一、养精种玉汤加减提取液对离体培养的兔卵巢颗粒细胞雌二醇生成的影响（论文文献综述）
苗津东[1]（2018）在《养精种玉加味方干预肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者排卵提早的临床研究》文中指出目的:研究养精种玉加味方对肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者在自然周期体外受精-胚胎移植（Natural cycle-In Vitro Fertilization-Embryo Trasplantation,NC-IVF-ET）治疗中排卵提早的干预调节作用,探讨肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者在NC-IVF-ET中排卵提早的发生机制,以及养精种玉加味方可能的作用机制。方法:本研究将符合诊断及辨证标准行IVF-ET的肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者60例,用SPSS19.0随机分为2组,每组各30例,观察组30例患者在服用中药养精种玉加味方3个周期后进入NC-IVF-ET治疗周期;对照组未经任何药物干预。观察组治疗前后与对照组月经期第3天AFC、血清FSH、LH、E2水平及FSH/LH比值比较;治疗前后观察组与对照组肾精亏虚证中医证候量化积分比较;观察组与对照组hCG日月经天数、主导卵泡（优势卵泡中最大者）直径、血清LH、E2、P水平比较;观察组与对照组获卵率、优质卵率、2PN受精率、优胚率、妊娠率、周期取消率比较;观察组与对照组取消周期原因比较;观察组与对照组获卵者卵泡液促性腺激素峰平抑因子（gonadotropin surge-attenuating factor,GnSAF）、抑制素B（inhibin B,INHB）水平比较;获卵组与未获卵组年龄、不孕年限、治疗前月经期第3天AFC、血清FSH、FSH/LH、E2水平比较;获卵组与未获卵组hCG日月经天数、主导卵泡直径、优势卵泡数及血清LH、E2、P水平比较;获卵组卵泡液GnSAF与INHB水平分别与年龄、不孕年限、AFC、血清基础FSH、LH、FSH/LH、E2水平,以及hCG日月经天数、主导卵泡直径、优势卵泡数及血清LH、E2、P水平的相关性分析;获卵组卵泡液GnSAF与INHB水平的相关性分析。结果:治疗后观察组血清基础内分泌FSH水平、FSH/LH比值及肾精亏虚证中医证候积分均较前显着降低（p<0.01）。与对照组比较,治疗后观察组血清内分泌FSH水平、FSH/LH比值、中医证候积分及hCG日血清P水平、周期取消率均较低（p<0.05）;观察组hCG日月经天数、平均获卵数、获卵率及卵泡液GnSAF与INHB均高于对照组（p<0.05）。获卵组与未获卵组相较,前者年龄、基础血清FSH水平及hCG日血清P水平低于后者（p<0.05）;获卵组hCG日月经天数高于未获卵组。经pearson相关性分析,在获卵患者中,卵泡液GnSAF和INHB分别与基础E2、hCG日血清LH、E2、P及主导卵泡直径负相关（p<0.05且r<0）;与hCG日月经天数正相关（p<0.05且r>0）;卵泡液INHB水平分别与平均获卵数和卵泡液GnSAF水平正相关（p<0.05且r>0）。结论:养精种玉加味方对肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者的症状改善效果明显并能有效改善提示卵巢储备功能减退的相关指标,如血清基础内分泌FSH水平、FSH/LH等;养精种玉加味方可以在提高获卵率及降低周期取消率等方面改善自然周期肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者IVF的治疗效果、降低自然周期肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者排卵提早的发生率;养精种玉加味方降低排卵提早发生率的机制,可能与改善肾精亏虚症状、改善卵巢储备功能及内分泌、自分泌功能,提高卵泡液GnSAF、INHB分泌水平,抑制垂体Gn的分泌相关;排卵提早的发生可能与肾精亏虚症状及卵巢储备功能减退相关。
刘敏[2]（2018）在《补肾益气和血法中药对IVF-ET患者血清相关因子及妊娠结局的影响》文中研究指明目的本研究探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期血清中相关因子IGF-2、VEGF、TGF-β1和TNF-α水平及其与妊娠结局的关系,观察补肾益气和血法中药对血清相关因子IGF-2、VEGF、TGF-β1和TNF-α水平和IVF-ET妊娠结局的影响,以探索其作用和作用机制。方法从在本院生殖中心行IVF-ET助孕的患者中选取符合研究标准的研究对象,随机分为中药组和对照组,各100例,检测时剔除资料不全者,实际有效病例为中药组（66例）和对照组（70例）。中药组采用IVF-ET+COH+中药,对照组单纯采用IVF-ET+COH,两组COH+IVF-ET方案相同。中药应用分两个阶段,胚胎移植前采用补肾益气养血活血法,胚胎移植后采用补肾益气养血法,每个阶段中药均干预13个月,比较两组:（1）取卵日血清IGF-2、VEGF、TGF-β1及TNF-α水平;（2）移植日血清IGF-2、VEGF、TGF-β1及TNF-α水平;（3）移植后7天血清IGF-2、VEGF、TGF-β1及TNF-α水平;（4）临床妊娠率。结果（1）取卵日血清因子水平:IGF-2、VEGF及TGF-β1等3种因子中药组均显着高于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）;而TNF-α中药组显着低于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）,表明补肾益气和血中药可上调IVF-ET患者取卵日IGF-2、VEGF以及TGF-β1的在血清中的表达,而对TNF-α的表达有一定的下调作用。（2）移植日血清因子水平:IGF-2、VEGF及TGF-β1等3种因子中药组均显着高于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）;而TNF-α中药组显着低于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）,表明补肾益气和血中药可上调IVF-ET患者移植日IGF-2、VEGF以及TGF-β1的在血清中的表达,而对TNF-α的表达有一定的下调作用。（3）移植后7天血清因子水平:IGF-2、VEGF及TGF-β1等3种因子中药组均显着高于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）;而TNF-α中药组显着低于对照组,两组比较有显着性差异（P<0.05）,表明补肾益气和血中药可上调IVF-ET患者移植后7天IGF-2、VEGF以及TGF-β1的在血清中的表达,而对TNF-α的表达有一定的下调作用。（4）临床妊娠:总临床妊娠例数中药组50例、对照组41例,临床妊娠率中药组75.76%、对照组58.57%,两组比较有显着性差异（P<0.05）。结论本研究结果表明,补肾益气和血法介入IVF-ET过程,可能通过上调取卵日、移植日和移植后7天血清IGF-2、VEGF和TGF-β1的表达,下调TNF-α的表达,提高IVF-ET临床妊娠率（75.76%vs 58.57%,P<0.05）,改善妊娠结局。
