一、人卵巢中的神经垂体激素（论文文献综述）
林欣[1]（2018）在《蛋鸡退化卵泡衰退的机制及其功能的研究》文中研究指明蛋鸡的产蛋性能主要取决于卵巢中生殖细胞以及卵泡的生长发育水平,而卵泡发育的调控是蛋禽繁殖的核心问题。家禽卵巢中只有不超过5%的卵泡可完成发育过程,最后成熟排卵。卵母细胞被排出后,遗留下来的组织被称为排卵后卵泡（postovulatory follicle,POF）,在完成排卵之后,POF开始逐渐退化。而另外超过95%没有完成发育至成熟排卵的卵泡,最终都发生退化,这部分卵泡称闭锁卵泡（atretic follicle）。POF与闭锁卵泡组成了家禽卵巢中两种退化卵泡（regressed follicle）。本实验以海兰白蛋鸡为研究对象,一方面以研究POF调节蛋鸡卵泡发育的分子机制,另一方面探究延缓卵泡闭锁的方法。利用POF调节成鸡卵泡发育和减缓卵泡闭锁的双重措施,使蛋鸡的生殖细胞得以充分利用,为退化卵泡对蛋鸡产蛋性能调节作用提供理论依据。1.凋亡与自噬活动参与蛋鸡POF的退化哺乳动物成熟卵泡排卵后形成黄体,通过分泌高水平的孕酮（progesterone,P4）来调节子宫内膜的发育、胚胎附植以及早期胚胎的发育。然而,鸟类的卵泡排卵后不形成黄体,仅作为POF而逐渐退化。目前,POF的功能和退化机制尚不清楚。因此,本课题着手研究凋亡和自噬活动的变化是否参与POF的退化。通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）、油红O和透射电镜（transmission electron microscope,TEM）等形态学观察以及P4水平检测等方法,结果发现POF结构和分泌功能退化的最大程度发生于POF3。TUNEL法检测结果表明,POF颗粒层的退化程度不同于膜层,相比于膜层,颗粒细胞可维持更久的生物学活性。重要的是,相对于其他阶段的POFs,线粒体凋亡和内质网应激的相关基因和蛋白在POF3的颗粒层中的表达量达到最高值。此外,自噬标志性蛋白Beclinl主要表达于POF的膜层,同时随着POF的退化,LC3βII和Beclinl在POF膜层的表达上调,而自噬转运蛋白p62表达下调,说明自噬发生于POF的膜层中。以上结果提示:POF颗粒层的退化与线粒体凋亡和内质网应激相关,而POF膜层的退化可能是半胱天冬氨酸酶（caspase）介导的细胞凋亡和Beclin1介导的自噬联合作用产生的结果。2.POF通过PGE2-EP2信号促进蛋鸡等级前卵泡生长鸟类的POF是一个特殊的结构,对于其功能基本上还不明确。有报道指出,结扎或者摘除蛋鸡的POF之后,会影响蛋鸡的产蛋能力和就巢能力。这说明蛋鸡的POF可作为一个内分泌腺,分泌某些激素或者细胞因子来发挥作用。本实验通过建立POF培养、POF与等级前卵泡共培养、POF颗粒细胞培养、POF颗粒细胞与等级前卵泡共培养和等级前卵泡培养等5种培养模型,并通过HE、免疫组化和免疫荧光染色,免疫印记（Western blot,WB）、酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）和qRT-PCR等方法检测POF对等级前卵泡生长发育的影响。结果显示,两种前列腺素合成酶（COXl和COX2）、芳香化酶P450（cholesterol side-chain cleavage enzyme,CYP11A1）和类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory proteins,STAR）主要表达于POF的颗粒细胞。同时,最大的排卵后卵泡（POF1）分泌的前列腺素PGE2和PGF2α显着高于最大的排卵前卵泡和其他POF。通过共培养实验发现POF1和POF1的颗粒细胞都能促进小白卵泡（等级前卵泡的一个阶段,small white follicle,SWF）的外膜层细胞增殖;同时PGE2也能促进SWF外膜层细胞的增殖。POF1对SWF的增殖作用可被前列腺素合成酶的抑制剂吲哚美辛所抑制,但是这种抑制作用并不能阻断外源性添加PGE2的促增殖作用。另外,PGE2的促增殖能力受EP2的拮抗剂TG6-10-1所拮抗,说明POF1可通过PGE2-EP2信号促进SWF外膜层细胞的增殖,从而促进等级前卵泡的生长和发育。3.蛋鸡等级前卵泡生长发育和闭锁相关基因的初筛家禽生产中,闭锁卵泡的数量直接影响产蛋率的高低,目前关于家禽卵泡闭锁的机理尚不清楚,本实验旨在探索导致卵泡闭锁的可能原因。选取小白卵泡、小黄卵泡与大小接近的闭锁小黄卵泡,通过HE染色观察形态学差异,并通过qRT-PCR的检测相关基因表达。结果表明:闭锁小黄卵泡（atretic small yellow follicle,ASYF）与正常小黄卵泡（small yellow follicle,SYF）相比,颗粒层增生变厚,但细胞松散,紧密连接蛋白相关基因E-Cadherin显着下调,抑凋亡基因Bcl2极显着下调,凋亡基因caspase-3和caspase-9显着上调;检测激素合成酶得知,闭锁卵泡与正常卵泡相比,类固醇激素合成关键酶基因Cyplla1、Hsd3b2、Cyp17a1和Cyp19a1的表达均下调,前列腺素合成相关基因COX1和COX2表达均极显着升高;检测激素受体得知闭锁卵泡与正常卵泡相比,促性腺激素受体FSHR和LHR、类固醇激素ERβ相关受体基因表达量极显着升高,前列腺素相关受体EP2、EP4和FP表达量显着升高,但EP3表达量显着降低。此外,闭锁卵泡与正常卵泡相比,FGFR1和VEGFR1基因的表达量显着降低,但TGFβR1显着升高;SYF与小白卵泡（small white follicle,SWF）相比,BMPR1β、BMPR2、TGFβR1、FGFR1、VEGFR1和VEFGR2的表达量均显着升高,但VLDLR表达量显着降低。结果提示,闭锁卵泡的紧密连接蛋白受到破坏,闭锁进程由caspase通路介导的;对于闭锁卵泡,类固醇激素的合成能力逐渐丧失,促性腺激素和类固醇激素受体表达上调有助于延缓卵泡闭锁的进程;前列腺素合成酶和相关受体表达上调可能与闭锁卵泡的退化与再吸收相关,闭锁卵泡合成前列腺素的能力上升,可能通过自分泌作用于EP2、EP4和FP受体介导闭锁卵泡的退化与再吸收进程。4.bFGF促进蛋鸡等级前卵泡生长发育与卵黄沉积机制的研究此前的实验表明,随着卵泡发育,FGFR1的mRNA表达量上升,而VLDLR的mRNA表达量下降。蛋鸡卵母细胞中卵黄物质的主要成分包括极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL）和卵黄蛋白原（vitellogenin,VTG）,VLDL在肝脏合成,通过其受体VLDLR介导经内吞作用进入卵母细胞。本实验通过检测VLDLR在不同阶段卵泡中的表达,使用碱性成纤维因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）处理蛋鸡的SWF,并通过免疫荧光、WB和qRT-PCR等方法检测bFGF对等级前卵泡生长发育及卵黄沉积的影响。结果显示,VLDLR主要表达于等级前卵泡和排卵前卵泡的颗粒细胞上,且随着卵泡的发育,VLDLR的表达量下降。通过添加FGFR1的拮抗剂SU5402发现,bFGF通过FGFR1-AKT信号促进SWF外膜层的增殖,且bFGF能促进SWF外膜层的血管生成。此外,bFGF能抑制SWF的VLDLR和p-ERK的表达,通过联合阻断FGFR1和PPARγ,发现PPARγ也可以抑制SWF中VLDLR的表达。结果说明,bFGF一方面能促进SWF膜细胞增殖和血管生成,另一方面,能抑制颗粒细胞中VLDLR的表达,从而促进蛋鸡卵泡发育和卵母细胞卵黄的沉积。综上所述,通过比较不同阶段POF的退化程度,发现POF颗粒层的退化与线粒体凋亡和内质网应激相关,而POF膜层的退化可能是caspase介导的凋亡和Beclinl介导的自噬联合作用产生的结果;通过建立POF与SWF和POF的颗粒细胞与SWF的共培养模型,发现POF可通过PGE2-EP2信号提高SWF外膜层细胞的增殖活性,从而促进等级前卵泡的生长和发育;同时,通过比较SWF、SYF与ASYF,筛选出促进卵泡生长发育和抑制闭锁的相关基因;通过bFGF处理,发现bFGF对蛋鸡等级前卵泡生长发育及卵黄沉积具有促进作用。以上研究结果不仅为退化卵泡衰退机制及其对调节蛋鸡后续卵泡发育的作用提供了理论基础,而且为提高蛋鸡产蛋性能措施的研究提供了参考作用。
葛闻博[2]（2018）在《高原甘加藏羊发情周期下丘脑GnRH的动态分泌及其受体在垂体和卵巢中表达》文中认为雌性动物的生殖活动主要受下丘脑-垂体-卵巢轴（Hypothalamic-pituitary-ovary axis）的调控,促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasing hormone,GnRH）作为下丘脑-垂体-卵巢轴的关键信息分子,它可以直接作用于垂体和卵巢分别调控促性腺激素（Gonadotropic hormone,GTH）和卵巢类固醇激素的分泌来调控母畜的发情、排卵等生殖过程。GnRH对生殖功能的调控必须以促性腺激素释放激素受体（Gonadorelin releasing hormone receptor,GnRHR）为介导。因此,掌握甘加藏羊发情周期下丘脑GnRH的动态分泌及其受体在垂体和卵巢中的分布和基因表达的动态变化规律。为研究生殖激素调控甘加藏羊的生殖生理活动提供了理论依据。为了探究高原甘加藏羊发情周期下丘脑促性腺激素释放激素（GnRH）及其受体（GnRHR）在生殖调控活动中的作用。本试验对甘加藏羊发情周期不同阶段血浆中GnRH的分泌及垂体和卵巢组织中GnRHR的分布、GnRHR mRNA表达的动态变化规律进行了研究。试验选取年龄2.53.5岁,发育正常的未孕雌性高原甘加藏羊48只,根据发情周期四分法将高原甘加藏羊分为4组:发情前期、发情期、发情后期和间情期。采集藏羊血液、垂体及卵巢组织。（1）利用酶联免疫吸附试验（ELISA）,测定高原甘加藏羊发情周期各阶段血浆中GnRH的含量,分析其在发情周期的动态变化规律;（2）利用荧光定量PCR（RT-PCR）技术,检测高原甘加藏羊发情周期各阶段垂体和卵巢组织中GnRHR mRNA的动态表达规律;（3）利用HE染色法观察高原甘加藏羊发情周期各阶段垂体和卵巢组织结构变化特点;（4）利用免疫组织化学SP法,对高原甘加藏羊发情周期各阶段垂体和卵巢组织中GnRHR阳性细胞的分布表达进行研究,并结合计算机图像分析软件（Image pro-plus）对藏羊发情周期各阶段垂体和卵巢组织中GnRHR免疫反应阳性产物的积分光密度值进行分析。研究结果如下:1.高原甘加藏羊发情周期不同阶段下丘脑GnRH分泌呈现一定的规律:血浆中GnRH的含量在间情期分泌量最低（55.687pg/ml）,之后分泌量开始增加,发情前期（57.409pg/ml）,发情期升高达到最大（73.389pg/m）,发情后期分泌量减少（62.058pg/ml）,其中发情期分泌量最多且与其他三个时期差异显着（P<0.05）。发情期和发情后期呈脉冲式分泌,间情期和发情前期既有脉冲式又有波动式分泌。2.