一、血管内皮生长因子对牛胚胎体外发育影响的最适添加浓度筛选试验（论文文献综述）
肖佳佳[1]（2017）在《SIRT2对牛体细胞转基因效率的影响及其作用机制》文中研究说明体细胞转基因技术广泛的应用于基因功能研究和转基因动物育种过程中。转基因过程是一个多步骤过程,任何阶段的效率低下都会引起基因转移系统效率降低甚至导致外源基因不能表达。因此,需要采取策略来促进外源基因透过细胞膜,通过细胞质迁移到细胞核并转运通过核膜,从而能有效地表达。微管蛋白乙酰化是一种微管常规修饰,参与多种细胞功能的调节,包括纤毛组装,细胞内运输,细胞运动,以及轴突生长。SIRT2是一种微管蛋白去乙酰化酶,主要分布在细胞质中,在体外能够对多种靶蛋白进行去乙酰化作用,在许多衰老相关疾病,如癌症、神经性疾病、糖尿病、关节炎等具有重要的调节作用,但是SIRT2对外源基因转染效率的影响并不清楚。因此,本研究利用RNA干扰、定量PCR、蛋白免疫印迹等分析手段,对SIRT2影响牛体细胞转基因效率及作用机制进行调查研究。具体结果如下:1.本研究发现,利用SIRT2特异性siRNA转染细胞后,在SIRT2沉默大约80%时,实验组与对照组相比获得了更多EGFP阳性细胞和更高的EGFP相对表达水平,这一结果表明通过干扰SIRT2表达可以提高外源基因表达水平。2.为了研究SIRT2抑制对基因转染效率的影响机制,本研究构建了SIRT2表达载体pEGFP-SIRT2,并利用蛋白印迹技术分析细胞内微管乙酰化水平。研究结果发现,与阴性对照组相比,SIRT2过表达导致微管乙酰化水平降低（pEGFP-SIRT2）,而SIRT2抑制组（SiRNA-2）的乙酰化水平则明显升高。同时,在质粒pEGFP-SIRT2转染BFFs 24 h后,利用荧光显微镜检测融合蛋白SIRT2-EGFP表达情况,结果显示SIRT2与微管共定位。而且,利用SIRT2特异性抑制siRNA（SiRNA-2）转染BFFs-EGFP细胞时发现,SIRT2抑制组与对照组相比EGFP表达未出现显着变化,由此说明SIRT2抑制并没有改变细胞核中已存在质粒DNA转录效率。同时,本研究还对转基因体细胞克隆胚胎的发育能力进行了评估。结果显示SIRT2敲除对SCNT克隆胚胎的卵裂率、囊胚率等发育能力没有产生明显影响。3.本研究通过将人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因引入牛骨髓来源巨噬细胞（bBMMs）中建立了牛巨噬细胞系（TERT-bBMMs）,该细胞系表达巨噬细胞表面抗原（CD11b,CD282）。在细菌侵袭过程中bBMMs和TERT-bBMMs细胞因子表达情况发生变化,IL-1β,IL-6,IL-10,IL-12,TNF-α的表达出现了上调。这些结果表明,TERT-bBMMs细胞系能够和bBMMs细胞一样对BCG感染作出反应,能够作为体外研究牛结核病（BTB）感染机制的潜在工具。综上所述,通过干扰SIRT2的表达可以提高外源基因表达水平。这种表达的增加并不是因为质粒DNA在细胞核中转录效率的提高,而是由于SIRT2抑制使得微管乙酰化水平增加,促进了质粒从细胞质转运到细胞核的过程,进而增加了外源基因的表达水平,提高了其转染效率。TERT-bBMMs细胞系保留了bBMMs的形态和功能特征,该细胞系可以作为研究牛巨噬细胞与结核分枝杆菌之间相互作用的细胞模型。
张炜[2]（2016）在《外源粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对牛体外胚胎发育的影响》文中认为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）是一种多潜能造血生长因子,主要由T细胞和巨噬细胞产生,能诱导粒细胞前体和巨噬细胞前体细胞呈集落性生长,促进多种细胞增殖、分化。研究表明,GM-CSF能够提高附植前体外胚胎发育的质量,提高移植后的妊娠率降低自然流产的发生。本文旨在探究外源GM-CSF对牛体外胚胎发育的影响和作用机制。为研究GM-CSF对附植前体外胚胎发育的影响,于卵母细胞受精后第5天在培养液中按梯度添加GM-CSF（0、1、10、20 ng/mL）,两天后统计囊胚率,以筛选外源GM-CSF最适添加浓度。比较了最适添加浓度与对照组囊胚内源ROS水平、细胞总数和凋亡率的差异。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）方法对胚胎发育、抗凋亡、细胞氧化还原平衡、细胞代谢（沃博格效应）相关基因的表达水平进行了检测,以揭示GM-CSF提高附植前胚胎发育能力的作用机制。试验结果显示：培养液中添10 ng/mL GM-CSF可以显着提高囊胚率（30.75%,P<0.05）和囊胚细胞总数（86.6±4.22 vs.66.625±4.33,P<0.05）,显着降低囊胚细胞的内源性ROS水平（0.0865±0.0160 vs.0.1260±0.0156,P<0.05）,有降低囊胚细胞凋亡率的趋势但差异不显着（15.21%±1.44% vs. 17.60%±0.97%, P>0.05）.10 ng/mL GM-CSF可以较对照组显着提高囊胚抗凋亡基因Bcl-2,抗氧化基因（SOD-1、GPx4、Nrf2）的表达水平（P<0.05）；显着下调KEAP-1的表达（P<0.05）；相比于对照组,survivin及PCNA的表达量在处理组显着升高（P<0.05）；参与调控细胞无氧糖酵解（沃博格效应）的基因（G6PD、PDK1、PGK1及LDHA）在10 ng/mL GM-CSF处理组的胚胎细胞中显着高表达（P<0.05）,对其他基因的表达水平没有显着影响。以上结果表明,GM-CSF能够明显提高牛体外胚胎的发育效率及胚胎质量,促进细胞增殖、降低细胞内氧化应激水平；GM-CSF可能通过PI3K/Akt及JAK/STAT5信号通路及下游信号分子HIF1α、Nrf2发挥抗凋亡、抗氧化及调控细胞生长的作用,并上调糖酵解水平加强细胞生物合成活动。
宋丹丹[3]（2016）在《化学限定性培养基添加卵泡抑素对猪胚胎体外发育的影响》文中进行了进一步梳理体外培养（In vitro culture,IVC）是胚胎体外生产的关键技术环节,对动物良种繁育、生殖与发育机理研究具有重要意义。当前,猪的胚胎在IVC后发育效率和质量均不理想,主要与猪IVC培养基不理想有关。研究表明,卵泡抑素（Follistatin,FST）能够加速牛和恒河猴早期胚胎首次卵裂,并提高囊胚发育效率及质量。本实验室前期发现,在完全培养基中添加FST虽然对猪胚胎早期体外发育有影响,但与牛、猴上的报道不尽一致。因此,本研究拟通过在化学限定性的IVC培养基（PZM-4）中补充FST,旨在探讨FST对猪胚胎体外发育的真实影响,为进一步优化猪早期胚胎IVC体系提供依据。具体试验如下:试验一不同亚型FST对猪孤雌激活胚胎（Parthenogenetic Activation Embryos,PAEs）早期发育的影响。将10 ng/m L不同亚型FST（FST-315、FST-300、FST-288）分别独立添加至PZM4中作为处理组,以不添加FST的PZM-4为对照组;激活后立即将PAEs随机等量分配到各组、同等条件下进行IVC。结果表明,各亚型FST均可显着提高胚胎早期卵裂率（IVC第24h卵裂率;P<0.05）,各组IVC第48h总卵裂率无明显差异。FST-300组囊胚率显着提高（P<0.05）,而FST-288主要促进囊胚总细胞数增加（P<0.05）。试验二不同亚型FST（FST-315、FST-300、FST-288）对猪核移植胚胎（Somatic Cell Nuclear Transfer Embryos,NTEs）早期发育的影响。分组与试验一相同;将重构胚随机等量分配到各组、同等条件下进行IVC。结果显示,FST-315和FST-300有提高NTEs早卵裂率和总卵裂率的趋势,但与对照组相比差异不显着（P>0.05）;在囊胚率和囊胚质量上,各亚型FST对NTEs囊胚率、囊胚总细胞数和滋养层细胞数的提高也不显着（P>0.05）,但相对而言,在处理组中FST-300促进趋势较好。试验三不同浓度FST-300对猪NTEs体外发育的影响。以未添加FST-300的PZM-4为对照组,以分别添加10ng/m L、20 ng/m L、50ng/m L FST-300的PZM-4为处理组,随机将NTEs等量分配到各实验组,再于同等条件下进行IVC。结果是,20ng/m L处理组显着提高了NTEs总卵裂率（P<0.05）;各组间NTEs囊胚率、囊胚总细胞数和TE细胞数差异不明显（P>0.05）。试验四为进一步筛选不同亚型FST最适添加浓度,以不加FST蛋白为对照组,分别在PZM-4中设定三种亚型FST蛋白的浓度梯度:FST-315（1、5、10 ng/m L）,FST-300（10、20、50 ng/m L）,FST-288（10、20、50 ng/m L）,探讨能促进猪PAEs体外发育的FST最优亚型及浓度。