白俊[3]（2018）在《基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法调控大鼠卵巢颗粒细胞自噬的分子机制》文中认为实验一雷公藤甲素诱导离体原代培养大鼠卵巢颗粒细胞自噬的研究目的:观察雷公藤甲素（triptolide,TP）诱导颗粒细胞（granulosa cells,GCs）自噬所需的浓度、时间和作用机制。方法:1.采用CCK-8法比较不同浓度的TP对原代培养大鼠卵巢GCs的抑制作用并计算IC50;WB法检测不同浓度、时间点下TP对GCs自噬相关因子蛋白表达及PI3K/AKT/mTOR通路级联的影响。2.WB法检测TP、自噬诱导剂（BrefeldinA）、PI3K/mTOR抑制剂（NVP-BEZ235）分别干预GCs对PI3K/AKT/mTOR通路及自噬相关因子蛋白表达的影响。结果:1.不同浓度TP作用于大鼠卵巢GCs的IC50为14.65μM,其中最小抑制浓度为0.1μM（100nM）。2.与空白对照组相比,各组Beclin1、LC3II蛋白表达水平均升高,LC3I及p62蛋白表达水平均下降,其中TP（100nM）作用与大鼠GCs12h,各指标变化显着（p<0.05或p<0.01）;3.TP,BrefeldinA,NVP-BEZ235分别处理大鼠GCs12h后,与空白对照组相比,TP可显着促进下游自噬效应分子Beclin1,LC3II蛋白表达水平并抑制LC3I,p62蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）,且TP组Beclin 1和LC3II/LC3I的表达高于Brefeldin A组,p62的表达低于Bredeldin A组（p<0.05或p<0.01）。同时,TP能显着抑制p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平,且TP抑制效果优于NVP-BEZ235组。结论:TP（100nM）作用于离体培养大鼠卵巢GCs12h,可成功诱导GCs自噬;TP可能是通过抑制PI3k/Akt/mTOR信号通路诱导GCs自噬。实验二基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研补肾活血中药复方新加归肾丸对雷公藤甲素致大鼠卵巢颗粒细胞自噬的调控目的:以PI3K/AKT/mTOR通路为切入点,探讨补肾活血法调控体外培养大鼠卵巢GCs自噬的分子机制。方法:1.药效实验:将原代培养的大鼠卵巢GCs分为6组:空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、西药（FSH）组。空白对照组给予生理盐水灌胃的大鼠血清,其余五组先加TP诱导12h后,模型组给予生理盐水灌胃的大鼠血清,中药各剂量组分别加入相应剂量的大鼠含药血清、FSH组加入含FSH大鼠血清,血清孵育48小时后,Elisa法检测各组GCs中E2、P分泌量;RT-qPCR法、WB法和免疫荧光法分别检测各组GCs中PI3K、AKT、mTOR、Beclin1、LC3、p62的mRNA表达和Beclin1、LC3、p62及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的蛋白表达。2.机制实验:将原代培养的大鼠卵巢GCs分为5组:空白对照组、模型组、中药高剂量组、抑制剂组、中药高剂量+抑制剂组。空白对照组给予生理盐水灌胃的大鼠血清,其余四组先加TP诱导12h后,模型组给予生理盐水灌胃的大鼠血清,中药高剂量组加入中药高剂量大鼠含药血清,抑制剂组加入生理盐水灌胃的大鼠血清和抑制剂,中药高剂量+抑制剂组加入中药高剂量灌胃的大鼠含药血清和抑制剂,48小时后,透射电镜下观察各组GCs中的自噬小体数量,其余检测指标及方法均同药效实验。结果:1.药效实验:（1）Elisa法:与空白对照组相比,模型组E2含量显着降低,与模型组相比,中药各剂量组E2含量均上升（均p<0.05）,且中药高剂量组与FSH组E2含量均升高,两组差异无统计学意义（p>0.05）;与空白对照组相比,各组与对P的含量均没有影响（p>0.05）。（2）RT-qPCR法:与空白对照组相比,各组GCs中PI3K,AKT,mTOR的mRNA水平无明显变化（p>0.05）,而模型组Beclin1,LC3I,LC3II和p62的mRNA水平显着高升高（p<0.01）;中药各剂量组及西药FSH组Beclin 1,LC3I,LC3II和p62的mRNA水平显着下降（均p<0.05）;且中药高剂量组效果优于西药FSH组（均p<0.05）。（3）WB法:与空白对照组相比,模型组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和p62的表达显着降低,Beclin 1和LC3II/I的表达则显着升高（p<0.01）;中药各剂量组及FSH组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平和p62的表达上调,Beclin 1和LC3II/I的表达下调,且中药高剂量组效果优于西药FSH组（均p<0.05）。（4）免疫荧光法:模型组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和P62表达降低,Beclin1、LC3II的表达升高,各中药各剂量组及阳性药物FSH组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和p62表达上调,Beclin 1、LC3II的表达下调,且中药高剂量组效果优于FSH组（均p<0.05）。2.机制实验:（1）Elisa法:与空白对照组相比,模型组E2含量显着降低,与模型组相比,中药高剂量组E2含量显着上升（p<0.01）,且中药高剂量组显着高于中药高剂量+抑制剂组（p<0.01）;但与空白对照组相比,各组对P的含量均没有影响（p>0.05）。（2）透射电镜结果:自噬小体的数量在模型组多于空白对照组,中药高剂量组自噬小体少于模型组,且中药高剂量组自噬小体少于中药+抑制剂组。（3）RT-qPCR法:与空白对照组相比,各组PI3K,AKT和mTOR的mRNA水平无明显变化（p>0.05）,而模型组Beclin1,LC3I,LC3II和p62的mRNA水平显着升高（p<0.01）;中药高剂量组Beclin1,LC3I,LC3II和p62的mRNA水平显着下降,且中药高剂量组显着低于中药+抑制剂组（均p<0.01）。（4）WB法:与空白对照组相比,模型组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和p62的表达显着降低,Beclin 1和LC3II/I的表达则显着升高（p<0.01）;中药高剂量组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平和p62的表达上调,Beclin 1和LC3II/I的表达下调,且中药高剂量组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平和p62的表达显着高于中药高剂量+抑制剂组,Beclin 1和LC3II/LC3I的表达显着低于中药+抑制剂组（均p<0.01）。（5）免疫荧光法:模型组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和p62表达减少,Beclin1、LC3II的表达增多,中药高剂量组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和p62表达上调,Beclin 1、LC3II的表达下调,且中药高剂量组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR和p62表达显着高于中药高剂量+抑制剂组,中药高剂量组Beclin 1和LC3II的表达显着低于中药+抑制剂组。结论:TP100nM作用于大鼠卵巢GCs12h,可显着抑制GCs分泌E2含量,中药高剂量组可显着改善TP对离体原代培养大鼠GCs分泌E2的抑制;补肾活血中药复方新加归肾丸可能是通过激活PI3K/AKT/mTOR通路,下调下游自噬效应分子Beclin1及LC3的表达并减少p62的消耗来修复TP导致的大鼠卵巢GCs的自噬损伤。
