一、清热解毒益气活血药对弹性蛋白酶活力的影响（论文文献综述）
蔡甜甜[1]（2021）在《健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究》文中提出目的:1.通过一项探索性临床研究,采用随机、双盲安慰剂对照临床试验方法,观察健脾益肺Ⅱ号方中医药早期干预治疗COPD的有效性和安全性,探讨中医药早期干预能否延缓COPD病情进展,避免或减少急性加重的发生,为中医药防治COPD提供循证医学依据,为进一步研发针对COPD的中药新药提供临床研究基础。2.通过观察香烟暴露对呼吸道病毒感染后小鼠宿主免疫应答的影响,以及呼吸道病毒感染在诱发COPD急性加重过程中的免疫病理改变,建立符合慢阻肺急性加重的急性气道炎症模型,为后续中药减少病毒感染诱发慢阻肺急性加重的药理学研究提供实用性工具。3.利用熏烟联合流感病毒感染的小鼠动物模型,以健脾益肺Ⅱ号减少急性加重为出发点,探讨健脾益肺Ⅱ号减少熏烟联合流感病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制,探讨中医培土生金法的现代科学内涵,为研发针对预防COPD急性加重的药物提供研究基础。方法:1.随机对照探索性临床试验:健脾益肺Ⅱ号治疗COPD稳定期Ⅰ-Ⅱ级探索性临床研究探索性临床研究,采用随机双盲安慰剂平行对照研究方法,纳入符合COPD稳定期Ⅰ-Ⅱ级患者,采用健脾益肺Ⅱ号与健脾益肺Ⅱ号安慰剂进行疗效比较,随机分为治疗组和安慰剂组,治疗组给予健脾益肺Ⅱ号方颗粒剂,每日1剂,分成2袋,每次1袋,1天2次;安慰剂组给予健脾益肺Ⅱ号方安慰颗粒剂,每日1剂,分成2袋,每次1袋,1天2次。筛查期2周,治疗12周,随访12周。记录并测定两组患者治疗前后组间急性加重频次以及急性加重发生率,并且评估组间治疗前后肺功能、SGRQ、CAT量表、mMRC评分、BODE指数改变情况,探索健脾益肺Ⅱ号方干预治疗COPD的疗效并观察药物使用的安全性,探讨中医药干预能否延缓COPD病情进展,避免或减少急性加重的发生,为中医药防治慢阻肺提供循证医学依据。2.基础研究:健脾益肺Ⅱ号方减轻香烟暴露联合病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制（1）香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道免疫细胞的影响选取SPF级雌性Balb/c小鼠,随机分成4组:假熏烟假攻毒组,熏烟假攻毒组,假熏烟攻毒组,熏烟联合攻毒组。第1-4天对小鼠进行熏烟处理,3次/天,每次3支香烟,烟雾用60ml注射器注入熏烟箱中。于9am,12am,3pm进行,每次1h;第5天进行攻毒,用1ml注射器共抽取2ml异氟烷均匀洒在麻醉瓶中,随后将小鼠置于麻醉瓶中旋紧瓶盖,待小鼠出现深快呼吸后取出,迅速向小鼠鼻内滴注PR8病毒30ul/只。假熏烟小鼠放入另一干净且相同大小的塑料箱内,不做熏烟处理;假攻毒组鼻内滴注MEM培养基30ul/只,其余操作同上,分别观察攻毒后5天小鼠变化。第10天取材留取小鼠支气管肺泡灌洗液,检测细胞计数和细胞分类计数:留取小鼠肺组织用实时定量PCR法检测小鼠肺组织细胞因子、趋化因子、金属蛋白酶、病毒复制水平及干扰素mRNA表达水平。（2）健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响选取SPF级雌性Balb/c小鼠,随机分成8组:分别为假熏烟假攻毒组;假熏烟假攻毒+JPYFⅡ治疗组;假熏烟攻毒组;假熏烟攻毒+JPYFⅡ治疗组;熏烟假攻毒组;熏烟假攻毒+JPYFⅡ治疗组;熏烟联合攻毒组;熏烟联合攻毒+JPYFⅡ治疗组,每组10只。熏烟、攻毒方法同上。药物干预组,造模方法同熏烟联合攻毒组,从第1天开始进行药物干预,连续给药10天。第10天部分进行小鼠肺功能检测;其余小鼠取材,留取小鼠支气管肺泡灌洗液,用于检测细胞计数和细胞分类计数;留取小鼠肺组织实时定量PCR法检测各组肺组织细胞因子、趋化因子以及金属蛋白酶、病毒NP以及干扰素mRNA表达情况;化学发光法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液ROS的产生,Western Blot法检测各组小鼠肺组织gp91和HO-1的蛋白表达;病毒空斑实验观察健脾益肺Ⅱ号方对小鼠病毒载量的影响;以及观察健脾益肺Ⅱ号方对小鼠肺功能的影响。（3）熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究选取SPF级雌性Balb/c小鼠60只,随机分成6组:分别为假熏烟假攻毒组;熏烟联合攻毒（3天）组;熏烟联合攻毒（3天）+PYFⅡ治疗组;假熏烟假攻毒组;熏烟联合攻毒（5天）组;熏烟联合攻毒（5天）+JPYFⅡ治疗组;每组10只。熏烟联合攻毒组第1-4天进行熏烟处理,第5天进行攻毒,分别观察攻毒后3天和5天小鼠情况。熏烟联合攻毒+JPYFⅡ治疗组,造模方法同前,从第1天开始进行药物干预,连续给药5天。假熏烟假攻毒组,标准饲养8、10天,不做任何干预。留取小鼠支气管肺泡灌洗液,用于检测细胞计数和细胞分类计数;Real-time PCR法检测肺组织中细胞因子、病毒复制水平,观察健脾益肺Ⅱ号方对熏烟联合病毒感染小鼠持续预防作用。结果:1.临床研究:本次探索性临床试验共入组慢阻肺患者62例,纳入全分析集患者共62例,治疗组和安慰剂组各31例,其中安慰剂组脱落2例。对比治疗组和安慰剂组两组患者性别、年龄,体重指数,两组患者慢阻肺严重程度,包括两组患者基线时CAT、SGRQ、mMRC、BODE指数、6WMT;以及慢阻肺基线肺功能情况,包括舒张前后FEV1、FVC的情况。经过治疗组和安慰剂组的基线情况比较,两组间各指标差异均无统计学意义,具有可比性（P>0.05）。治疗组较安慰剂组可显着性降低患者CAT评分（P<0.05）、SGRQ评分（P<0.05）、mMRC评分（P<0.05）,减少慢阻肺急性加重发生频次（P<0.05）,一定程度降低急性加重发生率（P>0.05）;治疗组对运动耐力具有一定程度的改善作用,但治疗后在BODE指数改善与安慰剂比较无显着性差异（P>0.05）。对于肺功能改善方面,与安慰剂相比,健脾益肺Ⅱ号颗粒剂对于舒张后FVC和舒张后FEV1/FVC具有改善趋势,但组间差异无统计学意义（P>0.05）。治疗组和安慰剂组都有不良事件发生,但两组患者不良事件发生率均较低,且与用药无因果关系。2.基础研究:（1）香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道免疫细胞的影响①熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞计数的影响攻毒5天后,与假熏烟假攻毒组相比,熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、巨噬细胞均显着性增多（P<0.05）;熏烟联合攻毒组小鼠细胞总数、中性粒细胞数较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;熏烟联合攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数、巨噬细胞数较假熏烟假攻毒组与假熏烟攻毒组显着性增多（P<0.05）。②熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠肺组织中炎症因子、趋化因子、金属蛋白酶及对支气管肺泡灌洗液ROS产生的影响与假熏烟假攻毒组相比,假熏烟攻毒组小鼠肺组织中IL-6表达水平显着性升高（P<0.01）;与熏烟假攻毒组相比,假熏烟攻毒组小鼠肺组织IL-6、MMP12表达显着性增多（P<0.05）;与熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组相相比,熏烟攻毒组小鼠肺组织MMP12表达水平显着性升高（P<0.01）。假熏烟攻毒组、熏烟攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液R0S产生速率较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;与假熏烟攻毒组相比,熏烟联合攻毒组小鼠支气管肺泡灌洗液R0S产生速率显着性升高（P<0.05）。熏烟攻毒小鼠肺组织CXCL1、CXCL5、CCL2表达水平较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组显着性升高（P<0.05）;与假熏烟攻毒组相比,熏烟攻毒组小鼠肺组织CXCL5表达水平显着性升高（P<0.01）。③熏烟、病毒感染及熏烟联合流感病毒感染对小鼠肺组织肺部病毒复制水平及干扰素表达的影响与熏烟假攻毒组相比,假熏烟假攻毒组、假熏烟攻毒组、熏烟联合攻毒组小鼠肺组织IFN α、IFN β表达水平有显着性升高（P<0.05）。熏烟联合攻毒组小鼠肺组织Influenza matrix、NP表达水平较假熏烟假攻毒与熏烟假攻毒组均显着性升高（P<0.05）。（2）健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响①健脾益肺Ⅱ号可减轻熏烟联合流感病毒诱导的气道炎性细胞浸润与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性减少小鼠细胞总数、中性粒细胞数（P<0.01）。②健脾益肺Ⅱ号可降低香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的肺组织炎症因子、趋化因子及金属蛋白酶表达与熏烟攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低小鼠肺组织IL-6、CXCL1、CXCL2表达水平（P<0.05）,也可降低小鼠肺组织CXCL5、CCL2表达,但无统计学差异（P>0.05）。③健脾益肺Ⅱ号方可减轻香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的肺部氧化应激攻毒5天后,与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着降低小鼠支气管肺泡灌洗液中ROS表达水平,可显着性降低熏烟联合攻毒小鼠肺组织HO-1、gp91的表达水平（P<0.05）。④健脾益肺Ⅱ号可减少香烟暴露、流感病毒感染及二者联合小鼠肺部病毒复制水平及干扰素表达病毒空斑实验发现,与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低熏烟联合攻毒小鼠病毒载量（P<0.05）。与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性降低小鼠肺组织NP表达水平（P<0.01）。⑤健脾益肺Ⅱ号方增加香烟联合流感病毒感染小鼠吸气量（IC）和用力肺活量（VC）小鼠肺功能实验发现,与假熏烟假攻毒组相比,熏烟联合攻毒组小鼠功能残气量FRC有显着性升高（P<0.01）;与熏烟联合攻毒组相比,健脾益肺Ⅱ号可显着性升高小鼠IC深吸气量、VC肺活量（P<0.05）。（3）熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究①健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合病毒感染小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数持续作用的影响健脾益肺Ⅱ号未能降低熏烟联合攻毒小鼠支气管肺泡灌洗液细胞总数,与之前结果相反,健脾益肺Ⅱ号增加了攻毒后第5天细胞总数的数量。②健脾益肺Ⅱ号对熏烟联合病毒感染小鼠肺组织炎症因子、Influenza matrix持续作用的影响与熏烟联合攻毒组相比,感染前给予健脾益肺Ⅱ号未能改善感染后第3天和第5天免疫细胞浸润与炎症因子的表达。