一、鲢、鲤、团头鲂和草鱼精液冷冻保存的研究（论文文献综述）
贾濮元,郭华阳,朱克诚,刘宝锁,郭梁,张楠,江世贵,张殿昌[1]（2021）在《黄鳍棘鲷精子冷冻保存方法探究》文中研究表明黄鳍棘鲷（Acanthopagrus latus）是中国具有重要商业价值的海水鱼类之一,对其精子开展冷冻保存可为黄鳍棘鲷育种提供一定的技术支持,可有效预防其种质资源衰退,保持其养殖业的可持续发展。该研究以黄鳍棘鲷精子为实验材料,对其精子冷冻保存的稀释液、葡萄糖浓度、抗冻剂种类及浓度、精子与保护液稀释比例和降温程序等进行了筛选优化。结果表明,以含10 g·L-1葡萄糖、5%乙二醇的MPRS溶液与精子按1∶2的比例稀释,4℃平衡30 min,液氮面上5 cm熏蒸5 min,最后投入液氮保存2 h,将黄鳍棘鲷冷冻精子于37℃水浴解冻后活性最好,精子活力、运动时间和寿命可分别达到（85.17±3.66）%、（9.16±7.70） s和（94.29±9.55） s。
邢露梅,肖伟,李兰兰,张利平,赛清云,俞兆曦,吴旭东,连总强[2]（2021）在《兰州鲇精液超低温冷冻保存技术研究及细胞损伤检测》文中进行了进一步梳理为保护兰州鲇（Silurus lanzhouensis Chen）种质资源,促进新品种选育,文章开展了兰州鲇精液超低温冻存抗冻剂筛选及程序保存技术研究,并通过精子解冻激活率、核DNA检测、扫描电镜和透射电镜检测技术对冻存效果和冻存损伤情况进行了评测。结果表明:兰州鲇精液以10%DMSO为抗冻剂, 4℃平衡20min,–80℃平衡30min后立即置于液氮超低温保存,并于40℃水浴解冻时精子冻存效果较佳,冻精激活率达（75.56±3.91）%。SCGE检测DNA损伤结果显示超低温冻存10d、20d及30d兰州鲇精液的彗星率和损伤系数无显着差异。扫描电镜检测显示兰州鲇精子明显分头部,中段及尾部3部分,属于单鞭毛型,无顶体,无侧鳍,中心粒相互垂直呈"T"形,鞭毛为典型的"9+2"微管结构。冻存结构损伤主要表现为膜损伤,细胞质膜与染色质膜发生破损、折皱、囊泡化或整体脱落,细胞核膜与质膜空隙加大,核发生变形,核质疏散,线粒体结构弥散,线粒体内容物外流,中心粒复合体易位,鞭毛外膜变形脱离,中段位置断裂,微管结构基本完好。研究筛选的超低温冷冻保存技术可长期有效保存兰州鲇精液,为兰州鲇种质资源保护及今后精液超低温冷冻保存技术改良提供理论依据和技术基础。
曹勤[3]（2020）在《紫外辐射灭活清水石斑鱼精子诱导褐点石斑鱼卵子胚胎发育的研究》文中进行了进一步梳理褐点石斑鱼（Epinephelus fuscoguttatus）为我国东南沿海重要养殖品种但因种质资源退化导致其品质、遗传多样性、生长速度、抗病能力受到影响。雌核发育作为可获得优良品种的手段之一被广泛的应用于鱼类良种的开发。据报道,人工诱导褐点石斑鱼雌核发育技术已取得成功,但因人工诱导雌核发育过程中需对精子遗传物质灭活和受精卵染色体加倍处理使得仔鱼存活率低、畸形率高,为探究人工诱导雌核发育手段对褐点石斑鱼受精卵胚胎发育的影响,本研究以紫外线法和冷休克法为雌核发育处理手段,以紫外灯、褐点石斑鱼母本（♀）与清水石斑鱼父本（Epinephelus polyphekadion,♂）为研究对象,对紫外灯辐射强度稳定范围、稳定时间进行测定以及对清水石斑鱼精子最佳稀释液进行筛选、清水石斑鱼精子紫外处理条件和受精卵冷休克处理条件的摸索以及经紫外处理诱导的胚胎和冷休克处理过的胚胎发育的观察,取得的研究结果如下:1.对不同紫外灯管辐射强度进行研究表明不同紫外灯打开后辐射强度趋于稳定的时长不同;同一灯管不同位点处辐射强度不同;辐射强度随灯管高度增加而降低,一定范围内,高度上升1 cm会造成辐射强度呈显着差异（P<0.05）。2.采用5种精子稀释液（ELS3、EM1、Hank’s、MPRS和TS-19）对清水石斑鱼精子稀释后通过观察精子激活率、精子快速运动时间及寿命,测得EM1为清水石斑鱼精子最佳稀释液。本研究对紫外照射条件、冷休克处理起始时间、处理持续时间进行了筛选。结果表明:当辐射强度为2500μW/cm2,照射2.5 min时褐点石斑鱼受精卵原肠期胚胎存活率和孵化率最高;当冷休克（0～2℃）处理起始时间为6.0 min持续处理6.5 min后胚胎孵化率最高。3.对未经任何处理、紫外照射以及冷休克后的受精卵胚胎发育进行观察,研究表明经冷休克处理后的受精卵胚胎发育用时最长,且紫外和冷休克处理会造成受精卵胚胎发育卵裂不均一,胚胎细胞出现多油球的情况,并造成初孵仔鱼不同程度的畸形。
李景春[4]（2020）在《兴国红鲤精液的玻璃化超低温冻存技术研究》文中指出兴国红鲤是市面上常见的食用鱼,养殖遍布全国,具有巨大的经济效益价值。育种过程中,常有雄雌鱼性成熟不同步,繁殖季节雄鱼精液过剩,反季节繁殖缺少精液等一系列问题。而玻璃化超低温保存技术打破了时间空间上的限制,随时随地可以使用。本研究玻璃化超低温保存技术,除了通过检测精子激活率、快速运动时间、寿命等常规手段来对冷冻后的精子质量检测评价外,还对解冻后精子的相关酶活性的检测和超微结构观察分析,从而系统性的完善了精子超低温保存的方案,为实际生产提供一定的理论指导。1.kurokura、D-17、ASP、任氏液四种稀释液搭配四个浓度DMSO做为抗冻剂,液氮冻存10d后解冻,测得kurokura稀释液搭配10%浓度DMSO的精子活力最好;分别设置了四个梯度浓度DMSO、DEF、甲醇、乙二醇四种试剂配kurokura为稀释液来保存,液氮冻存10d,10%浓度的DMSO保存的精子活力高于其他组别;设置5个梯度的稀释倍数,10d后解冻检测,发现10倍的稀释倍数效果最好;设置5个梯度的平衡时间,10d后复苏,整体活力呈现先升后降的趋势,平衡时间10min的效果最佳;设置四个梯度解冻温度,37℃水浴13s取得了效果最好;解冻后0.65%Nacl的激活液对精子激活效果最好。