一、木瓜粉对体外缺氧损伤神经细胞抗氧化能力及凋亡的影响（论文文献综述）
刘玥欣[1]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究》文中研究指明目的:本研究基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽（Velvet antler peptide,VAP）对神经元修复及保护作用,阐释VAP改善轻度认知功能障碍（Mild Cognitive Impairment,MCI）作用机制,为临床鹿茸防治MCI提供依据。方法:本研究利用体内、体外实验,探讨VAP通过调控PI3K/AKT信号通路改善MCI作用机制。1 VAP鉴定及检测利用双缩脲法鉴定VAP理化性质;利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验（SDSPolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定VAP分子量;利用柱前衍生化-高效液相色谱法（Precolumn derivatization-High performance liquid chromatography,PD-HPLC）测定VAP不同成分含量。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制利用TCMID数据库、Pubchem数据库筛选鹿茸活性成分及靶点;利用OMIM数据库、Disgenet数据库、Genecards数据库筛选MCI作用靶点;利用Venny 2.1在线作图工具平台筛选鹿茸-MCI作用靶点;利用STRING 11.0蛋白质互作平台构建蛋白-蛋白相互作用（Protein-protein interaction,PPI）网络,利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件,基于拓扑分析、聚类分析筛选PPI网络核心靶点;利用Cytoscape 3.8.0网络拓扑属性分析软件构建“中药-成分-靶点-疾病”网络模型,分析核心成分;利用R语言及Bioconductor生物信息软件,进行基因本体论（Gene ontology,GO）富集分析以及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）富集分析,对共同靶点所涉及的生物学过程、主要代谢通路等进行归纳。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制采用腹腔注射东莨菪碱法、单侧颈总动脉结扎法分别诱导不同MCI大鼠模型。利用旷场实验、Morris水迷宫实验观察VAP对不同MCI模型大鼠行为学变化的影响;利用苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察VAP对不同MCI模型大鼠海马区病理学变化的影响;利用ELISA检测VAP对不同MCI模型大鼠血清中SOD、MDA、脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、睾酮（Testosterone,T）、皮质醇（Cortisol）含量变化的影响;利用Western Blot检测VAP对不同MCI模型大鼠海马区PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制利用超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间二级质谱联用（UPLC-Q/TOF-MS）代谢组学技术对由腹腔注射东莨菪碱法复制的MCI模型大鼠脑组织、肾脏进行检测,分析各组间差异代谢物、代谢通路动态变化情况。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制利用OA诱导HT22细胞损伤建立模型,给药后,利用CCK-8法检测HT22细胞活性,WST-1法、可分光光度法检测HT22细胞中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）活力或含量变化的影响,Western Blot检测HT22细胞中PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果:1 VAP鉴定及检测实验中选用的VAP理化性质为蛋白质,分子量约为3.2k Da,由17种氨基酸组成,其中必须氨基酸共有7种,含量为393.39±1.65g/kg,氨基酸总含量为826.55±10.75g/kg,不同成分含量稳定,可用于本实验研究。2基于网络药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制鹿茸中多数活性成分为VAP中的重要构建物质,利用交互网络发现鹿茸活性成分可能通过PI3K/AKT信号通路发挥改善MCI作用,作用机制可能与调控体内神经信号转导、神经元损伤、氧化应激过程、性激素类作用等途径相关,为本研究探讨VAP对MCI的改善作用提供方法与思路。3基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP能够提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,改善海马区固缩现象,增加不同MCI模型大鼠血清中SOD、BDNF、NGF、VEGF、T、Cortisol含量（P<0.05或P<0.01）,减少MDA含量（P<0.05或P<0.01）,升高Bcl-2、m TOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.05或P<0.01）。4基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。5基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由冈田酸（Okadaic acid,OA）诱导的受损HT22细胞的作用机制VAP能够提高受损HT22细胞存活率（P<0.01）,增强受损HT22细胞中SOD、GSH-PX活力（P<0.01）,减少MDA含量（P<0.01）,降低Bad、Bax、Caspase-3蛋白表达水平（P<0.01）,上调PI3K/AKT信号通路的表达（P<0.01）。结论:VAP可能通过“填精补髓”作用调控PI3K/AKT信号通路,拮抗由OA诱导的受损HT22细胞,并提高不同MCI模型大鼠学习、记忆能力,调节肾脏功能、促进神经元细胞生长、增殖与分化,保护中枢神经系统,作用机制可能与调控脑内叶酸及脂质代谢、环磷酸腺苷能量循环、氨基酸生物合成,以及肾脏中性激素分泌等多种途径相关。
高强[2]（2021）在《星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究》文中研究指明急性缺血性脑卒中（Acute Ischemic Stroke,AIS）,即急性脑梗死,中医称缺血性中风,是脑组织因局部的血流循环障碍缺血、缺氧而发生的软化、坏死。目前溶栓是治疗缺血性卒中急性期最快、最有效的方法,但由于适应证严格、时间窗短、出血和再灌注损伤风险高,其临床效果受到限制。基础与临床研究证实,中医药治疗中风独具优势。中医认为痰热腑实证是缺血性中风急性期最为常见的证型,而化痰通腑法代表方星蒌承气汤是治疗中风急性期痰热腑实证的代表性方剂。星蒌承气汤“脑病治肠”、“上病治下”的中医理论与现代医学提出的“菌-肠-脑轴”具有异曲同工之妙。诸多临床试验及系统性综述已证实星蒌承气汤治疗缺血性卒中的确切临床疗效与神经保护作用,但是其效应机制研究尚且不足。因此本文基于网络药理学及肠道微生态理论,深入探讨缺血性中风的肠道微生态机制及化痰通腑法代表方星蒌承气汤治疗中风痰热腑实证的效应机理。目的:基于中医“上病治下”理论与现代医学“菌-肠-脑轴”理论,（1）通过中药网络药理学与分子对接技术全面探讨星蒌承气汤治疗缺血性卒中的多组分、多靶点、多通路机制;（2）明确具有“化痰通腑”作用的星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型的神经保护作用,并验证网络药理学研究的关键靶点与通路;（3）探讨星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠模型肠道菌群的影响,探讨其治疗中风痰热腑实证“通腑”与“通便”差异的肠道微生态机制;（4）观察星蒌承气汤对伪无菌小鼠急性缺血性中风模型菌-肠-脑轴的影响,验证星蒌承气汤通过直接影响肠道菌群而改善脑卒中预后的假说。方法:（1）借助TCMSP、BATMAN-TCM、ETCM及TCMID等数据库收集星蒌承气汤活性成分及作用靶点,并应用STITCH等对未找到靶点的化合物进行靶点预测。通过6个数据库挖掘缺血性卒中的靶点。通过GO和KEGG富集对交集靶点进行高级功能分析,并用cytoscape3.6.0构建PPI、化合物-靶点及药物-靶点-通路网络。最后进行分子对接验证。（2）雄性C57BL/6小鼠随机分为:假手术（Sham）组、模型（MCAO）组、星蒌承气汤（XCD）组、尼莫地平（Nim）组及舒泰清（PGE）组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用神经功能评分、除胶实验、TTC和TUNNEL染色,综合评价星蒌承气汤的神经保护作用,并运用ELISA、W estern blot等技术验证网药关键靶点与通路;（3）雄性C57BL/6小鼠随机分为:Sham组、MCAO组、XCD组、Nim组与PG E组,通过制备高脂低纤维饮食复合线栓法的小鼠急性缺血性中风痰热腑实证模型,采用高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术分别对肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）及其受体GPR43、神经-内分泌-免疫途径相关指标（NE及TH、血清MTL、脑IBA-1及GFAP、血清炎症因子）进行分析;（4）雄性C57BL/6小鼠在术前14天服用多种抗生素剔除肠道菌群后,随机分为:伪无菌假手术（ABX-Sham）组、伪无菌模型（ABX-MCAO）组以及伪无菌中药（ABX-XCD）组,通过神经功能评分、除胶实验、TTC染色以及高通量16srDNA基因测序、代谢组学技术、免疫组化、免疫荧光、ELISA及流式多因子技术,观察中药对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴相关指标的影响。