一、实验性急性坏死性胰腺炎并发肺损伤大鼠血液、肺组织中氧自由基代谢变化（论文文献综述）
闫寒,张畅斌,李沧海,姜廷良[1]（2013）在《磷脂酶A2及其相关中药活性研究进展》文中研究表明磷脂酶A2是催化水解磷脂甘油二位酰基释放游离脂肪酸和溶血磷脂的限速酶,其下游产物参与了基因表达、能量代谢、质膜重构、信号转导以及炎症、损伤等多种基本生理病理过程,具有广泛的生物活性。本文介绍了磷脂酶A2超家族成员及其功能,并对近150篇文献所涉约100余种中草药或其配方及其化学成分对磷脂酶A2活性和（或）含量影响进行梳理和综述,以期对中药相关研究提供参考。
范开亮[2]（2019）在《HO-1和中药大柴胡汤对重症急性胰腺炎大鼠胰腺和肺保护机制的研究》文中研究表明研究背景重症急性胰腺炎（Severe Acute Pancreatitis,SAP）病情重,并发症多,常释放大量炎症介质诱发全身系统性炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS）,导致肺损伤（ALI）、急性呼吸窘迫综合征（ARDS）和严重感染等多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）[’1,2],病死率很高。SAP的临床治疗包括保守治疗或手术治疗,大量临床研究证实,外科治疗因为手术的创伤和应激反应会加重胰腺局部和全身的炎症反应,而且会继发严重感染,引起肺、肝、肾、心等器官的功能衰竭,病死率较高[3]。近年来我国重症急性胰腺炎的发病率升高,但缺乏有效的治疗手段来提高患者治愈率及存活率,因此重症急性胰腺炎的发病机制和治疗方法是目前临床研究的国际性难题。重症急性胰腺炎是一个多因素参与的复杂的病理生理过程[4],目前的研究表明,SAP发病的主要机制是:胰酶对胰腺的自身消化、肠道细菌移位、炎症细胞过度激活、钙超载、胰腺循环障碍和高脂血症等。胰腺内各种消化酶原被激活,诱导大量炎症细胞持续释放各种细胞因子,触发连续的炎症介质瀑布样级联反应,一系列的炎症反应导致多器官功能障碍[5]。胰腺作为原发器官,往往是受损最为严重的器官。肺作为SIRS最常见的靶器官,是最容易受累的器官,肺损伤是SAP最常见并发症之一。Bonjoch Le等[6]研究发现,采用牛磺酸诱导急性胰腺炎大鼠模型,肺泡巨噬细胞激活,炎性细胞浸润,出现急性胰腺炎相关性肺损伤。近几年的研究表明,炎症因子的持续过度释放是造成SAP病情恶化的主要因素之一。因此,SAP的临床治疗的重点是降低炎症反应、控制炎症介质瀑布样级联反应、维持促炎和抗炎反应的平衡,阻断SIRS引起的MODS。所以阻断SAP的炎症信号转导通路、抑制炎症因子的表达是目前研究和治疗的关键靶点。血红素加氧酶-1（HO-1）,是血红素降解的限速酶,也被称为热休克蛋白-32（HSP-32）,具有保护细胞、减轻氧化应激对细胞损伤的作用[7]。HO-1还具有影响细胞生长、炎症反应和凋亡等作用。一些动物实验证实,HO-1具有降低炎症反应的作用,能够减少组织细胞对不同促炎因子导致的炎症反应所引起的组织损伤[8]。在一些动物实验中,给予脂多糖（LPS）建立脓毒症模型,缺乏HO-1基因的大鼠和给予HO-1抑制剂的大鼠,器官损伤增加,死亡率升高[9-10]。这些研究表明,在缺血再灌注损伤中,在降低脓毒症模型的氧化应激反应中,在低氧环境中,HO-1在调控氧化应激、炎症反应等方面发挥重要的作用,并具有器官保护作用,HO-1具有可诱导的抗炎和器官保护作用[11-14]。TNF-α和L-10是体内重要的促炎和抗炎细胞因子,IL-10可抑制IL-2、IL-3及TNF-α等细胞因子的合成,还可以抑制TNF-α释放而减轻炎症反应、保护脏器功能,具有潜在的抗炎功能,对SAP所致的MODS有保护作用。TNF-α是由淋巴细胞以及巨噬细胞所分泌的炎症因子,释放后能诱导IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-a的表达,导致炎性因子过度的表达和释放,过度的炎症反应导致细胞损伤和组织破坏[15-17]。近几年的一些研究发现,HO-1可调控IL-10的表达,介导IL-10的抗炎效果[18]。在小鼠巨噬细胞中,IL-10可通过p38-MAPK信号传导通路诱导HO-1的表达[19]。在LPS引起的脓毒性休克小鼠模型中,IL-10介导的抗炎作用可以被HO-1抑制剂ZnPP所减弱。近年来的研究发现,诱导HO-1基因表达与多条信号转导通路有关,而且各种炎症信号刺激通过不同的炎症信号传导通路诱导HO-1基因的表达。诱导HO-1基因表达的炎症信号传导通路可分为:（1）p38/MAPK炎症信号传导通路;（2）PI3K/AKT炎症信号传导通路（转录后水平的调节）;（3）JAK/STAT炎症信号传导通路;（4）蛋白激酶途径的调节。其中促分裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）炎症信号传导通路被研究证实可以诱导HO-1基因的表达。但HO-1的激活对p38 MAPK/NF-κB炎症信号传导通路的调节作用未见国内外研究报道,值得进一步研究证实,以指导临床应用。图1.HO-1及其相关p38 MAPK/NF-KB信号通路示意图在SAP中,HO-1的表达对促炎因子TNF-a、抑炎因子IL-10是否具有调节作用,对胰腺和肺是否具有器官保护作用,以及HO-1是否通过p38 MAPK/NF-KB炎症信号传导通路发挥调节炎症反应和器官保护作用,尚无定论。如果能从炎症信号传导通路阻断过度激活的全身炎症反应,将为SAP的临床治疗提供有力的武器。（国家自然基金课题（81503543）项目）目的观察血红素加氧酶-1（hemeoxygenase-1,HO-1）过表达及抑制对重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠血清、胰腺和肺组织HO-1、促炎因子TNF-aα抑炎因子IL-10含量的变化,以及对胰腺和肺组织病理学的影响,分析血红素加氧酶-1对胰腺和肺炎症反应的器官保护作用;观察HO-1过表达及抑制对SAP大鼠胰腺和肺组织p3 8 MAPK/NF-κB炎症信号传导通路的调节作用,探讨HO-1抗炎作用以及对胰腺和肺器官保护作用的炎症信号传导通路机制。方法60只雄性SD大鼠,6～7周龄,220～260 g,随机分为4组:对照组、SAP模型组、HO-1抑制剂组、HO-1过表达组,每组15只。1、对照组:假手术组,只开腹,然后关腹,腹腔注射生理盐水,10ml/kg。2、SAP模型组:采用开腹经胰管逆行性注射5%牛黄胆酸钠（0.1ml/100g）方法制备SAP模型,建模后腹腔注射生理盐水,10ml/kg。3、HO-1抑制剂组:经胰管逆行性注射5%牛黄胆酸钠（0.1ml/100g）方法制备SAP模型,制备SAP模型后30min腹腔注射HO-1抑制剂锌原卟啉（Zn-protoporphyrin,Zn-PP）,20μxmol/kg。4、HO-1过表达组:经胰管逆行性注射5%牛黄胆酸钠（0.1ml/100g）方法制备SAP模型,制备SAP模型后30 111min腹腔注射1HO-1促进剂血晶素,75μg/kg。在制模后24 h处死大鼠,腹主动脉留取血液标本,留取胰腺、肺组织标本。制备胰腺和肺组织石蜡切片,用HE（hematoxylin-eosin）染色法观察胰、肺组织病理学改变,进行组织病理学评分。应用免疫组织化学技术（免疫荧光法）对切片进行染色,观察促炎因子TNF-α、抗炎因子IL-10的细胞内表达情况。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清TNF-α IL-10、HO-1含量。制备胰腺和肺组织匀浆,离心提前上清液,ELISA法检测其中TNF-α IL-10、HO-1的含量。提取胰腺和肺组织的总蛋白,Western Blot法检测p38 MAPK/NF-κB通路关键蛋白（p38 MAPK、磷酸化P38 MAPK、MAPKAPK2、NF-1κB p65）的表达水平。结果一、各组大鼠血清HO-1、IL-10、TNF-a含量的比较1、各组大鼠的血清HO-1含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的血清HO-1含量明显增高（0.85±0.14vs 0.28±0.03,P<0.01）;与HO-1过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的血清HO-1显着下降（0.75±0.11 vs 1.02±0.16,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的血清HO-1含量显着增高（1.02±0.16 vs 0.85±0.14,P<0.01）。2、各组大鼠的血清IL-10含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的血清IL-10含量均明显增高（71.89±8.91 vs 11.05±1.79,P<0.01）;与HO-1 过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的血清IL-10含量显着下降（64.55±7.69 vs 99.83±13.33,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的血清IL-10含量显着增高（99.83±13.33 vs 71.89±8.91,P<0.01）。3、各组大鼠的血清TNF-a含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的血清TNF-α含量明显增高（29.26±3.69 vs 12.53±2.04,P<0.01）;与HO-1 过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的血清TNF-α含量显着升高（34.36±3.95 vs 21.69±2.95,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组TNF-α含量显着下降（21.69±2.95 vs 29.26±3.69,P<0.01）。二、各组大鼠胰腺组织中HO-1、IL-10、TNF-α含量的比较1、各组大鼠的胰腺HO-1含量比较.:与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺HO-1含量明显增高（0.52±0.08 vs 0.18±0.02,P<0.01）;与HO-1过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的胰腺HO-1含量显着下降（0.37±0.06 vs 0.82±0.12,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的胰腺HO-1含量明显增高（0.82±0.12 vs 0.52±0.08,P<0.05）。