与之前结果相反,健脾益肺Ⅱ号增加了攻毒后第5天小鼠肺组织IL-1 β和IL-6的表达水平。结论:1.本研究为一项随机、双盲安慰剂对照的探索性临床研究,通过观察健脾益肺Ⅱ号对急性加重发生的影响,发现健脾益肺Ⅱ号颗粒剂可减少患者急性加重的频次,提高早期慢阻肺患者生活质量、改善临床症状,疗效优于安慰剂,且具有良好的安全性。早期对COPD患者进行干预,特别是稳定期有效干预,将改善患者生存质量,是减少COPD急性加重的重要手段,对于延缓疾病进展以及减轻患者经济负担具有重要的意义。本研究证实健脾益肺Ⅱ号可减少慢性肺病人急性加重,基于这一发现我们对健脾益肺Ⅱ号在减少慢阻肺急性加重发生方面的潜在作用机制将进行深入探讨。2.香烟暴露联合低剂量流感病毒感染会增加小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞数量,尤其是诱导小鼠气道以巨噬细胞和中性粒细胞增多为主的气道炎症,伴随急性炎症因子升高,过氧化物的增多和金属蛋白酶表达升高,且气道炎症浸润、氧化应激、金属蛋白酶以及肺部病毒载量水平明显高于单纯熏烟或单纯病毒感染小鼠。本研究一方面明确了香烟烟雾暴露和流感病毒感染是小鼠发生气道炎症重要的致病因素,初步探讨了香烟暴露对病毒诱导气道炎症的影响;另一方面通过熏烟联合病毒感染,成功建立了慢阻肺气道炎症模型,为后续中药减少病毒感染诱发慢阻肺急性加重的药理学研究提供实用性工具。3.健脾益肺Ⅱ号方减少了熏烟联合病毒感染小鼠气道炎症细胞的浸润,尤其中性粒细胞下调明显,并可抑制熏烟联合病毒感染小鼠促炎细胞因子、趋化因子的表达,减少了肺组织免疫细胞的募集,对氧化应激起到了抑制作用,并可减少流感病毒的复制。表明健脾益肺Ⅱ号方对熏烟联合病毒感染小鼠肺部炎症、氧化应激具有抑制作用,可能与健脾益肺Ⅱ号方的抗病毒作用密切相关。从而可保护小鼠肺组织免受病毒感染所引起的炎症攻击,可能具有治疗流感病毒诱发慢性阻塞性肺疾病急性加重的作用。4.健脾益肺Ⅱ号方未能在熏烟阶段通过改善肺部损伤及炎症状态,从而减少病毒诱导的急性炎症;健脾益肺Ⅱ号方减少流感病毒诱导的熏烟小鼠气道炎症和氧化应激的主要环节可能在于流感病毒感染阶段;此外单纯的抗病毒作用,可能不足以改善病毒诱导的熏烟小鼠肺组织急性炎症。
乔波[2]（2021）在《益气涤痰破瘀方治疗慢阻肺调控ACE-AngⅡ-AT1R轴的机制研究》文中指出目的:本研究选用云南省名中医李庆生教授治疗慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）有效方-益气涤痰破瘀方,观察该方对COPD模型大鼠ACE-AngⅡ-AT1R轴以及肺表面活性物质的影响,为该方的开发研究提供实验依据。方法:1.气管内滴注脂多糖联合香烟烟熏法复制COPD模型大鼠,通过观察大鼠的一般形态,肺组织病理以及肺组织炎细胞浸润情况等评价模型是否复制成功。2.制备益气涤痰破瘀方水煎液,并以灌胃的方式开始药物干预,给药28天后取材进行指标检测。3.采用酶联免疫吸附法对血清中TNF-α、ICAM-1、IL-8、SELE、AngⅡ表达情况进行测定。4.采用实时荧光定量聚合酶链式反应对肺组织TNF-α、ICAM-1、SELE、SP-A、SP-D、ACE、AT1R mRNA相对表达水平进行测定。5.采用蛋白质印迹法检测肺组织ACE、AT1R蛋白表达水平。6.采用免疫组化法检测肺组织中SP-A、SP-D蛋白表达相对强对和位置。结果:1.益气涤痰破瘀方可改善COPD大鼠一般状态和肺组织病理改变:（1）与模型组相比,给予益气涤痰破瘀方干预后,大鼠咳嗽、气喘、呼吸急促、体量减轻、精神倦怠等有所改善。（2）光镜下发现,同模型组相比,益气涤痰破瘀方干预后炎症细胞浸润明显减轻、支气管管壁无明显增厚,肺泡相对完整等。（3）电镜下发现,与模型组相比,益气涤痰破瘀方干预后肺泡壁轻度水肿、毛细血管内皮细胞轻度水肿、肺泡腔I型上皮结构正常、线粒体结构轻度水肿等。2.益气涤痰破瘀方可降低大鼠血清和肺组织中炎症因子TNF-α、ICAM-1、IL-8、SELE表达,缓解炎症反应。（1）与模型组相比,益气涤痰破瘀方高、中、低剂量组大鼠血清中炎症因子TNF-α、ICAM-1、IL-8、SELE含量均有不同程度降低（P<0.05）。（2）与模型组相比,益气涤痰破瘀方高、中剂量组肺组织中TNF-α、ICAM-1、SELE mRNA相对表达水平显着下降（P<0.05）;低剂量组组TNF-α、SELE mRNA相对表达水平显着下降（P<0.05）。3.益气涤痰破瘀方可提高大鼠肺组织中肺表面活性蛋白A、D表达。（1）与模型组相比,益气涤痰破瘀方中剂量组SP-A mRNA相对表达水平显着升高（P<0.05）;高、低剂量组SP-D mRNA相对表达水平显着升高（P<0.05）。（2）与模型组相比,益气涤痰破瘀方高剂量组SP-A和SP-D积分光密度（IOD）显着增强（P<0.05）,中、低剂量SP-D表达升高（P<0.05）。4.益气涤痰破瘀方可抑制ACE-AT1R-AngⅡ途径表达。（1）与模型组相比,益气涤痰破瘀方中、低剂量ACE、AT1R mRNA相对表达水平显着升高（P<0.05）。（2）与模型组相比,益气涤痰破瘀方中剂量组肺组织中ACE和AT1R蛋白表达显着下降（P<0.05）,低剂量组ACE蛋白表达显着下降（P<0.05）。（3）与模型组相比,益气涤痰破瘀方高、中、低剂量组大鼠血清中AngⅡ表达水平均有不同程度降低（P<0.05）。结论益气涤痰破瘀方可以抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴表达,提高SP-A、SP-D表达,缓解炎症反应,改善气血屏障损伤,可能为治疗COPD的作用机制之一。
张嘉鑫[3]（2021）在《基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究》文中研究表明背景:肝硬化（Hepatic cirrhosis,HC）为肝脏受各种损伤因素侵袭,出现以肝纤维化、假小叶为特点的疾病,由乙肝病毒、丙肝病毒、酒精等一种或多种病因引起。5年生存率为14-35%,已成为全球成人死亡率第14高的病因。目前的治疗主要集中在病因与并发症防治方面,肝硬化本身能否被逆转一直存在争议。国内外学者认为,肝硬化实现逆转必然涉及以下三方面环节:细胞外基质（extracellular matrix,ECM）降解,肝细胞再生及肝小叶结构重建。其中,ECM降解为重要前提。近年研究提示,弹性蛋白合成、降解及其交联阻碍了 ECM降解,进而影响逆转过程。弹性蛋白是由肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分泌的,为ECM重要组分。其在正常肝脏中也存在,但含量极低,在肝硬化阶段,沉积迅速。目前,中药单体、复方研究多集中于抗纤维化领域,对早期肝硬化关注较少,需要更多基础研究及高质量的临床试验进一步证实中药疗效优势,并对其相关机制进行深入挖掘。中药复方具有多层次、多靶点的先天优势,但现有研究多聚焦于抑制HSCs活化、促进胶原降解或抗肝窦毛细血管化等方向,尚未对中医药潜在的调控弹性蛋白合成及降解的相关机制进行探索。目的:基于益肝消积方对弹性蛋白合成及降解的调控作用,探索在四氯化碳（CCl4）诱导的肝脏发生损伤形成早期肝硬化病变后,该复方干预早期肝硬化的效果及其可能的机制,以期为益肝消积方进一步成果转化提供理论支撑,同时亦为其它防治早期肝硬化药物的研发提供方向。方法:通过给予SPF级雄性Sprague Dawley大鼠（200±10g）1ml/kg腹腔内注射50%CCl4和橄榄油混合液,2次/周,共6周,构建早期肝硬化模型。7周始,予益肝消积方、阳性对照药（安络化纤丸）,1ml/100g剂量灌胃。空白对照、模型对照组予等剂量蒸馏水灌胃,日1次,持续6周。用生化法检测ALT、AST评估肝功能;行组织病理学染色（HE染色、天狼猩红染色及Masson染色）评估早期肝硬化病变进展、检测肝脏胶原沉积;用弹性纤维染色评估肝脏的弹性蛋白沉积;免疫组织化学染色、免疫荧光染色观察肝组织中TGF-β1、CD68、CD80、CD163和α-SMA表达情况;用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）分析以及实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-βR-Ⅱ、Smad2/3、P-Smad2/3、Smad4、Smad7、Sp1、TNF-α、Ras、MEK1/2、ERK1/2、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1的蛋白水平及bFGF、弹性蛋白（Elastin）的mRNA水平变化,进而对益肝消积方干预早期肝硬化的作用及其相关机制进行初步探索。结果:1.模型制备:予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周。造模6周后,组织病理染色发现,模型组大鼠肝脏出现大量纤维增生,汇管区增宽,形成假小叶,说明模型制备成功。2.一般情况:益肝消积方治疗组及阳性对照安络化纤丸组大鼠毛色、精神状态、进食量等方面均优于模型组。体重上,治疗组大鼠体重均明显高于模型组（P<0.01）;体重增长趋势上,益肝消积方组优于安络化纤丸组。3.肝功能:与正常组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST含量升高显着（P<0.01）。益肝消积方和阳性对照组（安络化纤丸）较模型组显着下降（P<0.05或P<0.01）。与安络化纤丸相比,益肝消积方在改善ALT方面疗效较优。4.肝组织病理学表现:从肝脏外观看,模型组大鼠颜色变暗,体积缩小,表面粗糙,边缘较钝,质地较硬韧,部分肝脏在剥离时与胸膜腔其他组织相粘连,难以剥离。益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝体积缩小不明显,表面粗糙不明显,质地较柔韧,未发现与胸腔其他组织粘连,较易剥离。此外,通过组织学染色（HE染色、Masson染色、天狼猩红染色）发现,与模型组大鼠相比,益肝消积方和安络化纤丸治疗后的大鼠肝脏炎性细胞浸润程度减轻,病变范围减小,汇管区及周围纤维增生程度减轻,假小叶数量明显减少,且胶原纤维等细胞外基质成分沉积减少（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方抑制胶原沉积的效果较好。说明益肝消积方能够有效抑制炎细胞浸润,减少胶原纤维过度沉积,从而发挥干预早期肝硬化的作用。5.弹性纤维染色结果:为观测弹性纤维变化,我们对其进行了特殊染色。实验发现,在早期肝硬化阶段,模型组弹性纤维含量增多迅速,显着高于空白对照组（P<0.01）。益肝消积方、安络化纤丸治疗组与模型组相比,弹性纤维含量显着减少（P<0.01）,且益肝消积方效果较明显。6.免疫组化、免疫荧光染色结果:与空白对照组相比,模型组TGF-β1、α-SMA、CD68、CD80、CD163阳性表达区域明显增多。与模型组相比,益肝消积方、安络化纤丸组阳性区域明显减少。7.qRT-PCR结果:模型组与空白对照组相比,ElastinmRNA表达量显着升高（P<0.01）。与模型组相比,益肝消积方治疗组ElastinmRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方减少ElastinmRNA表达更显着;模型组bFGF mRNA较正常组升高显着（P<0.01）。对比模型组,益肝消积方治疗组bFGF mRNA表达量显着下降（P<0.01）。对比安络化纤丸,益肝消积方下调bFGF mRNA表达更显着。8.Western blot 结果:与空白对照组相比,模型组 Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显升高（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2 蛋白表达含量明显下降（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,益肝消积方治疗组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、CCL2、CCR2、TGF-β1、TGF-β RⅡ、P-Smad2/3、Smad4、Ras、Sp1、MMP-2、MMP-9、MMP-12、TIMP-1 蛋白表达含量明显降低（P<0.05 或 P<0.01）,Smad7、TNF-α、MEK1/2蛋白表达含量明显上升（P<0.05或P<0.01）。结论:1.予50%CCl4/橄榄油混合液,腹腔注射,1ml/kg,2次/周,共6周,可成功制备早期肝硬化大鼠模型。予益肝消积方干预后,可改善早期肝硬化大鼠体重、肝功能;有效抑制早期肝硬化大鼠肝脏炎性细胞浸润,肝细胞变性、坏死,胶原纤维（Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ）、弹性纤维等ECM沉积,改善病变程度。2.益肝消积方可抑制α-SMA表达,下调CD68、CD80、CD163表达量,抑制CCL2-CCR2通路,进而具有抑制HSCs激活,抑制单核/巨噬细胞浸润,及向M2型巨噬细胞极化,阻止单核/巨噬细胞向损伤肝组织部位迁移,减少Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和Elastin含量,发挥干预早期肝硬化的作用。3.益肝消积方能通过 TGF-β1/Smads、TGF-β1/Ras/ERK 和 bFGF、TNF-α/MEK/ERK信号转导通路抑制胶原纤维、弹性纤维等ECM合成,发挥干预早期肝硬化的作用。4.益肝消积方可通过调节MMPs/TIMPs酶系,促进胶原纤维、弹性纤维等ECM降解,达到干预早期肝硬化的作用。
