integrinβ 1蛋白的定性表达。结果:1.对毛发生长的影响:模型组和基质组小鼠毛发生长速度落后于其他组。模型组小鼠皮肤开始变黑的时间落后于空白组,P<0.01。模型组小鼠毛发长出皮表的时间落后于空白组,P<0.01。2.对毛囊的影响:空白组、模型组、基质组毛干色素浅甚至无,毳毛较多;阳性对照组可见毛干色素深的终毛,以毳毛为主;实验组以毛干色素深的终毛为主。模型组小鼠毛囊数量比空白组少,P<0.01;模型组和基质组小鼠毛囊数量无差别,P>0.05;阳性对照组、实验组小鼠毛囊数量明显比模型组多,P<0.001;实验组小鼠毛囊数量比阳性对照组多,P<0.01。模型组和基质组小鼠终毛/毳毛比值无差别,P>0.05;阳性对照组、实验组小鼠终毛/毳毛比值比模型组高,P<0.01,P<0.001。3.WB结果显示:模型组（M）Wnt10b蛋白表达比空白组（B）少,P<0.01;实验组（E）Wnt10b蛋白表达比M组多,P<0.01。E组GSK-3β蛋白、DKK1蛋白表达比M组少,P<0.01,P<0.001。E组CD34蛋白表达比M组多,P<0.05。E组Integrinβ1蛋白表达比M组多,P<0.001;E组Integrin β1蛋白表达比阳性对照组（PC）多,P<0.001。4.IF结果显示:Wnt10b主要表达在毛囊内根鞘,阳性对照组和实验组均可见表达,尤以实验组表达最强;β-catenin主要表达在毛囊内根鞘、基底部,基底部表达最强烈,空白组、模型组只表达在基底部,而实验组在毛囊内根鞘、基底部均可见表达,且表达最强;LEF1主要表达在毛囊内根鞘,仅实验组可见些许毛囊有所表达;c-Myc主要表达在毛囊外根鞘、内根鞘,仅实验组可见微弱表达。CK15在毛囊外根鞘和表皮有些许表达,以实验组表达较多;Integrin β1主要表达在毛囊内根鞘,以实验组表达较多。结论:1.使用DHT 5mg/kg/d皮下注射制作雄激素性脱发小鼠模型是成功的。2.龟板酊具有增加毛囊数量,促进终毛生长,减少毳毛数量的作用,升高终毛/毳毛比值。3.龟板酊可能是通过促进分泌Wnt10b配体触发激活毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,抑制由DHT激活的负调节因子GSK-3β和DKK1的表达,使信号传导顺利,启动毛发周期,激活毛囊干细胞,促进毛囊干细胞增殖,从而发挥促进雄激素性脱发模型小鼠毛发毛囊生长的作用。
栾兆进,张家新[3]（2018）在《哺乳动物附睾特异GPx5功能及其调节机制的研究进展》文中研究说明精子在附睾中的成熟过程是哺乳动物雄配子获得受精能力的关键。谷胱甘肽过氧化物酶-5（glutathione peroxidase-5,GPx5）作为附睾特异性表达的抗氧化酶具有强抗氧化作用,可调节附睾微环境中的活性氧浓度,保护精子免受脂质过氧化损伤,以维持精子DNA完整性。GPx5还可能对精子活力和顶体反应产生一定影响。GPx5基因的染色体定位及其外显子数存在一定的种间差异,其在不同物种、部位和发育期的表达具有特异性,受雄激素、PEA3因子和ETV4家族等调节。作者就哺乳动物附睾特异GPx5基因的结构与定位、表达特性、功能及其调节机制的研究进展进行综述,以期为进一步研究精子抗氧化机制和提高雄性动物繁殖力提供理论依据。
阮崇美[4]（2017）在《不同发育期白牦牛睾丸蛋白质组学分析及生殖相关候选基因HSP60生物学研究》文中认为天祝白牦牛（Bos grunniens）是我国特有的牦牛品种,是当地牧民主要的生产生活资料,但由于该品种原始,繁殖力低下,自然繁育为2年1胎或3年2胎,严重制约着白牦牛的生产能力。睾丸作为主要的生殖器官,影响着雄性动物的繁殖性能,其主要功能是分泌激素、产生精子等,这些生理过程需要多种蛋白质精确表达和调控。因此,以天祝白牦牛睾丸为材料,研究不同发育阶段睾丸中的差异表达蛋白质将为解释白牦牛睾丸发育和精子发生的分子机制提供参考,对提高白牦牛繁殖性能提供理论依据。本试验以1岁,2岁,4岁和8岁天祝白牦牛睾丸为实验材料,利用二维电泳和MALDI-TOF-TOF质谱技术鉴定不同发育时期差异表达蛋白质,分析这些差异表达蛋白质的功能及参与生物学过程或代谢途径。对筛选出的生殖候选基因热休克蛋白60（HSP60）进行分子克隆及在下丘脑-垂体-睾丸轴表达定位研究,进一步分析了HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的影响。本研究取得的主要结果如下:1、构建了白牦牛睾丸蛋白质表达图谱,经PDQuest 8.0.1分析发现白牦牛睾丸约有437个蛋白质点。比较了不同发育阶段差异蛋白质表达,结果显示在4个年龄阶段共有29个差异（p≤0.01）表达倍数在1.5倍以上的蛋白质点。其中,2种蛋白质随年龄上调,5种蛋白质随年龄下调,3种蛋白质在4岁前上调并随后下调,15种蛋白质在2岁前上调而后下调,4种蛋白质随年龄波动。2、对鉴定出的差异蛋白进行GO功能注释,这些蛋白质主要参与了“细胞过程、单有机体过程和新陈代谢过程”、“细胞、细胞器组成和胞外域”及“结合和催化活性”。亚细胞定位分析表明,鉴定蛋白主要位于细胞骨架（8个蛋白质）,细胞核（6个蛋白质）,线粒体（3个蛋白质）和细胞外基质（2个蛋白质）。3、选择2-DE检测的2个差异表达蛋白质（钙结合蛋白、热休克蛋白60）进行免疫印迹分析,结果显示所选蛋白的表达变化模式与2-DE结果基本一致,表明2-DE分析所得蛋白质差异表达结果可靠。4、对筛选出的差异蛋白HSP60进行分子克隆,发现白牦牛HSP60基因c DNA全长为2300bp,开放阅读框为1722bp,编码572个氨基酸。其理论分子量为60.977k Da、等电点为5.69,HSP60编码蛋白为非跨膜可溶性蛋白。氨基酸序列比对结果显示,白牦牛HSP60基因编码氨基酸序列与黄牛、瘤牛、绵羊、藏羚羊、骆驼、白犀牛、兔和黑猩猩的氨基酸序列同源性分别为100%、99%、99%、99%、99%、99%、98%和98%,说明HSP60在物种间高度保守。5、对HSP60表达及定位分析研究发现,HSP60基因及蛋白在白牦牛的下丘脑、垂体及睾丸组织中均有表达,其中下丘脑及垂体组织表达量高,睾丸组织表达量最低。免疫组化结果显示,HSP60蛋白表达于白牦牛下丘脑组织的室旁核大细胞,室旁核小细胞和神经角演网,垂体组织的腺细胞,睾丸组织的精原细胞,精母细胞,支持细胞和间质细胞,其中精子细胞中表达较弱。推断HSP60参与雄性白牦牛生殖轴调控,并参与睾丸发育与精子发生。6、进一步研究HSP60对原代培养的白牦牛睾丸支持细胞增殖的影响,通过构建HSP60过表达载体p IRES2-EGFP-HSP60,合成靶向si RNA沉默HSP60,瞬时转染支持细胞后,经RT-q PCR检测发现过表达组HSP60 m RNA在24、48和72h各时间点均上调,沉默组HSP60 m RNA在24、48和72h各时间点均下调。四氮唑盐法（MTS）检测细胞的增殖情况,过表达HSP60组,支持细胞增殖率各时间点均显着高于对照组。沉默HSP60组,支持细胞的增值率各时间点均低于对照组,但差异不显着。RT-q PCR检测细胞增殖标志基因细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和增殖细胞核抗原（PCNA）,发现过表达HSP60组Cyclin D1基因在48h时的表达显着高于对照组,PCNA基因的表达在24、48和72h时均显着高于对照组。沉默HSP60组Cyclin D1基因和PCNA基因的表达在24、48和72h时均低于对照组,但差异不显着。表明HSP60在白牦牛睾丸支持细胞增殖调控中的作用是正向调控。本研究通过差异蛋白质组学技术检测不同发育阶段睾丸蛋白质表达差异变化,筛选出HSP60与生殖相关,并对HSP60基因进行分子克隆及表达定位研究,原核表达系统诱导表达出融合蛋白His-HSP60,同时,对HSP60在睾丸支持细胞的增殖调控过程进行了初步研究,结果表明HSP60在白牦牛性机能的旺盛期是通过下丘脑-垂体-性腺轴来调控睾丸支持细胞增殖,进而影响睾丸发育,本实验为进一步研究雄性白牦牛精子发生提供了基础资料。