2、各组大鼠的胰腺IL-10含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺IL-10含量明显增高（52.63±6.02 vs 26.37±3.57,P<0.01）;与HO-1过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的胰腺IL-10含量显着下降（48.09±6.22 vs 62.7±9.11,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的胰腺IL-10含量明显增高（62.71±9.11 vs 52.63±6.02,P<0.05）。3、各组大鼠的胰腺TNF-a含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺TNF-a含量明显增高（31.76±5.52 vs 14.78±2.39,P<0.01）;与HO-1 过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的胰腺TNF-α含量明显升高（34.17±5.16 vs 25.68±3.49,P<0.05）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的胰腺TNF-α含量明显下降（25.68±3.49 vs 31.76±5.52,P<0.05）。三、各组大鼠肺组织中HO-1、IL-10、TNF-α含量的比较1、各组大鼠的肺组织HO-1含量比较.:与对照组相比,SAP模型组大鼠的肺组织中HO-1含量明显增高（0.46±0.06 vs 0.09±0.01,P<0.01）;与HO-1过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的肺组织中HO-1含量显着下降（0.33±0.05 vs 0.79±0.11,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的肺组织中HO-1含量明显增高（0.79±0.11 vs 0.46±0.06,P<0.05）。2、各组大鼠的肺组织IL-10含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的肺组织中IL-10含量明显增高（49.18±6.80 vs 19.51±2.92,P<0.01）;与HO-1 过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的肺组织中IL-10含量显着下降（44.72±6.67 vs 58.34±7.81,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的肺组织中IL-10含量明显增高（58.34±7.81 vs 49.18±6.80,P<0.05）。3、各组大鼠的肺组织TNF-α含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的肺组织中TNF-α含量明显增高（29.61±3.89 vs 11.36±1.64,P<0.01）;与HO-1 过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的肺组织中TNF-α含量明显升高（35.06±4.92 vs 22.58±3.32,P<0.05）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的肺组织中TNF-α含量明显下降（22.58±3.32 vs 29.61±3.89,P<0.05）。四、各组大鼠胰腺组织病理学和免疫组化切片观察:1、胰腺大体标本观察:对照组胰腺组织无水肿、充血、及胰腺坏死,未见明显病理变化;SAP模型组胰腺组织水肿、苍白,表面脂肪组织散在点状皂化斑;HO-1抑制剂组胰腺组织明显水肿、苍白,表面脂肪组织散在点状皂化斑;HO-1过表达组胰腺组织局部水肿、苍白,未发现明显皂化斑。2、光镜下观察:对照组胰腺腺泡排列规则,腺管形态正常,未见明显变化;SAP模型组胰腺间质不同程度的充血、水肿,伴有炎症细胞浸润,胰腺部分出血、坏死,腺泡水肿、排列紊乱;HO-1抑制剂组胰腺间质明显充血、水肿,大量炎症细胞浸润,胰腺大片出血、坏死,腺泡水肿、排列紊乱,与模型组比较,病变较重;HO-1过表达组胰腺间质轻度水肿,少量炎症细胞浸润,小叶间隔增宽,与模型组比较,病变较轻。3、胰腺组织病理学评分:与HO-1过表达组相比,HO-1抑制剂组大鼠的胰腺组织病理评分明显升高（13.50±0.76 vs 7.00±0.49,P<0.01）,与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的胰腺组织病理评分明显降低（7.00±0.49 vs 11.50±0.53,P<0.05）;有显着统计学差异。4、各组大鼠胰腺组织IL-10免疫组化检测结果:对照组细胞内IL-10表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内IL-10表达增加,免疫组化染色较对照组明显;HO-1抑制剂组细胞内IL-10表达增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显;HO-1过表达组细胞内IL-10表达明显增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显。5、各组大鼠胰腺组织TNF-α免疫组化检测结果:对照组细胞内TNF-α表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内TNF-a表达增加,免疫组化染色较对照组明显;HO-1抑制剂组细胞内TNF-α表达明显增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显;HO-1过表达组细胞内TNF-α表达较少,免疫组化染色较SAP模型组少。五、各组大鼠肺组织病理学和免疫组化切片观察:1、大体标本观察:对照组大鼠肺无水肿、充血,表面红润,气管内无渗出液。SAP模型组大鼠肺明显水肿、充血,表面苍白,包膜下可见渗血,气管内较多渗出液。HO-1抑制剂组大鼠肺明显水肿、充血,表面苍白,包膜下较多渗血,气管内大量渗出液,病变较SAP模型组大鼠重。HO-1过表达组大鼠肺可见水肿、充血,较SAP模型组大鼠轻,表面苍白,包膜下少量渗血,气管内少量渗出液。2、HE染色光镜下观察:对照组大鼠肺组织结构完整、清晰,细胞排列规整,无炎性细胞浸润;肺泡壁薄,无充血、水肿,肺泡内无渗出液。SAP模型组大鼠肺组织结构模糊,大量炎性细胞浸润,少量红细胞渗出;肺泡壁增厚,明显充血、水肿,肺泡内大量渗出液,富含蛋白,透明膜形成。HO-1抑制剂组大鼠肺组织结构模糊,大量炎性细胞浸润,可见红细胞渗出;肺泡壁显着充血、水肿,肺泡内大量渗出液,富含蛋白,透明膜形成,上皮细胞脱落,渗出较SAP模型组增加,病变明显加重。HO-1过表达组大鼠肺组织结构较完整,少量炎性细胞浸润,偶见红细胞渗出;肺泡壁轻度充血、水肿,肺泡内少量渗出液,富含蛋白,渗出较SAP模型组减轻,病变较轻。3、肺组织病理学评分:HO-1抑制剂组大鼠的胰腺组织病理评分明显升高（12.28±0.83 vs 9.37±0.61,P<0.05）;与HO-1 过表达组相比,HO-1 抑制剂组大鼠的胰腺组织病理评分明显升高（12.28±0.83 vs 5.53±0.57,P<0.01）;与SAP模型组相比,HO-1过表达组大鼠的肺组织病理评分明显降低（5.53±0.57 vs 9.37±0.61,P<0.05）,有显着统计学差异。4、各组大鼠肺组织IL-10免疫组化检测结果:对照组细胞内IL-10表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内IL-10表达增加,免疫组化染色较对照组明显;HO-1抑制剂组细胞内IL-10表达增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显;HO-1过表达组细胞内IL-10表达明显增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显。5、各组大鼠肺组织TNF-α免疫组化检测结果:对照组细胞内TNF-α表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内TNF-α表达增加,免疫组化染色较对照组明显;HO-1抑制剂组细胞内TNF-α表达明显增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显;HO-1过表达组细胞内TNF-α表达较少,免疫组化染色较SAP模型组少。六、各组大鼠胰腺组织中p38 MAPK/NF-κB通路关键蛋白的表达水平Western Blot检测结果显示,HO-1抑制剂可增加胰腺组织中p38的磷酸化、MAPKAPK2的表达,促进NF-KB p65的表达;HO-1过表达可抑制SAP大鼠胰腺组织p38的磷酸化、MAPKAPK2的表达,减少NF-κB p65的表达。七、各组大鼠肺组织中p38 MAPK/NF-KB通路关键蛋白的表达水平Western Blot检测结果显示,HO-1抑制剂可增加SAP大鼠肺组织中p38的磷酸化、MAPKAPK2的表达,促进NF-κκB p65的表达;HO-1过表达可抑制SAP大鼠肺组织p38的磷酸化、MAPKAPK2的表达,减少NF-κB p65的表达。Western Blot检测结果提示p38 MAPK/NF-KB传导通路可能是HO-1增加IL-10、降低TNF-α减轻SAP大鼠过度炎症反应的关键炎症信号传导通路。结论1、HO-1过表达可以降低SAP大鼠炎症因子的释放,减轻组织炎症反应,对SAP大鼠的胰腺和肺组织具有器官保护作用;2、HO-1对SAP大鼠胰腺和肺组织保护作用的机制可能与增加IL-10表达、降低TNF-α的表达有关。3、HO-1过表达可抑制SAP大鼠胰腺和肺组织p38 MAPK的磷酸化,减少NF-κB p65的表达。4、实验提示p38 MAPK/NF-KB传导通路可能是HO-1减轻SAP大鼠过度炎症反应的关键炎症信号传导通路。前言重症急性胰腺炎（Severe Acute Pancreatitis,SAP）的临床治疗包括保守治疗或手术治疗。大量临床研究已经证实,外科治疗因为手术的创伤和应激反应会加重胰腺局部和全身的炎症反应,而且会继发严重感染,引起肺、肝、肾、心等器官的功能衰竭,病死率较高。近年来我国重症急性胰腺炎的发病率升高,但缺乏有效的治疗手段来提高患者治愈率及存活率,因此重症急性胰腺炎的治疗是国际性难题。中医药是我国传统文化的瑰宝,中西医结合治疗是我国的特色和优势所在。中医药治疗SAP具有独特的疗效,已成为SAP临床治疗方案中的重要组成部分。医圣汉代张仲景所着《伤寒杂病论》中的经典方剂大柴胡汤在胰腺炎的临床治疗中应用最多,临床疗效较为明显[1]。大柴胡汤是仲景名方,为表里双解剂,具有和解少阳,内泻热结之功效,主治少阳阳明合病W。