李昭融[4]（2021）在《13味中草药及八正散对泌尿系感染致病菌体外抑菌作用研究》文中进行了进一步梳理目的:研究13味中草药及复方八正散对7种泌尿系感染致病菌的体外抑菌效果,通过对两组实验的MIC值、MBC值及FIC值的分析,筛选出具有较好抑菌作用的中草药,以期减少抗菌药物的使用并为临床治疗泌尿系感染疾病提供新思路。方法:本研究采用体外抑菌实验,运用平板打孔法和试管二倍稀释法研究金银花、连翘、黄柏、黄芩、黄连、车前子、瞿麦、扁蓄、滑石、栀子、甘草、川木通、大黄13味常用中草药对屎肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌7种泌尿系感染致病菌的抑菌效果,记录各味中草药的抑菌圈直径大小、MIC值及MBC值,再使用中西药联合的方法观察复方八正散联合盐酸左氧氟沙星胶囊和头孢呋辛酯胶囊不同时间梯度联合使用时的FIC值,以研究中西药联合在不同时间梯度对泌尿系耐药菌的抑制效果。结果:13味中草药对7种泌尿系致病菌均有不同程度的抑菌作用。1.屎肠球菌:金银花、连翘、黄柏、黄芩、黄连、甘草、大黄对屎肠球菌的抑菌环直径分别为9.2、6.6、11.3、15.6、18.6、12、11.4mm,以上中药对屎肠球菌的MIC值分别为250～125、250～125、125～62.5、62.5～31.25、62.5～31.25、125、250～125mg/m L,车前子、瞿麦、萹蓄、滑石、栀子、木通对屎肠球菌无抑制作用。2.粪肠球菌:金银花、连翘、黄柏、黄芩、黄连、甘草、大黄对粪肠球菌的抑菌环直径分别为7.5、12、12.6、14.5、17、16.3、11.3mm,以上中药对粪肠球菌的MIC值分别为500、250～125、125～62.5、62.5、62.5～31.25、125～250、125mg/m L,车前子、瞿麦、萹蓄、滑石、栀子、木通对粪肠球菌无抑制作用。3.大肠埃希菌:金银花、连翘、黄柏、黄芩、黄连、甘草、大黄对大肠埃希菌的抑菌环直径分别为7.6、6.2、7.8、15.3、18.5、10.8、8.9mm,以上中药对大肠埃希菌的MIC值分别为250、>500、250、125～62.5、31.25、250、250～125mg/m L,连翘对大肠埃希菌有抑菌环,但抑菌作用不明显,车前子、瞿麦、萹蓄、滑石、栀子、木通对大肠埃希菌无抑制作用。4.黄芩对产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的抑菌环直径分别为13、13.7、11.2、9.7mm,黄连对以上4种菌株的抑菌直径分别为12、14、10.5、9.3mm;黄芩、黄连对以上4种菌株的MIC值均位于500～250mg/m L范围之间。5.黄柏、大黄对粪肠球菌的MBC值位于500～250mg/m L之间;黄芩、黄连对屎肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌的MBC值均大于等于250mg/m L,除以上中草药对7种泌尿系致病菌有部分杀菌作用外,其余中草药对致病菌的杀菌作用均不明显。6.当实验菌为产ESBLs大肠埃希菌时,复方八正散作用0h和2h后加入左氧氟沙星溶液,FIC指数分别为1,两药联用对实验菌的抑制起相加作用。八正散作用4h后加入左氧氟沙星溶液,FIC指数为0.5,两药联用对实验菌起协同作用。复方八正散作用0h后加入头孢呋辛酯溶液,FIC指数为2.5,两药联用对实验菌呈拮抗作用。八正散作用2h和4h后加入头孢呋辛酯溶液,FIC指数为1.25,两药联用呈无关作用。7.当实验菌为产ESBLs肺炎克雷伯菌时,复方八正散作用0h后加入左氧氟沙星溶液,FIC指数为1,两药联用对实验菌的抑制起相加作用。八正散作用2h和4h后加左氧氟沙星溶液,FIC指数为2.06,两药联用起拮抗作用。八正散作用2h后加入头孢呋辛酯溶液,FIC指数为0.625,两药联用呈相加作用。八正散作用0h和4h后加入头孢呋辛酯,FIC指数为1.25,两药联用呈无关作用。结论:不同中药对不同菌株的抑菌效果差异较大,且杀菌效果并不明显。黄芩、黄连、黄柏、甘草、大黄对屎肠球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌的抑菌效果较好,而金银花、连翘的抑菌作用较弱,车前子、瞿麦、萹蓄、滑石、栀子、木通对以上菌株无抑制作用;除了黄芩、黄连对产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌具有抑菌效果且效果相近外,其余中草药对以上菌株均无抑菌作用。八正散作用0h、2h和4h后加入左氧氟沙星溶液对产ESBLs大肠埃希菌的抑制起相加或协同作用,八正散作用0h后加入左氧氟沙星溶液对产ESBLs肺炎克雷伯菌的抑制起相加作用,八正散作用2h后加入头孢呋辛酯溶液对产ESBLs肺炎克雷伯菌的抑制起相加作用。其余时间梯度两药联合对致病菌的抑制效果欠佳。
黄婷[5]（2021）在《平肺口服液治疗急性放射性肺损伤的实验研究》文中进行了进一步梳理近年来胸部恶性肿瘤的发病率居高不下,放疗是其主要治疗手段之一,导致的放射性肺损伤（radiation induced lung injury,RILI）是最常见也最限制放疗剂量甚至应用的并发症之一,按照病程可分为急性期的放射性肺炎（radiation pneumonitis,RP）和慢性期的放射性肺纤维化（radiation induced lung fibrosis,RILF）,不仅降低肿瘤局部控制率,更严重损害患者的生活质量,进展至后期往往可危及生命。关于防治RILI的药物研究已进行多年,然而从动物实验成功应用于临床的药物很少,目前临床上仍以肾上腺皮质激素、广谱抗生素、支气管扩张剂以及免疫抑制剂来治疗,既无较好疗效,也无预防作用。目前中药已广泛用于临床RILI的防治,其疗效和安全性都得到了较为普遍的认可。RILI发生机制目前尚不十分明晰,可以确定的是,氧化应激反应与RILI的发生、发展密切相关。研究表明,HO-1是机体内最经典的防御酶之一,受P38MAPK/Nrf2信号通路调控表达,可有效拮抗氧化应激以维持细胞自身功能稳定,在各种急慢性应激损伤中发挥着重要作用。目的:平肺口服液是中日友好医院肿瘤内科李佩文教授以养阴清肺、解毒散结为治法组方而成的院内制剂,以往临床及实验研究发现,平肺口服液可降低RP及RILF的发生率,提高患者生活质量。本研究旨在以往研究的基础上,通过对平肺口服液治疗的急性RILI大鼠模型肺组织HO-1的检测,探究其治疗RILI的机制与其对HO-1表达调控的关系,并通过对肺组织中P38MAPK及Nrf2蛋白表达的检测,探究其是否通过P38MAPK/Nrf2信号转导通路调控HO-1的表达,从而初步阐明平肺口服液治疗RILI的可能机制。方法:将18只6周龄的SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组及平肺口服液组,予除对照组外的另2组大鼠单次全胸照射20Gy以建立RILI模型。对照组和模型组经胃灌注生理盐水2ml/（只·d）,平肺口服液组则灌注等量的平肺口服液（20g/kg/（只·d））,各组于造模当日起开始灌胃给药,持续至照射后4周,期间观察并记录大鼠一般状况。至第4周处死大鼠,摘取全肺,称重,计算肺指数,采用HE染色观察其肺组织病理形态变化,免疫组化法测定肺组织中HO-1、Nrf2及P38MAPK的蛋白表达水平。实验数据采用SPSS18.0统计学软件进行统计分析。结果:（1）大鼠整体情况:模型组大鼠照射后逐渐出现拱背、竖毛、脱毛、呼吸加快、摄食饮水量下降、活动量减少以及精神状态异常等表现。照射2周后相继出现胸背部受照区域皮毛枯槁脱落,眼周、鼻周红赤,眼睛无神伴有少量黄色分泌物,大便干硬,至照射后4周脱毛明显,背部出现脱毛带,尾巴发黄无光泽,且较对照组明显消瘦。平肺口服液组大鼠外观、营养及精神状态等方面均明显好于模型组。（2）肺指数:模型组大鼠肺湿重在1.8g-2.9g之间,肺指数7.90±0.49（mg/g）,较对照组肺指数（3.95±0.14（mg/g））显着升高（P<0.01）;平肺口服液组肺湿重在1.3g-1.7g之间,肺指数4.79±0.22（mg/g）,与模型组比较明显下降（P<0.05）。（3）肺组织形态学:模型组大鼠肺体积增大、水肿明显,表面可见大片充血;镜下见水肿、渗出等炎性改变面积广泛且程度较重,部分肺泡结构塌陷融合;肺泡炎损伤评分总体以3分为主（占66.67%）,与对照组相比差异显着。平肺口服液组大鼠双肺色泽、充血水肿、表面瘀斑等情况较对照组均有不同程度的改善;镜下见炎细胞浸润、肺泡壁增厚、肺泡结构破坏等RILI表现的程度、范围均不似模型组严重,肺泡炎损伤评分以2分为主（占83.33%）且未见3分,整体炎性改变程度明显低于模型组。（4）HO-1的蛋白表达:与对照组比较,模型组大鼠肺组织中HO-1蛋白表达增多（P<0.05）;相较于模型组,平肺口服液组HO-1蛋白水平显着上升（P<0.05）。（5）Nrf2的蛋白表达:模型组大鼠肺组织中Nrf2蛋白表达较对照组增多,但无统计学意义;与模型组对比,平肺口服液组Nrf2蛋白表达水平显着提高（P<0.05）。（6）P38MAPK的蛋白表达:与对照组比较,模型组大鼠肺组织中P38MAPK蛋白表达显着增加（P<0.01）;与模型组对比,平肺口服液可下调P38MAPK蛋白表达水平(（P<0.05）。结论:平肺口服液能明显改善急性放射性肺损伤模型大鼠的一般情况,有效减轻肺内炎症反应,其作用机制可能与调控P38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路从而拮抗氧化应激反应有关。
