一、急性脑血管病再灌流损伤12例临床分析（论文文献综述）
文超[1]（2021）在《三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制研究及三七总皂苷对PCI心肌保护作用的系统评价》文中研究说明研究目的1.实验部分通过Langendorff实验装置,建立大鼠离体心脏的缺血再灌注损伤模型,并观察三七三醇皂苷对大鼠心脏缺血再灌注损伤造成的影响,同时探究其是否通过PI3K/Akt信号通路及其相关的机制发挥作用。2.临床部分采用Meta分析研究方法,系统评价三七总皂苷治疗急性冠脉综合征患者经PCI后心肌缺血再灌注损伤的疗效及安全性,旨在提供进一步的循证医学证据。研究方法1.实验部分实验一:将40只健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法,随机分为对照组、I/R模型组和低、中、高剂量三七三醇皂苷组（PTSL组、PTSM组、PTSH组）,各8只。对照组穿线,但不结扎冠状动脉,以K-H液持续灌流105min;IR模型组穿线并结扎冠状动脉左前降支近分支30 min后松开结扎线,以K-H液复灌75 min;PTSL组、PTSM组、PTSH组穿线并结扎冠状动脉左前降支近分支处30 min后,分别给予含5、10、20 mg/L三七三醇皂苷的K-H液复灌75 min。收集5组大鼠平衡灌注20 min、心肌缺血30 min和再灌注15min、再灌注75 min的灌流液,检测大鼠灌流液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）水平。比较5组平衡灌注20 min、局部缺血30 min、再灌注15min和再灌注75 min通过多导生理仪记录的心脏血流动力学参数水平,包括心率（HR）、左心室收缩末压（LVESP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室发展压（LVDP）、左心室内压上升/下降最大速率（±dp/dtmax）,以及LVESP、LVDP、+dp/dtmax与平衡末差值占比。实验二:将40只健康雄性Wistar大鼠采用随机数字表法,分为对照组、I/R组、PTS组、LY294002组、LY294002+PTS组,各8只。通过Langendorff离体心脏灌流装置建立心脏缺血/再灌注模型,对照组只穿线不结扎,平衡20min后以K-H液持续灌流105 min;I/R模型组平衡20min后穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处,令左前降支局部停灌30 min,开放结扎线,K-H液复灌75 min。LY294002组平衡20min后,穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处30min,后开放结扎线,以含15 μmol/L LY294002的K-H液复灌75min。PTS组平衡20min后,穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处30min,后开放结扎线,以含10mg/L三七三醇皂苷的K-H液复灌75min。LY+PTS组平衡20min后,穿线结扎冠状动脉左前降支近分支处30min,后开放结扎线,先以含15 μmol/LLY294002的K-H液复灌15min,再以含10mg/L PTS的K-H液复灌60min。收集不同时刻的灌流液测量心肌酶学指标（CK-MB、LDH）,并记录不同时刻左心室血流动力学参数（HR、LVESP、LVEDP、LVDP、±dp/dtmax）;Western-blot 检测心肌组织中 Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表达,免疫组化检测Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。2.临床部分评价三七总皂苷治疗冠心病急性冠脉综合征PCI患者的有效性和安全性。通过全面搜索 CNKI、WanFang Date、Sinomed、VIP、PubMed、Embase 数据库。筛选并纳入自建库到2021年1月1日以来三七总皂苷联合西医常规治疗冠心病急性冠脉综合征PCI患者的随机对照试验,后根据Cochrane协作网系统评价员5.1.0版进行评估,并对相关结局指标利用RevMan5.3软件进行Meta分析。研究结果1.实验部分实验一:I/R模型组再灌注15、75 min灌流液中CK-MB和LDH水平均高于对照组[CK-MB:（234±51）U/L 比（12±6）U/L,（203±63）U/L 比（14±3）U/L;LDH:（63.9±9.4）U/L 比（6.2±4.6）U/L,（52.1±9.5）U/L比（6.3±4.8）U/L];PTSL、PTSM、PTSH组再灌注75 min灌流液CK-MB水平和再灌注15 min LDH水平均低于IR模型组,PTSL、PTSH组再灌注75 min LDH水平均低于I/R模型组（均P<0.05）。对照组不同时刻灌流液心肌酶指标水平比较差异均无统计学意义（均P>0.05）。与对照组比较,I/R模型组再灌注15、75 min LVDP、+dp/dtmax 均降低,LVEDP、-dp/dtmax 以及 LVESP、LVDP、+dp/dtmax 与平衡末差值占比均升高（均P<0.05）。与I/R模型组比较,PTSL组、PTSM组、PTSH组再灌注15 min LVEDP,PTSL 组再灌注 75 min LVEDP 均降低,PTSM 组再灌注 75 min LVDP、+dp/dtmax均升高,局部缺血30 min,再灌注75 min-dp/dtmax均降低,PTSL组、PISM组、PTSH组LVESP,LVDP、+dp/dtmax与平衡末差值占比均显着降低（均P<0.05）。PTSL组、PTSH组心率在平衡灌注20 min,PTSM组在平衡灌注20 min,局部缺血30 min和再灌注15、75 min均高于IR模型组（均P<0.05）。实验二:（1）血流动力学参数:对照组HR不同时点无明显变化（P>0.05）,其余各组均不同程度上升,且I/R模型组、LY组、PTS组、LY+PTS组在再灌注75min时均无明显差异（P>0.05）。对照组不同时点LVESP、LVEDP、LVDP、±dp/dtmax无明显变化,其余各组随时间延长出现不同程度下降。再灌注75min时,PTS组明显低于模型组（P<0.05）,而LY294002+PTS组与模型组无明显差异,与PTS组差异显着（P<0.05）。（2）CK-MB、LDH:对照组不同时点无显着变化,其余各组再灌注后心肌酶水平均较缺血30min有显着提升（P<0.05）。各组平衡20min时无明显差异（P>0.05）;局部缺血30min时,各组CK-MB无统计学差异（P>0.05）,而各组LDH较对照组有所升高（P<0.05）;再灌注15min、75min时,各组均较对照组明显升高,PTS组明显低于模型组,LY294002+PTS组高于PTS组（P均<0.05）。（3）Akt、pAkt、GSK-3β、pGSK-3β的表达:缺血再灌注损伤后,各组心肌组织Akt、GSK-3β表达无统计学差异（P>0.05）,pAkt、pGSK在PTS组中表达较模型组有显着提高（P<0.05）,在应用LY294002的2组中表达较模型组显着下降（P<0.05）,且LY294002+PTS 与 PTS 组差异存在统计学意义（P<0.05）。（4）Bax、Bcl-2、Caspase-3 的表达:模型组 Bax、Caspase-3 显着高于对照组（P<0.05）,PTS 与 LY+PTS2 组 Bax、Caspase-3表达低于模型组（P<0.05）。对照组Bcl-2强阳性,模型组显着低于对照组（P<0.05）,PTS组较模型组显着提高（P<0.05）,LY294002+PTS组显着低于PTS组（P<0.05）。2.临床部分最终纳入35篇研究,研究地点均在中国,累计病例共计2963例,其中观察组1488例,对照组1475例,共涉及三七总皂苷制剂4种。统计结局指标:CK-MB、cTnT、LVEF、LVEDD、BNP、hs-CRP、IL-6、TNF-α、TC、TG、LDL-C、HDL-C、冠脉灌注 TIMI血流分级进行连续性变量的Meta分析,结果分别为:CK-MB（SMD=-2.09,95%CI:[-3.04,-1.13],I2=97%,P<0.0001）、cTnT（SMD=-2.37,95%CI:[-3.31,-1.43],I2=97%,P<0.00001）、LVEF（WMD=3.97,95%CI:[2.58,5.36],I2=83%,P<0.00001）、LVEDD（WMD=-3.18,95%CI:[-4.33,-2.04],I2=85%,P<0.00001）、BNP（SMD=-1.89,96%CI:[-2.68,-1.11],I2=96%,P<0.00001）、hs-CRP（SMD=-1.46,95%CI:[-2.02,-0.90],I2=96%,P<0.00001）、IL-6（SMD=-1.87,95%CI:[-2.33,-1.41],I2=91%,P<0.00001）、TNF-α（SMD=-1.22,95%CI:[-1.85,-0.59],I2=94%,P<0.0001）、TC（WMD=-0.57,95%CI:[-0.87,-0.27],I2=84%,P=0.0002）、TG（WMD=-0.27,95%CI:[-0.46,-0.08],I2=84%,P=0.005）、LDL-C（WMD=-0.32,95%CI:[-0.61,-0.03],12=85%,P=0.03）、HDL-C（WMD=0.02,95%CI:[-0.13,0.17],I2=84%,P=0.75）、冠脉灌注 TIMI 血流分级（WMD=0.34,95%CI:[0.26,0.42],I2=30%,P<0.00001）。MACEs 发生率、不良反应发生率进行二分类变量的Meta分析,结果分别为:MACEs发生率（RR=0.48,95%CI:[0.33,0.70],I2=4%,P=0.0002）、不良反应发生率（RR=0.73,95%CI:[0.51,1.04],I2=0%,P<0.08）。提示PNS制剂联合西医常规治疗对PCI患者心肌存在一定的保护作用,尤其是在改善冠脉再灌注情况、降低心血管不良事件发生率方面作用显着。但是纳入研究数量偏少、样本量较小、方法学质量偏低,为进一步评价PNS制剂治疗MIRI的有效性,仍需要未来有更多大样本、高质量的随机对照研究提供更可靠的循证医学证据。研究结论1.在大鼠离体心脏局部I/R损伤模型中,三七三醇皂苷具有减少心肌酶的释放、减轻左心室收缩和舒张功能障碍的作用,可能与其调节PI3K/Akt信号通路有关。2.三七总皂苷制剂对PCI患者心肌保护作用疗效肯定,尤其是在改善冠脉灌流、心血管不良事件方面作用显着。