临床常用于治疗消化性溃疡、急性胰腺炎、胆结石、急性胆囊炎等病症。近年来临床研究和动物实验发现,该方剂具有多种药理作用,可以抑制胃酸过多分泌以保护胃黏膜,还能松弛奥狄氏括约肌张力,具有利胆作用,还有保护肝细胞等作用[3]。大柴胡汤治疗SAP的临床疗效值得期待,其作用机制尚不明确,需要实验研究来加以证实和阐明,也将为临床应用提供实验证据的支持。TNF-α和IL-10是体内重要的促炎和抗炎细胞因子,IL-10可抑制IL-2、IL-3及TNF-α等细胞因子的合成,还可以抑制TNF-α释放而减轻炎症反应、保护脏器功能,具有潜在的抗炎功能,对SAP所致的多器官损伤有保护作用[4,5]。TNF-α是由淋巴细胞以及巨噬细胞所分泌的炎症因子,释放后能诱导IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-a的表达,导致炎性因子过度的表达和释放,过度的炎症反应导致细胞损伤和组织破坏[6-8]。在第一部分SAP大鼠动物实验中已经证实,HO-1可以促进抑炎因子IL-10的表达、减少促炎因子TNF-α的表达,对胰腺和肺具有器官保护作用,HO-1调节p38 MAPK/NF-κB炎症信号传导通路发挥抑制炎症反应和器官保护作用。大柴胡汤如果能通过调节HO-1抑制p38 MAPK/NF-κB炎症信号传导通路阻断过度激活的全身炎症反应,将为SAP的临床治疗提供新的治疗靶点。大柴胡汤治疗SAP的临床疗效及其作用机制尚需实验研究来加以证实和阐明,本实验应用大柴胡汤来治疗SAP大鼠模型,观察其对大鼠血清、胰腺和肺组织炎症因子HO-1、TNF-α、IL-10含量的影响,以及对胰腺和肺组织病理学的影响,探讨大柴胡汤对胰腺和肺保护作用;观察大柴胡汤对SAP大鼠胰腺和肺组织p38 MAPK/NF-κB炎症信号传导通路的调节作用,分析大柴胡汤治疗SAP是否通过介导HO-1/p38 MAPK/NF-KB炎症信号传导通路发挥抗炎作用以及器官保护作用。如果能阻断过度激活的全身炎症反应,将为SAP的临床治疗提供有力的武器,具有重要的临床意义。目的观察中药大柴胡汤（Dachaihu Decoction）对重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠血清、胰腺和肺组织HO-1、TNF-α、IL-10的影响,以及对胰腺和肺组织病理学的影响,探讨大柴胡汤对胰腺和肺炎症反应的保护作用;观察大柴胡汤对SAP大鼠胰腺和肺组织p38 MAPK/NF-κB炎症信号传导通路的调节作用,分析大柴胡汤治疗SAP是否通过介导HO-1/p38 MAPK/NF-KB炎症信号传导通路发挥抗炎作用以及器官保护作用。方法45只雄性SD大鼠,6～7周龄,220～260 g,随机分为3组:对照组、SAP模型组、大柴胡汤组,每组15只。1、对照组:假手术组,只开腹,然后关腹。术后给予2ml生理盐水灌胃,每天两次,自由饮水。2、SAP模型组:采用开腹经胰管逆行性注射5%牛黄胆酸钠（0.1ml/100g）方法制备SAP模型,建模后大鼠给予2ml生理盐水灌胃,每天两次,自由饮水。3、大柴胡汤组:经胰管逆行性注射5%牛黄胆酸钠（0.1ml/1OOg）方法制备SAP模型,制备SAP模型后给予大鼠中药大柴胡汤灌胃（2ml/200g,BID,剂量按公式计算）。大柴胡汤配方:柴胡15g,黄芩9g,芍药9g,枳实9g,半夏9g,大黄6g,大枣5枚（约10g）,生姜15g,总计82g。大柴胡汤由山东中医药大学附属医院中药房煎药室煎制,熬成200ml药液,大鼠以200g为标准体重计算,给予2ml中药灌胃,每天两次,给药量相当于含生药8.2g/（kg·d）。大鼠的用药剂量计算公式:dB=dA× RB/RA×（WA/WB）1/3。公式中dA为人每公斤体重给予的剂量,dB为大鼠每公斤体重给予的剂量,单位为mg/kg,RA=100,为人的体型系数,RB=59,为大鼠的体型系数,WA、WB分别为人和大鼠的体重值,单位为kg。人的标准体重以60kg计算,大鼠标准体重以200g计算,求得所给予剂量[9]。在制模后72h腹主动脉穿刺留取血液标本,放尽血液处死大鼠,然后留取胰腺、肺组织标本。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清TNF-α、IL-10、HO-1含量。制备胰腺和肺组织匀浆,离心提前上清液,ELISA法检测其中TNF-α、IL-10、HO-1的含量。制备胰腺组织石蜡切片,用HE（hematoxylin-eosin）染色法观察胰、肺组织病理学改变,进行组织病理学评分。应用免疫组织化学技术（免疫荧光法）对切片进行染色,观察促炎因子TNF-α、抗炎因子IL-10的细胞内表达情况。提取胰腺和肺组织总蛋白,Western Blot法检测p38 MAPK/NF-κB通路关键蛋白（p38 MAPK、磷酸化P38 MAPK、MAPKAPK2、NF-KB p65）的表达水平。结果一、各组大鼠的血清HO-1、IL-10、TNF-α含量比较1、各组大鼠的血清HO-1含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的血清HO-1含量显着增高（0.82±0.17 vs 0.26±0.05,P<0.01）;与SAP模型相比,大柴胡汤组血清HO-1 明显增高（0.99±0.15 vs 0.82±0.17,P<0.05）。2、各组大鼠的血清IL-10含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的血清IL-10含量均显着增高（74.62±7.28 vs 12.37±1.94,P<0.01）;与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的血清IL-10含量明显增高（91.67±10.53 vs 74.62±7.28,P<0.05）。3、各组大鼠的血清TNF-α含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的血清TNF-α含量明显增高（31.49±4.67 vs 11.73±1.88,P<0.01）;与SAP模型组相比,大柴胡汤组TNF-α含量明显下降（23.81±3.29 vs 31.49±4.67,P<0.05）。二、各组大鼠的胰腺HO-1、IL-10、TNF-α含量比较1、各组大鼠胰腺的HO-1含量比较.:与对照组相比,SAP模型组大鼠胰腺的HO-1含量显着增高（0.49±0.07 vs 0.17±0.04,P<0.01）;与SAP模型相比,大柴胡汤组胰腺HO-1 明显增高（0.78±0.14 vs 0.49±0.07,P<0.05）。2、各组大鼠的胰腺IL-10含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺IL-10含量明显增高（50.37±4.56 vs 25.93±2.86,P<0.01）;与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的胰腺IL-10含量明显增高（59.82±6.35 vs 50.37±4.56,P<0.05）。3、各组大鼠的胰腺TNF-a含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺TNF-a含量明显增高（31.76±5.52 vs 14.78±2.39,P<0.01）;与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的胰腺TNF-α含量明显下降（25.68±3.49 vs 31.76±5.52,P<0.05）。三、各组大鼠的肺组织HO-1、IL-10、TNF-α含量比较1、各组大鼠肺组织的HO-1含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠肺组织的HO-1含量显着增高（0.42±0.07 vs 0.13±0.02,P<0.01）;与SAP模型相比,大柴胡汤组肺组织HO-1 明显增高（0.65±0.09 vs 0.42±0.07,P<0.05）。2、各组大鼠的肺组织IL-10含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的肺组织中IL-10含量明显增高（48.51±3.94 vs 20.63±1.89,P<0.05）;与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的肺组织中IL-10含量明显增高（57.26±6.07 vs 48.51±3.94,P<0.05）。3、各组大鼠的肺组织TNF-a含量比较:与对照组相比,SAP模型组大鼠的肺组织中TNF-a含量明显增高（28.43±2.92 vs 10.67±0.94,P<0.05）;与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的肺组织中TNF-α含量明显下降（10.67±0.94 vs 28.43±2.92,P<0.05）。四、各组大鼠胰腺形态学观察:1、胰腺大体标本观察:对照组胰腺组织无水肿、充血、及胰腺坏死,未见明显病理变化;SAP模型组胰腺组织水肿、苍白,表面脂肪组织散在点状皂化斑;大柴胡汤组胰腺组织局部水肿、苍白,未发现明显皂化斑。2、光镜下观察:对照组胰腺腺泡排列规则,腺管形态正常,未见明显变化;SAP模型组胰腺间质不同程度的充血、水肿,伴有炎症细胞浸润,胰腺部分出血、坏死,腺泡水肿、排列紊乱;大柴胡汤组胰腺间质轻度水肿,少量炎症细胞浸润,小叶间隔增宽,与模型组比较,病变较轻。3、胰腺组织病理学评分:与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的胰腺组织病理评分明显降低（8.50±0.78 vs 12.30±1.26,P<0.05）;与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺组织病理评分明显升高（12.30±1.26vs0,P<0.01）。4、各组大鼠胰腺组织IL-10免疫组化检测结果:对照组细胞内IL-10表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内IL-10表达增加,免疫组化染色较对照组明显;大柴胡汤组细胞内IL-10表达明显增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显。5、各组大鼠胰腺组织TNF-α免疫组化检测结果:对照组细胞内TNF-α表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内TNF-α表达增加,免疫组化染色较对照组明显;大柴胡汤组细胞内TNF-α表达较少,免疫组化染色较SAP模型组少。五、各组大鼠肺组织病理学观察:1、大体标本观察:对照组大鼠肺无水肿、充血,表面红润,气管内无渗出液。SAP模型组大鼠肺明显水肿、充血,表面苍白,包膜下可见渗血,气管内较多渗出液。