张静怡[6]（2021）在《“止痒平肤液”治疗EGFRIs相关中重度皮疹的RCT研究及作用机制探讨》文中提出表皮生长因子受体抑制剂（epidermal growth factor receptor inhibitors,EGFRIs）由于在非小细胞肺癌和结直肠癌等恶性肿瘤的治疗中突出的疗效,得到了广泛的认可,目前临床应用较多,但其伴随的不良反应也给接受治疗的患者带来了很大的困扰。作为EGFRIs相关皮肤不良反应中出现最早、发生率最高的EGFRIs相关皮疹,对患者的形象、社交以及生活质量的各方面都造成了极大的影响,甚至导致了部分患者因此而不得不停止接受EGFRIs治疗,从而对患者的生存期造成影响。目前认为EGFRIs相关皮疹的发生与细胞因子介导的炎症反应等机制有关,因此临床指南推荐应用抗生素和激素来治疗皮疹,但疗效不能令人满意且抗生素和激素同样伴随有不小的副作用。寻求中医药的方法来治疗EGFRIs相关皮疹成为当前研究的热点,导师崔慧娟教授潜心研究EGFRIs相关皮疹的中医治疗多年,制定了中药复方外用制剂“止痒平肤液”,取得了一定的疗效且安全性好。但“止痒平肤液”的作用机制仍不清楚,需要进行深入的探讨。本研究以EGFRIs相关中重度皮疹患者为研究对象,通过随机对照试验对“止痒平肤液”的疗效和安全性进行检验,同时对入组患者治疗前后的血清细胞因子水平进行检测,对“止痒平肤液”的作用机制展开初步的探索;运用超高效液相色谱法对复方“止痒平肤液”进行定性和定量的检测,找出复方中的主要活性单体,并运用该单体在肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）诱导的人永生化角质形成细胞（human immortalizedkeratinocytes,HaCaT）炎症模型上进行作用机制的探索,为“止痒平肤液”的临床应用提供实验证据。第一部分临床试验1.研究目的通过随机对照试验,对外用“止痒平肤液”联合短期、小剂量口服米诺环素±甲泼尼龙片治疗EGFRIs相关皮疹的有效性和安全性进行检验,对入组患者治疗前后血清细胞因子水平的变化情况进行探索。2.研究方法采用双盲、随机、对照的试验方法,纳入应用EGFRIs后发生中重度皮疹的患者,随机分为试验组和对照组。试验组患者接受“止痒平肤液”联合西医标准治疗,“止痒平肤液”外用每日2次,丁酸氢化可的松乳膏外用每日2次,米诺环素胶囊口服每日2次,每次100 mg,重度皮疹患者必要时口服甲泼尼龙片每日1次,每次20mg。对照组患者接受安慰剂联合西医标准治疗。所有患者治疗7天后进行血清细胞因子检测,治疗7天和14天后进行疗效评价。主要疗效指标为EGFRIs相关中重度皮疹的治疗有效率,次要疗效指标包括皮疹伴随的瘙痒症状评分、EGFRIs其他皮肤不良反应分级、米诺环素和甲泼尼龙用量以及生活质量评分。对治疗前后血清细胞因子水平进行比较,对安全性指标进行监测。3.研究结果共纳入患者58例,4例脱落,对完成临床试验的54例患者进行统计分析,其中试验组和对照组各27例。研究的主要疗效指标,治疗14天后试验组的治疗有效率为81.48%,对照组为55.56%,二者之间的差异有统计学意义（P=0.040）。次要疗效指标方面,治疗14天后试验组和对照组治疗EGFRIs相关皮肤瘙痒的有效率分别为100.00%和82.61%,二者之间的差异具有统计学意义（P=0.033）,EGFRIs相关皮肤干燥的治疗有效率分别为80.77%和70.37%,二者之间的差异无统计学意义（P>0.05）,EGFRIs相关甲沟炎的治疗有效率分别为76.92%和68.42%,两组治疗有效率之间的差异无统计学意义（P>0.05）。试验组和对照组患者口服米诺环素的中位时间均为7天,试验组中位总剂量为1000 mg,对照组为1400 mg。仅对照组1例患者服用了甲泼尼龙片。两组的生活质量评分经治后均有明显改善（P<0.001）。治疗7天后,试验组血清白细胞介素（interleukin,IL）-8水平低于对照组,两组IL-8水平之间的差异有统计学意义（P=0.018）。其他细胞因子之间的差异未发现统计学意义（P>0.05）。试验中4例患者出现消化道不良反应,停用米诺环素后好转,未发生与“止痒平肤液”直接相关的不良反应。4.研究结论中药“止痒平肤液”长期外用联合短期、小剂量口服米诺环素胶囊±甲泼尼龙片治疗EGFRIs相关中重度皮疹的疗效较好,在治疗皮疹伴随的瘙痒症状方面疗效同样显着,对于患者生活质量的改善明显,对患者血清IL-8水平有降低作用,对其他细胞因子的影响不明显。“止痒平肤液”的应用可以减少米诺环素胶囊和甲泼尼龙片的用量,降低抗生素和激素带来的副反应,使皮疹的治疗疗效得到长期有效的维持,且不良反应低。提供了短期口服西医标准治疗药物,联合中药“止痒平肤液”长期外用治疗EGFRIs相关皮疹的治疗模式的新证据,为长期接受EGFRIs治疗的患者带来了皮疹治疗新方案。第二部分基础实验1.研究目的通过超高效液相色谱法寻找复方“止痒平肤液”的主要单体成分,运用TNF-α构建HaCaT细胞炎症模型,应用“止痒平肤液”主要活性单体在TNF-α介导的HaCaT细胞炎症模型上进行基于PLA2G4A基因的抗炎作用探索。2.研究方法采用超高效液相色谱法检测“止痒平肤液”样品,通过与标准品比对指认主要单体成分,进行含量测定。应用20 ng/mL的TNF-α干预HaCaT细胞,应用CCK8进行细胞活性的检测,PI-FACS进行细胞周期的检测,Annexin V-APC&PI双染法进行细胞凋亡的检测,Western Blot进行细胞自噬蛋白的检测,ELISA法进行IL-6水平的检测,以评估24h、48 h和72 h不同干预时间下TNF-α对HaCaT细胞的影响,同时确定TNF-α的最佳作用时间。应用不同浓度的中药活性单体及5 mg/L阳性对照药物米诺环素干预HaCaT炎症细胞模型,通过CCK8对细胞活性进行检测,Western Blot进行PLA2G4A基因的蛋白表达检测,ELISA法进行IL-6水平的检测。3.研究结果在超高效液相色谱条件下,通过与对照标准品相应的色谱峰进行对比,共指认出4种主要成分,分别是:苦参碱、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素,其中苦参碱的含量最高,浓度为15.565 mg/mL,其次是黄芩苷,浓度为4.160 mg/mL。TNF-α干预HaCaT细胞后,CCK8检测发现细胞吸光度增加,72 h时两组差异最大,两组之间的差异有统计学意义（P=0.008）。TNF-α干预HaCaT细胞72h后,凋亡细胞比例与未经TNF-α干预的细胞相比明显上升（P<0.001）,处于G1期的HaCaT细胞数量明显多于对照组,二者之间的差异存在统计学意义（P<0.001）,处于G2/M和S期的细胞数量明显少于对照组,实验组和对照组之间的差异不存在统计学意义（P>0.05）。TNF-α干预HaCaT细胞72 h后,HaCaT细胞中的LC3B蛋白表达明显下降（P<0.01）,与未经TNF-α干预的细胞比较,二者之间的IL-6水平存在明显的统计学差异（P<0.001）,提示72 h时应用TNF-α介导的HaCaT细胞炎症模型造模成功。应用米诺环素和不同浓度的苦参碱干预HaCaT炎症细胞后,CCK8检测发现各组细胞的吸光度均较前有所下降,但与TNF-α介导的炎症模型组的差异无统计学意义（P>0.05）。与炎症模型组比较,米诺环素组,苦参碱200 μg/mL、400 μg/mL和800 μg/mL组的IL-6水平均有所减低,苦参碱100 μg/mL组的IL-6水平有所升高,但与模型组的差异均无统计学意义（P>0.05）。炎症模型组的cPLA2蛋白表达较空白对照组有明显下降,两组蛋白表达之间的差异有统计学意义（P<0.001）,米诺环素和不同浓度苦参碱干预后,cPLA2蛋白表达较炎症模型组均有所上升（P<0.05）。苦参碱100 μg/mL、200μg/mL和800 μg/mL组的cPLA2蛋白表达较米诺环素组明显升高（P<0.05）,苦参碱400 μg/mL组与米诺环素组cPLA2蛋白表达之间的差异没有统计学意义（P>0.05）。4.研究结论在超高效液相色谱条件下,“止痒平肤液”样品所有检测到色谱峰的成分都为水溶性成分,通过对照标准品可指认出4种主要成分,分别是:苦参碱、黄芩苷、汉黄芩苷和黄芩素,含量最高的是苦参碱,浓度为15.565 mg/mL。应用TNF-α干预HaCaT细胞72 h后,可以促进HaCaT细胞的增殖和凋亡,抑制HaCaT细胞自噬,对HaCaT细胞的细胞周期有影响,促进HaCaT细胞IL-6表达水平的上升,HaCaT细胞炎症模型造模成功。苦参碱和米诺环素可以抑制TNF-α介导的HaCaT炎性细胞的增殖,降低炎性细胞中IL-6的表达水平,且苦参碱优于米诺环素。在TNF-α介导的HaCaT炎性细胞中cPLA2蛋白表达明显下降,米诺环素和苦参碱可以提高cPLA2蛋白的表达,苦参碱优于米诺环素。但该实验结果与文献报道不相符,仍需后续进一步实验进行探讨。
李光达[7]（2021）在《固本消瘤胶囊加减方联合吉非替尼干预人NSCLC耐药的机制研究》文中进行了进一步梳理非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）吉非替尼耐药是指NSCLC患者应用分子靶向药物吉非替尼治疗取得短暂获益后,进而出现疾病进展。目前大量临床与实验研究证实,中医药治疗肺癌疗效确切,联合分子靶向等现代医学治疗手段,具有减毒增效及延缓耐药的作用。本研究从中医理论出发,采用生物信息学及体外实验结合的研究方法,探索固本消瘤胶囊加减方（GBXLⅡ）联合吉非替尼在非小细胞肺癌及吉非替尼耐药的非小细胞肺癌中的作用及作用机制,为该方在非小细胞肺癌中的应用提供科学依据。本研究首先采用生物信息学的方法,从GEO数据库中获得包含吉非替尼敏感细胞及吉非替尼耐药细胞的基因表达数据集GSE34228,通过加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）得到与耐药最为相关的关键模块与关键基因,并对关键模块进行功能富集分析。同时通过R语言筛选出两种细胞之间的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）并构建蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）网络,从而得到DEGs中的关键基因。基于共表达网络及DEGs中筛选出的关键基因,最终确定与吉非替尼耐药相关的核心基因。最后对核心基因进行基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）,以探究核心基因在吉非替尼耐药中的作用机制。其次通过体外实验的方法探究GBXLⅡ联合吉非替尼对非小细胞肺癌的作用机制:应用噻唑蓝比色（MTT）法检测不同浓度的GBXLⅡ、吉非替尼及联合用药对吉非替尼敏感的PC9细胞及其耐药株PC9GR细胞的增殖能力的影响,细胞划痕实验检测各组用药对细胞的迁移能力的影响;流式细胞术观察各组用药对细胞凋亡和周期的影响。最后以体外实验的方式对GBXLⅡ干预非小细胞肺癌吉非替尼耐药的作用机制进行了研究:MTT法检测GBXLⅡ对PC9GR细胞耐药的干预作用,Western blot法测定GBXLⅡ对EGFR下游通路相关蛋白AKT、p-AKT、ERK、p-ERK表达的影响,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法测定PI3、S100A8的表达来探索GBXLⅡ干预非小细胞肺癌吉非替尼耐药的可能的机制。我们通过WGCNA与基因集差异基因分析,共得到4个核心基因,分别为PI3、S100A8、AXL与PNPLA4,其中PI3与S100A8在吉非替尼耐药中表达下调,AXL与PNPLA4则表达上调。功能富集分析显示,耐药的发生可能与蛋白质合成及转运的生物学过程相关,而4个核心基因可能通过遗传信息的处理与代谢通路发挥作用。在GBXLⅡ联合吉非替尼对非小细胞肺癌的作用机制研究中,MTT实验结果显示GBXLⅡ与吉非替尼可呈浓度依赖性抑制PC9及PC9GR细胞的增殖,且联合用药组对两种细胞的生长抑制作用均明显强于单药组（P均<0.05）;细胞划痕实验结果显示,与空白组比较,GBXLⅡ与吉非替尼单独应用均可减弱两种细胞的划痕修复能力,联合用药对PC9细胞划痕修复能力的抑制作用显着增强（P均<0.05）;流式细胞术实验显示,与空白组比较,GBXLⅡ与吉非替尼单独应用均可显着增加细胞的凋亡率,且联合用药组细胞凋亡率明显高于单药组,同时各组用药对两种细胞分裂周期中的Go/G1期均产生了不同程度的抑制,但联合用药对两细胞周期的阻滞作用弱于单用吉非替尼（P均<0.05）。GBXLⅡ可以降低吉非替尼对PC9GR细胞的IC50,提高了 PC9GR细胞对吉非替尼的敏感性,同时GBXLⅡ可降低PC9GR细胞中ERK、p-ERK蛋白的表达,联合用药组ERK1/2蛋白的磷酸化水平低于单药组（P<0.05）,但各组间AKT、p-AKT等蛋白的表达量均无显着统计学差异（P>0.05）。RT-PCR结果显示,GBXLⅡ可显着上调PC9GR细胞PI3及S100A8的mRNA表达水平。本研究最终得到结论:1.4个核心基因PI3、S100A8、AXL与PNPLA4可能在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中起到关键作用,它们可能是通过调控细胞的增殖与周期等发挥作用。2.GBXLⅡ可以显着抑制人非小细胞肺癌PC9及其耐药株PC9GR细胞的增殖、迁移,其作用机制与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期有关;同时该方与吉非替尼联合应用在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡方面具有明显的增效作用。3.GBXLⅡ可以对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌起到干预作用,其机制可能与调节EGFR下游MEK/ERK信号传导通路以及上调PI3、S100A8表达水平有关。