侯季秋[2]（2021）在《从CXCR4/NF-κB/GSDMD探讨柴胡加龙骨牡蛎汤抑制心肌梗死合并焦虑大鼠炎症机制研究》文中提出目的:通过临床文献研究明确中药治疗冠心病合并焦虑抑郁疾病对患者体内炎症因子水平及焦虑抑郁状态的影响,得出中药治疗对机体炎症因子表达量影响及对焦虑抑郁状态改善情况。通过实验研究探析慢性应激性情绪刺激对心肌梗死后大鼠体内CXC趋化性炎症反应的影响,及柴胡加龙骨牡蛎汤治疗心肌梗死合并焦虑大鼠炎症反应的效用机制。方法:研究一:根据主要检索词,在中国知网、维普数据库、万方数据库和PubMed、Cochrane Library进行检索,检索年份不限。由2名研究者根据纳入标准独自进行文献检索及筛选。并按照Cochrane’s Handbook提供的偏倚风险Risk of bias（ROB）量表对纳入的文献进行质量评价,采用GRADEpro系统对证据质量进行评级。使用Cochrane Revman 5.3软件进行数据录入、分析,采用相应的模型进行分析处理。对临床异质性大而不能进行合并分析的研究则仅进行描述性分析,最后用森林图表示结果。研究二:本研究采用21天不可应激性空瓶刺激方法建立焦虑模型,结扎冠脉左前降支方式建立心肌梗死模型,根据实验目的分别给予不同的干预方式,并分成假手术组、心梗组、复合模型组、抑制剂组、中药组,每组6～9只不等,采用心电图、心脏超声对心肌梗死大鼠造模成功与否及心功能进行评价,采用高架十字迷宫和旷场试验评价大鼠的行为学,进行HE、Masson、尼氏染色及透射电镜观察组织细胞形态变化,采用ELISA、免疫组化、Western-Blot、QPCR对靶点蛋白和基因进行检测。结果:研究一:本研究共纳入21篇研究文献,总样本量2342例,试验组1175例,对照组1167例。药物干预试验组Hs-CRP因子表达量均值低于对照组[SMD=-1.61,95%CI（-2.14,-1.00）,P<0.01];药物干预试验组IL-6因子表达量均值低于对照组[SMD=-43.31,95%CI（-45.55,-41.07）,P<0.01];药物干预试验组IL-8因子表达量均值低于对照组[SMD=-5.03,95%CI（-8.37,-1.70）,P=0.003];药物干预试验组 IL-17 因子表达量均值低于对照组[SMD=-33.27,95%CI（-40.15,-26.39）,P<0.01];药物干预试验组 TNF-α因子表达量均值低于对照组[SMD=-1.18,95%CI（-1.98,-0.38）,P=0.004];药物干预试验组患者焦虑状态的汉密尔顿量表评分均值低于对照组[SMD=-1.97,95%CI（-2.48,-1.46）,P<0.01]。研究二:实验一:（1）慢性应激刺激下心肌梗死大鼠骨髓中CXCL12的含量降低:复合模型组大鼠骨髓中CXCL12表达量明显低于假手术及心肌梗死组（P<0.05）;（2）慢性应激刺激下心肌梗死大鼠心肌组织CXCR4表达亢进:复合模型组大鼠梗死边缘区心肌组织CXCR4的IOD值高于假手术组和心肌梗死组（P<0.05）;（3）心肌梗死后CXCL12/CXCR4生物轴失衡加重炎症反应:复合模型组中性粒细胞弹性蛋白酶表达明显高于假手术及心肌梗死组（P<0.05）,复合模型组和心肌梗死组心肌纤维排列紊乱,细胞骨架结构消失并发生大面积坏死,大量中性粒细胞及其他炎症因子浸润。实验二:（1）柴胡加龙骨牡蛎汤抑制CXCR4/NF-κB/GSDMD通路炎症蛋白表达:中药组与抑制剂组大鼠CXCR4蛋白表达量比复合模型组明显降低（P<0.05）,给予中药及抑制剂的大鼠组织内NF-κB、IL-1β、IL-18、GSDMD蛋白的表达与复合模型组大鼠相比有所下降（P<0.05）;（2）柴胡加龙骨牡蛎汤抑制CXCR4/NF-κB/GSDMD通路炎症蛋白基因表达:复合模型组大鼠体内CXCR4、NLRP3、NF-κB、GSDMD蛋白基因表达明显高于假手术组（P<0.05）,中药组可明显抑制心肌梗死合并焦虑大鼠体内CXCR4、NLRP3、NF-κB、GSDMD蛋白基因表达量（P<0.05）;（3）柴胡加龙骨牡蛎汤抑制心肌梗死边缘区组织相关炎症蛋白表达:与假手术组比较,复合模型组NLRP3、GSDMD免疫组化染色阳性率增高（P<0.05）,但中药组大鼠心肌梗死边缘区的NLRP3、GSDMD表达水平低于复合模型组（P<0.05）;（4）柴胡加龙骨牡蛎汤改善心肌梗死后心脏功能:与假手术组比较,心肌梗死组和复合模型组LVEF%和LVFS%明显降低（P<0.05）,抑制剂组和中药组大鼠心脏LVEF%、LVFS%较复合模型组明显升高（P<0.05）,复合模型组及心肌梗死组大鼠的LVIDs、LVIDd比假手术组明显增加（P<0.05）,抑制剂组和中药组的LVIDd和LVIDs均比复合模型组下降（P<0.05）;（5）柴胡加龙骨牡蛎汤降低外周血中IL-1β和IL-18表达水平:与复合模型组和心肌梗死组相比,中药治疗后可降低外周血中IL-18、IL-1β水平（P<0.05）;（6）柴胡加龙骨牡蛎汤缓解大鼠的焦虑样行为,调节5-HT和DA蛋白表达:复合模型组大鼠进入开放臂次数和停留时间明显少于假手术组和心肌梗死组（P<0.05）,与复合模型组相比,给予中药或抑制剂的大鼠进入开放臂次数和停留时间增加（P<0.05）,复合模型组大鼠海马内焦虑相关神经递质5-HT和DA蛋白水平明显低于假手术组（P<0.05）,中药与抑制剂大鼠海马区5-HT和DA蛋白水平较复合模型组明显提高（P<0.05）。实验三:（1）柴胡加龙骨牡蛎汤抑制海马组织主要炎症蛋白表达:复合模型组、心肌梗死组、中药组大鼠海马组织中NLRP3、GSDMD、IL-1β、IL-18表达均高于假手术组（P<0.05）,与复合模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤治疗组明显降低了心肌梗死合并大鼠脑部NLRP3、GSDMD、IL-1β、IL-18 的表达量（P<0.05）;（2）柴胡加龙骨牡蛎汤改善海马区神经损伤:与复合模型组及心肌梗死组相比,中药组大鼠海马区尼氏阳性面积增加（P<0.05）;（3）柴胡加龙骨牡蛎汤改善心肌梗死合并焦虑大鼠焦虑样行为:与假手术组相比,复合模型组大鼠OT%和OE%均明显下降（P<0.05）,复合模型组的大鼠水平运动得分和垂直运动得分均显着减少（P<0.05）,活动探索能力下降,中药组大鼠水平运动得分及垂直运动得分与复合模型组相比均有所增加（P<0.05）,活动及探索能力提高。结论:临床中采用中药治疗冠心病合并焦虑状态疗效显着且不良反应少,能够有效降低冠心病患者体内炎症因子的表达,缓解患者焦虑状态;活血化瘀法对冠心病合并焦虑抑郁患者体内Hs-CRP炎症因子的改善更具有优势。实验研究初步证明了心肌梗死合并焦虑大鼠体内骨髓及心肌梗死边缘区CXCL12/CXCR4生物轴表达失衡,CXCR4在心肌梗死急性期中表达明显上调,炎症反应亢进,心肌梗死边缘区心肌组织发生更多炎症因子浸润;而CXCR4表达亢进诱导的CXCR4/NFκB/GSDMD炎症信号通路激活,柴胡加龙骨牡蛎汤可能通过降低CXCR4的过表达,抑制CXCR4/NFκB/GSDMD炎症信号通路激活,减轻心肌组织炎症因子浸润,促进心肌梗死边缘区心肌细胞修复,改善心功能;同时,心肌梗死合并焦虑大鼠皮层及海马区相关炎症蛋白表达上调,柴胡加龙骨牡蛎汤可降低心肌梗死后皮层及海马区NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18 炎症因子表达,调节脑神经递质 5-HT、DA合成,缓解心肌梗死大鼠的焦虑样行为。
康晓文[3]（2021）在《“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响》文中指出目的:观察“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤后血脑屏障通透性的调控作用,并探讨其作用机制,为“醒脑开窍”针法治疗脑血管病提供理论依据。方法:SPF级雄性SD大鼠88只,按体重随机分为空白组（N=8）,假手术组（N=8）,模型组（N=24）,中风膏组（N=24）,针刺+中风膏组（N=24）,除空白组和假手术组外,其它3组每组组内再进一步分为4h,3d和15d三个亚组,每个亚组8只。空白组不予处理,假手术组予以生理盐水灌胃,2次/日,中风膏组予以中风膏混悬液灌胃,2次/日,针刺+中风膏组在中风膏灌胃的基础上予以“醒脑开窍”针法,1次/日。干预后通过Zea-longa评分方法检测各组实验大鼠的神经功能缺损评分;采用伊文斯蓝测定法评价各组实验大鼠的血脑屏障通透性;用实时定量聚合酶链反应检测缺血脑组织ICAM-1、MMPs-9的基因相对表达。结果:1.大鼠神经功能缺损评分缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组神经功能缺损评分均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组神经功能缺损评分几乎无变化,针刺+中风膏组神经功能缺损评分降低（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组神经功能缺损评分均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组下降更显着（P>0.05）。与4 h、3d相比:针刺+中风膏组15d神经功能缺损评分显着降低（P<0.05）。2.大鼠EB含量测定缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组EB含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组的EB含量均降低（P<0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组相比较,差异无统计学意义（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组EB含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组的EB含量高于中风膏组（P<0.05）。与4h相比:针刺+中风膏组3d时EB含量增高,15d时EB含量降低。3.大鼠脑组织ICAM-1mRNA的含量测定缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组的ICAM-1mRNA含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组的ICAM-1mRNA含量均降低（P>0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组相比较无统计学差异（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组ICAM-1mRNA含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组ICAM-1mRNA含量下降更显着（P<0.05）。针刺+中风膏组ICAM-1mRNA含量在4h、3d、15d各个时相依次降低。4.大鼠脑组织MMPs-9含量检测缺血再灌注4h:与空白组和假手术组比较,模型组、中风膏组和针刺+中风膏组MMPs-9含量均上升（P<0.05）;缺血再灌注3d:与模型组相比,中风膏组、针刺+中风膏组MMPs-9含量均下降（P<0.05）,中风膏组与针刺+中风膏组比较差异无统计学差异（P>0.05）;缺血再灌注15d:与模型组相比,中风膏组和针刺+中风膏组MMPs-9含量均降低（P<0.05）。其中,针刺+中风膏组比中风膏组下降更显着（P<0.05）。与4h相比:针刺+中风膏组3d时MMPs-9含量增高,15d时MMPs-9含量降低。结论:1.“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性具有双向调控作用。在脑缺血再灌注3d时“醒脑开窍”针法可以降低血脑屏障的通透性,在15d时“醒脑开窍”针法可以增加血脑屏障的通透性。2.此种双向调控作用可能是通过针刺调节缺血再灌注大鼠脑组织中ICAM-1含量和MMPs-9含量来实现的。