结果:（1）网络药理学及分子对接结果表明,星蒌承气汤包含51个活性成分及44个治疗缺血性卒中的交集靶点。高级功能分析显示星蒌承气汤抗缺血性卒中的机制与脂多糖介导的信号通路、凋亡过程的调控、炎症反应、内皮屏障的建立以及对脂肪酸的反应有关。星蒌承气汤发挥作用的有10条关键KEGG信号通路。PPI网络分析得到AKT 1,PTGS2,TNF,TP53,CASP3,IL1B等关键靶点。分子对接验证了星蒌承气汤活性成分与关键靶点具有良好的对接能力。（2）星蒌承气汤神经保护作用及对网络药理学关键靶点及通路的影响:①神经功能评分:与MCAO组相比,XCD组及Nim组术后48h及72h Longa评分降低（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。②除胶实验:XCD组和Nim组术后48和72h的接触和去除胶带时间缩短（P<0.05）,PGE组未见变化（P>0.05）。③TTC染色:XCD组梗死面积下降（P<0.05）,Nim组及PGE组未见变化。④TUNNEL:MCAO组梗死区细胞凋亡明显增加,XCD组和Nim组TUNEL阳性染色减少（P<0.05）。⑤网络药理学验证:XCD组及Nim组TNF-α含量具有下降趋势（P>0.05）;XCD组p-AKT、PI3K及NF-κB蛋白表达具有升高趋势。AKT蛋白表达组间未见明显变化（P>0.05）。（3）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响:①肠道菌群:与MCAO组相比,XCD组α多样性有升高趋势,Nim组及PGE组无显着变化。β多样性显示MCAO组与Sham组PCoA曲线有显着差异（P<0.05）。MCAO组拟杆与变形杆菌门显着增加,厚壁菌门显着减少;XCD组拟杆菌比例显着降低,疣微菌门显着增加,Nim组变形菌门显着增加,厚壁菌门进一步降低,PGE组菌群组成与MCAO相似,变形杆菌略降低。此外,XCD组Akkermansia比率增加,Nim组Klebsiella增加最为显着,而 PGE 组 Parabacteroides 和Escherichia/Shigella增加较为显着。②SCFAs 及GPR43:MCAO组的SCFAs含量显着降低（P<0.05）,XCD组丁酸含量增加（P<0.05）。XCD组及Nim组GPR43表达显着降低（P<0.05）。③自主神经途径:XCD组NE有下降趋势,PGE组NE有上升趋势（P>0.05）。MCAO组及PGE组TH蛋白表达上升（P<0.05）,XCD组及Nim组TH表达未见显着变化趋势（P>0.05）。④神经内分泌途径:MCAO组MTL显着升高（P<0.05）,PGE组有升高趋势（P>0.05）,XCD组及Nim组MTL显着下降（P<0.05）。⑤免疫途径:MCAO组星形胶质细胞增生、肥大,显着活化,小胶质细胞迅速从“静息态”转变为“激活态”,从梗死周边区域向病变部位募集,而XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较MCAO组降低。MCAO 组 TNF-α、IL-17A、IL-22 升高（P<0.05）,而 XCD 和 Nim 组的 IL-10显着升高（P<0.05）,TNF-α、IL-17A 和 IL-22 降低。（4）星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响:①神经保护作用:与ABX-MCAO组相比,ABX-XCD组在Longa评分、除胶实验及TTC染色等方面未见显着变化（P>0.05）。②肠道菌群:ABX-MCAO和ABX-XCD组的α多样性低于ABX-Sham,PCoA分析显示ABX-XCD组肠道菌群的β多样性和组成与AB X-MCAO组相似。相对丰度结果显示,在ABX组中,小鼠的微生物区系均以变形杆菌为特征,这与正常小鼠有显着差异。LEfSe分析显示MCAO组富集了更多的病原体或机会性病原体,包括Bacteroidetes,EscherichiaShigella与Helicobacter,而 XCD富集了Verrucomicrobia和Akkermansia等有益菌群。条件致病菌如Streptococcus,Lact ococcus,Morganella,Klebsiella,Proteobacteria,Enterobacteriaceae 等在 ABX-XCD组富集显着增多。PGE组富集菌群主要有oSelenomonadales、cNegativicutes、gRomboutsia及fPeptostreptococcaceae。③SCFAs 及 GPR43:ABX-XCD 的丙酸显着下降（P<0.05）。ABX-MCAO 组 GPR43 表达显着上调（P<0.05）,ABX-XCD 组 G PR43表达显着降低（P<0.05）。④自主神经途径:ABX-XCD组NE含量未见显着变化（P>0.05）,TH蛋白表达未见显着变化（P>0.05）。⑤神经内分泌途径:ABX-MCAO组MTL升高趋势（P>0.05）,ABX-XCD组MTL未见显着变化（P>0.05）。⑥免疫途径:ABX-XCD组IL-22显着升高（P<0.05）,IL-17A有降低趋势（P>0.05）,余未见显着变化趋势（P>0.05）。ABX-MCAO组星形胶质细胞表达显着升高,小胶质细胞显着活化,ABX-XCD组星形胶质细胞及小胶质细胞活化较ABX-MCAO组有降低趋势。结论:星蒌承气汤对急性缺血性中风痰热腑实证小鼠具有一定神经保护作用,其效应机制具有多成分、多靶点、多通路特点。其对伪无菌小鼠中风模型则未发现确切的脑保护效应,说明其脑保护的部分机制是通过改善肠道微生态实现的。其具体机制包括提高肠道短链脂肪酸,尤其是丁酸含量,增强肠道短链脂肪酸受体GPR43表达,增加血液IL10、减少TNF-α等炎性因子及MTL水平,最终减少梗死区域胶质细胞活化和神经细胞凋亡,从而达到中风脑保护的作用。本研究成果对中风病的临床治疗具有重要的指导意义——对于中风后便秘患者,仅仅“通便”治疗是不够的,需要结合患者的证候特点进行中医药“化痰通腑”治疗,才能取得好的临床效果。
陈逸伦[3]（2021）在《壳寡糖对新生大鼠酒精性神经损伤的缓解作用研究》文中认为大脑发育期的酒精暴露可以引起一系列中枢神经发育损伤,可能会导致胎儿酒精谱系综合症（Fetal alcohol spectrum disorder,FASD）。酒精暴露对发育中的中枢神经系统造成多种影响包括影响脑容量,损害海马,皮层和小脑等大脑区域的发育,引起脑部氧化应激损伤和炎症反应,引起脑部神经细胞广泛的非正常死亡,并对认知和学习记忆能力产生重要影响。壳寡糖（Chitooligosaccharide,COS）为天然碱性氨基寡糖,由于其良好的水溶性、易降解和极其微小的细胞毒性受到广泛关注。COS具有多种生理活性,如抗氧化、抗炎、免疫调节以及神经保护活性等。COS具有良好的血脑屏障穿透能力,能够直接到达大脑发挥其神经保护作用。本论文探究COS对酒精诱导的新生大鼠神经损伤的缓解作用,为进一步开发利用壳寡糖的神经保护活性提供理论依据。本论文的主要研究内容与结果如下:（1）通过对新生SD大鼠在出生后第5-9天连续进行酒精灌胃处理,建立胎儿酒精谱系综合症模型,酒精造模前分别进行COS干预和二十二碳六烯酸干预,在出生后第21-26天进行行为学实验。通过测定饲养过程中新生大鼠体重、脑重、行为学实验数据,并对新生大鼠脑组织进行病理组织学检查,分析新生大鼠体重增长情况,大脑发育和形态变化以及学习记忆能力状况。结果表明:COS可以缓解酒精暴露导致的新生大鼠体重增长滞缓、减轻酒精对新生大鼠大脑发育造成的损伤;改善酒精暴露导致的新生大鼠大海马区和皮质区神经细胞凋亡与变形;显着降低新生大鼠在Morris水迷宫中逃避潜伏期,提高目标象限停留时间,增加穿越目标平台的次数,改善酒精暴露导致的新生大鼠学习记忆和认知障碍。（2）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS对酒精暴露导致的大脑中脑神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor,BDNF）和神经递质异常的干预作用。通过测定大鼠脑组织中BDNF、乙酰胆碱（Acetycholine,A-Ch）、乙酰胆碱酯酶（Acetylcholin esterase,A-ch E）水平的变化,分析新生大鼠的中枢神经系统发育环境和神经递质代谢情况。结果表明:COS可以缓解酒精暴露导致的BDNF含量降低,抑制酒精暴露所导致的新生大鼠脑组织中神经递质A-Ch的降低以及A-ch E提高,维持神经信号的正常传递。（3）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS对酒精暴露诱导大脑氧化应激损伤的干预作用。通过测定脑组织中谷胱甘肽（Glutathione,GSH）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）水平和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）活力、过氧化氢酶（Catalase,CAT）活力以及总抗氧化能力（Total antioxidant capacity,T-AOC）活力、核因子E2相关因子（NF-E2-related factor 2,Nrf2）蛋白表达和P53、氨基末端激酶（Jun N-terminal kinases,JNK）m RNA表达来观察新生大鼠的脑组织氧化损伤情况。结果表明:COS干预可以提高新生大鼠脑组织中GSH水平,降低MDA含量,提高的SOD、CAT、T-AOC活力,抑制P53,JNK在m RNA水平上的表达,显着提高Nrf2的蛋白表达,缓解酒精暴露导致的新生大鼠脑组织中的氧化损伤。以上研究说明COS可能通过抑制P53和JNK的表达和提高Nrf2的表达来抑制酒精暴露所导致的氧化应激,进而缓解发育中新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡。（4）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS对酒精暴露诱导的炎症损伤的干预作用及机制。