徐雨璇[8]（2021）在《健脾益气方对CAG大鼠胃组织Notch信号通路相关蛋白表达的影响》文中研究说明目的:观察健脾益气方对CAG模型大鼠血清胃泌素（GAS）、生长抑素（SS）、前列腺素E2（PGE2）含量变化、胃组织病理学改变、Ki67蛋白及Notch信号通路相关蛋白的影响,探讨健脾益气方治疗CAG的作用机制。方法:65只健康SD大鼠,设空白组10只为健康对照,余运用MNNG+雷尼替丁+饥饱失常法喂养24周以建立脾虚型CAG大鼠模型。将50只CAG造模成功大鼠随机分为模型组（0.09%氯化钠溶液）、阳性药对照组[叶酸2.7mg/（kg·d）+替普瑞酮13.5mg/（kg·d）]、健脾益气方低剂量组[13.1g/（kg·d）]、中剂量组[26.2g/（kg·d）]、高剂量组[52.4g/（kg·d）],每组10只,1mL/100g灌胃给药8周（给药剂量按《药理学实验方法学》计算）。空白组亦予1mL/100g 0.09%氯化钠溶液灌胃。观察大鼠一般状态及体质量变化,苏木精-伊红（HE）染色观察胃组织病理改变,酶联反应吸附实验（ELISA）测定各组血清GAS、SS、PGE2的含量变化,免疫组化（IHC）法、蛋白质印迹法（WB）测定各组大鼠胃组织中Ki67及Notch信号通路相关蛋白的表达变化。结果:①一般情况:空白组大鼠毛色白而有光泽,精神状态好,活动积极,饮食饮水及体质量均正常;模型组大鼠毛色黄暗易脱落,精神不振,活动消极,食水有剩余,体质量较空白组显着降低（P<0.01）;各干预组大鼠毛色、精神状态、活动力、饮食状况及体质量均接近空白组,其中中药干预组更优。②病理组织学形态:空白组大鼠胃黏膜上皮正常,腺体排列紧密整齐,少有炎症细胞浸润;模型组胃黏膜上皮变薄,腺体排列疏松杂乱,可见杯状细胞;各干预组胃黏膜上皮增厚,腺体增加,排列趋向整齐,炎症细胞浸润减少,肠化改善,以健脾益气方中剂量组为优,并近似空白组,较少腺体消失,排列规整,未见明显黏膜萎缩与肠化。③血清学指标:与空白组相比,模型组大鼠血清GAS、SS、PGE2含量明显下降（P<0.01）;与模型组比较,阳性药对照组SS及PGE2含量升高有意义（P<0.05,P<0.01）;健脾益气方低剂量组SS及PGE2含量有所提高（P<0.05）;中剂量组SS及PGE2显着升高（P<0.01）;高剂量组GAS含量有所升高（P<0.05）,SS及PGE2含量升高更为显着（P<0.01）,中药低、中、高剂量组间无明显差异（P>0.05）。④Ki67表达:与空白组相比,模型组大鼠Ki67蛋白表达增高（P<0.05）;与模型组比较,阳性药对照组及健脾益气方各剂量组Ki67表达均有不同程度的升高,低剂量组Ki67表达升高最明显（P<0.01）,中药各剂量组间无明显差异（P>0.05）。⑤Notch信号通路蛋白表达:与空白组相比,模型组Notch1、Notch2、Jagged2、DLL1、Hes1 与 CyclinD1 均明显降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,各干预组IHC与WB结果有所不同,阳性药对照组IHC结果仅示Notch1表达显着提升（P<0.01）,WB结果示Notch1、Notch2及Hes1表达升高（P<0.05,P<0.01）;低剂量 IHC 结果示 Notch1、Notch2、CyclinD1 表达提升（P<0.05,P<0.01）,WB结果示所有检测指标表达均升高（P<0.05,P<0.01）;中剂量组IHC结果示 Notch1、Notch2、Jagged2、DLL1、CyclinD1 表达升高（P<0.05,P<0.01）,WB 结果示 Notch1、Notch2、DLL1 及 Hes1 表达升高（P<0.05,P<0.01）;高剂量组 IHC 结果示 Notch1、Notch2、Jagged2、Hes1 表达升高（P<0.05,P<0.01）,WB 结果仅示 Notch1、Notch2及Hes1表达明显升高（P<0.01）,中药各剂量组间未见明显差异（P>0.05）。结论:健脾益气方能够改善CAG大鼠一般状态、胃黏膜萎缩的病理状态,上调血清GAS、SS、PGE2含量,上调Ki67基因及调节Notch信号通路相关蛋白表达变化,从而促进胃黏膜细胞增殖,改善胃黏膜腺体的萎缩状态。我们认为,健脾益气方对CAG大鼠胃黏膜萎缩的抑制作用与该方调控Notch信号通路相关蛋白的表达异常相关,这一结果一定程度上解释了健脾益气方对CAG疗效作用的部分机制,至于如何调控信号通路蛋白的微靶点,有待进一步研究深入。
朱长乐[9]（2020）在《清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究》文中研究表明本论文分为综述和实验研究两部分综述综述一对中药复方及中药单体治疗急性肺损伤的国内外相关文献进行了综述。综述二对急性肺损伤的病因、临床表现等相关文献进行了综述,并对急性肺损伤的发病机制进行了重点综述。实验研究实验研究分为两部分,第一部分主要研究了清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用,分为四个实验;第二部分主要研究了黄芩苷对急性肺损伤的干预作用,分为五个实验。第一部分:清金化痰汤对急性肺损伤的干预作用实验一目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:气道滴注LPS可显着上调大鼠肺重量的湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,增加肺泡毛细血管膜通透性,促进炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的释放,诱导中性粒细胞的聚集浸润,引起肺泡壁增厚、支气管上皮细胞水肿。清金化痰汤可显着降低肺重量湿/干比和大鼠BALF的蛋白质浓度,减轻ALI大鼠的肺泡毛细血管膜通透性,减少蛋白质由毛细血管、间质向肺泡的渗透,减少中性粒细胞聚集,抑制炎症因子CXCL-1、IL-6和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验二目的:通过LPS干预建立急性肺损伤大鼠模型,评价清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:采用气道滴注LPS溶液的方式建立急性肺损伤模型并给予低剂量清金化痰汤、高剂量清金化痰汤和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:气道滴注LPS可显着促进TLR4、MYD88、NLRP3的蛋白表达的升高和NF-κB磷酸化。清金化痰汤可显着降低TLR4、MYD88、NLRP3蛋白的表达,抑制了 NF-κB的磷酸化,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验三目的:探索清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响。方法:使用冻干机将含药血清冻干为含药血清冻干粉。以空白含药血清冻干粉、清金化痰汤含药血清冻干粉、克拉霉素含药血清冻干粉干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:清金化痰汤含药血清冻干粉和克拉霉素含药血清冻干粉可以引起细胞明显的水肿,细胞内可见黑色颗粒物质,并且无明显抑制炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO分泌的作用,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验四目的:分析中药复方清金化痰汤的主要化学成分及入血成分。方法:大鼠灌胃纯水、清金化痰汤和克拉霉素7天后采血、离心,制备含药血清。采用液质联用技术检测并分析各药物及其含药血清的主要化学成分。结果:清金化痰汤中含有9个化学成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、绿原酸、咖啡酸、芦丁、连翘苷、大黄酸、甘草酸铵、齐墩果酸,其中3个为入血成分,分别为黄芩苷、伪麻黄碱、甘草酸铵。第二部分:黄芩苷对急性肺损伤的干预作用实验五目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预支气管上皮细胞。采用CCK8法检测各药物的细胞毒性,并检测各药物抑制炎症因子分泌的效果。结果:黄芩苷标准品浓度在10μg/ml及以下时,对细胞存活率无明显影响,细胞生长状态较好,细胞扁平,呈多边形。黄芩苷用药对炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α、MPO的表达有一定的抑制作用。实验六目的:探索黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响。方法:以黄岑苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞培养上清中的炎症因子的含量、观察细胞形态、用Transwell小室检测上皮细胞趋化中性粒细胞的作用。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可显着促进细胞因子IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF的分泌,刺激支气管上皮细胞趋化中性粒细胞,诱导上皮细胞损伤。黄芩苷可显着地抑制IL-8、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β和GM-CSF等炎症因子的分泌,减少中性粒细胞的迁移数量。实验七目的:探索黄芩苷对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响。方法:以黄芩苷标准品、克拉霉素标准品干预LPS诱导的上皮细胞急性损伤模型,检测细胞中TLR4、MYD88、TRIF、NF-κB、NLRP3蛋白含量及mRNA表达情况。结果:LPS干预BEAS-2B细胞可激活TLR4信号通路,显着上调TLR4、MyD88、NLRP3蛋白的表达和NF-κB的磷酸化,黄芩苷可显着地下调TLR4、MyD88、p-NF-κB和NLRP3蛋白含量和mRNA的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验八目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。检测肺湿/干比、BALF蛋白质浓度、炎症因子分泌情况、肺组织病理变化。结果:LPS干预上调了 BALF和血清中的炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,增加了肺泡毛细血管膜通透性。