2.鲜精和经1d、10d、30d三个不同时间冻存的精子分别检测总ATP酶、SDH（琥珀酸脱氢酶）、LDH（乳酸脱氢酶）、CAT（过氧化氢酶）、SOD（超氧化物歧化酶）、GR（谷胱甘肽还原酶）。鲜精的总ATP酶和三组冻精之间有显着性差异（P<0.05）,整体来看冻精的总ATP随着时间的延长整体呈现下降的趋势;鲜精SDH酶活性和其他三组冻精有显着性差异（P<0.05）,冻精的SDH酶活性整体呈现先降后升的效果;鲜精LDH酶活性和其他三组冻精有显着性差异（P<0.05）,随着保存时间的加长整体酶活性呈现下降的趋势,保存1d和10d的没有显着差异性（P>0.05）;鲜精的SOD酶活性和鲜精相比,冷冻后的精子SOD酶的活性明显的下降,冻精和鲜精之间有显着性差异（P<0.05）;鲜精CAT酶活性高于冻精,冻精的CAT酶活性随着时间的延长而降低;GR酶活性经超低温冻存和时间的加长,酶活性显着升高。3.兴国红鲤精子在电子显微镜下看到是由头、中、尾三部分组成。正常的精子头部呈卵状。中部短且不明显,在细胞核的后面连接着,主要是由中心粒复合体和袖套组成。精子的鞭毛是从袖套腔里延伸出来,形态细长,切断可以看到典型“9+2”微管结构,鞭毛的两侧有侧鳍。经30d玻璃化超低温保存后的精子损伤主要表现在,细胞质膜褶皱破裂,细胞质泄漏,电子致密物质明显疏松,线粒体吸水膨胀脱落,鞭毛严重断裂,鞭毛两边侧鳍不规则破损等。研究结果表明,采用kurokura稀释液搭配10%DMSO抗冻剂最终浓度10倍稀释精液,平衡10min后液氮保存,37℃水浴13s复苏最适宜兴国红鲤精液玻璃化超低温冻存;而玻璃化超低温对精子里面的酶活性影响也是十分明显,导致冻精的酶活性普遍偏低;从精子超微结构来看,少部分精子的结构不同程度上受到了超低温的损伤,从而影响了精子活率。
刘光霞,吴兴兵,何勇凤,邓智明,杨德国,王小明,杨少荣,刘欢[5]（2020）在《圆口铜鱼精子超低温冷冻保存》文中研究表明为建立圆口铜鱼（Coreius guichenoti）精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统（CASA）评价了4种稀释液（D15、D20、L1、D1）, 3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺（DMF）、二甲基亚砜（DMSO）、甲醇（METH）]在3种体积浓度（7.5%、10%、12.5%, V/V）下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响。结果表明,D1组稀释液的精子活率（MOT）最高,为（74.64±13.17）%,与鲜精无显着差异（P>0.05）;以10%甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到（78.11±14.74）%,与鲜精无显着差异（P>0.05）,精子运动速度达最大,平均曲线运动速度（VCL）、平均直线运动速度（VSL）、VAP（平均路径运动速度）分别达到（50.28±12.46）μm/s、（35.06±10.82）μm/s、（39.44±12.46）μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为（8.67±1.15） s、（33.33±5.00） s,显着低于鲜精（P<0.05）; 7.5%甲醇组和7.5%二甲基甲酰胺组的MOT次之,分别为（77.71±17.74）%、（76.42±12.49）%,抗冻剂二甲基亚砜组的MOT显着低于甲醇组、二甲基甲酰胺组（P<0.05）。12.5%的3种抗冻保护剂中,几乎无精子存活;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,10%甲醇组,相较于使用超纯水激活,用150 mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,说明Na+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用。研究表明, D1+10%METH （7.8 g/L NaCl+0.5 g/L KCl+15 g/L葡萄糖+10%METH）可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定了基础。
刘光霞[6]（2019）在《圆口铜鱼精子冷冻保存技术研究》文中指出圆口铜鱼（Coreius guichenoti）,隶属于鲤形目（Cytcriniformes）、鲤科（Cyprinidae）、鮈亚科（Gotiongiae）、铜鱼属（Coreius）,是一种习惯在水流湍急的江河中栖息的河道洄游鱼类,常在岩礁众多的深潭中成群出现,曾是我国长江上游江段的主要优势物种和重要经济鱼类。然而,近年来,由于水电工程设施建设,长江流域生态环境改变、人类无节制的捕捞对圆口铜鱼的繁殖、生长造成了破坏性的影响,种群数量逐年下降,渔获物中幼龄或低龄鱼所占比重较大。是为长江上游珍稀特有鱼类保护区指标性物种之一,其保护问题亟待解决。开展增殖放流工作对保护珍稀鱼类至关重要,实现亲鱼的人工驯养、规模化化繁育则是增值放流的充分条件。目前,圆口铜鱼人工驯养繁殖圆满成功,已攻克该物种保护的关键技术难题,但亲鱼难捕获、养殖亲鱼数量少,雌雄配子发育不同步,雄鱼精液量少等问题制约了圆口铜鱼的规模化繁育。