一、公兔免疫去势效果观察（论文文献综述）
付俊[1]（2020）在《去势多肽疫苗对三元公猪生长、屠宰性能及肉品质的影响》文中认为
曾凡梅,种玉晴,姜勋平,刘桂琼[2]（2019）在《家畜免疫去势研究进展》文中提出传统的手术去势技术正受到动物福利和规模化标准化畜牧生产需求的挑战,作为手术去势的优势替代方法,免疫去势能够很好地阻滞睾丸发育,控制性行为,避免手术带来的痛苦。免疫去势是采用免疫学方法破坏下丘脑-垂体-性腺轴的激素平衡,通过降低促性腺激素释放激素（GnRH）、黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）的水平,进而使性腺激素水平降低,最终抑制性腺功能,达到去势的目的。免疫去势分为激素免疫去势和基因免疫去势,其靶标经历了下丘脑-垂体-性腺轴自下而上的筛选,依次为睾酮、LH、FSH、GnRH、吻素-1（KISS-1）,其中位于下丘脑-垂体-性腺轴上游的GnRH激素、GnRH和KISS-1基因3种靶标去势效果较好。免疫去势效果及机制的相关研究表明,免疫去势具有改善生产性能、安全和可逆的特点,但其可逆性机制还不清楚。去势导致肾上腺发挥代偿作用,但目前免疫去势的肾上腺代偿研究鲜见报道。文章首先介绍了几种靶标的免疫去势机制,其次对免疫去势的特点和应用进行了讨论,旨在为推动免疫去势技术在动物生产繁殖领域的应用提供理论依据。
曹晓涵,韩兴发,陈志渝,曾宪垠[3]（2014）在《GnRH主动免疫对雌鼠下丘脑-垂体-卵巢轴调控的影响》文中认为本研究采用GnRH并列体二聚物（GnRH-Tandem-Dimer,GTD）为免疫原主动免疫SD雌鼠,检测下丘脑-垂体-卵巢轴生殖相关基因表达变化,分析主动免疫GTD对SD雌鼠生殖功能的影响。选取48只性成熟SD雌鼠随机分为GTD免疫去势组和空白组。免疫组雌鼠于12周龄时初免GTD免疫去势疫苗,4周后加免。每两周采集血液检测血清激素含量变化。分别于加免后4、8、12周处死大鼠,每组处死8只,收集血液;并采集下丘脑、垂体、卵巢,分析生殖相关基因mRNA表达变化。结果显示,GTD主动免疫后大鼠卵巢严重萎缩,重量下降到对照组的23.12%（p<0.05）;血清FSH、LH、P4及E2含量均显着下降（p<0.05）;除下丘脑GnRH mRNA先上升后下降外,下丘脑ER、垂体GnRH-R、LH-β、FSH-β和卵巢LH-R、FSH-R和ER mRNA表达水平显着下调（p<0.05）。结果表明,GTD主动免疫可通过对生殖内分泌激素分泌的调节和对生殖相关基因mRNA表达水平的调控,影响下丘脑-垂体-卵巢轴的功能。
赵熙杰[4]（2013）在《GnRH-I主动免疫对犬生殖机能的影响》文中研究表明促性腺激素释放激素I （Gonadotrophin releasing hormone，GnRH-I）是下丘脑合成、分泌的十肽，它和脑垂体促性腺激素分泌细胞的特异性受体结合后刺激促性腺激素的产生和释放，起着调节生殖活动的作用。GnRH-I主动免疫动物，机体产生GnRH-I抗体中和内源性的GnRH-I，从而抑制动物的生殖。因此，GnRH-I主动免疫可作为生育调节的方法，具有抑制生殖内分泌、生殖器官发育等功能，可用于动物去势、避孕、终止妊娠。目前国内外学者用GnRH-I主动免疫对猪、牛、羊等的生殖机能和生产性能的影响进行了广泛研宄，但在犬方面的研宄却鲜有报道。鉴于本实验室已研制出GnRH-I疫苗，在猪、兔和鼠等动物显示了很强的免疫原性。本实验以犬为研宄对象，研宄该疫苗对其生殖功能的影响，为该疫苗将来的广泛应用和推广提供科学的理论依据。选取健康犬12只（雄犬6只，雌犬6只），年龄相近（3月龄），体重3.0?4.0kg，且发育正常。将6只雄、雌犬分别随机分成两组，每组3只，即对照组（n=3）与免疫组（n=3）。犬4月龄时，称取麦芽糖结合蛋白一促性腺激素释放激素六聚体（malotsebinding protein-gonadotropin releasing hormone I hexamer， MBP-GnRH-I6）1.5mg溶于3mL生理盐水，用等体积的Al（OH）3佐剂充分乳化后给每头试验组犬颈部肌肉注射2mL作为初始免疫，6周后加强免疫。试验期间，雄、雌犬每月采血一次，200xg离心20分钟提取血清，将血清保存在-20°C冰箱中，以备激素含量测定。7月龄时，手术摘取免疫组与对照组的犬睾丸与卵巢，并称重，测量睾丸与卵巢大小。然后用10%甲醛固定睾丸和卵巢组织，常规石蜡切片，厚度为祚m，苏木精-伊红（HE）染色，光学显微镜下观察并拍照。结果表明：免疫组雄犬的睾丸重量、直径、横径、纵周长与横周长、血清睾酮水平与对照组相比差异显着（P<0.05）。免疫组雌犬的卵巢重量、直径、横径与周长、血清中雌二醇浓度均显着低于对照组（P<0.05）。组织切片显示免疫组雄犬的睾丸曲精小管的管壁附近有一、二层退化的精原细胞且排列稀疏，管腔内空荡，睾丸间质细胞也明显减少，没有精子，而对照组雄犬睾丸的曲精小管内的精原细胞逐渐向管腔方向发育，明显分化成精母细胞、精子细胞和精子，并且细胞排列紧密。免疫组雌犬的卵巢可见有大量的闭锁卵泡，而对照组卵巢内可以看到大量的原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡。根据本试验的结果可得到以下结论：MBP-GnRH-I6主动免疫抑制睾丸卵巢的生长发育，降低了血清睾酮与雌二醇浓度，精子发生与卵泡发育受到抑制，睾丸与卵巢萎缩。表明MBP-GnRH-I6对犬具有很强的免疫原性。
曹晓涵[5]（2013）在《GnRH主动免疫动物去势机制及其可逆性研究》文中研究说明促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing hormone, GnRH）是动物体内重要生殖激素之一,其主要作用是调控动物生殖过程。GnRH由丘脑下部的GnRH神经元合成,以脉冲方式释放,通过垂体门脉循环进入垂体前叶,与垂体上的GnRH受体结合,调节促黄体激素（Luteinizing hormone, LH）和促卵泡激素（Follicle stimulating hormone, FSH）的合成和分泌,继而通过血液循环调节性腺类固醇激素的产生和雌雄配子的发生。GnRH主动免疫动物能降低动物体内FSH、LH含量,使性腺退化、萎缩甚至停止发育,影响其生殖功能从而达到去势的目的。利用GnRH主动免疫可以避免外科手术或药物去势对动物造成的应激、感染、药物残留等问题,并且不影响动物生产性能,也更符合动物福利的要求,是一种有望替代传统外科手术给动物去势的新方法。KiSS-1基因是KiSS基因的亚型,主要在中枢神经系统和胎盘表达,该基因编码的一组肽产物称为kisspeptins, GPR54（G protein-coupled receptor54）是kisspeptin的天然受体。KiSS-1/GPR54系统与生殖系统的发育有密切关系：研究表明,GnRH神经元是kisspeptins的直接调节对象；目前普遍认为的作用机制是kisspeptins与GPR54结合,激活GnRH神经元,刺激GnRH的释放,进而调节FSH和LH的释放。GnRH主动免疫动物能使其达到去势效果,但去势机制是怎样的?去势效果维持时间的长短在不同研究中为何有较大差别?关于这些问题目前尚无统一定论。鉴于此,本研究制备了GnRH免疫去势疫苗,主动免疫SD大鼠,结合大鼠血清抗体、血清激素、生殖相关基因及其受体mRNA表达变化情况,探讨主动免疫后KiSS-1/GPR54系统和下丘脑-垂体-性腺轴各级激素、受体和配体的调控关系,以期阐明GnRH主动免疫去势的作用机理；此外,还对GnRH免疫去势的可逆性进行了研究。本文开展的主要研究工作和取得的结果如下：1.以组成GnRH的9种氨基酸为原料合成GnRH并列体（GnRH-Tandem）和GnRH并列体二聚物（GnRH-Tandem-Dimer, GnRH-TD）,使用碳二亚胺法将GnRH-TD与卵清蛋白（OVA）偶联,制成GnRH-TDO免疫原,经SDS-PAGE分析,在51.5KDa处出现了预期条带,得到合格的免疫原；以矿物油、‘Tween-85和span-85为原料制作specol佐剂,将GnRH-TDO免疫原与specol佐剂充分乳化制成GnRH-TDO去势疫苗,检验去势疫苗的物理特性和稳定性,均符合要求。