曹媛媛[4]（2017）在《中药周期疗法调控反复种植失败患者子宫内膜容受性及对Galectin的影响》文中进行了进一步梳理目的:对行体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）反复种植失败（recurrent implantation failure,RIF）的患者给予中药周期疗法干预治疗,设置对照组进行对比。通过研究两组患者中医肾虚临床症状、体征及实验室指标,研究两组患者子宫内膜容受性的特征性标记分子半乳糖凝集素（Galectin）的表达,分析中药周期疗法对子宫内膜容受性的作用机制及对胚胎种植率和临床妊娠率的影响。方法:研究对象为120例行冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer,FET）的患者,其中RIF患者60例为观察组,输卵管因素行IVF-ET的患者60例为对照组。观察组给予中药周期疗法干预一个疗程,对照组不予干预。比较患者中医肾虚临床症状体征及实验室指标;比较排卵日及排卵后6日子宫内膜容受性特征性标记分子半乳糖凝集素（Galectin）的表达;比较两组患者FET周期胚胎种植率及临床妊娠率。结果:1.观察组治疗后肾虚症状及体征较前改善,与对照组比较无统计学差异（P>0.05）;2.观察组治疗后血清基础内分泌水平较前改善,与对照组比较无统计学差异（P>0.05）;3.观察组治疗后排卵日及排卵后6日血清Galectin水平升高、子宫内膜Galectin及m RNA表达均有提高,排卵日子宫内膜厚度、分型及内膜下血流均较前改善,与对照组比较无统计学差异（P>0.05）;4.观察组治疗后FET周期移植日及FET后14日血清激素水平,胚胎种植率及临床妊娠率,与对照组比较无统计学差异（P>0.05）。结论:中药周期疗法能改善RIF患者中医肾虚证候及基础内分泌环境,改善排卵日子宫内膜容受性相关指标,提高了FET周期子宫内膜容受性特征性标记分子Galectin的表达,从而提高了子宫内膜容受性与胚胎种植率及临床妊娠率。
王铮,滕晓明,俞而慨[5]（2017）在《益气血填肾精分段法在卵巢低反应患者预处理中的助孕作用》文中研究指明目的探讨益气血填肾精分段法对辅助生殖中卵巢低反应（POR）患者预处理的助孕作用。方法选取2014年12月-2016年10月在该院生殖中心就诊的102例卵巢低反应患者,采用随机的方法分为治疗组50例,对照组52例。治疗组予以益气血填肾精分段法治疗,对照组不服药;12周后两组再次以拮抗剂方案超促排卵。分别在治疗0、4、8、12周测两组患者血清卵泡刺激素（FSH）、抗缪勒氏管激素（AMH）、窦卵泡计数（AFC）;于h CG日测血雌二醇（E2）、子宫内膜厚度、≥18 mm的卵泡数;超促排后比较促性腺激素（Gn）总剂量、获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、新鲜胚胎移植数和冷冻胚胎数。结果 （1）两组AFC比较:治疗组用药4、8、12周都较治疗前升高（P<0.05）;治疗组用药4、8、12周与对照组相比都有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。（2）两组FSH比较:治疗组用药4、8、12周都较治疗前下降（P<0.05）;治疗组用药8周与对照组相比下降（P<0.05）,治疗组用药4周、12周与对照组相比呈下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。（3）两组AMH比较:治疗组用药12周后较治疗前升高（P<0.05）;治疗组用药12周与对照组相比升高,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）两组用药前后临床疗效比较:两组用药12周后再次拮抗剂超促排卵发现,治疗组较对照组在Gn用药总量有降低趋势,Gn用药时间有减少趋势,h CG日≥18mm卵泡数有增加趋势,获卵数、受精卵数、卵裂胚胎数、鲜胚移植数都有增加趋势,但以上差异都无统计学意义（P>0.05）;而治疗组的子宫内膜厚度较对照组显着增加（P<0.05）,优质胚胎数显着增加（P<0.05）。结论益气血填肾精分段法对辅助生殖中POR患者预处理,可以改善患者卵巢功能,提高卵巢反应性,增加子宫内膜厚度、提高优质胚胎数。
陆柳如[6]（2016）在《基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法修复雷公藤多苷致卵泡发育障碍的分子机制》文中提出实验一、大鼠卵巢颗粒细胞的体外培养及鉴定目的：在前期研究的基础上,分离大鼠卵巢颗粒细胞进行原代培养,并探索其增殖高峰期,为下一步实验确定最佳检测时间点。方法：将雌性成年SD大鼠皮下注射孕马血清促性腺激素（PMSG） 40IU,48h后将大鼠以颈椎脱臼法处死,迅速剖取卵巢放入PBS液中冲洗,用空针针头刺破卵泡,释放卵泡内颗粒细胞,吹打分散后过滤,离心后弃上清液,收集细胞,细胞培养瓶中加入DMEM/F12/青链霉素/胎牛血清培养液,于37℃、5%CO2培养箱中培养,24h后换液,将培养24h贴壁的大鼠卵巢颗粒细胞分为5组：空白对照组、雷公藤多苷组、西药组（雷公藤多苷+戊酸雌二醇）、中药高剂量组（雷公藤多苷+新加归肾丸高剂量）、中药低剂量组（雷公藤多苷+新加归肾丸低剂量）。空白对照组给予等量生理盐水灌胃大鼠获取的血清,其余四组先加入80mg/kg·d雷公藤多苷大鼠含药血清作用48小时后,再分别加入各组含药血清,48小时后,进行HE染色及FSHR免疫细胞化学法进行颗粒细胞鉴定。MTT法检测各组颗粒细胞培养第48h、72h、96h、120h、144h的生长、增殖及凋亡情况。结果：HE染色结果：HE染色后在镜下见贴壁细胞形态完整,边缘清晰,呈不规则多角形,细胞核呈卵圆形染深蓝色,胞浆淡红色,判定为颗粒细胞。FSHR结果：FSHR特异表达于卵巢颗粒细胞,免疫细胞化学染色见阴性细胞中,只有细胞核被染成蓝紫色,细胞浆无色；阳性细胞的细胞浆呈棕黄色,细胞核呈蓝紫色,判定为颗粒细胞,FSHR阳性率>90%。MTT结果：培养48h后,颗粒细胞聚集生长,呈梭状,核大而圆。加大鼠血清后,颗粒细胞继续聚集生长,呈梭状,核大而圆。在96h～120h之间,细胞增长速度最快,120h时细胞OD值到达峰值。120h后,细胞生长速度减慢,形态异常的数量增多,死亡细胞逐渐增多。结论：1、本实验中大鼠卵巢颗粒细胞的分离及原代培养是成功的,且可以满足后续实验的需要。2、本实验中体外培养96h-120h的大鼠卵巢颗粒细胞增殖速度最快,120h的OD值达峰值,后续实验可以收集此时间点的颗粒细胞进行各项指标的检测。实验二、基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法修复雷公藤多苷致卵泡发育障碍的分子机制目的：在实验一的基础上,以原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞为实验对象,以与卵泡发育密切相关的PI3K/AKT/mTOR信号通路为切入点,研究雷公藤多苷抑制卵泡发育及补肾活血复方新加归肾丸促进卵泡发育的分子机制。方法：参照实验一方法分离及培养大鼠卵巢颗粒细胞,将培养24h贴壁的大鼠卵巢颗粒细胞分为5组：空白对照组、雷公藤多苷组、西药组（雷公藤多苷+戊酸雌二醇）、中药高剂量组（雷公藤多苷+高剂量新加归肾丸）、中药低剂量组（雷公藤多苷+低剂量新加归肾丸）。