结果显示,分别添加三种亚型FST的对应所有浓度梯度均可显着提高PAEs早期卵裂率（P<0.05）,其中以20ng/m L FST-300处理组作用最明显。此外,10ng/m L和20ng/m L的FST-300还可显着改善PAEs囊胚发育率（P<0.05）;5ng/m L FST-315组、20ng/m L FST-300组、10ng/m L和50ng/m L FST-288组对猪PAEs体外发育的促进作用主要体现在囊胚总细胞数上（P<0.05）。试验五不同亚型FST、不同浓度组合对猪PAEs体外发育的影响。以未添加FST的PZM-4为对照组,试验组则是在PZM-4中联合添加不同亚型的FST,其中组合1是联合添加FST-300（20ng/m L）、FST-315（5ng/m L）和FST-288（10ng/m L）;组合2是联合添加FST-300（20ng/m L）、FST-315（5ng/m L）;组合3是联合添加FST-300（20ng/m L）、FST-288（10ng/m L）;组合4是联合添加FST-315（5ng/m L）、FST-288（10ng/m L）。组合5为单一添加FST-300（20ng/m L）。结果表明,与空白对照组相比,上述单一添加和组合添加均可显着提高PAEs的早期卵裂率（P<0.05）;在囊胚率上,组合1、2、3和5均有明显促进作用（P<0.05）;从囊胚总细胞数来看,组合4和5可显着改善囊胚质量（P<0.05）。但对照组、组合1和5之间的GDF9、BAX、BCL-xl、p53、KLF4、SOX2、OCT4、CDX2等胚胎发育相关基因表达无明显差异（P>0.05）。总之,本研究不仅发现FST对猪PAEs和NTEs的体外发育具有不同作用,还筛选出了可用于促进猪PAEs、NTEs早期卵裂、提高胚胎发育效率,改善PAEs胚胎质量的FST处理方案,进一步丰富了猪化学限定培养基配方组分,为今后深入揭示FST对胚胎发育的调控机制奠定了良好基础。
张骏鸿[4]（2014）在《C型钠肽对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响》文中研究说明哺乳动物卵母细胞体外成熟培养过程中，由于脱离了在体条件下的卵泡环境，卵母细胞内环腺苷酸单磷酸核苷酸（3’,5’-cyclic adenylate monophosphate, cAMP）的浓度迅速降低，引起减数分裂过早恢复并完成核成熟，最终导致卵母细胞核质成熟不同步，从而影响卵母细胞的后续发育能力。迄今已有多种物质被用来诱导体外成熟培养卵母细胞的核质同步成熟，但大多不能达到既诱导核质成熟同步，又提高成熟卵母细胞质量的目的。C-型钠肽（C-type natriuretic peptide, CNP）是哺乳动物体内广泛存在的高保守的小分子多肽。已有研究表明CNP能够抑制小鼠和猪卵母细胞减数分裂的恢复，并有文献报道CNP在山羊卵泡颗粒细胞中有表达，而有关C-型钠肽受体（natriuretic peptidereceptor2，NPR2）在山羊卵巢中的表达以及CNP对体外成熟培养山羊卵母细胞减数分裂进程的作用及其对卵母细胞成熟质量的影响尚未见报道。本研究在检测山羊卵巢NPR2表达的基础上，利用卵母细胞体外成熟培养体系，探讨CNP对山羊卵母细胞减数分裂进程及其对山羊卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育的影响。主要研究结果如下：（1）利用免疫荧光技术和实时定量PCR技术对山羊卵巢NPR2表达进行检测。结果显示，在山羊卵丘卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes, COCs）中NPR2蛋白和mRNA都有表达；在腔前卵泡阶段，Npr2mRNA表达随着卵泡的发育显着上升（P<0.05）；在有腔卵泡阶段，Npr2mRNA在COCs的表达显着高于颗粒细胞（Granulosacells, GCs）（P<0.05），大直径卵泡中的表达量低于小直径卵泡。（2）山羊COCs在含50ng/mL，100ng/mL，150ng/mL CNP和不含CNP的培养液中分别培养4h，6h和8h后，检测卵母细胞的减数分裂进程。结果表明，刚从卵巢分离的卵母细胞有69.13±1.64%左右仍处于生发泡（germinal vesicle, GV）期；体外培养4h时，培养液中添加100ng/mL和150ng/mLCNP组仍处于GV期的卵母细胞比例较高，且二者之间差异不显着（P>0.05），二者都显着高于50ng/mL CNP组和不添加CNP组（P<0.05），并与卵巢新鲜分离的卵母细胞无显着差异（P>0.05）；培养6h时，各组仍处于GV期的卵母细胞比例显着下降（P<0.05），其中100ng/mL和150ng/mLCNP组显着高于50ng/mL组和不添加CNP组（P<0.05）；培养8h时，各组卵母细胞基本都发生了生发泡破裂。结果说明，卵母细胞成熟培养液中添加高于100ng/mL的CNP能有效抑制山羊卵母细胞减数分裂恢复，这种抑制作用大约能够维持4h。（3）山羊COCs在同时添加100ng/mL CNP和5nmol/L，10nmol/L，50nmol/L，1μg/mL（常规成熟培养液浓度，约为3761nmol/L）和2μg/mL（7522nmol/L）17β-E2的培养液中分别培养6h和8h后，检测卵母细胞的减数分裂进程，并以基础培养液培养组做空白对照组（不添加CNP和17β-E2），以添加100ng/mL CNP组作为无17β-E2对照组。结果表明，培养6h时，添加10nmol/L和50nmol/L17β-E2组仍处于GV期的卵母细胞比例显着高于5nmol/L，1μg/mL，2μg/mL和两个对照组，二者之间差异不显着（P>0.05）；添加10nmol/L17β-E2组仍处于GV期的卵母细胞比例与从卵巢新鲜分离出的COCs组差异不显着（P>0.05）；添加高浓度17β-E2各组仍处于GV期的卵母细胞比例显着低于低浓度各组。培养8h后，各组仍处于GV期卵母细胞比例显着下降（P<0.05），其中10nmol/L与50nmol/L组仍都显着高于其他各组的（P<0.05），二者之间差异不显着（P>0.05）。说明，在含100ng/mL CNP的培养液中添加10～50nmol/L17β-E2能将体外培养卵母细胞减数分裂恢复时间有效延迟至6h，高浓度的17β-E2则促进了卵母细胞的成熟。（4）山羊COCs体外培养过程中Npr2mRNA水平的检测结果显示，在体外培养过程中Npr2mRNA水平迅速下降，而在培养起始阶段，培养液中17β-E2的添加则能显着提高COCs Npr2mRNA水平（P<0.05），但仍达不到新鲜采集的COCs水平。（5）将山羊COCs在含100ng/mL CNP和10nmol/L雌激素的培养液（OMi）中培养24h（OMi24h）；在卵母细胞成熟培养液（OM）中培养24h（OM24h）；在OMi中先培养6h然后在OM中继续培养18h（OMi6h+OM18h）。培养到期后，统计各组卵母细胞的成熟率，并对成熟卵母细胞进行孤雌激活及孤雌胚胎体外培养。结果显示，OMi6h+OM18h组卵母细胞的成熟率（75.88±3.12%）、孤雌激活卵的卵裂率（84.24±0.66%）和孤雌胚胎囊胚发育率（44.80±1.83%）显着高于OMi24h组和OM24h组（P<0.05）；OMi6h+OM18h组孤雌激活体外发育囊胚的细胞数（149.86±9.26）显着高于OMi24h组（97.20±2.60）和OM24h组（122.00±10.11）（P<0.05），并与体内发育囊胚的细胞数（161.20±8.16）差异不显着（P>0.05）。综上所述，NPR2主要在山羊COCs的卵丘细胞表达，且Npr2mRNA随着卵泡的发育而表达上调，排卵前表达水平降低。CNP对山羊卵母细胞减数分裂恢复具有抑制作用，一定水平的17β-E2能够增强CNP的这种作用，有利于体外成熟培养卵母细胞核成熟与胞质成熟同步，高浓度的17β-E2则促进了卵母细胞的核成熟。山羊COCs在添加100ng/mL CNP和10nmol/L17β-E2的成熟培养液中培养6h后，转入常规成熟培养液中继续培养至24h，能显着提高卵母细胞的成熟率及成熟卵母细胞的发育潜能。
