一、质脂过氧化作用及其在辐射损伤中的意义（论文文献综述）
曾慧红[1]（2020）在《雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护作用及机制》文中进行了进一步梳理研究背景众所周知,机体内的消化系统和造血系统对辐射最为敏感。临床上,许多接受辐射治疗的癌症患者常伴随急性和慢性肠道及骨髓损伤,这限制了癌症的成功治疗;在核意外事故或核恐怖袭击条件下,最先损伤的系统也是消化系统和造血系统,出现急性放射综合征。虽然已有缓解辐射导致的急性造血系统损伤药物如氨磷汀（Amifostine）和优保津（Filgrastim）等在临床应用,但目前尚没有公认的能有效缓解辐射导致的急性肠道损伤药物,其主要原因是人们对辐射导致肠道损伤机制的研究不够深入,因此有必要通过了解其机制寻找新的防治方法。mTORC1信号通路作为细胞内多条通路的枢纽,参与多种重要生理病理过程,如胰岛素/胰岛素受体通路、PI3K/Akt通路和AMPK通路等。但在辐射条件下,肠黏膜上皮细胞内mTORC1信号通路是否参与辐射导致的肠道损伤?改变mTORC1信号通路状态能否保护或修复肠道的辐射损伤等问题,值得深入探讨。本文通过观察不同剂量X射线全身辐射后小鼠的生存情况和肠黏膜病理变化程度以确定后续实验的辐射剂量（第一部分）;系统观察了X射线全身辐射小鼠小肠隐窝细胞mTORC1信号通路及与此相关的细胞自噬、细胞凋亡、NF-κB信号通路和DNA损伤等病理生理变化以了解mTORC1信号通路在此过程中的作用（第二部分）;应用雷帕霉素短暂抑制辐射激活的mTORC1信号通路,观察其对小鼠存活、肠黏膜机械屏障及肠道干细胞损伤等的影响以进一步证实mTORC1信号通路的作用和作为干预药物的防护效果（第三部分）;并从细胞自噬、细胞凋亡、NF-κB信号通路和DNA损伤修复等方面深入研究雷帕霉素抑制mTORC1信号通路对肠黏膜辐射损伤保护作用的机制（第四部分）。第一部分不同剂量X射线辐射致小鼠肠黏膜损伤目的:以X射线全身辐射建立小鼠辐射模型,观察辐射对小鼠肠黏膜机械屏障和肠道干细胞的损伤。方法:120只8周C57BL/6雄性小鼠随机分为4 Gy组、8 Gy组、12 Gy组和正常对照组共4组。小鼠采用Elekta Precise直线加速器进行X射线全身一次性辐射建模,辐射总剂量分别为4 Gy、8 Gy和12 Gy,辐射速率为2.28 Gy/min。正常对照组不辐射。40只用于观察各组小鼠30天内生存情况;80只建模后取材,辐射小鼠各组观察时间点为6h,1d,2d,3d和7d。采用速率法检测血清DAO活性观察肠道通透性变化,苏木素-伊红（H-E）染色法观察各组小鼠空、回肠组织病理变化,透射电镜观察空肠黏膜上皮细胞超微结构变化,免疫组织化学染色观察Olfm4+肠道干细胞、Lysozyme+潘氏细胞和紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin的分布及变化,PAS染色观察杯状细胞变化,嗜银染色观察小肠嗜银细胞变化,蛋白免疫印迹法检测ZO-1、Occludin蛋白表达变化。结果:1.随着X射线辐射剂量增加,小鼠体重降低;辐射后30天内生存率观察,辐射剂量越大,小鼠存活时间越短。12 Gy组小鼠5天内全死亡,8 Gy组14天内全部死亡,4 Gy组小鼠全部存活;2.不同剂量X射线辐射后,空肠和回肠肠绒毛出现倒伏、缩短和上皮脱落以及固有层毛细血管扩张出血等病理变化,肠上皮细胞微绒毛和细胞内线粒体等细胞器超微结构有损伤,其中12 Gy辐射损伤最严重;不同剂量辐射后空肠、回肠损伤分数均升高,且辐射剂量越大升高越明显。辐射后回肠的损伤分数变化与空肠相似,但比空肠轻。3.不同剂量X射线辐射可导致DAO活性增强,与正常对照组相比,8 Gy组和12 Gy组变化均有统计学意义（P<0.01）。4.X射线辐射均导致空肠、回肠Olfm4阳性细胞数量减少,但不同剂量的作用差异很大。4 Gy、8 Gy辐射后阳性细胞数减少后快速回升,12 Gy辐射后则持续减少。5.X射线辐射可导致空肠、回肠肠绒毛杯状细胞、嗜银细胞数量减少。与正常组相比,4 Gy组各时间点差异无统计学意义,8 Gy辐射后细胞数减少后回升,12 Gy组则持续减少（P<0.01或P<0.05）。不同剂量X射线辐射后空肠潘氏细胞数量出现先增加后减少的的变化趋势,回肠潘氏细胞数在4 Gy辐射后变化不明显,但8 Gy和12Gy辐射后阳性细胞数减少。6.通过观察8 Gy X射线辐射后肠黏膜ZO-1和Occludin蛋白,各时间点均表达降低且分布异常（P<0.01）。结论:不同剂量X射线辐射均可不同程度损伤空肠、回肠肠黏膜,破坏肠黏膜机械屏障,而且造成肠道干细胞的数量减少和分化异常。第二部分mTORC1信号通路在辐射致小鼠肠黏膜损伤中的作用目的:以X射线全身辐射建立小鼠辐射模型,观察辐射对小鼠空肠隐窝细胞mTORC1信号通路、NF-κB信号通路和DNA损伤情况,探讨mTORC1信号通路在辐射肠黏膜损伤中的作用。方法:85只8周C57BL/6雄性小鼠随机分4 Gy组、8 Gy组、12 Gy组和正常对照组共四组。采用Elekta Precise直线加速器对小鼠进行X射线全身一次性辐射,建立小鼠辐射模型,辐射总剂量分别为4 Gy、8 Gy和12 Gy,辐射速率为2.28 Gy/min,辐射组小鼠观察时间点为6h,1d,2d,3d和7d,其中8 Gy增加12h观察时间点,正常对照组不辐射。各组小鼠处死前两小时腹腔注射Brd U溶液（100mg/kg）,麻醉后留取空肠标本。采用免疫组织化学法观察肠隐窝pS6表达变化、Brd U+增殖细胞数量变化、细胞核内γH2AX和53BP1阳性焦点数变化,免疫荧光双重染色观察Olfm4+小肠干细胞内pS6表达变化,TUNEL法观察肠隐窝凋亡细胞变化,蛋白免疫印迹法检测S6、pS6、mTOR、pmTOR、LC3B、p62、Akt、pAkt、p65和pp65蛋白表达变化。结果:1.不同剂量X射线全身辐射小鼠后空肠肠隐窝pS6免疫阳性蛋白积分光密度值明显高于正常组,蛋白印迹检测也显示8 Gy肠隐窝pS6、pmTOR蛋白高表达（P<0.01）;辐射后pS6和Olfm4阳性染色共同表达于同一肠道干细胞,肠隐窝细胞（包括肠道干细胞）内mTORC1信号通路被激活。2.不同剂量X线辐射均导致空肠Brd U+增殖细胞数量减少,但不同剂量的作用差异较大。4 Gy和8Gy组辐射后阳性细胞呈现降低-升高-恢复正常的变化规律,12 Gy组则持续减少（P<0.01）。不同剂量辐射后肠隐窝凋亡细胞数明显比正常组多（P<0.01或P<0.05）。3.8 Gy辐射后肠隐窝内p62表达均高于正常对照组（P<0.01）,LC3BII/LC3BI的比值较未辐射组显着降低（P<0.01或P<0.05）;辐射后细胞自噬受到显着抑制。4.与正常对照组比,8 Gy辐射后肠隐窝pAkt蛋白表达水平升高;辐射后肠隐窝pp65蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。5.8 Gy辐射后小鼠肠隐窝细胞核内γH2AX和53BP1焦点数明显高于未辐射小鼠肠隐窝细胞（P<0.01）。结论:辐射后肠隐窝细胞内mTORC1信号通路和NF-κB信号通路过度激活,细胞自噬受抑制,辐射引起肠道隐窝细胞DNA损伤和细胞凋亡。第三部分雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护作用目的:以X射线全身辐射小鼠构建辐射模型,探索雷帕霉素通过抑制mTORC1信号通路,对辐射肠黏膜损伤的保护作用。方法:90只8周C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组,单纯辐射组,雷帕霉素处理组和雷帕霉素对照组,40只用于观察小鼠30天内生存率,50只按实验需要处理小鼠并取材,采用Elekta Precise直线加速器对小鼠进行8 Gy X射线全身一次性辐射,雷帕霉素处理组全身辐射后6h给小鼠皮下注射雷帕霉素（4mg/kg）,以后隔天注射1次,雷帕霉素对照组小鼠不辐射但同时间点给药,单纯辐射组和正常对照组不给药,观察时间点为辐射后1d,3d,7d。各组小鼠麻醉后留取空肠标本,采用速率法检测血清DAO活性观察肠道通透性变化,H-E染色法观察各组小鼠空肠组织病理变化,透射电镜观察空肠黏膜上皮细胞超微结构变化,免疫组织化学观察Olfm4+肠道干细胞、Lysozyme+潘氏细胞,pS6,紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin的分布及变化,免疫荧光双重染色观察Olfm4+小肠干细胞内pS6表达变化,PAS染色观察杯状细胞变化,嗜银染色观察嗜银细胞变化,蛋白免疫印迹法检测ZO-1、Occludin、S6、pS6、mTOR、pmTOR蛋白表达变化。结果:1.雷帕霉素处理后能显着降低由辐射导致的肠隐窝pS6、pmTOR蛋白高表达（P<0.01）,并可明显减弱肠隐窝和肠道干细胞辐射后增强的pS6荧光强度,能有效抑制辐射导致的肠隐窝细胞包括肠道干细胞内的mTORC1信号通路。2.雷帕霉素处理组在辐射后30天仍有30%的小鼠存活,而单纯辐射组小鼠全部死亡,雷帕霉素处理后可提高辐射小鼠生存率（P<0.05）。3.与单纯辐射组相比,雷帕霉素处理后小鼠血清DAO活性明显降低（P<0.05）;空肠黏膜的病理变化明显改善,肠绒毛增高,肠黏膜上皮细胞损伤减轻,微绒毛的形态和数量得到改善,紧密连接结构趋于正常,损伤分数显着降低（P<0.01）。4.与单纯辐射组比,雷帕霉素处理后辐射小鼠空肠肠黏膜ZO-1和Occludin蛋白表达升高（P<0.01）,在肠黏膜上皮细胞间的分布增加,结构也更清晰。5.雷帕霉素处理组1天和3天Olfm4+细胞数量比辐射组少,但辐射后7天肠隐窝内肠道干细胞的数量多于辐射组（P<0.01）;辐射后,雷帕霉素处理可增加肠黏膜杯状细胞和潘氏细胞数量（P<0.01）。雷帕霉素处理促进了肠道干细胞数量及细胞分化功能的恢复。结论:短暂使用雷帕霉素可抑制辐射激活的mTORC1信号通路,促进肠道干细胞的恢复以及肠黏膜损伤的修复。第四部分雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护机制目的:以X射线全身辐射小鼠为模型,探索雷帕霉素对辐射损伤肠黏膜保护作用的机制。方法:65只8周C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组,单纯辐射组,雷帕霉素处理组和雷帕霉素对照组,采用Elekta Precise直线加速器对小鼠进行8Gy X射线全身一次性辐射,雷帕霉素处理组全身辐射后6h给小鼠皮下注射雷帕霉素（4mg/kg）,以后隔天注射1次,雷帕霉素对照组小鼠不辐射但同时间点给药,单纯辐射组和正常对照组不给药,观察时间点为辐射后12h,1d,3d,7d。各组小鼠处死前两小时腹腔注射Brd U溶液（100mg/kg）,麻醉后留取空肠标本。采用免疫组织化学法观察肠隐窝Brd U+增殖细胞数量变化、细胞核内γH2AX和53BP1阳性焦点数变化,TUNEL法观察肠隐窝凋亡细胞变化,qRT-PCR法检测肠隐窝Puma、Bcl2、Bcl-xl、Bax和Bak基因表达量的变化,蛋白免疫印迹法检测LC3B、p62、Akt、pAkt、p65和pp65蛋白表达变化。结果:1.单纯辐射组LC3BII的表达量低于LC3BI量,而雷帕霉素处理后LC3BII的表达量高于LC3BI,LC3BII/LC3BI的比值比单纯辐射组高（P<0.01）。单纯辐射组肠隐窝p62的表达明显比正常对照组高,而雷帕霉素能显着降低辐射导致的p62表达升高（P<0.01）。雷帕霉素处理组肠隐窝pAkt、pp65表达较单纯辐射组均明显减少（P<0.01或P<0.05）。2.雷帕霉素处理后小鼠肠隐窝内Brd U+细胞数较单纯辐射组明显减少,雷帕霉素能有效抑制辐射后肠隐窝细胞的过度增殖（P<0.01）,雷帕霉素处理后肠隐窝凋亡细胞数量也减少（P<0.05）。与正常对照组相比,单纯辐射后肠隐窝内表达高水平的促凋亡相关基因Puma和Bak m RNA,雷帕霉素处理能显着降低辐射后Puma和Bak m RNA的表达量（P<0.01或P<0.05）。3.雷帕霉素处理后肠隐窝细胞内γH2AX和53BP1焦点数较单纯辐射组明显减少（P<0.01）,雷帕霉素减少了辐射后肠隐窝细胞的DNA损伤。结论:mTORC1信号通路抑制剂雷帕霉素通过促进细胞自噬,抑制细胞过度增殖和凋亡,抑制激活的Akt、NF-κB信号通路,促进DNA损伤修复,以达到对辐射损伤肠黏膜的保护作用。全文结论综合以上四部分内容,全文结论如下:1.X射线全身辐射可造成实验小鼠肠黏膜病理损伤,机械屏障受损,通透性增加,肠道干细胞数量减少与分化能力下降。2.X射线全身辐射激活肠隐窝上皮mTORC1信号通路,抑制细胞自噬,激活Akt和NF-κB信号通路,加速DNA损伤和细胞凋亡产生病理变化。3.雷帕霉素通过短暂抑制X射线辐射导致的肠隐窝干细胞mTORC1信号通路激活,恢复肠道干细胞数量和分化能力,维持肠黏膜机械屏障结构的完整性,提高辐射小鼠的生存率。4.mTORC1信号通路抑制剂雷帕霉素通过促进细胞自噬,抑制激活的Akt、NF-κB信号通路和细胞凋亡,促进DNA损伤修复,以达到对辐射损伤肠黏膜的保护作用。