赵慧[4]（2020）在《免疫与炎症反应在脑卒中动物模型中的影响与机制研究》文中指出目的:脑卒中后脑内炎症反应参与损伤级联扩大及神经功能恶化,但其特点与直接作用尚不明确。本研究通过注射百日咳毒素（pertussis toxin,PTx）增强脑缺血或出血后脑内炎症反应,观察脑内炎症特点、病理变化及临床结局,明确脑卒中后脑内炎症的直接作用。在细胞调节水平,具有获得性免疫功能的固有淋巴细胞（innate lymphoid cell,ILC）亚群对脑卒中的免疫调节作用与机制尚不明确。因此我们研究以2型为代表的ILC及其调节因子白介素（interleukin,IL）-33对脑卒中的影响,以明确脑卒中后免疫细胞介导的炎症反应特征与机制,为免疫调节治疗提供实验依据。方法:第一部分:野生型C57BL/6小鼠100只,雄性,予以分为5组,假手术组（Sham组）、脑缺血组（MCAO组）、PTx处理脑缺血组（20μg/kg PTx+MCAO组）、脑出血组（ICH组）、PTx处理脑出血组（20μg/kg PTx+ICH组）（随机数字法）,每组20只。采用线栓法对野生型C57BL/6小鼠建立60分钟大脑中动脉缺血再灌注模型。采用胶原酶微量泵注射法制备野生型C57BL/6小鼠脑出血模型。应用改良的神经功能缺损评分量表、转棒疲劳实验检测第1-3天各组小鼠的神经功能损伤情况;用流式细胞术对第3天各组小鼠的病灶侧脑组织免疫细胞浸润情况进行分析,包括小胶质细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞、B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞;小动物活体成像技术对第3天各组小鼠中枢活性氧进行标记示踪;免疫荧光染色的方法对内皮细胞与紧密连接蛋白ZO-1、内皮细胞与紧密连接蛋白Claudin-5共染,观察第3天各组小鼠的血脑屏障通透性。第二部分:野生型C57BL/6小鼠40只,雄性,予以分为2组,假手术组（Sham组）与脑缺血组（MCAO组）（随机数字法）,每组20只。流式细胞分析比较各组小鼠MCAO模型制备后第3天脑、脾、外周血的ILC2计数;免疫荧光染色法分析少突胶质细胞、星形胶质细胞中IL-33表达水平。应用药理学干预和转基因动物,研究删除、转输或活化ILC2细胞对神经功能评分和梗死体积的影响:分组1)野生型C57BL/6小鼠制备MCAO模型后20只,雄性,予以分为2组,PBS处理组（Vehicle组）与删除ILC2组（anti-CD90.2组）（随机数字法）,每组10只。2)应用免疫缺陷的Rag2-/-γc-/-小鼠制备MCAO模型后20只,雄性,予以分为2组,PBS处理组（Vehicle组）与ILC2转输组（ILC2组）（随机数字法）,每组10只。3)野生型C57BL/6小鼠制备MCAO模型后20只,雄性,予以分为2组,PBS处理组（Vehicle组）与IL-33处理组（IL-33组）（随机数字法）,每组10只。应用小动物磁共振成像仪T2成像比较各组小鼠MCAO模型制备后第1、3、7天脑梗死病灶体积;改良的神经功能缺损评分量表、转角实验比较各组小鼠MCAO模型制备后第1、3、7天神经功能损伤情况。结果:第一部分:（1）各组小鼠神经功能损伤情况:与MCAO组相比,第1-3天20μg/kg PTx+MCAO组小鼠改良的神经功能缺损评分明显增高（*P<0.05）,转棒疲劳实验小鼠停留的时间明显减少（*P<0.05）。与ICH组相比,20μg/kg PTx+ICH组小鼠改良的神经功能缺损评分明显增高（*P<0.05）,转棒疲劳实验的时间明显减少（*P<0.05）。（2）各组小鼠中枢免疫细胞浸润分布:与Sham组相比,MCAO组与ICH组小鼠脑内小胶质细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞、B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞显着增多（*P<0.05）。分别与MCAO组、ICH组相比,20μg/kg PTx+MCAO组、20μg/kg PTx+ICH组小鼠中枢内B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞明显增多（*P<0.05）。此外,分别与MCAO、20μg/kg PTx+MCAO组相比,ICH、20μg/kg PTx+ICH组小鼠中枢内中性粒细胞、自然杀伤细胞、B细胞、CD8+T细胞明显减少（*P<0.05）。（3）各组小鼠脑氧化应激对比:与Sham组相比,MCAO组、ICH组第3天的活性氧产生显着增多,氧化应激水平显着增高（*P<0.05）。20μg/kg PTx+MCAO组、20μg/kg PTx+ICH组的氧化应激水平较未处理组明显增高（*P<0.05）。（4）各组小鼠血脑屏障染色:与Sham组相比,MCAO组、ICH组第3天的紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5表达显着减少。分别与MCAO组、ICH组相比,20μg/kgPTx+MCAO组、20μg/kg PTx+ICH组的紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5表达进一步减少。第二部分:（1）与Sham组相比,MCAO组野生型C57BL/6小鼠脑内ILC2计数明显增多（**P<0.01）,脾与外周血中ILC2计数明显减少（*P<0.05）,提示脑缺血后ILC2向中枢浸润增多。（2）为研究ILC2是否影响脑卒中病理进程,我们利用抗CD90.2单抗删除ILC2及将ILC2转输至Rag2-/-γc-/-小鼠（无T、B、NK细胞）体内,经核磁影像与神经功能评分阐述ILC2对脑卒中预后的影响。实验发现,在脑缺血再灌注后第1-3天,抗CD90.2抗体删除ILC2显着增加小鼠脑梗死体积和神经功能缺失（*P<0.05）。而通过将ILC2转输至Rag2-/-γc-/-小鼠可有效降低脑梗死体积和神经功能缺失（*P<0.05）。上述结果表明ILC2对缺血性脑卒中具有保护作用。（3）继而,我们利用病理切片染色发现,少突胶质细胞是表达IL-33的主要细胞,且在脑缺血再灌注后表达显着上调（*P<0.05）。推测胶质细胞来源的IL-33可能是维持脑部ILC2细胞存活与活化的主要细胞。缺血性脑卒中小鼠体内给予IL-33能够扩增ILC2数量,减小脑梗死体积和神经功能缺失（*P<0.05）。结论:第一部分:PTx引起的系统炎症反应可进一步加重小鼠脑卒中后神经功能损伤程度体现为:中枢内小胶质细胞活化,髓系与淋巴细胞的浸润增多;PTx引起的免疫炎症过程可能与B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞在中枢内浸润增高有关,而与小胶质细胞、中性粒细胞、自然杀伤细胞的中枢浸润关系不密切。相比ICH模型,MCAO模型以中性粒细胞、自然杀伤细胞、B细胞、CD8+T细胞的中枢浸润为主,提示天然免疫可能主要参与了脑缺血急性期损伤加重。PTx对小鼠脑内活性氧的产生及其氧化应激水平有进一步放大作用。PTx诱发的炎症反应下调脑卒中后第3天血脑屏障的紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的表达,使其破坏加重,进一步扩大脑内免疫炎症反应水平。第二部分:MCAO小鼠脑内有大量的ILC2浸润,而外周ILC2显着减少,提示外周ILC2可能在脑缺血后迁移至脑损伤部位。通过删除或转输ILC2的相关实验提示ILC2可减轻脑缺血再灌注小鼠神经功能损伤和病灶体积,证明ILC2对缺血性脑卒中发挥保护作用。IL-33可在体内扩增ILC2,表明脑内胶质细胞来源的IL-33可能是维持ILC2细胞活化的关键分子。ILC2减小梗死体积、帮助神经功能的修复可能是通过其上游的IL-33调节作用完成,其中少突胶质细胞可能是IL-33的主要来源。
张丹丹[5]（2020）在《通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究》文中提出脑梗死又称缺血性脑卒中,是指因脑部供血障碍,缺血、缺氧所导致的局限性脑组织缺血性坏死或软化,属中医“中风病”范畴。通络化痰胶囊（Tongluo Huatan Capsule,THC）有活血通络、化痰熄风的功效,用于治疗中风病中经络痰瘀阻络证。团队课题组前期已完成该药Ⅳ期临床试验资料采集,但未对数据进行总结,现基于前期收集的临床数据进行系统性总结及分析,进一步评价通THC治疗中风恢复期的疗效和安全性。同时,基于中医“异病同治”思想,痰瘀阻络证也是缺血性卒中后引发血管性痴呆（Vescular Dementia,VD）常见证型,由此提出假设:THC对VD是否也会有效?据最新研究显示,上调网格蛋白（clathrin）及其内吞标记物Rab5B能够促进神经元表面N-甲基D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR）的内吞,减少神经元膜表面的NMDAR分布,从而减轻兴奋性氨基酸毒性造成的神经元损伤,改善VD大鼠学习记忆能力,但是clathrin和NMDA受体在这一过程中各个时点的变化还未明确。故本研究拟针对VD大鼠模型,早期给药干预后造模,取海马组织,按照造模后3h/1d/3d/7d/14d不同时点,采用动物行为学及Western blotting（WB）、RT-PCR检测clathrin及其内吞标记物Rab5B、NMDAR1（NMDAR功能亚单位）的表达,探索脑缺血再灌注海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点,同时探讨THC在VD早期干预中可能存在的作用,从而从微观表征层面证明中药异病同治的疗效。临床研究目的:进一步评价THC治疗中风病中经络恢复期痰瘀阻络证患者的疗效和安全性,为临床用药提供参考。方法:采用多中心、前瞻性、单臂队列临床研究,纳入34家二级甲等以上医院中符合西医脑梗死恢复期及中医中风病中经络痰瘀阻络证诊断标准的病例,予THC治疗4周。运用统计学方法对课题组前期采集的临床试验数据进行分析。以美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评定神经功能缺损,中医证候评分及改良Rankin量表（Modified Rankin Scale,mRS）为疗效评价指标;以血常规、肝功能、肾功能为安全性评价指标。结果:（1）2012年01月-2016年12月于34家二级甲等以上的医院纳入的受试者共2169例,THC治疗后神经功能缺损综合疗效、中医证候疗效总有效率分别为84.09%、81.01%;mRS总分减少50%及以上者817例（37.67%）,总分下降至0-1者1187例（54.73%）;（2）影响NIHSS综合疗效的多因素分析显示年龄（OR=1.024,95%CI 1.009-1.039,P=0.002）、基线合并高血压（OR=4.720,95%CI 3.513-6.341,PP=0.000）、冠心病（OR=2.601,95%CI 1.530-4.421,P=0.000）、高脂血症（OR=2.234,95%CI1.234-4.407,P=0.008）、基线 NIHSS 评分（OR=0.902,95%CI 0.849-0.957,P=0.001）影响临床神经功能缺损程度综合疗效。