通过测定COS干预后新生大鼠脑组织中炎症因子水平的变化,测定炎症介质的表达,探究壳寡糖对酒精诱导造成新生大鼠脑组织炎症损伤的调节作用。结果表明:COS可以降低脑组织中白介素6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）水平,提高IL-10水平;此外,COS可以通过下调IL-1β、IL-4、IL-5、环氧合酶（Cyclooxygenase,COX-2）和诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase,i NOS）m RNA表达,从而缓解酒精暴露诱导的新生大鼠脑组织炎症损伤。（5）在新生大鼠胎儿酒精谱系综合症模型中研究了COS通过影响固有的酒精诱导神经细胞凋亡通路的激活来抑制神经细胞凋亡。结果表明,COS可有效抑制酒精暴露引起的γ-氨基丁酸受体（Gamma-aminobutyric acid receptor,GABAR）激活表达,提高N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-Methyl-D-Aspartate receptor,NMDAR）的表达。此外,COS干预显着抑制了Cleaved Caspase-3和Caspase-3的表达,抑制了Bax表达的激活和Bcl/2的下调。因此,本研究结果表明COS能够通过调节GABAR、NMDAR和Bcl/2-Bax-Caspase-3信号通路来缓解酒精暴露所导致的新生大鼠脑神经细胞凋亡,缓解新生大鼠的学习记忆与认知障碍。
周东蕊[4]（2021）在《血塞通对MCAO大鼠和OGD/R损伤SH-SY5Y细胞LINGO-1，EGFR，PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的研究》文中研究表明研究目的:1.观察血塞通注射液对大鼠大脑中脉闭塞（MCAO）28天神经功能的影响,探究血塞通对损伤皮层LINGO-1,EGFR,PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的调节作用。2.观察血塞通注射液对体外培养SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注（OGD/R）损伤的保护作用,验证血塞通注射液对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的调节作用。研究方法:1.采用改良的Longa法对SD大鼠进行MCAO模型的制备,假手术组大鼠只进行皮肤切开以及钝性分离血管和神经,不插入栓线。大鼠MCAO模型的成功建立评价方法选用TTC染色法。2.根据术后Longa评分将手术组大鼠随机分为模型组,血塞通小剂量组,血塞通大剂量组和尼莫地平组（即阳性药物组）。假手术组和模型组注射同等剂量的生理盐水,其余组别给与相对应的药物治疗。术后1-28天,每日清晨给药前对大鼠进行称重,根据mNSS神经功能评分表进行评分。评价血塞通对大鼠MCAO术后不同时间点（7天,14天和28天）神经功能和体重恢复的疗效。MCAO术后28天,将所有大鼠麻醉后断头取脑,采用HE染色观察大鼠大脑皮层的病理变化,采用Western blot法检测皮层梗死侧的SYN和PSD-95的蛋白表达变化,探索血塞通注射液对皮层梗死区的神经保护作用。采用qRT-PCR、免疫组织化学（IHC）和Western Blot检测MCAO术后28天大鼠大脑皮层LINGO-1,EGFR以及PI3K/AKT的mRNA和蛋白表达,探索血塞通的神经保护机制。3.采用qRT-PCR和Western Blot检测MCAO术后28天大鼠大脑皮层PTEN和GSK-3β的mRNA和蛋白表达,进一步探索血塞通的神经保护机制。4.体外培养SH-SY5Y细胞,CCK-8法确定最佳缺氧时间,建立OGD/R损伤SH-SY5Y细胞模型,CCK-8法确定血塞通和bpV的最适药物浓度。将SH-SY5Y细胞随机分为正常组,模型组,血塞通组,bpV组以及血塞通+bpV组等5个组别,按照不同组别给与相对应的药物,正常组给与无血清的EBSS液,模型组给与无糖的Earle’s液。镜下观察血塞通对OGD/R损伤SHSY-5Y细胞生长状态的影响。采用qRT-PCR和Western Blot检测OGD/R损伤SH-SY5Y细胞的PI3K/AKT以及PTEN和GSK-3β的mRNA和蛋白表达对体内实验进一步验证,观察当使用bpV时,PTEN及其下游的PI3K/AKT通路、GSK-3β mRNA和蛋白的表达情况。研究结果:1.TTC染色显示:假手术组大鼠右脑为均一的红色,表明脑组织并未损伤;手术组大鼠由于大脑右侧被梗塞而出现广泛的白色,表明MCAO可诱导大鼠右侧脑组织梗死。研究结果证明大鼠MCAO模型成功建立。2.各组大鼠的体重在造模前未见显着的差异（P>0.05）;在MCAO术后第7天和第14天,各组大鼠体重均明显低于假手术组（P<0.05或者P<0.01）;术后第28天,除模型组外,各药物治疗组大鼠的体重与假手术组没有明显差异（P>0.05）。术后第14天的假手术组大鼠的体重高于第7天假手术组的体重,余组别两个时间点比较未见明显差异（P>0.05）;而第28天各组大鼠的体重均显着高于第14天相同组别的大鼠（P<0.01）。手术组各组大鼠苏醒后EZ-Longa评分组间未见明显差异（P>0.05）。在第7天的mNSS评分中,血塞通大剂量组明显低于模型组（P<0.05）。药物治疗后14天,血塞通治疗组（包括小剂量和大剂量）和尼莫地平组大鼠的mNSS评分与模型组相比显着降低（P<0.05）。而药物治疗后28天,血塞通治疗组大鼠的mNSS评分与模型组相比明显降低（P<0.05或P<0.01）;血塞通大剂量组在降低大鼠的mNSS评分方面显着优于血塞通小剂量组和尼莫地平组（P<0.05）。这说明血塞通治疗可长期缓解MCAO大鼠的神经功能障碍,且具有剂量依赖性。MCAO术后相同组别的mNSS评分在不同时间点的比较显示:第7天和第14天同一组别的mNSS评分无显着差异（P>0.05）;除尼莫地平组外,第28天的mNSS评分显着高于同一组别第14天的mNSS评分（P<0.05）。MCAO术后28天,HE染色结果显示:假手术组大鼠的脑组织形态和细胞结构完整。模型组大鼠脑组织呈大面积损伤,组织着色较浅,神经细胞坏死、核固缩、深染;治疗组大鼠的脑组织也出现一定的损伤,但是和模型组相比,损伤程度较轻,神经细胞的数量也多;与血塞通小剂量组和尼莫地平组相比,血塞通大剂量组的脑组织结构更完整,神经细胞数量亦明显增多。MCAO术后28天,与模型组相比较,各治疗大鼠的PSD-95蛋白表达显着升高（P<0.01）;对各治疗进行比较发现,血塞通大剂量组在提高PSD-95表达方面显着优于血塞通小剂量组和尼莫地平组（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比,血塞通大剂量组和尼莫地平组可显着提高大鼠大脑皮层SYN蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）;与血塞通小剂量组相比,血塞通大剂量组在提高SYN蛋白表达方面具有显着的优势（P<0.05）。MCAO术后28天,qRT-PCR结果显示:各组LINGO-1,EGFR,PI3K以及AKT mRNA表达无显着变化（P>0.05）。IHC结果显示:LINGO-1的阳性颜色为深棕色,假手术组大鼠脑组织LINGO-1的阳性表达较少;各治疗组大鼠脑组织LINGO-1的阳性表达显着低于模型组的阳性表达（P<0.01）;而对各治疗组之间皮层LINGO-1的阳性表达进行比较发现,组间未见显着差异（P>0.05）。各组大鼠脑组织P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT的阳性颜色均为深棕色,假手术组大鼠脑组织P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT呈低表达;各治疗组大鼠大脑皮层P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT的表达显着高于模型组（P<0.01）;对各治疗组之间的P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT的表达进行比较发现,组间未见显着差异（P>0.05）。Western blotting结果显示:各治疗组大鼠的Lingo-1蛋白的相对表达相较于模型组显着下降（P<0.01）,接近正常水平;而各治疗组之间进行比较,Lingo-1的表达未见明显差异（P>0.05）。各治疗组的P-EGFR,P-PI3K以及P-AKT高于模型组（有趋势,或P<0.05,或P<0.01）;治疗组之间比较无明显差异（P>0.05）。3.MCAO术后28天,qRT-PCR结果显示:除血塞通大剂量组的大鼠脑组织的PTEN mRNA表达明显高于假手术组的mRNA（P<0.05）,其余各组大鼠脑组织的PTEN mRNA表达组间比较未见显着差异（P>0.05）;各组大鼠脑组织的GSK-3β mRNA表达组间亦未见显着差异（P>0.05）。Western blotting结果显示:与模型组相比,各治疗组的P-PTEN和P-GSK3β相对蛋白表达水平显着升高（P<0.05或P<0.01）;而各治疗组之间的P-PTEN和P-GSK3β相对蛋白水平无明显差异（P>0.05）。4.CCK-8法检测SH-SY5Y细胞的最佳缺氧时间为7 h;血塞通和bpV对OGD/R损伤的SH-SY5Y细胞的最适药物浓度分别为20μg/ml和1μmol/L。通过镜下观察血塞通,bpV以及血塞通+bpV对OGD 7 h/R 24 h培养的SH-SY5Y细胞生长状态的影响发现,血塞通组、bpV组以及血塞通+bpV组的贴壁细胞数量较模型组多,大部分细胞呈多边形或梭形,部分细胞突触缩短,但大部分细胞突触仍存在,各治疗组之间的细胞形态未见明显的差异。SH-SY5Y细胞OGD 7h/R24 h培养后,qRT-PCR结果显示:正常组,模型组,血塞通组,bpV组以及血塞通+bpV组细胞的PI3K,AKT,PTEN和GSK-3β mRNA的水平未见显着差异（P>0.05）。Western blotting检测结果显示,与模型组相比,各治疗组大鼠大脑皮层的 P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT,P-PTEN/PTEN 以及 P-GSK-3β/GSK-3β蛋白水平显着升高（P<0.05,或P<0.01）;各治疗组之间的P-PI3K/PI3K,P-AKT/AKT,P-PTEN/PTEN以及P-GSK-3β/GSK-3β蛋白水平比较未见明显差异（P>0.05）。研究结论:1.血塞通可以长期缓解MCAO大鼠的脑组织损伤并促进神经重塑和再生从而增加MCAO术后大鼠的体重,改善MCAO大鼠的神经功能。2.血塞通发挥的神经保护作用机制包括抑制LINGO-1表达,激活EGFR和PI3K/AKT信号通路,抑制PTEN的表达进一步激活PI3K/AKT通路,从而抑制下游GSK-3β的活性,长期促进突触的重塑和再生。3.血塞通可以缓解OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,通过抑制PTEN的活性,激活其下游PI3K/AKT/GSK-3β信号通路,发挥长期的神经保护作用。
