猪传染性水疱病结晶紫组织杀伤疫苗试验报告

一、猪传染性水泡病结晶紫组织灭能苗试验报告（论文文献综述）

成都兽医生物药品厂^[1]（1977）在《猪传染性水泡病结晶紫组织灭能苗试验报告》文中研究指明猪传染性水泡病是六十年代中期发现的一种猪病毒性传染病,对我国养猪事业的发展有较大的危害,还会直接影响我国活猪和猪肉出口的国际信誉。为了贯彻毛主席、党中央关于“以养猪为中心,全面发展畜牧业”和“预防为主”的方针,我们在上级单位的重视、支持,以及厂党委的领导下,开展了猪水泡病结晶紫组织灭能苗的研制工作,以期寻找一种制苗材料容易解决,适合于工厂化生产的安全有效的疫苗。现将试验研究情况汇报如下。

钟金栋^[2]（2007）在《猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究》文中研究指明猪水泡病（SVD）又名猪传染性水泡病，是由猪水泡病毒（SVDV）引起的一种烈性传染病，以口和蹄部产生水泡性损伤为特征，其临床症状与猪口蹄疫（FMD）极为相似，不容易区别，严重阻碍我国畜牧业和动物及其产品国际贸易的发展，引起严重的公共卫生问题，国际兽医局（OIE）将这疫病列为A类传染病。在国际贸易中，多数国家对SVD采取严格的检疫和控制措施已成为一种技术性贸易保护壁垒。猪水泡病和水泡性口炎（VSV）及口蹄疫临床症状相似，需要进行鉴别诊断，因此建立敏感性高、特异性强，快速、安全和可靠的诊断方法对于猪水泡病、水泡性口炎、口蹄疫的控制和出入境检验检疫至关重要。本研究应用基因克隆、基因表达等技术，对猪水泡病病毒外壳蛋白抗原（VP1）编码基因进行了克隆，构建于原核表达载体，高效表达目的蛋白，应用表达产物建立了酶联免疫吸附试验（ELISA），同时建立了猪水泡病RT-PCR、多重RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR核酸检测方法，并进行了相关病毒核酸的鉴别检测，其主要内容和结果为：1．以猪水泡病病毒核酸为模板，反转录聚合酶链式反应，扩增获得849bp的VP1基因，通过T-A克隆，将VP1基因片段克隆至pMD18-T克隆载体质粒中，构建SVDV VP1基因重组质粒，并进行核苷酸序列测定确定其基因的正确性。再将片断插入pBAD／Thio TOPO表达载体，经测序鉴定，筛选获得VP1基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆，成功构建了猪水泡病病毒VP1基因重组表达载体。经L-Arabinose诱导表达，可稳定、高效地表达VP1蛋白抗原。SDS-PAGE结果表明，以终浓度为0.002％的L—阿拉伯醛糖进行诱导，5h后表达可达到高峰，表达蛋白为融合蛋白，分子量为47.13kDa，表达产量约占菌体总蛋白的16％。Western blotting检测表明，诱导的蛋白能与猪水泡病阳性血清发生特异性反应。应用该重组抗原建立了检测猪水泡病的间接ELISA方法，以重组的猪水泡病病毒VP1蛋白为包被抗原，建立了以重组VP1蛋白为抗原检测SVDV抗体的酶联免疫吸附试验。2．根据基因库中的猪水泡病病毒高度保守的序列，设计了与SVDV互补的特异性引物，成功地建立了RT-PCR检测方法，扩增出251bp和366bp特异性条带，本试验能稳定、高效、快速地检测出猪水泡病病毒。通过检测FMDV、VSV、BHK21细胞等，对照的扩增结果均为阴性，证明该方法可特异性扩增目的基因。对SVDV RNA进行10倍系列稀释后检测，结果SVDV RNA在10-4稀释度时仍能检测到阳性，说明该方法具有较好的敏感性。3．应用RT-PCR技术，建立了多重PCR同时检测鉴别口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎病毒的方法。根据基因库中的口蹄疫病毒、猪水泡病病毒和水泡性口炎病毒各基因的序列，设计了与FMDV、SVDV、VSV互补的3对特异性引物，对样品中的cDNA模板进行了多重RT-PCR扩增及反应条件的优化，结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带，分别为189bp、125bp和300bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增，均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能同时特异、敏感、快速地鉴定FMDV、SVDV和VSV。4．建立了实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的方法。根据基因库中的SVDV高度保守的序列，设计合成引物和TaqMan探针，经各反应条件的优化，建立了实时荧光定量PCR技术。对SVDV进行了特异性、敏感性和重复性试验，结果表明，实时荧光TaqMan RT-PCR可检测到每个反应相当于1×102copies病毒RNA；与FMDV、VSV等其它水泡性病毒不发生交叉反应；制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽，相关系数为0.993；与常规的RT-PCR相比较，该方法具有快速、特异、敏感、重复性好、可同时检测大量样品等优点。可对样品中微量SVDV进行准确检测，是一种SVDV检测的良好方法。综上所述，本研究成功表达了猪水泡病病毒VP1基因，应用表达产物建立了酶联免疫吸附试验；并建立了猪水泡病RT-PCR、多重PCR、实时荧光定量RT-PCR核酸检测方法。该检测体系对于猪水泡病的预防和控制、出入境检验检疫以及社会公共安全显得至关重要，为我国猪水泡病的诊断和动物检疫提供了技术支撑。