李思佳[2]（2019）在《刺五加中改善辐射小鼠脑损伤的功能成分研究》文中进行了进一步梳理空间辐射会对神经系统造成伤害,而刺五加对神经系统疾病的积极作用已有报道,关于刺五加中不同功能成分对改善辐射诱导脑损伤疾病的具体作用还不清楚。本文分别以中药刺五加的功能成分,即多糖、黄酮、皂苷B、皂苷E为研究对象,以60Co-γ射线辐照小鼠为脑损伤模型,探究不同的刺五加功能成分对辐射脑损伤小鼠的改善作用,并获得以下结果:首先,通过辐射小鼠行为学、病理切片观察以及神经递质的变化,探究了刺五加中各功能成分对辐射脑损伤小鼠的学习记忆能力影响。研究发现,在行为学实验中,刺五加皂苷B与刺五加皂苷E的水迷宫游泳情况与辐射组之间具有显着差异（P<0.01）,刺五加各功能成分组辐射小鼠的糖水偏嗜度显着高于辐射组（P<0.05）,说明刺五加皂苷B与刺五加皂苷E能够改善辐射小鼠的空间记忆能力与神经敏感性;在病理学观察中,刺五加皂苷E能够减少辐射小鼠大脑皮质与海马组织的细胞空洞,提高神经元数量,说明刺五加皂苷E能够改善辐射造成的脑组织细胞的损伤;在神经递质含量测定中,刺五加多糖可显着提高辐射小鼠脑组织的去甲肾上腺素（NE）的含量（P<0.01）,刺五加黄酮可显着提高去甲肾上腺素（NE）和乙酰胆碱（Ach）的含量（P<0.05）,刺五加皂苷B和刺五加皂苷E能够显着提高γ-氨基丁酸（GABA）（P<0.05）与乙酰胆碱（P<0.05）的含量,说明刺五加多糖可通过作用于NE能系统,刺五加黄酮可通过作用于NE能系统与Ach能系统,刺五加皂苷B与刺五加皂苷E可通过作用于GABA能系统与Ach能系统,发挥改善辐射小鼠学习记忆能力的作用。然后,通过辐射小鼠的胸脾指数测定、脑组织与血清的氧化指标测定,探究了刺五加功能成分对辐射小鼠的免疫损伤以及氧化损伤的改善作用。研究发现,刺五加的功能成分均能够显着改善辐射诱导的免疫损伤（P<0.05）;脑组织中,刺五加多糖与刺五加黄酮能够显着降低脑组织蛋白羰基的含量并发挥清除自由基的作用（P<0.05）,说明刺五加多糖与刺五加黄酮能够改善由辐射引起的蛋白变性,清除自由基,防止脂质过氧化;血清中,刺五加功能成分能够抑制辐射造成的生物大分子损伤（P<0.05）,刺五加多糖和刺五加皂苷B能够发挥显着的自由基清除作用（P<0.05）,说明脑组织中刺五加多糖、刺五加黄酮能够发挥抑制蛋白损伤清除自由基的作用,血清中刺五加多糖与刺五加皂苷B具有抑制生物大分子的损伤和清除自由基的作用。最后,通过刺五加功能成分在脑及其他组织的药代动力学研究,以及液质联用技术应用,进行了刺五加功能成分在辐射小鼠脑及其他组织的代谢情况探究和透过血脑屏障的刺五加单体成分分析。结果表明,刺五加功能成分均能够在各个组织中发挥作用,脑组织中刺五加皂苷E的相对代谢量显着高于其他组织,说明刺五加皂苷E可在脑组织中发挥作用;药代动力学结果显示,刺五加黄酮的药代曲线出现双峰现象,说明刺五加黄酮成分在脑组织中发生药物的再分配,刺五加皂苷E的药物清除量高,并且生物利用度显着高于其他成分（P<0.05）,说明刺五加皂苷E能够在辐射小鼠脑组织中被吸收,药物作用后被代谢,体现对辐射脑损伤小鼠改善作用;通过对辐射小鼠的脑组织进行质谱分析,检测到的完整化合物单体为多糖类单体2,3,4-三-O-苄基-L-岩藻吡喃糖、黄酮类单体槲皮素、以及异嗪皮啶、α-亚麻酸、刺五加皂苷E1,说明几种单体可透过血脑屏障发挥药效,维持神经系统的稳定。
王安[3]（2020）在《基于“脾为之卫”探讨益气解毒方对急性放射损伤小鼠的防护研究》文中研究说明背景:随着核能的广泛应用,放射诊疗手段的普及,人类暴露于辐射环境的可能性大大增加。当机体一次或短时间（数日）内受到>1 Gy的均匀或比较均匀的全身照射,即可引起急性放射损伤,这极大地威胁到人们的生命健康,因此对于辐射防护剂的研究一直是电离辐射相关研究的重点。然而,现有辐射防护剂存在着诸如毒副作用大、价格昂贵、效果不稳定或治疗窗小等问题,一定程度上限制了其在临床的普及推广。近年来,中医学界对放射损伤进行了一系列探索,在病因学、治疗学方面都取得了一定进展,中草药以其安全、方便口服、吸收迅速、价格低廉等特点,被认为是辐射防护剂研究的新热点。但目前,相关研究多集中在单味药或中药单体上,中药复方研究较少,难以凸显中药多系统、多靶点、整体防护的作用优势。同时,中医药防治放射损伤的理论体系尚未构建,“理法”阐释不够透彻、全面,“方药”选择亦缺少系统的理论支持,且围绕药效及机制的实验研究与中医理论间的关联性不强,这些问题一定程度上限制了中医药在辐射防护领域的应用与发展。基于上述问题,课题组展开了一系列探索,在理论研究上将急性放射损伤的中医学病因命名为“电离毒”,并明确了中医“脾”在电离辐射致病过程及防治方法中均具有重要地位。中医“脾”的功能定位涵盖了现代解剖学的脾脏及肠道,这两者均是重要的免疫器官,在免疫防御中发挥作用,从而保护机体。对于“脾”的这种护卫机体的功能,中医有“脾为之卫”之说,认为“脾”在疾病发生、传变、防治方面均具有重要地位。生理情况下,“脾”旺则不受邪,这与现代医学认为脾脏、肠道发挥免疫功能、护卫机体的作用不谋而合;病理情况下,“脾”伤则百病由生,这与现代医学认为射线易致脾脏和肠道免疫损伤,进而引发机体防御功能下降,引发并发症的病理过程相似。因此,本研究首次将中医“脾为之卫”理论引入急性放射损伤的研究中,并以此为切入点,对急性放射损伤的中医病机、治则治法、组方用药进行探讨,以期进一步补充、完善放射损伤的中医理论体系。并在此基础上自拟益气解毒中药复方,利用急性放射损伤小鼠模型,总结照射后脾脏及肠道免疫的损伤特点,探究益气解毒方对急性放射损伤小鼠脾脏及肠道免疫的防护效应和机制,为从“脾失之卫”论治放射损伤的中医病机,以及“补脾实卫,益气解毒”的防治方法,提供现代科学依据。目的:在理论上明确“脾为之卫”的源流与内涵,并从“脾失之卫”探讨急性放射损伤的中医学病机,为“补脾实卫,益气解毒”的防治方法提供理论依据;在实验研究中,首先总结电离辐射对小鼠脾脏及肠道免疫的损伤特点,然后探究益气解毒方对小鼠脾脏及肠道免疫的防护效应,为从“脾失之卫”论治放射损伤的中医病机,以及“补脾实卫,益气解毒”的防治方法,提供现代科学依据。最后,围绕“铁死亡”这一近些年发现的新型细胞死亡方式,通过分子生物学实验技术,探讨益气解毒方预防急性放射损伤的潜在药理学机制,为其今后的临床应用和推广提供科学支持。方法:理论研究:（1）查阅、分析古代文献记载,阐述“脾为之卫”理论的源流与内涵;（2）分析急性放射损伤的临床表现,结合中医理论,从“脾失之卫”探讨急性放射损伤的各阶段病机;（3）根据分析得出的中医病机,从“补脾实卫,益气解毒”论证急性放射损伤各阶段的防治方法,为益气解毒方的组方提供依据。实验研究:（1）2.0 Gy 60Coγ射线一次性全身照射,照后1、3、7、14、21 d观察脾脏及肠道免疫损伤特点,为中药防护效应研究提供基础。（2）预防性给药10 d,2.0 Gy 60Co γ射线一次性全身照射,照后1、3、7天,观察益气解毒方对脾脏及肠道免疫的防护效应。（3）根据中药的防护特点,围绕“铁死亡”这一近些年发现的新型细胞死亡方式,通过分子生物学实验技术,探讨益气解毒方防护急性放射损伤的潜在药理学机制。结果:理论研究:（1）“脾为之卫”理论肇起于《黄帝内经》,经过历代医家的诠释与补充,得以不断完善与发展。通过文献研究,我们认为其内涵包括:脾主运化水谷精微,长养肌肉,抵御外邪;脾为五脏六腑之源,灌溉四傍,脏安难伤;脾为气血化生之源,化生卫气,防御外邪。（2）通过分析急性放射损伤各个阶段的临床表现,我们从“脾失之卫”角度对其阶段病机进行论述。我们认为:在急性放射损伤发病之初,其中医病机为“毒邪致病,伤于脾卫”;在疾病发展、变化阶段,中医病机为“脾失之卫,百病由生”;在疾病转归、预后阶段,中医病机为“脾卫渐复,抗邪外出”。（3）我们根据急性放射损伤的中医病机,提出“补脾实卫,益气解毒”的基本防治原则,并根据损伤不同阶段的侧重,提出分阶段的防治方法。我们认为,在损伤发生之前,以“未病先防,补脾实卫”为原则;感病之后以“既病防变,益气解毒”为原则;恢复阶段以“瘥后防复,益气扶正”为原则。在此基础上,我们对益气解毒方进行了组方分析,我们认为该方,配伍精当,用药以补脾、益气、实卫为主,清热解毒、养阴生津为辅,具有“补脾益气,清热解毒”之功,符合照射前“未病先防,重补脾实卫”的治疗原则。且复方中多味药物为药食两用之品,药性平和,作为预防性给药不会造成机体阴阳偏颇。实验研究:（1）①根据急性放射损伤的定义,以及课题组前期研究基础,本研究采用2.0 Gy 60Coγ射线一次性全身照射,成功复制急性放射损伤小鼠模型。②从整体情况及脾脏、肠道免疫的变化规律来看,对Balb/c小鼠行2.0 Gy 60Co γ射线一次性全身照射,照后1d即可观察到显着损伤,其中整体情况及脾脏免疫在照后3d损伤最为严重,照后7 d出现好转,肠道免疫在照后1 d损伤最为严重,3 d可观察到好转。提示照后7 d之内为损伤发生、发展、变化的关键期,亦是观察防护效果的重要时期,故下一步将选取照后1、3、7d进行中药的防护效应研究。③上述小鼠照射后整体情况与脾脏、肠道免疫的变化特点表明,急性放射损伤小鼠存在“脾失之卫”这一病理表现,且“脾卫”功能的损伤及恢复情况在很大程度上影响着整体的病情变化,为从“脾失之卫”探讨急性放射损伤的中医病机提供了科学支持。（2）益气解毒方对2.0 Gy 60Co γ射线一次性全身照射后引发的整体及脾脏、肠道免疫损伤有一定的防护效应,具体表现为:促进整体情况的恢复;抑制照后脾脏及肠道免疫细胞的减少,促进免疫细胞数量恢复,改善脾脏、肠道组织结构;改善照后脾脏及肠道免疫细胞亚群分布,调控照后相关细胞因子的分泌,进而促进机体免疫平衡的恢复;减轻电离辐射引发的脾脏、肠道氧化损伤。（3）益气解毒方通过减轻照后氧化应激水平、抑制铁过载、调控LPCAT3/LOX途径,来抑制照后细胞铁死亡,进而发挥辐射防护作用。现代药理学研究表明,复方中的一些药物或其活性成分,具有明确的抗氧化、调控铁代谢、防辐射作用,这些成分或成为益气解毒方抑制铁死亡、发挥辐射防护作用的潜在物质学基础。结论:理论研究表明,“脾失之卫”为急性放射损伤的重要病机,益气解毒方以“补脾实卫,益气解毒”为治则组方,符合其基本病机。动物实验表明2.0 Gy60Co γ射线一次性全身照射,可致小鼠脾脏及肠道免疫损伤,益气解毒方对急性放射损伤小鼠脾脏及肠道免疫具有一定防护效果,为从“脾失之卫”论治急性放射损伤的中医病机,以及“补脾实卫,益气解毒”的防治方法,提供现代科学依据。进一步的机制研究表明,益气解毒方可能通过抑制照后细胞铁死亡,进而发挥辐射防护作用。