高原甘加藏羊垂体组织中GnRHR mRNA在发情前期、发情期、发情后期和间情期的相对表达量分别是0.8246±0.1739、1.5100±0.4187、0.2923±0.0202、1.0000±0.2100,其中发情期的相对表达量最高,较发情后期差异极显着（P<0.01）,与发情前期和间情期差异显着（P<0.05）。卵巢组织中GnRHR mRNA按照发情周期的相对表达量分别是1.0910±0.7665、0.5420±0.0763、1.3799±0.7452、1.0000±1.1221,其中发情后期的相对表达量最高,与发情期差异极显着（P<0.01）,与发情前期和间情期差异显着（P<0.05）。3.HE染色观察显示,（1）甘加藏羊垂体根据胞浆染色不同,可辨别出三种类型细胞,垂体细胞胞浆被染成红色的为嗜酸性细胞,体积较大,圆形;胞核被染成紫色的为嗜碱性细胞,体积最大,圆形或卵圆形;嫌色细胞着色较浅,体积小,形状不规则。甘加藏羊从发情前期、发情期、发情后期嗜碱性细胞着色数量逐渐增多,在间情期降低;嗜酸性细胞在发情前期和发情期着色数量较少,在发情后期和间情期着色数量较多;嫌色细胞没有完整的细胞颗粒,在发情前期和间情期较多。（2）原始卵泡主要位于皮质浅层,体积小,细胞界限不明显。初级卵泡卵泡细胞界限明显,围绕着初级卵母细胞。次级卵泡位于卵巢皮质较深处,卵泡的体积增大,卵泡细胞增至多层围绕着次级卵母细胞。三级卵泡位于髓质,卵泡细胞分裂为更多层颗粒细胞,细胞界限清晰,出现卵泡腔,里面充满了卵泡液。成熟卵泡位于卵巢表面,体积最大,卵泡腔随之增至最大,充满卵泡液,此时透明带和放射冠更明显。闭锁卵泡的卵母细胞萎缩变形无规则。黄体细胞体积较大,细胞和周围组织界限清晰,胞质着色较深。4.免疫组织化学检测结果显示:（1）高原甘加藏羊发情周期的各个阶段GnRHR免疫反应阳性细胞主要分布在垂体远侧部,在发情期GnRHR阳性细胞数量分布最多,细胞多为圆形;发情后期和间情期阳性细胞数量较少,细胞呈卵圆形;发情前期阳性细胞相对较多,形状不规则。应用计算机图像分析软件（IPP）得出,甘加藏羊发情周期垂体中GnRHR免疫阳性细胞积分光密度值在发情前期、发情期、发情后期和间情期分别为:9126874.8624±39582.6795、9628562.0168±49365.2516、7486923.0574±52684.8536、7395086.6842±49572.8143,发情期最高,与发情后期和间情期相比差异极显着（P<0.01）,发情前期与发情后期和间情期差异显着（P<0.05）。（2）高原甘加藏羊发情周期的各个阶段GnRHR免疫反应阳性细胞在各级卵泡的卵母细胞、卵泡细胞、卵泡的颗粒层、卵泡膜和黄体上有分布,在卵泡周围基质细胞中也有免疫阳性反应。根据IPP软件分析得到,甘加藏羊发情周期卵巢中GnRHR免疫阳性细胞积分光密度值在发情前期、发情期、发情后期和间情期分别为:869625.1954±6921.2894、895264.6931±6137.9752、973841.3840±5941.3698和897316.2547±5723.4618,发情后期最高,与发情期、发情前期和发情间情差异极显着（P<0.01）,发情前期、发情期和间情期差异不显着（P>0.05）。结论:高原甘加藏羊发情周期血浆中GnRH的含量在间情期分泌量最低,发情期分泌量最高。垂体组织中GnRHR mRNA在发情期的相对表达量最高;卵巢组织中GnRHR mRNA在发情后期的相对表达量最高。垂体组织中GnRHR免疫反应阳性细胞主要分布在远侧部,在发情期分布密度最高。GnRHR阳性细胞分布在各级卵泡的卵母细胞、卵泡细胞、卵泡颗粒层、卵泡膜、黄体。GnRHR的免疫阳性产物的积分光密度值在发情后期最高。上述研究结果,可为进一步研究高原甘加藏羊下丘脑生殖激素对不同发育时期垂体、卵泡的作用和繁殖性能的影响,提供了包括激素、分子和细胞水平的理论依据。
王洪进[3]（2012）在《小鼠和山羊性成熟前卵巢卵泡发育与雌激素受体表达及其调控研究》文中进行了进一步梳理动物发育良好的卵子经体外成熟、授精、胚胎培养可获得完整的后代个体，大量的比较研究证实性成熟前一些哺乳动物如小鼠、猪、牛、山羊等卵泡卵子在体外成熟和受精后的发育能力很低，甚至不形成胚胎，这显示性成熟前卵母细胞发育存在缺陷，造成这种缺陷的原因或机制尚不清楚。人们试图通过一些途径或方法如改善培养介质、使用各种刺激等提高性成熟前卵泡发育的潜能，一直未达到预期效果，这显然制约对性成熟前雌性动物卵泡卵子的利用，成为动物克隆、胚胎移植工程中的关键科学问题和技术难题。针对上述科学问题，本研究以小鼠、沂蒙黑山羊、波尔山羊为动物模型，以性成熟的卵巢卵泡为对照，使用连续组织切片技术、HE染色技术、免疫组织化学方法、放射免疫技术、荧光定量RT-PCR等技术设计了一系列的科学试验，探讨了卵巢卵泡发育、雌激素分泌和α、β两种雌激素受体表达性成熟前后的差异规律；另外，研究了使用外源性激素E2、FSH和LH处理对性成熟前小鼠卵泡发育、雌激素分泌及其受体表达的影响，为探索改善卵泡发育潜能的途径和方法提供科学依据。实验结果表明：1.小鼠血液雌激素在性成熟前（25d）较低，而性成熟（32d至38d）极显着升高（P<0.01），且维持较高的水平；随日龄增加，小鼠卵巢卵泡发育渐至成熟，其内α型雌激素受体和β型雌激素受主要分布于颗粒细胞内，呈现不同的表达规律：性成熟前α型受体表达极少，到性成熟后显着升高（P<0.01）；β型受体性成熟前大量表达，较α型受体多，性成熟后略有降低。2.沂蒙黑山羊和波尔山羊性成熟前卵巢皮质较薄,原始卵泡和初级卵泡数量多,发育不充分,细胞结构较完整,形态小,成熟卵泡很少；性成熟卵巢和卵泡发育良好可见明显的黄体结构,初级卵泡、次级卵泡丰富,成熟卵泡较多。性成熟前波尔山羊和沂蒙黑山羊卵巢α、β雌激素受体表达均低于性成熟卵巢内的表达；且无论性成熟前还是性成熟卵巢，α雌激素受体的表达均显着低于β雌激素受体。3.经E2、FSH和LH处理的20日龄小鼠可以不同程度增加卵泡的数量，经FSH和LH处理的小鼠优势卵泡数量较多，排卵提前；经三种激素处理后卵泡内α、β两种雌激素受体阳性颗粒细胞增多，其中FSH和LH对α雌激素受体增加显着，优势卵泡内颗粒细胞增加显着；雌激素分泌在三种激素作用下变化不一致，其中FSH和LH具有促进内源性雌激素分泌的作用，而外源性雌激素有降低内源性雌激素作用的趋势。结论：小鼠和山羊研究证实性成熟前卵泡雌激素受体表达较性成熟低，这可能是卵泡卵子发育潜能低下重要原因之一；使用合适的调控处理方法可以改善性成熟前小鼠卵巢卵泡的发育与卵泡内α、β雌激素受体的分布、表达，对探索提高性成熟前动物卵泡发育潜能的途径和方法提供科学依据。
张文华[4]（2012）在《催产素对牛黄体细胞中突触素表达的影响》文中进行了进一步梳理为研究不同妊娠期牛黄体中突触素及其mRNA的表达变化，以及催产素对其表达的影响，本试验首先采用RT-PCR和原位杂交技术确定了突触素mRNA在牛黄体细胞中的表达，再运用免疫组织化学和RT-PCR检测突触素及其mRNA在不同妊娠期牛黄体中的表达变化，分析突触素与催产素表达的相关性。体外培养妊娠中期牛黄体细胞，用不同浓度的催产素处理，探讨催产素对牛黄体细胞生长活力和孕酮分泌的影响，并检测突触素及其mRNA的表达变化，分析催产素对突触素表达的影响，探讨两者之间的关系。试验结果如下：1.牛黄体中有突触素mRNA的表达，且表达含量不同。在妊娠早期和中期表达含量较高，晚期表达下降，说明突触素可参与黄体的形成和维持，并可调节蛋白、激素和细胞因子的分泌，在分娩后，突触素mRNA的表达又升高，可能与黄体退化时表达大量的凋亡相关蛋白与因子有关。2.突触素在妊娠的各个时期都有表达，且不同时期表达含量不同，主要在大黄体细胞中，在小黄体细胞和卵巢的其他组织微量表达或不表达。在妊娠早期表达含量较高，妊娠中期的相对表达量明显高于早期、晚期及分娩后，妊娠晚期表达量较少，分娩后显着减少，说明突触素与黄体的生成和维持密切相关，可调节黄体的生长。3.不同浓度催产素可抑制黄体细胞中孕酮的分泌，低浓度的催产素对孕酮分泌影响较小，而高浓度的催产素可显着抑制孕酮分泌，与MTT法测得的细胞生长活力一致，说明不同浓度催产素可影响黄体细胞的生长活性及孕酮的分泌，而且，细胞的存活和生长与培养液中孕酮的含量相关。但是催产素对孕酮分泌的影响还与物种、黄体时期及催产素浓度有一定的关系。4.催产素可影响牛黄体细胞中突触素及其mRNA的表达。RT-PCR结果显示，不同浓度的催产素不同程度上促进突触素mRNA的表达；Western Blot结果显示，催产素可显着促进突触素的表达，并呈一定的剂量依赖性。综上所述，突触素及其mRNA在牛不同妊娠时期的黄体中是一个动态变化的过程，在妊娠中期时表达量最高，催产素对体外培养的牛黄体细胞的生长、孕酮分泌及突触素表达有一定的影响，且黄体细胞的生长与孕酮浓度呈正相关。这为揭示牛黄体发生、凋亡退化及妊娠维持等相关机理提供了新的理论依据，也为探究OT影响SYP表达的机制奠定了基础。
方富贵,李福宝,蒋书东,王琳[5]（2010）在《GHS-R1a在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位与mRNA表达》文中提出目的:分析ghrelin受体（GHS-R1a）在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位与表达。方法:采用免疫组织化学法检测GHS-R1a的定位,实时荧光定量PCR检测GHS-R1a mRNA的表达。结果:GHS-R1a在下丘脑中主要分布在弓状核,腹内侧核,正中隆起的颗粒细胞、椎体细胞以及穿插于颗粒细胞和椎体细胞之间的神经胶质细胞内;在脑垂体中主要分布在腺垂体的嗜酸性细胞和嗜碱性细胞内,而神经垂体则无;以及卵巢的卵母细胞、黄体细胞初级卵泡的粒层细胞、有腔卵泡的内膜层和粒层细胞有少量GHS-R1a分布,在原始卵泡的粒层细胞、有腔卵泡阶段外膜层细胞没有GHS-R1a分布。GHS-R1amRNA在不同发情周期大鼠的下丘脑、垂体均有表达,下丘脑中GHS-R1a mRNA在发情后期达到最高值,发情期最低;脑垂体中,GHS-R1a mRNA发情前期最高,间情期达到最低值;大鼠卵巢中没有GHS-R1amRNA分布。结论:GHS-R1a在下丘脑-垂体-卵巢轴中均有分布。GHS-R1a mRNA在大鼠的下丘脑、垂体中的表达受发情周期的控制。