（3）影响中医证候疗效的多因素分析显示基线中医证候评分对中医证候疗效有影响（OR=62.023,95%CI 37.407-113.026,P=0.000）;（4）影响mRS改善的多因素分析显示年龄（OR=1.019,95%CI 1.007-1.031,P=0.001）、基线合并高血压（OR=2.898,95%CI 2.144-3.917,P=0.000）冠心病（OR=3.625,95%CI 1.516-8.673,P=0.004）对 mRS 的改善有影响;（5）THC不良反应总体发生率为0.00%。结论:（1）THC在中风恢复期的治疗中单用或联用其他西医基础治疗对于改善患者神经功能缺损程度、减轻残障及中医症状均有较好的疗效及安全性。（2）THC在中风恢复期的治疗中,年龄小、基线病情轻、没有基础疾病的患者疗效越好。实验研究目的:（1）探索VD大鼠海马区神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程动态变化特点;（2）探索THC在VD早期干预中可能存在的作用。方法:大鼠适应性饲养7天后随机分为假手术组、模型组、THC组、美金刚组（MH组）、参知健脑方组（SZJN组）,分别予相应药物灌胃,假手术组、模型组予等量的蒸馏水灌胃,1次/日,连续7日。采用2VO+腹腔注射硝普纳的方法制备VD大鼠模型,假手术组大鼠分离双侧颈总动脉但不夹闭血管,不注射硝普钠。造模后进行跳台实验、新物体识别实验、Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;造模后3h、1d、3d、7d、14d分别取大鼠海马组织通过RT-PCR、WB检测海马clathrin、NMDAR1、Rab5B在造模后不同时间点的表达水平。结果:（1）行为学①跳台试验（模型评价）结果显示:假手术组大鼠与正常组大鼠相比潜伏期以及错误次数无统计学差异;VD大鼠与正常组、假手术组相比,潜伏期缩短,错误次数增加（P<0.05）;②新物识别实验,模型组与假手术组比较,新物辨别指数下降（P<0.01）;THC组、SZJN组、MH组辨别指数均比模型组高（P<0.01）;③水迷宫:各组大鼠逃避潜伏期均有不同程度缩短（P<0.01）。不同分组对逃避潜伏期的影响有差异（P<0.05）,模型组与其他四组大鼠相比逃避潜伏期延长;撤去平台后,模型组与其他四组大鼠相比在目标限停留时间缩短（P<0.01）。和模型组相比,假手术组、SZJN组穿越平台次数增加（P<0.01）。（2）病理学HE染色显示,假手术组海马CA1区结构形态未见异常,神经元形态完整,排列整齐,胞核与胞质界限清晰可见无坏死。VD大鼠海马CA1区神经元形态不完整,排列紊乱,间隙增大,胞质稀少,神经元胞核深染,固缩呈三角形或不规则形,核仁不明显。造模后随着时间延长,VD大鼠海马CA1区神经元形态排列紊乱程度加重,间隙增加明显。与模型组比较,THC组、SZJN组大鼠海马CA1区整体组织损伤情况均有明显改善,神经元排列较为整齐,细胞形态结构较完整,胞质较均匀,胞核与胞质界限较清晰,少数细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形,核仁不明显。MH组大鼠海马CA1区细胞层次减少,神经元排列稀松,形态较模型组有明显改善,部分细胞核深染、固缩,呈三角形或不规则形。尼氏染色显示,假手术组大鼠海马CA1区神经元细胞排列整齐紧凑,染色后呈现为颗粒或状块状,染色浓密且规则。VD大鼠海马CA1区神经元排列散乱,造模后随着时间延长,细胞带出现了断裂,细胞凋亡数量增加,大量神经细胞出现尼氏体碎裂。THC组、SZJN组海马CA1区神经细胞排列较为整齐,少数细胞间隙增宽,细胞带稍有变薄,少量的神经细胞可见到有尼氏体碎裂、胞质中央尼氏小体消失。MH组海马CA1区神经元细胞形态和排列较模型组有所改善,部分神经元细胞凋亡,细胞带变薄。RT-PCR结果①与假手术组相比,造模后3h、1d、3d、7d、14dVD大鼠clathrin mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,MHG组（P<0.01）、THC组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马clathrin mRNA相对表达量增加;②与假手术组相比,术后3h、7d、14d模型组大鼠NMDAR1 mRNA表达增加（P<0.01）,术后1d NMDAR1 mRNA表达下降（P<0.01）;与模型组相比,术后3h SZJN组NMDAR1 mRNA 表达降低（P<0.01）,术后 7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）NMDAR1 mRNA 表达降低;③与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d VD大鼠Rab5B mRNA表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,术后 3h、1d、3d、7d、14dMH 组（P<0.01）、THC 组（P<0.01）、SZJN组（P<0.01）大鼠海马Rab5B mRNA相对表达量增加。（3）WB结果①与假手术组相比,术后3h、1d、3d、7d、14d模型组大鼠clathrin蛋白表达均减少（P<0.01）。与模型组相比,THC组大鼠在术后3h（P<0.01）、1d（P<0.05）clathrin 蛋白表达升高,SZJN 组在术后 3h（P<0.01）、1d（P<0.05）、7d（P<0.05）、14d（P<0.05）clathrin蛋白表达升高,MH组在术后3h（P<0.01）clathrin蛋白表达增加。②与假手术组相比,术后3h（P<0.01）、7d（P<0.01）、14d（P<0.01）模型组大鼠的膜蛋白NMDAR1表达增加,术后1d表达减少（P<0.01）;与模型组相比,THC组大鼠术后3h（P<0.05）、7d（P<0.01）NMDAR1表达减少,1d时表达增多（P<0.01）,SZJN组、MH组大鼠术后3h、7d NMDAR1表达减少（P<0.01）。结论:（1）THC早期干预可减轻VD大鼠海马CA1区的病理损伤,提高学习及记忆能力,具有脑保护作用;（2）VD大鼠在脑缺血再灌注损伤后,海马神经元NMDAR1表达的动态演变在造模后先升后降再上升。clathrin及Rab5B表达降低导致神经元表面NMDAR内吞减少加重了兴奋性氨基酸毒性,导致学习记忆能力降低。（3）THC早期干预VD大鼠,可通过上调clathrin表达使神经元表面的NMDAR内吞增加,或下调NMDAR表达来减少兴奋性毒性作用对神经元的损伤,从而起到脑保护作用。
刘婉莹[6]（2020）在《芎归方协同BMSCs-exosomes调控缺血性脑卒中血管新生的实验研究》文中研究指明研究背景:中风是一种复杂且威胁生命的疾病,是全球死亡和残疾的主要原因之一。中风的恢复需要一系列神经干细胞和神经血管单元之间精密互动配合,因此在症状出现后尽快恢复缺血区血供成为缺血性中风治疗的首选,但现有治疗手段的效果都不理想,其中药物治疗是脑中风临床治疗的重要途径之一。中医学认为缺血性中风即为中风病的范涛,因经气升降失司、气血运行失常,致气血逆乱而发病,其病因病机虽然复杂,但无非气血二字;而由“气中之血药”川芎及“血中之气药”当归两味药组成的芎归方则为治疗缺血性脑血管病常用方药。本团队前期用芎归方开发的上市中成药舒脑欣滴丸进行了相关研究,表明舒脑欣滴丸有促进缺血性脑损伤大鼠血管新生、神经元再生和脑组织重建的作用。另外,现代医学研究发现干细胞具有治疗卒中的临床潜力,但也存在诸多风险;有研究表明在干细胞发挥主要治疗作用的旁分泌效应中,外泌体（exsomes）占主导地位,并且能避免干细胞治疗的诸多风险,但疗效仍有不足。此外相关研究发现,PI3K/Akt/mTOR信号通路对于促进细胞周期、细胞增殖、血管生成有着至关重要的作用。研究目的:探讨芎归方是否能对微环境进行调控,以提高骨髓间充质干细胞来源外泌体（BMSCs-exosomes）对缺血性脑卒中恢复期血管新生的作用;分析芎归方协同BMSCs-exosomes是否通过mTOR/p70S6K通路协同调控缺血性脑卒中恢复期血管新生。研究方法:1.原代大鼠BMSCs培养及鉴定。分离大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,用含1%双抗和10%胎牛血清的完全培养基培养,运用细胞流式术进行鉴定。2.BMSCs-exosomes的分离鉴定。以超速离心机100,000×g离心12小时的方法去除血清中的exosomes,配制含10%无exosomes血清的培基对BMSCs进行培养,取其上清液进行离心、超速离心以分离获得BMSCs-exosomes,并重悬于1×PBS中,-80°保存。并运用Westernblot检测法和透射电镜观察形态鉴定拍照。3.运用线栓法制作SD大鼠短暂性大脑中动脉闭塞缺血（tMCAO）模型。将实验动物随机分为六组,造模成功后的大鼠分为模型组（tMCAO组）、芎归方组（tMCAO+SNX组）、外泌体组（tMCAO+exos组）、协同组（tMCAO+SNX+exos组）、抑制剂组（tMCAO+SNX+exos+RAPA组）和假手术组（Sham组）,其中芎归方组给予舒脑欣滴丸配成液（溶于生理盐水,每只大鼠按45mg/kg/d灌胃,tMCAO后24h给药并持续七天）,外泌体组予以BMSCs-Exosomes400μg/kg尾静脉注射（tMCAO后24h、3d、5d、7d给药）,协同组按上述方法给予舒脑欣滴丸和BMSCs-exosomes共同干预,抑制剂组则是在给予舒脑欣滴丸和BMSCs-exosomes之前先给予RAPA（每只大鼠按照2mg/kg/d腹腔注射,tMCAO后24h给药并持续七天）,假手术组与模型组给予等体积1×PBS尾静脉注射。造模后第1、3和7天对大鼠进行神经功能缺损评分、足部故障测试、掉线试验。并用激光多普勒脑血流监测仪-DRT4监测大鼠tMCAO后21d脑血流量改变,于饲养21d后心脏灌注取脑,采用HE染色观察各组大鼠脑组织梗死体积。4.运用Westernblot免疫蛋白印迹法检测PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路中PI3K、Akt、mTOR、p70S6K、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K、VEGF等蛋白的表达情况。研究结果:1.各组大鼠神经功能缺损评分结果显示,缺血再灌后第3d,各组mNSS评分均有所降低,与模型组比较,协同组mNSS评分明显降低（P<0.05）;与协同组组相比,外泌体组、抑制剂组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。缺血再灌后第7d,各组mNSS评分显着降低,与模型组比较,协同组mNSS评分显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与协同组相比,外泌体组比较差异无统计学意义（P>0.05）,抑制剂组比较差异有统计学意义（P<0.05）。2.各组大鼠掉线试验显示,缺血再灌后第3d,与模型组比较,其余各组比较差异均无统计学意义（P>0.05）;与协同组比较,外泌体组、抑制剂组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。