樊敏欢[5]（2014）在《白术多糖对牛羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响》文中研究指明白术多糖是中药白术发挥生物学活性作用的重要成分，对细胞的生长、增殖及分化具有明显的促进作用，为不断提高卵母细胞体外成熟率、受精卵发育能力和优化培养体系，本研究在体外培养液中添加白术多糖，研究白术多糖对牛、羊卵母细胞的体外成熟及受精卵发育的影响。试验通过从屠宰场收集的废弃牛、羊卵巢，比较抽吸法和挖卵法对获得的卵母细胞数量及质量的影响；取A/B级卵母细胞，在体外成熟培养液中分别添加10、50、100、150、200μg/mL的白术多糖溶液，检测白术多糖的最适添加浓度，在此基础上，对卵母细胞进行高温处理，研究白术多糖对卵母细胞热应激损害的保护作用；对获得的成熟卵母细胞进行体外受精，筛选体外基础培养液及共培养体细胞种类，在受精卵体外培养液中，添加上述浓度的白术多糖共同孵育培养，检测24h和48h的卵裂率，试验结果如下：1、不同的集卵方法对卵母细胞的获得数量和质量有很大影响，使用特制挖卵刀获得的卵母细胞数及A/B级卵母细胞率与抽吸法相比，差异显着（P<0.05），其中，羊卵巢采用挖卵法能获得更多的A/B级卵母细胞。2、在体外成熟培养液中添加不同浓度的白术多糖溶液，对牛、羊卵母细胞进行培养，结果显示：牛、羊卵母细胞对高剂量（150μg/mL、200μg/mL）白术多糖均表现出发育停滞现象，卵母细胞的成熟率显着下降，50μg/mL以下的低剂量对牛、羊卵母细胞发育有一定的促进作用，其中牛卵母细胞使用50μg/mL添加剂量，卵母细胞的成熟率最高，差异显着（P<0.05）；羊卵母细胞使用10μg/mL添加剂量效果最好。在卵母细胞受到热应激刺激时，白术多糖对牛卵母细胞的保护作用强于羊卵母细胞。3、通过对培养液及共培养细胞的筛选，得出受精卵体外培养液选用ACM基础培养液，MEF细胞作为共培养细胞时，对羊受精卵发育的作用效果最好；培养液中添加白术多糖，可明显提高24h的受精卵卵裂率，对48h的卵裂率无明显作用，表明白术多糖可促进羊受精卵的发育速度，利于早期胚胎的成活。综上所述，白术多糖在低剂量（10μg/mL、50μg/mL）的添加浓度时，能够显着提高牛、羊卵母细胞的体外成熟率，对热应激状态下的牛卵母细胞有明显的保护作用，受精卵体外培养液中添加中、低剂量（10-100μg/mL）的白术多糖可显着提高羊受精卵的24h卵裂率。
宋凯,曹忻,石国庆,周平,罗海玲[6]（2014）在《绵羊卵母细胞不同体外成熟培养液添加血管内皮生长因子效果研究》文中研究指明为研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。本试验仅在成熟培养阶段的不同培养液（血清培养体系fetal bovine serum,FBS和牛血清白蛋白培养体系albumin from bovine serum,BSA）中添加不同浓度VEGF（5和10 ng/mL）,通过成熟率、卵裂率、桑葚胚率、囊胚率反映其影响效果。结果表明:FBS体系中,添加VEGF两试验组卵母细胞成熟率提高到84.61%和82.87%（P<0.01）;BSA体系中,2试验组成熟率分别提高到82.40%和79.21%（P<0.01）;无论是FBS体系还是BSA体系,添加VEGF的各个试验组成熟卵经受精后的胚胎发育都有不同程度的提高,且具有差异显着性。结论:VEGF在不同培养体系中,都可能是绵羊卵母细胞体外成熟的重要调节因子之一,且5 ng/mL VEGF为最适添加量;在FBS体系中,VEGF可能与存在于血清中的多种未知生长因子协同作用,更加有效的提高绵羊卵母细胞体外成熟率和胚胎发育潜力。
彭夏雨[7]（2010）在《绵羊卵巢组织体外培养与冷冻保存试验研究》文中研究说明哺乳动物卵巢组织内有大量处于休眠状态的原始卵泡,但目前对这部分卵泡的利用率却很小本研究旨在用组织学,免疫组化（细胞核增殖抗原检测和细胞凋亡检测）,透射电镜观察以及对培养液中雌激素,妊娠,抑制素的测定等手段,对不同生理状态绵羊卵巢组织生理结构,影响体外培养效果的基础条件,以及抗坏血酸,促卵泡素,表皮生长因子,碱性成纤维生长因子,生长分化因子-9对绵羊卵巢组织体外培养的影响,做系统的研究。在这些研究的基础上以动态连续添加多种成分的方式,建立了可供绵羊皮质卵泡发育到窦腔阶段的综合培养体系,此外还对绵羊卵巢组织的玻璃化冷冻进行了对比研究,建立了适合绵羊卵巢组织快速冷冻的方法,主要取得了以下结果：1、通过对绵羊各阶段卵巢的生理构造研究发现,卵巢中原始卵泡位于皮质的最外层,紧靠白膜下方,密度较大,而发育卵泡位于皮质里层。青年母羊卵巢内发育程度较高,各级卵泡直径都较大,老龄母羊中闭锁卵泡增多,而胎儿和羔羊卵巢中原始卵泡数量较多,直径较小,且构成相对单一。有黄体卵巢中原始卵泡比例低于无黄体卵巢,而次级卵泡比例高于无黄体卵巢。左侧卵巢原始卵泡数量高于右侧卵巢。2、通过对各种培养条件的对比研究,发现绵羊卵巢卵泡在金属格栅+3mg/ml的胶原蛋白,以100μl/cm2的密度铺层的滤膜或膜硝酸纤维素膜的培养支架上,以α-MEM+3mg/mlBSA+胰岛素10μg/ml+转铁蛋白6.25μg/ml+亚硒酸钠6.25ng/ml+0.23 mM丙酮酸钠+2 mM谷氨酰胺+2mM次黄嘌呤+100IU/ml双抗为基础培养液,在38.6℃,5%CO2的增湿培养箱中能长期存活与发育。3、培养中添加50ng/mlVC,能维持卵泡存活和卵泡结构完整。50ng/mlFSH能够促进卵泡和卵母细胞直径的增长,动态添加FSH能促进绵羊原始卵泡在体外的发育和存活,促进卵泡雌激素的分泌和颗粒细胞增殖。添加100ng/mlEGF促进原始卵泡发育和存活,高浓度EGF添加对绵羊卵泡体外发育不利；bFGF呈剂量依赖性促进绵羊原始卵泡的体外发育和生长,培养21天后显着的提高次级卵泡的比例,以及雌激素的分泌；200ng/mlGDF-9显着的促进初级卵泡向次级卵泡的转变,促进颗粒细胞增殖,维持卵泡存活。4、通过对对各种因子的不同组合添加发现,FSH与EGF或VC共同作用可以促进羊原始卵泡的激活和生长,VC与EGF一起时则抑制卵泡的发育和生长,FSH可以消除这种抑制,且增强它们对细胞增殖活性的影响bFGF,GDF-9,EGF,FSH以及VC之间存在着相互促进作用,共同作用能促进卵泡的存活和发育。在添加有VC,BSA,ITS等的α-MEM培养液中,动态连续添加起始高浓度的bFGF和GDF-9以及起始低浓度的EGF和FSH培养18天后,能有效的支持羔羊皮质内卵泡大量启动发育到次级阶段甚至窦腔阶段,促进颗粒细胞增殖,抑制间质细胞凋亡,促进雌激素和抑制素的分泌。5、通过对卵巢组织常规短期保存和冷冻保存研究发现,卵巢组织在生理盐水和α-MEM中4。C保存2小时,或者20℃保存2-6小时不影响卵泡的后续发育潜力。以20%DMSO+20%EG作为冷冻保护剂,梯度平衡后,用金属固体表面玻璃化冷冻方法冷冻绵羊卵巢组织,对卵泡的后续发育和卵巢活性的保持没有影响。
曹忻,罗海玲,石国庆,赵有璋[8]（2008）在《血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响》文中研究表明为了研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对绵羊卵母细胞体外成熟和成熟后卵母细胞体外受精卵的早期发育的影响,在细胞培养过程中分别在体外成熟培养液、体外受精液及体外胚胎发育液中添加5、10 ng/mL VEGF.结果显示,添加VEGF组卵母细胞的体外成熟率由对照组的80.68%提高到了86.09%和85.22%（P<0.01）,成熟卵母细胞的卵裂率由69.38%提高到了75.18%和73.48%（P>0.05）,5 ng/mL添加组的桑葚胚率（45.45%）和囊胚率（30.06%）极显着（P<0.01）高于对照组（37.61%;23.65%）;而10 ng/mL添加组的桑葚胚率（40.25%）和囊胚率（27.80%）低于5 ng/mL添加组的,高于对照组,但差异不显着.据此认为5 ng/mL VEGF的添加量比10 ng/mL VEGF添加量能更有效的促进绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育.
董彬[9]（2008）在《添加筛选的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响》文中提出中药是我国特有的资源,中药中的有效成分在动物繁殖中治疗不孕症、流产、保胎及促进精子活力等方面作用突出,还具有抗过氧化效应、清除自由基、促进卵母细胞成熟和细胞增殖等作用。共培养是近10多年来在胚胎培养方面最引人注目的变革之一。共培养能改善胚胎的形态、促进卵裂并有较高的细胞数、提高囊胚的形成率及孵化率。目前,胚胎体外生产技术的累积效率还很低,卵母细胞的存活力与异常卵母细胞的产生也是制约胚胎体外生产的瓶颈之一。本研究旨在探讨一种稳定的适合小鼠子宫内膜上皮细胞培养的方法,筛选能促进体外受精及胚胎体外发育的中药添加剂,并探讨其合适的添加时间,从而构建一种理想的培养体系,以提高胚胎体外生产的累积效率。本试验为了研究适宜的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响,进行了三个阶段试验研究:第一阶段是筛选了适合于小鼠子宫内膜上皮细胞的培养方法,获得了高纯度子宫内膜上皮细胞;第二阶段在小鼠胚胎不同培养阶段在培养液中分别加入三种中药添加剂,观察其对体外受精及胚胎体外发育的影响,筛选适宜的中药培养液并确定其合适的添加时间;第三阶段结合前两项试验结果,构建新的共培养体系,观察小鼠体外受精胚胎体外发育的效果。试验结果表明:（1）采用酶消化法可以获得小鼠子宫内膜上皮细胞,但酶会影响细胞活力,致使细胞增殖缓慢,且酶消化法获得的上皮细胞纯度不高;采用子宫翻转组织块培养法培养小鼠子宫内膜上皮细胞,细胞活力高,增殖速度快,可以获得较好的原代培养效果。该方法为下一步研究胚胎共培养提供了可靠的体细胞来源。（2）经筛选试验表明,0.5mg/L川芎嗪与4mg/L黄芩苷对小鼠体外受精及早期胚胎发育的作用并不十分显着（P>0.05）,且会延缓2-细胞阶段以后胚胎体外发育的速度; 0.1mg/L小檗碱在体外受精过程中能显着提高受精卵存活率（49.5%对照组7.5%,P<0.05）,但会严重阻碍受精卵后续阶段的胚胎培养（P<0.05）。（3）共培养体系能显着降低2-细胞发育阻滞率（46.2%对照组34.2%,P<0.05）。