王琳[6]（2010）在《Ghrelin对大鼠下丘脑—垂体—性腺的影响及其机理研究》文中研究指明目的:探讨Ghrelin、GHS-R1a在下丘脑-垂体-性腺上的定位以及Ghrelin mRNA在其上的表达。分析Ghrelin mRNA和GHS-R1a mRNA在不同发情周期大鼠下丘脑-垂体-卵巢上的表达丰度。研究外源性Ghrelin对促性腺激素、性腺激素的分泌及其基因表达的影响。从而揭示Ghrelin对大鼠生殖轴的作用途径和机理。方法:（1）分离成年SD大鼠的下丘脑、垂体、卵巢和睾丸,经4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,采用免疫组织化学方法观察Ghrelin及其受体GHS-R1a在上述组织中的定位。（2）使用地高辛标记的Ghrelin寡核苷酸探针,采用原位杂交方法观察Ghrelin mRNA在下丘脑、垂体、卵巢和睾丸中的表达。（3）实时荧光定量PCR法分析Ghrelin mRNA和GHS-R1a mRNA在不同发情周期大鼠下丘脑、垂体、卵巢上的表达丰度。（4）采用1%的戊巴比妥钠1mL对大鼠进行腹腔注射,麻醉后固定于大鼠脑立体定位仪,采用不同剂量的Ghrelin（0.3nmol、1nmol、3nmol和生理盐水对照组）对雄性大鼠和不同发情周期大鼠进行侧脑室注射,15 min后断头采血,酶联免疫分析法测血清促黄体素、促卵泡素浓度,放射免疫分析法测血清睾酮、雌激素和孕酮的浓度。（5）分离试验四大鼠的下丘脑、垂体、卵巢和睾丸,实时荧光定量PCR法分析FSH、LH、GnRH、AR、ERβ和PRA+B mRNA表达丰度。（6）成年雄性大鼠和25 d的雌性大鼠断头处死,收集睾丸间质细胞、黄体细胞和颗粒细胞于CO2培养箱内培养6 h,收集培养液和细胞,采用酶联免疫、放射免疫分析法测培养液中睾酮、雌激素和孕酮的浓度,实时荧光定量PCR法分析AR、ERβ和PRA+BmRNA的表达丰度。结果:（1）Ghrelin与其受体GHS-R1a在下丘脑弓状核、腹内侧核、正中隆起,腺垂体,睾丸间质细胞、精母细胞、睾丸支持细胞,卵母细胞等中均有分布。（2）在下丘脑、垂体、睾丸中,Ghrelin mRNA显示和Ghrelin一致的分布方式,在卵巢中,显示出差异性表达。（3）Ghrelin和GHS-R1a在不同发情周期大鼠的下丘脑、垂体中均有表达,且其表达丰度随发情周期的变化而变化。在卵巢中仅发现Ghrelin mRNA表达,在整个发情周期均未检测到GHS-R1a mRNA表达。（4）侧脑室注射Ghrelin能抑制促性腺激素、性腺激素的分泌,其作用效果与所处发情周期、注射的剂量、性别有关。（5）侧脑室注射Ghrelin显着抑制GnRH mRNA、FSH mRNA、LH mRNA、ERβmRNA、PRA+B mRNA、AR mRNA的表达,其抑制效果与注射剂量与所处发情周期有关。（6）在体外,Ghrelin显着抑制孕酮、雌激素的分泌和ERβmRNA、PRA+B mRNA的表达。但对睾酮的分泌、AR mRNA的表达不起作用。结论:Ghrelin、GHS-R1a和Ghrelin mRNA在大鼠下丘脑、垂体和性腺上均有分布,Ghrelin通过与其受体相互作用,在中枢和外周水平上抑制大鼠促性腺激素和性腺激素的分泌和促性腺激素释放激素、促性腺激素和性腺激素受体基因的表达,且这种抑制作用受发情周期、剂量、性别的限制。
张佳卉[7]（2011）在《老年猕猴下丘脑、脾脏、生殖器官中NGF、ERs、AR、IL-2及IL-6表达的研究》文中提出目的：本实验研究了老年猕猴川西亚种下丘脑、脾脏、生殖器官中神经生长因子（Nerve growth factor, NGF）、雌激素受体α（Estrogen receptor alpha,ERα）、雌激素受体β（Estrogen receptor beta, ERβ）、白细胞介素2（Interleukin-2, IL-2）、白细胞介素6（Interleukin-6, IL-6）、雄激素受体（Androgen receptor, AR）蛋白的表达,探讨老年猕猴由性激素变化及性别差异致上述物质表达的变化规律。方法：运用免疫组化SABC法,对12只青、老年猕猴（雌雄各半）的下丘脑、脾脏、卵巢、睾丸中的NGF、ERα、ERβ, IL-2、IL-6、AR蛋白的表达及变化进行研究。结果：（1） NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR蛋白广泛分布于下丘脑各核团,主要定位于细胞胞核和突起,也少量存在于胞浆和胞膜中。与青年猕猴相比,老年猕猴NGF、ERα、ERβ、IL-2、AR的表达显着下降,而IL-6的变化显着升高,推测老年机体细胞免疫水平下降,体液免疫水平相对升高。（2）脾脏中广泛存在着NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR蛋白,其中红髓区及围绕在白髓的中央动脉周围存在大量阳性产物,而在白髓的脾小结外周及动脉周围淋巴鞘的外层阳性产物分布较少,表明NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR参与了脾脏以体液免疫调节功能为主的作用。以上6种物质在青年猕猴脾脏中的表达较老年猕猴多,证明了性激素的下降下调了NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR的表达。（3）NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR蛋白在卵巢和睾丸中均有分布,参与了生殖系统功能发挥的过程。老年猕猴NGF、ERα、ERβ、IL-2、AR含量的下降及IL-6含量的上升,均说明了性激素水平对以上6种物质具有重要的调节作用。（4）NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR在下丘脑及脾脏中表达存在性别差异,老年雌性猕猴下丘脑、脾脏中NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR蛋白表达低于雄性猕猴,推测是由于雄激素水平对下丘脑、脾脏的影响较雌激素小或雌性动物在进入老年期后雌激素水平显着下降,而雄性动物性腺衰老时间较雌性动物晚,且雄激素在芳羟化酶的作用下可转化为雌激素,从而对体内雌激素的含量有一定的补充等原因所致。（5）下丘脑、脾脏、卵巢和睾丸中可能存在NGF、ERα、ERβ、IL-2、IL-6、AR几种物质的共表达区域,且相互影响来调节它们在这几个组织器官中的共表达位点。以上6种物质相互影响相互作用,共同调节机体的神经—免疫—生殖内分泌网络。
张灵枝[8]（2010）在《山羊妊娠期卵巢组织形态及黄体中Ghrelin的表达研究》文中研究表明为了解不同妊娠阶段奶山羊卵巢黄体组织结构的周期变化规律,明确各时期黄体组成细胞的分型、各型的结构特征及不同时期的细胞学变化规律,本研究以妊娠421周龄的山羊卵巢为试验材料,运用常规组织学石蜡包埋-HE染色方法及透射电镜技术对不同妊娠时期山羊卵巢的组织结构进行详细观察,在此基础上,进一步运用免疫组织化学SP法对不同妊娠时期山羊黄体组织中ghrelin的定位及分布变化规律进行了研究,结合相应时期卵巢内分泌生理特点,探讨ghrelin在卵巢功能中的调节作用及在雌性动物生殖方面的功能意义。结果如下:1.妊娠黄体外包结缔组织被膜,被膜内伸形成小梁;黄体实质主要由粒性黄体细胞（大黄体细胞）和膜性黄体细胞（小黄体细胞）组成,前者数量多,主要位于黄体的中央部,后者数量较少,位于黄体的周边及少量散布于大黄体细胞之间。电镜研究结果表明,大黄体细胞与小黄体细胞的典型区别在于胞质中分泌颗粒和脂滴的分布,大黄体细胞胞质内两种物质的含量较小黄体细胞丰富。在整个妊娠时期均存在黄体细胞的退化现象,退化黄体细胞数量随妊娠进程逐渐增加;黄体细胞的结构退行性变化表现为:细胞形态多变,胞质呈强嗜酸性,胞核固缩或碎裂;电镜下可见细胞器发生变性,核内异染色质数量逐渐增多,后期核膜出现皱缩,线粒体嵴断裂、脱落,分泌颗粒数量减少、脂滴发生退化聚集,滑面内质网减少或消失,细胞质内空泡数量增多、细胞间隙加大。对妊娠前期、中期、后期卵巢组织中生长卵泡及闭锁卵泡的计数和统计分析显示,妊娠前期卵巢上的生长卵泡最多,中期变少,后期又开始增多,闭锁卵泡的数量则随妊娠进程逐渐减少。结果表明,黄体组织的形态结构随所处妊娠的不同阶段而变化,退化黄体细胞数量随周期进程逐渐增多;不同妊娠时期山羊卵巢黄体构型可影响生长卵泡和闭锁卵泡的数量。2. Ghrelin阳性反应主要位于被膜和黄体细胞,各阶段被膜上均存在ghrelin表达,主要为纤维及血管的着色;黄体内ghrelin主要定位于大黄体细胞,另外部分小细胞也有表达,从分布范围和染色强度看,随妊娠进程呈现出少—多—再渐少的变化趋势;通过对各周龄山羊黄体组织中ghrelin阳性产物相对表达量的分析,表明在妊娠早期,黄体组织内就有ghrelin的表达,而后随胚胎发育进程逐渐升高、至中期达最高,然后开始下降, 19周至最低。不同妊娠时期山羊黄体组织中ghrelin的这种周期性表达模式与黄体的功能相适应,提示ghrelin的表达与黄体的功能密切相关。
唐骏启[9]（2009）在《牛黄体细胞与C6胶质瘤细胞共培养及凋亡相关基因在大鼠黄体中的表达》文中研究指明为了探讨黄体细胞分泌物抑制肿瘤细胞增殖的可能性及机制,本研究建立黄体细胞培养模型,通过黄体细胞与C6胶质瘤细胞共培养以及给培养的C6胶质瘤细胞中分别添加OT、PG-Cl和5-HT的方法,观察黄体细胞及黄体分泌物对C6胶质瘤细胞增殖的影响;为了探讨黄体细胞凋亡相关基因表达变化,进一步研究黄体细胞的凋亡机理,本研究采用RT-PCR方法对SD大鼠不同期黄体p21、p53、K-ras和c-Myc mRNA的表达进行检测。主要结果如下:1.成功建立黑白花奶牛黄体细胞培养模型。牛黄体细胞组织块法培养效果较好,贴壁细胞数较多,消化法细胞贴壁数不多。2.成功建立SD大鼠黄体细胞培养模型。SD大鼠黄体细胞培养消化法效果较好,组织块法培养速度较慢。3. C6胶质瘤细胞与黑白花奶牛黄体细胞共培养后出现空泡化现象,存活率与时间和黄体细胞浓度呈负相关,提示C6胶质瘤细胞空泡化现象与黄体分泌物有关。4. OT可以抑制C6胶质瘤细胞增殖并引起C6胶质瘤细胞空泡化。PGF2α类似物PG-Cl可以抑制C6胶质瘤细胞增殖,但不引起C6胶质瘤细胞空泡化。5-HT对C6胶质瘤细胞增殖几乎没有影响。5. p21、p53、K-ras和c-Myc基因mRNA在SD大鼠黄体妊娠第5 d、15 d及分娩后第3 d（即第20 d）均有表达,不同时间表达量不同,p21从妊娠第5 d到分娩后第3 d先降后增,c-Myc略有降低;p53先增后降,且分娩后第3d下降幅度异常大,结果提示存在其他基因或机制抑制p53表达;K-ras表达一直升高,分娩后第3d增加幅度异常大。结论:牛黄体细胞分泌物对C6胶质瘤细胞增殖具有一定程度的抑制作用;OT、PGF2α的类似物PG-Cl可以抑制C6胶质瘤细胞增殖且OT能够引起C6胶质瘤细胞空泡化;p21和c-Myc mRNA在妊娠第5 d、15 d及分娩后第3 d（第20 d）变化幅度不大;p53先增后降,分娩后第3 d下降幅度异常大,提示有其他基因或机制抑制p53表达;K-ras表达一直升高,分娩后第3 d上调幅度异常大,提示K-ras在黄体退化中可能发挥重要作用。