本研究通过对圆口铜鱼精液渗透压、不同渗透压下精子活力、精子4℃低温保存稀释液及不同抗冻剂下圆口铜鱼精液超低温冷冻保存效果的研究,旨在探索影响精子活力的因素和适宜圆口铜鱼精子保存的方法,以期为圆口铜鱼人工繁育、精子超低温冷冻保存提供基础数据。研究内容及主要研究结果如下:1.不同渗透压对圆口铜鱼精子活力的影响为探讨圆口铜鱼精子活力与渗透压的关系,研究了圆口铜鱼精液渗透压及其精子在2种溶液（NaCl和KCl）7个渗透压梯度（0、50、100、150、200、250、300 mOsm/kg）中的活动情况。结果表明:圆口铜鱼精液渗透压平均为252.48±4.20mOsm/kg;在0150 mOsm/kg梯度内,受渗透压影响,圆口铜鱼精子快速运动时间和寿命逐渐增加,在150 mOsm/kg NaCl、KCl溶液中,圆口铜鱼精子的快速运动时间分别为35.2 s、30.8 s,寿命分别为103.13 s、105.13 s;在150300mOsm/kg渗透压梯度内,圆口铜鱼精子快速运动时间和寿命均在不断下降,近似为0。研究结果可为圆口铜鱼精液保存提供参考依据。2.圆口铜鱼精子4℃低温保存分别在Kurokura1、D15、L1、L2、L3、L4六种稀释液中低温保存圆口铜鱼精子,结果表明:精子活率、寿命和运动速度均随保存时间的延长呈下降趋势。未经任何处理的鲜精在保存72 h后,几乎无精子存活。D15稀释液保存圆口铜鱼精子的效果最好,72 h,精子活率为（91.65±6.77）%,快速运动时间和寿命分别为10.00±1.67 s、41.33±7.42 s,观察至120 h,精子活率仍可达（75.28±42.56）%。四种溶液中,精子的VCL、VSL、VAP随时间的延长呈下降趋势。144 h,D15稀释液中精子的VCL、VSL、VAP分别为46.44μm/s、24.55μm/s和32.15μm/s,Kurokura1稀释液中精子已死亡。3.圆口铜鱼精液超低温冷冻技术与效果分析了四种稀释液（D15、D20、L1、D1）,三种抗冻保护剂（DMF[二甲基甲酰胺]、DMSO[二甲基亚砜]、METH[甲醇]）在三种浓度（7.5%、10%、12.5%,v/v）下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果。结果表明,D1组稀释液的MOT（精子活率）最高,为（74.64±13.17）%,与鲜精无显着差异;抗冻剂终浓度为10%METH组的圆口铜鱼精子,经无离子水激活后,测得MOT最高,达到（78.11±14.74）%,与鲜精差异不显着（P>0.05）,精子运动速度达最大,VCL（平均曲线运动速度）、VSL（平均直线速度）、VAP（平均路径速度）分别达到50.28±12.46μm/s、35.06±10.82μm/s、39.44±12.46μm/s,与鲜精有显着差异（P<0.05）,抗冻剂DMSO组的精子活率显着低于METH、DMF组;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,发现10%METH组,相较于使用无离子水激活,用150mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,Na+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用。研究表明,D1+10%METH可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定基础。
程顺,顾志敏,刘士力,蒋文枰,迟美丽,贾永义[7]（2019）在《翘嘴鲌精子生理特性及超低温冷冻的研究》文中认为采用试验生态——显微观察方法对翘嘴鲌精子的生理特性进行了研究,并用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,筛选出适宜的稀释液与抗冻剂配方。结果表明,翘嘴鲌适宜的盐度范围为0～0.4%,pH值为5.5～8.0时,精子激活率较高,其中pH值为5.5时,精子运动时间与寿命最长;翘嘴鲌精子在4℃条件下保存84 h仍有48.33%的激活率,在25℃条件下保存84 h时精子死亡。以D-15为稀释液、10%乙二醇（EG）为抗冻剂,采用两步降温法超低温冷冻保存翘嘴鲌精子,解冻后精子活力最高。
王鑫伟,史应学,竺俊全,王建平[8]（2017）在《光唇鱼精子的超低温冷冻保存及酶活性检测》文中研究表明光唇鱼（Acrossocheilus fasciatus）是我国溪流性特色经济鱼类之一,因生境变化及捕捞过度等原因,导致种质资源衰退,因此需要开展种质资源保护及种质细胞保存研究,精子冷冻保存是种质细胞保存的有效方式之一。本研究,从人工养殖的性成熟雄性光唇鱼采集精液,以0.25 m L麦细管为冻存管,开展稀释液及其稀释比例、抗冻剂种类及其浓度、平衡时间、两步降温法降温高度以及解冻温度等对该种鱼精子超低温冻存效果影响的研究,并通过酶活性检测对冻精质量进行初步评价。结果表明,在稀释液为D-15液、稀释比为1∶5、抗冻剂为10%二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）、平衡时间为30 min,距离液氮面3.5 cm处降温5 min后投入液氮中保存以及37℃解冻的精子效果较佳,冻精解冻后激活率达（35.33±2.52）%,但与鲜精激活率（87.67±3.06）%相比仍差异显着（P<0.05）;鲜精总ATP酶、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase,SDH）及乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性分别为（9.31±0.17）U/m L、（30.33±5.69）U/m L和（7 454.84±252.42）U/L,冻精总ATP酶、SDH和LDH活性分别为（7.23±1.08）U/m L、（17.67±6.03）U/m L和（2 172.48±209.62）U/L,两者差异亦显着（P<0.05）。本研究取得了光唇鱼精子冷冻保存实验的初步成功,为光唇鱼精子冷冻保存库建立提供了一定的技术基础,但有关技术参数还有待于进一步探索优化,以提高冻精质量。