陈瑗,周玫[4]（1983）在《质脂过氧化作用及其在辐射损伤中的意义》文中认为 自由基病理学是讨论细胞中失控的异常的自由基反应所引起的病理学变化,这些反应可以由生理条件下产生的自由基所引起的,也可以由外源性化学剂所引起。这些化学剂或者本身就是自由基,或者可通过代谢形成自由基,或者是将正常细胞成分诱发为自由基。电离辐射是属于物理性致自由基剂。自由基独特的化学性质及其有关的分子构形的改变是自由基病理学的基础。细胞内大分子聚合物核酸和
张华[5]（2013）在《黑木耳中性多糖片段硫酸酯对辐射诱导氧化应激防护作用》文中研究表明随着科学技术的发展，由于空间技术和核技术的应用，辐射伤害不仅见于战时，已渗透到各个领域，辐射产生大量自由基能引发机体氧化应激反应，现代医学认为炎症、肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮肤等近百余种相关疾病的发生机理与体内自由基产生过多而得不到及时有效清除有着密切的关系，由于合成抗氧化剂存在稳定性差、作用时间短、毒副作用、不适合长期服用等问题，发掘新型天然抗氧化剂已成为食品科学和航天医学的研究重点。本课题采用化学修饰方法制备黑木耳中性多糖片段硫酸酯（Sulfate of neutralAuricularia auricular polysaccharides, SNAAP），采用清除体外自由基进行活性跟踪，经细胞模型确证，SNAAP对氧化应激具有很好的防护作用，进一步建立氧化应激动物模型，从细胞、分子水平系统研究SNAAP辐射防护作用，旨在促进黑木耳及其多糖资源的深度开发利用。选用氯磺酸-N, N二甲基甲酰胺（CSA-DMF）作为酯化试剂，采用单因素实验，以硫酸酯化试剂（CSA：DMF）体积比为1：6；酯化温度为50℃，反应时间为3h，进行非选择性修饰制备木耳中性多糖片段硫酸酯：得率为51.89±1.36%，离子色谱法测定其硫酸根含量为31.00±2.79%，计算硫酸基取代度为0.78±0.11；经气相色谱法分析该工艺下制备SNAAP产物中甲酰胺和N, N-二甲基甲酰胺溶剂残留量分别为80.1±7.5μg/L和64.1±4.8μg/L，均符合人用药品注册技术规范国际协调会（ICH）和中国药典（2000版）限量标准。采用活性跟踪法，研究了SNAAP的体外抗氧化活性，当受试样品浓度为2.0mg/mL时，SNAAP对超氧自由基清除率为95.71%，而黑木耳中性多糖片段清除率仅为3.75%，表明硫酸酯化能显着提高黑木耳中性多糖片段对超氧自由基的清除能力，筛选得到SNAAP对超氧自由基清除活性最强。红外光谱解析SNAAP在1249cm-1（νS=O）和820cm-1（νC-O-S）处有-OSO3的S=O伸缩振动和C-O-SO3基团的伸缩振动特征吸收峰，说明合成产物SNAAP有硫酯键。且硫酸基位于SNAAP中单糖残基平伏位置，并在C6位上发生取代；紫外光谱显示SNAAP未出现新的特征吸收峰，证明该酯化方法是较为温和的硫酸化修饰手段。原子力显微镜表征SNAAP分子中具有三维空间网状结构，相对分子量为6.53×106Da，且与黑木耳中性多糖片段相比，经过硫酸化，SNAAP的分子量分布变窄，分子量较为均一和集中。SNAAP单糖组成分别由D-核糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成，各单糖之间摩尔比例为1.0：7.0：1.0：1.0：4.0：10：2.0。MTT法评价了SNAAP不具有细胞毒性作用，以X射线辐射诱导人外周血为氧化应激模型，采用血常规分析，筛选得到SNAAP对氧化应激防护作用最佳，进一步验证实验研究发现SNAAP中剂量组（60μg/mL）可以将辐射受损的白细胞数维持至对照组水平，减少辐射引起的畸变白细胞数，具有辐射防护功效。构建γ辐射诱导的氧化应激动物模型，研究发现SNAAP各剂量组能够直接清除辐射产生的自由基，可有效的促进造血系统恢复和免疫细胞增殖和生长，提高机体的免疫系统功能；能够显着提高小鼠各脏器中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和乳酸脱氢酶（LDH）活性，增加还原型谷胱甘肽（GSH）的含量，降低髓过氧化物酶（MPO）活性，降低丙二醛（MDA）水平，证实SNAAP能够有效激活抗氧化酶系，抑制氧化酶系，抑制脂质过氧化，减轻细胞膜损伤，减少骨髓微核和染色体畸变率；揭示SNAAP抗辐射机制与自由基清除、抗氧化酶系水平、细胞增殖、谷胱甘肽水平、脂质氧化、细胞周期停滞等因素有关。因此，SNAAP对辐射诱导氧化应激防护作用这一研究对航天、军事及核辐射接触人员的健康和安全具有十分重要理论意义和实际应用价值。
廖泽彬[6]（2020）在《MPLA对小肠隐窝细胞增殖及辐射损伤后再生的调控作用和机制研究》文中指出核爆炸、核恐怖袭击以及核反应堆事故等均会产生大剂量的电离辐射,涉核人员不可避免的会受到电离辐射的损伤,因此导致的急性放射病如骨髓型急性放射病、肠型急性放射病等均严重威胁患者的生命安全。小肠作为辐射损伤最敏感的器官之一,其在辐射事件后会发生肠道细胞的大量死亡,并导致小肠绒毛的缺失、肠道完整性的破坏等,然而现有的医学手段对于辐射剂量大于8 Gy的重度骨髓型放射病以及肠型放射病尚无成功的治疗案例,其主要原因是存在严重的肠道辐射损伤,开发高效低毒的肠道辐射损伤防治药物以及探索其潜在的机制有着重要的军事和临床意义。而小肠隐窝作为小肠干细胞的龛,其是小肠细胞再生的来源,辐射损伤后小肠干细胞会大量缺失,这严重影响肠道细胞的更新,因此,对小肠隐窝细胞增殖以及辐射损伤后再生的作用机制研究有利于解决肠型放射病治疗的难题。Toll样受体（TLR）是一类病原相关的模式识别受体,研究发现,多种类型的TLR受体激动剂有着显着的辐射防护效果。本教研室对多种TLR受体激动剂进行了研究,经过多年的努力,筛选出具有优良辐射防护效果的TLR4受体激动剂脂多糖（LPS）和单磷酰脂质A（MPLA）,前期实验结果显示LPS和MPLA均能显着提高辐射损伤后动物的存活率,并且能减轻辐射导致的肠道损伤,然而LPS和MPLA对于肠道辐射损伤防护的作用机制尚不明确。本课题从小肠隐窝细胞增殖再生的角度出发,探索TLR4激动剂LPS和MPLA介导小肠隐窝细胞增殖以及辐射损伤后再生的作用和调控机制。免疫荧光实验结果显示TLR4受体主要分布在小肠隐窝部,这提示TLR4激动剂能调控小肠干细胞的生命活动;通过构建小肠类器官模型以及使用小鼠体内模型,我们发现LPS和MPLA刺激能在体内和体外促进小肠隐窝细胞的增殖;LPS和MPLA对小肠类器官、小肠隐窝细胞的增殖作用依赖TLR4受体;提取小鼠小肠隐窝接种在基质胶上后给予电离辐射或给予小鼠大剂量的全身照射以造成其肠道损伤,结合小肠组织Olfm4免疫组织化学染色,我们发现辐射损伤后给予LPS或MPLA刺激能促进小肠类器官及小肠隐窝干细胞的再生。为了探索TLR4激动剂调控小肠隐窝细胞增殖以及辐射损伤后再生的作用机制,我们给予小鼠腹腔局部照射并提取隐窝细胞的RNA,通过转录组测序考察肠道损伤后小肠隐窝细胞相关信号通路的变化以及辐射后给予MPLA刺激对这些通路的影响。实验结果显示,腹腔局部照射后导致小肠隐窝中活跃型干细胞的生物标志物Lgr5、Olfm4显着下调,而静息干细胞的标志物Clu、Bmi1显着上调,辐射后给予MPLA刺激能促进Lgr5的显着上调;对信号通路的研究发现,肠道辐射损伤后Wnt信号通路、Notch信号通路、Hippo信号通路、Hedgehog信号通路以及SOX9、c-Myc、MSI等维持小肠干细胞正常生命活动的基因被明显的抑制,而辐射后给予MPLA刺激,这些信号通路和基因又被显着的激活;肠道辐射损伤还导致了凋亡、坏死、铁死亡、RNA和氨基酸降解等相关的信号通路显着激活,而辐射后给予MPLA刺激能显着抑制这些信号通路。这均提示MPLA能促进辐射损伤后小肠干细胞的再生并且抑制辐射导致的小肠隐窝细胞坏死、凋亡以及活性分子的降解。进一步的,我们通过提取小肠类器官和小肠隐窝细胞的蛋白,通过蛋白免疫印迹实验并结合小肠组织免疫荧光实验,验证了TLR4激动剂LPS或MPLA刺激后能显着激活Wnt和Notch信号通路,并上调c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1蛋白,该激活和上调作用依赖TLR4受体。使用Wnt信号通路、Notch信号通路、c-Myc蛋白特异性的抑制剂,并构建腺相关病毒（AAV）特异性的敲低小肠中MSI2、SOX9、YAP1基因并抑制其表达,结合小肠类器官EDU免疫荧光染色以及小肠组织BRDU免疫组化染色,发现LPS和MPLA对小肠隐窝细胞增殖及辐射损伤后再生的促进作用依赖Wnt、Notch信号通路以及c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1蛋白。通过构建慢病毒（lentivirus）对小肠类器官MSI2、SOX9和YAP1进行敲低并抑制其表达、使用AAV敲低小鼠体内相关基因,结合蛋白免疫印迹和小肠组织免疫荧光实验,我们发现LPS和MPLA刺激后能激活小肠类器官以及小肠隐窝细胞中c-Myc-MSI2-SOX9-YAP1信号通路。为了研究LPS或MPLA刺激后小肠隐窝细胞中相关蛋白的相互作用关系,我们首先构建人小肠类器官,通过免疫共沉淀实验（Co-IP）发现LPS和MPLA刺激后能促进My D88和Trif募集c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1等蛋白;使用AAV对小肠MSI2、SOX9、YAP1进行敲低并抑制其表达,结合Co-IP实验,我们发现LPS和MPLA对于小肠隐窝细胞的调控存在不同的蛋白募集模式:MSI2、SOX9和YAP1对于MPLA刺激小肠隐窝细胞后相关蛋白的募集更加重要,而缺乏MSI2蛋白后My D88蛋白不能募集β-catenin、SOX9、YAP1、c-Myc蛋白。LPS和MPLA刺激后还能增强小肠隐窝中MSI2、SOX9、YAP1蛋白间的相互作用,并且促进MSI2、SOX9、YAP1蛋白与β-catenin、c-Myc蛋白的结合;使用AAV敲低小肠中MSI2、SOX9、YAP1基因,发现该促进作用依赖于MSI2、SOX9和YAP1首先形成复合物,而MSI2、SOX9和YAP1形成复合物的过程主要表现为MSI2对SOX9、YAP1蛋白的募集,该募集作用需要SOX9和YAP1提前形成复合物。综上所述,我们的研究发现TLR4激动剂LPS和MPLA能促进小肠隐窝细胞增殖以及辐射损伤后的再生,该促进作用依赖Wnt、Notch信号通路以及c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1蛋白;我们的研究还证实了LPS和MPLA能激活小肠隐窝中的c-MycMSI2-SOX9-YAP1这条新的信号通路,并且对LPS或MPLA刺激后小肠隐窝细胞中相关分子的相互作用模式进行了探索,明确了小肠隐窝细胞增殖和再生过程中My D88与Trif对相关蛋白的募集存在不同的模式,而TLR4激动剂LPS和MPLA对于小肠隐窝细胞的调控也存在不同的蛋白募集模式。