乌亚罕[5]（2016）在《绵羊附睾GPx5基因表达调控的分子机制》文中研究表明附睾是家畜生殖系统中的重要器官之一,负责精子的成熟、转运和储存。附睾功能的实现依赖于其旺盛的生理活性,因而自由基的产生是不可避免的。自由基过度积累或缺乏氧化酶势必造成附睾氧化应激,引起精子质膜及其DNA发生氧化损伤,极大地影响精子运动和受精能力,从而造成公畜繁殖能力的下降。谷胱甘肽过氧化酶家族（GPx）的主要功能是维持公畜生殖道内自由基正常水平,能够有效保护精子。因此,本研究以绵羊为研究模型,探讨GPx5基因在绵羊附睾上的时空表达特性及雄激素对绵羊附睾GPx5基因表达的影响,并在体外构建绵羊附睾上皮细胞系,在细胞水平上对GPx5基因的表达模式进行研究。利用RNAi技术,在转录水平上初步鉴定GPx5基因的抗氧化机制。本研究成果一方面可以从分子水平上诠释GPx5时空特异性表达调控的机制,另一方面可以为组织特异表达基因的分子调控机制的研究提供新思路,同时可丰富家畜繁殖生理学的分子调控理论。经上述试验,得到如下研究结果：1.采用荧光定量PCR技术、免疫印迹技术及免疫荧光法检测GPx5基因在不同发育期绵羊附睾不同部位上的mRNA和蛋白水平表达及分布定位。荧光定量PCR结果表明,8月龄羊附睾头部GPx5基因mRNA表达量显着高于体部和尾部（P<0.05）;同时其表达量显着高于2月龄羊和5岁羊附睾头部（P<0.05）。经RT-PCR鉴定,绵羊精子上表达GPx5基因。免疫印迹结果表明,2月龄羊附睾中未检测到GPx5蛋白表达；在8月龄羊附睾不同部位均有表达,而5岁羊附睾头部和体部表达,尾部无表达。进一步,灰度分析结果表明,8月龄羊附睾头部GPx5表达量显着高于其它部位（P<0.05）,且表达量也显着高于5岁羊附睾头部（P<0.05）。免疫荧光结果表明,在2月龄羊附睾未检测到GPx5蛋白表达信号；8月龄羊附睾不同部位均有荧光信号表达,且头和体部荧光强度明显高于附睾尾部,同时在附睾管液体中也发现有荧光信号；5岁羊附睾头部和体部有荧光信号,且荧光信号遍布于附睾管假复层上皮细胞的细胞核和细胞质中；附睾精子膜上检测到荧光信号。GPx5基因mRNA在绵羊不同发育时期附睾中均有表达,但在附睾不同部位表达确有差异；GPx5蛋白在附睾管假复层上皮细胞内表达,但2月龄羊和5岁羊附睾尾部不表达,由此推测,GPx5的蛋白表达与绵羊性机能发育有密切关联。2.利用酶联免疫吸附（ELISA）、实时荧光定量PCR和免疫印迹法,研究雄激素对绵羊附睾特异性表达基因GPx5的影响。ELISA结果表明,用丙酸睾酮处理公羊后其血清、附睾的二氢睾酮（DHT）、雄激素受体（AR）及附睾睾酮（T）含量均显着提高（P<0.05）；实时荧光定量PCR结果表明,丙酸睾酮处理组与对照组相比,GPx5mRNA表达量显着提高（P<0.05）；免疫印迹结果表明,处理组附睾GPx5蛋白表达量显着高于对照组（P<0.05）。由此推测,绵羊附睾特异性基因GPx5的表达受雄激素的调控。3.采用机械剪切结合酶消化法,成功建立了绵羊附睾上皮细胞系,体外生长时呈扁平不规则多角,细胞生长曲线呈“S”型。采用RT-PCR法和免疫荧光法,检测附睾上皮细胞GPx5基因mRNA和GPx5、角蛋白（CK18）表达。免疫荧光结果显示,细胞间紧密相连形成单层膜,呈现鹅卵石样排列；上皮细胞中均检测到CK18和GPx5蛋白的荧光信号。经RT-PCR鉴定,绵羊附睾上皮细胞表达GPx5基因。4.采用RNA干扰和重组腺病毒技术,沉默绵羊附睾上皮细胞GPx5基因表达,再用Ad5/F35MaxTM重组腺病毒系统,将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒基因组的包装质粒共转染包装细胞,借助Cre/loxP系统的作用重组产生腺病毒。将设计好的寡聚GPx5 shRNA经退火复性后插入穿梭质粒pHBAd-U6-Scramble-CMV-GFP中。设计3组靶向GPx5基因shRNA干扰序列,并分别构建3组GPx5 shRNA1、GPx5 shRNA2、GPx5 shRNA3腺病毒载体,并转染HEK293细胞,通过包装、扩增后产生干扰重组腺病毒AD-GPx5 shRNA 1、AD-GPx5 shRNA2、AD-GPx5 shRNA3, TCID50法测定其滴度分别为1×1010PFU/ml、1.26x1010PFU/ml,1.58×1010PFU/ml。用AD-GPx5 shRNA感染上皮细胞（MOI=100）,实时定量PCR检测表明,在病毒感染24 h和36h,绵羊附睾上皮细胞中GPx5 mRNA表达量在AD-GPx5 shRNA1、AD-GPx5 shRNA2和AD-GPx5 shRNA3感染后分别显着下调了42%、40%、44%和65%、75%、73%（P<0.05）,其中AD-GPx5 shRNA2和AD-GPx5 shRNA3的干扰效果最佳,检测SOD活力,细胞GSH含量结果表明AD-GPx5 shRNA2组与AD-GFP组相比较显着提高（P<0.05）。因此在后续的试验中可用AD-GPx5 shRNA2干扰载体,并且GPx5基因表达量减少引起其他氧化因子的增多。
朱倩[6]（2016）在《SET蛋白调节精原细胞和精母细胞增殖和凋亡》文中指出研究背景和目的：精子发生是一个精巧而复杂的过程,哺乳动物的精子发生主要分为3个阶段：精原细胞的自我更新和分化,精母细胞减数分裂以及精子形成。精子发生受多种因素的精细调节以确保把正确的基因和表观遗传信息传给子代,包括激素、蛋白因子以及miRNAs的调节。在生精小管中生精细胞凋亡是生精细胞固有的特征,研究发现在小鼠的睾丸中有2次凋亡高峰期,即原始生殖细胞迁移到生殖腺嵴和开始第一波精子发生的时候。并且在正常的精子发生过程中一半以上的生精细胞发生凋亡。在正常精子发生中,生精细胞凋亡发挥着重要的作用,它能够维持生精细胞的数量,去除有缺陷的生精细胞。但是异常的凋亡将影响精子发生,引起生育障碍。SET基因是原癌基因,可产生两种蛋白：模板活化因子-1a （TAF-1a）和SET/TAF-1β,两者氨基端的氨基酸不同,而SET/TAF-1β亚型发挥SET蛋白的主要生物学作用。SET蛋白的功能极为丰富,包括细胞周期、细胞增殖凋亡、DNA修复、基因转录以及表观遗传等多个生物过程。研究还发现SET表达于卵巢卵泡膜细胞和卵母细胞,参与卵巢雄激素的生成和卵母细胞的发育。本课题组前期研究发现,SET蛋白主要表达于生精小管中的精原细胞和精母细胞以及睾丸间质细胞,在支持细胞中也有低表达,提示SET蛋白调节精子发生以及睾丸间质细胞雄激素的生成。综上, SET蛋白作为睾丸内局部表达的因子,可能参与调节精子发生。为验证上述假说,本研究以精原细胞株和精母细胞株为模型,干涉细胞中的SET蛋白表达,研究SET蛋白对精原细胞和精母细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。