傅文栋[10]（2005）在《小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎体外培养及移植效果的研究》文中提出为探讨小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖三种中药成分对小鼠胚胎体外生长发育的效果,本研究以ICR小鼠2-细胞胚胎为试验材料,设计三个试验:小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的筛选试验;小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎发育至孵化期细胞数目的影响;小檗碱、黄芩苷对小鼠早期胚胎移植效果的影响。以期为提高体外培养胚胎发育率开拓一条新的途径。试验一: 以mCZB 基础液为试验对照组,设计添加小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖三个试验内容,每种药物在进行多个批次的试验后,初步筛选出四个或五个浓度后再进一步筛选最佳浓度。试验结果:小檗碱最佳浓度0.10μg/ml, 其120h 孵化胚胎发育率（89.9%）极显着高于对照组（50.7%） （P < 0.01）,组间无显着差异（P > 0.05）;黄芩苷最佳浓度4μg/ml,其120h 孵化胚胎发育率（64.1%）显着好于对照组（47.8%）（P < 0.05）;黄芪多糖最佳浓度为60μg/ml,其120h 孵化胚胎发育率对照组（41.0%）与试验2（35.0%）、3 组（35.0）间无显着差异（P > 0.05）。结果表明:在mCZB 基础液中添加小檗碱、黄芩苷能有效促进2-细胞胚胎体外生长发育。试验二:为验证试验一2-细胞胚胎体外培养的效果,试验二以试验一培养的孵化胚胎为试验材料,比较各试验组中不同中药浓度与对照组中2-细胞胚胎体外培养发育至孵化胚胎细胞数目的差异。试验结果:添加小檗碱各浓度培养的孵化胚胎细胞数目极显着高于对照组（P < 0.01）,小檗碱最佳浓度0.10μg/ml 的孵化胚胎细胞数目为83.7±9.10,对照组为69.5±7.14;添加黄芩苷、黄芪多糖试验中各浓度培养的孵化胚胎细胞数目与对照组间无差异（P < 0.05）。结果表明:小檗碱能有效促进体外培养胚胎的细胞数目。试验三:根据试验一和试验二的结果,以添加双抗mCZB 为试验对照组,添加小檗碱、黄芩苷为试验组。通过对体外培养2-细胞胚胎至囊胚期后移植,来观察小檗碱、黄芩苷对小鼠胚胎移植效果和产仔发育的影响。试验结果:受体妊娠率以小檗碱培养囊胚移植妊娠率（66.7%）显着高于对照组（50%）和黄芩苷试验组（45.5%）（P < 0.05）,其各试验组间产仔率、初产仔鼠平均体重、离窝小鼠平均体重均无差异（P > 0.05）;离窝成活率小檗碱、黄芩苷组显着好于对照组（P < 0.05）。且胚胎和假孕母鼠完全同步移植妊娠效果较好。结果表明:小檗碱、黄芩苷对早期胚胎附植及出生仔鼠无不良影响。由以上结果说明,小檗碱、黄芩苷对体外胚胎生长发育和细胞增殖有促进作用,其中以小檗碱的作用显着;小檗碱、黄芩苷对胚胎附植及出生仔鼠无不良影响。
二、血管内皮生长因子对牛胚胎体外发育影响的最适添加浓度筛选试验（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管内皮生长因子对牛胚胎体外发育影响的最适添加浓度筛选试验（论文提纲范文）
（1）SIRT2对牛体细胞转基因效率的影响及其作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 文献综述 |
| 第一章 Sirtuins家族基因研究进展 |
| 1.1 Sirtuins家族基因进展 |
| 1.2 SIRT2基因的研究进展 |
| 1.2.1微管蛋白去乙酰化酶SIRT2 |
| 1.2.2 SIRT2对细胞周期和癌症的影响 |
| 1.2.3 Sirt2在细胞衰老及相关疾病中的作用 |
| 1.3 其他Sirtuin家族基因生物学功能 |
| 1.3.1 SIRT1基因生物学功能研究进展 |
| 1.3.2 SIRT3基因生物学功能研究进展 |
| 1.3.3 SIRT4基因生物学功能研究进展 |
| 1.3.4 SIRT5基因生物学功能研究进展 |
| 1.3.5 SIRT6基因生物学功能研究进展 |
| 1.3.6 SIRT7基因生物学功能研究进展 |
| 1.4 Sirtuin家族成员之间相互作用研究进展 |
| 第二章 转基因动物技术进展 |
| 2.1 转基因动物研究进展 |
| 2.1.1 抗病转基因动物育种 |
| 2.1.2 利用转基因技术构建人类疾病动物模型 |
| 2.1.3 利用转基因动物生产药物 |
| 2.1.4 利用转基因技术培育移植器官 |
| 2.2 转基因技术研究进展 |
| 2.2.1 非病毒载体转基因技术 |
| 2.2.2 病毒载体转基因技术 |
| 2.3 转基因技术的问题和未来 |
| 实验部分 |
| 第三章 SIRT2对牛体细胞基因转染效率的影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 主要实验试剂 |
| 3.1.2 干扰序列 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 成纤维细胞的制备 |
| 3.2.2 BFFs总 RNA的提取和反转录 |
| 3.2.3 质粒p EGFP-N1 的制备 |
| 3.2.4 RNA干扰实验 |
| 3.2.5 Western blot分析蛋白表达 |
| 3.2.6 基因表达定量检测 |
| 3.2.7 SIRT2干扰干扰对不同转基因方法的影响 |
| 3.2.8 生长曲线的检测 |
| 3.2.9 细胞周期的检测 |
| 3.2.10 数据统计 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 特异性si RNA显着抑制SIRT2 表达 |
| 3.3.2 SIRT2 抑制对BFFs基因转染效率的影响 |
| 3.3.3 SIRT2抑制对不同转基因方法的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 SIRT2提高牛体细胞转基因效率的机制 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 SIRT2 引物序列和定量PCR序列 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 细胞培养 |
| 4.2.2 BFFs总 RNA的提取和反转录 |
| 4.2.3 构建p EGFP-SIRT2 表达载体 |
| 4.2.4 RNA干扰实验 |
| 4.2.5 Western blot分析蛋白表达 |
| 4.2.6 基因表达定量检测 |
| 4.2.7 数据统计 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 SIRT2基因克隆 |
| 4.3.2 载体pEGFP-Sirt2 的表达检测 |
| 4.3.2 SIRT2细胞定位 |
| 4.3.3 SIRT2抑制未能改变质粒的转录活性 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 第五章 SIRT2干扰对转基因体细胞核移植胚胎发育的影响 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 主要实验试剂和仪器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 卵母细胞的收集和体外成熟 |
| 5.2.2 体外成熟卵母细胞的去核 |
| 5.2.3 供体细胞的准备及注核 |
| 5.2.4 核质复合体的电融合 |
| 5.2.5 核移植胚胎的激活及体外培养 |
| 5.2.6 克隆胚的Ipr1基因检测 |
| 5.2.7 囊胚内细胞凋亡染色 |
| 5.2.8 囊胚差异染色 |
| 5.2.9 统计分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 SiRNA-2处理对转基因核移植胚胎体外发育的情况 |