逄志骏[7]（2019）在《槐角染料木黄酮对电离辐射损伤保护作用的研究》文中进行了进一步梳理随着核科学和核工业的发展,核技术的广范应用,人们在生产、生活、医疗和科研活动中接触到辐射的机会越来越多。电离辐射（Ionizing radiation,IR,以下简称辐射）能导致骨髓和肠道损伤等,而对可能遭受辐照威胁人员或接受放射治疗的患者预先使用电离辐射损伤保护药物则可以明显降低后期的辐射损伤,提高治愈率。但辐射损伤目前尚缺乏确实有效的保护药物,研究和开发辐射损伤保护药物一直是放射医学领域广受关注的热点。染料木黄酮（Genistein）是一种植物雌激素类化合物,具有很强的抗氧化作用,能降低辐射诱导的自由基水平,也可以通过抑制细胞凋亡、调节细胞周期和基因表达、促进DNA损伤修复等机制发挥辐射保护作用,且具有良好的成药性。化学合成的Genistein制剂Bio-300已在美国食品药品监督管理局注册研发并已进入临床试验研究,而我国对于开发Genistein作为辐射损伤保护药物的研究相对滞后。前期,我单位从中草药槐角（Fructus sophorae）中提取槐属甙、再将槐属甙酸解成Genistein的制备工艺获得国家发明专利（ZL02123450.7）,从而得到纯度达到药用级的槐角染料木黄酮（Fructus sophorae genistein,FSGen）单体（纯度99%以上）,回收率为0.54%,每克成本小于1元,使染料木黄酮作为原料药应用成为可能。其对骨质疏松症的治疗获得国家药物临床研究批件,I期临床试验结果已证明该药物的安全性。但该工艺同时存在着醇提槐角甙增加脱脂和回收醇的步骤,以及氯仿回流脱脂增加成本并污染环境等技术缺陷。鉴于FSGen在辐射损伤保护中的重要作用和前期我实验室的研究基础,本课题拟在前期基础上改进从槐角中提取FSGen的工艺,优化步骤,提高环保标准,节约成本,并对FSGen的辐射损伤保护功能和机制进行探索。为完成上述研究目标,我们开展了以下科学工作:1.在先前提取工艺基础上,我们简化步骤,省略醇提、有机溶剂脱脂步骤,并进行3批提取实验收取FSGen粗品,通过高效液相色谱（HPLC）检测样品纯度,并通过红外光谱（IR）、紫外光谱（UV）、核磁共振（NMR）和质谱（MS）对提取样品进行结构鉴定;2.流式细胞术和Western blotting检测FSGen对辐射诱导小鼠骨髓单个核细胞（BMCs）凋亡的抑制作用,H&E染色、免疫组化染色、免疫荧光染色观察FSGen在体内水平对辐射导致的骨髓损伤的保护作用;3.CCK-8细胞活力检测实验、流式细胞术、Western blotting、单细胞凝胶电泳（SCGE）、细胞衰老检测、细胞活性氧自由基（ROS）检测和细胞免疫荧光染色实验观察FSGen对辐射导致的大鼠小肠上皮细胞（IEC-6）损伤的保护作用;H&E染色、免疫组化染色、免疫荧光染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）观察FSGen对辐射导致小鼠小肠组织损伤和炎症的保护作用;4.转录组学测序分析FSGen发挥保护作用的关键分子机制;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、RNA干涉实验（RNAi）、CCK-8细胞活力检测实验、Western blotting和免疫组化染色研究DNA损伤修复基因Rassf1a和Ercc1在FSGen辐射保护作用中的意义。通过上述研究工作,我们得出了以下结论:改进后的FSGen提取工艺得到了高纯度的原料药,提取样品的结构正确,为5,7,4’-三羟基异黄酮,简化步骤后的工艺利于节约成本,保护环境,适于大批量生产;低浓度FSGen能有效抑制辐射导致的BMCs凋亡,皮下注射FSGen能保护小鼠全身受照后骨髓结构的破坏、减少骨髓组织细胞凋亡,保护造血细胞;低浓度FSGen预处理能有效提高X射线照射后IEC-6细胞的活力,减少细胞凋亡,降低DNA损伤程度,降低衰老程度并减少细胞内的ROS,FSGen预先注射给药也能减少辐射造成的小鼠小肠组织结构破坏、减轻炎症程度、减少细胞凋亡程度并缓解氧化损伤程度,提高小鼠的生存率;FSGen对辐射损伤的保护主要通过DNA损伤修复途径进行;FSGen能通过上调Rassf1a和Ercc1基因的表达发挥DNA损伤修复的功能。本课题改良了FSGen提取的工艺,系统研究了FSGen在辐射导致骨髓和小肠损伤中的保护作用,并对FSGen的保护作用分子机制进行了初步探讨,为进一步开发FSGen成为辐射损伤保护药物奠定了基础,也为我国自主知识产权辐射损伤保护药物的发展积累了资料。
孟媛媛[8]（2019）在《N-草酰化-D-苯丙氨酸（NOFD）的合成及辐射防护作用的研究》文中研究说明目的:HIF（Hypoxia inducible factor）是一种低氧条件下被激活的转录因子,由α亚基和β亚基组成。HIF-1α活性受环境氧浓度调节。低氧诱导因子抑制因子（factor inhibiting hypoxia-inducible factor,FIH,又名:天冬酰胺酰羟化酶）,是体内调节HIF-1α转录活性的主要因子。低氧情况下,FIH活性降低,激活HIF-1转录活性,启动庞大的低氧应激调控网络。N-草酰化-D-苯丙氨酸（NOFD）是已知的FIH抑制剂。为了研究NOFD抑制FIH促进HIF-1α转录在辐射损伤防护中的作用,本研究首先合成了NOFD,继而采用辐射损伤动物模型对其辐射防护作用进行系统评价,并进一步探索NOFD辐射防护作用的机理。方法:本文的研究内容主要分成三部分。1.NOFD化合物的合成及结构鉴定。2.NOFD辐射防护作用的药效学评价。采用30天生存率实验考察NOFD的整体防护效果;通过骨髓细胞克隆形成实验、外周血及骨髓细胞流式细胞术分析实验和骨髓细胞γ-H2AX和MitSox流式细胞分析实验分析NOFD对造血系统损伤的辐射防护作用。通过H&E染色、免疫组织化学实验和免疫荧光实验观察NOFD对辐射后肠损伤的辐射防护作用。3.NOFD辐射防护作用机制的探索。通过Western-blot和RT-PCR实验评估NOFD对细胞内HIF蛋白及下游靶基因表达的影响。通过免疫荧光实验、彗星实验以及凋亡流式分析实验评估NOFD的体外辐射防护作用。结果:1.合成NOFD,并通过核磁和质谱分析确定NOFD分子结构。2.小鼠体内实验结果表明:NOFD可以提高辐射后小鼠的存活率;缓解辐射后骨髓抑制现象,维持外周血系统的平衡;增加辐射后小鼠骨髓细胞的数量;增强辐射小鼠骨髓细胞的自我更新和增殖能力;降低辐射后骨髓细胞的DNA损伤程度以及ROS的聚集。肠损伤实验结果证明,NOFD可以有效地维护辐射后小鼠小肠组织的完整性,增加小鼠小肠隐窝细胞的增殖能力,减少辐射后小肠细胞的凋亡比例。3.体外实验结果表明:NOFD可以提高常氧条件下,细胞中HIF蛋白的表达量,刺激HIF蛋白下游基因的表达,减少辐射后细胞内DNA损伤和凋亡比例,降低ROS的聚集。结论:NOFD具有一定的辐射防护作用。NOFD可以提高辐射后小鼠存活率,改善辐射引起的造血系统损伤和肠损伤,保护细胞免受电离辐射损伤的影响。
赵海田[9]（2012）在《蓝靛果花色苷结构表征及对辐射诱导氧化损伤防护机制》文中研究表明电离辐射能诱导机体生成活性氧自由基，导致细胞和组织发生氧化应激反应，造成机体神经、造血、消化和免疫系统发生急性或慢性损伤，因此，筛选和评价具有优良抗氧化、抗辐射活性的天然产物成分已成为医学、生物学和食品科学研究的热点。本论文以蓝靛果花色苷（Anthocyanin from Lonicera caerulea var. edu-lis，ALC）为研究对象，对ALC分离纯化工艺进行了优化，并对ALC进行了结构表征；对ALC抗氧化、抗辐射活性和对辐射诱导氧化伤害防护作用及机制进行了系统的研究。主要研究结果如下：采用超声波辅助提取法分离提取了ALC，通过响应面法优化得到ALC最佳提取工艺条件：提取时间97min，料液比1:16.35，乙醇浓度47%；单次提取率为86.53%，反复提取3次，总提取率达94.70%。大孔树脂层析法纯化ALC最优条件：采用AB-8型大孔树脂，50%乙醇（HCl调pH值至3.0）为洗脱剂，径高比1:15，洗脱流速1.5BV/h，洗脱剂用量4.0BV，所得ALC色价为79.68与粗提物（色价3.58）相比，纯化倍数为22.26。采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）、高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱（HPLC-ESI-IT-MS）和高分辨质谱（Q-TOF-MS）技术，结合紫外-可见光谱（UV-VIS）、红外光谱（IR）分析技术对ALC进行了结构表征。从ALC中发现8种花色苷，分别是矢车菊素-3-槐糖-5-葡萄糖苷、矢车菊素-3,5-二葡萄糖苷、矢车菊素-3（阿魏酰）-葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷和芍药素-3-芸香糖苷，相对质量百分含量分别为1.12%、3.71%、1.38%、72.42%、9.62%、2.30%、7.10%和2.34%。系统性研究了ALC的体外抗氧化活性作用，清除生理自由基、非生理自由基、总还原能力和抑制脂质过氧化能力。结果表明，ALC具有很强的传递氢原子能力，可以通过提供氢原子直接清除羟基自由基（·OH）或终止自由基的链反应，从而防止自由基诱导氧化损伤的发生。同时，ALC具有较高的抗氧化活性和还原能力，对于脂质过氧化具有一定的抑制作用，并呈良好的剂量效应关系。建立X了射线和60Coγ辐射诱导细胞损伤模型，结果表明，ALC可以拮抗电离辐射损伤作用，提高辐射损伤小鼠脾淋巴细胞活力，降低小鼠脾淋巴细胞DNA的辐射损伤程度。建立60Coγ辐射诱导氧化损伤动物模型，对ALC的辐射防护作用进行研究。结果表明，ALC能减轻辐射造成小鼠免疫器官的损伤，显着增加小鼠各脏器中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，提高还原型谷胱甘肽（GSH）含量，降低丙二醛（MDA）含量，有效激活抗氧化酶系，减少脂质过氧化，减轻细胞膜的氧化损伤，降低小鼠外周血淋巴细胞异形和骨髓细胞微核率。通过蛋白免疫印迹技术（Western blot）对小鼠肝脏组织MAPK信号通路和线粒体介导的细胞凋亡信号通路主要相关蛋白表达进行了研究。结果表明，ALC对辐射致小鼠肝脏组织细胞蛋白表达具有显着的调控作用。ALC防护辐射诱导机体氧化损伤的作用机制是：ALC能诱导小鼠肝脏组织细胞中Bcl-2表达上调，阻抗辐射引起Bax表达升高，诱导HSP70表达升高，阻抗辐射诱导的p-JNK1/2和p-p38表达升高，从而降低活化caspase-3表达，减少细胞凋亡。ALC能够改善由电离辐射诱导的氧化损伤，降低活性氧自由基的产生，调节细胞氧化还原和凋亡信号转导，抑制线粒体凋亡信号途径，对辐射诱导氧化伤害具有显着的防护作用。本研究结果对于揭示辐射诱导氧化损伤防护机制及开发研制新型抗辐射药物具有重要的理论价值和实际意义。
东肃河[10]（2019）在《GSDMD对造血系统和肠道的电离辐射损伤效应和初步分子机制研究》文中研究说明研究背景骨髓型放射病和肠型放射病是急性放射病中最主要的两种疾病类型,目前除美国FDA批准上市的WR-2721外,尚无其他有效的防治方法。因此,寻找能够解决核辐射损伤的辐射防护剂以及辐射损伤中的关键作用分子,已成为当今核辐射领域研究的重点和难点。在前期的研究中,我们发现TLR4的配体LPS具有很强的辐射防护作用,但由于毒性较大限制了其临床应用。2014年,邵峰院士提出LPS作为Caspase-11胞内配体激活细胞焦亡通路,随后细胞焦亡被广泛研究并被陆续报道。其中GSDMD作为焦亡通路的执行分子是焦亡发生与否的关键所在,而其与电离辐射损伤效应的关系还尚无文献报道。因此我们以GSDMD作为研究对象,探究GSDMD及其相关通路对造血系统和肠道电离辐射损伤的效应,明确GSDMD及其通路与电离辐射的关系,并初步研究GSDMD参与电离辐射损伤的分子机制。研究目的1、明确GSDMD对造血系统电离辐射损伤的效应;2、明确GSDMD对肠道电离辐射损伤的效应;3、初步阐明GSDMD参与肠道电离辐射损伤的分子机制。研究内容、方法及结果一、GSDMD对造血系统的电离辐射损伤效应研究1、GSDMD KO能够显着提高电离辐射的生存率,改善外周血的损伤。以GSDMD KO小鼠为实验对象,其辐照后30天的生存率提高显着;外周血损伤程度较小,恢复更快。2、GSDMD KO对骨髓/脾脏及胸腺具有保护作用。GSDMD KO小鼠在接受电离辐射后,骨髓/脾脏/胸腺有核细胞数明显更多,骨髓损伤程度减轻,脾系数变化较小。3、GSDMD KO增加LSK细胞,促进LSK的髓系分化。流式检测GSDMD KO小鼠骨髓及脾脏LSK细胞及比例显着增加,GMP和MEP比例升高,脾脏中的髓系/红系/巨核系细胞增加明显,而CLP比例无显着变化。4、GSDMD KO骨髓移植促进造血恢复GSDMD KO骨髓来源的受体小鼠外周血及体重恢复更快,促进电离辐射后的造血功能恢复。