材料与方法：（1） 含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液在37℃、5%C02条件下培养小鼠精原细胞GC-1 spg和精母细胞GC-2spd。实验分2组：对照组转染无关序列腺病毒（AdH1-siRNA/NS）;实验组转染SET干涉腺病毒（AdH1-siRNA/SET）.（2） 免疫荧光和共聚焦激光扫描显微镜检测SET蛋白在GC-1 spg和GC-2 spd细胞中的表达与定位。（3） AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET感染GC-1 spg和GC-2 spd细胞48h,蛋白印迹（Western Blot）方法检测转染前后SET蛋白的表达,验证SET干涉腺病毒的效率。（4） GC-1 spg和GC-2 spd细胞转染AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET后48h,细胞计数试剂盒-8（CCK8）检测细胞活率。（5） 体外培养GC-1 spg和GC-2 spd细胞,转染AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET后48h,5一溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法检测细胞增殖情况。（6） GC-1 spg和GC-2 spd细胞转染AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET后48h,流式细胞仪检测细胞周期的变化；（7） GC-1 spg和GC-2 spd细胞转染AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET后72h,流式细胞仪检测细胞凋亡。（8） GC-1 spg和GC-2 spd细胞转染AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET后48h和72h,提取细胞总蛋白,Western Blot检测细胞增殖和凋亡的相关因子AKT、p-AKT （T308）、p-AKT （S473）、caspase3、cleaved-caspase3、Bax、Bcl2、 caspase9、cleaved-caspase9、caspase8、cleaved-caspase8的变化。（9） 统计学方法：采用SPSS2统计学20.0统计软件进行数据处理与分析,采用独立样本t检验比较两组间差异,以均数±标准差（x±s）表示,P<0.05为差异具有统计学意义。结果：（1） SET蛋白表达于GC-1 spg和GC-2 spd细胞的胞核和胞浆中,且胞浆多于胞核。（2） GC-1 spg和GC-2 spd细胞转染AdH1-siRNA/NS和AdH1-siRNA/SET后48h,在对照组相对,GC-1 spg细胞和GC-2 spd细胞干涉组SET蛋白分别降低了55%（**P<0.01）和50%（*P<0.05）,表明SET干涉腺病毒是有效的。（3） 降低SET蛋白表达后,与对照组相比,GC-1 spg和GC-2 spd细胞活率,分别减少了80%（**P<0.01）%和50%（**P<0.01）。（4） 降低SET蛋白表达后,与对照组相比,GC-1 spg和GC-2 spd细胞增殖分别减少了11%（*P<0.05）和15%（**P<0.01）。（5） 降低SET蛋白表达后,与对照组相比,GC-1 spgd的S期减少了7%（**P<0.01）,G2/M期增加了40%（**P<0.01）; GC-2 spd的S期减少了18%（*P<0.05）,G0/G1期增加了11%（**P<0.01）,G2/M期增加了65%（*P<0.05）。（6） 降低SET蛋白表达后,与对照组相比,GC-1 spg和GC-2 spd细胞凋亡率分别增加了1.5倍（**P<0.01）和5倍（**P<0.01）。（7） 降低SET蛋白表达后,与对照组相比,GC-1 spg细胞和GC-2 spd细胞干涉组cleaved-caspase3分别增加了2.3倍（*P<0.05）和1.6倍（*P<0.05）,Bcl2/Bax分别减少了60%（*P<0.05）和50%（**P<0.01）,cleaved-caspase9分别增加了40%（*P<0.05）和33%（**P<0.01）,cleaved-caspase8分别增加了2.2倍（*P<0.05）和1-8倍（*P<0.05）, p-AKT （S473）/AKT分别减少了25%（*P<0.05）和40%（**P<0.01）。结论。（1） 降低小鼠精原细胞中的SET蛋白表达,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。其机制是SET蛋白特异性抑制AKT （S473）磷酸化,下调AKT信号通路,激活内源性和外源性凋亡信号通路。（2） 降低小鼠精母细胞中的SET蛋白表达,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。其机制也是通过特异性抑制AKT （S473）磷酸化,下调AKT信号通路,激活内源性和外源性凋亡信号通路。（3） 这些结果提示SET蛋白是调节精原细胞和精母细胞增殖和凋亡的重要因子,是调节精子发生的重要局部调节因子。（4） 本研究证明SET蛋白是调节生精细胞增殖和凋亡的重要局部调节因子,深入研究SET蛋白在精子发生中的作用有利于我们进一步理解男性少弱畸精子症的发生机制,对于临床男性不育症的治疗具有重要意义。
顾挺[7]（2016）在《双酚A对雄激素调节小鼠焦虑和抑郁行为的影响》文中指出双酚A（Bisphenol A, BPA）作为一种最具有代表性的酚类环境内分泌干扰物,广泛用于生产碳酸聚酯、环氧树脂、杀真菌剂、抗氧化剂和食品包装材料等。BPA具有弱雌激素、抗雌激素和抗雄激素活性,可以通过食品、饮料、皮肤接触等途径进入人体,影响成年脑的突触可塑性和多种神经行为。前期研究发现长期BPA暴露能够性别特异性地影响成年小鼠焦虑和抑郁行为,主要为对雄鼠的影响,表现促进其焦虑和抑郁状态,对雌鼠的影响较小。由于雄激素参与调控成年动物的情绪,推测BPA对雄性焦虑抑郁行为的影响可能涉及雄激素相关机制。雄激素主要依赖脑内雄激素受体（Androgen Receptor, AR）调节雄性动物的情绪及情感反应。新生雄鼠注射雄激素受体（AR）拮抗剂氟他胺后,在青春前期的强迫游泳和蔗糖偏好实验中均表现出明显的抑郁情绪。研究发现人类焦虑抑郁等情绪疾病与一些脑区特别是海马、杏仁核的结构和功能异常密切相关。中枢神经系统（central nervous system, CNS）内广泛分布的抑制性神经递质γ-氨基丁酸（y-amino-butylic acid, GABA）参与情绪、精神分裂以及药物成瘾等病症,其中GABA（A）亚型受体（GABAA-2aR）在海马和杏仁核脑区高度表达,与焦虑和抑郁密切相关。GABAA-2aR基因敲除的雄性小鼠在强迫游泳和悬尾实验中更容易表现出抑郁样状态。MAPK/ERKs信号通路既是睾酮和雌二醇发挥其非基因组效应的主要途径,也是参与学习记忆和情绪反应的主要信号通路。双氢睾酮（Dihydrotestosterone, DHT）或睾酮（Testosterone, T）可经MAPK/ERKs信号通路促进海马CA3区神经元树突棘密度,而经典AR抑制剂可以阻断这一过程。睾酮及其代谢产物也可激活与情绪及情感相关脑区ERK1/2通路,从而影响情感障碍的发生及治疗。本研究先建立去势雄鼠模型,分析BPA影响雄性动物焦虑和抑郁样行为是否与其抗雄作用有关。