| 5.3.2 Ipr1转基因克隆胚外源基因的检测 |
| 5.3.3 SiRNA-2处理对牛体细胞核移植胚胎内细胞团与滋养层细胞比例的影响 |
| 5.3.4 SiRNA-2处理对牛转基因体细胞核移植胚胎细胞凋亡率的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 结论 |
| 第六章 SIRT2干扰在细胞系建立过程中的应用 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 主要试剂 |
| 6.1.2 引物序列 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 制备pCI-neo-hTERT质粒 |
| 6.2.2 牛骨髓来源巨噬细胞的培养与鉴定 |
| 6.2.3 牛骨髓来源巨噬细胞系的建立 |
| 6.2.4 流式细胞术检测细胞系纯度 |
| 6.2.5 免疫荧光检测TERT-bBMMs细胞标志物 |
| 6.2.6 TERT-bBMMs细胞端粒酶活性测定 |
| 6.2.7 逆转录PCR和定量RT-PCR |
| 6.2.8 生长曲线测定 |
| 6.2.9 Western Blot检测TERT蛋白表达 |
| 6.2.10 染色体核型分析 |
| 6.2.11 检测TERT-bBMMs细胞生物学功能 |
| 6.2.12 数据分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 pCI-neo-hTERT质粒的提取与鉴定 |
| 6.3.2 牛骨髓来源巨噬细胞的分离与培养 |
| 6.3.3 TERT-bBMMs细胞系的建立 |
| 6.3.3 TERT-bBMMs细胞系生长性能鉴定 |
| 6.3.4 TERT-bBMMs细胞生物学功能分析 |
| 6.3.5 检测TERT-bBMMs细胞系端粒酶活性 |
| 6.3.6 结核杆菌对细胞系的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 结论 |
| 全文结论 |
| 创新之处和进一步研究课题 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）外源粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对牛体外胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 动物胚胎体外生产技术 |
| 1.2 肿瘤与胚胎的代谢相似性 |
| 1.2.1 能量代谢 |
| 1.2.2 葡萄糖代谢 |
| 1.2.3 氨基酸代谢 |
| 1.2.4 代谢调控方式的相似性 |
| 1.3 集落刺激因子对生殖活动调控的研究进展 |
| 1.3.1 生殖道中CSFs的分布 |
| 1.3.2 集落刺激因子对生殖活动及功能的调控 |
| 1.3.3 集落刺激因子的应用 |
| 1.4 GM-CSF对哺乳动物附植前胚胎发育的影响 |
| 1.4.1 GM-CSF作用于附植前的胚胎对其后期发育情况的影响 |
| 1.4.2 GM-CSF对囊胚发育的调节 |
| 1.4.3 GM-CSF参与胚胎细胞的抗凋亡作用 |
| 1.4.4 GM-CSF对胚胎细胞多能性和分化的影响 |
| 1.4.5 GM-CSF调控胚胎发育的性别差异 |
| 1.4.6 GM-CSF影响胚胎发育(囊胚发育)的模型 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 不同浓度GM-CSF对胚胎发育能力的影响 |
| 2.1 试验材料及仪器 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要药品及试剂 |
| 2.1.4 主要试剂及培养液配制 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 卵母细胞的采集 |
| 2.2.2 成熟卵母细胞的体外受精 |
| 2.2.3 胚胎体外培养 |
| 2.2.4 试验设计 |
| 2.2.5 数据统计 |
| 2.3 试验结果 |
| 不同浓度GM-CSF对牛体外培养胚胎发育(囊胚率)的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 GM-CSF对牛胚胎内源ROS、囊胚细胞数及凋亡率的影响 |
| 3.1 试验材料及仪器 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 主要药品及试剂 |
| 3.1.4 主要溶液及培养液配制 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 卵母细胞的采集 |
| 3.2.2 成熟卵母细胞的体外受精 |
| 3.2.3 胚胎体外培养 |
| 3.2.4 胚胎内源性活性氧簇(ROS)检测 |
| 3.2.5 TUNEL检测囊胚细胞凋亡水平及细胞总数 |
| 3.2.6 试验设计 |
| 3.2.7 数据统计 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.3.1 GM-CSF对囊胚内源性ROS水平的影响 |
| 3.3.2 GM-CSF对囊胚内细胞总数及凋亡率的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 GM-CSF对牛囊胚相关基因转录水平表达量的影响 |
| 4.1 试验材料及仪器 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 主要仪器设备 |
| 4.1.3 主要药品及试剂 |
| 4.1.4 主要溶液及培养液配制 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 卵母细胞的采集 |
| 4.2.2 成熟卵母细胞的体外受精 |
| 4.2.3 胚胎体外培养 |
| 4.2.4 囊胚RNA提取及cDNA合成 |
| 4.2.5 荧光定量PCR检测相关基因的表达 |
| 4.3 试验结果 |
| 4.3.1 样品总RNA提取及普通PCR检测 |
| 4.3.2 qRT-PCR标准曲线的建立 |
| 4.3.3 GM-CSF对囊胚基因表达水平的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 全文结论 |
| 后期研究设想 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 致谢 |
（3）化学限定性培养基添加卵泡抑素对猪胚胎体外发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 1 猪早期胚胎体外生产研究进展 |
| 1.1 胚胎生产的类型和研究意义 |
| 1.1.1 体外受精胚胎 |
| 1.1.2 体细胞核移植胚胎 |
| 1.1.3 孤雌激活胚胎 |
| 1.2 影响体外早期胚胎发育的因素 |
| 1.2.1 卵母细胞自身质量 |
| 1.2.2 卵母细胞成熟 |
| 1.2.3 胚胎培养体系 |
| 1.2.4 培养方式和环境控制 |
| 2 FST对动物生殖与发育的影响研究进展 |
| 2.1 FST的基本机构 |
| 2.2 FST的发现和生物功能 |
| 2.2.1 卵泡抑素—激活素—抑制素调控体系 |
| 2.2.2 卵泡抑素对卵母细胞和颗粒细胞的调节作用 |
| 2.2.3 卵泡抑素对早期胚胎发育的调节作用 |
| 2.2.4 不同亚型FST蛋白生物学功能比较 |
| 结语 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要仪器与耗材 |
| 1.1.3 主要试剂和溶液的配制 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 猪卵母细胞体外成熟及胚胎培养皿的准备 |
| 1.2.2 猪卵母细胞体外成熟(PIVM) |
| 1.2.3 猪成熟卵母细胞获得与判定 |
| 1.2.4 猪卵母细胞孤雌激活(PA) |
| 1.2.5 猪卵母细胞体细胞核移植（SCNT） |
| 1.2.6 囊胚总细胞计数 |
| 1.2.7 间接免疫荧光染色 |
| 1.2.8 猪早期胚胎的RNA提取及反转录技术 |
| 1.2.9 实时荧光定量PCR技术操作流程 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 在PZM-4中添加不同亚型FST蛋白对猪PAEs早期发育的影响 |
| 2.2 在PZM-4中添加不同亚型FST蛋白对猪NTEs早期发育的影响 |