龙敏[10]（2008）在《雌激素和γ-干扰素对去卵巢大鼠HPG轴中细胞凋亡的影响》文中研究指明下丘脑-垂体-性腺轴（Hypothalamic-Pituitary-gonad Axial, HPG轴）是机体重要的神经生殖调控轴。种类繁多、作用机制复杂的细胞因子、神经递质、激素及其受体之间的平衡是维持动物HPG轴神经免疫内分泌机能平衡的物质基础,其中任何物质表达失衡,都会打破HPG轴的平衡,引起一系列组织结构和功能的改变,进而引发细胞的衰老凋亡。为了探讨激素和细胞因子对HPG轴因雌激素缺乏所引起的组织功能改变和细胞衰老凋亡的调节作用,本试验拟通过建立去卵巢（OVX）大鼠模型,人为破坏HPG轴中神经-免疫-内分泌网络间的平衡状态,用免疫组织化学SP法来研究在这种病理状态下下丘脑和垂体中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况以及体外补充雌激素（Estrogen,E）和细胞因子γ-干扰素（Interferon-γ, IFN-γ）后对其表达的影响。主要结果如下:1.大鼠下丘脑中Bcl-2和Bax的表达:大鼠下丘脑视上核、室旁核、弓状核、下丘脑腹内侧核及乳头体内侧核等35个核团中均有Bcl-2和Bax免疫反应阳性产物的表达,主要在细胞膜、细胞质和核膜分布。去卵巢后,Bcl-2的相对表达量随时程逐渐减少,4周后最少,6周后又逐渐上升,并且维持在一定的水平;Bax则逐渐增加,4周后达峰值,与假手术（SHAM）组差异均显着（P<0.05）。给予外源性雌激素后,Bcl-2的相对表达量增加,与OVX组差异显着（P<0.05）;Bax的相对表达量在不同的核团出现不同程度的变化,在视上核、弓状核等核团Bax的相对表达量显着减少,与OVX差异显着（P<0.05）,而在室旁核、下丘脑腹内侧核等核团Bax的变化则不显着,与OVX相比P>0.05。雌激素联合200 IUγ-干扰素注射,各核团内Bcl-2的相对表达量较OVX组差异极显着（P<0.01）,与OVX+E2组差异显着（P<0.05）,与SHAM组相比,P>0.05;Bax的含量总体变化趋势与单独注射雌激素后一致,表达量减少的核团与OVX组相比,差异也极显着（P<0.01）;雌激素联合50 IU和800 IU的γ-干扰素,Bcl-2和Bax的相对表达量与OVX+E2差异不显着（P>0.05）。2.大鼠垂体内Bcl-2和Bax的表达:腺垂体和神经垂体内均有Bcl-2和Bax阳性细胞的表达,主要在细胞膜、细胞质着色,腺垂体内阳性产物明显较神经垂体内多,着色也深。去卵巢后,Bcl-2的表达减少,Bax增加,与SHAM组差异显着（P<0.05）。补充外源性雌激素后,Bcl-2较OVX组显着增加（P<0.05）,Bax显着减少（P<0.05）;雌激素联200IUγ-干扰素注射后,凋亡情况较单独注射雌激素有所改善,Bcl-2的表达较OVX组极显着增加（P<0.01）,Bax极显着减少（P<0.01）,两者与SHAM组差异均不显着（P>0.05）。50 IU/800 IU的γ-干扰素联合雌激素注射后凋亡情况与单独注射雌激素后差异不显着（P>0.05）。以上结果表明,雌激素缺乏状态下,下丘脑和垂体中的细胞对凋亡的敏感性增强,而外源性的生理剂量的雌激素与适当剂量的γ-干扰素对下丘脑神经元和垂体在一定时期内有重要的保护作用,可以调节Bcl-2和Bax蛋白的表达和两者的比例。
二、人卵巢中的神经垂体激素（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人卵巢中的神经垂体激素（论文提纲范文）
（1）蛋鸡退化卵泡衰退的机制及其功能的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 家禽卵泡发育的基本过程 |
| 1.1 家禽卵巢发育过程 |
| 1.2 家禽卵泡的形成 |
| 第二节 家禽的退化卵泡 |
| 2.1 排卵后卵泡(POF) |
| 2.1.1 POF的形成与退化 |
| 2.1.2 POF功能的概况 |
| 2.2 POF/黄体的比较生理学 |
| 2.2.1 鱼类的POF |
| 2.2.2 两栖类的POF |
| 2.2.3 爬行类的POF |
| 2.2.4 哺乳动物黄体的形成 |
| 2.2.5 哺乳动物黄体的退化机制 |
| 2.2.6 哺乳动物黄体的功能 |
| 2.3 闭锁卵泡 |
| 2.3.1 闭锁卵泡的形成及机理 |
| 2.3.2 颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要原因 |
| 2.3.3 自噬与卵泡闭锁 |
| 2.3.4 坏死与卵泡闭锁 |
| 第三节 调节家禽卵泡生长发育和闭锁的因素 |
| 3.1 胰岛素样生长因子 |
| 3.2 表皮生长因子 |
| 3.3 转化生长因子β超家族 |
| 3.3.1 TGFβ家族 |
| 3.3.2 抑制素/激活素家族 |
| 3.3.3 BMP家族 |
| 3.4 成纤维细胞生长因子家族 |
| 3.4.1 FGF1 |
| 3.4.2 FGF2/bFGF |
| 3.4.3 FGF7 |
| 3.4.4 FGF8 |
| 3.4.5 FGF9 |
| 3.4.6 FGF10 |
| 3.5 其它调节家禽卵泡生长发育和闭锁的因素 |
| 第四节 本研究的目的和内容 |
| 4.1 研究的目的和意义 |
| 4.2 研究的目标和内容 |
| 4.3 技术路线 |
| 第二章 凋亡与自噬活动参与蛋鸡POF的退化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 主要器材 |
| 2.2.3 主要试剂及配制 |
| 2.2.4 组织采集 |
| 2.2.5 石蜡切片制作和HE形态学观察 |
| 2.2.6 冰冻切片制作 |
| 2.2.7 免疫荧光染色 |
| 2.2.8 油红O染色 |
| 2.2.9 TUNEL检测 |
| 2.2.10 透射电镜和细胞超微结构观察 |
| 2.2.11 P4水平测定 |
| 2.2.12 RNA提取 |
| 2.2.13 cDNA合成 |
| 2.2.14 RT-PCR和qRT-PCR |
| 2.2.15 WB分析 |
| 2.2.16 数据统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 POF的形态学观察 |
| 2.3.2 POF颗粒层的鉴定 |
| 2.3.3 POF6的空泡样细胞是由脂肪样变性导致 |
| 2.3.4 POF的脂肪样变性开始于POF3 |
| 2.3.5 POF退化过程中P_4合成关键酶在mRNA的表达水平变化 |
| 2.3.6 POF退化过程中CYP11A1的表达水平变化 |
| 2.3.7 POF退化过程中P_4分泌水平变化 |
| 2.3.8 POF退化过程中caspase-3表达量的变化 |
| 2.3.9 POF退化过程中颗粒层的退化速度慢于膜层的退化速度 |
| 2.3.10 GRP78和BCL2主要表达于POF的颗粒细胞之上 |
| 2.3.11 POF颗粒细胞退化过程中内质网和线粒体发生不同程度的退行性变化 |
| 2.3.12 POF3经历最大程度的内质网应激和线粒体凋亡 |
| 2.3.13 POF膜层的退化可能与Beclin1介导的自噬有关 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 POF通过PGE_2-EP2信号促进蛋鸡等级前卵泡生长 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 主要器材 |
| 3.2.3 主要试剂及配制 |
| 3.2.4 POF的培养 |
| 3.2.5 POF与SWF共培养 |
| 3.2.6 POF颗粒细胞的分离培养 |
| 3.2.7 POF的颗粒细胞与SWF共培养 |
| 3.2.8 SWF的培养与药物的处理 |
| 3.2.9 石蜡切片制作和HE形态学观察 |
| 3.2.10 免疫组织化学染色 |
| 3.2.11 BrdU的染色方法 |
| 3.2.12 RNA提取、cDNA合成及RT-PCR和qRT-PCR |
| 3.2.13 WB分析 |
| 3.2.14 ELISA的方法检测PGE_2和PGF_(2α)水平 |
| 3.2.15 数据分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 POF体外培养模型的建立 |
| 3.3.2 POF1促进SWF外膜层的增殖 |
| 3.3.3 POF颗粒细胞的分离与鉴定 |
| 3.3.4 POF1颗粒细胞能促进SWF外膜层增殖 |
| 3.3.5 POF具有分泌前列腺素的能力 |
| 3.3.6 PGE_2能促进SWF外膜层的增殖 |
| 3.3.7 POF1通过分泌PGE2促进SWF外膜层的增殖 |
| 3.3.8 POF通过PGE_2-EP2信号促进SWF外膜层的增殖 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 蛋鸡等级前卵泡生长发育和闭锁相关基因的初筛 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 主要器材 |
| 4.2.3 主要试剂及配制 |
| 4.2.4 组织采集 |
| 4.2.5 石蜡切片制作和形态学观察 |
| 4.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR |
| 4.2.7 数据分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 等级前卵泡与闭锁的等级前卵泡形态学观察 |
| 4.3.2 SYF与ASYF凋亡和抗凋亡基因表达的变化 |
| 4.3.3 SYF与ASYF紧密连接相关基因表达的变化 |
| 4.3.4 SYF与ASYF类固醇激素和前列腺素合成酶相关基因表达的变化 |
| 4.3.5 SYF与ASYF激素受体相关基因表达的变化 |
| 4.3.6 SYF与ASYF细胞因子受体相关基因表达的变化 |
| 4.3.7 SWF与SYF细胞因子受体相关基因表达的变化 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 bFGF促进蛋鸡等级前卵泡生长发育与卵黄沉积机制的研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 主要器材 |
| 5.2.3 主要试剂及配制 |
| 5.2.4 SWF的培养与药物的处理 |
| 5.2.5 石蜡切片制作和免疫荧光染色 |
| 5.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR |
| 5.2.7 BrdU掺入及检测 |
| 5.2.8 WB分析 |
| 5.2.9 数据分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 VLDLR在蛋鸡等级前卵泡与等级卵泡中表达的变化 |
| 5.3.2 bFGF通过FGFR1-AKT信号促进SWF外膜层增殖 |
| 5.3.3 bFGF通过促进卵泡膜层的血管生成调节等级前卵泡卵黄沉积 |
| 5.3.4 bFGF通过抑制卵泡颗粒层VLDLR的表达调节等级前卵泡卵黄沉积 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 提示和创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）高原甘加藏羊发情周期下丘脑GnRH的动态分泌及其受体在垂体和卵巢中表达（论文提纲范文）
| 缩略词表(Abbreviations) |
| 摘要 |
| Summary |
| 第一部分 研究背景和研究的意义 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 藏羊类型及生活习性 |
| 1.2 下丘脑的结构和功能 |
| 1.3 垂体的结构及功能 |
| 1.4 下丘脑-垂体-卵巢轴对生殖生理的调控机理 |
| 1.5 GnRH和GnRHR的研究 |
| 1.5.1 GnRH的结构及生物学功能 |