再进一步探讨BPA影响雄激素调节雄鼠焦虑抑郁行为的可能机制。我们设想BPA通过影响AR、GABAA-2αR的表达进而干扰内源性雄激素对焦虑抑郁行为的影响,ERK 1/2信号通路也可能参与了这一过程的调节。内容：建立去势动物模型,通过对成年雄鼠长期BPA染毒,观察BPA暴露对睾丸摘除和摘除后丙酸睾酮（Testosterone Propionate, TP）补充的成年雄性小鼠自发活动、焦虑、抑郁等行为的影响；BPA暴露对睾丸摘除和TP补充的成年雄性小鼠血清和脑内睾酮含量变化的影响；BPA暴露对海马和杏仁核脑区AR、GABAA-2αR及ERK1/2磷酸化水平（p-ERK1/2）的影响。方法：清洁级8周龄ICR雄性小鼠适应环境1W后,进行假手术和去势手术。待术后恢复2W,将其分组给予药物处理。假手术组为Sham、Sham+BPA 0.4 mg/kg/d、Sham+BPA 4 mg/kg/d;去势组为GDX、GDX+BPA 0.4 mg/kg/d、 GDX+BPA 4mg/kg/d、GDX+TP（TP为0.5 mg/kg/d）、GDX+TP+BPA 0.4 mg/kg/d)、 GDX+TP+BPA 4 mg/kg/d。颈背部皮下注射给药45d后进行相关行为测试。应用旷场、高架十字迷宫、强迫游泳模型观察BPA暴露对各组小鼠自发活动、焦虑、抑郁等行为的影响。选未进行行为检测的小鼠,一部分运用放射免疫法检测其血清和脑内睾酮含量：另一部分取其双侧海马和杏仁核,运用Western blot检测这两个脑区内AR、GABAA-2αR、ERK1/2及其磷酸化蛋白表达。结果：1.与假手术对照组相比,去势后小鼠的血清和脑内睾酮水平均明显降低（均p<0.001）；但是去势小鼠在外源TP补充之后睾酮含量明显升高（均p<0.001）。0.4及4 mg/kg/day BPA显着降低假手术小鼠的血清和脑内睾酮水平（0.4mg/kg/day:p<0.05; 4mg/kg/day:p<0.01）,但对去势小鼠睾酮含量影响不大；然而,BPA（0.4mg/kg/day）与TP共处理部分消除了TP对去势小鼠血清和脑内睾酮含量升高作用（均p<0.05）。2.行为检测结果：1)旷场行为发现,与假手术对照组相比,去势并没有改变小鼠在旷场行为中的5min跑动格数、理毛次数、站立次数和中央区停留时间百分比；此外,BPA暴露和TP外源补充也没有明显改变小鼠的上述行为指标。以上结果表明去势或长期BPA暴露都不影响小鼠的自发活动性和在新环境中的探究能力。2)高架十字迷宫实验发现,与假手术对照组相比,去势小鼠在高架十字迷宫内的探头次数和开放臂停留时间百分比显着减少（p<0.001；p<0.05）,该作用可被外源TP补充逆转（p<0.001；p<0.01）,表明雄激素的缺乏是导致焦虑行为出现的主要原因。BPA在0.4和4mg/kg/d这两个剂量暴露均能显着缩短正常小鼠在开放臂的停留时间百分比（p<0.01；p<0.001）。BPA（4mg/kg/d）单独给药仅减少了去势小鼠的总进入次数（p<0.001）；但当BPA与TP共处理后,与TP补充的去势组相比,去势小鼠的开放臂时间百分比、探头次数及总进入次数均显着减少（p<0.01；p<0.01；p<0.01）。综上结果提示BPA可以通过抑制雄激素对雄鼠的抗焦虑作用。3)强迫游泳实验发现,去势后小鼠在强迫游泳时的静止不动时间显着延长（p<0.001）,该作用可以由TP补充得到一定的缓解（p<0.05）。BPA并不改变去势小鼠的静止不动时间,但增加了假手术组（0.4mg/kg/d,p<O.01; 4mg/kg/d,p<0.001）和TP补充组（0.4mg/kg/d,p<0.05）小鼠在强迫游泳的静止不动时间,提示BPA能够抑制雄激素的抗抑郁作用。3. Western blot实验发现,与假手术对照组相比,去势显着下调小鼠海马脑区AR和GABA（A）a2R蛋白表达（p<0.05；p<0.001）,这一作用在TP补充后均得到了逆转。BPA长期暴露能够显着下调假手术组和TP补充组小鼠的海马／AR （4 mg/kg/day,p<0.05）和 GABAA-2αR （0.4 mg/kg/day,p<0.01; 4 mg/kg/day,p<0.05）蛋白表达,但不影响去势组小鼠相关蛋白的表达。同时,4 mg/kg/d BPA也减少了假手术组和TP补充组小鼠海马p-ERK1/2（p<0.05; p<0.01）,但各组ERK1/2总蛋白表达均无显着差异。与海马脑区相似,我们发现BPA暴露后小鼠杏仁核脑区内相关蛋白的表达情况亦是如此。结论：BPA能性别特异性地影响雄性小鼠焦虑抑郁行为与其对雄激素的干扰作用有关。该作用可能与血清和脑内睾酮水平降低、海马及杏仁核AR、GABA（A）a2R表达的减少有关,ERK 1/2信号通路也可能参与了这一过程的调节。
张国林,李振,高晋生,曹宁贤,张春香[8]（2013）在《附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶基因调控的研究进展》文中进行了进一步梳理附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶（epididymal specific glutathione peroxidase,GPx5）可保护精子免受氧化应激,维持精子遗传信息的完整性,促进精子发育成熟,其重要生理功能在提高动物繁殖力上有着不可替代的作用,但其基因调控转录表达的机制尚不明确。现作者主要对基因表达特性、表达调控和转录调控等内容进行综述。
黄丽波[9]（2013）在《GnRH、GTH、GH及其受体在山羊垂体—卵巢轴中的发育性变化》文中提出促性腺激素（GTH）、促性腺激素释放激素（GnRH）、生长激素（GH）及Ghrelin在哺乳动物的生殖调控中起着关键作用，其生理调控作用主要是通过与相应的受体FSHR、LHR、GnRHR、GHR结合来介导完成。因此，研究这些激素和受体在生后发育过程中垂体、卵巢内的表达与分布情况，是理解其在生殖发育调控中如何影响垂体-卵巢轴作用机理的基础。本试验以D0-D180日龄的雌性济宁青山羊为研究对象，采用免疫组织化学、RT-PCR和Western-blot方法研究从出生至性成熟（D0-D180）过程中垂体-卵巢轴中这些激素和受体表达定位以及mRNA表达规律，结果表明：D0-D180日龄血清中雌激素（E2）含量差异显着，孕激素变化趋势与E2相近，含量均以D0为多，D30显着下降，在D90和D180分别出现两个峰值，P是D120骤然上升。FSH在D0、D90有所升高；LH变化趋势基本同E2，在D90出现峰值。P的峰值出现是在LH之后，符合LH在促进排卵后，刺激P分泌的生理规律。而E2、FSH、LH含量在D90时处于高峰，可能是济宁青山羊发情早的原因之一。垂体内FSH、LH、Ghrelin、GnRH、GnRHR、GH、GHR、AR阳性细胞及其mRNA在D0-D180日龄山羊腺垂体内均有分布和表达，阳性细胞呈区域状分布，随着日龄增长阳性区域也增大。垂体细胞内GH、Ghrelin与LH分布特点和mRNA变化趋势相同，以D60显着高于其他月龄（p<0.05），其次是D30、D90，提示在D30-90阶段垂体细胞通过大量合成分泌这些激素，调控垂体自身及卵巢等器官的功能活动，这可能是济宁青山羊性成熟早的物质基础。垂体和卵巢GnRHR、GHR、AR mRNA表达量在D60-D180间变化不大，提示受体含量在生后发育至性成熟阶段是相对恒定的，真正影响功能发挥的是取决于其相应激素含量和分布位置。