制得合格的GnRH-TDO免疫去势疫苗。2.选取健康性成熟雄性SD大鼠72只,随机分为GnRH免疫去势组（mIG）、手术,去势组（mSG）和空白组（mCG）,每组24只（各组再随机分为3个小组,n=8）。mIG于12周龄腿部肌肉注射1mL疫苗（含GnRH-TD50μg）,4周后加免,加免时注射剂量及方法同初次免疫；mSG于11周龄进行手术,摘除睾丸；mCG不做任何处理。初次免疫当天记为Owpv （weeks post vaccination）。初免当天起每2周空腹尾尖采血1次,直至处死。所有血样分离血清,使用ELISA法测定血清抗体含量,RIA法测定血清激素T、FSH和LH含量。各小组雄鼠分别于8wpv、12wpv、16wpv处死,分离下丘脑、垂体,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因]mRNA表达情况；mIG和mCG分离双侧睾丸,去除附睾后精确称重,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因]nRNA表达情况。GnRH主动免疫雄鼠后,血清抗体滴度升高,睾丸重量减小,睾丸严重皱缩。在8wpv、12wpv和16wpv采样时,mIG睾丸平均重量分别为mCG睾丸平均重量的55.22%、54.31%和42.55%,均显着低于mCG （p＜0.05）。GnRH主动免疫使mIG大鼠血清T、FSH和LH浓度显着下降,均显着低于mCG（p<0.05）。而外科手术去势使血清T含量显着下降至检测限附近,而使血清FSH和LH含量上升,二者浓度均显着高于空白组（p<0.05）。与mCG相比,GnRH主动免疫显着下调下丘脑GnRH, GPR54、KiSS-1和AR mRNA,垂体GnRH-R、FSH-β和LH-βmRNA以及睾丸FSHR、LHR和AR mRNA表达水平（p<0.05）；而外科手术显着下调下丘脑下丘脑GnRH、GPR54、KiSS-1和AR mRNA、睾丸FSHR、LHR和AR mRNA表达水平（p<0.05）的同时,对垂体GnRH-R、 FSH-β和LH-βmRNA表达水平显着上调（p<0.05）。3.选取健康性成熟雌性SD大鼠72只,随机分为GnRH免疫去势组（fIG）、手术去势组（fSG）和空白组（fCG）,每组24只（各组再随机分为3个小组,n=8）。fIG于12周龄腿部肌肉注射1mL疫苗（含GnRH-TD50μg）,4周后加免,加免时注射剂量及方法同初次免疫；fSG于11周龄进行手术,摘除卵巢；fCG不做任何处理。初次免疫当天记为0wpv。初免当天起每2周空腹尾尖采血1次,直至处死。所有血样分离血清,使用ELISA法测定血清抗体含量,RIA法测定血清激素E2、P4、FSH和LH含量。各小组雌鼠分别于8wpv、12wpv、16wpv处死,分离下丘脑、垂体,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因mRNA表达情况；fIG和fCG分离双侧卵巢,去除脂肪组织后精确称重,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因mRNA表达情况。GnRH主动免疫雌鼠后,血清抗体滴度升高,卵巢重量减小,卵巢和子宫萎缩。8wpv、12wpv和16wpv采样时fIG卵巢平均重量分别为fCG平均重量的63.63%、38.46%和21.43%,均显着低于fCG （p＜0.05）。GnRH主动免疫使fIG大鼠血清E2、P4、FSH和LH浓度显着下降,均显着低于fCG （p＜0.05）。而外科手术去势使fSG大鼠血清E2、P4含量显着下降至检测限附近；而使其血清FSH和LH含量上升,二者浓度均显着高于空白组（p＜0.05）。GnRH主动免疫明显下调雌鼠下丘脑GPR54、KiSS-1、GnRH和ER-α mRNA、垂体GnRH-R、FSH-β和LH-β mRNA以及卵巢FSHR、LHR和ER-α mRNA的表达水平（p<0.05）。而外科去势对雌鼠生殖相关基因]mRNA的表达调控有不同影响：显着下调下丘脑GPR54、KiSS-1、GnRH和ER-α mRNA,以及卵巢FSHR、LHR和ER-α mRNA的表达水平；与此同时,显着上调垂体GnRH-R、FSH-β和LH-β mRNA表达水平。4.选取健康性成熟雄性SD大鼠24只,随机分为免疫组（mIG）、手术组（mSG）和空白组（mCG）,每组8只（n=8）。mIG于12周龄腿部肌肉注射1mL疫苗（含GnRH-TD50μg）,4周后加免,加免时注射剂量及方法同初次免疫；mSG于11周龄手术摘除睾丸；mCG不做任何处理。初次免疫当天记为0wpv。初免当天至8wpv每2周、8wpv至56wpv每4周空腹尾尖采血1次,直至处死（56wpv）。所有血样分离血清,使用ELISA法测定血清抗体含量,使用RIA法测定血清激素T、FSH和LH含量。各组大鼠于56wpv处死,迅速分离下丘脑、垂体,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因mRNA表达情况；mIG和mCG分离双侧睾丸,精确称重,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因mRNA表达情况。GnRH主动免疫雄性大鼠,产生抗GnRH抗体,在12wpv时达到高峰并维持较长时间,20wpv后开始下降,至40wpv时抗体滴度下降至免疫前水平,至56wpv处死时几乎已无抗体存在。56wpv采样时,大鼠睾丸表面仍然皱缩,轻按可以感觉到并无弹性,且重量显着低于mCG （p＜0.05）;主动免疫显着降低mIG大鼠血清T、FSH和LH含量,至56wpv处死时除T含量有微弱上升,FSH和LH含量维持较低水平。三种激素含量显着低于mCG （p＜0.05）。外科手术去势使mSG大鼠血清T含量显着下降至检测限附近；而使其血清FSH和LH含量上升,二者浓度均显着高于空白组（p<0.05）。GnRH主动免疫56wpv后,下丘脑GPR54、KiSS-1、GnRH和AR mRNA,垂体GnRH-R、FSH-β和LH-βmRNA以及睾丸FSHR、LHR和AR mRNA的表达水平均显着低于mCG（p<0.05）；对于mSG,56wpv采样时,雄鼠下丘脑GPR54、KiSS-1、 GnRH和AR mRNA,以及睾丸FSHR、LHR和AR mRNA的表达水平均显着低于mCG,（p<0.05）,而垂体GnRH-R, FSH-β和LH-β mRNA表达量显着高于mCG（p＜0.05）。5.选取健康性成熟雌性SD大鼠24只,随机分为免疫组（fIG）、手术组（fSG）和空白组（fCG）,每组8只（n=8）,fIG于12周龄腿部肌肉注射1mL疫苗（含GnRH-TD50μg）,4周后加免,加免注射剂量及方法同初次免疫；fSG于11周龄进行手术,摘除卵巢；fCG不做任何处理。初次免疫当天记为0wpv。初免当天至8wpv每2周、8wpv至56wpv每4周空腹尾尖采血1次,直至处死。所有血样分离血清,使用ELISA法测定血清抗体含量,RIA法测定血清激素E2、P4、FSH和LH含量。各组大鼠于56wpv处死,分离下丘脑、垂体,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因mRNA表达情况；fIG和fCG分离双侧卵巢,去除脂肪组织后精确称重,提取总RNA,使用荧光定量PCR测定各基因mRNA表达情况。GnRH主动免疫雌性大鼠，产生抗GnRH抗体,在12wpv时达到高峰并维持较长时间,20wpv后开始缓慢下降,40wpv时抗体滴度下降至免疫前水平,至56wpv处死时几乎已无抗体存在。GnRH主动免疫56周后,卵巢和子宫仍然保持较好的去势状态,fIG卵巢重量显着低于fCG （p＜0.05）。主动免疫显着降低fIG大鼠血清E2、P4、FSH和LH含量,至56wpv处死时除E2和LH含量有微弱上升,P4和FSH含量维持较低水平。