姜静[9]（2014）在《几种海水鱼类种质超低温冷冻保存研究》文中研究指明自20世纪50年代，Blaxter首次成功冰冻保存了太平洋鲱鱼（Clupea harengus）精巢后，到目前为止，种质资源的超低温冷冻保存技术已经取得了不错的成绩，并正日益趋于成熟。目前，已对200多种淡水鱼类、40多种海水鱼类的精液作了冷冻保存研究，并获得了成功保存，并建立了精子冷冻库（cryobank）。但目前还尚未取得一个统一的方法适用于各种鱼类，因此，鱼类精液冷冻保存技术还有待需要进一步的探索和推进。同时期，鱼类胚胎冷冻保存也开始了相关研究。随着生物技术和新型技术手段的不断成熟和应用，鱼类胚胎冷冻保存研究的发展也取得了迅速的推进。星斑川鲽（Platichthys stellatus, Pallas1788）隶属鲽形目（Pleuronectiformes）、鲽科（Pleuronectidae）、川鲽（Platichthys）属。主要分布于白令海峡、楚科奇海、阿拉斯加和加拿大北部沿海以及北美和南加利福尼亚等，其中，在加拿大、美国、俄罗斯、中国、朝鲜、韩国和日本等均有分布。但近些年，星斑川鲽的自然种群在我国已很少发现，并且星斑川鲽产精量少，限制了在人工繁育和杂交育种中的扩大生产。石斑鱼为雌雄同体，暖水性海水鱼类，以热带、亚热带分布居多，在我国主要分布于南海和东海。鞍带石斑鱼（Epinephelus lanceolatus）和七带石斑鱼（Epinephelus septemfasciatus）隶属鲈形目（Perciformes）、鮨科（Serranidae）、石斑鱼亚科（Epinephelinae）、石斑鱼属（Epinephelus）。鞍带石斑鱼体型大、生长迅速，是水产养殖业的新型品种，但其雄鱼数量少，产精量有限，这些因素的限制造成现实不能够满足实际的需求。此外，生殖隔离也阻隔了石斑鱼种间杂交的发展。七带石斑鱼是在我国黄海唯一有分布的、具有较高经济价值的种类。本实验室于2013年已对七带石斑鱼精子进行了冷冻保存，并获得了成功。目前，由于七带石斑鱼因神经坏死病的复发蔓延，该鱼产量受到了严重影响。为此，鉴于以上几种鱼类所存在的问题，开展鱼类种质保存研究是解决和保持水产养殖业可持续发展和保护鱼类遗传多样性的一种可行性方法，并且该研究的开展已迫在眉睫，势在必行。本研究分别对星斑川鲽和鞍带石斑鱼两种海水鱼类的精子进行了冷冻保存，在星斑川鲽精子冷冻保存研究中，主要对精子稀释液（种类、成分、渗透压）、激活海水适宜温度，冷冻精液的适宜稀释比例等方面进行了筛选。研究得出，利用Ts-2和SFs-4作为稀释液，10%DMSO为抗冻剂，冷冻复苏后用12℃海水激活能够获得较高的精子活力，并且利用稀释20倍的冻精用于受精实验，能够获得较高的受精率。此外，运用CASA系统对利用Ts-2和SFs-4冷冻保存的精子做了参数分析，发现利用SFs-4保存的精子各项运动参数明显高于Ts-2。在鞍带石斑鱼精子冷冻保存研究中，主要对精子稀释液种类、抗冻剂DMSO及FBS适宜浓度作了筛选。结果得出，利用ELS3和ELRS3作为稀释液，15%DMSO和10%FBS作为抗冻剂，精子的冷冻效果最好，解冻复苏后精子活力最高。同时，本研究对七带石斑鱼胚胎进行了超低温玻璃化冷冻保存，主要是从抗冻剂种类以及不同种类抗冻剂混合搭配使用对胚胎的毒性作用大小的角度，来筛选出毒性最低的最适宜的玻璃化液用于冷冻保存。研究结果发现利用35%PMG3+5%海藻糖（PMG3T）玻璃化液处理的未经冷冻的胚胎的孵化率最高为31.76%，并经冷冻保存后，发现78粒冷冻保存的卵中，解冻处理后有上浮卵6粒，并有1粒孵化出仔鱼。此外，本研究还对利用PM、PMG3、PMG3T3玻璃化液处理和冷冻保存的七带石斑鱼肌节期胚胎内的6种酶进行了测定，发现鉴于玻璃化液处理和冷冻保存后的胚胎内6种酶活性，除了MDA外，其他5种酶（SOD、CK、Na+/K+-ATPase、LDH、GSH-Px）活性均减少，表明冷冻和玻璃化液均使得胚胎细胞内的抗氧化体系遭受损伤，造成胞内能量代谢酶和某些抗氧化酶含量减少，脂质过氧化损伤等，从而降低了冷冻胚胎复活率。通过对冷冻前后胚胎内相关酶活性的测定，一定程度上为七带石斑鱼胚胎冷冻保存提供了理论依据。另外，为了更好的探索海水鱼类胚胎冷冻保存机理，本文对海水靑鳉胚胎进行了初步的研究实验，但目前尚未作出系统的研究工作，还有待日后继续进行研究。