空白对照组给予等量生理盐水灌胃大鼠获取的血清,其余四组先加入80mg/kg·d雷公藤多苷大鼠含药血清作用48小时后,再分别加入各组含药血清,48小时后,用MTT法检测各组细胞的增殖率,用蛋白免疫印迹法（western-blotting）检测颗粒细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路上的主要信号分子PI3K、p-AKT、p-mTOR以及上游分子IGF-1及IRS-1的蛋白相对表达量,用实时荧光定量法（RT-PCR）检测颗粒细胞中PI3KmRNA、p-AKTmRNA、 p-mTORmRNA、IGF-1mRNA及IRS-1mRNA的相对表达量。结果：MTT法检测结果显示：与空白对照组相比,各组的光密度值均降低,其中尤其以雷公藤多苷组下降最多,差异均具有统计学意义（P<0.01）;与雷公藤多苷组相比较,西药组及中药各剂量组光密度值均升高,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）；与西药对照组相比,中药高剂量组光密度值差异无统计学意义（P>0.05）,中药低剂量组光密度值降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western-blotting及RT-PCR检测结果显示：与空白对照组相比,雷公藤多苷组颗粒细胞中的PI3K、p-AKT、p-mTOR、IGF-1、IRS-1蛋白及mRNA的相对表达量均降低,差异具有统计学意义（P<0.01）；应用戊酸雌二醇及不同剂量的新加归肾丸大鼠含药血清作用48h后,与雷公藤多苷组相比,西药组、中药高剂量组颗粒细胞上的PI3K、p-AKT、p-mTOR、IGF-1、IRS-1蛋白及mRNA的相对表达量及中药低剂量组PI3KmRNA、p-mTOR蛋白、IRS-1蛋白相对表达量均上升,差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,中药低剂量组颗粒细胞上的P13K蛋白、p-AKT蛋白及mRNA、p-mTORmRNA. IGF-1蛋白及mRNA、IRS-1蛋白及mRNA相对表达量与雷公藤多苷组的差异无统计学意义（P>0.05）,但有上升趋势；与西药组相比,中药高、低剂量组颗粒细胞上的P13K蛋白及mRNA中药高剂量组p-AKT蛋白及mRNA.中药高剂量组p-mTOR蛋白及mRNA、中药高剂量组IGF-1蛋白及mRNA、中药低剂量组IGF-1蛋白、中药高剂量组IRS-1蛋白及mRNA、中药低剂量组IRS-1 mRNA的相对表达量的差异均无统计学意义（P>0.05）,中药低剂量组p-AKT及p-mTOR蛋白及mRNA.中药低剂量组IGF-1mRNA、中药低剂量组IRS-1蛋白相对表达量的差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。结论：1、雷公藤多苷可能通过下调大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关信号分子PI3K、p-AKT、p-mTOR及上游细胞因子IGF-1与IRS-1的表达,抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性,使大鼠卵巢颗粒细胞有丝分裂信号传递受阻,抑制颗粒细胞增殖,导致卵泡生长发育受阻。2、补肾活血中药复方新加归肾丸可能通过上调大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/AKT/ mTOR信号通路中相关信号分子PI3K、p-AKT、p-mTOR及上游细胞因子IGF-1、IRS-1的表达,增强PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性,加快大鼠卵巢颗粒细胞有丝分裂信号的传递,促进颗粒细胞增殖,进一步促进卵泡的生长发育。
梅巧[7]（2016）在《滋勒调经汤对大鼠卵巢颗粒细胞增殖和分泌的影响》文中研究表明目的:观察不同浓度的滋勒调经汤（ZiLe Tiao Jing Soup-ZLTJS）含药血清对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞（GC）增殖与分泌雌二醇（E2）及孕酮（P）、激活素A（ActA）的影响,探讨滋勒调经汤治疗肾虚血少型的月经量少、闭经,卵巢早衰等卵巢储备功能下降内分泌疾病的作用机制,为滋勒调经汤在临床上的进一步推广应用提供理论依据。方法:1.以一定浓度的滋勒调经汤和生理盐水灌胃6周龄健康近成熟SD大鼠,制备大鼠含药血清和无药血清,并配置成体积分数为10%的小、中、大三组不同剂量浓度的含药血清和无药血清,且设空白对照组;2采用简单机械分离加胰酶消化的方法,用3周龄的健康未成年SD大鼠制备大鼠卵巢颗粒细胞（GC）,并建立其体外培养体系,光学显微镜下观察大鼠卵巢颗粒细胞的生长情况,通过FSHR免疫组化法以及细胞爬片HE染色法进行细胞鉴定,用MTT法绘制细胞的生长曲线;3.依据血清药理学原理方法,在GC体外培养24h待其贴壁后,用小、中、大等不同浓度的滋勒调经汤的大鼠含药血清和大鼠无药血清对大鼠卵巢颗粒细胞进行干预,用MTT法测定OD值,观察颗粒细胞增殖情况;4.通过放射免疫分析法测培养液中E2、P的含量;5用ELISA法检测培养液中Act A的含量结果:1.体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞生长状态良好,24小时细胞核为蓝紫色,细胞浆为棕黄色,阳性率>90%;基本贴壁,3-4天进入增生期,15天细胞明显凋亡,FHSR免疫组化阳性染色:核为蓝紫色,浆为棕黄色,阳性率>90%;HE染色:核被染成深蓝色,胞浆被染成淡红色;2.滋勒调经汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞（GC）的增殖的影响:小、中、大三组滋勒调经汤含药血清OD值均明显高于无药血清组和空白对照组,差异具有统计学意义（P<0.01）,滋勒调经汤含药血清各组OD与药物浓度存在一定的依赖性,各组间差异有统计学意义（P<0.05）。3.滋勒调经汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞分泌的影响:空白对照组和无药血清组的大鼠卵巢颗粒细胞的E2、P、ActA的分泌量均低于小、中、大三组滋勒调经汤含药血清,差异具有统计学意义（P<0.01）,滋勒调经汤含药血清小、中、大组E2、P、ActA分泌量与浓度存在一定的依赖性,各组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论:滋勒调经汤含药血清能够促进体外培养的大鼠颗粒细胞的增殖和促进E2、P、ActA的分泌,推测在机体内,滋勒调经汤可能通过改善卵巢局部自分泌、旁分泌的作用,上调ActA分泌量影响ActA/Smads信号通路,调节卵巢局部微环境,从而达到调节卵巢功能的目的。