在垂体和卵巢内有Ghrelin、GnRH免疫阳性细胞和mRNA表达，可能是源于垂体和卵巢对Ghrelin、GnRH的“需求”，并通过自身细胞以自分泌或旁分泌的方式来产生。AR阳性细胞的存在说明垂体和卵巢细胞也接受雄激素的调控，AR在垂体是D60阶段高表达，与绵羊相同；而AR在卵巢随着卵泡发育，在基质细胞和颗粒细胞内表达量增多。FSHR、LHR、Ghrelin、GHR阳性细胞在各月龄山羊的卵巢内分布位置因日龄不同而呈现较大差异。特别是在刚出生的D0阶段存在明显差异。在刚出生时集中分布在不规则原始卵泡的卵母细胞内，但随月龄增长，是在少数次级卵泡上存在，D30-180阶段常在1-2个生长卵泡上分布。当次级卵泡发生闭锁，则可在卵泡壁上见有环形排列的Ghrelin、GHR阳性细胞均匀分布。卵巢内动脉管壁的平滑肌上呈GHR、FSHR、LHR、GnRHR、GnRH阳性，而Ghrelin在动脉管壁周围的结缔组织呈强阳性。几种物质的mRNA表达量与组化结果变化趋势基本相近，结论：垂体内的FSH、LH、GH、Ghrelin、GnRH、GnRHR在生后发育过程中阳性细胞分布及mRNA表达量与生长阶段密切相关，几种激素可能协同调控垂体自身及卵巢等器官的功能活动。FSHR、LHR、Ghrelin、GnRHR、GHR在卵巢内分布的差异性说明其对于卵泡发育过程中调控随机体生长而异，其细胞内的mRNA是否表达相应的蛋白与卵泡发育相关联。垂体和卵巢还可以通过自身细胞以自分泌或旁分泌的方式产生Ghrelin、GnRH。
范丽娜,周玲玲,李岩,李兴明,梁杜,赵宗胜,鲁平,廖和荣[10]（2012）在《AR、ER基因在鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织中的表达及其对睾丸生长发育的影响》文中认为为探讨鸡（♂）与鹌鹑（♀）属间杂交种睾丸生长发育不良的分子机理,采集新罗曼蛋用型公鸡、朝鲜公鹌鹑、鸡与鹌鹑杂交的雄性杂交种不同发育时期的睾丸组织样共计96份并测定其体质量与睾丸质量。采用实时荧光定量PCR对公鸡、公鹌鹑及其杂交种不同生长发育期睾丸组织中AR、ER基因的mRNA表达进行了检测。结果显示:（1）鸡和鹌鹑的睾丸均能随着日龄、体质量的增长而正常生长发育,但鸡与鹌鹑杂交的杂交种的睾丸却生长缓慢而发育不良;（2）鸡和鹌鹑不同生长发育期睾丸组织中AR、ER基因mRNA的表达具有相似性,AR基因均有一个极显着的峰值,ER基因均呈波动性变化;鸡与鹌鹑的杂交种均为极端性表达,AR基因呈直线下降,ER相反则一直升高;与鸡和鹌鹑相比,杂交种AR、ER基因mRNA的极端性表达均应为异常表达。（3）鸡、鹌鹑及其杂交种的共同点是AR表达为最高峰时,ER则趋于最低点,反之,ER表达为最高峰时,AR则趋于最低点,表明ER基因对AR基因具有上调作用或者AR基因对ER基因具有下调作用,从而推测AR与ER即相对立而又协同作用的表达模式是鸡和鹌鹑睾丸组织正常生长发育的分子调控模式,探明了鸡与鹌鹑的杂交种睾丸组织发育不良的分子影响因素是其睾丸组织中的AR、ER基因mRNA异常表达。
二、EXPRESSION OF ANDROGEN RECEPTOR IN THE DEVELOPING RAT EPIDIDYMIS AND ITS REGULATION BY ANDROGENS（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、EXPRESSION OF ANDROGEN RECEPTOR IN THE DEVELOPING RAT EPIDIDYMIS AND ITS REGULATION BY ANDROGENS（论文提纲范文）
（1）GPx5在骆驼附睾上的时空表达研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 附睾的概述 |
| 1.2 附睾的功能 |
| 1.3 附睾蛋白分泌特点 |
| 1.4 附睾氧化应激 |
| 1.4.1 精子与活性氧 |
| 1.4.2 附睾中的主要抗氧化剂 |
| 1.5 附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPx5) |
| 1.5.1 附睾特异谷胱甘肽氧化物酶的结构 |
| 1.5.2 谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPx5)的作用 |
| 1.5.3 GPx5表达特性 |
| 1.5.4 GPx5表达调控 |
| 1.5.5 GPx5基因的功能研究 |
| 1.5.6 GPx5和顶体反应的关系 |
| 1.6 研究目的和意义 |
| 2 技术路线 |
| 3 实验材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 主要实验试剂 |
| 3.3 主要仪器 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 总RNA的提取 |
| 3.4.2 总RNA反转录 |
| 3.4.3 目的基因荧光定量PCR |
| 3.4.4 总蛋白的提取 |
| 3.4.5 Western Blot |
| 3.4.6 石蜡切片 |
| 3.4.7 免疫组化 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 组织总RNA电泳检测 |
| 4.2 RT-qPCR产物检测 |
| 4.3 GPx5与GAPDH基因RT-qPCR结果 |
| 4.4 GPx5基因的时空表达特异性 |
| 4.5 蛋白浓度测定 |
| 4.6 GPx5蛋白在不同年龄骆驼附睾上的表达 |
| 4.7 GPx5蛋白在不同年龄骆驼附睾上的定位 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 7 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（2）龟板酊调控Wnt/β-catenin信号诱导毛囊干细胞防治雄激素性脱发（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 雄激素性脱发的研究进展 |
| 一、雄激素性脱发的概述 |
| 二、雄激素性脱发的发病机制 |
| 三、雄激素性脱发的治疗进展 |
| 四、雄激素性脱发护理的研究进展 |
| 第二节 龟板有效成分的研究进展 |
| 第三节 通过Wnt/β-catenin信号通路调控毛囊干细胞(HFSCs)对毛发的作用 |
| 第四节 研究思路 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 龟板酊对雄激素性脱发模型小鼠的疗效观察 |
| 一、龟板酊对雄激素性脱发模型小鼠毛发生长情况的观察 |
| 二、龟板酊对雄激素性脱发模型小鼠毛囊的影响 |
| 第二节 龟板酊调控Wnt/β-catenin信号促雄激素性脱发模型小鼠毛发生长 |
| 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（3）哺乳动物附睾特异GPx5功能及其调节机制的研究进展（论文提纲范文）
| 1 GPx5基因的结构与定位 |
| 2 GPx5基因的表达特性 |
| 2.1 GPx5基因表达的种属差异性 |
| 2.2 GPx5基因表达的时空特异性 |
| 3 GPx5基因的功能研究 |
| 3.1 GPx5基因的抗氧化作用 |