周磊,罗渡,卢薛,王鹏飞,胥鹏,曾雷,李桂峰[10]（2014）在《斑鳜精液超低温冷冻保存及其效果分析》文中研究指明实验所用翘嘴鳜（♀,Siniperca chuatsi）23龄,体质量1 0001 500 g;斑鳜（♂,Siniperca scherzeri Steindachner）12龄,体质量300500 g。于繁殖季节选取成熟度好的亲鱼以促黄体素释放激素类似物（LHRH-A2）、绒毛膜促性腺激素（HCG）和马来酸地欧酮（DOM）进行催产。通过筛选D-15、D-17、Ringer液和M-Hank’s液4种稀释液和二甲基亚砜（DMSO）、甘油（Gly）、乙二醇（EG）、1,2-丙二醇（PG）和二甲基甲酰胺（DMF）5种抗冻剂,发现DMSO和D-17分别是优选的抗冻剂和稀释液。以D-17作为斑鳜精子的稀释液,按照1︰3（精液︰稀释液）体积比稀释,添加10%体积的DMSO作为抗冻剂,按照三步冷冻法超低温冷冻保存,37℃水浴解冻的斑鳜精子,经CASA分析精子活率为（83.26±18.20）%,SCGE检测表明70%以上的精子核DNA不会发生损伤;FCM分析表明26.74%的解冻精子有完整的细胞膜且线粒体功能正常;用冷冻复苏斑鳜精子与翘嘴鳜精卵进行人工授精,最高受精率（39.6±6.5）%,温度2428℃孵化时间38 h,孵化后的鱼苗发育正常,开口1周以后的鱼苗全长（1.346±0.255）cm,体高（0.438±0.103）cm,体质量（0.045±0.020）g。鲜精受精鱼苗和冻精受精鱼苗在开口后1周的生长没有显着差异。因此认为D-17+10%DMSO可用于斑鳜精液的超低温冷冻保存。本研究将有助于斑鳜种质资源的收集保存和冷冻保存的斑鳜精液在翘嘴鳜（♀）×斑鳜（♂）杂交中的应用。
二、鲢、鲤、团头鲂和草鱼精液冷冻保存的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鲢、鲤、团头鲂和草鱼精液冷冻保存的研究（论文提纲范文）
（1）黄鳍棘鲷精子冷冻保存方法探究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 稀释液的筛选 |
| 1.3 葡萄糖浓度的筛选 |
| 1.4 抗冻剂的筛选 |
| 1.5 稀释比例的筛选 |
| 1.6 降温程序的筛选 |
| 1.7 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 黄鳍棘鲷精子冷冻保存稀释液的筛选 |
| 2.2 黄鳍棘鲷精子冷冻保存葡萄糖浓度的筛选 |
| 2.3 黄鳍棘鲷精子冷冻保存抗冻剂的筛选 |
| 2.4 黄鳍棘鲷精子冷冻保存稀释比例的筛选 |
| 2.5 黄鳍棘鲷精子冷冻保存降温程序的筛选 |
| 3 讨论 |
| 3.1 稀释液对黄鳍棘鲷精子活力的影响 |
| 3.2 葡萄糖浓度对黄鳍棘鲷精子活力的影响 |
| 3.3 抗冻剂的种类和浓度对黄鳍棘鲷精子活力的影响 |
| 3.4 稀释比例对黄鳍棘鲷精子活力的影响 |
| 3.5 降温程序对黄鳍棘鲷精子活力的影响 |
| 4 结论 |
（3）紫外辐射灭活清水石斑鱼精子诱导褐点石斑鱼卵子胚胎发育的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 石斑鱼养殖和育种概况 |
| 1.1.1 石斑鱼分类地位 |
| 1.1.2 石斑鱼生物学特性 |
| 1.1.3 石斑鱼人工养殖 |
| 1.1.4 石斑鱼种质研究 |
| 1.1.5 石斑鱼育种策略 |
| 1.2 雌核发育 |
| 1.2.1 天然雌核发育的鱼类 |
| 1.2.2 鱼类雌核发育的人工诱导 |
| 1.3 人工诱导鱼类雌核发育研究进展 |
| 1.4 人工诱导鱼类雌核发育目的及意义 |
| 1.5 本研究的目的及内容 |
| 2 紫外灯辐射强度稳定范围测定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 数据统计 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 不同时段紫外灯管辐射强度的变化 |
| 2.4.2 不同位点处紫外辐射强度 |
| 2.4.3 不同高度下的紫外辐射强度 |
| 2.5 讨论 |
| 3 紫外灭活清水石斑鱼精子诱导褐点石斑鱼卵子发育最佳处理条件的筛选 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 精卵的采集 |
| 3.1.2 清水石斑鱼精子最佳稀释液的选择 |
| 3.1.3 精子遗传物质紫外灭活 |
| 3.1.4 冷休克诱导条件的选择 |
| 3.1.5 指标计算 |
| 3.1.6 数据统计 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同稀释液对清水石斑鱼精子活力的影响 |
| 3.2.2 不同紫外灭活条件下受精卵的孵化情况 |
| 3.2.3 冷休克结果 |
| 3.3 讨论 |
| 4 不同处理条件下的胚胎发育比较 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 受精卵的获得以及孵化 |
| 4.1.2 胚胎发育观察 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（4）兴国红鲤精液的玻璃化超低温冻存技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鱼类精液玻璃化超低温保存在生产中的应用 |
| 1.2 鱼类精液玻璃化超低温冷冻保存技术研究现状 |
| 1.2.1 国内鱼类精液玻璃化超低温冷冻保存技术的进展 |
| 1.2.2 国外鱼类精液玻璃化超低温冷冻保存技术的进展 |
| 1.3 鱼类精液的玻璃化超低温保存研究 |
| 1.3.1 鱼类精液的一般生理特征 |
| 1.3.2 鱼类精液玻璃化超低温冷冻的工作原理 |
| 1.3.3 鱼精液的活力评判标准 |
| 1.3.4 鱼类精液的玻璃化超低温冷冻方法 |