叶丹凤,马红霞,吴婉婷,赖毛华,刘华,郑艳华,马婉莹[8]（2015）在《MAPK信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制》文中研究表明目的通过丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路探讨养精种玉汤正丁醇（ZDC）及乙酸乙酯（YSYZ）提取物降低猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制。方法分离并培养猪卵巢颗粒细胞,将细胞按不同浓度的MAPK抑制剂PD98059孵育,分为0（空白对照）、1、3、10、25μmol/L共5组,培养24 h后,采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测17α-羟化酶/C17,20-裂解酶（cytochrome P450c17a,CYP17）mRNA表达水平,应用放射免疫测定法（RIA）检测细胞上清液雄激素（睾酮）含量,筛选最佳的PD98059作用浓度;采用10μmol/L PD98059干预卵巢颗粒细胞24 h后,将细胞培养液更换成含或不含有不同浓度（0、1、5、25、50 mg/m L）的养精种玉汤有效成分提取物ZDC及YSYZ干预不同的时间（3、6、18、24 h）后,采用Western blot法检测各组磷酸化的细胞外信号调节激酶（p-ERK1/2）、c-Fos及CYP17蛋白表达水平,RIA法检测细胞上清液睾酮含量。结果 10μmol/L PD98059可明显降低猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加CYP17 mRNA表达,并可增加细胞上清液睾酮含量（P<0.05）。当养精种玉汤ZDC、YSYZ提取物浓度为25 ng/m L、作用时间为6 h时,可增加猪卵巢颗粒细胞p-ERK1/2、c-Fos蛋白水平并降低CYP17蛋白的表达,降低细胞上清液睾酮含量（P<0.05）。结论养精种玉汤有效成分通过增加MAPK的活性从而降低猪卵巢颗粒细胞的雄激素生成。
郑艳华,丁涛,马红霞,叶丹凤,苏念军,吴效科[9]（2014）在《养精种玉汤对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞PCNA、StAR、FSHR mRNA与蛋白表达的影响》文中指出目的观察养精种玉汤对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞（GC）增殖细胞核抗原（PCNA）、类固醇激素合成急性调节蛋白（StAR）与促卵泡生成素受体（FSHR）mRNA及其蛋白表达的影响。方法以原代培养猪卵巢GC为实验对象。分别将促卵泡生成素（FSH）、养精种玉汤加入受过量丙酸睾酮处理的GC培养体系中。48 h后,利用RT-PCR和Western blot分别检测PCNA、StAR、FSHR mRNA及其蛋白表达量。结果过量雄激素抑制GC的PCNA、StAR、FSHR mRNA及蛋白的表达,养精种玉汤和FSH能逆转雄激素的抑制作用,促进GC PCNA、StAR、FSHR mRNA与蛋白的表达。结论养精种玉汤有拮抗过量雄激素对PCNA、StAR、FSHR mRNA及其蛋白表达的抑制作用,推测养精种玉汤通过促进PCNA、StAR、FSHR mRNA与蛋白的表达以及拮抗过多雄激素的负作用,改善卵泡发育异常。
宋翠淼,杨宏敏,陆君,周楠,路帅,段彦苍,马惠荣,徐华洲,杜惠兰[10]（2014）在《补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响》文中研究指明目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素/环磷酸腺苷-蛋白激酶A（follicle stimulating hormone/cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A,FSH/cAMP-PKA）通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24 h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48 h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇（estrogen,E2）、孕酮（progesterone,P）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的水平,采用蛋白印迹法和Real-time PCR分别检测卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）蛋白和FSHR、P450芳香化酶（P450 aromatase,P450arom）mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组:与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高（P<0.05）,补肾强经方中剂量组P明显降低（P<0.01）;补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.01）,P450芳香化酶mRNA表达显着升高（P<0.05,P<0.01）。大鼠含药血清组:与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组E2均升高（P<0.01）,cAMP明显升高（P<0.05,P<0.01）,补肾调经方中剂量组P明显降低（P<0.01）;补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高（P<0.01）,P450芳香化酶mRNA表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。
二、养精种玉汤加减提取液对离体培养的兔卵巢颗粒细胞雌二醇生成的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、养精种玉汤加减提取液对离体培养的兔卵巢颗粒细胞雌二醇生成的影响（论文提纲范文）
（1）养精种玉加味方干预肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者排卵提早的临床研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 一、临床资料 |
| (一)病例来源 |
| (二)诊断、辨证及评价标准 |
| (三)病例选择及排除、剔除标准 |
| 二、研究方法 |
| (一)临床分组 |
| (二)临床药物 |
| (三)实验步骤 |
| (四)实验方法 |
| (五)观察指标 |
| (六)统计分析 |
| 三、一般资料 |
| (一)入组时观察组与对照组肾精亏虚证中医证候积分比较 |
| (二)观察组与对照组患者年龄、不孕年限比较 |
| (三)入组时观察组与对照组患者月经期第3天AFC、血清基础内分泌FSH、LH、E2水平及FSH/LH比值比较 |
| (四)观察组与对照组患者不孕症类型比较 |
| 四、实验结果 |
| (一)观察组与对照组入组时及拟取卵周期月经期第3天AFC、血清FSH、LH、E2 水平及FSH/LH比值比较 |
| (二)治疗后观察组与对照组肾精亏虚证中医证候量化积分比较 |
| (三)观察组与对照组hCG日优势卵泡数、主导卵泡直径及月经天数比较 |
| (四)观察组与对照组hCG日血清LH、E2及P水平比较 |
| (五)观察组与对照组平均获卵数比较 |
| (六)观察组与对照组获卵率、优质卵率、正常受精率、2PN卵裂率、优胚率、妊娠率及周期取消率比较 |
| (七)观察组与对照组取消周期原因比较 |
| (八)观察组与对照组获卵者卵泡液Gn SAF、INHB水平比较 |
| (九)获卵组与未获卵组年龄与不孕年限比较 |
| (十)获卵组与未获卵组治疗后月经期第3天AFC、血清基础FSH、LH、E2 水平及FSH/LH比值比较 |
| (十一)获卵组与未获卵组hCG日优势卵泡数、主导卵泡直径及月经天数比较 |
| (十二)获卵组与未获卵组hCG日血清LH、E2、P水平比较 |
| (十三)卵泡液Gn SAF水平与患者年龄和不孕年限的相关性分析 |
| (十四)卵泡液Gn SAF水平与治疗后AFC、血清基础FSH、LH、E2 水平及FSH/LH比值的相关性分析 |