黄芩苷干预可显着降低大鼠肺组织重量的湿/干比和BALF的蛋白质浓度,抑制大量中性粒细胞浸润到肺泡间质和肺泡间隙,减轻支气管上皮细胞的水肿,抑制上皮细胞的黏液分泌,抑制BALF和血清中炎症因子CXCL-1、IL-6、IL-1β、TNF-α和MPO的分泌,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。实验九目的:探索黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响。方法:气道滴注LPS溶液建立急性肺损伤大鼠模型并给予低剂量黄芩苷、高剂量黄芩苷和克拉霉素灌胃。WB法检测蛋白表达变化、IHC检测肺组织蛋白表达改变。结果:LPS干预促进TLR4信号通路和MAPK信号通路的激活。黄芩苷可以显着地抑制TLR4、MYD88、P-NF-κB、NLRP3、P-ERK和P-p38蛋白的表达,与模型组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.气道滴注5mg/kg的LPS溶液可诱导大鼠的肺泡毛细血管通透性增加、炎症因子分泌增加、肺组织病理变化,符合急性肺损伤的病理改变,可以用于急性肺损伤的实验研究。2.清金化痰汤能够通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活,抑制炎症因子分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加和大鼠的急性肺损伤。3.清金化痰汤的主要化学成分之一黄芩苷可显着抑制LPS诱导BEAS-2B细胞的损伤以及炎症因子的分泌。4.黄芩苷可以抑制LPS诱导的急性大鼠肺损伤模型炎症因子的分泌和炎性细胞的浸润,减轻LPS诱导的炎症反应,缓解急性肺损伤模型大鼠的肺泡毛细血管通透性的增加、肺水肿和大鼠的急性肺损伤。5.黄芩苷可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB/NLRP3信号通路的激活与转录,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症风暴的爆发。6.黄芩苷能够通过抑制MAPK信号通路的激活,减少炎症因子、趋化因子的分泌,抑制炎症细胞的聚集以及炎症反应的扩大。
王智超[10]（2020）在《基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究》文中认为目的:在前期实验研究“感毒清的质量控制成分黄芪甲苷对PM2.5所致急性肺损伤肺组织结构保护作用”的基础上,进一步探讨黄芪甲苷保护PM2.5所致急性肺损伤的作用机制。方法:将35只大鼠随机分成5组:空白组、模型组、黄芪甲苷高剂量组、黄芪甲苷低剂量组、法舒地尔组。实验设计为造模前经腹腔注射（intraperitoneal injection,i.p）预防性给药,以观察药物对PM2.5造成损伤的保护性作用。预防性给药3日后开始制备急性肺损伤大鼠模型,以气道滴注PM2.5混悬液的方式进行,造模时间为预防性给药开始后的第3日、第5日。预防性给药剂量为:黄芪甲苷低剂量50mg/kg/b.w,每日给药1次;黄芪甲苷高剂量100mg/kg/b.w,每日给药1次;法舒地尔剂量10mg/kg/b.w,每日给药1次;空白组和模型组给与等体积生理盐水。本次实验于第二次造模后开始计时,计时24h时后麻醉大鼠处死,获取肺组织及肺泡灌洗液进行检测。右肺膈叶做干湿比观察肺组织水肿情况;右肺尖叶做HE染色及Mc Guigan病理评分观察病理损伤程度;副叶检测ICAM-1、IL-1β、MPO水平判断肺损伤炎症水平;BCA法检测肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白的含量,同时做细胞计数及细胞分类判断肺损伤渗出水平;部分右肺膈叶做透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤情况;免疫组化法观察肺组织Rho A、ROCK1、ROCK2定位、Western Blot法检测肺组织Rho A、ROCK1、ROCK2、NF-κB、p-NF-κB、IκB、p-IκB、E-cadherin含量。实验结果采用SPSS 22.0统计软件进行数据统计及分析,Graph Pad Prism 8.0进行绘图。结果:（1）肺组织水肿情况:与空白组相比,模型组大鼠的干湿比、总肺含水量明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺组织干湿比、总肺含水量明显降低（P<0.001）。（2）肺组织中总蛋白含量和细胞渗出情况:在BCA法检测总蛋白渗出中,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白质含量明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺泡灌洗液中总蛋白质含量明显降低（P<0.001）。在细胞计数和中性粒细胞瑞氏-吉姆萨染色中,与空白组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数、中性粒细胞占比明显升高（P<0.001）;与模型组相比,黄芪甲苷高剂量组和法舒地尔组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数、中性粒细胞占比明显下降（P<0.001）,黄芪甲苷低剂量组大鼠肺泡灌洗液中细胞计数有所下降（P<0.01）。（3）肺组织形态学观察:HE染色结果表明空白组大鼠肺组织结构基本完整;模型组大鼠肺泡结构出现塌陷,肺泡充血、出血明显,大量含蛋白质水液渗出,中性粒细胞和成纤维细胞聚集;各给药组大鼠肺组织结构较模型组明显好转。在病理评分中,与空白组相比,模型组大鼠病理总积分明显升高（P<0.001）,在出血（P<0.01）、肺泡充血（P<0.05）、肺泡壁增厚或透明膜（P<0.05）评分中有升高;与模型组相比,黄芪甲苷高剂量明显降低病理总积分（P<0.001）和出血评分（P<0.01）;黄芪甲苷低剂量、法舒地尔可以降低病理总积分（P<0.01）。（4）肺组织中炎症水平:与空白组相比,模型组大鼠IL-1β水平（P<0.01）、MPO活性（P<0.001）、ICAM-1活性（P<0.001）明显升高;与模型组相比,各给药组IL-1β、ICAM-1水平明显降低（P<0.001）,黄芪甲苷高剂量组、低剂量组MPO活性明显降低（P<0.001）,法舒地尔组MPO活性有所降低（P<0.01）。（5）肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构:空白组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体体积正常,肺泡结构基本正常。模型组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体体积增大且不规则,排空明显呈空泡化,肺泡结构紊乱。各给药组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构较模型组明显好转,肺泡结构基本正常。（6）Rho A/ROCK蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠肺组织中Rho A/ROCK1蛋白活性明显升高（P<0.001）,ROCK2蛋白活性有一定升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白活性明显降低（P<0.001）。与模型组相比,各给药组Rho A/ROCK1蛋白活性明显升高（P<0.001）,法舒地尔明显抑制ROCK2蛋白活性（P<0.001）,黄芪甲苷高剂量可抑制ROCK2蛋白活性（P<0.05）;黄芪甲苷高剂量组E-cadherin蛋白活性有所升高（P<0.05）,黄芪甲苷低剂量组、法舒地尔组E-cadherin蛋白活性明显升高（P<0.01）。（7）NF-κB蛋白表达:与空白组相比,模型组大鼠肺组织中p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB比值明显升高（P<0.001）;与模型组相比,各给药组大鼠肺组织中p-IκB/IκB、p-NF-κB/NF-κB比值明显降低（P<0.001）。结论:（1）黄芪甲苷可以保护PM2.5诱导的急性肺损伤,抑制PM2.5造成的炎症因子、水肿液和蛋白质渗出。（2）黄芪甲苷可以抑制PM2.5所致的炎症反应,保护肺组织的正常结构和功能。（3）黄芪甲苷对肺组织结构的保护作用可能是通过Rho A/ROCK/NF-κB信号通路发挥作用。
二、清热解毒益气活血药对弹性蛋白酶活力的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、清热解毒益气活血药对弹性蛋白酶活力的影响（论文提纲范文）
（1）健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 慢性阻塞性肺疾病研究背景 |
| 第二节 慢性阻塞性肺疾病防治策略 |
| 一、慢性阻塞性肺疾病早期干预 |
| 二、中医药防治慢性阻塞性肺疾病作用机制研究 |
| 三、健脾益肺Ⅱ号防治慢性阻塞性肺疾病前期基础 |
| 第三节 慢性阻塞性肺疾病急性加重与呼吸道病毒感染的关系 |
| 一、呼吸道病毒感染在诱发慢阻肺急性加重过程中的免疫病理改变 |
| 二、吸烟对呼吸道病毒感染后宿主免疫应答的影响 |
| 第四节 气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病急性加重中的作用 |
| 一、慢阻肺炎症反应过程中的免疫细胞 |
| 二、炎症反应过程中的炎症介质 |
| 第五节 慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型的研究概况 |
| 一、病毒及其模拟物致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 二、细菌感染致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 三、熏烟联合LPS致慢性阻塞性肺疾病急性加重动物模型 |
| 第二章 健脾益肺Ⅱ号干预治疗COPD Ⅰ-Ⅱ级患者探索性临床研究 |
| 一、研究目标 |
| 二、研究对象 |
| 三、治疗方案 |
| 四、数据管理 |
| 五、统计分析 |
| 六、研究结果 |
| 七、讨论 |
| 第三章 健脾益肺Ⅱ号减少熏烟联合流感病毒感染小鼠肺部炎症的主要环节和作用机制 |
| 第一节 香烟暴露对低剂量流感病毒诱导的气道炎症的影响 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二节 健脾益肺Ⅱ号方对香烟暴露、低剂量流感病毒感染及二者联合诱导的气道免疫细胞的影响 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 熏烟期间给药对熏烟联合低剂量流感病毒感染小鼠持续预防作用的研究 |
| 一、实验仪器及材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 一、研究总结 |
| 二、研究创新点 |
| 三、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况、参与课题与获奖情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）益气涤痰破瘀方治疗慢阻肺调控ACE-AngⅡ-AT1R轴的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstracrt |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 实验研究 |