| 2.3 在PZM-4中添加不同浓度FST-300蛋白对猪NTEs早期发育的影响 |
| 2.4 猪PAEs早期发育过程中FST蛋白最优浓度筛选 |
| 2.5 不同亚型FST蛋白联合处理对PAEs早期体外发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同亚型FST对猪PAEs早期发育的影响 |
| 3.2 不同亚型FST对猪NTEs早期发育的影响 |
| 3.3 FST各亚型的最佳作用浓度筛选 |
| 3.4 FST各亚型单一添加与联合添加对PAEs早期发育的影响 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 在读期间发表的学术论文 |
（4）C型钠肽对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 哺乳动物卵母细胞成熟调控 |
| 1.1 哺乳动物卵母细胞的发生 |
| 1.1.1 卵原细胞增殖 |
| 1.1.2 卵母细胞生长发育 |
| 1.1.3 卵母细胞成熟 |
| 1.2 卵母细胞成熟调控机制 |
| 1.2.1 卵母细胞减数分裂第一次阻滞 |
| 1.2.2 初级卵母细胞减数分裂的恢复 |
| 1.2.3 MⅡ期卵母细胞的维持机制 |
| 1.2.4 MⅡ期卵母细胞的减数分裂激活机制 |
| 1.3 哺乳动物卵母细胞的体外成熟培养 |
| 1.3.1 卵泡液在卵母细胞体外成熟培养中的应用 |
| 1.3.2 调控蛋白合成和蛋白磷酸化的物质在卵母细胞体外成熟中的应用 |
| 1.3.3 调控 cAMP 合成与降解物质在卵母细胞体外成熟培养中的应用 |
| 1.3.4 C 型钠肽在卵母细胞体外成熟中的应用前景 |
| 第二章 C 型钠肽在雌性生殖调控中的作用 |
| 2.1 C 型钠肽概述 |
| 2.2 C 型钠肽受体及其信号转导 |
| 2.3 C 型钠肽的合成与降解 |
| 2.3.1 C 型钠肽的表达调控 |
| 2.3.2 C 型钠肽的降解 |
| 2.4 C 型钠肽受体的调控 |
| 2.4.1 C 型钠肽受体的表达调控 |
| 2.4.2 C 型钠肽受体活性的调控 |
| 2.5 C 型钠肽在雌性生殖调控中的作用 |
| 2.5.1 C 型钠肽及其受体在雌性动物生殖系统中的表达 |
| 2.5.2 C 型钠肽在卵母细胞减数分裂恢复阻滞中的作用 |
| 2.5.3 C 型钠肽在卵泡发育调控中的作用 |
| 第三章 山羊卵泡中 C 型钠肽受体表达检测 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 山羊卵泡中 C 型钠肽受体的表达检测结果 |
| 3.2.2 不同发育阶段卵泡中 Npr2 mRNA 的表达检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 山羊卵泡中 C 型钠肽受体的表达 |
| 3.3.2 不同发育阶段卵泡中 Npr2 mRNA 的表达规律 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 C 型钠肽抑制山羊卵母细胞减数分裂处理条件的筛选 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 C 型钠肽添加浓度的筛选结果 |
| 4.2.2 17β-E2添加浓度的筛选结果 |
| 4.2.3 17β-E2对体外培养山羊 COCs 中 Npr2 mRNA 表达的作用 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 C 型钠肽对山羊卵母细胞减数分裂的影响 |
| 4.3.2 雌激素对 C 型钠肽介导的卵母细胞减数分裂抑制的影响 |
| 4.3.3 雌激素对体外培养山羊 COCs 中 Npr2 mRNA 表达的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 CNP 对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 山羊卵母细胞体外成熟培养结果 |
| 5.2.2 山羊孤雌激活胚胎发育结果 |
| 5.2.3 山羊孤雌激活囊胚与体内发育囊胚细胞计数结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 C 型钠肽对卵母细胞体外成熟的影响 |
| 5.3.2 C 型钠肽对体外成熟山羊卵母细胞孤雌激活胚胎发育的影响 |
| 5.3.3 C 型钠肽对体外成熟山羊卵母细胞孤雌激活囊胚细胞数的影响 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）白术多糖对牛羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 第一章 绪论 |
| 1 白术多糖的生物活性作用 |
| 1.1 白术多糖对畜禽免疫功能的影响 |
| 1.2 白术多糖发挥免疫调节作用的机制 |
| 2 卵母细胞体外成熟培养的研究进展 |
| 2.1 卵母细胞的获取对体外成熟的影响 |
| 2.1.1 动物年龄对采集卵母细胞的影响 |
| 2.1.2 卵巢采集的季节因素 |
| 2.1.3 卵母细胞采集方法的影响 |
| 2.1.4 卵泡发育程度的影响 |
| 2.1.5 卵丘细胞的完整度 |
| 2.2 卵母细胞体外培养环境的影响 |
| 2.2.1 温度和气相 |
| 2.2.2 培养时间 |
| 2.2.3 培养液的 pH 值和渗透压 |
| 2.3 卵母细胞体外成熟培养液成分的影响 |
| 2.3.1 基础培养液的选择 |
| 2.3.2 培养液的添加成分 |
| 3 卵母细胞体外受精和受精卵发育的研究进展 |
| 3.1 卵母细胞的成熟度对体外受精的影响 |
| 3.1.1 第一极体 |
| 3.1.2 卵母细胞胞质 |
| 3.1.3 颗粒细胞的层数 |
| 3.1.4 透明带 |
| 3.2 精子和受精液对体外受精的影响 |
| 3.2.1 精子质量对体外受精的影响 |
| 3.2.2 受精液对体外受精的影响 |
| 3.3 受精卵发育的体外培养条件 |
| 3.3.1 受精胚胎体外培养液 |
| 3.3.2 受精胚胎体外培养方法 |
| 第二章 卵母细胞采集方法的优化 |
| 1 引言 |
| 2 材料与仪器 |
| 2.1 卵巢 |
| 2.2 主要试剂及耗材 |
| 2.3 主要仪器 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 卵巢的采集与保存 |
| 3.2 卵母细胞保存液配制 |
| 3.3 卵母细胞的采集 |
| 3.4 卵母细胞的分级标准 |
| 3.5 数据分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 不同采卵方法对羊卵母细胞采集率的影响 |
| 4.2 不同采卵方法对牛卵母细胞采集率的影响 |
| 5 小结 |
| 第三章 白术多糖对牛、羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与主要仪器 |
| 2.1 GV 期卵母细胞 |
| 2.2 主要试剂及耗材 |
| 2.3 主要仪器设备 |
| 3 试验方法 |
| 3.1 卵母细胞洗涤液及基础成熟培养液配制 |
| 3.2 白术多糖原液配制 |
| 3.3 卵母细胞培养前洗涤 |
| 3.4 卵母细胞培养方法 |
| 3.5 卵母细胞成熟判断 |
| 3.6 试验分组设计 |
| 3.6.1 白术多糖最佳添加浓度筛选试验 |
| 3.6.2 白术多糖对卵母细胞成熟的促进效果试验 |
| 3.7 数据处理 |
| 4 结果与分析 |
| 4.1 不同浓度白术多糖对羊卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 4.2 不同浓度白术多糖对牛卵母细胞体外成熟培养的影响 |
| 4.3 最适浓度白术多糖对牛、羊卵母细胞体外成熟培养的保护作用 |
| 5 小结 |
| 5.1 白术多糖的添加浓度对卵母细胞成熟率的影响 |
| 5.2 白术多糖在卵母细胞成熟过程中的保护作用 |
| 第四章 白术多糖对羊受精卵卵裂的影响 |
| 1 引言 |
| 2 试验材料 |
| 2.1 卵母细胞 |
| 2.2 精子 |
| 3 试剂耗材与主要仪器 |
| 3.1 主要试剂耗材 |
| 3.2 主要仪器设备 |
| 4 试验方法 |
| 4.1 卵母细胞洗涤液及培养液配制 |
| 4.2 精子洗涤液及培养液配制 |
| 4.3 其他所需用液的配制 |
| 4.4 精子及卵母细胞的准备 |
| 4.4.1 受精前精子的准备 |
| 4.4.2 受精前卵母细胞的准备 |
| 4.5 受精液培养盘的制备 |
| 4.6 MEF 滋养层原代细胞的制备 |