四种激素含量显着低于mCG （p＜0.05）。而外科手术去势使fSG大鼠血清E2、P4含量显着下降至检测限附近,血清FSH和LH含量上升,二者浓度均显着高于空白组（p<0.05）。GnRH主动免疫56wpv后,雌鼠下丘脑GPR54、KiSS-1、 GnRH和ER-α mRNA,垂体GnRH-R、FSH-β和LH-β mRNA以及卵巢FSHR、LHR和ER-α mRNA的表达水平均显着低于mCG （p＜0.05）;对于fSG,56wpv采样时,下丘脑GPR54、KiSS-1、GnRH和ER-α mRNA,以及卵巢FSHR、LHR和ER-a mRNA的表达水平均显着低于mCG （p＜0.05）,而垂体GnRH-R、FSH-β和LH-β mRNA表达量显着高于mCG。综上所述：GnRH-TDO具有良好的免疫原性。GnRH-TDO主动免疫能显着抑制SD大鼠性腺发育,显着降低血清FSH、LH以及性激素（雄性血清T,雌性血清E2和P4）的含量；GnRH-TDO主动免疫显着下调雄性和雌性SD大鼠下丘脑GnRH、 GPR54、KiSS-1和AR mRNA/ER-a mRNA,垂体GnRH-R、FSH-β和LH-βmRNA以及性腺FSHR、LHR和AR mRNA/ER-α mRNA表达水平。主动免疫降低血清性激素含量,通过下丘脑AR mRNA/ER-a mRNA-GPR54/KiSS-1通路,下调GnRH mRNA表达,从而降低血清FSH、LH含量,最终使动物去势。经GnRH-TDO主动免疫56w后的SD大鼠仍处于去势状态,雄性大鼠血清T含量和雌性大鼠血清LH含量在试验末期出现上升趋势,揭示GnRH主动免疫造成的动物去势存在恢复的可能,且动物去势状态维持时限可能存在性别差异。
赵熙杰,方富贵[6]（2012）在《GnRH主动免疫对动物生殖的研究进展》文中研究说明GnRH主动免疫是近年来新兴起的一项生育调控技术,且得到了很大的发展。本文全面综述了GnRH的结构与生殖功能,GnRH免疫动物的机理、对动物生殖系统的影响、在动物生殖上的应用以及前景,为进一步研究GnRH主动免疫提供科学的理论依据。
程薇[7]（2012）在《孕烯醇酮和睾酮主动免疫对公兔生殖性能的影响》文中进行了进一步梳理本试验旨在研究孕烯醇酮和睾酮主动免疫对性成熟的雄性新西兰大白兔生殖能力的影响。研究内容如下：试验选取24只4-5月龄体重相当的健康雄性新西兰大白兔,随机分为3组,每组8只。各试验组处理分别为：空白对照组不作任何处理；孕烯醇酮免疫组免疫孕烯醇酮抗原；睾酮免疫组免疫睾酮抗原。以免疫当天为0天,在初次免疫后第四周加强免疫,共免疫两次,免疫方式均采用颈部皮下多点注射,初次免疫使用弗氏完全佐剂,加强免疫使用弗氏不完全佐剂,每次免疫2m1疫苗（含1mg抗原）。初次免疫前采集血样并称量空腹体重,初免后第2w,4w,6w,8w,12w,16w,20w,24w采集血样并称量空腹体重一次。试验期间所有试验兔自由饮水和采食。所有试验兔在初次免疫后第24周处死。血清抗体滴度用间接ELISA方法检测,血液中生殖激素（T、LH）含量用RIA方法测定,试验兔处死后测量其睾丸重量及大小,并对睾丸组织进行组织学分析以及对睾丸组织中合成孕烯醇酮和睾酮所需要的细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）,3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）和细胞色素P45017-α脱羟基酶（CYP450-17）三种酶的活性进行测定。本研究取得的结果如下：在孕烯醇酮免疫的试验中,血清中抗体检测结果显示,免疫后血清抗孕烯醇酮抗体滴度（结合率%）逐渐升高,在初次免疫后12周（即加免后8周）抗体含量达到最高水平（53.3%±3.6%）,然后开始下降,但在整个试验期间抗体滴度均保持在一个较高的水平。对生殖激素的检测发现,空白对照组兔血清睾酮的浓度在27.72±4.25ng/ml与90.24±2.94ng/ml之间上下波动：免疫组兔血清睾酮浓度在0w时与空白对照组无差异,初免后血清睾酮浓度低于空白对照组,尤其在初免后4w,12w,16w,20w,24w显着低于（p<0.05）空白对照组睾酮水平。空白对照组兔血清中的LH浓度维持在一个相对稳定的水平（27.33±5.12mIU-37.33±7.49/ml）;免疫组兔血清LH浓度在免疫当天与空白对照组无差异,初免后免疫组兔血清中的LH含量逐渐上升,在初免后4w达到一个比较稳定的水平,并且在初免后8w至试验期末均显着高于空白对照组LH水平（p<0.05）。免疫组兔细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）的活性（23.364nmol/ml）显着低于空白对照组（182.737nmol/ml）（p＜0.05）,免疫组3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）的活性（7.73nmol/ml）和细胞色素P45017-α脱羟基酶（CYP450-17）的活性（64.206nmol/ml）与对照组（3β-HSD:7.845nmol/ml,CYP450-17:69.133nmo1/ml）相比差异虽然不显着（p>0.05）但是有降低的趋势。免疫组兔的体重、睾丸的大小及重量与对照组相比均无显着性差异（p>0.05）。睾丸组织分析表明,孕烯醇酮免疫组的兔睾丸组织发生明显病变,曲精小管管腔增大,曲精小管上皮细胞成分减少,次级精母细胞数量较少,且官腔内精子数量较对照组的减少。在睾酮免疫的试验中,血清抗体检测结果显示,免疫后血清中抗睾酮抗体滴度（结合率%）持续升高,在初次免疫后第8周（即加免后4周）抗体滴度达到最高（67.8%±2.7%）,然后一直保持在一个相对稳定的水平。对生殖激素的检测发现,在整个试验期间,空白对照组兔血清睾酮的浓度在27.72±4,25ng/ml与90.24±2.94ng/ml之间上下波动；睾酮免疫组兔血清睾酮浓度在0w时与空白对照组无差异,初免后血清睾酮浓度低于空白对照组,在初免后4w,12w,16w显着低于（p<0.05）空白对照组睾酮水平。空白对照组兔血清中的LH浓度维持在一个相对稳定的水平（27.33±5.12-37.33±7.49mIU/ml）,睾酮免疫组兔血清LH浓度在0w时与空白对照组无差异（p>0.05）,在初免后的第4w,6w,8w,12w,16w,20w睾酮免疫组兔血清中的LH浓度显着高于（p<0.05）空白对照组LH水平。免疫组兔细胞3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）的活性（12.492nmol/ml）显着高于对照组的酶活（7.845nmol/ml）（p＜0.05）,免疫组兔细胞色素P45017-α脱羟基酶（CYP450-17）的活性（103.386nmol/ml）有比对照组（69.133nmol/ml）高的趋势,尽管两者之间差异不显着（p>0.05）；而细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）的活性免疫组（20.319nmol/ml）(显着低于空白对照组（182.737nmol/ml）（p<0.05）。免疫组兔的体重与对照组相比无显着性差异。免疫组兔睾丸的大小及重量与对照组相比虽然无显着性差异（p>0.05）,但都有增高的趋势。睾丸组织分析表明,睾酮免疫组兔的睾丸曲精小管结构,曲精小管基膜和多层上皮细胞结构以及精子和精细胞的含量均正常。综上所述,孕烯醇酮主动免疫公兔,可降低血清中睾酮浓度,使血清中LH浓度升高,睾丸组织曲精小管精母细胞及精细胞减少,管腔内精子明显减少,起到了类似“免疫去势”的效果。睾酮主动免疫公兔后,虽然使血清中睾酮浓度有所降低,但睾酮合成的关键酶3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）和细胞色素P45017-α脱羟基酶（CYP450-17）的酶活升高,且睾丸的生长发育有提高的趋势,对睾丸和精子的发育均无影响,揭示睾酮免疫可以减少公畜的攻击行为和性行为,使其性情温顺,但不影响其生殖能力。