程越[5]（2021）在《补脾醒神益智法对脾虚认知功能障碍大鼠TREM2/NF-κb信号通路作用机制的研究》文中研究说明目的:以“脾脑相关”理论为指导,系统论述认知功能障碍与脾脏的相关性,并采取病证结合方式,建立脾虚认知功能障碍大鼠模型,探究补脾醒神益智方对脾虚认知功能障碍的疗效及作用机制,为临床防治认知功能障碍提供理论及实验依据。材料与方法:第一部分:理论研究通过对古籍文献的整理以及相关理论的分析,梳理认知功能障碍的病名及病因病机,从脾与脑、脾与认知功能、脾与衰老等多方面论述脾与认知功能障碍的密切关系,探究补脾醒神益智法作为防治认知功能障碍治法的优势及补脾醒神益智方广阔的应用前景。第二部分:实验研究将60只SPF级SD大鼠,雌雄各半,随机分为正常组、认知功能障碍组、脾虚认知功能障碍组、安理申组、补脾醒神益智方组,共5组,每组12只,适应性喂养1周。采用复合因素、病证结合以及海马注射Aβ1-42的方法建立脾虚认知功能障碍模型,即第2、3周进行脾虚模型的建立,第4周进行海马CA1区Aβ1-42注射后进入灌胃治疗阶段,正常组、认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组治疗期间予0.9%生理盐水灌胃,剩余两组予对应药物灌胃,治疗周期为4周。于灌胃第四周依序开始进行水迷宫适应性训练、定位航行以及空间探索实验,评价不同组别之间大鼠的学习记忆能力。最后一次灌胃结束后,禁食24h后麻醉取材,采用HE染色法观察和分析各组大鼠脑组织神经元形态的变化,ELISA法检测各组别大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,运用RT-PCR及Western blot法检测脑组织中Aβ、NF-κB、TREM2、DAP12、IκB、ERK1/2的mRNA及蛋白的表达情况,从炎症反应的角度观察和探讨补脾醒神益智方改善脾虚认知功能障碍大鼠学习记忆障碍的可能机制。结果:第一部分:理论研究1 通过对古籍中认知功能障碍相关内容的梳理,其相关病名的描述多以“忘”及“呆”为主,并呈现出一定病情严重程度上的递进关系。2 脾虚是老年人群也是认知功能障碍患者的常见证候,脾脏与脑经络相连,气血相通,脾虚则脑髓失养,脾失健运则痰浊内生,因虚致瘀,痰瘀阻窍,从而导致认知功能障碍的发生,故认知功能障碍的防治可从“脾脑相关”理论立论。3 补脾醒神益智法可通过补脾而益气生血,从根本上阻断痰瘀内生,达到益智醒神开窍的作用,是防治认知功能障碍的有效治法。第二部分:实验研究1 大鼠的一般状态结果:在治疗阶段结束后,与正常组相比,认知功能障碍组以及脾虚认知功能障碍组呈现不同程度精神萎靡,毛发粗糙,缺乏光泽,大便溏稀,并伴随出现眯眼及嗜睡等症状,与两模型组相比,各治疗组一般状态均有所好转,补脾醒神益智方组大鼠好转程度优于安理申组。2 行为学实验结果2.1 定位航行实验:与正常组相比,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组的逃避潜伏期明显增加（P<0.01）,与两模型组相比,各治疗组逃避潜伏期均明显改善（P<0.01）,两治疗组逃避潜伏期比较无明显差异（P>0.05）。2.2 空间探索实验:与正常组相比,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组首次穿越目标区域所需时间明显延长,穿越该区域的次数明显减少,目标象限停留时间缩短（P<0.01）,脾虚认知功能障碍组首次穿越目标区域所需时间较认知功能障碍组延长（P<0.05）。中药组及西药组均可以在一定程度上改善痴呆大鼠的记忆能力,与模型组相比,各治疗组首次穿越目标区域所需时间,穿越次数及目标象限的停留时间均优于模型组。在空间探索实验中,正常组行进轨迹较为简单,并存在多次反复折返探索的行为,痴呆组及脾虚痴呆组整体行进轨迹较杂乱无章,在各象限停留时间较为均衡。3形态学结果:与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组,海马区及海马区周围皮质神经元数目明显减少,排列稀疏,细胞体积增大,核仁固缩,细胞核染色加深,锥体细胞数目减少,排列紊乱,出现空泡样变性。安理申组及补脾醒神益智方组海马区及海马周围皮质神经元数目与模型组相比明显增多,但仍低于正常组,细胞形态较为规则,锥体细胞的树突数量与各模型组相比明显上升,空泡变性及细胞的固缩坏死数量减少。4 ELISA结果:与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组IL-1β、IL-6以及TNF-α表达含量明显上升（P<0.01）,且脾虚认知功能障碍组的增高幅度明显高于认知功能障碍组,具有统计学意义,与两模型组相比,安理申组及补脾醒神益智方组与模型组相比IL-1β、IL-6以及TNF-α表达明显下降（P<0-01）,且补脾醒神益智方组对其下调作用更显着。5 RT-PCR结果:与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组NF-κBmRNA的相对表达量明显上调（P<0.01）,IκBmRNA的相对表达量明显下调（P<0.01）,与认知功能障碍组比较,安理申组及补脾醒神益智方组NF-κBmRNA相对表达量明显下调,IκBmRNA的相对表达量上调,组间相对表达量无明显差异。与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组TREM2mRNA、DAP12mRNA的相对表达量明显下调（P<0.01）,与两模型组比较,安理申组及补脾醒神益智方组均可上调TREM2mRNA的相对表达量（P<0.01）,且补脾醒神益智方对二者的上调作用优于安理申组。与正常组比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组ERK1、ERK2mRNA的相对表达量明显上调（P<0.01）,与模型组比较,两治疗组ERK1、ERK2mRNA的相对表达量明显下调,但两治疗组组间比较无统计学意义。6 Western Blot结果:与正常组相比较,认知功能障碍组及脾虚认知功能障碍组海马组织中Aβ、NF-κB、ERK1/2的蛋白表达量明显上升（P<0.01）,IκB、TREM2以及DAP12的蛋白表达含量明显下降（P<0.01）,两治疗组与脾虚认知功能障碍组相比,Aβ、NF-κB、ERK1/2的蛋白表达明显下降（P<0.01）,IκB、TREM2以及DAP12的mRNA表达含量明显上升（P<0.01）。且补脾醒神益智方组对TREM2的上调以及Aβ的下调幅度高于安理申组,两者具有统计学意义（P<0.05）。结论:1 脾虚是认知功能障碍发病的关键病机,且与认知功能障碍的主要病理产物痰浊、血瘀关系密切。补脾醒神益智法及其方药从“脾脑相关”理论出发,通过补脾益气,促进气血运行,进而充养脑髓,气血调和,醒神开窍,对于认知功能障碍的防治具有充分的理论依据及广泛应用前景。2 脾虚复合因素造模方法结合Aβ1-42海马注射可成功构建脾虚认知功能障碍模型,出现学习记忆能力减退以及炎症损伤,较为贴切复制了临床中认知功能障碍患者的症状特点。3 补脾醒神益智方可明显改善脾虚认知功能障碍大鼠的便溏、毛发粗糙、精神萎靡等脾虚证候表现,同时提高模型大鼠定位巡航以及空间探索能力,恢复其学习记忆能力。4 补脾醒神益智方可改善认知功能的作用机制与TREM2/NF-κB信号通路有关,通过上调TREM2及其配体DAP12的mRNA及蛋白的表达,同时抑制NF-κB炎性通路的激活,降低脑组织中Aβ及炎性因子的含量,从而发挥对认知功能障碍的防治作用。
杜欣[6]（2021）在《牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究》文中研究表明目的:观察牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用,阐明牛黄及其有效成分治疗缺血性中风的内在生物学机制。方法:1.体外脑神经血管单元模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立（1）利用体外原代细胞培养技术,提取大脑皮质神经元、星形胶质细胞和微血管内皮细胞,进行细胞鉴定;（2）利用transwell板将三种细胞共培养,构建体外脑神经血管单元的模型,利用TEER值,判定模型是否成功;（3）采用缺氧1h,复氧24h,构建OGD/R模型,利用TEER值、荧光素钠渗透系数判定模型是否成功。2.牛黄及其有效成分对三种细胞的毒性利用不同浓度的牛黄（Bezoar）、牛磺酸（Taurine）、牛黄熊去氧胆酸（TUDCA）和熊去氧胆酸（UDCA）,作用于神经元、星形胶质细胞和内皮细胞,分别干预24h和48 h,利用CCK8检测细胞活力,检测每种不同浓度的药物对细胞的毒性。3.牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用（1）通过OGD/R模型,检测牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA的不同剂量对细胞的作用,利用CCK8法检测细胞活力,确定每种药物的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。（3）牛黄对脑神经血管单元的保护机制研究加入抑制剂LY294002,检测牛黄对细胞的干预是通过PI3K/AKT通路实现的;检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 HIF-1α、VEGF、PI3K、AKT、p-AKT。