大柴胡汤组大鼠肺可见水肿、充血,较SAP模型组大鼠轻,表面苍白,包膜下少量渗血,气管内少量渗出液。2、HE染色光镜下观察:对照组大鼠肺组织结构完整、清晰,细胞排列规整,无炎性细胞浸润;肺泡壁薄,无充血、水肿,肺泡内无渗出液。SAP模型组大鼠肺组织结构模糊,大量炎性细胞浸润,少量红细胞渗出;肺泡壁增厚,明显充血、水肿,肺泡内大量渗出液,富含蛋白,透明膜形成。大柴胡汤组大鼠肺组织结构较完整,少量炎性细胞浸润,偶见红细胞渗出;肺泡壁轻度充血、水肿,肺泡内少量渗出液,富含蛋白,渗出较SAP模型组减轻,病变较轻。3、肺组织病理学评分:与SAP模型组相比,大柴胡汤组大鼠的肺组织病理评分明显降低（5.35±0.49 vs 8.93±0.85,P<0.05）;与对照组相比,SAP模型组大鼠的胰腺组织病理评分明显升高（8.93±0.85 vs 0,P<0.01）。4、各组大鼠肺组织IL-10免疫组化检测结果:对照组细胞内IL-10表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内IL-10表达增加,免疫组化染色较对照组明显;大柴胡汤组细胞内IL-10表达明显增加,免疫组化染色较SAP模型组更加明显。5、各组大鼠肺组织TNF-α免疫组化检测结果:对照组细胞内TNF-a表达正常,未见明显病理变化;SAP模型组细胞内TNF-α表达增加,免疫组化染色较对照组明显;大柴胡汤组细胞内TNF-α表达较少,免疫组化染色较SAP模型组少。六、各组大鼠胰腺组织中p38 MAPK/NF-κB通路关键蛋白的表达水平Western Blot检测结果显示,对照组大鼠胰腺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化、NF-KB p65的表达正常。SAP组大鼠胰腺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化、NF-κB p65的表达明显增加。大柴胡汤可抑制SAP大鼠胰腺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化,抑制NF-κB p65的表达。七、各组大鼠肺组织中p38 MAPK/NF-κB通路关键蛋白的表达水平Western Blot检测结果显示,对照组大鼠肺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化、NF-κB p65的表达正常。SAP组大鼠肺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化、NF-κB p65的表达明显增加。大柴胡汤可抑制SAP大鼠肺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化,抑制NF-KB p65的表达。结论1、大柴胡汤治疗SAP大鼠可增加HO-1表达,减轻炎症反应,明显减轻胰腺及肺组织病理改变。2、大柴胡汤可抑制SAP大鼠胰腺和肺组织中p38 MAPK的磷酸化、MAPKAPK2的活化,抑制NF-κB p65的表达。3、大柴胡汤对SAP大鼠胰腺和肺组织保护作用的机制可能与诱导HO-1表达升高IL-10、降低TNF-a有关。4、p38 MAPK/NF-κB通路可能是大柴胡汤诱导HO-1表达发挥抗炎和器官保护作用的关键炎症信号传导通路。
王皓[3]（2013）在《大鼠重症急性胰腺炎继发性肝、肺损伤模型的建立及相关炎症因子研究》文中认为目的：（1）通过夹闭胰头部的方法建立一种新型大鼠重症急性胰腺炎相关性肝损伤（severe acutepancreatitis-associated liver injury）的动物模型（2）通过夹闭胰头部的方法建立一种新型大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤（severe acute pancreatitis-associated lung injury, SAP-LI）的动物模型。（3）观察大鼠重症急性胰腺炎继发性肺损伤（severe acute pancreatitis-associated lung injury, SAP-LI）肺组织中低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）mRNA、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）mRNA、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）的变化情况，探讨HIF-1α、iNOS、NO在SAP-LI中的作用,以便为SAP-LI的诊治提供理论基础。方法：（1）将SPF级健康雄性SD大鼠180只随机分为：对照组、假手术组、肝损伤模型组，每组60只。再分别将每个分组中的60只大鼠随机分为6个分组，包括0h、6h、12h、18h、24h、36h组，每组10只大鼠。肝损伤模型组用16cm弯止血钳夹闭胰头2小时后松开。同时在相应时间点建立对照组及假手术组。在造模完成后，分别于相应各时间点采集血液、肝脏组织、胰腺组织标本。行血清淀粉酶（serum amylase，AMY）、血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、血液中性粒细胞百分比检测，行肝脏组织、胰腺组织病理学观察。（2）将SPF级健康雄性SD大鼠210只随机分为:对照组、假手术组、重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型组，每组70只。再分别将每个分组中的70只大鼠随机分为7个分组，包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h组，每组10只大鼠。SAP-LI模型组用16cm弯止血钳夹闭胰头2h后松开。假手术组于相应各时间点开腹后，仅轻轻翻动胰腺10次后放回其解剖位置。正常对照组除麻醉3h外不做任何处理。在造模完成后，分别于相应各时间点采集血液、肺泡灌洗液、肺组织、胰腺组织标本。行血淀粉酶、总蛋白、中性粒细胞百分比检测，行大鼠肺组织湿/干重比，肺泡灌洗液蛋白检测，行肺组织、胰腺组织病理学观察。（3）将210只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为:对照组、假手术组、SAP-LI模型组，每组70只。再将每组中的70只大鼠随机分为7个分组，包括0h、6h、12h、18h、24h、36h、48h组，每组10只大鼠。SAP-LI模型组采用夹闭法建模。造模完成后，分别于相应各时间点采集血液、肺泡灌洗液、肺组织标本。行血浆总蛋白检测，行大鼠肺组织湿/干重比，肺泡灌洗液蛋白检测，行肺组织HIF-1mRNA、iNOS mRNA qRT-PCR检测及NO、MDA、MPO检测，行肺组织病理学观察。结果：（1）肝损伤模型组大鼠AMY12h[（5052.1±114.9）U/L]、中性粒细胞百分比值在12h[（75.2±5.8）%]、ALT12h[（52.6±5.9）U/L]、AST12h[（629.5±57.4）]达到峰值，均显着高于其它时间点组（P<0.05）。肝损伤模型组与对照组和假手术组同一时间点组比较，差异具有统计学意义（P﹤0.05）。病理组织学观察可见造模后随时间进程胰腺炎呈加重表现，肝组织损伤24h最重。肝损伤模型组血清淀粉酶与血液中性粒细胞百分比、ALT、AST呈正相关（r=0.796，P<0.01；r=0.710，P<0.01；r=0.875，P<0.01）。胰腺病理学评学与肝脏病理学评分呈正相关（rs=0.919，P<0.01）。（2）SAP-LI模型组大鼠血清淀粉酶12h（5052.1U/L±114.9U/L,P<0.01）、中性粒细胞百分比值12h（75.2%±5.8%,P<0.05）达到峰值,大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值36h（0.009021±0.000107,P<0.01）达到高峰;大鼠肺组织湿/干重比36h（1.2001±0.0443,P<0.01）达到最小值。SAP-LI模型组与对照组和假手术组比较,差异均具有统计学意义（P﹤0.05）。病理组织学观察可见造模后随时间进程胰腺炎呈加重表现,肺组织损伤36h最重。SAP-LI模型组血清淀粉酶与血液中性粒细胞百分比、肺湿干质量比均呈正相关（r=0.794,P<0.01; r=0.365,P=0.002）。中性粒细胞百分比与肺湿干质量比呈正相关（r=0.356,P=0.003）。肺湿干质量比、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈负相关（r=-0.717, P<0.01）。胰腺病理学评分与肺脏病理学评分呈正相关（r=0.934,P<0.01）。（3）SAP-LI模型组大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值36h（0.009021±0.000107，P<0.01）达到高峰；大鼠肺组织湿/干重比36h（1.2001±0.0443，P<0.01）达到最小值。肺组织中HIF-1α mRNA（0.020279±0.000625，P<0.01）、iNOS mRNA（0.029780±0.000498，P<0.01）的相对表达量及NO（7.505±0.481，P<0.01）含量24h达到最高值，MDA（6.819±0.810，P<0.01）、MPO（5.089±0.523，P<0.05）含量36h达到峰值。SAP-LI模型组与对照组和假手术组比较，差异均具有统计学意义（P﹤0.05）。病理组织学观察可见肺组织损伤36h最重。肺湿干质量比、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈负相关（r=-0.717,P<0.01）。肺湿干质量比和MPO、MDA呈负相关（r=-0.636,P<0.01； r=-0.497,P<0.01）。 MDA和肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.661,P<0.01）。NO和MPO、MDA、iNOS、HIF-1α、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.721,P<0.01；r=0.529,P<0.01；r=0.695,P<0.01；r=0.642,P<0.01；r=0.781,P<0.01）。HIF-1α和MPO、iNOS、MDA、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.387,P<0.01；r=0.99,P<0.01；r=0.269,P<0.05；r=0.413,P<0.01）。iNOS和MPO、MDA、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.457,P<0.01；r=0.323,P<0.01；r=0.495,P<0.01）。MPO与MDA、肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值呈正相关（r=0.595,P<0.01；r=0.884,P<0.01）。结论：（1）通过夹闭胰头部的方法建立了一种新型大鼠重症急性胰腺炎相关性肝损伤的动物模型，24h为肝损伤最严重的时间点，也是我们建模的最佳时间点．为急性坏死性胰腺炎致肝损伤的发病机制及药物干预研究提供了一种较为理想的动物模型。（2）通过夹闭胰头部的方法建立了一种新型大鼠重症急性胰腺炎致肺损伤动物模型,36h为肺损伤最严重的时间点,也是我们建模的最佳时间点。为重症急性胰腺炎致肺损伤的发病机制及药物干预研究提供了一种较为理想的动物模型。（3）大鼠重症急性胰腺炎继发性肺损伤36h损伤最重，肺组织MDA、MPO检测值36h最高，HIF mRNA、iNOS mRNA含量及NO检测值24h最高，由此推测HIF-1α参与了肺损伤早期过程，iNOS及NO间接性致伤作用占主导地位。HIF-1α、NO、iNOS与中性粒细胞活性、脂质过氧化程度、及SAP-LI蛋白渗出有关。中性粒细胞活性与脂质过氧化程度有关。中性粒细胞活性、过氧化损伤与肺蛋白渗出关系密切。