| (十五)卵泡液Gn SAF水平与h CG日的优势卵泡数、主导卵泡直径及月经天数相关性分析 |
| (十六)卵泡液Gn SAF水平与h CG日血清LH、E2、P相关性分析 |
| (十七)卵泡液Gn SAF水平与获卵数的相关性分析 |
| (十八)卵泡液INHB水平与患者年龄和不孕年限的相关性分析 |
| (十九)卵泡液INHB水平与治疗后AFC、血清基础FSH、LH、E2 水平及FSH/LH比值的相关性分析 |
| (二十)卵泡液INHB水平与h CG日的优势卵泡数、主导卵泡直径及月经天数相关性分析 |
| (二十一)卵泡液INHB水平与h CG日血清LH、E2、P相关性分析 |
| (二十二)卵泡液INHB水平与获卵数的相关性分析 |
| (二十三)卵泡液INHB水平与Gn SAF水平的相关性分析 |
| 第二部分 讨论 |
| 一、肾精亏虚证DOR患者卵泡早排的机理探讨 |
| (一)中医对排卵的认识—“氤氲”、“真机”与“的候” |
| (二)从肾精亏虚讨论卵泡早排的发生机理 |
| 二、西医对排卵提早的认识 |
| (一)排卵的生理过程 |
| (二)DOR患者排卵提早的机制 |
| 三、自然周期IVF中干预DOR患者排卵提早的必要性与干预措施 |
| (一)自然周期IVF中干预DOR患者排卵提早的必要性 |
| (二)自然周期IVF中针对DOR患者排卵提早的干预措施 |
| 四、养精种玉加味方分析 |
| (一)养精种玉加味方功效解析 |
| (二)养精种玉汤现代药理研究 |
| 五、养精种玉加味方干预肾精亏虚证DOR患者排卵提早的临床疗效分析 |
| (一)改善肾精亏虚证DOR患者症状的疗效分析 |
| (二)改善DOR患者卵巢储备功能的疗效分析 |
| (三)干预排卵提早的临床疗效及可能的机制 |
| 第三部分 结论 |
| 第四部分 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
（2）补肾益气和血法中药对IVF-ET患者血清相关因子及妊娠结局的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.2.1 输卵管性不孕诊断标准 |
| 1.2.2 中医辩证标准 |
| 1.3 病例选择标准 |
| 1.3.1 纳入标准 |
| 1.3.2 排除标准 |
| 1.3.3 剔除标准 |
| 1.4 病例分组 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 试验药物 |
| 2.2 检测设备 |
| 2.3 实验所用试剂盒 |
| 3 治疗方法 |
| 3.1 COH+IVF-ET方法 |
| 3.2 中药治疗方法 |
| 4 标本采集 |
| 5 检测指标及方法 |
| 5.1 检测两组患者血清IGF-2、VEGF、TGF-β1和TNF-α水平 |
| 5.2 检测方法 |
| 6 统计方法 |
| 结果与分析 |
| 1 基本情况 |
| 2 两组血清因子水平 |
| 2.1 取卵日血清因子水平 |
| 2.2 移植日血清因子水平 |
| 2.3 移植后7天血清因子水平 |
| 3 两组妊娠率比较 |
| 讨论 |
| 1 中医学对不孕症的认识 |
| 1.1 对不孕症病名的认识 |
| 1.2 对不孕症病因病机的认识 |
| 1.3 不孕症的治疗思路 |
| 1.4 不孕症的治则治法 |
| 2 补肾中药干预辅助生殖技术的理论机制 |
| 3 血清相关因子与IVF-ET妊娠结局 |
| 4 补肾益气和血法中药辅助IVF-ET的作用 |
| 4.1 方药组成 |
| 4.2 方义解析 |
| 4.3 方药药理研究 |
| 4.4 研究结果分析 |
| 结语 |
| 1 研究结论 |
| 2 本研究的先进性与创新性 |
| 3 本研究存在的问题与改进方向 |
| 3.1 存在的问题 |
| 3.2 改进方向 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1：中医药在辅助生殖技术中的应用现状(综述) |
| 参考文献 |
| 附录2：研究生期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法调控大鼠卵巢颗粒细胞自噬的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 一 卵泡发育障碍类疾病的研究现况 |
| 二 颗粒细胞自噬对卵泡发育和闭锁的调控 |
| 三 颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/mTOR信号通路 |
| 四 导师治疗卵泡发育障碍类疾病临证经验 |
| 第二部分 实验研究 |
| 课题的前期研究基础及创新性 |
| 研究基础 |
| 研究创新点 |
| 实验一 雷公藤甲素诱导离体原代培养大鼠卵巢颗粒细胞自噬的研究 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 实验动物和实验条件 |
| 1.2 主要药物、试剂和仪器 |
| 1.3 实验分组 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠卵巢颗粒细胞的分离与原代培养 |
| 2.2 离体培养大鼠卵巢颗粒细胞鉴定 |
| 2.3 CCK8法检测TP对GCs增殖的抑制 |
| 2.4 WB法检测各组卵巢GCs中Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、p-PI3K，p-AKT及p-mTOR蛋白表达 |
| 3 统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 体外培养大鼠卵巢颗粒细胞形态学观察 |
| 4.2 大鼠卵巢颗粒细胞的鉴定 |
| 4.3 雷公藤甲素对大鼠卵巢颗粒细胞增值的抑制作用 |
| 4.4 雷公藤甲素诱导大鼠卵巢颗粒细胞自噬浓度的确定 |
| 4.5 雷公藤甲素诱导大鼠卵巢颗粒细胞自噬时间的确定 |
| 4.6 大鼠卵巢颗粒细胞自噬诱导剂确定及机制研究 |
| 5 讨论 |
| 5.1 选择颗粒细胞（GCs）作为研究对象的原因 |
| 5.2 采用雷公藤甲素诱导颗粒细胞自噬的原因 |
| 5.3 实验指标的意义与结果分析 |
| 6 结论 |
| 实验二 基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血中药复方新加归肾丸对雷公藤甲素致大鼠卵巢颗粒细胞自噬的调控 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 实验动物和实验条件 |
| 1.2 主要药物 |
| 1.3 主要试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验技术路线图 |
| 2.2 大鼠含药血清的制备 |
| 2.3 大鼠卵巢颗粒细胞的TP诱导处理 |
| 2.4 实验分组及添加受试药物处理 |
| 2.5 Elisa法检测颗粒细胞分泌E_2、P含量 |
| 2.6 透射电子显微镜下观察各组自噬小体数量 |
| 2.7 RT-qPCR法检测大鼠卵巢颗粒细胞PI3K、AKT、mTOR及自噬相关因子的mRNA相对表达量 |
| 2.8 WB法检测颗粒细胞中的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR及自噬相关因子蛋白表达 |
| 2.9 免疫荧光观察各组颗粒细胞中信号通路及自噬相关因子的表达 |
| 3 统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 药效实验 |
| 4.2 机制实验 |