二、GSDMD对肠道电离辐射损伤的效应研究1、GSDMD在动物水平的电离辐射损伤的效应研究1)肠道作为GSDMD研究的靶器官的锁定。正常状态下小鼠肝脏、脾脏、肺脏和肠道中GSDMD均有较高的表达,GSDMD KO对电离辐射的肠道损伤防护作用明显。2)GSDMD KO提高肠道ABI生存率。小鼠腹部局部给予电离辐射刺激,GSDMD KO小鼠30天内未发生死亡,野生小鼠死亡率为50%,GSDMD KO显着提高肠道ABI的生存率。3)GSDMD KO小鼠照后粪便变化较小。GSDMD KO小鼠在接受电离辐射3天内,粪便质量和数量均未发生明显减少,未出现明显的水化、变形等形态学改变。4)GSDMD KO抑制肠道照后增殖能力的丧失。GSDMD KO在电离辐射后的Ki-67和BrdU阳性率较野生型小鼠明显更高,GSDMD KO抑制了电离辐射所引发的肠道细胞增殖能力的丧失。2、GSDMD在细胞水平的电离辐射损伤的效应研究1)电离辐射导致肠道细胞系中的GSDMD剪切活化。给予电离辐射后,小鼠小肠上皮细胞MODE-K中GSDMD的剪切活化随时间逐渐增加,证明GSDMD同样参与细胞的电离辐射损伤过程。2)构建GSDMD KO/OE细胞系作为电离辐射的研究工具。以GSDMD高表达的小鼠小肠上皮细胞MODE-K为载体构建GSDMD KO细胞系;以GSDMD低表达的小鼠胚胎成纤维细胞3T3-LI为载体构建GSDMD OE细胞系,经蛋白和qPCR验证,GSDMD KO/OE效果相当显着,可作为工具细胞进行后续效应及机制研究。3)GSDMD KO减轻电离辐射引起的细胞毒性。电离辐射能够通过激活GSDMD从而导致细胞释放的LDH增加,PI阳性率升高,而抑制GSDMD则能够有效减轻电离辐射所引起的细胞损伤。4)GSDMD KO缓解电离辐射后的细胞周期阻滞。GSDMD KO缓解电离辐射后的细胞G2/M期阻滞,而GSDMD OE则加重了这一现象。三、GSDMD参与肠道电离辐射损伤的初步分子机制研究1、电离辐射激活GSDMD及其相关通路1)电离辐射激活GSDMD给予电离辐射刺激后,GSDMD由绒毛的广泛分布逐渐过渡为向绒毛顶端集中,这是其发挥焦亡效应的表现;免疫荧光实验证明,在接受电离辐射8 h后,GSDMD开始激活并向细胞膜集中,形成孔洞,这也证明GSDMD在体外同样参与电离辐射损伤过程。2)电离辐射激活GSDMD上游分子蛋白水平验证GSDMD上游分子Caspase-1和Caspase-11在电离辐射后表达上调;Caspase-11的免疫组化同样验证了该结果。3)电离辐射激活GSDMD下游分子GSDMD下游细胞因子IL-1β和IL-18在接受电离辐射后组织和细胞中表达减少,但血清和细胞上清中含量增加,证明电离辐射促进了IL-1β和IL-18的释放。2、电离辐射通过介导ROS激活GSDMD发挥损伤效应1)GSDMD KO抑制电离辐射后SOD的减少和MDA的升高经电离辐射,野生型小鼠的SOD被显着抑制,而GSDMD KO小鼠的SOD略有降低,但与对照小鼠无显着差异;野生型小鼠的MDA水平在辐照后升高约4倍,而GSDMD KO小鼠的这一数值无明显变化,辐照后野生型小鼠与GSDMD KO小鼠存在显着差异。2)GSDMD KO抑制电离辐射后的ROS及超氧阴离子的产生电离辐射后GSDMD KO细胞中的ROS水平较对照细胞更低,而在GSDMD OE细胞中却有相反的结果。超氧阴离子与ROS的变化趋势相一致。3)GSDMD KO抑制电离辐射后线粒体膜电位的降低GSDMD KO细胞在照射后线粒体膜电位降低较对照更少;与之相反,照射引起了GSDMD OE细胞线粒体膜电位的大幅降低,而其对照细胞有更高的线粒体膜电位。4)ROS与电离辐射均能激活GSDMD及其相关通路以H2O2作为ROS阳性药物进行蛋白水平验证,结果表明H2O2刺激在一定程度上与电离辐射刺激有类似的作用,均能激活GSDMD相关通路。3、RNA-SEQ差异基因筛选及Wnt相关通路的验证1)RNA-SEQ筛选差异基因利用RNA-SEQ对电离辐射后的野生型和GSDMD KO小鼠进行差异基因筛选,得到差异基因总数502个,其中上调基因209个,下调基因293个;并对差异基因进行GO分析以及KEGG分析。2)Wnt相关通路的验证选取部分差异基因进行qPCR验证,与测序结果相一致;选定Wnt相关通路进行RNA和蛋白水平的验证,证明GSDMD KO在Wnt通路存在显着差异,有待进一步的研究。研究结论本课题对GSDMD参与造血系统和肠道电离辐射损伤的效应和初步分子机制进行了研究,研究结论如下:1、GSDMD KO能够有效抑制造血系统的电离辐射损伤。GSDMD KO能够有效提高辐照后小鼠的生存率,加速外周血恢复,缓解骨髓和脾脏的电离辐射损伤;GSDMD KO能够增加造血器官的有核细胞数,增加LSK数量及比例,并促进其向髓系分化,具体机制有待进一步研究。2、GSDMD KO能够有效抑制肠道电离辐射损伤。在体内,GSDMD在肠道表达水平高且能被电离辐射激活,GSDMD KO能够有效缓解电离辐射引起的肠道损伤,提高腹部局部照射的生存率,维系粪便生成与正常形态,抑制肠道增殖能力的丧失;在体外,电离辐射能够引起GSDMD剪切体的上调,GSDMD KO减缓LDH生成,降低PI阳性率,缓解细胞周期阻滞,而GSDMD OE则与之相反。3、电离辐射通过激活GSDMD及其相关通路发挥肠道辐射损伤效应。电离辐射能够调节GSDMD的活化及分布,上调GSDMD上游分子Caspase-1和Caspase-11的表达,促进下游IL-1β和IL-18的释放,发挥电离辐射损伤效应;此外,电离辐射能够通过介导ROS的产生激活GSDMD及其相关通路发挥电离辐射损伤效应;最后,电离辐射还可能通过调节Wnt相关通路来激活GSDMD发挥电离辐射损伤效应。
二、质脂过氧化作用及其在辐射损伤中的意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、质脂过氧化作用及其在辐射损伤中的意义（论文提纲范文）
（1）雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 国内外的研究现状与存在的问题 |
| 1.2.1 辐射与肠黏膜损伤保护作用的研究现状 |
| 1.2.2 mTORC1 信号通路与DNA损伤 |
| 1.2.3 雷帕霉素对细胞的保护作用 |
| 1.3 本研究提出的假说和验证方法 |
| 第2章 不同剂量X射线辐射致小鼠肠黏膜损伤 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要药物及试剂的配制 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组及模型的建立 |
| 2.2.2 标本的留取 |
| 2.2.3 检测指标及方法 |
| 2.2.4 统计学处理 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 X射线辐射后小鼠一般情况及体重变化 |
| 2.3.2 X射线辐射后小鼠肠道组织病理形态学变化 |
| 2.3.3 X射线辐射对小鼠血清DAO活性的影响 |
| 2.3.4 X射线辐射对Olfm4~+肠道干细胞的影响 |
| 2.3.5 X射线辐射对肠道干细胞分化的影响 |
| 2.3.6 X射线辐射后肠黏膜超微结构变化 |
| 2.3.7 X射线辐射后肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、Occludin变化 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 mTORC1 信号通路在辐射致小鼠肠黏膜损伤中的作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要实验试剂 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 |
| 3.1.4 主要仪器设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 动物分组及模型的建立 |
| 3.2.2 标本的留取 |
| 3.2.3 检测指标及方法 |
| 3.2.4 统计学处理 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 X射线辐射激活肠黏膜m TORC1 信号通路 |
| 3.3.2 辐射后肠隐窝上皮细胞增殖和凋亡变化 |
| 3.3.3 X射线辐射抑制肠隐窝细胞自噬 |
| 3.3.4 辐射激活肠隐窝Akt和 NF-κB信号通路 |
| 3.3.5 辐射造成肠隐窝细胞DNA损伤 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第4章 雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要实验药物及试剂 |
| 4.1.3 主要药物及试剂的配制 |
| 4.1.4 主要仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 动物分组及模型的建立 |
| 4.2.2 标本的留取 |
| 4.2.3 检测指标及方法 |
| 4.2.4 统计学处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 雷帕霉素能有效抑制辐射导致的肠隐窝细胞过度激活的mTORC1信号通路 |
| 4.3.2 雷帕霉素延长辐射小鼠生存率 |
| 4.3.3 雷帕霉素处理后能减轻辐射导致的肠黏膜病理损伤 |
| 4.3.4 雷帕霉素处理后可降低小鼠肠黏膜通透性,改善辐射导致的肠黏膜屏障功能损伤 |
| 4.3.5 雷帕霉素处理后可促进紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的恢复,保护肠黏膜机械屏障 |
| 4.3.6 雷帕霉素促进辐射小鼠肠隐窝干细胞恢复 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 第5章 雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护机制 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要实验试剂 |
| 5.1.3 主要仪器设备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 动物分组及模型的建立 |
| 5.2.2 标本的留取 |
| 5.2.3 检测指标及方法 |
| 5.2.4 统计学处理 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 雷帕霉素可有效促进辐射后肠隐窝细胞自噬 |
| 5.3.2 雷帕霉素应用能有效抑制辐射小鼠肠隐窝细胞Akt和 NF-κB信号 |
| 5.3.3 雷帕霉素应用能抑制辐射后隐窝细胞过度增殖和细胞凋亡 |
| 5.3.4 雷帕霉素应用能减少辐射后隐窝细胞的DNA损伤 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 结论 |
| 第6章 全文总结与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 进一步研究的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（2）刺五加中改善辐射小鼠脑损伤的功能成分研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题研究背景及研究的目的和意义 |
| 1.2 中枢神经系统疾病研究现状 |
| 1.3 辐射对脑损伤的影响 |
| 1.3.1 辐射对学习记忆能力的影响 |
| 1.3.2 脑组织氧化损伤与神经退行性病变的研究现状 |