文玲[4]（2020）在《安胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠NF-κBp65、INOS、COX-2、TNF-α、IL-1β表达影响的实验研究》文中认为目的:探究安胰颗粒对左旋精氨酸诱导的重症急性胰腺炎大鼠核转录因子-κBp65（nuclear factor-κBp65,NF-κBp65）、诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）、环氧合酶-2（cyclo-oxygenase,COX-2）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、白细胞介素1-β（interleukin 1-β,IL-1β）表达水平的影响,阐明安胰颗粒有效治疗重症急性胰腺炎的主要机制,丰富临床治疗重症急性胰腺炎的方法,改善重症急性胰腺炎的预后。方法:取鼠龄为42～49天的清洁级雄性成年SD（Sprague-Dawley,SD）大鼠120只,体重约200～250g,适应性喂养7天后,用电脑随机数字表随机分为4组。分别为正常组、模型组、中药组及西药组,每组30只大鼠。各组进一步分为3小时、6小时、12小时三小组,每组10只大鼠。中药组造模前连续三天以8g/kg的安胰颗粒水溶后灌胃,一天1次;正常组不做处理,自由饮水饮食;西药组造模前1小时予以人重组白介素10（Recombinant human interleukin-10,rh IL-10）10000U行腹腔注射;经以上预处理后,取模型组、中药组、西药组大鼠,造模前禁食不禁水12小时,以6%左旋精氨酸（L-arginine）溶液按150mg/100g剂量腹腔注射3次,每次间隔1小时,诱导SAP模型。用最后一次注射结束时间开始,按3小时、6小时、12小时时间点将四组大鼠分批麻醉后取腹主动脉血并处死大鼠进行解剖,观察胰腺大体形态,迅速摘取胰腺组织。采用酶联免疫吸附测定法测血清TNF-α、IL-1β水平;取胰腺组织,进行病理切片制作、用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测NF-κBp65mRNA含量、用免疫组化法测定NF-κBp65、iNOS、COX-2表达。采集所有数据进行统计学分析。结果:（1）胰腺病理切片结果:正常组电镜下胰腺小叶结构清晰,腺泡细胞、腺管、胰岛形态结构正常,腺泡细胞内见深蓝色点状细胞核。模型组随时间延长,小叶结构模糊,细胞排列紊乱,可见成片破裂细胞堆积,视野模糊,腺泡细胞大面积空泡性坏死,细胞核游出或破碎,间隙增宽,炎性细胞浸润,间质小血管破裂坏死,红细胞溢出。中药组胰腺小叶结构尚可见,炎性细胞浸润、血管破裂、细胞坏死情况与模型组对比明显改善,细胞肿胀明显,尚可见清晰细胞轮廓及在位的细胞核。西药组胰腺电镜下改变与中药组大体相似。（2）血清TNF-α、IL-1β:除正常组外,其余各组造模后各时间点血清TNF-α、IL-1β均随时间延长而显着升高,12小时间点为本实验观察时间中的峰值,同时间点与正常组两两对比差异有统计学意义（其中TNF-α水平p<0.01,IL-1β水平p<0.05）;与模型组同时间点两两对比,中药组和西药组血清TNF-α、IL-1β显着下降,差异有统计学意义（p<0.01）。中药组和西药组对比差异无统计学意义（p>0.05）。（3）胰腺组织NF-κBp65mRNA:除正常组外,其余各组造模后各时间点胰腺组织NF-κBp65mRNA均随时间延长而显着升高,12小时间点为本实验观察时间中的峰值,同时间点与与正常组两两对比差异有统计学意义（p<0.01）;与模型组同时间点两两对比,中药组和西药组胰腺组织NF-κBp65mRNA显着下降,差异有统计学意义（p<0.01）。中药组和西药组对比差异无统计学意义（p>0.05）。（4）胰腺组织NF-κBp65、iNOS、COX-2:除正常组外,其余各组造模后各时间点胰腺组织NF-κBp65、iNOS、COX-2均随时间延长显着升高,12小时间点为本实验观察时间中的峰值,同时间点与正常组两两对比差异有统计学意义（p<0.01）;与模型组同时间点两两对比,中药组和西药组胰腺组织NF-κBp65、iNOS、COX-2显着下降,差异有统计学意义（p<0.01）。中药组和西药组对比差异无统计学意义（p>0.05）。（5）SAP大鼠胰腺组织NF-κBp65的表达量与TNF-α、IL-1β、iNOS、COX-2表达量分别呈高度正相关（p<0.05）,而各TNF-α、IL-1β、iNOS、COX-2间亦存在不同程度的正相关关系（p<0.05）。结论:1、左旋精氨酸诱导的大鼠SAP模型血清TNF-α、IL-1β以及胰腺组织NF-κBp65mRNA、NF-κBp65、iNOS、COX-2水平在3小时时间点开始显着升高,于本组实验的12小时达到峰值,NF-κBp65与各因子的表达量间呈高度正相关,而各因子间亦存在不同程度的正相关关系,说明NF-κBp65mRNA基因转录诱导了NF-κBp65蛋白表达,蛋白过表达又导致下游靶基因转录或激活靶基因转录,炎症放大与微循环障碍同时发生在SAP早期,且炎症因子与微循环之间相互影响。2、安胰颗粒能够有效改善SAP大鼠胰腺组织病理损伤,说明安胰颗粒对胰腺组织具有保护作用,是有效治疗SAP的病理生理基础。3、安胰颗粒胃灌注后不仅显着降低SAP大鼠血清TNF-α、IL-1β含量,还显着降低胰腺组织NF-κBp65mRNA表达及NF-κBp65、iNOS、COX-2表达,提示安胰颗粒通过核因子-炎症因子通路,防治SAP系统性炎症反应综合征,通过核因子-微循环因子通路改善微循环,有效减轻SAP发病过程中的炎性损伤及微循环障碍,达到有效治疗SAP的目的。
张馨木[5]（2007）在《重组人Elafin对实验性大鼠急性胰腺炎作用的研究》文中认为急性胰腺炎（Acute pancretitis,AP）是一种炎症性疾病,基本病理改变为胰腺腺泡的急性损害和胰腺的急性炎症,炎症不仅涉及胰腺局部,而且会发生全身性炎症反应。急性胰腺炎发病急、病情凶险、病死率高,早期容易并发多脏器功能衰竭,尤其是急性肺损伤（ALI）。急性肺损伤是一种肺泡毛细血管膜弥散性损伤,导致肺水肿和肺不张,进一步发展即为急性呼吸窘迫综合征（ARDS）。ALI和ARDS是AP最常见和最严重的全身并发症之一,也是致死的主要原因。AP和AP并发ALI发病机制复杂。Elafin称弹性蛋白酶特异性抑制因子,是支气管Clara细胞、II型肺泡上皮细胞及肺泡巨噬细胞等在炎性刺激诱导下表达。Elafin为中性粒细胞弹性蛋白酶、胰弹性蛋白酶、蛋白酶3等丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂。炎性反应是机体对损伤的一种保护性反应,其目的是将损伤源破坏、稀释并清除,与此同时也会引起不同程度的自身损伤。中性粒细胞弹性蛋白酶被认为是炎性反应的主要终效应因子,Elafin是内源性的弹性蛋白酶抑制剂,具有抗蛋白酶活性、抗炎活性和直接的抗微生物活性等重要作用。本研究首先利用牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射法建立大鼠急性胰腺炎和胰腺炎合并肺损伤模型,之后给与重组人Elafin,通过急性胰腺炎大鼠血清生化指标检测,观察胰腺组织和肺组织病理学变化,考察重组人Elafin对大鼠急性胰腺炎及合并肺损伤的作用,对其作用机制进行探讨。本论文的创新之处在于:1)证实了Elafin对实验性大鼠急性胰腺炎的治疗作用,并对其作用机制进行探讨。2)证实了Elafin对实验性大鼠急性胰腺炎合并肺损伤的治疗作用,并对其作用机制进行探讨。国内外尚未见Elafin对大鼠急性胰腺炎和胰腺炎合并肺损伤作用的报道。
张喜平,李志军[6]（2006）在《急性胰腺炎合并肺损伤时炎性介质的作用》文中进行了进一步梳理急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是临床常见的急腹症之一,并发症多,死亡率较高．除了导致胰腺病变外,肺是最早受累器官之一,从低氧血症到急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory depress syndrome,ARDS）均可出现．目前,国内外学者对于AP合并急性肺损伤（acute lung injury,ALI）的发病机制进行了许多实验及临床研究,现就AP合并肺损伤时炎性介质的作用作一综述．
周业江[7]（2006）在《Cycloxygenase-2在急性胰腺炎相关性肺损伤中的作用及机制研究》文中研究说明研究背景 急性胰腺炎是以胰腺间质水肿、出血、腺泡细胞空泡变性、坏死及炎症细胞浸润为病理特征、病变程度不一、结局难以预料的急性炎症性疾病。急性胰腺炎常伴有全身炎症反应，约20％发展为重症急性胰腺炎（多器官功能障碍或衰竭），其病死率可高达40％以上。因此，SAP仍是目前常见的、严重威胁人类健康的重大疾病。 急性胰腺炎相关性肺损伤是急性胰腺炎常见的、也是最为严重的全身并发症，成人呼吸窘迫综合征是严重急性肺损伤的表现，急性胰腺炎早期阶段的死亡几乎可归因于成人呼吸窘迫综合征。迄今为止，急性胰腺炎及相关性肺损伤的病理生理机制，以及影响急性胰腺炎发生发展和结局的因素目前仍不清楚。积累的大量证据表明，胰腺实质中活化的单核巨噬细胞、多核粒细胞释放的TNF-α、IL-1和IL-6等多种促炎细胞因子不仅有助于启动急性胰腺炎局部炎症的形成和发展，而且也有助于导致全身炎症反应，促炎细胞因子的过表达加重了实验急性胰腺炎的严重程度；与此相反，IL-4、IL-10及TGF-β等抗炎细胞因子则可显着减轻实验急性胰腺炎的严