| 5 讨论 |
| 5.1 补肾活血法治疗卵泡发育障碍类疾病的立法依据 |
| 5.2 补肾活血中药复方新加归肾丸的方药分析 |
| 5.3 阳性对照药物的选择 |
| 5.4 补肾中药复方调控细胞信号转导通路促卵泡发育的实验研究现况 |
| 5.5 调控细胞自噬是中药发挥药理作用的重要机制 |
| 5.6 实验指标意义与结果分析 |
| 6 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 综述一 自噬与中医药延缓卵巢衰老的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 基于“肾主生殖”理论认识细胞自噬与卵泡发育 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文 |
| 在读期间参加的学术会议 |
（4）中药周期疗法调控反复种植失败患者子宫内膜容受性及对Galectin的影响（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 临床研究 |
| 一、临床资料 |
| （一）病例来源 |
| （二）诊断标准 |
| （三）病例选择 |
| 二、研究方法 |
| （一）用药与设备 |
| （二）实验步骤 |
| （三）实验方法 |
| （四）观察指标 |
| （五）统计分析 |
| 三、一般资料 |
| （一） 两组患者年龄（岁）分布比较 |
| （二） 两组患者不孕年限（年）分布比较 |
| （三） 观察组治疗前和对照组血清基础FSH、LH、FSH/LH、E_2比较 |
| （四） 两组患者FET周期移植胚胎数目比较 |
| 四、实验结果 |
| （一）观察组用药前后及对照组中医肾虚证证候评分（分）情况比较 |
| （二）观察组用药前后及对照组血清基础FSH、LH、FSH/LH、E_2比较 |
| （三）观察组用药前后及对照组排卵日血清E_2、P、Galectin比较 |
| （四）观察组用药前后及对照组排卵后6日血清E_2、P、Galectin比较 |
| （五）观察组用药前后及对照组排卵后6日子宫内膜Galectin蛋白定性表达比较 |
| （六）观察组用药前后及对照组排卵后6日子宫内膜Galectin蛋白相对灰度值比较 |
| （七）观察组用药前后及对照组排卵后6日子宫内膜Galectin mRNA表达比较 |
| （八）观察组用药前后及对照组排卵日子宫内膜厚度比较 |
| （九）观察组用药前后及对照组排卵日子宫内膜形态分型比较 |
| （十）观察组用药前后及对照组排卵日子宫内膜下血流分型比较 |
| （十一）两组患者FET周期排卵日子宫内膜厚度比较 |
| （十二）两组患者移植日血清E_2、P比较 |
| （十三）两组患者移植2周血清E_2、P、β-HCG比较 |
| （十四）两组患者FET周期种植率比较 |
| （十五）两组患者FET周期临床妊娠率比较 |
| （十六）两组患者排卵日血清与子宫内膜Galectin蛋白定性表达相关性分析 |
| （十七）两组患者排卵日血清与子宫内膜Galectin蛋白相对灰度值相关性分析 |
| （十八）两组患者排卵日血清与子宫内膜Galectin mRNA表达相关性分析 |
| （十九）两组患者排卵后6日血清与子宫内膜Galectin蛋白定性表达相关性分析 |
| （二十）两组患者排卵后6日血清与子宫内膜Galectin蛋白相对灰度值相关性分析 |
| （二十一）两组患者排卵后6日血清与子宫内膜Galectin mRNA表达相关性分析 |
| 第二部分 讨论 |
| 一、中药周期疗法 |
| （一）中药周期疗法的理论基础 |
| （二）中药周期疗法分期 |
| （三）中药周期疗法临床应用 |
| （四）养精种玉汤与中药周期疗法 |
| 二、RIF与子宫内膜容受性 |
| （一）RIF的病因 |
| （二）改善子宫内膜容受性措施 |
| 三、半乳糖凝集素的作用 |
| （一）免疫调节 |
| （二）炎症应答 |
| （三）妊娠相关 |
| 四、结果分析 |
| （一）观察组用药后肾虚证候得到有效改善 |
| （二）观察组用药后子宫内膜容受性得到有效改善 |
| （三）观察组用药后胚胎种植率及临床妊娠率提高 |
| 第三部分 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录 1 |
| 附录 2 |
| 附录 3 |
| 致谢 |
| 发表着作 |
（5）益气血填肾精分段法在卵巢低反应患者预处理中的助孕作用（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般情况 |
| 1.1.1 诊断标准 |
| 1.1.2 纳入标准 |
| 1.1.3 排除标准 |
| 1.2 治疗方案 |
| 1.2.1 中药组 |
| 1.2.2 对照组 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 治疗前后卵巢储备功能比较 |
| 2.1.1 两组AFC比较 |
| 2.1.2 两组FSH比较 |
| 2.1.3 两组AMH比较 |
| 2.2 两组用药前后临床疗效比较 |
| 3 讨论 |
（6）基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法修复雷公藤多苷致卵泡发育障碍的分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 西医对卵泡发育障碍性疾病的认识及研究 |
| 1 卵泡发育障碍性疾病现状 |
| 2 卵泡发育障碍的病因 |
| 3 卵泡发育障碍性疾病的西医治疗 |
| 4 西医治疗的副反应 |
| 第二部分 中医对卵泡发育障碍性疾病的认识 |
| 1 古代中医对卵泡发育障碍性疾病的认识 |
| 1.1 对病因病机的认识 |
| 1.2 对治疗的认识 |
| 2 现代中医对卵泡发育障碍性疾病的认识 |
| 2.1 对病因病机的认识及辨证论治 |
| 2.2 临床及实验室研究 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 大鼠卵巢颗粒细胞的体外培养及鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 受试药物 |
| 1.4 大鼠含药血清制备方法 |
| 1.5 血清培养基的配制 |
| 1.6 颗粒细胞的分离及原代培养 |
| 1.7 加受试药物 |
| 1.8 HE染色法实验材料、方法及步骤 |
| 1.9 FSHR免疫细胞化学法实验材料、方法及步骤 |
| 1.10 MTT法实验材料、方法及步骤 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 分离颗粒细胞前的大鼠卵巢 |
| 2.2 颗粒细胞原代培养结果 |
| 2.3 HE染色实验结果 |
| 2.4 FSHR免疫细胞化学法实验结果 |
| 2.5 MTT法观察细胞生长情况结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中药含药血清与细胞体外试验 |
| 3.2 中药含药血清给药方案 |
| 3.3 大鼠卵巢颗粒细胞的鉴定 |
| 3.4 大鼠卵巢颗粒细胞各项指标检测时间点 |
| 4 结论 |
| 实验二 基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法修复雷公藤多苷致卵泡发育障碍的分子机制 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物、分组及受试药物 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠含药血清的制备 |