| 1.4 本论文研究的目的和意义 |
| 第二章 兴国红鲤精液玻璃化超低温冻存条件研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.2.1 成鱼的来源及喂养 |
| 2.2.2 溶液的配制 |
| 2.2.3 主要仪器 |
| 2.2.4 精液密度的测定 |
| 2.2.5 精子活力检测 |
| 2.2.6 稀释液的筛选 |
| 2.2.7 抗冻剂的筛选 |
| 2.2.8 冷冻稀释倍数的筛选 |
| 2.2.9 平衡时间的筛选 |
| 2.2.10 解冻温度的筛选 |
| 2.2.11 激活液的筛选 |
| 2.2.12 OpenCASA动态图像分析系统分析精子活力情况 |
| 2.2.13 数据分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 不同采集时间对兴国红鲤精液密度和活力的影响 |
| 2.3.2 稀释液的筛选结果 |
| 2.3.3 抗冻液的筛选结果 |
| 2.3.4 稀释倍数的筛选结果 |
| 2.3.5 平衡时间的筛选结果 |
| 2.3.6 解冻温度的筛选结果 |
| 2.3.7 激活液的筛选结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 不同采集时间对兴国红鲤精子密度和活力的影响 |
| 2.4.2 稀释液和抗冻剂对兴国红鲤精子的活力影响 |
| 2.4.3 稀释倍数对兴国红鲤精子的影响 |
| 2.4.4 平衡时间对兴国红鲤精子的影响 |
| 2.4.5 解冻温度对兴国红鲤精子的影响 |
| 2.4.6 激活液对兴国红鲤精子的影响 |
| 第三章 玻璃化超低温保存对兴国红鲤精液酶活性的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 试剂和仪器 |
| 3.2.3 实验方法 |
| 3.2.4 数据处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 兴国红鲤鲜精和冻精的活力结果 |
| 3.3.2 玻璃化超低温玻璃化冻存对精子SDH和LDH酶的影响结果 |
| 3.3.3 玻璃化超低温玻璃化冻存对精子SOD和CAT酶的影响结果 |
| 3.3.4 玻璃化超低温玻璃化冻存对精子GR和总ATP酶的影响结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 玻璃化超低温对精子SDH和LDH两种酶的影响 |
| 3.4.2 玻璃化超低温对精子SOD和CAT两种酶的影响 |
| 3.4.3 玻璃化超低温对精子GR和总ATP两种酶的影响 |
| 第四章 玻璃化超低温冻存前后兴国红鲤精子的超微结构比较 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 精子采集 |
| 4.2.2 试剂材料 |
| 4.2.3 扫描电镜样品处理 |
| 4.2.4 透射电镜样品处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 冷冻前鲜精的超微结果 |
| 4.3.1.1 头部超微结构 |
| 4.3.1.2 中段超微结构 |
| 4.3.1.3 尾部超微结构 |
| 4.3.2 冷冻后精子的超微结构 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 兴国红鲤正常精子的超微结构 |
| 4.4.2 玻璃化超低温冻存对兴国红鲤精子超微结构的影响 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位间所取得成就 |
| 致谢 |
（5）圆口铜鱼精子超低温冷冻保存（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 样品采集 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 筛选稀释液 |
| 1.2.2 抗冻剂筛选 |
| 1.2.3 不同激活液中冻精质量检测 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同稀释液对圆口铜鱼精子活力的影响 |
| 2.2 抗冻剂对精子快速运动、寿命和活率的影响 |
| 2.3 不同浓度不同种类的抗冻剂对精子运动速率的影响 |
| 2.4 激活液中Na+对冻精质量的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 稀释液对精子活力的影响 |
| 3.2 抗冻剂种类和浓度对精子活力的影响 |
| 3.3 激活液中Na+对冷冻精子质量的影响 |
（6）圆口铜鱼精子冷冻保存技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1 圆口铜鱼研究概况 |
| 1.1 圆口铜鱼生物学概述 |
| 1.2 圆口铜鱼研究进展 |
| 2 鱼类精液保存研究进展 |
| 2.1 鱼类精子生理生态特征研究 |
| 2.2 鱼类精子质量的评价 |
| 2.3 鱼类精子活力的影响因素 |
| 2.3.1 渗透压 |
| 2.3.2 Na~+、K~+、Ca~(2+) |
| 2.3.3 温度 |
| 2.3.4 pH |
| 2.3.5 其他因素 |
| 3 鱼类精液的主要保存方法 |
| 3.1 常温保存 |
| 3.2 低温保存 |
| 3.3 超低温冷冻保存 |