| 1.3.3 空间辐射对脑组织的应性研究 |
| 1.4 刺五加的功能成分研究现状 |
| 1.4.1 刺五加多糖及其单体成分的研究现状 |
| 1.4.2 刺五加黄酮及其单体成分的研究现状 |
| 1.4.3 刺五加皂苷E的研究现状 |
| 1.4.4 刺五加皂苷B的研究现状 |
| 1.4.5 异嗪皮啶的研究现状 |
| 1.4.6 刺五加糖蛋白的研究现状 |
| 1.4.7 刺五加药代动力学的研究现状 |
| 1.5 本课题主要研究内容和技术路线 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 材料与仪器 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 刺五加中改善辐射小鼠学习记忆能力的功能成分研究 |
| 2.2.1 实验动物设计 |
| 2.2.2 行为学实验 |
| 2.2.3 病理切片的制作 |
| 2.2.4 神经递质含量测定实验 |
| 2.3 刺五加功能成分对辐射小鼠抗氧化能力的改善作用研究 |
| 2.3.1 胸脾指数测定 |
| 2.3.2 刺五加中改善辐射小鼠血清和脑组织氧化指标的功能成分测定 |
| 2.4 刺五加功能成分在辐射小鼠脑及其他组织的代谢学研究 |
| 2.4.1 刺五加功能成分在小鼠体内含量测定 |
| 2.4.2 刺五加功能成分在小鼠体内的分布以及药代动力学测定 |
| 2.4.3 液质联用法鉴定透过血脑屏障刺五加单体成分 |
| 2.5 统计方法 |
| 第3章 刺五加功能成分对辐射小鼠学习记忆能力的影响研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 辐射脑损伤动物模型的建立 |
| 3.2.1 动物模型的病理学分析 |
| 3.2.2 动物模型组神经递质含量分析 |
| 3.3 刺五加功能成分对辐射损伤小鼠行为学的影响 |
| 3.3.1 刺五加功能成分给药组水迷宫完成情况分析 |
| 3.3.2 刺五加功能成分给药组糖水偏嗜度分析 |
| 3.4 刺五加功能成分对辐射小鼠脑组织病理学影响 |
| 3.4.1 刺五加功能成分对辐射损伤小鼠大脑皮质病理学影响 |
| 3.4.2 刺五加功能成分对辐射损伤小鼠海马组织病理学影响 |
| 3.5 刺五加功能成分对辐射小鼠脑组织代谢物的影响 |
| 3.5.1 刺五加功能成分对小鼠脑组织氨基酸类神经递质代谢物的影响 |
| 3.5.2 刺五加功能成分对小鼠脑组织单胺类神经递质的影响 |
| 3.5.3 刺五加功能成分对脑组织单胺氧化酶的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 刺五加功能成分对辐射损伤小鼠氧化损伤的影响研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 刺五加中改善辐射脑损伤小鼠胸脾指数的功能成分研究 |
| 4.3 刺五加中改善辐射损伤小鼠脑组织氧化指标的功能成分分析 |
| 4.3.1 刺五加功能成分对脑组织生物大分子的保护作用分析 |
| 4.3.2 刺五加功能成分对脑组织中自由基清除作用研究 |
| 4.4 刺五加中改善辐射损伤小鼠血清氧化指标的功能成分分析 |
| 4.4.1 刺五加功能成分对血清生物大分子的保护作用分析 |
| 4.4.2 刺五加功能成分对血清自由基清除作用研究 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 刺五加功能成分在辐射小鼠脑及其他组织的代谢学研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 刺五加功能成分在辐射小鼠脑及组织中的分布研究 |
| 5.2.1 刺五加功能成分在辐射小鼠各组织中的分布研究 |
| 5.2.2 刺五加多糖在辐射损伤小鼠体内的分布研究 |
| 5.2.3 刺五加黄酮在辐射损伤小鼠体内的分布研究 |
| 5.2.4 刺五加皂苷B在辐射损伤小鼠体内的分布研究 |
| 5.2.5 刺五加皂苷E在辐射损伤小鼠体内的分布研究 |
| 5.3 刺五加功能成分在脑及其他组织代谢动力学研究 |
| 5.3.1 刺五加功能成分在辐射损伤小鼠脑组织中的药代动力学研究 |
| 5.3.2 刺五加多糖在辐射损伤小鼠体内的药代动力学研究 |
| 5.3.3 刺五加黄酮在辐射损伤小鼠体内的药代动力学研究 |
| 5.3.4 刺五加皂苷B在辐射损伤小鼠体内的药代动力学研究 |
| 5.3.5 刺五加皂苷E在辐射损伤小鼠体内的药代动力学研究 |
| 5.4 透过辐射小鼠血脑屏障的刺五加单体成分的质谱分析 |
| 5.4.1 HPLC色谱分析 |
| 5.4.2 HPLC-ESI-MS质谱分析 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及其他成果 |
| 致谢 |
（3）基于“脾为之卫”探讨益气解毒方对急性放射损伤小鼠的防护研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治急性放射损伤的研究进展 |
| 综述二 铁死亡与放射损伤研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 理论研究 |
| 引言 |
| 第一节 “脾为之卫”理论的源流与内涵 |
| 1 中医学对脾的认识 |
| 2 “脾为之卫”理论的源流与内涵 |
| 3 “脾为之卫”理论与现代医学“免疫功能”的联系 |
| 4 结语 |
| 第二节 从“脾失之卫”探讨急性放射损伤的中医病机 |
| 1 “脾失之卫”的含义 |
| 2 从“脾失之卫”探讨急性放射损伤的中医病机 |
| 3 结语 |
| 第三节 从“补脾实卫,益气解毒”论治急性放射损伤的防治方法及益气解毒方的组方分析 |
| 1 从“补脾实卫,益气解毒”论治急性放射损伤的防治方法 |
| 2 益气解毒方的组方分析 |
| 3 结语 |
| 第二章 实验研究 |
| 引言 |
| 第一节 2.0 Gy ~(60)Coγ射线一次性全身照射对小鼠脾脏及肠道免疫的损伤效应研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二节 益气解毒方对2.0 Gy ~(60)Coγ射线一次性全身照射致小鼠脾脏及肠道免疫损伤的防护效应研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三节 益气解毒方对2.0 Gy ~(60)Coγ线致小鼠脾脏及肠道免疫损伤的防护机制研究 |
| 实验(一) 2.0 Gy ~(60)Coγ射线致小鼠脾脏及肠道免疫损伤与铁死亡的相关性研究 |
| 实验(二) 益气解毒方通过减轻照射后细胞铁死亡发挥辐射防护作用的研究 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）黑木耳中性多糖片段硫酸酯对辐射诱导氧化应激防护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.2 辐射与自由基 |
| 1.3 自由基与氧化应激 |
| 1.3.1 自由基对生物分子的作用 |
| 1.3.2 自由基对生物系统的影响 |
| 1.4 抗氧化防护途径 |
| 1.4.1 增强抗氧化酶活性 |
| 1.4.2 直接清除自由基、抑制脂质过氧化 |
| 1.4.3 抑制细胞凋亡 |
| 1.4.4 修复DNA氧化损伤 |
| 1.4.5 免疫调节作用 |
| 1.4.6 抑制氧化酶活性 |
| 1.4.7 激活体内非酶类抗氧化剂 |
| 1.5 辐射防护剂研究现状 |
| 1.6 多糖构效关系 |
| 1.6.1 溶解度、粘度对多糖生理活性影响 |
| 1.6.2 分子量对多糖生理活性影响 |
| 1.6.3 某些特定基团对多糖生理活性影响 |
| 1.6.4 空间构象对多糖生理活性影响 |
| 1.7 多糖硫酸酯化修饰 |
| 1.7.1 多糖硫酸酯的修饰方法 |
| 1.7.2 多糖硫酸酯的结构分析 |
| 1.7.3 多糖硫酸酯的生物活性研究 |
| 1.8 黑木耳多糖的研究 |
| 1.8.1 黑木耳多糖的提取、纯化及结构表征 |
| 1.8.2 黑木耳多糖的抗氧化活性 |
| 1.9 本课题主要研究内容 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 |
| 2.1.1 实验原料 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.2 黑木耳多糖提取、分级 |
| 2.2.1 原料预处理 |
| 2.2.2 黑木耳粗多糖提取 |
| 2.2.3 黑木耳粗多糖分级 |
| 2.2.4 黑木耳多糖片段分离 |
| 2.3 黑木耳多糖硫酸酯制备 |
| 2.3.1 硫酸酯化试剂制备 |
| 2.3.2 多糖硫酸酯制备工艺优化 |
| 2.3.3 取代度测定 |
| 2.3.4 甲酰胺和N, N-二甲基甲酰胺残留量分析 |
| 2.4 黑木耳中性多糖片段硫酸酯结构表征 |
| 2.4.1 红外光谱分析 |
| 2.4.2 紫外光谱分析 |
| 2.4.3 拉曼光谱表征 |
| 2.4.4 原子力显微镜表征 |
| 2.4.5 分子量测定 |
| 2.4.6 单糖组成分析 |
| 2.5 体外抗氧化活性测定 |
| 2.5.1 超氧自由基（O_2~-·）清除能力测定 |
| 2.5.2 羟基自由基（·OH）清除能力测定 |
| 2.5.3 ABTS~+·清除能力测定 |
| 2.5.4 脂质过氧自由基（ROO·）清除能力测定 |
| 2.5.5 总还原能力测定 |
| 2.6 细胞实验 |
| 2.6.1 细胞毒性实验 |
| 2.6.2 辐射诱导人外周血氧化应激的防护 |
| 2.6.3 Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖指数 |
| 2.6.4 小鼠脾淋巴细胞周期分析 |
| 2.6.5 单细胞凝胶电泳 |
| 2.7 动物实验 |
| 2.7.1 辐射诱导氧化应激动物模型 |
| 2.7.2 脏器指数测定 |
| 2.7.3 体重和存活率变化 |
| 2.7.4 外周血象和白细胞损伤分析 |
| 2.7.5 小鼠血液中VE含量测定 |
| 2.7.6 小鼠骨髓细胞微核实验 |
| 2.7.7 小鼠骨髓细胞染色体畸变实验 |
| 2.7.8 小鼠碳廓清指数测定 |
| 2.7.9 小鼠脾组织和小肠绒毛超微结构形态观察 |
| 2.7.10 小鼠生化指标检测 |
| 2.8 统计分析 |
| 第3章 黑木耳中性多糖片段硫酸酯制备及其结构解析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 黑木耳多糖分离及分级 |
| 3.3 黑木耳多糖片段分离 |
| 3.3.1 DEAE-Sephadex-25 柱层析 |
| 3.3.2 Sephadex G-200 凝胶层析 |
| 3.4 黑木耳多糖硫酸酯制备 |
| 3.4.1 酯化试剂优化 |
| 3.4.2 取代度分析 |
| 3.4.3 SNAAP合成工艺单因素条件的确定 |
| 3.4.4 溶剂残留分析 |
| 3.5 SNAAP化学性质及结构分析 |
| 3.5.1 化学性质分析 |
| 3.5.2 红外光谱分析 |
| 3.5.3 紫外光谱分析 |
| 3.5.4 拉曼光谱表征 |
| 3.5.5 原子力显微镜表征 |
| 3.5.6 相对分子质量分布分析 |
| 3.5.7 单糖组成分析 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 黑木耳中性多糖片段硫酸酯抗氧化活性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 SNAAP清除生理自由基 |