袁亚利[8]（2011）在《GnRF疫苗对猪屠宰性能和肉品质的影响及免疫猪睾丸营养特性的研究》文中进行了进一步梳理本试验研究目的是探讨免疫去势和手术去势两种公猪异味控制方法,对公猪的屠宰性能、肉品质影响及免疫去势公猪睾丸营养成分的研究。探讨GnRF免疫去势疫苗的可应用性,为GnRF免疫去势疫苗在养猪业上的应用提供科学的理论依据。试验分为以下三个部分：第一部分主要研究GnRF免疫去势疫苗对公猪屠宰性能及肉品质的影响。试验选取400头健康的仔公猪分成2组,每组10个重复,每个重复20头,分别采取手术阉割法去势（手术去势组）和注射GnRF疫苗法去势（免疫去势组）。免疫去势组分别于第14周龄和21周龄进行Improvac疫苗注射（2m1/头,耳根部皮下注射）。饲养25周龄后,对猪称重,每组随机选用20头猪进行屠宰,测定屠宰性能。并在屠宰的猪中每组随机选取10头猪取其背最长肌进行肉质测定,取皮下脂肪进行胴体脂肪品质测定。结果显示：与手术去势组相比,免疫去势组的屠宰率和背膘厚极显着下降（P<0.01）,眼肌面积和瘦肉率差异不显着（P>0.05）；胴体分割部分,两组的肩颈肉、腰背肉、肋腹肉、臀腿肉所占比例差异均不显着（P>0.05）,免疫去势组的肘子肉所占比例极显着的高于手术去势组（P<0.01）；免疫去势组背最长肌的b*值极显着的低于手术去势组（P<0.01）,两个试验组的pH45、pH24、L*值、a*值、滴水损失、剪切力、蒸煮损失和肌内脂肪含量差异均不显着（P>0.05）。与手术去势组相比,免疫去势组的胴体背部脂肪的a*和b*值均极显着的升高（P<0.01）,而L*值、碘值、硬度和熔点差异均不显着（P>0.05）。GnRF免疫去势对公猪的背最长肌的盐溶蛋白凝胶的质构特性没有显着影响（P>0.05）,但有提高盐溶蛋白凝胶G’值的趋势。第二部分主要研究GnRF免疫去势疫苗对公猪氨基酸、肌苷酸和脂肪酸的影响。研究结果表明：免疫去势组与手术去势组相比,背最长肌的鲜味氨基酸总量、必需氨基酸总量、氨基酸总量显着降低（P<0.05）,但是两组之间必需氨基酸/氨基酸总量和鲜味氨基酸/氨基酸总量差异不显着（P>0.05）。免疫去势组的肌苷酸的含量显着高于手术去势组（P<0.01）。肌内脂肪酸含量中,免疫去势组花生酸含量极显着的低于手术去势组（P<0.01）,亚油酸含量极显着的高于手术去势组（P<0.01）,亚麻油酸含量显着的高于手术去势组（P<0.05）。对于总脂肪酸而言,两组的总饱和脂肪酸和总单不饱和脂肪酸含量均无显着差异（P>0.05）,免疫去势组的多不饱和脂肪酸含量极显着的高于手术去势组（P<0.01）。两组间胴体背部皮下脂肪的总饱和脂肪酸含量和单不饱和脂肪酸含量均无显着差异（P>0.05）,免疫去势组的多不饱和脂肪酸含量极显着的高于手术去势组（P<0.01）。第三部分主要对GnRF免疫去势公猪的睾丸营养特性进行研究。试验结果表明：睾丸中水分含量是82.84%,粗蛋白含量为12.98%,粗脂肪含量为3.24%,灰分含量为0.97%,无氮浸出物为0.03%；多不饱和脂肪酸PUFA含量高达28.38%,人体必需的氨基酸中亮氨酸的含量最高,为0.81g/100g。以上结果表明,用GnRF疫苗免疫公猪,降低了公猪的屠宰率,但是可以降低其背膘厚。可以改善猪肉的色泽,一定程度的改善肉品质,增加肌肉中PUFA的含量,使猪肉具有较高的营养价值。睾丸中各种营养成分比较均衡,且含有人体所必需的氨基酸,同时PUFA含量较高,具有食用价值。
巩转娣,魏锁成,韦敏[9]（2010）在《GnRH-A主动免疫公兔对垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达的影响》文中提出目的探讨GnRH-A激动剂（阿拉瑞林）主动免疫对公兔的去势效果和垂体GnRHR、FSH-β和LH-βmRNA表达的影响。方法 30只日本大耳白兔（Oryctolagus cuniculus）随机分为三组（n=10）,在实验1组（EG-Ⅰ）和实验2组（EG-Ⅱ）颈部皮下注射1.0mL（100μg/mL）阿拉瑞林抗原乳剂EG-Ⅱ于20d以相同剂量重复注射1次,用荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSH-β和LH-β mRNA的表达,并测定GnRHR的核苷酸序列。结果 EG-Ⅰ和EG-ⅡGnRH抗体水平高于对照组（P<0.05）,EG-Ⅱ在49d达到峰值,显着高于EG-Ⅰ（P<0.05）和对照组（P<0.01）,而后开始逐渐下降。28d以后,EG-Ⅱ和EG-Ⅰ血清睾酮浓度低于对照组（P<0.05）,且EG-Ⅱ低于EG-Ⅰ（P<0.01）;公兔GnRHR的核苷酸为1179bp,同源性达96%。结论阿拉瑞林免疫可以明显提高血清GnRH抗体水平,降低垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达,减少睾酮的合成与分泌,从而导致性器官发育受阻,具有明显的作用,加强免疫效果更佳。
方富贵[10]（2010）在《重组MBP—GnRH—I6研制及其免疫公猪的效果与机理的研究》文中认为目的:动物去势术仍是畜牧生产中一个急需解决的问题。因为传统的手术去势往往遗留后遗症,且在施术过程中对人畜的安全构成威协等,而免疫去势法可以克服传统方法的不足。本研究系统地研究了免疫去势疫苗MBP-GnRH-I6的制备、效果以及免疫去势的机理,旨在研制出一种免疫原性强且成本低的免疫去势疫苗并阐明其去势的机制。方法:（1）将人工合成的GnRH-I六聚体基因插入麦芽糖结合蛋白融合表达系统载体pMAL-c4x中,重组质粒转化到大肠杆菌（E.coli TB1）中并用IPTG进行诱导表达,多糖树脂（amylose resin）亲和层析法纯化蛋白。应用SDS-PAGE、HPLC法对纯化蛋白进行分析。Western blot鉴定融合蛋白的反应原性。（2）同龄健康的杜洛克×长白×大白初生公猪,随机平均分为3组,分别为免疫组,阳性对照组（不去势组）和阴性对照组（手术阉割组）。用PBS溶解MBP-GnRH-I6,并与AL（OH）3佐剂充分乳化。免疫组猪颈部肌肉注射2mL的乳化剂（含1mg MBP-GnRH-I6）,采用同样的剂量与路线加强免疫一次。实验期间从前腔静脉采血置于4℃过夜,然后4℃2000g离心20min,收集血清-80℃保存。游标卡尺测量阴囊直径,酶联免疫分析法测血清GnRH-I抗体效价,放射免疫分析法测血清睾酮浓度,屠宰时取睾丸,称重并测量大小,取睾丸组织用福尔马林固定,制做5μm厚的切片,HE染色后观察其组织学变化,随机选取每头猪的5张睾丸组织切片,用形态学分析软件统计生精小管中不同发育阶段的生殖细胞数目,探明MBP-GnRH-I6的免疫去势效果。（3）屠宰后,迅速取出下丘脑、腺垂体和睾丸,置于液氮中,-80℃保存。采用实时荧光定量PCR法,分析下丘脑GnRH-I和GnRH-IR mRNA,垂体中GnRH-IR,FSHβ和LHβmRNA以及睾丸中GnRH-IR、FSH受体、LH受体、3βHSD和17βHSD mRNA的变化。透射电镜观察垂体促性腺激素细胞,睾丸生精细胞、支持细胞和间质细胞的超微结构,探讨MBP-GnRH-I6主动免疫对生殖轴上相关生殖激素及其受体的影响以及垂体和睾丸组织超微结构的变化。（4）免疫前和屠宰时称猪体重,酶联免疫分析法检测血清猪生长激素,放射免疫分析法检测血清IGF-I水平,Pearson相关分析血清睾酮与IGF-I的相关性,探讨免疫去势猪生长快的初步机理。（5）HPLC法分析背膘脂肪中雄烯酮和3-甲基吲哚的含量,探明MBP-GnRH-I6主动免疫对公猪肉膻味的影响。结果:（1）与麦芽糖结合蛋白基因融合的GnRH-I六聚体基因在E.coli TB1中能够高效表达,且为可溶性表达,经多糖树脂亲和层析纯化后,获得高纯度的MBP-GnRH-I6融合蛋白（纯度达97.68%）,其分子量大小与理论值（50kDa）一致,且Western blot表明MBP-GnRH-I6融合蛋白与GnRH-I抗体发生特异性反应。