| 1.5.2 GnRH的分布 |
| 1.5.3 GnRHR的结构和类型 |
| 1.5.4 GnRHR细胞的分布 |
| 1.5.5 GnRH对GnRHR的调节 |
| 1.6 发情周期的划分鉴定 |
| 1.7 GnRHR在垂体和卵巢的研究 |
| 2 研究的目的和意义 |
| 第二部分 高原甘加藏羊发情周期下丘脑GnRH分泌的动态变化规律 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物与样品采集 |
| 1.2 试剂及主要仪器 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 主要仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 血浆样品的处理 |
| 1.3.2 血浆中GnRH含量的测定 |
| 1.3.3 试验数据的统计分析处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 高原甘加藏羊发情期和发情后期血浆中GnRH含量的变化 |
| 2.2 甘加藏羊间情期和发情前期血浆GnRH含量变化 |
| 2.3 甘加藏羊发情周期不同阶段血浆GnRH分泌 |
| 3 讨论 |
| 3.1 甘加藏羊发情周期不同阶段下丘脑GnRH的动态分泌变化的规律 |
| 3.2 甘加藏羊发情周期下丘脑GnRH的分泌对生殖激素分泌的调节 |
| 3.3 下丘脑分泌GnRH激素在动物繁殖活动中的应用 |
| 第三部分 高原甘加藏羊发情周期垂体和卵巢GnRHRmRNA表达规律的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物和样品采集 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 主要仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 高原甘加藏羊垂体和卵巢总RNA提取 |
| 1.3.2 总RNA的检测 |
| 1.3.3 cDNA链合成 |
| 1.3.4 实时荧光定量PCR |
| 1.3.5 RT-PCR法测定垂体和卵巢中GnRHR基因的相对表达量 |
| 1.4 数据处理与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 总RNA纯度和完整性 |
| 2.2 高原甘加藏羊垂体和卵巢组织中GnRHR基因的表达量检测 |
| 2.3 高原甘加藏羊垂体和卵巢GnRHR和GAPDH基因表达分析 |
| 2.4 高原甘加藏羊发情周期不同阶段垂体和卵巢组织中GnRHRmRNA的表达量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 高原甘加藏羊发情周期垂体组织中GnRHRmRNA表达变化规律 |
| 3.2 高原甘加藏羊发情周期卵巢中GnRHRmRNA表达的变化规律 |
| 3.3 高原甘加藏羊发情周期垂体和卵巢中GnRHRmRNA表达的相互关系 |
| 3.4 GnRHR基因与动物繁殖率的关系 |
| 第四部分 高原甘加藏羊发情周期垂体和卵巢GnRHR细胞分布表达研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物与样品采集 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.2.2 主要仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 载玻片预处理 |
| 1.3.2 兔抗羊GnRHR多克隆抗体稀释 |
| 1.3.3 石蜡组织切片制备 |
| 1.3.4 免疫组织化学(SP)染色 |
| 1.3.5 阴性对照 |
| 1.3.6 苏木精-伊红(HE)染色法 |
| 1.4 垂体和卵巢组织形态观察 |
| 1.5 图像分析和数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 高原甘加藏羊发情周期垂体结构特点 |
| 2.2 高原甘加藏羊发情周期垂体中GnRHR细胞分布 |
| 2.2.1 高原甘加藏羊发情周期垂体组织中GnRHR免疫阳性细胞的分布 |
| 2.2.2 高原甘加藏羊发情周期垂体中GnRHR免疫阳性产物表达量 |
| 2.3 高原甘加藏羊发情周期卵巢组织结构特点 |
| 2.4 高原甘加藏羊发情周期卵巢组织中GnRHR细胞分布 |
| 2.4.1 高原甘加藏羊发情周期卵巢GnRHR免疫产物阳性细胞分布 |
| 2.4.2 高原甘加藏羊发情周期卵巢GnRHR免疫阳性产物表达量 |
| 3 讨论 |
| 3.1 高原甘加藏羊发情周期GnRHR细胞在垂体中的分布 |
| 3.2 高原甘加藏羊发情周期各阶段GnRHR细胞在卵巢中的分布 |
| 3.3 GnRHR分布表达与下丘脑-垂体-卵巢轴的关系 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（3）小鼠和山羊性成熟前卵巢卵泡发育与雌激素受体表达及其调控研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 下丘脑-垂体-卵巢轴在生殖中的作用 |
| 1.1 下丘脑-垂体-卵巢轴 |
| 1.2 下丘脑-垂体-卵巢轴的调控 |
| 2 雌激素研究进展 |
| 2.1 |
| 2.1.1 雌激素 |
| 2.1.2 雌激素的作用机制 |
| 2.2 |
| 2.2.1 雌激素受体 |
| 2.2.2 雌激素受体的结构(特点) |
| 2.2.3 雌激素受体在组织中的分布 |
| 2.2.4 雌激素受体在卵巢不同细胞中的定位与功能 |
| 3 FSH、LH 的概括 |
| 3.1 L H 和 FSH 的来源 |
| 3.2 L H 和 FSH 的生物学特性 |
| 4 发情周期激素的调节 |
| 5 卵泡发育 |
| 5.1 卵泡的分类 |
| 5.2 卵泡选择的调控 |
| 5.3 卵泡优势化的调控 |
| 5.4 优势卵泡成熟、排卵或闭锁的调控 |
| 5.5 卵巢激素及其它生长因子对卵泡发育的调节 |
| 6 实时定量 PCR（Real Time PCR） |
| 6.1 荧光嵌合法（SYBR GreenⅠ）的原理 |
| 6.2 荧光探针法的原理 |
| 6.3 实时定量 PCR 技术应用的研究进展 |
| 7 本研究的目的和意义 |
| 实验研究 |
| 8 小鼠性成熟前卵巢卵泡发育与雌激素分泌及其受体分布表达规律的研究 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.1.1 材料 |
| 8.1.1.1 主要试剂、仪器及其来源 |
| 8.1.1.2 主要试剂的配制 |
| 8.1.2 试验方法 |
| 8.1.2.1 样品采集 |
| 8.1.2.1.1 小鼠性成熟判断 |
| 8.1.2.1.2 采集样品 |
| 8.1.2.2 石蜡切片标本制备 |
| 8.1.2.3 冰冻切片标本制作 |
| 8.1.2.4 H E 染色 |
| 8.1.2.5 免疫组织化学染色 |
| 8.1.2.5.1 石蜡切片免疫组化试验步骤 |
| 8.1.2.5.2 冰冻切片免疫组化试验步骤 |
| 8.1.2.6 血清雌激素检测 |
| 8.1.2.7 图像分析 |
| 8.1.2.8 数据处理 |
| 8.2 结果与分析 |
| 8.2.1 性成熟前与性成熟小鼠血液雌激素浓度变化 |
| 8.2.2 性成熟前后小鼠卵泡发育的动态变化 |
| 8.2.3 小鼠性成熟前后卵巢内两种亚型雌激素受体的分布 |
| 8.2.4 小鼠性成熟前后卵巢内两种亚型雌激素受体的含量变化 |
| 8.3 小结 |
| 9 山羊卵巢雌激素受体定量表达检测方法的建立及其条件优化 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.1.1 主要试剂、仪器 |
| 9.1.2 试验前的准备 |
| 9.1.3 试验方法 |
| 9.1.3.1 样品来源 |
| 9.1.3.2 卵巢组织总 RNA 的提取 |
| 9.1.3.3 RNA 质量的鉴定 |
| 9.1.3.4 PCR 预试验 |
| 9.1.3.4.1 cDNA 的合成 |
| 9.1.3.4.2 PCR 温度及优化 |
| 9.1.3.4.3 阳性对照和阴性对照 |
| 9.1.3.5 荧光定量 PCR 检测 |
| 9.1.3.5.1 cDNA 的合成 |
| 9.1.3.5.2 实时荧光定量 PCR 扩增 |
| 9.2 结果与分析 |
| 9.2.1 对波尔山羊和沂蒙黑山羊α、β雌激素受体 PCR 扩增效果 |
| 9.2.2 最佳引物 |
| 9.2.3 PCR 反应条件的优化 |
| 9.2.4 荧光定量反应条件 |
| 9.3 小结 |
| 10 性成熟前和性成熟山羊卵巢卵泡发育规律和雌激素受体表达差异性比较 |
| 10.1 材料与方法 |
| 10.1.1 材料 |
| 10.1.2 方法 |
| 10.1.2.1 总 RNA 提取 |
| 10.1.2.2 反转录体系 |
| 10.1.2.3 PCR 检测 |
| 10.1.2.4 荧光定量 PCR 检测 |
| 10.1.2.5 结果统计分析 |
| 10.1.2.6 石蜡切片标本制备 |
| 10.1.2.7 HE 染色 |
| 10.2 结果 |
| 10.2.1 山羊卵巢组织形态学研究 |
| 10.2.2 性成熟前后波尔山羊和沂蒙黑山羊α、β雌激素受体表达检测结果 |
| 10.3 分析 |
| 10.4 小结 |
| 11 小鼠性成熟前卵泡发育与雌激素受体表达的调控研究 |
| 11.1 材料与方法 |
| 11.1.1 试验材料 |
| 11.1.1.1 试验材料的选取 |
| 11.1.1.2 主要试剂和仪器 |
| 11.1.2 试验方法 |
| 11.1.2.1 血清雌激素检测 |
| 11.1.2.2 卵巢组织发育及细胞定位分析 |
| 11.1.2.3 卵巢雌激素受体分析 |
| 11.1.2.4 图像分析 |
| 11.1.2.5 小鼠性成熟判断 |
| 11.1.2.6 数据处理 |
| 11.2 结果与分析 |
| 11.2.1 E_2、FSH 和 LH 对性成熟前小鼠卵巢卵泡发育的影响 |
| 11.2.2 E_2、FSH 和 LH 对性成熟前小鼠卵巢卵泡内雌激素受体的影响 |
| 11.2.3 E_2、FSH 和 LH 对性成熟前小鼠卵巢成熟卵泡亚细胞内雌激素受体分布的影响 |
| 11.2.4 E_2、FSH 和 LH 对性成熟前小鼠血液雌激素含量的影响 |
| 11.2.5 E_2、FSH 和 LH 对性成熟前小鼠卵巢卵泡雌激素受体表达的影响 |
| 11.3 小结 |
| 12 讨论 |
| 12.1 性成熟前小鼠和山羊卵泡发育组织形态发育规律 |
| 12.2 性成熟前小鼠和山羊雌激素受体发育规律 |