刘洪斌[8]（2004）在《急性出血坏死性胰腺炎肺损伤发病机制及中药治疗的实验研究》文中指出目的 急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）时血中增多的磷脂酶A2（PLA2）对Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用是引起胰腺炎肺损伤的重要因素。本研究对大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞进行分离纯化和原代培养，并在体外研究了PLA2及含有PLA2的AHNP大鼠血清对培养细胞的损伤作用及机理。方法 对大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞进行分离纯化和原代培养，分别加入PLA2及含有PLA2的AHNP大鼠血清，并设PLA2抑制剂（盐酸阿的平）对照组，各组均孵育4h，离心收集细胞，破碎细胞核提取核蛋白，ELISA法测定NF-κB活性；测定培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性，另外对培养细胞进行透射电镜检查，观察PLA2对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用。结果PLA2及含有PLA2的AHNP大鼠血清可使Ⅱ型肺泡上皮细胞培养上清液中LDH活性显着升高、Ⅱ型肺泡上皮细胞NF-κB活性显着增高，透射电镜检查显示Ⅱ型肺泡上皮细胞受损严重。盐酸阿的平可显着抑制PLA2对Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用。结论 AHNP时，PLA2对Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用是造成胰腺炎肺损伤的重要因素；这种损伤作用除了与其对Ⅱ型肺泡上皮细胞的直接损伤作用有关外，还与其激活NF-κB的表达有关。
胡炜[9]（2019）在《清胰汤调控DAMPs对SAP-ALI大鼠的治疗机制及对肠道微生态调整的初步探讨》文中研究表明目的观察重症急性胰腺炎（SAP）伴急性肺损伤（ALI）大鼠经清胰汤灌胃治疗后血浆中线粒体DNA（mt DNA）水平和肺组织甲酰肽受体（FPR）活化以及炎症损伤改变情况,探讨清胰汤通过调控损伤相关分子模式（DAMPs）对重症急性胰腺炎伴发急性肺损伤（SAP-ALI）大鼠的保护作用机制;通过微生物16Sr DNA测序技术检测大鼠粪便中微生物菌群改变,初步探讨清胰汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道微生态的调整作用。方法1.清胰汤调控DAMPs对SAP-ALI大鼠肺组织器官损伤治疗机制的研究将30只SPF级健康雄性Wistar大鼠按照随机数字法分为对照组、模型组、清胰汤组各10只。清胰汤组在实验前一周给予清胰汤10m L/kg灌胃,其余两组给予等量的生理盐水。清胰汤组与模型组在大鼠胆胰管内逆行注射牛磺胆酸钠制作模型;对照组仅在开腹后轻轻翻动胰腺,即关闭腹腔。24h后,颈部脱臼法处死大鼠。标本采集取出肺组织,10%福尔马林溶液固定,一部分进行苏木精-伊红（HE）染色以及FPR1的免疫组化（IHC）染色,镜下观察肺组织病理变化,并进行病理损伤评分;一部分匀浆提取组织上清液,ELISA法检测髓过氧化物酶（MPO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1（IL-1）、白介素6（IL-6）水平;取全血,留取血浆测定淀粉酶（AMY）和脂肪酶（LIP）水平;提取血浆中游离DNA,通过RT-PCR法,检测循环血浆中线粒体DNA（mt DNA）含量;采用Western blotting法检测各组大鼠肺组织中的甲酰肽受体1（FPR1）、甲酰肽受体2（FPR2）蛋白含量,同时采用RT-PCR法在基因水平检测FPR1、FPR2m RNA含量。2.运用16Sr DNA测序技术初步探讨清胰汤调整SAP大鼠肠道微生态菌群结构的研究30只SPF级健康雄性Wistar大鼠,分组以及建模方法同上,标本收集各组中结肠和胰腺组织,采用苏木精-伊红（HE）染色法观察结肠和胰腺组织病理变化,同时收集大鼠盲肠段粪便,16Sr DNA测序技术分析各组大鼠肠道微生物菌群的变化。结果1.清胰汤调控DAMPs对SAP-ALI大鼠肺组织器官损伤治疗机制的研究1.1肺组织HE染色比较:与对照组相比,模型组肺组织有明显肺血肿、肺淤血表现,大部分肺泡间隔明显增宽,肺泡腔部分融合成肺大泡,肺泡中大量PMN、巨噬细胞浸润（P<0.01）,而清胰汤组炎症反应明显减轻（P<0.05）。1.2肺组织中MPO、TNFα、IL-1及IL-6水平测定:较对照组相比,模型组中MPO、TNFα、IL-1及IL-6水平显着升高（P<0.01）,但是清胰汤治疗组显着降低这些指标（P<0.01）。1.3血浆AMY和LIP测定:较对照组相比,模型组中AMY和LIP水平显着升高（P<0.01）,但是清胰汤治疗组显着降低这些指标（P<0.01）。1.4血浆mt DNA的荧光定量PCR检测:较对照组相比,模型组中大鼠循环血中mt DNA水平显着升高（P<0.01）,但是清胰汤组可显着下调血浆中mt DNA含量（P<0.01）。1.5肺组织中FPR1 IHC染色比较:通过各组光密度值可知,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中可见明显的肺泡水肿,大量的中性粒细胞浸润等病理表现（P<0.001）;而清胰汤组炎细胞浸润、肺泡水肿程度较模型组降低（P<0.05）。1.6肺组织中FPR1、FPR2 m RNA及蛋白表达比较:模型组肺组织中FPR1、FPR2m RNA和蛋白相对表达量高于对照组（P<0.01）,清胰汤组肺组织中FPR1、FPR2 m RNA和蛋白相对表达量低于模型组（P<0.01）。2.运用16Sr DNA测序技术初步探讨清胰汤调整SAP大鼠肠道微生态菌群结构的研究2.1各组肠、胰腺组织的病理学评分比较从病理结果中显示,模型组中肠组织表现为肠壁水肿,肠黏膜上皮缺损、脱落等,上皮下间质空隙变宽,大量PMN等炎性细胞浸润等;胰腺组织表现为胰腺腺泡水肿、坏死,小叶间隔增宽,大量PMN等炎性细胞浸润等（P<0.05）,而中药清胰汤可减轻模型组中的胰腺损伤和肠黏膜受损程度（P<0.05）。表明本实验的大鼠重症急性胰腺炎造模成功,清胰汤对SAP的胰腺实质损伤以及肠道的黏膜损伤有一定的修复以及保护作用。2.2各组粪便中肠道菌群多样性分析三者之间物种差异性比较具有统计学意义（P<0.05）。测序的样本量足够大,具有一定程度的代表性,基本可以反应出测序的绝大多数菌群物种的生物信息,且所测同组中样本组成的均匀度相似。2.3肠道菌群结构分析:从门、纲、属三个水平分析结果显示清胰汤组可有效降低SAP大鼠厚壁菌门含量,其中包括梭菌纲（优杆菌属）和芽孢杆菌纲（梭状芽孢杆菌属）,以及毛螺菌属数量菌群含量下降,升高拟杆菌门（包括拟杆菌纲、拟杆菌属）和乳酸杆菌属含量（均P<0.05）。结论1.SAP大鼠血浆中mt DNA水平升高,而中药清胰汤灌胃可有效降低SAP大鼠循环血中mt DNA水平,起到对机体器官保护作用,且SAP大鼠循环血中mt DNA也许可作为一种判断SAP受损严重程度的指标。2.中药清胰汤灌胃可通过活化SAP-ALI中肺组织各种炎性细胞表面的FPR1和FPR2的表达,起到对SAP-ALI中肺组织过度炎症反应的保护作用。3.中药清胰汤可增加SAP大鼠的肠道菌群的多样性和丰富性,调控微生物生态平衡,增加益生菌群的含量,降低有害菌群的定植能力,从而达到对肠道的保护作用。
朱峰[10]（2007）在《丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠急性肺损伤保护作用的实验研究》文中认为急性肺损伤（acute lung injury，ALI）是重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）的常见并发症，其确切发病机制尚不明确。SAP发病1周内死亡的患者，60％死于ALI／ARDS或伴有ALI／ARDS的多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），防治肺损伤成为降低SAP死亡率的重要措施。促炎因子拮抗剂或抑炎因子协同剂的作用是近年来急性胰腺炎并发肺损伤防治研究的热点。大量动物实验表明促炎因子拮抗剂或抑炎因子协同剂对急性胰腺炎相关性肺损伤（acute pancreatitis-associated acute lung injury，APALI）防治效果明显，但遗憾的是，对于人来说，几乎没有明显的临床疗效。其原因可能与复杂的炎性因子网络相互作用有关，单一的促炎因子拮抗剂或抑炎因子协同剂的应用，可能导致炎性因子的失衡进一步加重；而且这些药物的药代动力学和毒性效应也限制了这些药物在伴有MODS的重症患者中的应用。再者，试验大多靶向于发病早期的一些炎症介质，而事实上，往往对患者进行干预治疗时，可能全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）的整个级联反应已经启动。而近来在内毒素血症和脓毒症中研究颇多且疗效明显的丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate，EP）在急性胰腺炎及其器官功能损伤的可能作用尚未引起足够的重视。近来研究表明丙酮酸乙酯是一种抗氧化剂和活性氧清除剂，并可调节多种炎症介质的释放，包括早期和晚期炎症介质如肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein，HMGB1）等，且无细胞毒性。基于对以上研究现状的认识，本研究拟通过建立简便、易复制、重复性好的急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis，ANP）并发急性肺损伤动物模型，探讨急性坏死性胰腺炎肺损伤的发病机制；观察丙酮酸乙酯延迟应用是否可减轻急性坏死性胰腺炎肺损伤及可能作用机制；并研究大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1的表达在急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用及意义。方法1、实验动物模型的建立及取材：健康雄性Wistar大鼠72只，体重220～250g，随机分为三组：假手术组（SO）、ANP组及EP治疗组。ANP组及EP治疗组大鼠予逆行性胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制作ANP模型，假手术组大鼠仅开腹并翻动十二指肠数次；EP治疗组于制模后经尾静脉或股静脉延迟给予EP溶液（EP溶于乳酸钠林格液中，28mM），每次剂量为40mg／kg。各组大鼠分别于制模后6h、12h及24h取材。