| 3.2 GPx5基因与精子活力的关系 |
| 3.3 GPx5基因与顶体反应的关系 |
| 4 GPx5基因的调节机制 |
| 5 展望 |
（4）不同发育期白牦牛睾丸蛋白质组学分析及生殖相关候选基因HSP60生物学研究（论文提纲范文）
| 缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 1 牦牛相关研究进展 |
| 1.1 牦牛的基础研究 |
| 1.2 雄性牦牛的繁殖生理 |
| 1.3 雌性牦牛繁殖生理 |
| 2 蛋白质组学研究进展 |
| 2.1 蛋白质组学技术与方法 |
| 2.2 蛋白质组学在畜牧业中的研究进展 |
| 2.3 蛋白质组学在动物睾丸发育研究中的应用 |
| 3 支持细胞研究进展 |
| 3.1 支持细胞结构、功能及所在的内环境 |
| 3.2 支持细胞增殖的分子机制 |
| 3.3 支持细胞体外培养的意义 |
| 4 热休克蛋白研究进展 |
| 4.1 热休克蛋白分类及功能 |
| 4.2 热休克蛋白60研究进展 |
| 4.3 热休克蛋白60在生殖领域的研究进展 |
| 5 研究的目的和意义 |
| 第二章 天祝白牦牛性成熟前后睾丸差异蛋白质组学研究 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同发育期白牦牛睾丸 2-DE图谱 |
| 2.2 不同发育期差异蛋白点质谱鉴定结果 |
| 2.3 差异蛋白质GO分析结果 |
| 2.4 差异蛋白亚细胞定位分析 |
| 2.5 差异蛋白的western blotting验证 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 天祝白牦牛HSP60基因的克隆及其在下丘脑-垂体-睾丸中的表达定位研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.4 数据统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 白牦牛HSP60基因全长cDNA克隆及测序 |
| 2.2 白牦牛HSP60蛋白理化性质及结构预测 |
| 2.3 白牦牛HSP60的疏/亲水性预测及分析 |
| 2.4 白牦牛HSP60蛋白氨基酸二级结构和磷酸化位点预测 |
| 2.5 白牦牛HSP60蛋白高级结构的分析 |
| 2.6 白牦牛与其他物种间HSP60氨基酸序列比较分析 |
| 2.7 HSP60mRNA在白牦牛性腺轴中的表达 |
| 2.8 Western Blotting验证HSP60蛋白在白牦牛性腺轴的表达 |
| 2.9 HSP60阳性细胞在白牦牛性腺轴的分布定位 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 HSP60对天祝白牦牛原代培养的支持细胞增殖的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 1.3 白牦牛睾丸支持细胞的原代培养及纯化 |
| 1.4 白牦牛睾丸支持细胞的鉴定 |
| 1.5 靶向HSP60基因siRNA合成及转染 |
| 1.6 靶向HSP60基因过表达载体pIRES2-EGFP-hsp60构建、鉴定及转染 |
| 1.7 MTS法测定细胞增殖 |
| 1.8 荧光定量检测Cyclin D1和PCNA基因的表达 |
| 1.9 数据统计与分析 |
| 2 结果和分析 |
| 2.1 白牦牛支持细胞的原代培养 |
| 2.2 支持细胞的鉴定 |
| 2.3 过表达载体pIRES2-EGFP-HSP60的构建及效果检测 |
| 2.4 siRNA-HSP60的合成及沉默效果检测 |
| 2.5 过表达HSP60基因对白牦牛原代支持细胞增殖的影响 |
| 2.6 沉默HSP60基因对白牦牛原代支持细胞增殖的影响 |
| 2.7 过表达HSP60基因对支持细胞Cyclin D1和PCNA基因的影响 |
| 2.8 沉默HSP60基因对支持细胞Cyclin D1和PCNA基因的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文结论及展望 |
| 1 结论 |
| 2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 个人简介 |
| 附表 |
| 1、HSP60核苷酸和氨基酸序列 |
| 2、GO功能分类 |
| 2.1 分子功能 |
| 2.2 生物学过程 |
| 2.3 细胞组份 |
（5）绵羊附睾GPx5基因表达调控的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 附睾功能基因表达特征 |
| 1.1.1 区域特异性 |
| 1.1.2 雄激素调控附睾特异表达基因 |
| 1.2 附睾氧化应激 |
| 1.3 谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPx5) |
| 1.3.1 绵羊附睾GPx5表达特性 |
| 1.3.2 绵羊附睾GPx5表达调控 |
| 1.4 附睾上皮细胞的培养与鉴定 |
| 1.4.1 细胞培养 |
| 1.4.2 附睾上皮细胞培养 |
| 1.4.3 上皮细胞的标志一角蛋白 |
| 1.5 基因功能研究技术 |
| 1.5.1 RNA干扰研究进展 |
| 1.5.2 RNAi的特征及方法 |
| 1.5.3 腺病毒载体的优缺点 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 2 GPx5在绵羊附睾组织中的时空表达特性 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 实验动物及组织处理 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 总RNA的提取 |
| 2.2.2 cDNA的合成 |
| 2.2.3 目的基因荧光定量PCR |
| 2.2.4 总蛋白的提取 |
| 2.2.5 目的蛋白和内参蛋白免疫印迹试验 |
| 2.2.6 免疫印迹和显影 |
| 2.2.7 免疫荧光试验 |
| 2.2.8 数据处理及分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 质检总RNA及RT-PCR检测 |
| 2.3.2 实时荧光定量的结果 |
| 2.3.3 GPx5基因的时空特异表达分析 |
| 2.3.4 免疫印迹结果 |
| 2.3.5 免疫荧光结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 外源雄激素促进绵羊附睾GPx5基因的表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.0 试验动物及组织样品采集 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 血清及附睾头部组织T、DHT测 |
| 3.1.4 附睾头部AR的测定 |
| 3.1.5 附睾头部总RNA的提取 |
| 3.1.6 目的基因荧光定量试验 |
| 3.1.7 免疫印迹 |
| 3.1.8 统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 绵羊血清及附睾T、DHT含量 |