4.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）利用OGD/R模型,筛选牛磺酸+牛磺熊去氧胆酸（T+T）,牛磺酸+熊去氧胆酸（T+U）的最佳剂量;（2）利用药物的最佳剂量进行干预,通过检测血脑屏障的通透性:TEER值、荧光素钠渗透系数和γ-GT;炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β;氧化应激指标SOD、NO、MDA以及神经元凋亡率。5.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+U的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶 MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5 以及 NF-κBp65,p-P65,IKBα,p-IKBα 蛋白表达。6.配伍组分牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制利用T+T的最佳剂量,进行OGD/R的造模,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3,金属蛋白酶MMP2、MMP9,紧密连接蛋白 ZO-1、Occludin、Claudin-5,CA43、AQP4以及 P38MAPK,P-P38MAPK。结果1.获得了纯度较高的神经元、星形胶质细胞和内皮细胞（1）神经元培养7d后成熟,经MAP2免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（2）星形胶质细胞培养7d后成熟,经GFAP免疫荧光鉴定,纯度大于95%;（3）内皮细胞培养7d后成熟,经Ⅷ因子免疫荧光鉴定,纯度大于95%。2.利用transwell,建立了脑神经血管单元的模型（1）该模型的电阻值在3-5天趋于平稳;（2）三细胞共培养,三种细胞的状态和单细胞相比,更佳。3.成功复制OGD/R模型利用缺氧1h,复氧24h,能够成功复制OGD/R模型,和正常组相比,模型组电阻值降低,荧光素钠渗透系数升高,能够进行下一步的实验研究。4.筛选药物毒性利用不用浓度的牛黄、牛磺酸、牛磺熊去氧胆酸和熊去氧胆酸分别干预24h和48h,筛选药物的毒性。5.筛选药物的保护剂量利用无毒性的各种药物浓度,通过OGD/R造模方法,检测细胞活力,筛选出保护作用的最佳剂量。6.牛黄及其有效成分对体外脑神经血管单元的保护作用（1）牛黄及其有效成分降低LDH,升高γ-GT,提高TEER值和降低荧光素钠渗透系数;（2）牛黄及其有效成分减少炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1 β的水平;（3）牛黄及其有效成分降低NO、MDA的水平,升高SOD的水平;（3）牛黄及其有效成分抑制神经元的凋亡;（4）牛黄降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（5）牛黄能升高紧密连接蛋白的表达,提高ZO-1、Occludin、Claudin-5的蛋白表达;（6）牛黄通过HIF-α/VEGF,PI3K/AKT通路,发挥保护NVU的作用,牛黄降低HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平,升高PI3K、AKT的蛋白表达水平。7.不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用（1）筛选了配伍组分的最佳剂量,T+T的最佳剂量1mM Taurine和1μM TUDCA,T+U的最佳剂量1mM Taurine和1μM UDCA;（2）T+T、T+U有效保护血脑屏障,降低TEER值,降低荧光素钠渗透系数,升高γ-GT;（3）T+T、T+U有效减轻细胞损伤,降低LDH的水平;（4）T+T、T+U有效减轻炎症反正,降低TNF-α、IL-6、IL-1β的值;（5）T+T、T+U有效抑制氧化反应,降低NO、MDA的水平,升高SOD的活力;（6）T+T、T+U抑制神经元的凋亡率。8.配伍组分牛磺酸和熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+U抑制神经元的凋亡率;（2）T+U 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+U降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+U降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低MyD88、P-P65、P-IKB α的蛋白表达,通过MyD88/NF-κB信号通路发挥脑保护作用。9.配伍组分牛磺酸和牛黄熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制（1）T+T抑制神经元的凋亡率;（2）T+T 提高 ZO-1、Occludin、Claudin-5 的蛋白表达;（3）T+T降低MMP2、MMP9的蛋白表达;（4）T+T降低Bax、Caspase-3蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达;（5）T+U降低AQP4、P38MAPK,升高CX43的蛋白表达。结论（1）牛黄、牛磺酸、TUDCA和UDCA能够减轻炎症反应,降低氧化应激的水平,抑制神经元的凋亡发挥神经保护的作用;（2）牛黄通过HIF-1α/VEGF和PI3K/AKT通路发挥脑保护作用;（3）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸,牛磺酸和熊去氧胆酸配伍,发挥协同作用,比单独使用牛磺酸药效更好;（4）牛磺酸和熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激的水平,保护血脑屏障,抑制神经元的凋亡,能够抑制通路MyD88/NF-κB通路发挥脑保护作用（5）牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸1000:1的配伍能够抑制炎症反应,降低氧化应激,保护血脑屏障,能够抑制P38MAPK通路,发挥脑保护作用;
栾朋伟[7]（2020）在《丹参多酚酸盐通过调控小胶质细胞对神经元损伤保护作用的研究》文中研究指明目的在急性脑缺血再灌注损伤发生后,不仅会引起脑内神经元发生损伤,而且会引起小胶质细胞发生极化引起炎症反应,释放炎症因子促进神经元细胞的进一步发生损伤,从而加重脑损伤。所以在本课题中主要通过体外缺氧缺糖（OGD）神经元细胞损伤和缺氧缺糖诱导小胶质细胞极化两个方面探讨丹参多酚酸盐的神经保护机制,并结合大脑中动脉阻塞模型（MCAO）,验证丹参多酚酸盐（salvia）的治疗效果。方法1.在OGD诱导神经元细胞损伤模型中:首先,OGD不同时间（2h、4h、8h）作用于神经元细胞筛选出最佳缺氧时间。接下来,采用细胞计数方法（CCK-8）测定salvia神经保护的最佳浓度;OGD损伤神经元细胞后,采用激光共聚焦成像技术（CLSM）测定salvia对活性氧簇（ROS）的荧光表达影响。最后,通过Hoechst 33342染色和流式细胞术方法测定了 salvia对神经元细胞核损伤和凋亡的保护作用;同时使用蛋白质印迹实验（Western Blotting）测定salvia作用后神经元细胞内凋亡信号通路（Caspase-3）的表达情况。2.在OGD诱导小胶质细胞极化模型中:首先,OGD不同时间（3h、6h、12 h、24h）作用于小胶质细胞筛选出最佳诱导表型极化时间。接下来,采用CCK-8实验测定salvia对小胶质细胞毒性作用;OGD可以诱导小胶质细胞发生氧化应激,采用CLSM实验方法测定不同浓度salvia对小胶质细胞内ROS和表型极化的荧光表达情况,并且测定超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的表达变化;采用Western Blotting检测salvia对小胶质细胞内炎症信号通路（TLR4）的表达情况,并使用采用逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ）的mRNA水平表达情况;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症因子的蛋白表达水平。最后,采用流式细胞术和Western Blotting方法测定salvia抑制OGD诱导的小胶质细胞活化,从而影响小胶质细胞对神经元细胞的凋亡。3.在大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO）中:首先,采用TTC染色实验方法测定不同浓度的salvia对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的影响。接下来,采用苏木精-伊红（HE）和尼氏（Nissl）染色方法测定salvia作用后的脑切片病理变化;采用激光散斑对比成像方法（LSCI）测定不同实验组中的大鼠脑血流变化情况;采用CLSM实验方法测定不同组小胶质细胞的表型转化情况;TUNEL染色实验检测salvia对于大鼠急性脑缺血再灌注损伤脑内细胞凋亡的影响;采用Western Blotting实验检测脑损伤组织中凋亡通路相关蛋白表达情况。最后,采用Morris水迷宫和Rota-Rod转棒实验测定salvia长期作用于急性脑缺血再灌注损伤后大鼠的认知能力和运动能力的改善情况。结果1.通过一系列实验方法成功构建了 OGD诱导神经元细胞损伤模型。然后使用salvia进行干预OGD诱导的神经元细胞损伤。结果表明:salvia（5μM）能够显着改善OGD诱导的神经元细胞损伤以及降低ROS的表达水平,同时减少损伤神经元细胞中LDH和NO的表达。并且salvia能够显着性减少损伤神经元细胞的凋亡率和抑制Caspase-3凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。2.通过一系列实验方法成功构建了 OGD诱导小胶质细胞极化模型。