| 12.3 卵泡发育的调控 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）催产素对牛黄体细胞中突触素表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 黄体的研究进展 |
| 1.1 黄体的细胞类型 |
| 1.2 不同时期黄体的形态结构的改变 |
| 1.3 黄体的功能及调节 |
| 1.3.1 激素对黄体功能的调节 |
| 1.3.2 细胞因子对黄体功能的调节 |
| 1.3.3 细胞外基质对黄体功能的调节 |
| 1.3.4 其他物质对黄体功能的调节 |
| 1.4 黄体的退化 |
| 1.4.1 功能性退化 |
| 1.4.2 结构性退化 |
| 1.4.3 黄体的退化机制 |
| 第二章 突触素的研究现状 |
| 2.1 突触素的性质 |
| 2.2 突触素的分布 |
| 2.3 突触素的表达与各种疾病的关系 |
| 2.4 突触素的生理作用及实际应用 |
| 2.4.1 参与神经递质释放 |
| 2.4.2 作为神经发育及突触密度的标记物 |
| 2.4.3 作为神经内分泌细胞或肿瘤的标记物 |
| 2.4.4 突触素可广泛应用于研究动物模型及人类疾病的突触发生 |
| 2.5 展望 |
| 第三章 催产素的研究进展 |
| 3.1 OT 的合成与分泌 |
| 3.1.1 卵巢中的 OT |
| 3.1.2 睾丸中的 OT |
| 3.1.3 子宫及胎盘中的 OT |
| 3.1.4 其他器官中的 OT |
| 3.2 OT 受体 |
| 3.3 对 OT 及其受体的调节 |
| 3.4 OT 功能 |
| 3.4.1 在卵巢中发挥的作用 |
| 3.4.2 对学习、记忆的影响 |
| 3.4.3 对消化系统的影响 |
| 3.4.4 对运动系统的影响 |
| 3.4.5 参与痛觉调控 |
| 3.4.6 其他 |
| 3.5 展望 |
| 试验研究 |
| 第四章 牛黄体中突触素 mRNA 的表达 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 主要仪器设备及试剂 |
| 4.1.3 原位杂交操作流程 |
| 4.1.4 RNA 提取 |
| 4.1.5 RT-PCR |
| 4.1.6 胶回收并测序 |
| 4.1.7 显微摄影及图像分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 RT-PCR |
| 4.2.2 测序结果 |
| 4.2.3 原位杂交 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 不同妊娠时期牛黄体中突触素及其 mRNA 的表达 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 主要仪器设备及试剂 |
| 5.1.3 免疫组织化学 SP 法染色程序 |
| 5.1.4 RNA 提取 |
| 5.1.5 RT-PCR |
| 5.1.6 显微观察、拍照及图像分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 不同妊娠期黄体中 SYP 的表达情况 |
| 5.2.2 不同妊娠期黄体中 SYP mRNA 的表达情况 |
| 5.2.3 不同妊娠期黄体中 SYP 相对表达量及差异性分析 |
| 5.2.4 不同妊娠期黄体中 SYP mRNA 相对表达量及差异性分析 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 牛黄体细胞和颗粒细胞的培养及鉴定 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 主要仪器设备、试剂及其配制 |
| 6.1.2 试验材料 |
| 6.1.3 黄体细胞的原代培养 |
| 6.1.4 颗粒细胞的原代培养 |
| 6.1.5 传代培养 |
| 6.1.6 细胞鉴定 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 黄体细胞的培养 |
| 6.2.2 颗粒细胞的培养 |
| 6.2.3 黄体细胞和颗粒细胞的鉴定 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 催产素对牛黄体细胞中突触素表达的影响 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 主要仪器设备、试剂及其配制 |
| 7.1.2 黄体细胞的原代培养、传代培养及不同浓度 OT 处理 |
| 7.1.3 MTT 法测细胞活力 |
| 7.1.4 RT-PCR |
| 7.1.5 Western Blot |
| 7.1.6 不同浓度催产素对黄体细胞孕酮分泌的影响 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 MTT 法测细胞活力 |
| 7.2.2 RT-PCR |
| 7.2.3 Western Blot |
| 7.2.4 孕酮浓度变化 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）Ghrelin对大鼠下丘脑—垂体—性腺的影响及其机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 目录 |
| 缩略词 |
| 文献综述 Ghrelin 与生殖的研究进展 |
| 1 Ghrelin 的发现背景及命名 |
| 2 Ghrelin 及其受体的分子结构 |
| 2.1 Ghrelin 的分子结构 |
| 2.2 Ghrelin 受体GHS-R 的分子结构 |
| 3 Ghrelin 在体内的分布 |
| 4 Ghrelin 的生理功能 |
| 4.1 调节生长素的分泌 |
| 4.2 调节胃肠道功能 |
| 4.3 调节摄食和能量代谢 |
| 4.4 调节心血管系统功能 |
| 4.5 对生殖的调节作用 |
| 4.5.1 调节激素分泌 |
| 4.5.2 对生殖细胞的调节 |
| 4.5.3 调节胚胎发育 |
| 4.5.4 调节动物发情 |
| 研究论文 Ghrelin 对大鼠下丘脑-垂体-性腺的影响及其机理研究 |
| 引言 |
| 第一章 Ghrelin 及其功能性受体GHS-R_(1a)在大鼠下丘脑-垂体-性腺上的定位 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验动物处理 |
| 1.2.2 组织切片制作 |
| 1.2.3 免疫组织化学步骤 |
| 1.2.4 观察并拍照 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ghrelin 在下丘脑-垂体-性腺轴上的定位 |
| 2.1.1 Ghrelin 在下丘脑上的定位 |
| 2.1.2 Ghrelin 在垂体上的定位 |
| 2.1.3 Ghrelin 在睾丸上的定位 |
| 2.1.4 Ghrelin 在卵巢上的定位 |
| 2.2 GHS-R_(1a) 在大鼠下丘脑-垂体-性腺轴上的定位 |
| 2.2.1 GHS-R_(1a) 在下丘脑上的定位 |
| 2.2.2 GHS-R_(1a) 在垂体上的定位 |
| 2.2.3 GHS-R_(1a) 在卵巢上的定位 |
| 2.2.4 GHS-R_(1a) 在睾丸上的定位 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 关于Ghrelin 在下丘脑、垂体、性腺中的分布 |
| 3.2 关于Ghrelin 受体在下丘脑、垂体、性腺中的分布 |
| 4 小结 |
| 第二章 Ghrelin mRNA 在大鼠下丘脑-垂体-性腺上的表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验动物处理 |
| 1.2.2 组织切片制作 |
| 1.2.3 地高辛标记的Ghrelin 寡核苷酸探针序列 |
| 1.2.4 切片的原位杂交检测 |
| 1.2.5 观察并拍照 |
| 2 结果 |
| 2.1 Ghrelin mRNA 在大鼠下丘脑上的表达 |
| 2.2 Ghrelin mRNA 在大鼠脑垂体上的定位 |
| 2.3 Ghrelin mRNA 在大鼠睾丸上的表达 |
| 2.4 Ghrelin mRNA 在大鼠卵巢上的表达 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 关于Ghrelin mRNA 在下丘脑中的表达 |
| 3.2 关于Ghrelin mRNA 在垂体中的表达 |
| 3.3 关于Ghrelin mRNA 在睾丸中的表达 |
| 3.4 关于Ghrelin mRNA 在卵巢中的表达 |
| 4 小结 |
| 第三章 Ghrelin 及其受体mRNA 在不同发情周期中的表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.1.5 组织取材 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 大鼠发情各阶段的阴道组织涂片观察 |
| 1.2.2 总RNA 的提取 |
| 1.2.3 RNA 完整性检测 |
| 1.2.4 RNA 浓度和纯度测定 |
| 1.2.5 引物的设计与合成 |
| 1.2.6 逆转录 |
| 1.2.7 实时荧光定量PCR |
| 1.2.8 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 标准曲线与溶解曲线 |
| 2.2 Ghrelin mRNA、GHS-R_(1a) mRNA 在下丘脑上的表达 |
| 2.3 Ghrelin mRNA、GHS-R_(1a) mRNA 在脑垂体上的表达 |
| 2.4 Ghrelin mRNA、GHS-R_(1a) mRNA 在卵巢上的表达 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 Ghrelin mRNA 在生殖轴中的表达 |
| 3.2 GHS-R_(1a) mRNA 在生殖轴中的表达 |
| 4 小结 |
| 第四章 侧脑室注射Ghrelin 对大鼠促性腺激素和性腺激素分泌的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 试验动物的分组与处理 |
| 1.2.2 大鼠的侧脑室注射 |
| 1.2.3 血样的采集 |
| 1.2.4 促性腺激素的测定 |
| 1.2.5 性腺激素的测定 |
| 1.2.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同剂量Ghrelin 侧脑室注射对成年雄性大鼠LH、FSH、T 分泌的影响 |
| 2.1.1 对LH 的影响 |
| 2.1.2 对FSH 的影响 |
| 2.1.3 对T 的影响 |
| 2.2 不同剂量Ghrelin 侧脑室注射对发情后期雌性大鼠LH、FSH、E_2、P_4 分泌的影响 |
| 2.2.1 对LH 的影响 |
| 2.2.2 对FSH 的影响 |