2、酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清TNF-α和IL-6水平；3、比色法检测肺组织的髓过氧化物酶（MPO）水平、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力；4、半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺组织HMGB1 mRNA表达：用经典的Trizol法进行肺组织RNA提取，定量后以其为模板逆转录合成cDNA第一链，然后用HMGB1引物进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳进行检测；5、生化法检测血清淀粉酶、血氧变化及观察胰腺、肺组织大体及光镜下的病理变化。结果1、随着制模时间的延长，ANP组大鼠血清淀粉酶逐渐升高，腹水量逐渐增加，各时相点动物的胰腺组织均存在不同程度的间质水肿、炎细胞浸润、灶性或片状出血坏死，胰腺及周围组织出现脂肪坏死及皂化斑，并伴血性腹水，呈典型的ANP病理改变；同时肺组织在各时相点形态上出现了不同程度的炎细胞浸润及肺间质、肺泡水肿、出血、灶性或大片肺不张等典型的ALI病理改变；在功能方面，PaO2进行性下降；2、ANP组大鼠肺组织的髓过氧化物酶（MPO）活性随着制模时间的延长而升高，EP治疗组与ANP组相比较，肺组织MPO水平均较低，且各时点均有统计学差异（P＜0.05）3、ANP组血清TNF-α和IL-6水平在制模后6h达高峰，12h下降，在此两时点治疗组血清TNF-α和IL-6水平明显低于ANP组（P＜0.05）；4、ANP组肺组织HMGB1 mRNA表达水平在制模后12h明显升高，至24h仍维持在高水平，治疗组肺组织HMGB1 mRNA表达水平在制模后12、24h明显低于ANP组（P＜0.05）；5、ANP组大鼠肺组织的丙二醛（MDA）水平随着制模时间的延长而升高，而SOD活力则逐渐降低：EP治疗组与ANP组相比较，肺组织MDA水平均较低，且在6h及12h组有统计学差异，SOD活力则均高于ANP组，且各时点均有统计学差异（P＜0.05）。6、同期胰腺、肺病理改变治疗组比ANP组明显减轻，且PaO2均明显高于ANP组。结论1、逆行性胆胰管注射牛磺胆酸钠诱导ANP并发ALI的大鼠模型是成功的，本模型操作方法简单，重复性好。本模型之ANP早期就合并急性肺损伤，表现为肺组织的炎症浸润并有功能障碍。2、牛磺胆酸钠诱导ANP发生后，可能通过活性胰酶的释放和中性粒细胞、单核巨噬细胞的激活，释放大量损害性炎性介质包括细胞因子如丁NF-α、IL-6等，通过炎症介质作用导致中性粒细胞等炎症细胞在肺部浸润、聚集活化，释放多种损伤因子如多种促炎细胞因子（TNF-α、HMGB1等）及氧自由基等有害物质直接作用于肺组织而致损伤。3、牛磺胆酸钠诱导ANP发生后，肺组织HMGB1表达增高较晚且持续时间长，因而可能成为ANPALI防治切实可行的潜在干预目标，能给ANPALI提供更广的治疗窗。4、丙酮酸乙酯具有抗氧化作用，且能明显抑制ANP肺损伤大鼠早期和晚期促炎细胞因子的释放和表达（TNF-α、IL-6、HMGB1），减轻肺组织病理损伤程度。与其他专门调控单一细胞因子的重组蛋白相比，丙酮酸乙酯在ANP肺损伤发病后有较长的“治疗窗”。丙酮酸乙酯对ANP肺损伤的防治具有良好应用前景。
二、实验性急性坏死性胰腺炎并发肺损伤大鼠血液、肺组织中氧自由基代谢变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、实验性急性坏死性胰腺炎并发肺损伤大鼠血液、肺组织中氧自由基代谢变化（论文提纲范文）
（1）磷脂酶A2及其相关中药活性研究进展（论文提纲范文）
| 1磷脂酶A2的亚家族 |
| 2磷脂酶A2的主要功能 |
| 3中药对磷脂酶的作用 |
| 3.1对分泌型PLA2(s PLA2)及其家族成员s PLA2-IIA的作用 |
| 3.2对胞液型PLA2(c PLA2)的作用 |
| 3.3对钙非依赖型PLA2(i PLA2)的作用 |
| 3.4对血小板活化因子乙酰水解酶型磷脂酶A2(PAF-AH)的作用 |
| 3.5对PLA2家族(未分型)总体活性的作用 |
| 4小结 |
（2）HO-1和中药大柴胡汤对重症急性胰腺炎大鼠胰腺和肺保护机制的研究（论文提纲范文）
| 第一部分 HO-1对重症急性胰腺炎大鼠胰腺和肺保护机制的研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大柴胡汤对重症急性胰腺炎大鼠胰腺和肺保护机制的研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的SCI论文目录 |
| 外文论文一 |
| 外文论文二 |
| 外文论文三 |
| 外文论文四 |
| 外文论文五 |
| 学位论文评阅及答辩情况 |
（3）大鼠重症急性胰腺炎继发性肝、肺损伤模型的建立及相关炎症因子研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠重症急性胰腺炎继发性肝损伤模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 术前准备及术后处理 |
| 2.3 手术建模方法和步骤 |
| 2.4 指标检测及取材方法 |
| 2.5 取材组织脱水流程 |
| 2.6 HE 染色步骤 |
| 2.7 胰腺病理学评分方法 |
| 2.8 肝组织病理学评分方法 |
| 2.9 统计学处理 |
| 2.10 技术路线图 |
| 结果 |
| 1 实验大鼠一般情况 |
| 1.1 对照组 |
| 1.2 假手术组 |
| 1.3 肝损伤模型组 |
| 2 各组大鼠血清淀粉酶检测值 |
| 3 各组大鼠血液中性粒细胞百分比值 |
| 4 各组大鼠血清 ALT 含量 |
| 5 各组大鼠血清 AST 含量 |
| 6 各组大鼠胰腺组织病理学分析 |
| 7 各组大鼠肝脏组织病理学分析 |
| 8 相关性分析 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第二部分 大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 术前准备及术后处理 |
| 2.3 手术建模方法和步骤 |
| 2.4 指标检测及取材方法 |
| 2.5 取材组织脱水流程 |
| 2.6 HE 染色步骤 |
| 2.7 BCA 法测定肺灌洗液超微量蛋白含量操作步骤 |
| 2.8 胰腺病理学评分方法 |
| 2.9 肺组织病理学评分方法 |
| 2.10 统计学处理 |
| 2.11 技术路线图 |
| 结果 |
| 1 实验大鼠一般情况 |
| 1.1 对照组 |
| 1.2 假手术组 |
| 1.3 SAP-LI 模型组 |
| 2 各组大鼠血清淀粉酶检测值 |
| 3 各组大鼠血液中性粒细胞百分比值 |
| 4 各组大鼠肺湿干质量比值 |
| 5 各组大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值 |
| 6 各组大鼠胰腺病理学分析 |
| 7 各组大鼠肺组织病理学分析 |
| 8 相关性分析 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 第三部分 大鼠重症急性胰腺炎相关性肺损伤肺组织中 HIF-1α、iNOS、NO、MDA、MPO 变化的研究 |
| 材料和方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 术前准备及术后处理 |
| 2.3 手术建模方法和步骤 |
| 2.4 指标检测及取材方法 |
| 2.5 取材组织脱水流程 |
| 2.6 HE 染色步骤 |
| 2.7 BCA 法测定肺灌洗液超微量蛋白含量操作步骤 |
| 2.8 10%肺组织匀浆的制备 |
| 2.9 BCA 法测定组织超微量蛋白含量操作步骤 |
| 2.10 一氧化氮试剂盒（硝酸还原酶法）操作步骤 |
| 2.11 组织髓过氧化物酶（MPO）测试操作步骤 |
| 2.12 组织匀浆丙二醛（MDA）测定步骤 |
| 2.13 HIF RNA 荧光定量 PCR 相对表达量的测定步骤 |
| 2.14 iNOS mRNA 荧光定量 PCR 相对表达量的测定步骤 |
| 2.15 β-action mRNA 荧光定量 PCR 相对表达量的测定步骤 |
| 2.16 肺组织病理学评分方法 |
| 2.17 统计学处理 |
| 结果 |
| 1 各组大鼠肺湿干质量比值 |
| 2 各组大鼠肺灌洗液蛋白与血清蛋白比值 |
| 2.1 各组大鼠肺组织病理学分析 |
| 2.2 各组大鼠肺组织 NO 含量 |
| 2.3 各组大鼠肺组织 MPO 活力 |
| 2.4 各组大鼠肺组织 MDA 含量 |
| 2.5 各组大鼠肺组织 HIF mRNA 相对表达量 |
| 2.6 各组大鼠肺组织 iNOS mRNA 相对表达量 |
| 2.7 相关性分析 |
| 2.8 技术路线图 |
| 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师评阅表 |
（4）安胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠NF-κBp65、INOS、COX-2、TNF-α、IL-1β表达影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 现代医学文献研究 |
| 1.1 SAP概述 |
| 1.2 SAP病因 |
| 1.3 SAP发病机制 |
| 1.4 SAP诊断 |
| 1.5 SAP非手术治疗进展 |
| 2 传统医学文献研究 |
| 2.1 中医对AP的大体认识 |
| 2.2 SAP中医辨证论治 |
| 2.3 中医对SAP的治疗 |
| 第二部分 动物实验 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 造模前处理 |
| 2.3 造模 |
| 2.4 标本采集 |
| 2.5 HE染色及病理切片制作 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 实验大鼠胰腺大体观察结果 |
| 3.2 胰腺组织病理结果 |
| 3.3 各组大鼠血清TNF-α、IL-1β检测结果 |
| 3.4 各组大鼠胰腺组织NF-κBp65mRNA检测结果 |
| 3.5 各组大鼠胰腺组织NF-κBp65、iNOS、COX-2表达结果 |
| 3.6 相关性分析 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 白介素10与SAP |
| 2 NF-κB/TNF-α-IL-1β信号通路与SAP |
| 2.1 NF-κB与SAP |
| 2.2 TNF-α、IL-1β与SAP |
| 2.3 NF-κB、TNF-α、IL-1β与SAP |
| 3 NF-κB/iNOS-COX-2信号通路与SAP |
| 4 SAP炎症通路与微循环通路的关系 |
| 4.1 TNF-α、IL-1β均可诱导iNOS的表达 |