| 4.7 MEF 滋养层细胞的冻存及复苏 |
| 4.8 单层颗粒细胞培养盘的制备（GC） |
| 4.9 MEF 细胞培养盘的制备 |
| 4.10 试验设计 |
| 4.10.1 不同受精卵培养液对羊受精卵卵裂的影响试验 |
| 4.10.2 不同共培养细胞对羊受精卵卵裂的影响试验 |
| 4.10.3 不同浓度的白术多糖对羊受精卵卵裂的影响试验 |
| 5 结果与分析 |
| 5.1 不同种类的受精卵培养液对羊受精卵卵裂的影响 |
| 5.2 不同共培养细胞对羊受精卵卵裂的影响 |
| 5.3 不同白术多糖浓度对羊受精卵卵裂的影响 |
| 6 小结 |
| 6.1 不同品种的培养液对羊受精卵发育的影响 |
| 6.2 GC 和 MEF 细胞对羊受精卵发育的共培养效果 |
| 6.3 白术多糖浓度对羊受精卵卵裂率的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（6）绵羊卵母细胞不同体外成熟培养液添加血管内皮生长因子效果研究（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1. 1离体卵巢的采集、运输、清洗及修剪 |
| 1. 2绵羊卵巢卵母细胞的采集 |
| 1. 3绵羊卵母细胞的体外成熟培养 |
| 1. 4绵羊卵母细胞体外成熟的观察 |
| 1. 5绵羊成熟卵母细胞的体外受精 |
| 1. 6受精卵体外发育培养 |
| 1. 7试验设计 |
| 1. 8统计分析 |
| 2结果与分析 |
| 2. 1 FBS体系中VEGF对绵羊卵母细胞体外成熟、 体外受精和胚胎发育的影响 |
| 2. 2 BSA体系中VEGF对绵羊卵母细胞体外成熟、 体外受精和胚胎发育的影响 |
| 3讨论 |
| 4结论 |
（7）绵羊卵巢组织体外培养与冷冻保存试验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语中英文对照 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 卵巢组织体外培养研究概况 |
| 1. 卵巢生理结构及功能 |
| 2 卵子的发生 |
| 3. 卵泡发生 |
| 4. 卵巢组织体外培养研究进展 |
| 4.1 卵巢组织体外培养方法 |
| 4.2 培养条件对卵巢卵泡体外发育的影响 |
| 4.3 激素对卵泡发育的影响 |
| 4.4 生长因子对卵泡发育的影响 |
| 4.5 总结 |
| 5. 卵巢组织体外培养的应用 |
| 5.1 用于研究卵泡发育规律和调节机制 |
| 5.2 转基因动物 |
| 5.3 毒理学研究 |
| 5.4 作为评估卵巢组织冷冻效果的手段 |
| 6. 展望 |
| 第二章 卵巢组织的冷冻保存 |
| 1. 卵巢组织冷冻的目的与优点 |
| 2. 卵巢组织冷冻的影响因素 |
| 2.1 冷冻前处理 |
| 2.2 组织切片的大小 |
| 2.3 植冰温度的影响 |
| 2.4 冷冻保护剂 |
| 2.5 冷冻方法 |
| 3. 冷冻效果的评估 |
| 4. 展望 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第三章 绵羊卵巢组织基础生理研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织切片与染色,以及卵泡计数 |
| 1.4 卵泡超微结构观察 |
| 1.5 数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 绵羊卵巢组织中卵泡数量 |
| 2.2 各年龄阶段绵羊卵巢中腔前卵泡的构成 |
| 2.3 各年龄阶段绵羊卵巢中各级卵泡的大小 |
| 2.4 左右侧卵巢之间的差异 |
| 2.5 黄体卵巢与无黄体卵巢中卵泡构成差异 |
| 2.6 各年龄阶段绵羊卵巢中卵泡的分布及各级卵泡的组织学特征 |
| 2.7 各级卵泡的超微结构特征 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 各年龄阶段绵羊卵巢的生理特征 |
| 3.2 各级卵泡的超微结构特征 |
| 4. 结论 |
| 第四章 绵羊卵巢组织的体外培养基础培养条件的筛选 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 培养支持体系对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.2 胶原蛋白浓度与铺层厚度对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.3 培养温度对卵巢体外培养的影响 |
| 2.4 培养基对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.5 血清及血清替代物添加对卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.6 ITS体系对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.7 组织块形状对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.8 营养与髓质对原始卵泡激活的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 培养支持体系对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.2 培养液对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.3 培养温度对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.4 培养添加成分对卵巢组织体外培养的影响 |
| 3.5 培养试验取材对卵巢组织体外培养的影响 |
| 4. 结论 |
| 第五章 卵巢组织体外培养基础添加因子浓度的筛选 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 免疫组化PCNA分析 |
| 1.5 培养液中雌激素含量的测定 |
| 1.6 超微结构观察 |
| 1.7 数据分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 不同浓度VC对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.2 不同FSH添加方式对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.3 不同浓度EGF对卵巢卵泡体外培养的影响 |
| 2.4 bFGF对卵巢皮质体外培养的影响 |
| 2.5 各筛选的因子浓度在同一体系中长期培养的结果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 VC的添加 |
| 3.2 FSH的添加 |
| 3.3 EGF的添加 |
| 3.4 BFGF的添加 |
| 3.5 各因子的对比 |
| 4 结论 |
| 第六章 绵羊卵巢组织综合体外培养体系的建立 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 超微结构观察 |
| 1.5 免疫组化PCNA检测 |
| 1.6 组织细胞凋亡TUNEL检测 |
| 1.7 培养液中激素含量的检测 |
| 1.8 数据分析 |
| 2. 试验结果 |
| 2.1 VC,EGF,FSH组合对绵羊卵巢组织体外培养的影响 |
| 2.2 动态体系的效果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 VC,FSH,EGF之间的相互关系 |
| 3.2 综合体系的评估 |
| 4. 结论 |
| 第七章 绵羊卵巢组织的冷冻与保存 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 组织学分析 |
| 1.4 超微结构观察 |
| 1.5 激素测定 |
| 1.6 数据统计 |
| 2. 结果 |
| 2.1 不同保存条件对卵巢卵泡的影响 |
| 2.2 冷冻对卵巢卵泡的影响 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 常规保存 |
| 3.2 冷冻保存 |
| 4. 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新之处 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
| 导师评语 |
（9）添加筛选的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 小鼠体外受精研究进展 |