| 2.2.3 对E_2 的影响 |
| 2.2.4 对P_4 的影响 |
| 2.3 111mol Ghrelin 侧脑室注射对不同发情周期雌性大鼠LH、FSH 分泌的影响 |
| 2.3.1 对LH 的影响 |
| 2.3.2 对FSH 的影响 |
| 2.4 3 nmol Ghrelin 侧脑室注射对不同发情周期雌性大鼠E_2、P_4 分泌的影响 |
| 2.4.1 对E_2 的影响 |
| 2.4.2 对P_4 的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 Ghrelin 对促性腺激素分泌的影响 |
| 3.2 Ghrelin 大鼠性腺激素分泌的影响 |
| 4 小结 |
| 第五章 侧脑室注射 Ghrelin 对大鼠促性腺激素释放激素、促性腺激素mRNA、性腺激素受体mRNA 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.1.5 组织取材 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 总RNA 的提取 |
| 1.2.2 RNA 完整性检测 |
| 1.2.3 RNA 浓度和纯度测定 |
| 1.2.4 逆转录方法 |
| 1.2.5 引物设计 |
| 1.2.6 实时荧光定量PCR |
| 1.2.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 标准曲线与溶解曲线 |
| 2.2 侧脑室注射 Ghrelin (1nmol)对不同发情周期雌性大鼠GnRH mRNA 表达的影响 |
| 2.3 侧脑室注射Ghrelin（1nmol）对不同发情周期雌性大鼠LH、FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.3.1 对LH mRNA 表达的影响 |
| 2.3.2 对FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.4 不同剂量 Ghrelin 侧脑室注射对发情后期雌性大鼠 LH、FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.4.1 对LH mRNA 表达的影响 |
| 2.4.2 对FSH mRNA 表达的影响 |
| 2.5 侧脑室注射Ghrelin 对不同发情周期大鼠ER_β、PR_(A+B) mRNA 表达的影响 |
| 2.5.1 对ER_βmRNA 表达的影响 |
| 2.5.2 对PR_(A+B) mRNA 表达的影响 |
| 2.6 不同剂量的 Ghrelin 侧脑室注射对发情后期大鼠对卵巢 ER_β、PR_(A+B) mRNA 表达的影响 |
| 2.6.1 对ER_βmRNA 表达的影响 |
| 2.6.2 对PR_(A+B)mRNA 表达的影响 |
| 2.7 侧脑室注射不同剂量的 Ghrelin 对雄性大鼠ARmRNA.表达的影响 |
| 2.8 侧脑室注射Ghrelin，大鼠垂体促性腺激素mRNA 表达丰度与血清促性腺激素浓度的相关性分析 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 侧脑室注射 Ghrelin 对促性腺激素释放激素mRNA 表达的影响 |
| 3.2 侧脑室注射Ghrelin 对促性腺激素mRNA 表达的影响 |
| 3.3 侧脑室注射Ghrelin 对性腺激素受体mRNA 表达的影响 |
| 4 小结 |
| 第六章 Ghrelin 在体外对大鼠性腺激素分泌及其受体mRNA 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 溶液的配制 |
| 1.1.4 主要仪器设备 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 性腺激素的测定 |
| 1.2.2 实时定量PCR 试验部分 |
| 1.2.3 细胞的制备与培养 |
| 1.2.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同浓度的Ghrelin 对孕酮、雌激素分泌的影响 |
| 2.1.1 对P_4 的影响 |
| 2.1.2 对E_2 的影响 |
| 2.2 不同浓度的Ghrelin 对睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 2.3 不同浓度的Ghrelin 对PR_(A+B) mRNA、ER_βmRNA 表达的影响 |
| 2.3.1 对PR_(A+B) mRNA 的影响 |
| 2.3.2 对ER_βmRNA 的影响 |
| 2.4 不同浓度的Ghrelin 对睾丸间质细胞AR mRNA 表达的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 体外条件下Ghrelin 对E_2、P_4、T 分泌的影响 |
| 3.2 体外条件下Ghrelin 对ER_βmRNA、PR_(A+B) mRNA、AR mRNA 表达的影响 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 本课题的创新点和对课题的进一步设想 |
| 1. 从分子角度进一步阐明 Ghrelin 及其受体在大鼠精母细胞、卵母细胞中的表达 规律, |
| 2. GHS-R_(1b) 以及其它亚型的主要生理功能 |
| 3. Ghrelin 对生殖轴的作用机理有待于进一步探索 |
| 4. Ghrelin 在家畜体内的分布和表达，从而为畜牧业生产提供理论指导 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 读期间发表论文 |
（7）老年猕猴下丘脑、脾脏、生殖器官中NGF、ERs、AR、IL-2及IL-6表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 文献综述 |
| 1 神经—免疫—内分泌系统的研究进展 |
| 1.1 神经系统与免疫系统间的相互关系 |
| 1.1.1 神经系统对免疫系统的调节 |
| 1.1.2 免疫系统对神经系统的作用 |
| 1.2 生殖内分泌系统与免疫系统间的相互关系 |
| 1.2.1 免疫系统对生殖内分泌系统的影响 |
| 1.2.2 生殖内分泌系统对免疫系统的作用 |
| 1.3 神经系统与内分泌系统的相互关系 |
| 1.3.1 神经系统对内分泌系统的调节 |
| 1.3.2 内分泌系统对神经系统的控制 |
| 2 选题意义 |
| 实验内容 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 仪器设备 |
| 1.1.3 试剂及配置 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验动物的取材 |
| 1.2.2 脾脏、睾丸、卵巢中ER_α、ER_β、NGF、IL-2、IL-6、AR蛋白的测定 |
| 1.2.3 下丘脑中ER_α、ER_β、NGF、IL-2、IL-6、AR蛋白的测定 |
| 1.2.4 显微拍照、图像分析及数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在下丘脑的表达及变化 |
| 2.1.1 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在下丘脑中分布的特点 |
| 2.1.2 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在青年、老年猕猴下丘脑中分布特点的比较 |
| 2.1.3 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在老年雌、雄性猕猴下丘脑中分布特点的比较 |
| 2.2 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在脾脏的表达及变化 |
| 2.2.1 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在脾脏中分布的特点 |
| 2.2.2 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在青年、老年猕猴脾脏中分布特点的比较 |
| 2.2.3 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在老年雌、雄性猕猴脾脏中分布特点的比较 |
| 2.3 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在卵巢、睾丸的表达及变化 |
| 2.3.1 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在卵巢、睾丸中分布的特点 |
| 2.3.2 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在青年、老年睾丸、卵巢中分布特点的比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在下丘脑中的分布 |
| 3.2 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在青年、老年猕猴下丘脑中分布特点的比较 |
| 3.3 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在老年雌、雄性猕猴下丘脑中分布特点的比较 |
| 3.4 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在脾脏中的分布 |
| 3.5 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在青年、老年猕猴脾脏中分布特点的比较 |
| 3.6 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在老年雌、雄性猕猴脾脏中分布特点的比较 |
| 3.7 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在卵巢、睾丸中的分布 |
| 3.8 NGF、ER_α、ER_β、IL-2、IL-6、AR蛋白在青年、老年猕猴卵巢、睾丸中分布特点的比较 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）山羊妊娠期卵巢组织形态及黄体中Ghrelin的表达研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 哺乳动物卵巢黄体的形态学研究进展 |
| 1.1 卵巢卵泡的解剖组织学特点 |
| 1.1.1 卵巢的解剖学特点 |
| 1.1.2 卵泡的发育和分布 |
| 1.2 黄体的形成及其组织形态学 |
| 1.2.1 黄体概念的形成 |