| 4 圆口铜鱼精液保存研究 |
| 5 选题目的与意义 |
| 第二章 不同渗透压对圆口铜鱼精子活力的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验鱼来源 |
| 2.1.2 精液采集 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 精液渗透压的测定 |
| 2.2.2 试验溶液的配置 |
| 2.2.3 精子活力观察方法 |
| 2.3 数据分析与处理 |
| 3 结果和分析 |
| 3.1 圆口铜鱼精液渗透压 |
| 3.2 不同溶液对圆口铜鱼精子快速运动的影响 |
| 3.3 不同溶液对圆口铜鱼精子寿命的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 渗透压对精子活力的影响 |
| 4.2 NaCl、KCl溶液对精子活力的影响 |
| 第三章 圆口铜鱼精液低温保存研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验鱼来源 |
| 2.2 精液采集 |
| 2.3 稀释液配制 |
| 2.4 精子活力检测方法 |
| 2.5 数据分析和处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同稀释液的保存效果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 稀释液配方对精子活力的影响 |
| 第四章 圆口铜鱼精子超低温冷冻技术与效果 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 样品采集 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 筛选稀释液 |
| 2.2.2 抗冻剂筛选 |
| 2.2.3 不同激活液中冻精质量检测 |
| 2.3 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同稀释液对圆口铜鱼精子活力的影响 |
| 3.2 抗冻剂对精子快速运动、寿命、活率的影响 |
| 3.3 不同浓度不同种类的抗冻剂对精子运动速率的影响 |
| 3.4 激活液中Na~+对冻精质量的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 稀释液对精子活力的影响 |
| 4.2 抗冻剂种类和浓度对精子活力的影响 |
| 4.3 Na~+对冷冻精子质量的影响 |
| 第五章 总结 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 致谢 |
（7）翘嘴鲌精子生理特性及超低温冷冻的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 激活液配制 |
| 1.3 稀释液配制 |
| 1.4 抗冻液 (稀释液+抗冻剂) 配制 |
| 1.5 方法 |
| 1.5.1 精液采集 |
| 1.5.2 精子活力的检测 |
| 1.5.3 不同激活液对精子活力的影响 |
| 1.5.4 不同抗冻液对精子冷冻保存的影响 |
| 1.6 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 盐度对翘嘴鲌精子活力的影响 |
| 2.2 pH值对翘嘴鲌精子活力的影响 |
| 2.3 精子在不同保存时间与保存温度下的活力变化 |
| 2.4 翘嘴鲌精子超低温保存 |
| 3 讨论与结论 |
（8）光唇鱼精子的超低温冷冻保存及酶活性检测（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 数据处理与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 精液中精子密度 |
| 2.2 稀释液种类对精子冷冻保存效果的影响 |
| 2.3 稀释比例对精子冷冻保存效果的影响 |
| 2.4 抗冻剂种类及其浓度对精子冷冻保存效果的影响 |
| 2.5 4℃平衡时间对精子冷冻保存效果的影响 |
| 2.6 两步降温法降温高度对精子冷冻保存效果的影响 |
| 2.7 解冻温度对精子冷冻保存效果的影响 |
| 2.8 鲜精及冻精的总ATP酶、SDH和LDH活性 |
| 3 讨论 |
| 3.1 精子超低温冷冻保存的适宜条件 |
| 3.2 冻精活力与能量代谢酶活性的关系 |
| 4 结论 |
（9）几种海水鱼类种质超低温冷冻保存研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1. 鱼类精液超低温冷冻保存研究 |
| 1.1 鱼类精子的生物学特性 |
| 1.2 鱼类精子超低温冷冻保存的基本原理与机理 |
| 1.3 鱼类精子超低温冷冻保存的研究现状 |
| 1.4 鱼类精子超低温冷冻保存技术的应用意义 |
| 1.5 鱼类精子超低温冷冻损伤研究 |
| 2. 鱼类胚胎超低温冷冻保存研究 |
| 2.1 鱼类胚胎超低温冷冻保存原理 |
| 2.2 影响鱼类胚胎冷冻保存的限制因子 |
| 2.3 鱼类胚胎超低温冷冻保存研究现状 |
| 第二章 星斑川鲽精子冷冻保存与生理特性分析 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 精液和未受精卵的来源 |
| 2.2 精子稀释液和冷冻保存液的配制 |