（2）MBP-GnRH-I6主动免疫能诱导公猪产生高效的抗GnRH-I抗体,导致血清睾酮浓度显着下降（P<0.05）,阴囊直径增大缓慢且比阳性对照组短（P<0.05）,屠宰时睾丸的纵径、横径、纵周长、横周长和重量均小于阳性对照组（P<0.05）,睾丸组织切片显示,生精小管严重发育不良,精原细胞、初级精母细胞和精子细胞退化且没有精子,管壁不同发育阶段的生精细胞数目明显减少（P<0.01）。（3）免疫组,阳性对照组和阴性对照组公猪下丘脑GnRH-IR和GnRH-I mRNA表达差异不显着（P>0.05）,垂体中FSHβmRNA、LHβmRNA显着地低于阴、阳对照组（P<0.05）,GnRH-IR mRNA显着地低于阴性对照组和阳性对照组（P<0.05）。免疫组公猪睾丸FSH受体、LH受体mRNA表达均显着地低于阳性对照组（P<0.05）,但3βHSD和17βHSD mRNA却高于阳性对照组（P<0.05）。超微结构显示,免疫猪垂体促性腺激素细胞颗粒减少,睾丸生精小管基膜增生,初级精母细胞线粒体数量明显减少,精子细胞核内染色质聚集成块状,分布于核膜四周,细胞器少,支持细胞线粒体少数空泡变性,线粒体嵴断裂。间质细胞少数线粒体空泡变性,胞浆内溶酶体增多。（4）MBP-GnRH-I6主动免疫猪体重显着重于阴性对照组（P<0.05）,但不影响公猪血清pGH水平（P>0.05）。在17～21周龄时,免疫组公猪血清IGF-I浓度显着低于阳性对照组（P<0.05）,21～25周龄时免疫组公猪血清IGF-I显着高于阴性对照组（P<0.05）。相关分析表明血清睾酮与IGF-I呈正相关。（5）免疫组背膘脂肪雄烯酮下降,和阴性对照组一样低于检测下限;但是免疫组、阳性对照组和阴性对照组公猪3-甲基吲哚水平差异不显着（P>0.05）。结论:（1）成功构建出GnRH-I6基因工程体,获得高纯度且具有良好反应原性的MBP-GnRH-I6。（2）MBP-GnRH-I6主动免疫使公猪血清睾酮浓度维持在较低的水平,睾丸显着萎缩,表明是成功的免疫去势。（3）MBP-GnRH-I6主动免疫降低公猪垂体FSHβmRNA、LHβmRNA和GnRH-IR mRNA以及睾丸FSH受体、LH受体、3βHSD和17βHSD mRNA的表达,损伤了垂体促性腺激素细胞及睾丸组织的支持细胞、间质细胞和生精细胞的超微结构。揭示MBP-GnRH-I6主动免疫可能通过降调生殖轴生殖激素及其受体mRNA数量,以及破坏生殖轴细胞的亚显微结构影响公猪生殖机能。（4）MBP-GnRH-I6主动免疫改变了公猪生长性能,增加体重,其作用途径可能是睾酮通过调控血清IGF-I水平来调控的。（5）MBP-GnRH-I6主动免疫降低脂肪雄烯酮含量,消除膻味,改善了肉质。
二、公兔免疫去势效果观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、公兔免疫去势效果观察（论文提纲范文）
（2）家畜免疫去势研究进展（论文提纲范文）
| 1 免疫去势的靶标筛选 |
| 1.1 GnRH激素免疫去势 |
| 1.2 GnRH基因免疫去势 |
| 1.3 KISS-1基因免疫去势 |
| 2 免疫去势的特点及应用 |
| 2.1 免疫去势对家畜生产性能的影响 |
| 2.2 免疫去势的安全性 |
| 2.3 免疫去势的可逆性 |
| 2.4 免疫去势与肾上腺代偿性分泌 |
| 3 小 结 |
（3）GnRH主动免疫对雌鼠下丘脑-垂体-卵巢轴调控的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1. 1 主要试剂和仪器 |
| 1. 2 试验动物选取及处理 |
| 1. 3 样品采集 |
| 1. 4 血清激素含量测定 |
| 1. 5 基因表达测定 |
| 1. 6 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2. 1 卵巢发育以及卵巢质量变化 |
| 2. 2 血清激素含量 |
| 2. 3 下丘脑- 垂体- 卵巢轴生殖基因mRNA表达变化 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（4）GnRH-I主动免疫对犬生殖机能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词 |
| 文献综述 |
| 1 GnRH-Ⅰ的概述 |
| 2 GnRH-Ⅰ的结构与生殖功能 |
| 3 GnRH-Ⅰ主动免疫的机理 |
| 4 GnRH-Ⅰ主动免疫对动物生殖系统的影响 |
| 5 GnRH-Ⅰ主动免疫在畜牧业上的应用 |
| 5.1 猪 |
| 5.2 兔 |
| 5.3 牛 |
| 5.4 其他动物 |
| 6 GnRH-Ⅰ主动免疫的发展前景及存在的问题 |
| 7 试验的目的和意义 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 免疫程序 |
| 1.2.2 血样采集 |
| 1.2.3 性腺测量与组织学观察 |
| 1.2.4 激素含量测定 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 血清激素浓度 |
| 2.1.1 血清睾酮浓度 |
| 2.1.2 血清雌二醇浓度 |
| 2.2 性腺大小与组织学观察 |
| 2.2.1 睾丸 |
| 2.2.2 卵巢 |
| 3 讨论 |
| 3.1 GnRH-Ⅰ主动免疫对睾酮和睾丸的影响 |
| 3.2 GnRH-Ⅰ主动免疫对雌二醇和卵巢的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）GnRH主动免疫动物去势机制及其可逆性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 一、促性腺激素释放激素的结构及其生物学功能 |
| 1.1 GnRH的结构、合成分泌及在体内的分布 |
| 1.1.1 GnRH的结构 |
| 1.1.2 GnRH的合成与分泌 |
| 1.1.3 GnRH的在动物体内的分布 |
| 1.2 GnRH的生物学功能 |
| 1.2.1 GnRH受体的研究进展 |
| 1.2.2 GnRH的生物学功能 |
| 1.3 GnRH对下丘脑-垂体-性腺轴激素分泌调控的作用及其受到的反馈调控 |
| 1.3.1 GnRH对LH/FSH的调控 |
| 1.3.2 LH/FSH对性激素的调控及其反馈调控 |
| 1.3.3 性激素对GnRH的反馈调控 |
| 二、kisspeptin/GPR54系统研究进展 |
| 2.1 kisspeptin/GPR54系统简介 |
| 2.2 kisspeptin/GPR54系统对GnRH的调控作用 |
| 三、对动物进行去势的目的、方法和现状 |
| 3.1 对动物进行去势的目的和方法 |
| 3.2 对动物进行去势的现状 |
| 四、GnRH主动免疫去势研究进展 |
| 4.1 GnRH主动免疫去势概述 |
| 4.2 GnRH主动免疫去势研究现状 |
| 4.2.1 免疫原的使用 |
| 4.2.2 佐剂的使用 |
| 4.2.3 免疫程序、免疫剂量和免疫方法研究现状 |
| 4.2.4 对不同动物免疫效果研究现状 |
| 4.3 GnRH主动免疫去势机理研究进展 |
| 4.4 GnRH免疫去势应用前景 |
| 五、GnRH主动免疫可逆性研究现状 |
| 六、目前存在的问题和本研究的目的意义 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 GnRH免疫去势疫苗的制备 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制方法 |
| 2.2 GnRH并列体合成 |
| 2.3 GnRH并列体二聚物合成 |
| 2.4 GnRH并列体二聚物与载体蛋白偶联及偶联产物鉴定 |
| 2.4.1 GnRH并列体二聚物与载体蛋白偶联 |
| 2.4.2 偶联产物SDS-PAGE鉴定 |
| 2.5 GnRH免疫去势疫苗的制备及性状检测 |
| 2.5.1 疫苗制备 |