实验结果表明:OGD能够诱导小胶质细胞发生氧化应激反应,导致大量ROS表达,使得小胶质细胞向促炎表型转变,炎症因子TNF-α和IL-6表达含量显着增加,IL-1β,IFN-γ的表达没有变化。接下来将salvia（4 μM,16 μM,64 μM）和小胶质细胞在OGD条件下共孵育,随着salvia浓度的增加,OGD诱导小胶质细胞中ROS的表达含量逐渐减少,并且抗氧化酶SOD,CAT,GHS-px的表达含量也逐渐降低。然后采用荧光染色观察小胶质细胞的表型,salvia与小胶质细胞共孵育后,促炎表型抗体CD86的表达含量逐渐降低。Salvia可降低OGD诱导的小胶质细胞中TLR4信号通路的激活,减少炎症因子TNF-α和IL-6的mRNA与蛋白表达的水平。最后,将salvia和小胶质细胞在OGD条件下共孵育制备的条件培养基作用与神经元细胞,结果发现salvia条件培养基能够提高神经元细胞的活力,减少凋亡率,抑制神经元细胞Caspase-3信号通路的激活。3.在MCAO模型中,实验结果发现salvia（20mg/kg）能够有效的减少大鼠脑梗死面积,增加神经元细胞的有序性,血脑屏障的完整性得到部分修复。并且能够减少小胶质细胞的活化。TUNEL染色结果也发现,salvia可以减少凋亡小体的表达,Caspase-3凋亡通路相关蛋白表达显着性减少。通过Morris水迷宫和Rota-Rod转棒实验测定salvia长期作用,发现可以改善急性脑缺血再灌注损伤后大鼠的认知能力和提高大鼠运动能力。结论本课题主要从两个方面探讨salvia的药理活性:一方面是通过构建OGD诱导神经元损伤模型,发现salvia可以减少神经元细胞内ROS的表达,进而抑制Caspas-3信号通路的激活。另一方面是通过OGD诱导小胶质细胞的极化模型,发现salvia减少小胶质细胞内氧化应激反应,降低ROS的表达,进一步抑制TLR4信号通路的激活,从而减弱由小胶质细胞极化带来的神经损伤。同样在动物水平得到了进一步验证,这些结果说明salvia能够有效的减少急性脑缺血再灌注损伤,具有较好的神经保护作用。
曹玉[8]（2014）在《左卡尼汀和甘露糖醛酸寡糖对高糖诱导视网膜神经节细胞凋亡的保护作用》文中研究表明糖尿病视网膜病变（Diabetic Retinopathy, DR）是2型糖尿病最常见的并发症,目前已成为最主要的致盲眼病之一。DR的发生机制尚未明确,目前认为氧化应激是其中的一个关键环节。本研究通过体外实验分别探讨了左卡尼汀（L-Carnitine, LC）及褐藻酸寡糖抗氧化应激的神经保护作用。首先考察了糖尿病及其并发症（尤其是DR）患者血浆左卡尼汀、乙酰左卡尼汀（Acetyl-L-carnitine, ALC）和丙酰左卡尼汀（Propionyl-L-carnitine, PLC）的含量变化；通过建立高糖诱导的视网膜神经节细胞（Retinal ganglion cells. RGCs）凋亡模型,观察高糖状态下RGCs凋亡情况,探讨LC和不同分子量甘露糖醛酸对高糖状态下RGCs凋亡的保护作用及抗氧化机制；着重研究了LC对Nrf2-Keap1-ARE通路的调控作用；最后,对两种组分的协同作用进行评价。（J）非干预收集健康志愿者（76例）、2型糖尿病患者（59例）以及糖尿病并发症患者（糖尿病视网膜病变74例、早期糖尿病肾病51例、糖尿病周围神经病变57例、糖尿病高血压69例、糖尿病性冠心病64例）的临床指标及血浆样本,采用柱前衍生荧光HPLC法检测LC、ALC和PLC的含量。结果表明糖尿病组的血浆LC浓度明显低于正常对照组（P<0.05）,其他并发症组LC浓度又明显低于糖尿病组（P<0.05）,但各并发症组间比较无明显差异（P>0.05）。结果提示对于糖尿病患者,尤其是糖尿病并发症患者来说,补充LC可能是有益的。（2）高糖状态下,LC对高糖状态下RGCs凋亡的保护作用及其抗氧化机制。原代培养RGCs,根据台盼蓝拒染实验观察细胞的存活情况,最终选择30mmol·L-1葡萄糖浓度干预48 h,建立高糖模型；MTT法测定细胞活力提示以50-200μmol·L-1 LC促细胞活性作用最佳：Hoechst33342染色结果显示不同浓度LC组细胞凋亡率明显低于高糖损伤组（P<0.01或P<0.05）,提示LC能够抑制高糖所致的RGCs凋亡。LC组活性氧（Reactive oxygen species, ROS）、丙二醛（Malondialdehyde, MDA）水平较高糖损伤组显着下降（P<0.01或P<0.05）,而超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase, GSH-Px）和过氧化氢酶（Catalase, CAT）活性以及总抗氧化能力（Totalanti-oxidation capability, T-AOC）与模型组相比较显着升高（P<0.01或P<0.05）,且效应呈剂量依赖性。结果提示LC可通过增强细胞的抗氧化能力抑制高糖所致的细胞凋亡。（3）高糖状态下,LC对RGCs凋亡过程中Nrf2-Keapl-ARE通路的调控作用。结果显示LC组Nrf2蛋白表达比高糖组显着增多（P<0.01或P<0.05）：而Keapl蛋白表达与高糖组比较无显着性差异（P>0.05）,血红素加氧酶（HO-1）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的蛋白表达均比高糖组显着增强（P<0.01）,且呈剂量依赖性,提示LC可能通过激活Nrf2-Keapl-ARE通路,增加下游抗氧化物酶HO-1和Ⅱ相解毒酶γ-GCS的表达,进而对高糖状态下RGCs的氧化应激性损伤发挥保护作用。（4）在课题组前期鉴定出甘露糖醛酸M段的四个组分（MH-1、MH-2、 MH-3、MH-4）的基础上,探讨不同分子量的甘露糖醛酸预处理对细胞活性的影响。结果显示,在10-1000μg·ml-1范围内不同分子量的甘露糖醛酸可拮抗高糖对RGCs凋亡的影响（P<0.01）。Hoechst33342染色显示不同分子量甘露糖醛酸均能够抑制高糖损伤所致的RGCs凋亡,其在浓度为100μg·ml-1时的保护作用排序为MH-1>MH-2>MH-4>MH-3;不同分子量甘露糖醛酸组ROS水平较高糖组显着下降（P<0.01）,均能逆转高糖引起的MDA的升高（P<0.01）,减轻脂质过氧化,抗氧化酶SOD、GSH-PX和CAT活性以及T-AOC与高糖组相比均显着升高（P<0.05）。结果提示不同分子量甘露糖醛酸可通过增强细胞的抗氧化能力抑制高糖所致的细胞凋亡。（5）探讨左卡尼汀与甘露糖醛酸寡糖对高糖诱导RGCs凋亡的协同保护作用。选择对RGCs凋亡保护作用最强的MH-1三个浓度分别与LC混合,Hoechst33342染色检测细胞凋亡发现现在相同条件下,甘露糖醛酸寡糖MH-1段对RGCs凋亡的保护作用略低于左卡尼汀。三组混合组凋亡率比较发现,低浓度混合组对RGCs凋亡的保护作用高于低浓度LC组,又高于低浓度MH-1组和中浓度MH-1组,中浓度混合组对RGCs凋亡的保护作用高于MH-1 （M）组,与LC（M）无显着性差异,高浓度混合组对RGCs凋亡的保护作用高于MH-1（H）组,与LC（H）组无显着性差异,LC和甘露糖醛酸寡糖低、中、高浓度联合组的CDI （The coefficient of drug interaction）分别为0.598,、0.971、1.350。说明左卡尼汀与甘露糖醛酸寡糖混合作用于高糖诱导的RGCs凋亡具有协同增效的作用。
唐莹[9]（2012）在《十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞的影响》文中研究表明研究背景慢性难愈性创面是指创面愈合过程不能以可预见的生物学步骤,按时相规律有序地进行组织学修复,从而引起创面经久不愈的疾病。这类创面具有病程长、对外观影响大及并发症多等特点,对患者的生活和工作质量造成了极大的危害,一直是临床中较为棘手的问题,已引起国内外学者的高度重视并逐步开展了多项研究。随着认识的深入,氧化应激对创面愈合的影响正日益受到重视。氧化应激是促氧化剂和抗氧化剂稳态失衡,自由基的产生增多,和（或）抗氧化能力下降的一种机体状态。过度的氧化应激可引起组织损害,导致创面愈合延迟甚至长期不愈。真皮成纤维细胞是创面愈合过程中主要的修复细胞。慢性难愈性创面中由于氧化应激的存在,过多的活性氧可对成纤维细胞造成氧化损伤,影响其生物学特性,使之不能发挥正常功能。近年来,针对成纤维细胞在创面愈合中作用的研究逐渐增多,同时对于中医药促进创面愈合的实验研究亦有了很大的发展,研究中医药对成纤维细胞氧化损伤的调节作用可从细胞水平上阐述中医药对慢性难愈性创面愈合的作用机制。临床上,中医药在治疗慢性难愈性创面上独具优势。中医认为,慢性难愈性创面属于“阴证溃疡”,治疗上宜遵循补益的治疗原则。在补益基础上,适当配伍温通药物能够提高药物的疗效,但温通药物使用过量亦会起到相反的作用,因此温通药物的使用剂量是比较关键的问题。十全大补汤是补益温通的代表方剂,由大量补益气血药物和少量温通药物——肉桂组成,临床上常被应用于治疗慢性难愈性创面。同时,实验研究表明十全大补汤具有提高机体抗氧化能力的作用。目的探讨十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞的调节作用,从细胞水平研究十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化应激介导的慢性难愈性创面的作用机制。方法采用原代培养组织块法获得大鼠真皮成纤维细胞。采用十全大补汤原方及调整肉桂剂量所得的三组方药灌胃Wistar大鼠,制备5组不同的含药血清,分别为正常对照组、去肉桂组、原方组、2倍肉桂组及4倍肉桂组。采用一定浓度的H2O2刺激大鼠真皮成纤维细胞,制备细胞氧化损伤模型。用各组大鼠血清对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞实施干预,采用MTT法检测四组药物对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响；采用PI单染法和PI/Annexin V双染法结合流式细胞术检测四组药物对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞周期和凋亡的影响；采用DCFH-DA探针和JC-1探针结合流式细胞术检测四组药物对氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞细胞内活性氧水平和线粒体膜电位的影响。