程抱林^[3]（2007）在《猪瘟、口蹄疫疫苗同步免疫方法研究》文中研究表明猪瘟（Classical swine fever，CSF），是由猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）引起的一种高度接触传染的病毒性疾病。口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD），是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄兽的一种急性、烈性、高度接触性人畜共患传染病。猪瘟、口蹄疫都被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病，我国将这两种动物疫病列为一类动物疫病。至今尚无特效的治疗药物，疫苗预防仍是我国防治猪瘟、口蹄疫的主要手段，被列为强制免疫项目。但过去在进行猪瘟和口蹄疫强制免疫时，主要采用猪瘟和口蹄疫两种疫苗间隔7-10d分两次注射的不同步的免疫方法，防疫周期长、成本高，费时费工，防疫效果和防疫密度均得不到保证。本研究通过对猪瘟、口蹄疫疫苗同步免疫和分步免疫的免疫反应进行观测。结果发现，同步免疫有免疫不良反应的占23.3％，分步免疫有免疫不良反应的占21％，差异不显着。猪瘟、口蹄疫同步免疫时，在免疫后10d、20d、30d、40d、50d、60d对二病的平均抗体合格率分别为38％、78％、85％、45％、32％、25％；猪瘟、口蹄疫分步免疫时，在免疫后10d、20d、30d、40d、50d、60d对二病的平均抗体合格率分别为38％、80％、84％、41％、30％、23％，两种免疫方法免疫效果基本一致，有效保护时间均在30d左右。结果表明猪瘟、口蹄疫疫苗联合免疫无明显相互干扰作用。猪瘟、口蹄疫疫苗同步免疫后30d加强免疫一次，结果表明：首免后30d、60d、90d、120d、150d的平均抗体合格率分别为81％、86％、81％、69％、47％，二免后抗体维持时间长，有效保护时间至少在90d以上。二免对首免有加强作用，猪瘟、口蹄疫疫苗两次同步免疫比一次同步免疫效果好。对于同步免疫和加强免疫，不同免疫剂量的免疫效果表明：在进行猪瘟、口蹄疫疫苗同步免疫时，猪瘟疫苗首免2头份和二免2头份、口蹄疫疫苗首免1头份和二免1头份，免疫效果最好。本试验对猪瘟、口蹄疫疫苗同步免疫的免疫不良反应、免疫效果、加强免疫、免疫剂量进行了研究，为今后进一步开展猪瘟、口蹄疫疫苗与其他疫苗联合免疫研究奠定了基础。

二、猪传染性水泡病结晶紫组织灭能苗试验报告（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、猪传染性水泡病结晶紫组织灭能苗试验报告（论文提纲范文）