| 3.2.2 丙酸睾酮处理后对绵羊附睾GPx5基因及AR mRNA的相对表达 |
| 3.2.3 丙酸睾酮处理后对绵羊附睾AR及GPx5基因蛋白相对表达 |
| 3.3 讨论 |
| 4 绵羊附睾上皮细胞的培养与鉴定 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 |
| 4.1.3 附睾上皮细胞的分离培养 |
| 4.1.4 上皮细胞与成纤维细胞的分离纯化 |
| 4.1.5 细胞生长曲线的绘制 |
| 4.1.6 附睾上皮细胞的鉴定 |
| 4.1.7 RT-PCR检测GPx5基因在附睾上皮细胞上的表达 |
| 4.1.8 GPx5蛋白在附睾上皮细胞的定位 |
| 4.1.9 细胞的冻存与复苏 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.0 附睾上皮细胞形态观察 |
| 4.2.1 附睾上皮细胞的纯化传代 |
| 4.2.2 附睾上皮细胞的生长曲线 |
| 4.2.3 附睾上皮细胞角蛋白CK18的鉴定 |
| 4.2.4 RT-PCR检测GPx5基因在附睾上皮细胞上的表达 |
| 4.2.5 附睾上皮细胞GPx5的定位 |
| 4.2.6 附睾上皮细胞的冷冻与复苏 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 附睾上皮的分离与培养 |
| 4.3.2 上皮细胞的纯化及鉴定 |
| 4.3.3 附睾上皮细胞GPx5基因的表达 |
| 4.3.4 附睾上皮细胞的冷冻与复苏 |
| 5 靶向绵羊GPx5基因的shRNA重组干扰腺病毒的制备及鉴定 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 细胞和质粒 |
| 5.1.2 实验试剂及仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 GPx5-shRNA的构建 |
| 5.2.2 目的细胞腺病毒的感染 |
| 5.2.3 检测GPx5 mRNA和蛋白表达量 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 酶切鉴定及测序分析结果 |
| 5.3.2 GPx5 shRNA感染性滴度检测结果 |
| 5.3.3 腺病毒感染附睾上皮细胞 |
| 5.3.4 Ad-GPx5 shRNA1、Ad-GPx5 shRNA2、Ad-GPx5 shRNA3干扰效率的RT-QPCR检测 |
| 5.3.6 氧化指标的测定 |
| 5.4 讨论 |
| 6 结论 |
| 6.1 主要研究结果 |
| 6.2 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（6）SET蛋白调节精原细胞和精母细胞增殖和凋亡（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略语名词对照 |
| 攻读硕士学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（7）双酚A对雄激素调节小鼠焦虑和抑郁行为的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1 双酚A概述及其对人类和动物体的毒性作用 |
| 2 雄激素与焦虑抑郁的关系 |
| 3 双酚A暴露对焦虑抑郁行为的影响 |
| 4 雄激素受体、GABAA-2α受体及ERK1/2信号通路与焦虑抑郁行为 |
| 5 本研究的目的及意义 |
| 第二章 双酚A暴露对成年雄鼠雄激素水平和焦虑抑郁行为的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 试剂和器材 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 去势模型建立 |
| 3.2 动物分组及药物处理 |
| 3.3 睾酮水平检测 |
| 3.4 行为学测试 |
| 3.4.1 旷场行为(OFT) |
| 3.4.2 高架十字迷宫(EPM) |
| 3.4.3 强迫游泳(FST) |
| 3.5 数据统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 血清和脑内睾酮含量 |
| 4.1.1 血清睾酮含量 |
| 4.1.2 脑内睾酮含量 |
| 4.2 行为学检测 |
| 4.2.1 旷场行为 |
| 4.2.2 高架十字迷宫 |
| 4.2.3 强迫游泳 |
| 5 讨论 |
| 第三章 双酚A暴露对小鼠相关脑区雄激素受体和GABA受体以及ERK1/2活性的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要仪器和试剂 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 溶液配制 |
| 2.3.2 组织分离及蛋白的提取 |
| 2.3.3 Western Blot实验 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 海马和杏仁核脑区雄激素受体AR的表达 |
| 4.2 海马和杏仁核脑区GABAA-2αR的表达 |
| 4.3 海马和杏仁核脑区ERK1/2信号通路 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（8）附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶基因调控的研究进展（论文提纲范文）
| 1 GPx5的结构与表达特性研究 |
| 1.1 GPx5基因结构与定位 |
| 1.2 GPx5基因表达特性 |
| 2 GPx5表达调控研究 |
| 3 GPx5转录调控分子机制 |
| 4 GPx5敲除模型的建立 |
| 5 小结 |
（9）GnRH、GTH、GH及其受体在山羊垂体—卵巢轴中的发育性变化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 垂体的结构及生理功能 |
| 1.2 哺乳动物 FSH 和 LH 研究进展 |
| 1.2.1 促性腺激素的发现与来源 |
| 1.2.2 促性腺激素细胞的类型 |
| 1.2.3 黄体生成素的结构 |
| 1.2.4 黄体生成素的作用 |
| 1.2.5 卵泡刺激素的结构 |
| 1.2.6 卵泡刺激素的生理作用 |
| 1.2.7 FSH 和 LH 的临床应用 |
| 1.2.8 血清中促性腺激素含量分析 |
| 1.3 FSHR 和 LHR |
| 1.3.1 FSHR 和 LllR 的结构 |
| 1.3.2 FSHR 与 LHR 的信号转导 |
| 1.3.3 FSHR 与 LHR 在组织器官内的分布状况 |
| 1.4 Ghrelin |
| 1.4.1 Ghrelin 结构和调控机理 |
| 1.4.2 Ghrelin. 在组织器官内的分布状况 |
| 1.5 GnRH 与 GnRHR |
| 1.5.1 GnRH 结构及生理作用 |
| 1.5.2 GnRH 在组织器官内的分布 |
| 1.5.3 GnRH 受体 |
| 1.5.3.1 GnRHR 分类和结构 |
| 1.5.3.2 GnRHR 基因 |
| 1.5.3.3 GnRHR 在组织器官分布 |