缺血再灌后第7d,与模型组比较,各组比较差异均无统计学意义（P>0.05）,与协同组比较,外泌体组、抑制剂组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3.行足部障碍测试,缺血再灌后第3d,与模型组比较,其余各组评分比较差异无统计学意义（P>0.05）;与协同组相比,外泌体组、抑制剂组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。缺血再灌后第7d足部障碍测试显示,与模型组相比,协同组评分显着下降（P<0.01）;与协同组相比,外泌体组比较差异无统计学意义（P>0.05）,抑制剂组评分明显高于协同组（P<0.05）。4.脑缺血区域脑血流量监测结果显示,与模型组相比,芎归方组、外泌体组、协同组比较差异具有统计学意义（P<0.05）;与协同组相比,外泌体组比较差异无统计学意义（P>0.05）,抑制剂组脑血流量较低（P<0.05）。5.脑梗死体积比较结果显示,与模型组相比,芎归方组、外泌体组、协同组比较差异均具有统计学意义（P<0.05）;与协同组比较,外泌体组比较差异无统计学意义（P>0.05）,抑制剂组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。6.Westernblot检测结果显示,各组间PI3K、AKT、p70S6K等蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）;与协同组相比,抑制剂组mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组相比,芎归方组p-PI3K、p-mTOR、p-p70S6K和VEGF蛋白表达水平升高（P<0.05）;外泌体组p-PI3K、p-mTOR、p-p70S6K和VEGF蛋白表达水平升高（P<0.05）;协同组p-PI3K、p-AKT、p-p70S6K和VEGF蛋白表达水平升高（P<0.05）,p-mTOR蛋白表达水平升高（P<0.01）。与协同组相比,抑制剂组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K和VEGF蛋白表达水平显着降低（P<0.05,P<0.01）;外泌体组p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K和VEGF蛋白表达水平显着降低（P<0.05）。研究结论:1.芎归方调控微环境,可能提高BMSCs-exosomes促进缺血性脑卒中恢复期血管新生的作用,改善tMCAO大鼠脑组织损伤和神经功能缺损;2.芎归方与BMSCs-exosomes可以通过PI3K/Akt/mTOR/p70S6通路协同调控tMCAO大鼠的血管新生,促进缺血性脑损伤后大鼠神经功能的修复。
向昱臻[7]（2020）在《清脑益元汤对局灶性脑缺血损伤大鼠NPY、CGRP表达水平的影响》文中认为目的:研究清脑益元汤对大鼠局灶性脑缺血损伤后神经肽NPY、CGRP表达的影响,探讨清脑益元汤防治局灶性脑缺血损伤的部分作用机制。方法:将240只SD大鼠按照体重大小分层,再分成A、B两大组,每大组120只大鼠,每大组用随机数字表法再将大鼠分为4组:空白组组、假手术组、模型组、清脑益元汤组。除空白组外,各组大鼠参照Longa线栓法,制作大鼠大脑中动脉栓塞模型。其中,假手术组在大鼠颈内动脉插入线栓8-10mm,此深度不足以阻断大脑中动脉血流,其余步骤与手术组相同。参考Longa的5分制法对大鼠进行神经功能缺损评分,并按照MCAO术后1d、3d、7d、14d、28d五个处死时间点分为5个亚组,每个亚组6只大鼠。空白组正常饲养,灌胃等体积蒸馏水。假手术组、模型组大鼠术后灌胃等体积蒸馏水、清脑益元汤组术后灌胃等体积清脑益元汤,持续至各个取材时间点。应用HE染色法检测大鼠神经细胞形态学变化;免疫组织化学法检测各组大鼠缺血侧脑组织切片NPY免疫阳性细胞的表达水平;Western blot法检测各组大鼠缺血侧脑组织CGRP蛋白含量,并用SPSS24.0统计软件包进行数据处理。结果:（1）神经功能缺损评分:（1）假手术组大鼠在各个时间点均无神经功能缺损表现。（2）与假手术组相比较,模型组及清脑益元组大鼠神经功能缺损评分显着增高,差异均有统计学意义（P<0.01）。（3）在相同取材时间点,清脑益元组大鼠神经功能缺损症状与模型组大鼠相比较,均有不同程度的改善,差异有统计学意义（P<0.01）。（2）HE染色:（1）空白组、假手术组:脑组织无水肿,细胞排列整齐,形态结构基本正常。（2）模型组:大鼠神经元皱缩变形,呈三角形松散排列,大范围散在坏死的红色神经元,大部分神经元变性、坏死,细胞周围间隙增大,细胞胞体变形缩小,细胞核固缩浓染,炎性细胞浸润、坏死,细胞溶解消失或见少量固核残留。（3）清脑益元汤组:给予药物后,脑组织梗死区可见少量神经元坏死、核固缩浓染等病理特征,较模型组有显着改善,皮质区域的神经元细胞排列紧密,呈类球形,细胞排列趋于正常,偶见部分细胞变形。表明清脑益元汤能够促使神经元细胞修复,或具有使神经细胞再生,修复神经损伤的作用。（3）免疫组化法检测NPY:（1）在各个取材时间点,空白组及假手术大鼠脑组织中观察到少量NPY免疫阳性细胞表达,同时间点两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）在同一时间点,与假手术组比较,模型组和清脑益元汤组大鼠NPY阳性细胞数明显增多,差异具有统计学意义（P<0.01）。（3）在同一时间点,与模型组相比,清脑益元汤组NPY免疫阳性细胞数明显低于模型组,差异有统计学意义（P<0.01）。（4）Western blot法检测CGRP:（1）CGRP在空白组和假手术组的脑组织中均有少量表达,两者比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）在同一时间点,与假手术组相比,模型组和清脑益元汤组CGRP蛋白表达均升高（P<0.01）,差异有统计学意义。（3）与模型组相比,清脑益元汤组大鼠脑组织内的CGRP蛋白相对表达量明显高于模型组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:清脑益元汤可改善大鼠脑缺血组织的损伤,其作用机制可能与其减少脑缺血损伤后NPY阳性细胞数、增加CGRP蛋白表达,进而调控脑血管的舒缩状态,改善缺血区域的脑血流有关。
袁丽君[8]（2020）在《基于PI3K/AKt/mTOR信号通路探讨土家族麝针疗法治疗缺血性脑中风大鼠的作用机制》文中进行了进一步梳理目的:探讨PI3K/AKt/mTOR信号通路的上下游相关细胞因子、蛋白在土家族麝针疗法干预缺血性脑中风SD大鼠前后的释放量及表达水平的变化,初步揭示土家族麝针疗法治疗缺血性脑中风的作用机制,尤其是与运动功能及认知功能相关的作用环节和靶点。方法:采用改良线栓法复制缺血性脑中风SD大鼠模型,将Zea-longa评分13分的模型大鼠随机分为模型对照组、土家族麝针组和针刺对照组,另取正常SD大鼠参照改良线栓法同法手术但不行栓塞处理,作为假手术组,每组30只。土家族麝针组以自制麝针以捻针法刺激大鼠对侧头皮运动区肌层,以200r/min以上的速度快速捻针,至针刺区微微有发热感,捻针5min后留针5min,反复捻针留针3次后起针,每日1次,5天为一疗程,每疗程间休息两天,持续治疗3个疗程;针刺对照组同法同位置以普通毫针刺激,模型对照组和假手术组不给予任何处理。分别于治疗前及治疗1、2、3疗程结束后每组随机取6只大鼠,采用平衡木实验测试各组大鼠的运动功能;于2疗程治疗后每组随机选取6只大鼠,进行Morris水迷宫行为学测试检测其记忆功能;于3疗程结束后取各组大鼠脑组织做HE染色病理切片,观察脑组织病理改变情况。取治疗前及治疗3疗程后各组大鼠血浆,用ELISA法检测其中IL-6、IL-1β的含量;取治疗3疗程后的大鼠脑组织固定、切片后,利用双光子激光共聚焦显微成像系统采集皮层区小胶质细胞突起的图像、采用Image J进行小胶质细胞突起进行骨架化分析,采集小胶质细胞总突起数目、突起总长度。在治疗3疗程后,取各组大鼠血浆和脑组织,采用ELISA法检测血浆中VEGF、HIF-1α的含量,Western-Blot法检测脑组织中PI3K、AKt、mTOR蛋白表达。结果:平衡木测试结果显示,治疗前,与假手术组比较,其他各造模组平衡木测试评分显着降低（P<0.05）,且造模组之间无显着性差异（P>0.05）;随着疗程增加,各造模大鼠平衡木测试评分显着增加,且在第3疗程评分土家族麝针组>针刺对照组>模型对照组（P<0.05）。水迷宫测试结果显示,治疗后,与模型对照组比较,各治疗组记忆功能具有明显差异（P<0.05）,其中土家族麝针组记忆功能更接近于假手术组。镜下观察大鼠海马区神经元结果显示,缺血性脑中风后的大鼠脑组织神经元细胞排列紊乱,数量明显减少,且结构不完整,出现大量神经元细胞坏死以及空泡现象;经过土家族麝针治疗后,脑组织神经元细胞排列基本整齐,胞膜结构完整,形态基本接近于假手术组。小胶质细胞突起结果显示,治疗后,与假手术组相比,模型对照组大鼠小胶质细胞的突起总数目和总长度均显着下降（aP<0.05）;给予土家族麝针疗法治疗后其突起总数目和突起总长度均显着增加（bP<0.05）,而针刺疗法能显着增加突起总长度（bP<0.05）,对突起总数目无显着的影响（bP>0.05）。血浆中IL-6、IL-1β含量测定结果显示,治疗前,与假手术组相比,各造模组大鼠血浆中IL-6、IL-1β的含量显着升高（aP<0.05）且无明显差异（bP>0.05,cP>0.05）。经过3个疗程治疗后,与假手术组比较,各组大鼠血浆中IL-1β、IL-6的含量均有显着降低（aP<0.05,△P<0.05）;与模型对照组比较,土家族麝针组血浆中IL-6、IL-1β的含量显着降低（P<0.05）,针刺对照组血浆中IL-6显着降低（bP<0.05）,而IL-1β的含量无显着性差异（bP>0.05）。血浆中HIF-1α、VEGF含量测定结果显示,治疗前,与假手术组相比,各造模组大鼠血浆中HIF-1α、VEGF的含量显着升高（aP<0.05）。经过3个疗程治疗后,模型对照组大鼠血浆中HIF-1α、VEGF的含量升高（△P<0.05）;与模型对照组比较,土家族麝针组以及针刺对照组血浆中HIF-1α、VEGF的含量均显着升高（△P<0.05,b P<0.05）。脑组织中PI3K、AKt、mTOR蛋白表达结果显示,治疗前,与假手术组比较,其余各组海马组织中PI3K蛋白表达显着降低（aP<0.05）,AKt蛋白表达显着降低（aP<0.05）,mTOR蛋白表达显着升高（aP<0.05）;随着疗程的增加,与模型对照组比较,土家族麝针组大鼠海马组织中PI3K蛋白表达呈逐渐升高趋势（bP<0.05,▲P<0.05,△P<0.05,●P<0.05）,AKt蛋白表达呈逐渐升高趋势（bP<0.05,▲P<0.05,△P<0.05,●P<0.05）,mTOR蛋白表达在治疗1、2疗程后变化不明显（bP<0.05,▲P>0.05,△P>0.05）,但在治疗3疗程后有下降的趋势（●P<0.05）。结论:缺血性中风发生后,大鼠出现明显的运动功能降低、记忆认知能力显着下降的现象,其发生可能与缺血缺氧导致血浆中IL-6、IL-1β、VEGF、HIF-1α的含量增加,海马组织中PI3K、AKt蛋白的表达降低,mTOR蛋白表达增加引起的脑组织神经元坏死有关。土家族麝针疗法对缺血性脑中风大鼠的运动功能和记忆认知能力具有显着的改善作用,其“活血化瘀生新”的作用机制可能与降低促炎细胞因子IL-6、IL-1β的含量;并激活PI3K/AKt/mTOR信号通路,增加血浆中VEGF、HIF-1α的含量,促进新生血管形成;调节MCAO大鼠细胞内分子开关,减少小胶质细胞向M1型转化,进而降低神经毒性,改善脑组织炎症反应,从而促进缺血性脑中风的恢复有关。