结果1、浓度在100-1000umol/L范围内的H202刺激大鼠真皮成纤维细胞30min,可明显抑制细胞增殖,细胞增殖抑制率（IR）随H202浓度增高而依次增高。当H202浓度为500umol/L时,IR约为50%,可作为诱导细胞氧化损伤的合适浓度。2、500umol/L H2O2刺激大鼠真皮成纤维细胞30mmin后,MTT法测得的OD值明显降低；GO/G1期细胞比例明显增高,S期和G2/M期细胞比例明显降低；细胞凋亡率明显增高；线粒体膜电位明显降低；细胞内活性氧水平显着上升。3、MTT法检测细胞增殖结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h后,10%血清浓度组中2倍肉桂组和4倍肉桂组OD值升高；15%浓度组中2倍肉桂组OD值明显升高。药物干预48h后,5%浓度组中2倍肉桂组和4倍肉桂组OD值明显升高；10%浓度组中2倍肉桂组OD值明显升高。在四个用药组中,2倍肉桂组在两个时间点上的OD值均为最高。4、细胞周期检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h后,四个用药组G0/G1期细胞比例均显着降低,S期和G2/M期细胞比例均显着增高。药物干预48h后,原方组、2倍肉桂组和4倍肉桂组G0/G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例增高。在四个用药组中,2倍肉桂组在两个时间点上的细胞增殖指数均为最高。5、细胞凋亡检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h及48h后,四个用药组细胞凋亡率均明显降低。在四个用药组中,2倍肉桂组在两个时间点上的细胞凋亡率均为最低。6、线粒体膜电位检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h后,只有2倍肉桂组明显提高了线粒体膜电位。药物干预48h后,四个用药组对线粒体膜电位无明显影响。7、活性氧检测结果中,氧化损伤的大鼠真皮成纤维细胞给予药物干预24h及48h后,四个用药组活性氧水平均显着降低。结论十全大补汤配伍不同剂量肉桂可以通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、清除细胞内活性氧的途径,对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞起到保护作用。其中,在十全大补汤原方基础上适当增加肉桂剂量,则其发挥的保护作用更加显着。
刘佳杰[10]（2011）在《叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞保护作用的研究》文中提出目的研究叶酸（folic acid, FA）对体外培养的缺氧神经干细胞（neural stem cells, NSCs）增殖能力、凋亡率、抗氧化能力和线粒体通路相关蛋白表达的影响,探讨叶酸对体外缺氧NSCs的保护作用及其可能机制。方法采用无血清体外细胞培养方法,培养新生大鼠NSCs,将NSCs分为5组：①正常对照组（Normol control group）叶酸浓度为4μg/ml;②缺氧模型组（Hypoxia model group）叶酸浓度为4μg/ml；③缺氧叶酸低剂量组（Hypoxia+folic acid L group）叶酸浓度为8μg/ml;④缺氧叶酸高剂量组（Hypoxia+folic acid H group）叶酸浓度为44μg/ml;⑤缺氧叶酸缺乏组（Hypoxia+folic acid D group）叶酸剂量为0.65μg/ml;于增殖第3d将除正常对照组外的其他4组细胞进行缺氧培养8h。用MTT法检测缺氧损伤后神经干细胞的活力,绘制生长曲线；用ELISA试剂盒检测各组细胞培养液中同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）水平；用荧光分光光度计检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species, ROS）水平；培养6d后收集增殖期细胞,提取细胞蛋白,并采用试剂盒检测细胞内抗氧化指标：超氧化物歧化酶（superoxide dismutase、SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）和丙二醛（maleic dialdehyde, MDA）的水平；采用流式细胞仪检测NSCs凋亡率和线粒体跨膜电位；采用Western blot方法检测各组细胞线粒体凋亡通路相关蛋白（Caspase-3、Bcl-2、Bax）表达。结果缺氧后NSCs形态学出现损伤迹象,叶酸可产生一定保护作用。MTT结果显示,缺氧后各时间点,正常对照组细胞活力高于缺氧模型组和叶酸缺乏组,差异有统计学意义（P<0.05）,缺氧叶酸高剂量组细胞活力高于缺氧叶酸低剂量组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。ELISA测定各组NSCs培养液中的Hcy结果发现,叶酸添加组均低于正常对照组,且具有一定的剂量反应关系。与正常对照组相比,缺氧模型组和缺氧叶酸缺乏组SOD、GSH-Px活性降低,MDA和ROS水平升高（P<0.05）；叶酸添加组SOD、GSH-Px活性升高,MDA和ROS水平降低（P<0.05）。流式细胞检测结果显示,缺氧模型组NSCs凋亡率高于正常对照组（P<0.05）和叶酸添加组,低于叶酸缺乏组,线粒体跨膜电位水平低于正常对照组和叶酸添加组（P<0.05）,高于叶酸缺乏组；Western blot方法测定各组NSCs内线粒体通路相关蛋白的表达结果显示,缺氧模型组活性Caspase-3和Bax表达量高于正常对照组和叶酸添加组（P<0.05）,低于叶酸缺乏组（P<0.05）,Bcl-2表达量低于正常对照组和叶酸添加组（P<0.05）,高于叶酸缺乏组（P<0.05）。结论本实验成功建立体外新生SD大鼠NSCs缺氧模型,研究结果显示叶酸可以促进缺氧损伤的NSCs增殖,减少NSCs凋亡。叶酸能降低Hcy水平,提高抗氧化能力,减少活性氧自由基生成,提高线粒体跨膜电位水平,上调线粒体通路中Bcl-2的表达,下调活性Caspase-3、Bax蛋白的表达,对体外缺氧损伤的NSCs起到定的保护作用。
二、木瓜粉对体外缺氧损伤神经细胞抗氧化能力及凋亡的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、木瓜粉对体外缺氧损伤神经细胞抗氧化能力及凋亡的影响（论文提纲范文）
（1）基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 第一章 VAP鉴定及检测 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 基于网路药理学探讨鹿茸改善MCI的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP改善不同MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第四章 基于代谢组学分析VAP改善MCI模型大鼠认知功能障碍的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第五章 基于PI3K/AKT信号通路探讨VAP拮抗由OA诱导的受损HT22细胞的作用机制 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学分析 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（2）星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 星蒌承气汤药效物质基础及对缺血性卒中神经保护机制研究进展 |
| 1 大黄 |
| 1.1 中医认识 |
| 1.2 化学成分及神经保护作用 |
| 2 胆南星 |
| 2.1 中医认识 |
| 2.2 化学成分及神经保护作用 |
| 3 瓜蒌 |
| 3.1 中医认识 |
| 3.2 化学成分及神经保护作用 |
| 4 羌活 |
| 4.1 中医认识 |
| 4.2 化学成分及神经保护作用 |
| 5 芒硝 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于肠道微生态理论的缺血性卒中病因与发病机制研究进展 |
| 1 肠道微生态与肠道微生态失调 |
| 2 菌-肠-脑轴 |
| 3 从肠到脑的上行通路 |
| 4 从脑到肠的下行通路 |
| 5 脑卒中相关危险因素与肠道菌群 |
| 6 卒中并发症的肠道微生态机制 |
| 7 结论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 基于网络药理学与分子对接的星蒌承气汤治疗缺血性卒中的机制研究 |
| 1 研究资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 星蒌承气汤化学活性成分的检索与筛选 |
| 2.2 星蒌承气汤化学成分及缺血性卒中靶点筛选 |
| 2.3 交集基因蛋白互作网络(PPI)分析 |
| 2.4 基因本体论(Gene ontology,GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析 |
| 2.5 可视化网络构建与分析 |
| 2.6 分子对接 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 星蒌承气汤潜在化学活性成分的检索与筛选结果 |
| 3.2 星蒌承气汤活性成分靶点及缺血性卒中靶点预测结果 |
| 3.3 GO富集分析及KEGG代谢通路富集分析结果 |
| 3.4 可视化网络构建与分析 |
| 3.5 分子对接 |
| 4 讨论 |
| 4.1 网络药理学在中医药现代化研究中的应用 |
| 4.2 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤活性成分 |
| 4.3 基于网络药理学方法探讨星蒌承气汤效应机制 |
| 5 小结 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠神经保护作用及网络药理学关键靶点及通路实验验证 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 TUNEL法检测皮层梗死周围细胞凋亡情况 |