| 1.6 生长激素的结构与功能 |
| 1.6.1 生长激素的结构与多态性 |
| 1.6.1.1 生长激素的结构 |
| 1.6.1.2 生长激素的生理功能 |
| 1.6.1.2.1 生长激素对糖代谢的影响 |
| 1.6.1.2.2 生长激素与蛋白质、脂肪代谢 |
| 1.6.1.2.3 生长激素的促进生长作用 |
| 1.6.1.2.4 GHRH 对 GH 调节 |
| 1.7 生长激素受体与雄激素受体 |
| 1.7.1 雄激素受体 |
| 1.7.2 生长激素受体(GHR)的结构特点 |
| 1.7.3 生长激素对卵泡生长和成熟的作用 |
| 1.7.4 GHR 在其他组织的分布 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 液体配制 |
| 2.2 菌株和载体 |
| 2.3 主要试剂和仪器 |
| 2.4 主要数据库及生物软件 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.5.1 RNA 的提取 |
| 2.5.2 反转录 cDNA |
| 2.5.3 实时荧光定量 PCR |
| 2.5.4 小量质粒 DNA 制备 |
| 2.5.5 荧光定量 PCR 标准曲线的建立 |
| 2.5.6 Western blot 法检测蛋白 |
| 2.6 试验动物和样品采集 |
| 2.6.1 试验动物 |
| 2.6.2 样品采集 |
| 2.6.3 石蜡组织切片制备 |
| 2.6.4 试验前器材的准备 |
| 2.7 HE 染色 |
| 2.8 免疫组织化学染色 |
| 2.9 外周血中 FSH 和 LH 含量的测定 |
| 2.10 数据统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 生后发育及性周期过程中促性腺激素和性激素变化规律 |
| 3.2 垂体内 FSH、LH 阳性细胞的分布及 mRNA 表达 |
| 3.3 垂体内 GH、GHR 阳性细胞的分布及 mRNA 表达 |
| 3.4 垂体内 GnRHR、GnRH 阳性细胞的分布及 mRNA 表达 |
| 3.5 垂体和卵巢中 AR 的分布及 mRNA 表达 |
| 3.6 垂体和卵巢中 Ghrelin 的分布及 mRNA 表达 |
| 3.7 卵巢内 FSHR、LHR 分布及其 mRNA 差异表达 |
| 3.8 卵巢内 GHR 分布及其 mRNA 差异表达 |
| 3.9 卵巢内 GnRH、GnRHR 的分布及 mRNA 差异表达 |
| 3.10 山羊 LH 、 FSH 、 GnRHR 、 LHR 、 FSHR 、 ERα 、 ERβ 、 PR 、GAPDH mRNA实时荧光定量PCR标准曲线的建立 |
| 3.11 卵巢、垂体内LH、FSH、GnRH、GnRHR、LHR、FSHR、GH、GHR、AR、、Ghrelin、GAPDH的Western Blot分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 生后发育过程中 FSH、LH、E2和 P的分泌 |
| 4.2 生后发育过程中 E2与 FSH 之间的关系 |
| 4.3 不同繁殖性能山羊发情周期中 FSH、LH、E2和 P的分泌规律的比较分析 |
| 4.4 垂体内 FSH、LH 阳性细胞分布的发育性变化 |
| 4.5 GH 与 Ghrelin 细胞分布情况的发育性变化 |
| 4.6 GH 与 GHR 的发育性变化 |
| 4.7 生后发育过程中垂体内 GnRH 与 GH 阳性细胞分布规律分析 |
| 4.8 卵巢内 FSHR、LHR 的分布特点 |
| 4.9 Ghrelin 在卵巢上的分布特点 |
| 4.10 生后发育阶段 AR 在山羊垂体、卵巢中的分布特点 |
| 4.11 垂体和卵巢内 GnRH 与 GnRHR 的分布特点 |
| 4.12 标准曲线建立的意义与应用 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 附录 |
| 8 致谢 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 |
（10）AR、ER基因在鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织中的表达及其对睾丸生长发育的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 睾丸组织的切片制备 |
| 1.4 总RNA提取和反转录 |
| 1.5 目的片段的扩增和标准品的制备 |
| 1.6 实时荧光定量PCR |
| 1.7 荧光定量PCR引物 |
| 1.8 数据分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 鸡、鹌鹑及其杂交种不同日龄睾丸组织的生长发育 |
| 2.2 AR、ER和β-actin基因PCR扩增和克隆质粒测序结果 |
| 2.3 AR基因的表达 |
| 2.4 ER基因的表达 |
| 3 讨论 |
| 3.1 鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织的生长发育 |
| 3.2 AR基因对公鸡、公鹌鹑及其杂交种睾丸组织发育性变化的作用 |
| 3.3 ER基因对鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织发育性变化的作用 |
| 3.4 鸡、鹌鹑及其杂交种不同发育时期睾丸组织中AR、ER基因的mRNA表达 |
四、EXPRESSION OF ANDROGEN RECEPTOR IN THE DEVELOPING RAT EPIDIDYMIS AND ITS REGULATION BY ANDROGENS（论文参考文献）
- [1]GPx5在骆驼附睾上的时空表达研究[D]. 伊茹汗. 内蒙古农业大学, 2020(02)
- [2]龟板酊调控Wnt/β-catenin信号诱导毛囊干细胞防治雄激素性脱发[D]. 钟淑贤. 广州中医药大学, 2020(06)
- [3]哺乳动物附睾特异GPx5功能及其调节机制的研究进展[J]. 栾兆进,张家新. 中国畜牧兽医, 2018(09)
- [4]不同发育期白牦牛睾丸蛋白质组学分析及生殖相关候选基因HSP60生物学研究[D]. 阮崇美. 甘肃农业大学, 2017(12)
- [5]绵羊附睾GPx5基因表达调控的分子机制[D]. 乌亚罕. 内蒙古农业大学, 2016(01)
- [6]SET蛋白调节精原细胞和精母细胞增殖和凋亡[D]. 朱倩. 南京医科大学, 2016(02)
- [7]双酚A对雄激素调节小鼠焦虑和抑郁行为的影响[D]. 顾挺. 浙江师范大学, 2016(02)
- [8]附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶基因调控的研究进展[J]. 张国林,李振,高晋生,曹宁贤,张春香. 中国畜牧兽医, 2013(09)
- [9]GnRH、GTH、GH及其受体在山羊垂体—卵巢轴中的发育性变化[D]. 黄丽波. 山东农业大学, 2013(05)
- [10]AR、ER基因在鸡、鹌鹑及其杂交种睾丸组织中的表达及其对睾丸生长发育的影响[J]. 范丽娜,周玲玲,李岩,李兴明,梁杜,赵宗胜,鲁平,廖和荣. 中国兽医学报, 2012(09)