| 技术路线 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及水煎剂制备 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 检测指标及选择依据 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组及造模 |
| 2.2 模型评价 |
| 2.3 中药干预 |
| 2.4 标本留取 |
| 2.5 指标检测及方法 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组大鼠行为学及体重 |
| 3.2 各组大鼠肺组织病理结果 |
| 3.3 各组大鼠肺组织炎性评分 |
| 3.4 各组大鼠肺组织超微结构 |
| 3.5 各组大鼠血清中TNF- α、ICAM-1、IL-8、SELE表达水平 |
| 3.6 各组大鼠肺组织中TNF-α、ICAM-1、SELE mRNA相对表达水平 |
| 3.7 各组大鼠肺组织SP-A、SP-D mRNA相对表达水平 |
| 3.8 各组大鼠肺组织SP-A、SP-D的表达位置及强度 |
| 3.9 各组大鼠肺组织ACE、AT1R mRNA相对表达水平 |
| 3.10 各组大鼠血清中AngⅡ表达水平 |
| 3.11 各组大鼠肺组织中ACE、AT1R蛋白表达水平 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 文献综述 |
| 1 COPD发病机制 |
| 2 COPD现代医学治疗 |
| 3 COPD中医学认识 |
| 4 “和调”思想在慢阻肺中的应用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 参加科研课题情况 |
| 致谢 |
（3）基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药防治肝硬化的研究现状 |
| 1 肝硬化病名渊源 |
| 2 中医对肝硬化病因病机的认识 |
| 3 中医治疗肝硬化思路 |
| 4 导师论治肝硬化的经验 |
| 5 中医药防治肝硬化的机制探讨 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 弹性蛋白及其调控因子在早期肝硬化中的作用 |
| 1 流行病学 |
| 2 肝硬化现代研究进展 |
| 3 弹性蛋白在肝硬化发生中的作用 |
| 4 调控弹性蛋白合成的细胞因子 |
| 5 调控弹性蛋白降解的细胞因子 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 研究一 益肝消积方对早期肝硬化的干预作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究二 益肝消积方调控弹性蛋白合成干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 研究三 益肝消积方调控弹性蛋白降解干预早期肝硬化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（4）13味中草药及八正散对泌尿系感染致病菌体外抑菌作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略表 |
| 前言 |
| 实验一 13味中草药体外抗7种泌尿系致病菌活性研究 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 复方八正散联合抗菌药物对耐药致病菌抑菌作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 1 西医学对本病的认识 |
| 2 泌尿系感染常见致病菌的致病机制 |
| 2.1 大肠埃希菌 |
| 2.2 肺炎克雷伯菌 |
| 2.3 粪肠球菌、屎肠球菌 |
| 3 中医学对本病的认识 |
| 4 研究结果分析 |
| 4.1 金银花、连翘 |
| 4.2 黄芩、黄连、黄柏 |
| 4.3 车前子、瞿麦、萹蓄、滑石、栀子、木通 |
| 4.4 甘草、大黄 |
| 4.5 八正散 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）平肺口服液治疗急性放射性肺损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 放射性肺损伤的研究进展 |
| 1 放射性肺损伤发生机制 |
| 2 放射性肺损伤信号通路 |
| 3 放射性肺损伤西医治疗 |
| 4 放射性肺损伤西医预防 |
| 参考文献 |
| 综述二 放射性肺损伤的中医药研究概况 |
| 1 中医学对放射性肺损伤的认识 |
| 2 中医药治疗放射性肺损伤的临床与实验研究 |
| 3 中西医结合治疗放射性肺损伤 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 动物造模及给药方法 |
| 2.3 取材方法及标本处理 |
| 2.4 检测指标与方法 |
| 2.5 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状况及体重变化 |
| 3.2 肺组织大体观察 |
| 3.3 肺组织病理形态学观察 |
| 3.4 大鼠肺泡炎评分及半定量分析 |
| 3.5 大鼠肺组织HO-1的蛋白表达 |
| 3.6 大鼠肺组织Nrf2的蛋白表达 |
| 3.7 大鼠肺组织P38MAPK的蛋白表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 放射性肺损伤大鼠模型的建立 |
| 4.2 平肺口服液治疗放射性肺损伤的理论基础 |
| 4.3 平肺口服液药物组成及方义剖析 |
| 4.4 平肺口服液治疗急性放射性肺损伤的疗效评价 |
| 4.5 平肺口服液治疗急性放射性肺损伤的P38MAPK/Nrf2/HO-1信号通路探讨 |
| 5. 结论 |
| 6. 不足与改进 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）“止痒平肤液”治疗EGFRIs相关中重度皮疹的RCT研究及作用机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 表皮生长因子受体抑制剂相关皮疹的发生机制 |
| 1. 概述 |
| 2. EGFRIs相关皮疹的发生机制 |
| 3.小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 EGFRIs相关皮疹的中医治疗措施 |
| 1. 概述 |
| 2. 中医治疗措施 |
| 3. 本团队前期研究成果 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 “止痒平肤液”主要成分的抗菌、抗炎作用机制研究进展 |
| 1. 概述 |
| 2. “止痒平肤液”各中药的组成成分 |
| 3. “止痒平肤液”各成分的抗菌、抗炎作用 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 临床试验 |
| 第一章 “止痒平肤液”治疗表皮生长因子受体抑制剂相关中重度皮疹的随机、对照临床试验 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 研究对象与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第二章 “止痒平肤液”对EGFRIs相关皮疹患者血清细胞因子水平的影响 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第二部分 基础实验 |
| 第一章 基于超高液相色谱的“止痒平肤液”主要成分分析 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第二章 人永生化角质形成细胞炎症模型的建立 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 第三章 基于PLA2G4A基因的苦参碱对HaCaT细胞炎症模型的干预研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 材料与方法 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
| 附录 |
| 附录1 外用中药“止痒平肤液”治疗中重度靶向药相关皮疹的前瞻、随机、对照临床研究病例报告表( case report form,CRF) |
（7）固本消瘤胶囊加减方联合吉非替尼干预人NSCLC耐药的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药的分子机制及治疗策略 |
| 1 EGFR-TKIs获得性耐药相关机制 |
| 2 EGFR-TKIs获得性耐药后治疗策略 |
| 3 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 中药干预非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药的研究进展 |
| 1 EGFR-TKIs获得性耐药的定义与临床表现 |
| 2 中医药在EGFR-TKIs获得性耐药中的作用 |
| 3 中医药逆转及延缓EGFR-TKIs获得性耐药的分子机制 |
| 4 讨论与小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一章 基于生物信息学探讨非小细胞肺癌吉非替尼耐药的机制 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 实验材料与方法 |
| 1 主要软件及R包 |
| 2 数据的获取与预处理 |
| 3 共表达网络的构建及关键模块与关键基因的识别 |
| 4 功能富集分析 |
| 5 差异表达基因的识别 |
| 6 蛋白质互作网络的构建 |
| 7 耐药相关核心基因的识别与基因集富集分析 |
| 第三节 研究结果 |
| 1 共表达网络中的关键模块与关键基因 |
| 2 关键模块的功能富集分析 |
| 3 差异基因与蛋白质互作网络 |
| 4 耐药相关核心基因与基因集富集分析 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 第二章 固本消瘤胶囊加减方联合吉非替尼对PC9及PC9GR细胞的作用研究 |
| 第一节 实验相关材料 |
| 1 细胞 |
| 2 主要试剂 |
| 3 主要耗材 |
| 4 主要仪器 |
| 5 主要溶液配置方法及药物制备 |
| 第二节 实验方法 |
| 1 细胞的体外培养 |
| 2 MTT法检测细胞对药物的毒性反应 |
| 3 MTT法检测药物对细胞增殖能力的影响 |
| 4 划痕实验检测药物对细胞迁移的影响 |
| 5 流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响 |
| 6 流式细胞术检测药物对细胞周期的影响 |
| 7 统计方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 1 固本消瘤胶囊加减方、吉非替尼及联合用药对PC9、PC9GR细胞增殖的影响 |
| 2 固本消瘤胶囊加减方及联合吉非替尼对PC9、PC9GR细胞迁移的影响 |
| 3 固本消瘤胶囊加减方及联合吉非替尼对PC9、PC9GR细胞凋亡的影响 |
| 4 固本消瘤胶囊加减方及联合吉非替尼对PC9、PC9GR细胞周期的影响 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 第三章 固本消瘤胶囊加减方干预NSCLC吉非替尼耐药的机制研究 |