| 2.5.2 疫苗物理性状检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 GnRH并列体合成 |
| 3.2 SDS-PAGE鉴定 |
| 3.3 物理性状检测 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第二章 GnRH主动免疫对雄鼠下丘脑-垂体-性腺轴的影响及其调控机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制方法 |
| 2.2 试验动物选取、分组及处理 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标测定及分析 |
| 2.4.1 血清抗体含量测定 |
| 2.4.2 血清激素含量测定 |
| 2.4.3 基因表达测定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 RNA完整性 |
| 3.2 睾丸发育以及睾丸重量变化 |
| 3.3 血清抗GnRH抗体含量 |
| 3.4 血清激素含量 |
| 3.4.1 血清T含量 |
| 3.4.2 血清FSH含量 |
| 3.4.3 血清LH含量 |
| 3.5 下丘脑-垂体-睾丸轴生殖基因mRNA表达变化 |
| 3.5.1 下丘脑生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.2 垂体生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.3 睾丸生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 GnRH主动免疫对雌鼠下丘脑-垂体-性腺轴的影响及其调控机制 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制方法 |
| 2.2 试验动物选取、分组及处理 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标测定及分析 |
| 2.4.1 血清抗体含量测定 |
| 2.4.2 血清激素含量测定 |
| 2.4.3 基因表达测定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 RNA完整性 |
| 3.2 生殖器官发育以及卵巢重量变化 |
| 3.3 血清抗GnRH抗体含量 |
| 3.4 血清激素含量 |
| 3.4.1 血清E_2含量 |
| 3.4.2 血清P_4含量 |
| 3.4.3 血清FSH含量 |
| 3.4.4 血清LH含量 |
| 3.5 下丘脑-垂体-卵巢轴生殖基因mRNA表达变化 |
| 3.5.1 下丘脑生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.2 垂体生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.3 卵巢生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第四章 GnRH主动免疫雄性大鼠的可逆性研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制方法 |
| 2.2 试验动物选取、分组及处理 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标测定及分析 |
| 2.4.1 血清抗体含量测定 |
| 2.4.2 血清激素含量测定 |
| 2.4.3 基因表达测定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 RNA完整性 |
| 3.2 睾丸发育以及睾丸、下丘脑和垂体重量变化 |
| 3.3 血清抗GnRH抗体含量 |
| 3.4 血清激素含量 |
| 3.4.1 血清T含量 |
| 3.4.2 血清FSH含量 |
| 3.4.3 血清LH含量 |
| 3.5 下丘脑-垂体-性腺轴生殖基因mRNA表达变化 |
| 3.5.1 下丘脑生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.2 垂体生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.3 睾丸生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第五章 GnRH主动免疫雌性大鼠可逆性的研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要溶液配制方法 |
| 2.2 试验动物选取、分组及处理 |
| 2.3 样品采集 |
| 2.4 指标测定及分析 |
| 2.4.1 血清抗体含量测定 |
| 2.4.2 血清激素含量测定 |
| 2.4.3 基因表达测定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 RNA完整性 |
| 3.2 生殖器官发育以及卵巢重量变化 |
| 3.3 血清抗GnRH抗体含量 |
| 3.4 血清激素含量 |
| 3.4.1 雌鼠血清E_2含量 |
| 3.4.2 雌鼠血清P_4含量 |
| 3.4.3 血清FSH含量 |
| 3.4.4 血清LH含量 |
| 3.5 下丘脑-垂体-性腺轴生殖基因mRNA表达变化 |
| 3.5.1 下丘脑生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.2 垂体生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 3.5.3 卵巢生殖相关基因mRNA表达变化 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三部分 结论与展望 |
| 1 本研究的总体结果 |
| 2 本研究的结论 |
| 3 本研究的创新点 |
| 4 下一步工作的思路和方向 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（7）孕烯醇酮和睾酮主动免疫对公兔生殖性能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写字母 |
| 目录 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 孕烯醇酮免疫研究进展 |
| 1.1 孕烯醇酮的合成代谢及其生理作用 |
| 1.2 孕烯醇酮免疫对动物生殖性能研究概述 |
| 2 睾酮免疫研究进展 |
| 2.1 睾酮的合成代谢及其生理作用 |
| 2.2 睾酮免疫对动物生殖性能研究概述 |
| 2.2.1 睾酮免疫对雄性动物生殖性能研究概述 |
| 2.2.2 睾酮免疫对雌性动物生殖性能研究概述 |
| 3 孕烯醇酮和睾酮免疫前景展望 |
| 4. 目的和意义 |
| 第二章 试验部分 |
| 试验一 孕烯醇酮主动免疫对公兔生殖性能的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂(盒) |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 孕烯醇酮疫苗的制备 |
| 1.2.2 动物试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 孕烯醇酮半琥珀酸酯的鉴定 |
| 2.1.1 红外光谱分析 |
| 2.1.2 质谱分析 |
| 2.1.3 核磁共振鉴定 |
| 2.2 孕烯醇酮抗原偶联率的测定 |
| 2.3 血清中抗孕烯醇酮抗体滴度 |
| 2.4 血清中睾酮(T)的含量 |
| 2.5 血清中促黄体生成素(LH)的含量 |
| 2.6 体重测定 |
| 2.7 睾丸的发育 |