王文毓[9]（2020）在《加味桂附理中汤防治急性脑梗死患者肠内喂养不耐受的临床观察》文中研究表明目的:使用“加味桂附理中汤”治疗急性脑梗死患者肠内喂养不耐受,通过观察和分析症状改善情况,探讨中医药辨治急性脑梗死患者肠内喂养不耐受的临床意义。方法:采用随机对照试验的方法,将符合纳入标准的66例急性脑梗死患者随机分为治疗组与对照组。除基础治疗外,治疗组予以肠内营养剂与口服中药“加味桂附理中汤”免煎剂;对照组予以肠内营养剂和与口服中药口感颜色包装相同的安慰剂。疗程3周,记录两组患者治疗前后EFI评分、营养指标、不耐受症状发生天数、喂养合格天数、不耐受发生率、安全性指标等,应用SPSS26.0软件进行统计学分析。结果:（1）EFI评分评价:两组间对比,治疗第1天差异性无统计学意义（P>0.05）,治疗1周及3周后治疗组较对照组改善明显,疗效差异性有统计学意义（P<0.05）。（2）不耐受症状发生天数评价:两组间对比腹泻、便秘发生天数,治疗组均少于对照组,差异性具有统计学意义（P<0.05）。两组间对比呕吐发生天数差异性无统计学意义（P>0.05）。（3）喂养合格天数评价:两组间对比喂养合格天数,治疗组高于对照组,差异性有统计学意义（P<0.01）。（4）NRS2002评分评价:两组组内对比治疗后均较前有所好转,差异性有统计学意义（P<0.05）,两组组间对比,治疗组改善情况较对照组明显,差异有统计学意义（P<0.05）。（5）营养指标评价:两组BMI组内对比治疗后较治疗前均有所好转,差异有统计学意义（P<0.05）;两组间对比差异无统计学意义（P>0.05）。两组组内比较治疗前后ALB、PAB 比较差异有统计学意义（P<0.05）,两组ALB组间比较差异无统计学意义（P>0.05）,两组PAB组间比较治疗组较对照组升高明显,差异有统计学意义（P<0.01）。（6）安全性指标:治疗前后两组的血常规、肝肾功能等指标均在正常范围内,整个研究过程无不良反应及不良事件发生。研究结论:“加味桂附理中汤”在降低患者不耐受发生率、减少患者不耐受症状发生天数,增加患者喂养合格天数方面作用明显。同时,本研究证实使用中药“加味桂附理中汤”配合肠内营养剂与使用肠内营养剂加安慰剂相比,疗效具有明显优势,值得临床深入研究。
李彦橙[10]（2020）在《电针水沟、足三里改善缺血再灌注大鼠微循环的影像学研究》文中提出目的:采用电针水沟、足三里干预SD大鼠大脑中动脉局部灶缺血（Middle Cerebral Artery Occlusion,MCAO）再灌注模型,检测大鼠神经行为学、脑组织学情况,用影像学观察脑组织梗死、血流情况,探讨电针对MCAO大鼠脑微循环的改善情况及可能的作用机制。方法:用雄性SD大鼠170只,随机分为假手术组34只和造模组136只。造模组采用改良线栓法制备MCAO大鼠模型,造模成功后将其分组为模型组、电针组、非穴组。电针组取穴水沟、足三里,非穴组取双侧胁下非经非穴处,于手术后六小时开始干预,采用频率1-20Hz的疏密波,20min/次,每日一次,连续7天。各组大鼠于造模后24小时、3天、7天,分别采用Zea-longa方法评分,观察大鼠神经功能缺损情况;在3小时、3天、7天行小动物磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）观察脑梗死情况;以灌注加权成像（Perfusion weighted imaging,PWI）检测脑血流（Cerebral blood flow,CBF）、脑血容积（Cerebral blood volume,CBV）,及血流平均通过时间（Mean trasit time,MTT）,观察电针水沟、足三里后MCAO大鼠脑梗死区的脑血流情况;在第7天通过心脏灌注方法固定大鼠脑后取材行HE染色和TTC染色做组织形态学观察。结果:1.神经行为学评分:三组大鼠第1天、第3天、第7天行为学分值逐渐降低。电针组神经评分优于模型组和非穴组,差异显着有统计学意义（P﹤0.05）。非穴组与模型组相较无明显差异（P﹥0.05）。2.脑组织形态变化:HE染色假手术组大鼠脑组织神经元细胞,结构形态层次清楚、细胞排列整齐。细胞形态大小正常,核仁清晰、核质染色均匀。锥体细胞有明显突起,神经细胞与毛细血管周围间隙正常,未见细胞肿胀,组织结构正常。模型组与非穴组脑组织神经元有大片坏死细胞,细胞排列混乱,形态不规则,呈菱形或三角形等,多数区域为红染颗粒状,核固缩、深染,结构消失,部分细胞溶解,细胞浆水肿,崩解,坏死区域可见小胶质细胞增生和血管增生、坏死区泡沫样细胞增多;细胞和血管周围间隙疏松水肿明显。电针组也可见脑组织神经元有坏死,亦可见红染颗粒状区域,小胶质细胞增生和血管增生,细胞及血管周围间隙缩小,细胞形态呈圆形或椭圆,组织形态较之模型组和非穴组有改善,排列较为有序,崩解细胞数量少。影像学观察假手术组脑组织结构清晰且左右对称,脑室居中,灰质无水肿、无坏死、无结构紊乱,图像无异常信号改变;模型组、电针组、非穴组右侧额叶、顶叶、纹状体区高信号改变,部分相应区域脑组织水肿、肿胀;脑室水肿明显,波及对侧脑室。3.脑梗死体积:TTC染色显示正常脑组织呈红色,梗死区为白色。电针组梗死体积率低于模型组,差异具有显着性（P=0.000<0.05）。非穴组与模型组相比,梗死体积率无明显差异（P=0.086>0.05）。4.脑血流量变化:CBF:第三天,电针组CBF值高于模型组、非穴组,但差异无统计学意义（P=0.452>0.05,P=0.564>0.05,）。第七天,电针组与假手术组CBF值相比,无显着差异（P=0.114>0.05）;电针组CBF值高于模型组,差异有统计学意义（P=0.000<0.05）;电针组CBF值高于非穴组,差异有统计学意义（P=0.000<0.05）。第三天和第七天不同时间的同组比较,电针组第三天与第七天相比,第七天CBF值高于第三天,差异有统计学意义（P=0.000<0.05）;假手术、模型组、非穴组第三天和第七天相比,CBF值无明显统计学差异（P=0.618>0.05,P=0.512>0.05,P=0.155>0.05）。CBV:第三天,电针组CBV值高于模型组、非穴组,差异有统计学意义（P=0.012<0.05,P=0.004<0.05,）。第七天,电针组CBV值高于模型组、非穴组,差异有统计学意义（P=0.000<0.05）。第三天和第七天不同时间的同组比较CBV值,电针组第三天与第七天相比,第七天CBF值高于第三天,差异有统计学意义（P=0.008<0.05）;假手术、模型组第三天和第七天相比,差异无统计学意义（P=0.474>0.05,P=0.842>0.05）。MTT:第三天,电针组MTT值低于模型组、非穴组,差异有统计学意义（P=0.000<0.05,P=0.000<0.05）;模型组MTT值低于非穴组,差异有统计学意义（P=0.004<0.05）。第七天,电针组MTT值低于模型组、非穴组,有统计学意义（P=0.000<0.05,P=0.011<0.05）。第三天和第七天不同时间的同组比较MTT值,电针组第三天与第七天相比,第七天MTT值高于第三天,差异有统计学意义（P=0.000<0.05）;假手术、模型组、非穴组第三天和第七天相比,差异无统计学意义（P=0.534>0.05,P=0.861>0.05,P=0.209>0.05）。结论:电针水沟、足三里可以改善MCAO大鼠的神经功能缺损表现,减轻MCAO大鼠脑水肿,降低MCAO大鼠模型脑梗死体积百分率,提高MCAO大鼠梗死病灶周围区的脑血流量、脑血容积,降低局部血流平均通过时间,有利于减轻脑缺血再灌注后脑的损伤,改善MCAO大鼠脑低灌注状态,促进脑组织修复。
二、急性脑血管病再灌流损伤12例临床分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、急性脑血管病再灌流损伤12例临床分析（论文提纲范文）
（1）三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制研究及三七总皂苷对PCI心肌保护作用的系统评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤与PI3K/Akt信号通路 |
| (一) PI3K/Akt信号通路的结构与功能 |
| (二) PI3K/Akt信号通路的研究进展 |
| (三) 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 三七总皂苷与三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤研究进展 |
| (一) 三七总皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制的研究进展 |
| (二) 三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制的研究进展 |
| (三) 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤的机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 药品及试剂的配置 |
| 实验一 探讨不同剂量PTS对大鼠离体心脏MIRI的保护作用 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于PI3K/Akt信号通路探讨PTS对MIRI的作用 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 临床研究 三七总皂苷对PCI患者心肌保护作用的系统评价 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）从CXCR4/NF-κB/GSDMD探讨柴胡加龙骨牡蛎汤抑制心肌梗死合并焦虑大鼠炎症机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 综述一 心肌梗死合并焦虑与CXC趋化因子的相关性研究 |
| 1 心肌梗死合并焦虑流行病学 |
| 2 CXC趋化因子在心肌梗死中的表达及作用 |
| 2.1 趋化因子结构、表达及作用 |
| 2.2 趋化因子受体结构、表达及作用 |
| 2.3 CXC趋化因子在心肌梗死中的表达及作用 |
| 3 CXCL12/CXCR4生物轴介导心肌梗死后炎症 |
| 3.1 CXCL12结构、表达及作用 |
| 3.2 CXCR4结构、表达及作用 |
| 3.3 CXCL12/CXCR4在心肌梗死中的表达及作用 |
| 4 炎症机制与心肌梗死合并焦虑疾病 |
| 5 心肌梗死合并焦虑的临床治疗 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 柴胡加龙骨牡蛎汤古方今用及药理机制研究 |
| 1 柴胡加龙骨牡蛎汤方证分析 |
| 2 柴胡加龙骨牡蛎汤近现代应用 |
| 3 柴胡加龙骨牡蛎汤单药及复方现代药理研究 |