| 1.1 卵母细胞体外成熟 |
| 1.1.1 卵母细胞的获取 |
| 1.1.2 卵母细胞体外成熟的培养体系 |
| 1.1.3 卵母细胞体外成熟的影响因素 |
| 1.1.4 卵母细胞体外成熟判定 |
| 1.2 精子获能 |
| 1.2.1 几种常用的精子体外获能体系 |
| 1.2.2 精子获能的判定 |
| 1.3 体外受精 |
| 1.3.1 体外受精的影响因素 |
| 1.3.2 显微受精 |
| 1.4 受精卵的体外培养 |
| 1.4.1 胚胎体外发育阻滞 |
| 1.4.2 受精卵体外培养系统 |
| 第二章 早期胚胎体外培养体系研究进展 |
| 2.1 培养液培养体系 |
| 2.1.1 葡萄糖 |
| 2.1.2 乳酸盐和丙酮酸盐 |
| 2.1.3 蛋白质和氨基酸 |
| 2.1.4 维生素 |
| 2.1.5 生长因子与细胞因子 |
| 2.2 胚胎与单层辅助细胞共培养体系 |
| 2.2.1 子宫内膜细胞的体外培养研究进展 |
| 2.2.2 用于共培养的细胞及其对胚胎发育的影响 |
| 2.2.3 共培养的应用价值 |
| 2.2.4 共培养的应用方式 |
| 2.2.5 共培养作用的可能机制或影响因素 |
| 2.2.6 共培养的前景 |
| 2.3 序贯共培养体系的建立 |
| 第三章 中药在动物繁殖中的应用 |
| 3.1 中药在体内的作用 |
| 3.1.1 中药对雌性生殖系统的影响 |
| 3.1.2 中药对雄性生殖系统的影响 |
| 3.2 中药在体外的作用 |
| 3.2.1 含药血清的研究 |
| 3.2.2 中药复方的研究 |
| 3.2.3 中药有效成分 |
| 3.3 中药的危害 |
| 3.4 本研究的目的和意义 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第四章 子宫内膜上皮细胞体外分离培养的实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试剂 |
| 4.2.2 仪器及耗材 |
| 4.2.3 实验动物 |
| 4.2.4 细胞的获取 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 子宫内膜上皮细胞的培养与观察 |
| 4.3.2 传代培养 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 促进体外受精及胚胎体外发育的中药添加剂筛选研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试剂 |
| 5.2.2 仪器及耗材 |
| 5.2.3 实验动物 |
| 5.2.4 小鼠胚胎收集及体外受精 |
| 5.2.5 实验设计 |
| 5.2.6 观测指标及数据处理 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 中药添加剂对2-细胞胚胎体外培养的影响 |
| 5.3.2 中药添加剂对单细胞胚胎体外培养的影响 |
| 5.3.3 中药添加剂对体外受精及早期胚胎体外培养的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 受精液中加入小檗碱及共培养对小鼠体外受精胚发育的影响 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 试剂 |
| 6.2.2 仪器及耗材 |
| 6.2.3 实验动物 |
| 6.2.4 小鼠子宫内膜上皮细胞的获得 |
| 6.2.5 小鼠卵母细胞成熟及体外受精 |
| 6.2.6 实验设计 |
| 6.2.7 观测指标及数据处理 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.4 讨论与小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 需进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎体外培养及移植效果的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1. 哺乳动物早期胚胎体外培养技术 |
| 1.1 培养液的种类 |
| 1.2 培养液的基本成分及其作用 |
| 1.3 胚胎的体外培养系统 |
| 1.4 胚胎体外培养存在的问题及展望 |
| 2. 小檗碱、黄芩苷和黄芪多糖在体外实验中的应用现状 |
| 2.1 小檗碱 |
| 2.2 黄芩苷 |
| 2.3 黄芪多糖 |
| 2.4 展望 |
| 3. 本研究的目的、意义及内容 |
| 第二章 试验部分 |
| 试验一 小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的筛选试验. |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 小鼠胚胎发育时期判定 |
| 1.4 数据处理 |
| 2. 结果 |
| 2.1 小檗碱对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的筛选结果 |
| 2.2 黄芩苷对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的筛选结果 |
| 2.3 黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的筛选结果 |
| 3. 讨论 |
| 试验二 小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎发育至孵化期细胞数目的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 数据处理 |
| 2. 结果 |
| 2.1 添加小檗碱培养小鼠2-细胞胚胎至孵化胚胎细胞数目 |
| 2.2 添加黄芩苷培养小鼠2-细胞胚胎至孵化胚胎细胞数目 |
| 2.3 添加黄芪多糖培养小鼠2-细胞胚胎至孵化胚胎细胞数目 |
| 3. 讨论 |
| 试验三 小檗碱、黄芩苷对小鼠早期胚胎移植效果的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 统计方法 |
| 2. 试验结果 |
| 2.1 不同试验组别胚胎发育情况 |
| 2.2 受体假孕不同时间移植效果 |
| 2.3 胚胎移植效果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 不同假孕时间移植效果的影响 |
| 3.2 小檗碱和黄芩苷对胎移植效果的探讨 |
| 第三章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
四、血管内皮生长因子对牛胚胎体外发育影响的最适添加浓度筛选试验（论文参考文献）
- [1]SIRT2对牛体细胞转基因效率的影响及其作用机制[D]. 肖佳佳. 西北农林科技大学, 2017(01)
- [2]外源粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对牛体外胚胎发育的影响[D]. 张炜. 山西农业大学, 2016(04)
- [3]化学限定性培养基添加卵泡抑素对猪胚胎体外发育的影响[D]. 宋丹丹. 安徽农业大学, 2016(05)
- [4]C型钠肽对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响[D]. 张骏鸿. 西北农林科技大学, 2014(02)
- [5]白术多糖对牛羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响[D]. 樊敏欢. 仲恺农业工程学院, 2014(03)
- [6]绵羊卵母细胞不同体外成熟培养液添加血管内皮生长因子效果研究[J]. 宋凯,曹忻,石国庆,周平,罗海玲. 西南农业学报, 2014(01)
- [7]绵羊卵巢组织体外培养与冷冻保存试验研究[D]. 彭夏雨. 石河子大学, 2010(05)
- [8]血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响[J]. 曹忻,罗海玲,石国庆,赵有璋. 甘肃农业大学学报, 2008(04)
- [9]添加筛选的中药培养液对小鼠体外受精及胚胎发育的影响[D]. 董彬. 西北农林科技大学, 2008(11)
- [10]小檗碱、黄芩苷、黄芪多糖对小鼠2-细胞胚胎体外培养及移植效果的研究[D]. 傅文栋. 新疆农业大学, 2005(05)
标签：卵母细胞论文; 血管内皮生长因子论文; 细胞生长因子论文; 胚胎论文; 基因合成论文;