| 2.3 精子稀释液的筛选 |
| 2.4 不同渗透压蔗糖溶液对精子活力的影响 |
| 2.5 激活精子的海水温度筛选 |
| 2.6 冷冻精液授精稀释比例的确定 |
| 2.7 冷冻精子授精实验 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 星斑川鲽精子稀释液的筛选 |
| 3.2 不同渗透压蔗糖稀释液对精子活力的影响 |
| 3.3 激活精子海水温度的筛选 |
| 3.4 冷冻精液授精稀释比例的确定 |
| 3.5 冷冻精子授精实验 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)精子冷冻保存以及与赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)杂交上的应用 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 精液的采集 |
| 2.2 精子稀释液的配制与筛选 |
| 2.3 适宜二甲基亚砜(DMSO)浓度的筛选 |
| 2.4 适宜胎牛血清(FBS)浓度的筛选 |
| 2.5 鞍带石斑鱼精子大量冷冻保存与杂交授精 |
| 3. 结果 |
| 3.1 适宜精子稀释液的筛选 |
| 3.2 适宜二甲基亚砜(DMSO)浓度的筛选 |
| 3.3 适宜胎牛血清(FBS)浓度的筛选 |
| 3.4 鞍带石斑鱼精子大量冷冻保存及受精率和孵化率比较 |
| 4. 讨论 |
| 第四章 七带石斑鱼(Epinephelus septemfasciatus)胚胎冷冻保存 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 胚胎来源及实验用试剂 |
| 2.2 渗透性抗冻剂对胚胎毒性实验 |
| 2.3 非渗透性抗冻剂对胚胎毒性实验 |
| 3. 结果 |
| 3.1 单一渗透性抗冻剂对胚胎毒性实验比较 |
| 3.2 两种渗透性抗冻剂对胚胎毒性实验比较 |
| 3.3 三种渗透性抗冻剂对胚胎毒性实验比较 |
| 3.4 非渗透性抗冻剂对胚胎毒性实验比较 |
| 4. 讨论 |
| 第五章 超低温冷冻对七带石斑鱼(Epinephelus septemfasciatus)胚胎酶活性的影响 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 实验样品采集与准备 |
| 2.2 酶活性检测 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 超低温冷冻中不同玻璃化液对抗氧化酶活性的影响 |
| 3.2 超低温冷冻中不同玻璃化液对能量代谢酶活性的影响 |
| 4. 讨论 |
| 第六章 靑鳉(Oryzias melastigma)胚胎冷冻保存初探 |
| 1. 引言 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 胚胎来源和实验用试剂 |
| 2.2 不同发育时期胚胎对玻璃化液的适应性影响 |
| 2.3 玻璃化液中不同种类和浓度糖类的筛选 |
| 2.4 不同解冻温度对胚胎孵化率的影响 |
| 3. 结果 |
| 3.1 胚胎时期的确定 |
| 3.2 玻璃化液中不同种类和浓度糖类的确定 |
| 3.3 不同解冻温度对胚胎孵化率的影响 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 致谢 |
| 发表及撰写论文 |
（10）斑鳜精液超低温冷冻保存及其效果分析（论文提纲范文）
| 1材料与方法 |
| 1.1亲鱼来源及配子采集 |
| 1.2超低温冷冻保存 |
| 1.3冷冻保存斑鳜精子的质量检测 |
| 1.4统计分析 |
| 2结果与分析 |
| 2.1超低温冷冻保存 |
| 2.2冷冻保存斑鳜精子的质量检测 |
| 3讨论 |
| 3.1斑鳜精子的超低温冷冻保存 |
| 3.2冷冻保存斑鳜精子的效果分析 |
四、鲢、鲤、团头鲂和草鱼精液冷冻保存的研究（论文参考文献）
- [1]黄鳍棘鲷精子冷冻保存方法探究[J]. 贾濮元,郭华阳,朱克诚,刘宝锁,郭梁,张楠,江世贵,张殿昌. 南方水产科学, 2021
- [2]兰州鲇精液超低温冷冻保存技术研究及细胞损伤检测[J]. 邢露梅,肖伟,李兰兰,张利平,赛清云,俞兆曦,吴旭东,连总强. 水生生物学报, 2021(03)
- [3]紫外辐射灭活清水石斑鱼精子诱导褐点石斑鱼卵子胚胎发育的研究[D]. 曹勤. 广东海洋大学, 2020(02)
- [4]兴国红鲤精液的玻璃化超低温冻存技术研究[D]. 李景春. 佛山科学技术学院, 2020(01)
- [5]圆口铜鱼精子超低温冷冻保存[J]. 刘光霞,吴兴兵,何勇凤,邓智明,杨德国,王小明,杨少荣,刘欢. 中国水产科学, 2020(01)
- [6]圆口铜鱼精子冷冻保存技术研究[D]. 刘光霞. 上海海洋大学, 2019(03)
- [7]翘嘴鲌精子生理特性及超低温冷冻的研究[J]. 程顺,顾志敏,刘士力,蒋文枰,迟美丽,贾永义. 江苏农业科学, 2019(07)
- [8]光唇鱼精子的超低温冷冻保存及酶活性检测[J]. 王鑫伟,史应学,竺俊全,王建平. 农业生物技术学报, 2017(04)
- [9]几种海水鱼类种质超低温冷冻保存研究[D]. 姜静. 上海海洋大学, 2014(12)
- [10]斑鳜精液超低温冷冻保存及其效果分析[J]. 周磊,罗渡,卢薛,王鹏飞,胥鹏,曾雷,李桂峰. 中国水产科学, 2014(02)