| 4 柴胡加龙骨牡蛎汤的效用机制研究 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 研究一 药物治疗对冠心病伴焦虑状态患者炎症因子影响的Meta分析 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 文献检索 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 诊断标准 |
| 1.5 资料提取 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 纳入研究质量评价及基本特征 |
| 2.1 文献检索结果 |
| 2.2 纳入文献研究质量评价 |
| 2.3 纳入研究的基本信息情况 |
| 3 Meta分析结果 |
| 3.1 外周血中Hs-CRP因子表达 |
| 3.2 外周血中IL-6因子表达 |
| 3.3 外周血中IL-8因子表达 |
| 3.4 外周血中IL-17因子表达 |
| 3.5 外周血中TNF-α因子表达 |
| 3.6 纳入研究中不同组别HAMA量表评分情况 |
| 3.7 纳入研究中不同组别HAMD量表评分情况 |
| 3.8 纳入研究中不同组别SDS量表评分情况 |
| 3.9 各项研究发表偏倚风险评价情况 |
| 3.10 各项研究不良反应发生情况 |
| 4 纳入研究证据质量评价 |
| 5 结论 |
| 5.1 主要研究结论 |
| 5.2 本研究的不足 |
| 5.3 研究的临床意义及展望 |
| 参考文献 |
| 研究二 柴胡加龙骨牡蛎汤调控CXCR4/NF-KB/GSDMD炎症通路抑制心肌梗死合并焦虑大鼠炎症机制研究 |
| 实验一: 慢性不可预知性空瓶刺激对心肌梗死大鼠CXCL12/CXCR4生物轴的影响 |
| 前言 |
| 1 材料、设备及方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验耗材 |
| 1.3 模型制备 |
| 1.4 分组 |
| 1.5 检测手段及方法 |
| 2 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 心肌梗死大鼠心电图出现异常Q波 |
| 3.2 慢性应激刺激下心肌梗死大鼠产生焦虑样行为改变 |
| 3.3 慢性应激刺激下心肌梗死大鼠骨髓中CXCL12的含量下降 |
| 3.4 慢性应激刺激下心肌梗死大鼠CXCR4表达亢进 |
| 3.5 CXCL12/CXCR4生物轴失衡加重炎症反应 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二: 柴胡加龙骨牡蛎汤调控CXCR4/NF-κB/GSDMD炎症通路抑制心肌梗死合并焦虑炎症机制 |
| 前言 |
| 1 材料、设备及方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验耗材 |
| 1.3 模型制备 |
| 1.4 给药方式及分组 |
| 1.5 检测手段及方法 |
| 2 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 柴胡加龙骨牡蛎汤抑制CXCR4/NF-κB/GSDMD通路炎症反应 |
| 3.2 柴胡加龙骨牡蛎汤抑制纤维化,改善心脏功能 |
| 3.3 柴胡加龙骨牡蛎汤改善心肌细胞的损伤 |
| 3.4 柴胡加龙骨牡蛎汤降低外周血中IL-1β、IL-18的表达水平 |
| 3.5 柴胡加龙骨牡蛎汤调节海马区5-HT、DA合成,缓解焦虑 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三: 柴胡加龙骨牡蛎汤抑制心肌梗死合并焦虑大鼠皮层及海马炎症部分机制 |
| 前言 |
| 1 材料、设备及方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验耗材 |
| 1.3 模型制备 |
| 1.4 给药方式及分组 |
| 1.5 检测手段及方法 |
| 2 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 柴胡加龙骨牡蛎汤抑制海马区炎症蛋白表达 |
| 3.2 柴胡加龙骨牡蛎汤降低皮层区炎症蛋白表达水平 |
| 3.3 柴胡加龙骨牡蛎汤改善海马区神经损伤 |
| 3.4 柴胡加龙骨牡蛎汤缓解心肌梗死合并焦虑大鼠焦虑样行为 |
| 3.5 柴胡加龙骨牡蛎汤改善心肌梗死合并焦虑大鼠心脏功能 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 在读期间研究成果 |
（3）“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲养条件 |
| 1.2 实验药物及给药方法 |
| 1.3 主要仪器、试剂及其配制方法 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 实验模型的制备 |
| 2.4 模型评定标准 |
| 2.5 脑组织病理标本的制作 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 统计处理 |
| 2.8 技术路线图 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 大鼠神经功能缺损评分 |
| 3.2 大鼠EB定量结果分析 |
| 3.3 RT-qPCR检测不同时相ICAM-1mRNA、MMPs-9mRNA的实验结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医病名及发病机制 |
| 4.2 西医发病机制 |
| 4.3 血脑屏障的生理病理变化 |
| 4.4 .针刺对血脑屏障的调控作用 |
| 4.5 醒脑开窍针法在治疗缺血性脑卒中的作用 |
| 4.6 中风膏对治疗缺血性脑卒中的作用 |
| 4.7 实验结果分析 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 文献综述 缺血性脑卒中时血脑屏障变化及其影响因素 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间获得的科研成果 |
（4）免疫与炎症反应在脑卒中动物模型中的影响与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstracts |
| 缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 PTx引发的炎性反应对脑卒中动物模型的影响与机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组小鼠神经功能损伤情况 |
| 2.2 各组小鼠中枢免疫细胞浸润分布 |
| 2.3 各组小鼠脑氧化应激对比 |
| 2.4 各组小鼠血脑屏障染色 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 2型固有淋巴细胞对缺血性脑卒中动物模型的影响与机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 缺血性脑卒中后小鼠脑与外周ILC2数量变化 |
| 2.2 ILC2对缺血性脑卒中小鼠神经功能与脑梗死体积的影响 |
| 2.3 缺血性脑卒中后第3天小鼠少突胶质细胞是IL-33的主要来源 |
| 2.4 IL-33能够扩增ILC2细胞数量,减少缺血性脑卒中小鼠神经功能缺损与脑梗死体积 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 脑血管病的发病机制、诊断与治疗方面的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 中风病恢复期中医治疗进展研究 |
| 1 中药治疗 |
| 2 针灸治疗 |
| 3 推拿按摩治疗 |
| 4 运动疗法 |
| 综述二 血管性痴呆中西医发病机制研究进展 |
| 1 血管性痴呆西医发病机制 |
| 2 中医对血管性痴呆病因病机的认识 |
| 参考文献 |
| 第二章 临床研究通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究 |
| 第一节 资料与方法 |
| 1 病例来源 |
| 2 诊断标准 |
| 3 纳入标准 |
| 4 排除标准 |
| 5 研究设计 |
| 6 治疗方案 |
| 7 观察指标及方法 |
| 8 疗效评价标准 |
| 9 统计学方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 观察对象入选及完成情况 |
| 2 受试者基本信息 |
| 3 受试者基线生命体征及一般情况 |
| 4 受试者基线合并疾病情况 |
| 5 药品使用情况 |
| 6 基线体格检查情况 |
| 7 基线辅助检查 |
| 8 疗效评价 |
| 9 安全性评价 |
| 第三节 讨论 |
| 1 临床研究完成情况 |
| 2 临床研究治疗方案的设计及实施情况 |
| 3 临床结果讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 实验研究通络化痰胶囊对VD大鼠clathrin介导的NMDA受体作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 第二节 结果 |
| 1 行为学实验结果 |
| 2 通络化痰胶囊对VD大鼠海马组织形态学的影响 |
| 3 造模后不同时间点各组大鼠海马组织clathrin、NMDAR1及Rab5b mRNA RT-PCR结果 |
| 4 造模后不同时间点海马组织clathrin、膜蛋白NMDAR1 Western Blot结果 |
| 第三节 讨论 |
| 1 血管性痴呆大鼠行为学特点 |
| 2 组织形态学特点 |
| 3 通络化痰胶囊对脑缺血再灌注早期海马神经元clathrin介导的NMDA受体胞吞过程不同时点的动态变化研究 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 创新与优势 |
| 2 不足与展望 |
| 附录 |
| 1. 通络化痰胶囊治疗中风病中经络(脑梗塞)恢复期(痰瘀阻络证)临床研究CRF表 |
| 2. 各组大鼠海马CA1区组织形态观察 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）芎归方协同BMSCs-exosomes调控缺血性脑卒中血管新生的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 缺血性中风中医演变认识及气血论治理论 |
| 1、缺血性中风中医概念演变史 |
| 1.1 《黄帝内经》时期—始于症状 |
| 1.2 汉代时期—始见《金贵要略》 |
| 1.3 唐宋时期—奠定基础 |
| 1.4 金元时期—重视内因 |
| 1.5 清末时期—中西汇通 |
| 2、缺血性中风中医病因病机演变史 |
| 2.1 金元以前—外风立论 |
| 2.2 金元时期—内风立论 |
| 2.3 明清时期至近现代—内虚邪中 |
| 3、从气血论治缺血性中风理论 |