| 4.2.1 SNAAP清除超氧自由基能力 |
| 4.2.2 SNAAP清除羟基自由基能力 |
| 4.3 SNAAP清除ABTS~+·自由基能力 |
| 4.4 SNAAP抗脂质过氧化作用 |
| 4.5 SNAAP总还原能力分析 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 黑木耳中性多糖硫酸酯对人外周血氧化应激防护作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 SNAAP细胞毒性分析 |
| 5.3 SNAAP对辐射引起人外周血象变化影响 |
| 5.3.1 X辐射模型建立 |
| 5.3.2 对人外周血中白细胞数的影响 |
| 5.3.3 对人外周血淋巴细胞数变化的影响 |
| 5.3.4 对人外周血淋巴细胞比率变化的影响 |
| 5.3.5 对人外周血血小板的影响 |
| 5.3.6 对人外周血红细胞数的影响 |
| 5.3.7 对人外周血血红蛋白的影响 |
| 5.3.8 对人外周血脂质过氧化抑制作用 |
| 5.4 SNAAP对人外周血的防护作用 |
| 5.4.1 SNAAP对白细胞数的作用 |
| 5.4.2 SNAAP对辐射条件下白细胞形态变化的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 第6章 黑木耳中性多糖硫酸酯对小鼠氧化应激防护研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 SNAAP对辐射小鼠存活率和体重的影响 |
| 6.3 SNAAP对60CO辐射小鼠外周血象影响 |
| 6.4 SNAAP对辐射小鼠免疫系统的影响 |
| 6.4.1 SNAAP对辐射小鼠脏器指数的影响 |
| 6.4.2 SNAAP对巨噬细胞吞噬活性和协同ConA脾淋巴细胞增殖作用 |
| 6.4.3 SNAAP对辐射小鼠脾淋巴细胞形态学影响 |
| 6.5 SNAAP对小鼠小肠上皮细胞及微绒毛组织超微形态学影响 |
| 6.6 SNAAP对辐射小鼠体内相关氧化酶活性影响 |
| 6.6.1 SNAAP对超氧化物歧化酶（SOD）的影响 |
| 6.6.2 SNAAP对过氧化氢酶（CAT）的影响 |
| 6.6.3 SNAAP对谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的影响 |
| 6.6.4 SNAAP对髓过氧物酶（MPO）的影响 |
| 6.7 SNAAP对丙二醛（MDA）含量的影响 |
| 6.8 SNAAP对乳酸脱氢酶（LDH）影响 |
| 6.9 SNAAP对60CO辐射小鼠体内非酶抗氧化剂影响 |
| 6.9.1 对小鼠外周血中VE含量的影响 |
| 6.9.2 对谷胱甘肽（GSH）含量影响 |
| 6.10 SNAAP对小鼠DNA损伤的影响 |
| 6.10.1 SNAAP对骨髓染色体畸变的影响 |
| 6.10.2 SNAAP对骨髓细胞微核率的影响 |
| 6.10.3 SNAAP对小鼠脾细胞DNA损伤的影响 |
| 6.11 SNAAP对小鼠脾淋巴细胞周期调控 |
| 6.12 相关性分析 |
| 6.12.1 脾组织SOD活性与脾组织细胞增殖之间的相关性分析 |
| 6.12.2 脾组织SOD值与微核率之间的相关性分析 |
| 6.12.3 脾组织细胞增殖与微核率之间的相关性分析 |
| 6.12.4 脾组织MDA值与微核率之间的相关性分析 |
| 6.13 本章小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 前景展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）MPLA对小肠隐窝细胞增殖及辐射损伤后再生的调控作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 LPS和 MPLA促进小肠隐窝细胞的增殖和辐射损伤后的再生 |
| 一、引言 |
| 二、实验材料和方法 |
| (一)实验试剂 |
| (二)仪器设备 |
| (三)实验动物 |
| (四)辐射处理 |
| (五)小肠类器官培养 |
| (六)BRDU及 EDU检测增殖实验 |
| (七)小肠类器官免疫荧光实验 |
| (八)小肠组织免疫荧光及免疫组化实验 |
| (九)统计分析 |
| 三、实验结果 |
| (一)TLR4主要分布在小肠隐窝 |
| (二)LPS和 MPLA促进小肠类器官的增殖 |
| (三)LPS和 MPLA促进小鼠小肠隐窝细胞的增殖 |
| (四)LPS和 MPLA对小肠增殖作用的影响依赖于TLR4分子 |
| (五)LPS和 MPLA促进辐照后小肠隐窝细胞再生 |
| 四、分析与讨论 |
| 第二部分 LPS和 MPLA激活小肠隐窝中调控干细胞增殖和再生相关的信号通路 |
| 一、引言 |
| 二、实验材料和方法 |
| (一)实验试剂 |
| (二)仪器设备 |
| (三)RNA-sequencing(转录组测序)实验 |
| (四)AAV-MSI2 质粒筛选及构建 |
| (五)AAV-SOX9 质粒筛选及构建 |
| (六)AAV-YAP1 质粒筛选及构建 |
| (七)腺相关病毒(AAV)的构建 |
| (八)动物实验及AAV的使用 |
| (九)辐射处理 |
| (十)小肠类器官培养 |
| (十一)BRDU及 EDU检测增殖实验 |
| (十二)小肠隐窝蛋白提取 |
| (十三)小肠类器官蛋白提取 |
| (十四)免疫印迹(Western-Blot)实验 |
| (十五)小肠组织免疫荧光及免疫组化实验 |
| (十六)统计分析 |
| 三、实验结果 |
| (一)RNA-sequencing实验 |
| (二)LPS和 MPLA对 Wnt和 Notch信号通路的调控作用 |
| (三)LPS和 MPLA促进小肠干细胞增殖分化关键调控分子c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1 蛋白上调 |
| (四)TLR4 介导Wnt、Notch信号通路以及c-Myc、MSI2、SOX9 和YAP1蛋白的激活 |
| (五)所构建的AAV均能特异性的敲低小肠中的基因 |
| (六)LPS、MPLA对小肠隐窝细胞增殖作用的调控依赖c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1 蛋白 |
| (七)LPS、MPLA促进小肠类器官辐射损伤后再生的作用依赖c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1 蛋白 |
| 四、分析与讨论 |
| 第三部分 c-Myc、MSI2、SOX9和YAP1 蛋白在LPS或 MPLA刺激小肠隐窝后的相互作用关系研究 |
| 一、引言 |
| 二、实验材料和方法 |
| (一)实验试剂 |
| (二)仪器设备 |
| (三)慢病毒质粒的构建 |
| (四)慢病毒的构建 |
| (五)慢病毒的筛选 |
| (六)小鼠小肠类器官培养 |
| (七)慢病毒感染小肠类器官 |
| (八)免疫荧光检测 |
| (九)人小肠类器官培养及处理 |
| (十)免疫共沉淀(Co-IP)实验 |
| (十一)免疫印迹检测 |
| (十二)统计分析 |
| 三、实验结果 |
| (一)小肠类器官慢病毒敲低体系的构建(MSI2、SOX9和YAP1) |
| (二)LPS、MPLA激活小肠类器官和隐窝细胞中c-Myc-MSI2-SOX9-YAP1信号通路 |
| (三)LPS、MPLA促进c-Myc、MSI2、SOX9、YAP1 形成新复合物 |
| (四)LPS和 MPLA促进小肠隐窝细胞增殖或再生机制总结 |
| 四、分析与讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、AAV靶点的筛选及构建 |
| 二、慢病毒干扰质粒构建结果 |
| 综述 肠道干细胞损伤的机制:电离辐射损伤和化学损伤 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（7）槐角染料木黄酮对电离辐射损伤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 槐角染料木黄酮提取工艺的优化 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 槐角染料木黄酮对骨髓电离辐射损伤的保护作用研究 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 槐角染料木黄酮对小肠电离辐射损伤的保护作用研究 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 槐角染料木黄酮通过上调Rassf1a和 Ercc1 表达促进DNA损伤修复 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（8）N-草酰化-D-苯丙氨酸（NOFD）的合成及辐射防护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 化合物的合成及结构鉴定 |
| 一 试剂与仪器 |
| 1. 试剂 |
| 2. 仪器 |
| 二 N-草酰化-D-苯丙氨酸(NOFD)的合成 |
| 三 结构鉴定 |
| 1. NOFD结构分析 |
| 2. NOFD图谱 |
| 第二章 NOFD改善电离辐射造成的造血系统损伤 |
| 一 实验材料 |
| 1. 动物 |
| 2. 化学药品与试剂 |
| 3. 主要仪器 |
| 4. 辐射 |
| 5. 统计学分析 |
| 二 实验方法 |
| 1. 小鼠30天存活率实验 |
| 2. 小鼠外周血细胞和骨髓细胞计数 |
| 3. 小鼠骨髓干细胞/祖细胞分型及外周血中淋巴系细胞分析 |
| 4. 小鼠骨髓细胞线粒体ROS流式分析 |
| 5. 小鼠骨髓细胞DNA损伤流式分析 |
| 6. 粒细胞巨噬细胞集落形成实验和脾克隆形成实验 |
| 7. 电离辐射后小鼠的抗氧化能力评估实验 |
| 7.1 BCA测定总蛋白浓度 |
| 7.1.1 测定原理 |
| 7.1.2 实验步骤 |
| 7.1.3 注意事项 |
| 7.1.4 计算公式 |
| 7.2 超氧化物歧化酶(SOD)含量测定 |
| 7.2.1 测定原理 |
| 7.2.2 实验步骤 |
| 7.2.3 注意事项 |
| 7.2.4 计算公式 |
| 7.3 丙二醛(MDA)含量测定 |
| 7.3.1 测定原理 |
| 7.3.2 实验步骤 |
| 7.3.3 注意事项 |
| 7.3.4 计算公式 |
| 7.4 过氧化氢酶(CAT)活性测定 |
| 7.4.1 测定原理 |
| 7.4.2 实验步骤 |
| 7.4.3 注意事项 |
| 7.4.4 计算公式 |
| 三 实验结果与讨论 |
| 1. NOFD提高辐射后小鼠30天存活率 |
| 1.1 实验结果 |
| 1.2 讨论 |
| 2. NOFD缓解辐射后小鼠的骨髓抑制 |
| 2.1 实验结果 |
| 2.2 讨论 |
| 3. NOFD抑制辐射后小鼠骨髓造血干细胞凋亡 |
| 3.1 实验结果 |
| 3.2 讨论 |
| 4. NOFD提高辐射后小鼠造血细胞增殖能力 |
| 4.1 实验结果 |
| 4.2 讨论 |
| 5. NOFD加强小鼠自身的抗氧化防御功能 |
| 5.1 实验结果 |
| 5.2 讨论 |
| 6. NOFD减少骨髓细胞中线粒体ROS的堆积 |
| 6.1 实验结果 |
| 6.2 讨论 |
| 7. NOFD降低电离辐射对小鼠骨髓细胞的DNA损伤 |
| 7.1 实验结果 |
| 7.2 讨论 |
| 第三章 NOFD保护小肠组织免受电离辐射的损伤 |