| 1.2.2 黄体起源的早期研究 |
| 1.2.3 黄体的形成与发育 |
| 1.2.4 新腺体的发生：来自排卵卵泡的残余物的结构变化 |
| 1.3 黄体的退化、溶解 |
| 1.3.1 黄体功能性退化 |
| 1.3.2 黄体结构性退化 |
| 1.4 黄体的功能 |
| 1.4.1 黄体类固醇生成 |
| 1.4.2 激素调节 |
| 1.5 今后的研究方向 |
| 第二章 Ghrelin 与哺乳动物生殖调节 |
| 2.1 Ghrelin 及其受体 |
| 2.2 Ghrelin 及其受体的分布 |
| 2.2.1 Ghrelin 的肠道分布 |
| 2.2.2 Ghrelin 在其他组织中的分布 |
| 2.2.3 Ghrelin 受体的分布 |
| 2.3 Ghrelin 的调控 |
| 2.4 Ghrelin 的生物学效应及作用 |
| 2.4.1 Ghrelin 在生殖轴上的作用 |
| 2.4.2 Ghrelin 对内分泌系统的影响 |
| 2.4.3 Ghrelin 对心血管系统的作用 |
| 2.4.4 Ghrelin 与肥胖的关系 |
| 2.4.5 Ghrelin 与肿瘤的关系 |
| 2.5 Ghrelin 应用前景及展望 |
| 第三章 奶山羊妊娠黄体的组织形态研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 |
| 3.1.3 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 妊娠期奶山羊卵巢的形态学特点 |
| 3.2.2 奶山羊妊娠黄体半超薄切片观察结果 |
| 3.2.3 奶山羊妊娠黄体的超微结构观察 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 山羊妊娠黄体的结构特点 |
| 3.3.2 不同妊娠阶段黄体结构与卵泡生长发育的关系 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 山羊妊娠黄体组织中 Ghrelin 的表达 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂和主要仪器设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 样本采集 |
| 4.2.2 组织制片和染色 |
| 4.2.3 显微摄像、图像分析及数据处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 奶山羊妊娠卵巢黄体组织中Ghrelin 的表达特点 |
| 4.3.2 奶山羊妊娠黄体组织中 Ghrelin 阳性产物表达的灰度值分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）牛黄体细胞与C6胶质瘤细胞共培养及凋亡相关基因在大鼠黄体中的表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 哺乳动物黄体研究进展 |
| 1.1 排卵与黄体 |
| 1.1.1 卵巢和卵泡 |
| 1.1.2 排卵与黄体 |
| 1.2 黄体的发生 |
| 1.2.1 黄体中血管的发生 |
| 1.2.2 黄体中的血管新生因子 |
| 1.2.3 黄体的形成过程中的分子生物学变化 |
| 1.3 黄体细胞组织学特点 |
| 1.4 黄体退化 |
| 1.4.1 黄体退化的一般过程 |
| 1.4.2 黄体退化与黄体细胞凋亡 |
| 1.5 黄体分泌物质 |
| 1.5.1 OT |
| 1.5.2 GnRH |
| 1.5.3 PG |
| 1.5.4 5-HT |
| 1.6 黄体细胞凋亡的相关基因概况 |
| 1.6.1 c-Myc |
| 1.6.2 p53 |
| 1.6.3 Ras 基因 |
| 1.6.4 p21 |
| 实验研究 |
| 第二章 黄体细胞培养模型的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 |
| 2.1.3 牛黄体细胞培养模型的建立 |
| 2.1.4 大鼠黄体细胞培养模型的建立 |
| 2.1.5 黄体细胞的鉴定 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 牛黄体细胞培养模型的建立 |
| 2.2.2 SD 大鼠黄体细胞培养模型的建立 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 牛黄体细胞与C6 胶质瘤细胞共培养的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 |
| 3.1.3 牛黄体细胞、C6 胶质瘤细胞和人胚肾细胞单独培养 |
| 3.1.4 细胞共培养研究 |
| 3.1.5 黄体分泌物抑制C6 胶质瘤细胞增殖机理初探 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 C6 胶质瘤细胞、牛黄体细胞和人胚肾细胞单独培养结果 |
| 3.2.2 细胞共培养结果 |
| 3.2.3 不同浓度黄体细胞对C6 胶质瘤细胞生长的影响 |
| 3.2.4 黄体分泌物抑制C6 胶质瘤细胞增殖机理初探 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 SD 大鼠黄体p21、p53、K-ras 和c-Myc mRNA 表达的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 样品采集 |
| 4.1.2 主要仪器及试剂 |
| 4.1.3 引物设计与合成 |
| 4.1.4 黄体组织总RNA 提取 |
| 4.1.5 cDNA 第一链合成 |
| 4.1.6 目的基因的PCR 扩增 |
| 4.1.7 结果分析 |
| 4.1.8 统计学处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 SD 大鼠妊娠第 5 d、15 d 及分娩后第 3 d(第 20 d)卵巢黄体形态学观察 |
| 4.2.2 SD 大鼠黄体p21、p53、K-ras 和c-Myc 基因mRNA 的表达 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）雌激素和γ-干扰素对去卵巢大鼠HPG轴中细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 神经免疫内分泌网络概述 |
| 1.1 下丘脑－垂体－卵巢轴的结构和功能 |
| 1.1.1 下丘脑的结构和生理机能 |
| 1.1.2 垂体的结构及生理机能 |
| 1.1.3 卵巢的结构和生理机能 |
| 1.1.4 下丘脑、垂体、卵巢之间的关系 |
| 1.2 下丘脑－垂体－卵巢轴在神经内分泌免疫网络研究中的意义 |
| 1.2.1 神经—免疫—内分泌网络的调节环路 |
| 1.2.2 下丘脑—垂体—卵巢轴对研究神经—内分泌—免疫网络的意义 |
| 第二章 雌激素和Γ-干扰素的结构特征及其对HPG 轴的调节作用 |
| 2.1 雌激素及其受体对HPG 轴调节作用的研究进展 |
| 2.1.1 雌激素受体的结构 |
| 2.1.2 雌激素受体的分类 |
| 2.1.3 雌激素受体的作用机制 |
| 2.1.4 雌激素对HPG 轴的神经免疫内分泌调节作用 |
| 2.2 Γ-干扰素对HPG 轴调节作用的研究进展 |
| 2.2.1 γ-干扰素的生物学特性 |
| 2.2.2 γ-干扰素对HPG 轴的神经免疫内分泌调节作用 |
| 第三章 BCL-2 蛋白家族及其在细胞凋亡中的作用机制 |
| 3.1 BCL-2 蛋白家族分子结构 |
| 3.2 BCL-2 蛋白家族的功能 |
| 3.3 细胞凋亡通路及BCL-2 蛋白家族作用的分子机制 |
| 3.3.1 细胞凋亡通路 |
| 3.3.2 Bcl-2 蛋白家族作用的分子机制 |
| 实验研究 |
| 第四章 雌激素与Γ-干扰素对去卵巢大鼠下丘脑中ＢＣＬ－２和ＢＡＸ表达的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂和仪器 |
| 4.1.2 试验动物及模型的建立 |
| 4.1.3 给药方法及剂量 |
| 4.1.4 取材及材料处理 |
| 4.1.5 免疫组织化学染色程序 |
| 4.1.6 显微图像分析及数据处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 雌激素与Γ-干扰素对去卵巢大鼠垂体中ＢＣＬ－２和ＢＡＸ表达的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要试剂和仪器 |
| 5.1.2 试验动物及模型的建立 |
| 5.1.3 给药方法及剂量 |
| 5.1.4 取材及材料处理 |
| 5.1.5 免疫组织化学染色程序 |
| 5.1.6 显微图像分析处理 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 各组大鼠不同时期腺垂体中Bcl-2 和Bax 蛋白的表达 |
| 5.2.2 各组大鼠不同时期神经垂体中Bcl-2 和Bax 蛋白的表达 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、人卵巢中的神经垂体激素（论文参考文献）
- [1]蛋鸡退化卵泡衰退的机制及其功能的研究[D]. 林欣. 浙江大学, 2018(01)
- [2]高原甘加藏羊发情周期下丘脑GnRH的动态分泌及其受体在垂体和卵巢中表达[D]. 葛闻博. 甘肃农业大学, 2018(10)
- [3]小鼠和山羊性成熟前卵巢卵泡发育与雌激素受体表达及其调控研究[D]. 王洪进. 山东农业大学, 2012(02)
- [4]催产素对牛黄体细胞中突触素表达的影响[D]. 张文华. 西北农林科技大学, 2012(12)
- [5]GHS-R1a在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴上的定位与mRNA表达[A]. 方富贵,李福宝,蒋书东,王琳. 中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集, 2010
- [6]Ghrelin对大鼠下丘脑—垂体—性腺的影响及其机理研究[D]. 王琳. 安徽农业大学, 2010(05)
- [7]老年猕猴下丘脑、脾脏、生殖器官中NGF、ERs、AR、IL-2及IL-6表达的研究[D]. 张佳卉. 四川农业大学, 2011(04)
- [8]山羊妊娠期卵巢组织形态及黄体中Ghrelin的表达研究[D]. 张灵枝. 西北农林科技大学, 2010(11)
- [9]牛黄体细胞与C6胶质瘤细胞共培养及凋亡相关基因在大鼠黄体中的表达[D]. 唐骏启. 西北农林科技大学, 2009(S2)
- [10]雌激素和γ-干扰素对去卵巢大鼠HPG轴中细胞凋亡的影响[D]. 龙敏. 西北农林科技大学, 2008(11)