| 4.2 TNF-α、IL-1β均可诱导C0X-2 的表达 |
| 4.3 NF-κB、TNF-α、IL-1β、iNOS、COX-2与SAP |
| 4.4 实验小结 |
| 第四部分 结语 |
| 1 结论 |
| 2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 重症急性胰腺炎微循环障碍中西医发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（5）重组人Elafin对实验性大鼠急性胰腺炎作用的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂的研究 |
| 第二节 重组人 Elafin 的制备及重组表达情况 |
| 第三节 急性胰腺炎病因及发病机制研究进展 |
| 第四节 急性胰腺炎合并肺损伤的发病机制研究进展 |
| 第五节 急性胰腺炎引发的全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭 |
| 第二章 重组人 Elafin 对实验性大鼠急性坏死性胰腺炎作用的研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 结论 |
| 第三章 重组人Elafin 对实验性大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤作用的研究 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读博士学位期间发表论文及其他成果 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 致谢 |
（6）急性胰腺炎合并肺损伤时炎性介质的作用（论文提纲范文）
| 0引言 |
| 1炎性介质 |
| 2其他 |
（7）Cycloxygenase-2在急性胰腺炎相关性肺损伤中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文对照 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 COX-2在AHNP大鼠肺组织中的表达及其与APALI的相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和材料 |
| 1.2 动物模型的建立 |
| 1.3 检测指标与方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 结果 |
| 2.1 各时相段存活情况 |
| 2.2 血清AMS的变化 |
| 2.3 病理形态学改变 |
| 2.4 AHNP大鼠肺组织WW/WD与MPO活性变化 |
| 2.5 肺组织COX-2mPNA表达 |
| 2.6 肺组织COX-2蛋白表达 |
| 2.7 COX-2表达与肺组织损伤程度的相关性 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 Celecoxib对重症急性胰腺炎及相关性肺损伤的保护作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.1 实验动物和材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 检测指标与方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 结果 |
| 2.1 Celecoxib预处理对AHNP大鼠生存率及生存质量的形响 |
| 2.2 腹腔积液性质和量的改变 |
| 2.3 胰腺、肺组织损伤的病理学改变 |
| 2.4 各组大鼠血清NO水平的动态变化 |
| 2.5 各组大鼠血清TNF-α的动态变化 |
| 2.6 各组大鼠血清内毒素水平的变化 |
| 2.7 各组大鼠肺组织水肿程度、MPO活性的变化与比较 |
| 2.8 肺组织MDA水平的改变 |
| 2.9 肺组织iNOS/NOS活力水平的改变 |
| 2.10 肺微血管通透性的变化 |
| 2.11 肺组织微血栓密度 |
| 2.12 Celecoxib对AHNP大鼠肺组织NF-κB、ICAM-1和COX-2蛋白表达的影响 |
| 2.13 Celecoxib对AHNP大鼠肺组织COX-2mRNA、iNOS mRNA、TNF-α mRNA和TFmRNA表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 Celecoxib对实验性SAP大鼠胰腺及相关性肺损伤具有显着的改善作用 |
| 2. Celecoxib改善APALI严重程度的途径与分子机制 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 急性胰腺炎相关性肺损伤的研究现状 |
| 1 导致APALI发生的主要因素 |
| 1.1 胰酶有APALI中的作用 |
| 1.2 细胞因子、趋化因子和炎症介质在APALI中的作用 |
| 1.3 细菌移位与肠源性内毒素的作用 |
| 2 炎症细胞在APALI发生中的主要作用 |
| 2.1 中性粒细胞 |
| 2.2 巨噬细胞活化 |
| 2.3 T淋巴细胞活化 |
| 3 APALI发生的分子机制 |
| 3.1 NF-κappaB信号途径 |
| 3.2 COX-2信号途径 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介及攻读博士学位期间发表的论文 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
（8）急性出血坏死性胰腺炎肺损伤发病机制及中药治疗的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词 |
| 前言 |
| 急性坏死性胰腺炎肺损伤机理研究 |
| 论文一. 磷脂酶A_2对大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的损伤作用研 |
| 论文二. 磷脂酶A_2与NF-κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤中的作用 |
| 中药对急性坏死性胰腺炎肺损伤的治疗机理研究 |
| 论文三. 清胰汤对急性出血坏死性胰腺炎肺损伤的治疗机理研究 |
| 论文四. 粉防己碱对急性出血坏死性胰腺炎肺损伤的治疗机理研究 |
| 论文五. 川芎嗪对急性出血坏死性胰腺炎肺损伤的治疗机理研究 |
| 文献综述: 急性胰腺炎肺损伤发病机制研究进展 |
| 附: 病理图片 |
| 致谢 |
（9）清胰汤调控DAMPs对SAP-ALI大鼠的治疗机制及对肠道微生态调整的初步探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、清胰汤调控DAMPs对 SAP-ALI大鼠肺组织器官损伤治疗机制的研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 动物分组以及模型的制备 |
| 1.1.5 标本采集及储存 |
| 1.1.6 实验方法 |
| 1.1.7 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 肺组织中苏木精-伊红(HE)病理损伤评分比较 |
| 1.2.2 肺组织中MPO、TNFα、IL-1和IL-6 的含量的比较 |
| 1.2.3 血浆中淀粉酶(AMY)和脂肪酶(LIP)水平的比较 |
| 1.2.4 血浆中mt DNA水平的比较 |
| 1.2.5 肺组织中FPR1 免疫组化染色(IHC)结果比较 |
| 1.2.6 肺组织中FPR1、FPR2 mRNA及蛋白表达比较 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、运用16srDNA测序技术初步探讨清胰汤调整SAP大鼠肠道微生态菌群结构的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 各组肠、胰腺组织的病理学评分 |
| 2.2.2 粪便中肠道菌群分析 |
| 2.2.3 肠道菌群结构分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 探讨清胰汤治疗SAP-ALI的机制研究现状 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠急性肺损伤保护作用的实验研究（论文提纲范文）
| 一、摘要 |
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 二、英文缩略语 |
| 三、论文 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 实验结果(附论文图片) |
| 讨论 |
| 结论 |
| 四、本研究创新性的自我评价 |
| 五、参考文献 |
| 六、附录 |
| 综述 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、实验性急性坏死性胰腺炎并发肺损伤大鼠血液、肺组织中氧自由基代谢变化（论文参考文献）
- [1]磷脂酶A2及其相关中药活性研究进展[J]. 闫寒,张畅斌,李沧海,姜廷良. 世界科学技术-中医药现代化, 2013(07)
- [2]HO-1和中药大柴胡汤对重症急性胰腺炎大鼠胰腺和肺保护机制的研究[D]. 范开亮. 山东大学, 2019(03)
- [3]大鼠重症急性胰腺炎继发性肝、肺损伤模型的建立及相关炎症因子研究[D]. 王皓. 石河子大学, 2013(04)
- [4]安胰颗粒对重症急性胰腺炎大鼠NF-κBp65、INOS、COX-2、TNF-α、IL-1β表达影响的实验研究[D]. 文玲. 广西中医药大学, 2020(02)
- [5]重组人Elafin对实验性大鼠急性胰腺炎作用的研究[D]. 张馨木. 吉林大学, 2007(03)
- [6]急性胰腺炎合并肺损伤时炎性介质的作用[J]. 张喜平,李志军. 世界华人消化杂志, 2006(19)
- [7]Cycloxygenase-2在急性胰腺炎相关性肺损伤中的作用及机制研究[D]. 周业江. 四川大学, 2006(03)
- [8]急性出血坏死性胰腺炎肺损伤发病机制及中药治疗的实验研究[D]. 刘洪斌. 天津医科大学, 2004(04)
- [9]清胰汤调控DAMPs对SAP-ALI大鼠的治疗机制及对肠道微生态调整的初步探讨[D]. 胡炜. 天津医科大学, 2019(02)
- [10]丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠急性肺损伤保护作用的实验研究[D]. 朱峰. 中国医科大学, 2007(05)