| 第一节 实验相关材料 |
| 1 主要试剂 |
| 2 主要耗材 |
| 3 主要仪器 |
| 4 主要溶液配制 |
| 第二节 实验方法 |
| 1 MTT法检测细胞对药物的敏感性 |
| 2 Western blot法分析细胞中EGFR下游通路相关蛋白质的表达水平 |
| 3 实时荧光定量PCR法检测细胞中PI3、AXL的mRNA表达水平 |
| 第三节 实验结果 |
| 1 固本消瘤胶囊加减方对PC9GR细胞吉非替尼耐药的干预作用 |
| 2 固本消瘤胶囊加减方及联合吉非替尼对PC9GR细胞相关蛋白表达的影响 |
| 3 固本消瘤胶囊加减方对PC9GR细胞PI3、S100A8 mRNA表达的影响 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）健脾益气方对CAG大鼠胃组织Notch信号通路相关蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 理论概述 |
| 一、现代医学相关理论概述 |
| 1. 发病因素与致病 |
| 2. 发病机制 |
| 3. 诊断方法 |
| 4. 治疗现状 |
| 二、中医药对CAG的认识及诊疗现状 |
| 1. 病因病机 |
| 2. 中医药疗法 |
| 三、健脾益气方对CAG疗效作用的理论基础 |
| 1. 健脾益气方方义 |
| 2. 健脾益气方组方药物的药理作用概述 |
| 3. 健脾益气方前期研究状况概述 |
| 四、NOTCH信号系统与CAG的相关性 |
| 1. Notch信号通路的概述和功能 |
| 2. Notch信号通路与GC相关 |
| 3. Notch信号通路与CAG的研究现状 |
| 4. 中医药对Notch信号通路的影响 |
| 第二部分 实验研究 |
| 一、实验目的 |
| 二、实验材料 |
| 1. 实验动物 |
| 2. 实验药物 |
| 3. 实验主要试剂 |
| 4. 实验仪器 |
| 三、实验方法 |
| 1. 实验动物造模及分组干预 |
| 2. 标本制备与采集 |
| 3. 病理学方法 |
| 4. 血清GAS、SS、PGE2检测方法 |
| 5. 免疫组化检测方法 |
| 6. Westen blot检测方法 |
| 7. 统计学方法 |
| 四、实验结果 |
| 1. 一般情况比较 |
| 2. 体质量比较 |
| 3. 胃黏膜病理组织学比较 |
| 4. 血清GAS、SS、PGE2含量比较 |
| 5. 胃组织中Ki67蛋白表达比较 |
| 6. 胃组织中Notch1、Notch2、Jagged2、DLL1、Hes1及CyclinD1蛋白表达比较 |
| 五、讨论 |
| 1.CAG大鼠模型的建立及评价 |
| 2. 健脾益气方对CAG大鼠一般情况及胃黏膜病理的影响 |
| 3. 健脾益气方对CAG大鼠血清GAS、SS、PGE2的影响 |
| 4. 健脾益气方对CAG大鼠胃黏膜细胞增殖的影响 |
| 5. 健脾益气方对CAG大鼠胃黏膜Notch信号通路相关蛋白的影响 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录英文缩略词表 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（9）清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药防治急性肺损伤的研究进展 |
| 1 中医对急性肺损伤的认识 |
| 2 急性肺损伤的病因病机 |
| 3 中药复方药干预急性肺损伤的研究 |
| 4 中药单体干预急性肺损伤的研究 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 综述二 急性肺损伤发病机制及治疗药物的研究进展 |
| 1 病因与临床表现 |
| 2 病理特征 |
| 3 ALI的发病机制 |
| 4 ALI的治疗药物 |
| 5 结语 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 第一部分 清金化痰汤干预急性肺损伤的研究 |
| 前言 |
| 实验一 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 清金化痰汤对急性肺损伤大鼠TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 清金化痰汤含药血清冻干粉对BEAS-2B细胞损伤炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 质谱分析清金化痰汤及其含药血清的主要成分 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芩苷对急性肺损伤干预作用的研究 |
| 前言 |
| 实验五 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症因子表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 黄芩苷对LPS诱导BEAS-2B细胞损伤的TLR4信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 黄芩苷对急性肺损伤大鼠炎症反应的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 黄芩苷对急性肺损伤大鼠TLR4和MAPK信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足及展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩写 |
| 第一部分 文献回顾 |
| 1.颗粒物污染与健康效应 |
| 1.1.细颗粒物PM2.5的理化特征 |
| 1.2.细颗粒物PM2.5对健康效应的影响 |
| 1.3.细颗粒物PM2.5对呼吸系统的影响机制 |
| 2.细颗粒物诱导急性肺损伤的机制探讨 |
| 2.1.急性肺损伤与细颗粒物 |
| 2.2.炎症损伤是细颗粒物致急性肺损伤的重要机制 |
| 2.3.肺泡上皮细胞介导的水液转运功能下降是细颗粒物致肺损伤的关键结局 |
| 2.4.肺微血管内皮细胞介导的炎症渗出是细颗粒物致肺损伤的中心环节 |
| 2.5.粘附分子在细颗粒物致急性肺损伤中的桥梁作用 |
| 3.Rho A/ROCK信号通路在细颗粒物致急性肺损伤中的作用探讨 |
| 3.1.小G蛋白Ras超家族中相关蛋白的基本生物学特征 |
| 3.2.Rho A/ROCK信号通路在炎症因子介导急性肺损伤中的作用机制 |
| 4.NF-κB信号通路在细颗粒物致急性肺损伤中的作用探讨 |
| 4.1.NF-κB信号通路中相关蛋白的基本生物学特征 |
| 4.2.NF-κB信号通路在炎症因子介导急性肺损伤中的直接作用 |
| 5.细颗粒物PM2.5介导急性肺损伤的中医认识 |
| 5.1.中医学对PM2.5为主的大气污染的认识 |
| 5.2.PM2.5所致肺系疾病及急性肺损伤的中医认识 |
| 5.3.中药黄芪的益气功效是预防环境毒邪致病的关键 |
| 6.参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1.本课题的研究思路,内容 |
| 1.1.研究思路 |
| 1.2.研究内容 |
| 1.3.技术路线图 |
| 2.实验材料 |
| 2.1.实验动物 |
| 2.2.动物饲养 |
| 2.3.主要试验仪器和设备 |
| 2.4.实验材料和试剂 |
| 3.试验方法 |
| 3.1.动物分组 |
| 3.2.给药方法 |
| 3.3.造模方法 |
| 3.4.动物处死 |
| 3.5.实验流程图 |
| 3.6.标本获取 |
| 3.7.指标检测 |
| 3.8.统计学方法及绘图 |
| 4.实验结果 |
| 4.1.一般情况 |
| 4.2.肺组织形态学观察 |
| 4.3.肺水肿指标的变化趋势 |
| 4.4.BALF中总蛋白含量的测定 |
| 4.5.肺组织HE染色 |
| 4.6.肺组织Mc Gugan病理评分 |
| 4.7.肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数 |
| 4.8.肺组织中炎症因子水平的测定 |
| 4.9.肺组织中MPO水平的测定 |
| 4.10.肺组织中黏附因子的测定 |
| 4.11.肺组织超微结构的透射电镜分析 |
| 4.12.肺组织中相关蛋白的Western Blot检测 |
| 4.13.肺组织中相关蛋白的免疫组化分析 |
| 4.14.E-cadherin、ICAM-1与ALI相关指标的相关性分析 |
| 4.15.E-cadherin、ICAM-1与ALI相关指标的回归性分析 |
| 4.16.小结 |
| 5.讨论 |
| 5.1.PM2.5诱导急性肺损伤大鼠模型的构建 |
| 5.2.基于多步骤黏附理论探讨炎症损伤在PM2.5致ALI中的作用机制 |
| 5.3.黄芪甲苷对PM2.5诱导急性肺损伤大鼠肺组织结构的保护作用 |
| 5.4.基于Rho A/ROCK/NF-κB通路探讨黄芪甲苷保护肺组织结构、抑制炎症渗出的机制 |
| 结论 |
| 本实验创新性及意义 |
| 存在问题及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 中药黄芪补气功效与药理作用的研究进展 |
| 1.中药黄芪 |
| 1.1.历史沿革 |
| 1.2.化学成分 |
| 2.黄芪补气之功 |
| 2.1.益气升阳 |
| 2.2.益气止咳喘 |
| 2.3.益卫固表 |
| 2.4.补气利水 |
| 3.药理学作用 |
| 3.1.炎症损伤的药理学机制 |
| 3.2.免疫调节的药理学机制 |
| 4.黄芪及其化合物在急性肺损伤中的运用 |
| 5.总结 |
| 6.参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
四、清热解毒益气活血药对弹性蛋白酶活力的影响（论文参考文献）
- [1]健脾益肺Ⅱ号治疗慢阻肺临床疗效及减轻香烟暴露联合流感病毒感染小鼠肺炎症作用研究[D]. 蔡甜甜. 广州中医药大学, 2021
- [2]益气涤痰破瘀方治疗慢阻肺调控ACE-AngⅡ-AT1R轴的机制研究[D]. 乔波. 云南中医药大学, 2021
- [3]基于弹性蛋白合成及降解探讨益肝消积方干预早期肝硬化的机制研究[D]. 张嘉鑫. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]13味中草药及八正散对泌尿系感染致病菌体外抑菌作用研究[D]. 李昭融. 天津中医药大学, 2021(01)
- [5]平肺口服液治疗急性放射性肺损伤的实验研究[D]. 黄婷. 北京中医药大学, 2021(08)
- [6]“止痒平肤液”治疗EGFRIs相关中重度皮疹的RCT研究及作用机制探讨[D]. 张静怡. 北京中医药大学, 2021
- [7]固本消瘤胶囊加减方联合吉非替尼干预人NSCLC耐药的机制研究[D]. 李光达. 北京中医药大学, 2021(08)
- [8]健脾益气方对CAG大鼠胃组织Notch信号通路相关蛋白表达的影响[D]. 徐雨璇. 南京中医药大学, 2021(01)
- [9]清金化痰汤及黄芩苷通过TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3通路抑制LPS诱导的急性肺损伤的研究[D]. 朱长乐. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]基于Rho A/ROCK/NF-κB信号通路探讨黄芪甲苷保护PM2.5诱导急性肺损伤的机制研究[D]. 王智超. 成都中医药大学, 2020