| 2.8 P450scc,3β-HSD,CYP450-17的酶活 |
| 2.9 睾丸组织学分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 试验二 睾酮主动免疫对公兔生殖性能的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂(盒) |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 睾酮疫苗的制备 |
| 1.2.2 动物试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 睾酮抗原偶联率的测定 |
| 2.2 血清中抗睾酮抗体滴度 |
| 2.3 血清中睾酮(T)的含量 |
| 2.4 血清中促黄体生成素(LH)的含量 |
| 2.5 体重测定 |
| 2.6 睾丸的发育 |
| 2.7 P450scc,3β-HSD,CYP450-17的酶活 |
| 2.8 睾丸组织学分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）GnRF疫苗对猪屠宰性能和肉品质的影响及免疫猪睾丸营养特性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 GnRF概述 |
| 2 GnRF免疫去势的机理研究 |
| 3 GnRF免疫的方法 |
| 4 公猪膻味的产生原因 |
| 4.1 粪臭素的合成与代谢 |
| 4.2 雄烯酮的合成与代谢 |
| 5 GnRF免疫在动物上的应用 |
| 5.1 GnRF免疫对公猪膻味的影响 |
| 5.2 GnRF免疫对公猪激素的影响 |
| 5.3 GnRF免疫对公猪睾丸的影响 |
| 5.4 GnRF免疫对公猪性欲和性行为的影响 |
| 5.5 GnRF免疫对猪生产性能及屠宰性能的影响 |
| 5.6 GnRF免疫对猪胴体分割的影响 |
| 5.7 GnRF免疫对猪肉品质的影响 |
| 6 影响GnRF免疫效果的因素 |
| 7 动物福利与公猪去势 |
| 8 免疫动物食品安全性评价 |
| 9 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 试验研究 |
| 第一章 GnRF疫苗对猪屠宰性能和胴体品质及背最长肌盐溶性蛋白凝胶特性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要仪器及试剂 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 日粮组成及饲养管理 |
| 1.5 样品采集 |
| 1.6 屠宰性能测定 |
| 1.7 胴体品质测定 |
| 1.8 盐溶蛋白热诱导凝胶特性测定方法 |
| 1.9 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 GnRF疫苗对猪屠宰性能的影响 |
| 2.2 GnRF疫苗对猪胴体分割的影响 |
| 2.3 GnRF疫苗对猪背最长肌肉品质的影响 |
| 2.4 GnRF疫苗对猪背部皮下脂肪品质的影响 |
| 2.5 GnRF疫苗对猪背最长肌蛋白凝胶质构特性的影响 |
| 2.6 GnRF疫苗对猪背最长肌蛋白凝胶流变特性的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二章 GnRF疫苗对猪肉氨基酸、肌苷酸和脂肪酸组成的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 指标测定与方法 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 GnRF疫苗对猪背最长肌氨基酸的影响 |
| 2.2 GnRF疫苗对猪背最长肌肌苷酸的影响 |
| 2.3 GnRF疫苗对猪背最长肌肌内脂肪酸的影响 |
| 2.4 GnRF疫苗对猪背部皮下脂肪的脂肪酸的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 免疫去势公猪的睾丸营养特性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 指标测定方法 |
| 1.5 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 睾丸常规营养成分分析 |
| 2.2 睾丸氨基酸组成 |
| 2.3 睾丸脂肪酸含量 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 应用前景 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 |
（9）GnRH-A主动免疫公兔对垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂和仪器 |
| 1.2 实验动物与免疫注射 |
| 1.3 血液和组织样品采集及处理 |
| 1.4 Gn RH抗体效价和睾酮含量测定 |
| 1.5 RNA的提取 |
| 1.6 引物设计 |
| 1.7 RT-PCR反应体系 |
| 1.8 PCR反应体系及条件 |
| 1.9 PCR产物的克隆和序列测定 |
| 1.10 实时荧光定量PCR |
| 1.11 数据统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 血清Gn RH抗体水平 |
| 2.2 血清睾酮浓度检测 |
| 2.3 垂体中Gn RHR、FSHβ和LHβ基因的表达变化 |
| 2.4 Gn RHR m RNA测序结果 |
| 3 讨论 |
（10）重组MBP—GnRH—I6研制及其免疫公猪的效果与机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 图表目录 |
| 缩略词表 |
| 文献综述 GnRH-I 及其疫苗的研究进展 |
| 1 GnRH-I 的特征 |
| 1.1 GnRH-I 基因的结构 |
| 1.2 GnRH-I 的分子结构 |
| 2 GnRH-I 的生理功能 |
| 2.1 调控LH 和FSH 的合成与释放 |
| 2.2 自我激发作用 |
| 2.3 对性腺的作用 |
| 3 GnRH-I 的作用分子机制 |
| 3.1 GnRH-I 受体 |
| 3.2 信号转导 |
| 3.2.1 磷脂酶C/蛋白激酶通路 |
| 3.2.2 G 蛋白偶联 |
| 3.2.3 胞内信息通路 |
| 4 GnRH-I 免疫中和技术 |
| 5 GnRH-I 疫苗的研究 |
| 5.1 GnRH-I 疫苗的发展过程 |
| 5.1.1 第一代GnRH-I 疫苗——化学合成肽疫苗 |
| 5.1.2 第二代GnRH-I 疫苗——基因工程疫苗 |
| 5.1.3 第三代GnRH-I 疫苗—核酸疫苗 |
| 5.2 GnRH-I 疫苗免疫对动物机体的影响 |
| 5.2.1 对动物生殖内分泌的影响 |
| 5.2.2 对生殖器官的影响 |
| 5.2.3 对垂体的影响 |
| 5.2.4 对发情周期的影响 |
| 5.2.5 对生产性能的影响 |
| 5.2.6 对动物生殖的短期与长期效应 |
| 5.3 GnRH-I 疫苗免疫去势的机理 |
| 5.4 GnRH-I 疫苗的应用 |
| 5.4.1 用于去势 |
| 5.4.2 用于避孕、终止妊娠 |
| 5.4.3 用于促进动物生长，提高肉品质量 |
| 5.4.4 用于治疗癌症 |
| 5.5 影响GnRH-I 疫苗免疫效果的因素 |
| 5.5.1 抗原的影响 |
| 5.5.2 佐剂的影响 |
| 5.5.3 其它因素 |
| 5.6 GnRH-I 疫苗商业化的困境 |
| 5.6.1 个体反应差异大 |
| 5.6.2 多次重复注射 |
| 5.6.3 佐剂的副作用 |
| 5.6.4 昂贵的价格 |
| 5.7 GnRH-I 疫苗应用前景 |