| 3.1 “气”与“血”在缺血性中风中的地位 |
| 3.2 气血理论下的缺血性中风瘀毒病机 |
| 3.3 气血理论下的缺血性中风痰浊病机 |
| 3.4 气血理论下的缺血性中风风火之邪 |
| 4、气血理论指导下缺血性中风的辨治策略 |
| 4.1 急性期—首辨虚实,紧守病机急性期 |
| 4.2 恢复期及后遗症期—气血通调,防病传变恢复期及后遗症期 |
| 5、小结 |
| 第二部分 芎归方协同BMSCs-exosomes调控缺血性脑卒中大鼠血管新生的效应研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 小结 |
| 第三部分 芎归方协同BMSCs-exosomes调控缺血性脑卒中大鼠血管新生的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 1 中医对缺血性中风的认识 |
| 2 芎归方运用于中风治疗 |
| 3 MSCs和 MSCs-exos运用于中风治疗 |
| 4 芎归方调控微环境以提高BMSCs-exosomes促进缺血性脑卒中大鼠脑血管新生作用 |
| 5 PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路与血管新生 |
| 6 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 中医药对脑梗死后血管新生的作用 |
| 参考文献 |
| 综述二 脑卒中疾病中的生物标志物—外泌体 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）清脑益元汤对局灶性脑缺血损伤大鼠NPY、CGRP表达水平的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲养条件 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验动物饲养条件 |
| 1.2 实验动物药物及给药方法 |
| 1.3 实验主要试剂、仪器及器材 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 主要液体及配制方法 |
| 1.3.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组及处理 |
| 2.2 实验模型建立 |
| 2.2.1 麻醉固定 |
| 2.2.2 分离血管 |
| 2.2.3 线栓的制备 |
| 2.2.4 插线与结扎 |
| 2.2.5 缝合与消毒 |
| 2.3 实验模型成功评定标准 |
| 2.4 实验动物取材 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.5.1 制备脑组织石蜡切片 |
| 2.5.2 HE染色法检测神经细胞形态学变化 |
| 2.5.3 免疫组化法检测脑组织NPY蛋白含量 |
| 2.5.4 Western blot检测脑组织的CGRP蛋白含量 |
| 2.5.5 统计处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 实验动物脑缺血损伤后的表现 |
| 3.2 神经功能缺损评分结果 |
| 3.3 HE染色评估脑组织形态学改变 |
| 3.4 免疫组化法测脑组织NPY蛋白阳性细胞表达 |
| 3.5 Western blot法测脑组织的CGRP蛋白含量 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医学对中风的认识 |
| 4.1.1 中风病名之源流 |
| 4.1.2 中风病因病机之探究 |
| 4.2 现代医学对缺血性脑卒中的阐释概要 |
| 4.2.1 缺血性脑卒中的发病机制 |
| 4.2.2 缺血性脑卒中的治疗进展 |
| 4.3 清脑益元汤防治缺血性脑卒中的机理及策略 |
| 4.3.1 探究痰瘀交阻,热毒内生,肾虚髓亏病机理论 |
| 4.3.2 谨守病机,清补兼施 |
| 4.3.3 清脑益元汤组方析义 |
| 4.4 局灶性脑缺血大鼠脑组织中NPY、CGRP肽类的表达 |
| 4.4.1 NPY与局灶性脑缺血的关系 |
| 4.4.2 CGRP与局灶性脑缺血的关联 |
| 4.4.3 NPY与 CGRP间的相互联系 |
| 4.5 清脑益元汤对NPY、CGRP肽类的影响 |
| 4.5.1 清脑益元汤对NPY表达的影响 |
| 4.5.2 清脑益元汤对CGRP蛋白表达的影响 |
| 4.5.3 清脑益元汤对NPY和 CGRP的综合调节效应 |
| 4.6 实验方法分析 |
| 4.6.1 动物的选择 |
| 4.6.2 造模方案的选择 |
| 5 存在的问题和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 主要缩略词表 |
| 综述 基于内质网应激-自噬途径探究脑缺血再灌注损伤及中医药防治进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（8）基于PI3K/AKt/mTOR信号通路探讨土家族麝针疗法治疗缺血性脑中风大鼠的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 主要研究内容 |
| 第一节 土家族麝针疗法干预MCAO大鼠的疗效研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 第二节 土家族麝针疗法对MCAO大鼠小胶质细胞及其胞内分子开关的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 第三节 土家族麝针疗法对MCAO大鼠血浆中HIF-1α、VEGF和脑组织中PI3K/AKt/mTOR蛋白表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 土家族麝针疗法“活血化瘀生新”治疗缺血性脑中风的研究进展 |
| 1 中医对缺血性脑中风的认识 |
| 2 西医对缺血性脑中风的研究 |
| 3 PI3K/AKt/mTOR信号通路与缺血性脑中风 |
| 4 土家族麝针疗法的研究现状 |
| 5 总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
（9）加味桂附理中汤防治急性脑梗死患者肠内喂养不耐受的临床观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 1. 研究目的 |
| 2. 临床资料 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 终止试验标准 |
| 2.6 剔除标准 |
| 2.7 脱落标准 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 样本量及其计算的依据 |
| 3.2 随机分组的方法 |
| 3.3 治疗方法 |
| 3.4 技术路线 |
| 3.5 观察指标 |
| 3.6 疗效评价标准 |
| 3.7 不良事件的处理与报告 |
| 3.8 数据统计 |
| 4. 结果 |
| 4.1 病例完成情况 |
| 4.2 基线结果分析 |
| 4.3 治疗结果分析 |
| 4.4 安全性分析 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 肠内喂养不耐受的病机认识 |
| 5.2 症状分析 |
| 5.3 方药分析 |
| 5.6 数据分析 |
| 6. 结论 |
| 7. 问题及展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 急性脑梗死患者早期肠内喂养不耐受的中西医治疗进展 |
| 1 脑梗死患者早期肠内喂养不耐受的西医研究进展 |
| 1.1 常见诱因 |
| 1.2 诊断及评估 |
| 1.3 治疗 |
| 2 脑梗死患者早期肠内喂养不耐受的中医研究进展 |
| 2.1 病机认识 |
| 2.2 中医药现代研究 |
| 2.3 治疗 |
| 参考文献 |
| 附录--临床观察表 |
| 在读期间发表的学术论文、专着及科研成果 |
（10）电针水沟、足三里改善缺血再灌注大鼠微循环的影像学研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英汉缩略词对照表 |
| 引言 |
| 第一章 实验研究 |
| 第一部分 电针水沟、足三里对MCAO模型大鼠神经功能缺损及组织形态学的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 第二部分 电针水沟、足三里对MCAO大鼠脑微循环改善的影像学研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 第三部分 讨论 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 文献综述 |
| 针刺治疗缺血性脑卒中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 针刺改善脑微循环研究进展 |
| 参考文献 |
| 磁共振技术在针刺治疗缺血性脑卒中的应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表文章及成果 |
四、急性脑血管病再灌流损伤12例临床分析（论文参考文献）
- [1]三七三醇皂苷抗心肌缺血再灌注损伤机制研究及三七总皂苷对PCI心肌保护作用的系统评价[D]. 文超. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]从CXCR4/NF-κB/GSDMD探讨柴胡加龙骨牡蛎汤抑制心肌梗死合并焦虑大鼠炎症机制研究[D]. 侯季秋. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]“醒脑开窍”针法对脑缺血损伤血脑屏障通透性的调控作用及对ICAM-1、MMPs-9表达的影响[D]. 康晓文. 甘肃中医药大学, 2021(01)
- [4]免疫与炎症反应在脑卒中动物模型中的影响与机制研究[D]. 赵慧. 山西医科大学, 2020(01)
- [5]通络化痰胶囊治疗中风恢复期的临床疗效及对VD大鼠Clathrin介导的NMDAR胞吞动态变化研究[D]. 张丹丹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]芎归方协同BMSCs-exosomes调控缺血性脑卒中血管新生的实验研究[D]. 刘婉莹. 天津中医药大学, 2020
- [7]清脑益元汤对局灶性脑缺血损伤大鼠NPY、CGRP表达水平的影响[D]. 向昱臻. 广西中医药大学, 2020(02)
- [8]基于PI3K/AKt/mTOR信号通路探讨土家族麝针疗法治疗缺血性脑中风大鼠的作用机制[D]. 袁丽君. 湖北民族大学, 2020(12)
- [9]加味桂附理中汤防治急性脑梗死患者肠内喂养不耐受的临床观察[D]. 王文毓. 成都中医药大学, 2020(02)
- [10]电针水沟、足三里改善缺血再灌注大鼠微循环的影像学研究[D]. 李彦橙. 云南中医药大学, 2020(01)