（2）猪水泡病毒VP1基因克隆、表达及其检测技术的研究（论文提纲范文）

摘要

ABSTRACT

第一章猪水泡病研究进展

1.1 SVDV病原学

1.1.1 病毒分类与特性

1.1.2 基因组结构

1.1.3 病毒蛋白质的结构和功能

1.1.4 SVDV的抗原结构

1.2 SVDV流行病学

1.2.1 流行与危害

1.2.2 病毒的繁殖与复制

1.2.3 SVDV的传播

1.3 SVDV诊断技术及其研究进展

1.3.1 动物试验

1.3.2 血清抗体检测方法

1.3.3 核酸诊断

1.4 SVD的控制和预防

1.5 本论文的研究目的和研究策略

第二章猪水泡病病毒VP1基因的克隆和表达

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.2.1 主要材料及试剂

2.2.2 主要试剂配制

2.2.3 引物设计

2.2.4 技术路线

2.2.5 病毒基因组RNA的提取

2.2.6 cDNA的反转录

2.2.7 SVDV-VP1基因的PCR扩增

2.2.8 PCR产物的小量胶回收

2.2.9 感受态细胞的制备

2.2.10 克隆及表达载体的构建

2.2.11 重组表达质粒在TOPO10E.coli细胞中的诱导表达

2.2.12 SDS-PAGE分析表达蛋白

2.2.13 表达产物的Western blotting检测

2.2.14 重组蛋白的小批量生产和纯化

2.3 试验结果

2.3.1 目的片段的克隆与鉴定

2.3.2 SVDV VP1基因的亚克隆及重组表达质粒的构建

2.3.3 SVDV核蛋白表达重组质粒的序列分析

2.3.4 表达产物的SDS-PAGE分析

2.3.5 表达产物的Western blotting检测

2.3.6 重组基因表达产物的纯化

2.4 讨论

2.4.1 VP1基因的选择

2.4.2 基因表达系统的选择

2.4.3 VP1基因表达

2.4.4 表达产物的纯化

第三章猪水泡病检测技术的建立

3.1 引言

3.2 材料和方法

3.2.1 病毒株、细胞和主要试剂

3.2.2 仪器设备

3.2.3 试剂配制

3.2.4 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立

3.2.5 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究

3.2.6 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究

3.2.7 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体的间接ELISA方法的研究

3.3 结果

3.3.1 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立

3.3.2 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究

3.3.3 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究

3.3.4 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体的间接ELISA方法的研究

3.4 讨论

3.4.1 猪水泡病病毒RT-PCR检测方法的建立

3.4.2 多重PCR检测口蹄疫、猪水泡病和水泡性口炎的研究

3.4.3 实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测猪水泡病病毒的研究

3.4.4 应用重组抗原建立检测猪水泡病抗体间接ELISA方法的研究

第四章结论

参考文献

致谢

作者简介

（3）猪瘟、口蹄疫疫苗同步免疫方法研究（论文提纲范文）

摘要

ABSTRACT

缩略词(ABBREVIATION)

1 文献综述

1.1 猪瘟

1.1.1 猪瘟概述

1.1.2 猪瘟病原

1.1.3 流行病学

1.1.4 临床症状

1.1.5 病理变化

1.1.6 诊断

1.1.7 防制

1.2 猪瘟免疫

1.2.1 猪瘟流行新特点

1.2.2 猪瘟疫苗研究进展

1.2.3 猪瘟一般免疫程序

1.2.4 猪瘟免疫效果研究

1.3 口蹄疫

1.3.1 口蹄疫概述

1.3.2 口蹄疫病原

1.3.3 流行病学

1.3.4 临床症状

1.3.5 病理变化

1.3.6 诊断

1.3.7 防制

1.4 口蹄疫免疫

1.4.1 口蹄疫流行情况

1.4.2 口蹄疫疫苗研究进展

1.4.3 猪口蹄疫一般免疫程序

1.4.4 猪口蹄疫免疫效果研究

1.5 疫苗的同步免疫

2 研究的背景与意义

3 材料与方法

3.1 材料

3.1.1 试验动物

3.1.2 试验疫苗

3.1.3 试验试剂

3.1.4 试验用品

3.2 方法

3.2.1 疫苗接种和血清采集

3.2.2 免疫反应观测

3.2.3 抗体测定

3.2.4 结果分析

4 结果与分析

4.1 同步免疫和分步免疫不良反应观察

4.2 同步免疫与分步免疫免疫效果

4.3 同步免疫与同步免疫后30d加强免疫免疫效果

4.4 同步免疫和加强免疫时不同免疫剂量的免疫效果

5 讨论

5.1 同步免疫与分步免疫发生不良反应分析

5.2 同步免疫与分步免疫免疫效果分析

5.3 同步免疫后加强免疫免疫效果分析

5.4 同步免疫不同免疫剂量免疫效果分析

5.5 不足分析

5.6 建议

6 结论