| 2.2 颗粒细胞的分离、原代培养及加受试药物 |
| 2.3 大鼠卵巢颗粒细胞的鉴定 |
| 2.4 MTT法检测颗粒细胞的生长增殖与凋亡 |
| 2.5 免疫印迹法(Western-blotting)检测颗粒细胞中PI3K、p-AKT、p-mTOR、IGF-1及IRS-1的蛋白含量 |
| 2.6 RT-PCR法检测大鼠颗粒细胞中PI3KmRNA、p-AKT mRNA、p-mTORmRNA、IGF-1mRNA及IRS-1mRNA的相对表达量 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果与统计分析 |
| 4.1 MTT法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞的生长、增殖与凋亡 |
| 4.2 各组大鼠卵巢颗粒细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白相对表达量 |
| 4.3 各组大鼠卵巢颗粒细胞IGF-1、IRS-1蛋白相对表达量 |
| 4.4 各组大鼠卵巢颗粒细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR mRNA相对表达量 |
| 4.5 各组大鼠卵巢颗粒细胞IGF-1、IRS-1 mRNA相对表达量 |
| 5 讨论 |
| 5.1 补肾活血法的立法依据 |
| 5.2 补肾活血中药复方新加归肾丸的理法方药分析 |
| 5.2.1 新加归肾丸方义分析 |
| 5.2.2 新加归肾丸单味药物分析 |
| 5.3 选择卵巢颗粒细胞作为研究对象的原因 |
| 5.4 阳性对照药物 |
| 5.5 PI3K/AKT/mTOR信号通路与卵泡发育障碍的关系 |
| 5.6 实验指标意义与结果分析 |
| 5.6.1 补肾活血法对大鼠颗粒细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响 |
| 5.6.2 补肾活血法对大鼠颗粒细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响 |
| 5.6.3 补肾活血法对大鼠颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的影响 |
| 6 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
| 致谢 |
（7）滋勒调经汤对大鼠卵巢颗粒细胞增殖和分泌的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药和试剂 |
| 1.3 试剂的配制 |
| 1.4 实验设备仪器及耗材 |
| 2 实验方法与步骤 |
| 2.1 含药血清的制备和处理 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 大鼠卵巢GC的分离培养与鉴定 |
| 2.4 MTT法检测大鼠卵巢GC的增殖 |
| 2.5 大鼠卵巢GC分泌雌二醇（E_2）和孕酮（P）测定 |
| 2.6 大鼠卵巢GC分泌ActA的测定 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 大鼠卵巢颗粒细胞形态学观察及存活率计算 |
| 3.2 生长曲线的测定 |
| 3.3 卵巢颗粒细胞的鉴定 |
| 3.4 不同浓度滋勒调经汤含药血清对大鼠卵巢 GC 的增殖影响 |
| 3.5 滋勒调经汤含药血清对大鼠卵巢GC雌二醇(E_2)和孕酮(P)的分泌的影响 |
| 3.6 滋勒调经汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞ActA的分泌的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 卵巢颗粒细胞的研究现状 |
| 4.1.1 卵巢颗粒细胞的特性 |
| 4.1.2 卵巢GC促卵泡发育作用研究 |
| 4.1.3 卵巢GC体外分泌功能的研究 |
| 4.2 药物干预对GC增殖和分泌的影响 |
| 4.2.1 药物对GC增殖的影响 |
| 4.2.2 药物对GC分泌的影响 |
| 4.3 中药血清药理学在本实验的应用 |
| 4.4 滋勒调经汤的功效特点 |
| 4.4.1 滋勒调经汤组方理论依据 |
| 4.4.2 滋勒调经汤组方药物研究 |
| 4.4.3 滋勒调经汤组方特点 |
| 4.5 滋勒调经汤含药血清对GC的作用机制探讨 |
| 5 存在的问题和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略写词 |
| 综述 中医药对卵巢颗粒细胞的影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（8）MAPK信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
（9）养精种玉汤对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞PCNA、StAR、FSHR mRNA与蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
（10）补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
四、养精种玉汤加减提取液对离体培养的兔卵巢颗粒细胞雌二醇生成的影响（论文参考文献）
- [1]养精种玉加味方干预肾精亏虚证卵巢储备功能减退患者排卵提早的临床研究[D]. 苗津东. 山东中医药大学, 2018(01)
- [2]补肾益气和血法中药对IVF-ET患者血清相关因子及妊娠结局的影响[D]. 刘敏. 湖北中医药大学, 2018(11)
- [3]基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法调控大鼠卵巢颗粒细胞自噬的分子机制[D]. 白俊. 成都中医药大学, 2018(01)
- [4]中药周期疗法调控反复种植失败患者子宫内膜容受性及对Galectin的影响[D]. 曹媛媛. 山东中医药大学, 2017(03)
- [5]益气血填肾精分段法在卵巢低反应患者预处理中的助孕作用[J]. 王铮,滕晓明,俞而慨. 中国妇幼保健, 2017(09)
- [6]基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究补肾活血法修复雷公藤多苷致卵泡发育障碍的分子机制[D]. 陆柳如. 成都中医药大学, 2016(05)
- [7]滋勒调经汤对大鼠卵巢颗粒细胞增殖和分泌的影响[D]. 梅巧. 广西中医药大学, 2016(06)
- [8]MAPK信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制[J]. 叶丹凤,马红霞,吴婉婷,赖毛华,刘华,郑艳华,马婉莹. 中国中西医结合杂志, 2015(07)
- [9]养精种玉汤对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞PCNA、StAR、FSHR mRNA与蛋白表达的影响[J]. 郑艳华,丁涛,马红霞,叶丹凤,苏念军,吴效科. 中国中西医结合杂志, 2014(03)
- [10]补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响[J]. 宋翠淼,杨宏敏,陆君,周楠,路帅,段彦苍,马惠荣,徐华洲,杜惠兰. 中国中西医结合杂志, 2014(03)