| 引言 |
| 第一章 GnRH-16 的原核表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 菌株与质粒 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液、试剂及培养基的配制 |
| 1.1.4 主要仪器与用品 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 重组表达质粒的构建 |
| 1.2.3 重组表达质粒的诱导表达 |
| 1.2.4 表达蛋白的分离纯化 |
| 1.2.5 表达蛋白的鉴定 |
| 1.2.6 纯化蛋白的冷冻干燥 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 目的基因合成的结果 |
| 2.2 重组质粒的构建与鉴定结果 |
| 2.3 目的蛋白的诱导表达结果 |
| 2.4 纯化蛋白的纯度鉴定结果 |
| 2.5 目的蛋白的Western blot 鉴定结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于原核表达 |
| 3.2 关于重组MBP-GnRH-16 融合蛋白 |
| 3.2.1 GnRH-16 基因序列的设计 |
| 3.2.2 MBP 的作用 |
| 3.3 关于重组MBP-GnRH-16 融合蛋白的表达、纯化与鉴定 |
| 4 小结 |
| 第二章 MBP-GnRH-16 对公猪的免疫去势试验 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 免疫程序 |
| 1.2.3 血样的采集 |
| 1.2.4 阴囊测定 |
| 1.2.5 性腺测量与组织学观察 |
| 1.2.6 公猪血清中抗GnRH-I 抗体测定 |
| 1.2.7 血清睾酮的测定 |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 GnRH-I 抗体效价 |
| 2.2 血清睾酮浓度 |
| 2.3 阴囊直径 |
| 2.4 睾丸发育 |
| 3 讨论 |
| 3.1 免疫应答与血清抗GnRH-I 抗体水平 |
| 3.2 免疫对血清睾酮浓度的影响 |
| 3.3 免疫对睾丸发育的影响 |
| 3.4 关于免疫程序与去势效果 |
| 4 小结 |
| 第三章 MBP-GnRH-16 对公猪免疫去势的机理研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 样品的采集 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 基因的定量 |
| 1.2.3 超微结构的观察 |
| 1.2.4 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 生殖轴上相关生殖激素基因的表达变化 |
| 2.1.1 RNA 质量 |
| 2.1.2 标准曲线与扩增曲线 |
| 2.1.3 下丘脑中GnRH-I 和GnRH-IR mRNA 的变化 |
| 2.1.4 垂体中GnRH-IR，FSHβ和LHβmRNA 的变化 |
| 2.1.5 睾丸中GnRH-IR、FSHR、LHR、3βHSD 和17βHSD mRNA 的变化 |
| 2.2 垂体和睾丸中细胞的超微结构 |
| 2.2.1 垂体促性腺激素细胞 |
| 2.2.2 睾丸组织 |
| 3 讨论 |
| 3.1 免疫对下丘脑中GnRH-I 和GnRH-IR mRNA 表达的影响 |
| 3.2 免疫对垂体中GnRH-IR 、FSHβ和LHβmRNA 表达的影响 |
| 3.2.1 对GnRH-IR mRNA 表达的影响 |
| 3.2.2 对FSHβ和LHβmRNA 表达的影响 |
| 3.3 免疫对睾丸中FSHR、LHR、3βHSD 和17βHSD mRNA 表达的影响 |
| 3.3.1 对FSHR 和LHR mRNA 表达的影响 |
| 3.3.2 对3βHSD 和17βHSD mRNA 表达的影响 |
| 3.4 关于垂体促性腺激素细胞超微结构 |
| 3.5 关于睾丸组织的超微结构 |
| 3.5.1 生精小管界膜 |
| 3.5.2 生精上皮 |
| 3.5.3 间质细胞 |
| 4 小结 |
| 第四章 MBP-GnRH-16 主动免疫对公猪体重及生长激素和IGF-I 的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 样品的采集与处理 |
| 1.1.2 试剂盒 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 体重的称量 |
| 1.2.3 血清中IGF-I 的放射免疫测定 |
| 1.2.4 血清中生长激素的酶免测定 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 体重的变化 |
| 2.2 血清中pGH 水平 |
| 2.3 血清中IGF-I 水平 |
| 2.4 血清睾酮与IGF-I 相关分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 免疫对公猪体重的影响 |
| 3.2 免疫对公猪血清pGH 水平的影响 |
| 3.3 免疫对公猪血清IGF-I 水平的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 MBP-GnRH-16 主动免疫对公猪肉膻味的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 样品的采集 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 雄烯酮的 HPLC 测定 |
| 1.2.2 3-甲基吲哚的 HPLC 测定 |
| 1.2.3 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 背膘脂肪雄烯酮含量 |
| 2.2 背膘脂肪 3-甲基吲哚含量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于雄烯酮 |
| 3.2 关于 3-甲基吲哚 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 本研究尚待解决的问题 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、公兔免疫去势效果观察（论文参考文献）
- [1]去势多肽疫苗对三元公猪生长、屠宰性能及肉品质的影响[D]. 付俊. 湖南农业大学, 2020
- [2]家畜免疫去势研究进展[J]. 曾凡梅,种玉晴,姜勋平,刘桂琼. 中国畜牧兽医, 2019(06)
- [3]GnRH主动免疫对雌鼠下丘脑-垂体-卵巢轴调控的影响[J]. 曹晓涵,韩兴发,陈志渝,曾宪垠. 核农学报, 2014(02)
- [4]GnRH-I主动免疫对犬生殖机能的影响[D]. 赵熙杰. 安徽农业大学, 2013(05)
- [5]GnRH主动免疫动物去势机制及其可逆性研究[D]. 曹晓涵. 四川农业大学, 2013(03)
- [6]GnRH主动免疫对动物生殖的研究进展[J]. 赵熙杰,方富贵. 黑龙江动物繁殖, 2012(06)
- [7]孕烯醇酮和睾酮主动免疫对公兔生殖性能的影响[D]. 程薇. 四川农业大学, 2012(06)
- [8]GnRF疫苗对猪屠宰性能和肉品质的影响及免疫猪睾丸营养特性的研究[D]. 袁亚利. 南京农业大学, 2011(01)
- [9]GnRH-A主动免疫公兔对垂体GnRHR、FSH-β和LH-β基因表达的影响[J]. 巩转娣,魏锁成,韦敏. 免疫学杂志, 2010(07)
- [10]重组MBP—GnRH—I6研制及其免疫公猪的效果与机理的研究[D]. 方富贵. 安徽农业大学, 2010(05)