| 一 实验材料 |
| 1. 动物 |
| 2. 化学药品与试剂 |
| 3. 主要仪器 |
| 4. 辐射 |
| 二 实验方法 |
| 1. 组织病理学(H&E染色法) |
| 2. 免疫组织化学(HC) |
| 3. 免疫荧光(IF) |
| 三 实验结果 |
| 1. NOFD改善小鼠腹部照射后小肠状态 |
| 2. NOFD改善小鼠腹部照射后小肠隐窝细胞增殖能力 |
| 3. NOFD抑制小鼠腹部照射后小肠细胞的凋亡 |
| 四 实验讨论 |
| 第四章 NOFD辐射防护作用机制的初步探索 |
| 一 实验材料 |
| 1. 细胞及其培养 |
| 2. 化学药品与试剂 |
| 3. 主要仪器 |
| 4. 辐射 |
| 5. 统计学分析 |
| 二 实验方法 |
| 1. MTT细胞毒性检测 |
| 2. 免疫印迹实验(Western-blot) |
| 3. 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) |
| 4. 活性氧自由基水平检测实验 |
| 5. 单细胞凝胶电泳实验 |
| 6. γ-H2AX检测实验 |
| 7. 细胞凋亡检测实验 |
| 三 实验结果与讨论 |
| 1. NOFD增加HCT116细胞内HIF蛋白的表达 |
| 2. NOFD激活HCT116细胞中HIF蛋白下游基因的表达 |
| 3. NOFD减少电离辐射引起的细胞内ROS的堆积 |
| 3.1 实验结果 |
| 3.2 讨论 |
| 4. NOFD有效地降低电离辐射后细胞核内DNA双联断裂损伤 |
| 4.1 实验结果 |
| 4.2 讨论 |
| 5. NOFD降低辐射后细胞凋亡比例 |
| 5.1 实验结果 |
| 5.2 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 乏氧诱导因子在疾病中作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 发表研究论文清单 |
（9）蓝靛果花色苷结构表征及对辐射诱导氧化损伤防护机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究目的和意义 |
| 1.2 花色苷研究进展 |
| 1.2.1 花色苷结构与性质 |
| 1.2.2 花色苷的提取纯化与鉴定 |
| 1.2.3 花色苷的生物活性 |
| 1.3 辐射损伤与防护研究进展 |
| 1.3.1 辐射损伤机制 |
| 1.3.2 辐射防护剂作用机制 |
| 1.3.3 天然产物辐射防护剂开发及应用现状 |
| 1.4 蓝靛果花色苷研究进展 |
| 1.4.1 蓝靛果花色苷分离鉴定研究现状 |
| 1.4.2 蓝靛果花色苷功能活性研究现状 |
| 1.5 本论文的主要研究内容及课题来源 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与设备 |
| 2.1.1 原料 |
| 2.1.2 试剂与药品 |
| 2.1.3 仪器与设备 |
| 2.2 ALC 分离纯化 |
| 2.2.1 花色苷含量测定 |
| 2.2.2 ALC 提取工艺优化 |
| 2.2.3 ALC 纯化工艺优化 |
| 2.3 ALC 结构表征 |
| 2.3.1 蓝靛果中总花色苷含量测定 |
| 2.3.2 ALC 紫外-可见光谱分析 |
| 2.3.3 ALC 红外光谱分析 |
| 2.3.4 ALC 组分液相色谱-质谱联用分析 |
| 2.3.5 ALC 高分辨质谱分析 |
| 2.4 ALC 抗氧化活性研究方法 |
| 2.4.1 总还原能力测定 |
| 2.4.2 ALC 对羟自由基的清除作用 |
| 2.4.3 ALC 对超氧阴离子自由基的清除作用 |
| 2.4.4 ALC 对 DPPH 自由基的清除作用 |
| 2.4.5 ALC 对 ABTS 自由基的清除作用 |
| 2.4.6 ALC 对小鼠肝组织匀浆脂质过氧化抑制作用 |
| 2.5 ALC 体外抗辐射活性作用研究方法 |
| 2.5.1 小鼠脾淋巴细胞的制备 |
| 2.5.2 细胞活力测定 |
| 2.5.3 单细胞凝胶电泳实验 |
| 2.5.4 ALC 对正常小鼠脾淋巴细胞活力的影响 |
| 2.5.5 细胞辐射损伤模型建立 |
| 2.5.6 ALC 对小鼠脾淋巴细胞辐射损伤防护作用的研究 |
| 2.6 ALC 对辐射损伤小鼠防护作用研究方法 |
| 2.6.1 动物分组 |
| 2.6.2 ALC 对小鼠体重的影响 |
| 2.6.3 ALC 对辐射小鼠免疫器官指数的影响 |
| 2.6.4 ALC 对辐射小鼠肝脏、脾脏病理学影响 |
| 2.6.5 外周血白细胞计数及形态学变化的观察 |
| 2.6.6 骨髓细胞微核率的测定 |
| 2.6.7 小鼠体内氧化应激指标的测定 |
| 2.6.8 小鼠肝细胞凋亡的检测 |
| 2.7 蛋白免疫印迹（Western-blot）分析 |
| 2.7.1 肝组织蛋白质的提取 |
| 2.7.2 Western-blot 操作与蛋白表达分析 |
| 2.8 统计学处理 |
| 第3章 ALC 分离纯化及结构表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 ALC 提取工艺优化 |
| 3.2.1 单因素对 ALC 提取效果的影响 |
| 3.2.2 响应面试验对 ALC 提取工艺参数优化 |
| 3.3 ALC 纯化工艺参数优化 |
| 3.3.1 ALC 静态吸附与解吸条件分析 |
| 3.3.2 ALC 动态吸附与解吸条件分析 |
| 3.4 ALC 结构表征 |
| 3.4.1 ALC 紫外-可见光谱分析 |
| 3.4.2 ALC 红外吸收光谱分析 |
| 3.4.3 高效液相色谱串联质谱分析 ALC 单体组成 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 ALC 体外抗氧化活性研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 ALC 对羟自由基的清除作用 |
| 4.3 ALC 对超氧阴离子自由基的清除作用 |
| 4.4 ALC 总还原能力 |
| 4.5 ALC 对 DPPH 自由基的清除作用 |
| 4.6 ALC 对 ABTS 自由基的清除作用 |
| 4.7 ALC 对小鼠肝组织匀浆脂质过氧化抑制作用 |
| 4.8 ALC 对羟自由基清除率与抑制脂质过氧化的相关性分析 |
| 4.9 本章小结 |
| 第5章 ALC 对不同来源电离辐射诱导氧化伤害防护作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 ALC 对正常小鼠脾淋巴细胞活力的影响 |
| 5.3 ALC 对 X 射线辐射损伤防护作用的研究 |
| 5.3.1 X 射线辐射损伤小鼠脾淋巴细胞模型的建立 |
| 5.3.2 ALC 对 X 射线辐射小鼠脾淋巴细胞的防护作用 |
| 5.4 ALC 对60Coγ辐射损伤防护作用的研究 |
| 5.4.1 60Coγ辐射损伤小鼠脾淋巴细胞模型的建立 |
| 5.4.2 ALC 对60Coγ辐射小鼠脾淋巴细胞的保护作用 |
| 5.5 ALC 对 X 射线与60Coγ辐射损伤防护作用的比较 |
| 5.5.1 ALC 对 X 射线与60Coγ辐射细胞活力保护效果比较 |
| 5.5.2 ALC 对 X 射线与60Coγ辐射细胞 DNA 保护效果比较 |
| 5.6 本章小结 |
| 第6章 ALC 对辐射诱导小鼠氧化损伤防护作用的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 ALC 对辐射小鼠体重的影响 |
| 6.3 ALC 对辐射小鼠免疫器官指数的影响 |
| 6.4 ALC 对辐射小鼠肝脏、脾脏组织形态学变化的影响 |
| 6.4.1 肝脏组织形态学变化的影响 |
| 6.4.2 脾脏组织形态学变化的影响 |
| 6.5 ALC 对辐射小鼠血象指标的影响 |
| 6.5.1 ALC 对外周血白细胞数变化的影响 |
| 6.5.2 ALC 对辐射小鼠外周血白细胞形态学变化的影响 |
| 6.6 ALC 对辐射小鼠骨髓细胞微核率的影响 |
| 6.7 ALC 对辐射小鼠氧化应激的影响 |
| 6.7.1 ALC 对辐射小鼠各组织及血清中 SOD 活力的影响 |
| 6.7.2 ALC 对辐射小鼠各组织及血清中 GSH-Px 活力的影响 |
| 6.7.3 ALC 对辐射小鼠各组织及血清中 GSH 含量的影响 |
| 6.7.4 ALC 对辐射小鼠各组织及血清中 MDA 含量的影响 |
| 6.8 本章小结 |
| 第7章 ALC 对辐射诱导氧化损伤的防护机制 |
| 7.1 引言 |
| 7.2 ALC 对辐射诱导小鼠肝脏细胞凋亡的影响 |
| 7.3 ALC 对辐射小鼠肝脏组织中 Bax、Bcl-2 蛋白表达的影响 |
| 7.4 ALC 对辐射小鼠肝脏组织中 HSP70 蛋白表达的影响 |
| 7.5 ALC 对辐射小鼠肝脏组织中 Caspase-3 蛋白表达的影响 |
| 7.6 ALC 对 MAPK 通路的影响 |
| 7.6.1 ALC 对 MAPK 通路蛋白表达的影响 |
| 7.6.2 ALC 对 MAPK 通路调节的讨论 |
| 7.7 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）GSDMD对造血系统和肠道的电离辐射损伤效应和初步分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分：GSDMD对造血系统的电离辐射损伤效应研究 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二部分：GSDMD对肠道的电离辐射损伤效应研究 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三部分：GSDMD参与肠道电离辐射损伤的初步分子机制. |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文情况 |
| 致谢 |
四、质脂过氧化作用及其在辐射损伤中的意义（论文参考文献）
- [1]雷帕霉素对辐射致小鼠肠黏膜损伤的保护作用及机制[D]. 曾慧红. 南昌大学, 2020(08)
- [2]刺五加中改善辐射小鼠脑损伤的功能成分研究[D]. 李思佳. 哈尔滨工业大学, 2019(02)
- [3]基于“脾为之卫”探讨益气解毒方对急性放射损伤小鼠的防护研究[D]. 王安. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]质脂过氧化作用及其在辐射损伤中的意义[J]. 陈瑗,周玫. 第一军医大学学报, 1983(S1)
- [5]黑木耳中性多糖片段硫酸酯对辐射诱导氧化应激防护作用[D]. 张华. 哈尔滨工业大学, 2013(02)
- [6]MPLA对小肠隐窝细胞增殖及辐射损伤后再生的调控作用和机制研究[D]. 廖泽彬. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [7]槐角染料木黄酮对电离辐射损伤保护作用的研究[D]. 逄志骏. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [8]N-草酰化-D-苯丙氨酸（NOFD）的合成及辐射防护作用的研究[D]. 孟媛媛. 北京协和医学院, 2019(02)
- [9]蓝靛果花色苷结构表征及对辐射诱导氧化损伤防护机制[D]. 赵海田. 哈尔滨工业大学, 2012(01)
- [10]GSDMD对造血系统和肠道的电离辐射损伤效应和初步分子机制研究[D]. 东肃河. 中国人民解放军海军军医大学, 2019(10)