| 2.8 脑组织ELISA |
| 2.9 脑组织Western blot |
| 2.10 统计分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 对缺血侧脑组织细胞凋亡的影响 |
| 3.5 星蒌承气汤对缺血侧脑组织TNF-α的影响 |
| 3.6 星蒌承气汤对缺血侧脑组织AKT、p-AKt、PI3K及NF-κB蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 星萎承气汤是治疗中风病急性期痰热腑实证的具有确切临床疗效的代表方剂 |
| 4.2 化痰通腑法代表方星蒌承气汤脑保护作用及中医理论探讨 |
| 4.3 卒中模型神经功能评分探讨 |
| 4.4 卒中模型行为学选择 |
| 4.5 星蒌承气汤与细胞凋亡 |
| 4.6 网络药理学关键靼点及通路实验验证 |
| 5 小结 |
| 实验二 星蒌承气汤对中风急性期痰热腑实证小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 取材及处理 |
| 2.4 免疫组化 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.6 ELISA检测 |
| 2.8 肠道菌群分析 |
| 2.9 盲肠内容物短链脂肪酸(SCFAs)检测 |
| 2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群的影响 |
| 3.2 星蒌承气汤对中风痰热腑实证小鼠肠道菌群代谢产物短链脂肪酸及短链脂肪酸受体的影响 |
| 3.3 星蒌承气对菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 基于脑肠互动理论探讨化痰通腑法治疗中风病的理论基础 |
| 4.2 星蒌承气汤对短链脂肪酸影响 |
| 4.3 星萎承气汤对菌-肠-脑轴自主神经途径影响 |
| 4.4 星蒌承气汤对菌-肠-脑轴神经内分泌途径影响 |
| 4.5 星萎承气汤对菌-肠-脑轴免疫途径影响 |
| 5 小结 |
| 实验三 星萎承气汤对中风急性期痰热腑实证伪无菌小鼠菌-肠-脑轴影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验对象 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备与耗材 |
| 1.4 实验药物的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 除胶实验 |
| 2.5 TTC染色 |
| 2.6 取材及处理 |
| 2.7 免疫组化、免疫荧光 |
| 2.8 ELISA检测 |
| 2.9 肠道菌群分析 |
| 2.10 盲肠内容物SCFAs分析 |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经功能评分 |
| 3.2 除胶实验 |
| 3.3 脑梗死体积评价 |
| 3.4 肠道菌群 |
| 3.5 短链脂肪酸 |
| 3.6 星蒌承气汤对伪无菌小鼠菌-肠-脑轴神经-内分泌-免疫途径相关指标影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 伪无菌模型建立及评价 |
| 4.2 肠道菌群是星蒌承气汤发挥作用的重要靶点 |
| 4.3 星蒌承气汤治疗急性期缺血性卒中机制的初步探讨 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）壳寡糖对新生大鼠酒精性神经损伤的缓解作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略语对照表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 酒精暴露与神经损伤的研究进展 |
| 1.1.1 酒精及其代谢物对神经系统的影响 |
| 1.1.2 酒精代谢影响神经系统的作用机制 |
| 1.1.3 酒精暴露与胎儿神经损伤与发育 |
| 1.1.4 胎儿酒精谱系综合症的治疗与干预研究现状 |
| 1.2 壳寡糖神经保护活性研究进展 |
| 1.2.1 壳寡糖吸收与大脑屏障 |
| 1.2.2 壳寡糖对体内外神经细胞的保护作用 |
| 1.2.3 壳寡糖的抗氧化和抗炎活性 |
| 1.3 立题意义 |
| 1.4 研究内容 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料及仪器 |
| 2.1.1 主要原料与试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组和给药方法 |
| 2.2.2 新生大鼠体重及脑器官指数的测定 |
| 2.2.3 行为学实验(Morris水迷宫) |
| 2.2.4 新生大鼠脑组织HE染色及TUNEL染色 |
| 2.2.5 新生大鼠脑组织中BDNF与神经递质检测 |
| 2.2.6 新生大鼠脑组织中氧化还原状态检测 |
| 2.2.7 新生大鼠脑组织中炎性因子检测 |
| 2.2.8 RT-PCR检测基因表达 |
| 2.2.9 Western Blot检测蛋白表达 |
| 2.2.10 数据处理与统计方法 |
| 3 结果与讨论 |
| 3.1 壳寡糖对新生大鼠生长发育状况以及学习与记忆能力的影响 |
| 3.1.1 壳寡糖对新生大鼠体重增长情况和脑器官指数的影响 |
| 3.1.2 壳寡糖对新生大鼠学习记忆与空间认知能力的影响 |
| 3.1.3 壳寡糖对新生大鼠脑组织病理学切片影响 |
| 3.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中脑神经营养因子与神经递质的影响 |
| 3.2.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中脑神经营养因子水平的影响 |
| 3.2.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中A-c H、A-ch E的影响 |
| 3.3 壳寡糖对新生大鼠脑组织氧化应激反应的影响 |
| 3.3.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中GSH和 MDA水平的影响 |
| 3.3.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中SOD、CAT和 T-AOC活力的影响 |
| 3.3.3 壳寡糖对新生大鼠脑组织中P53、JNK、Nrf2 信号分子的影响 |
| 3.4 壳寡糖对新生大鼠脑组织炎症反应的影响 |
| 3.4.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中炎性因子含量的影响 |
| 3.4.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中炎症介质基因表达的影响 |
| 3.5 壳寡糖对新生大鼠脑组织中 NMDAR、GABAR 和 Bcl/2-Bax-Caspase-3信号通路的影响 |
| 3.5.1 壳寡糖对新生大鼠脑组织中GABAR和 NMDAR的影响 |
| 3.5.2 壳寡糖对新生大鼠脑组织中Bcl/2-Bax-Caspase-3 信号通路的影响 |
| 主要结论与展望 |
| 主要结论 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ:附图 |
| 附录Ⅱ:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 |
（4）血塞通对MCAO大鼠和OGD/R损伤SH-SY5Y细胞LINGO-1，EGFR，PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 三七、三七总皂苷各成分对脑卒中的研究进展 |
| 1 中药三七和其成分的研究 |
| 2 三七总皂苷及其各成分对脑卒中的研究进展 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 LINGO-1及其下游信号通路在缺血性脑卒中后神经再生的机制研究 |
| 1 LINGO-1 |
| 2 EGFR |
| 3 PI3K//AKT |
| 4 PTEN |
| 5 GSK-3β |
| 6 PTE、AKT以及GSK-3β的关系 |
| 7 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 动物实验研究 |
| 实验一 大鼠MCAO模型的建立和评价 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 血塞通对MCAO大鼠术后28天LINGO-1,EGFR以及下游PI3K/AKT通路的作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 血塞通对MCAO大鼠术后28天PTEN和GSK-3β的作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 细胞实验研究 |
| 实验四 血塞通对SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/再灌注损伤的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 mNSS神经功能评分表 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（5）补脾醒神益智法对脾虚认知功能障碍大鼠TREM2/NF-κb信号通路作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 从脾论治认知功能障碍中医相关理论探讨 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一: 补脾醒神益智方对脾虚认知功能障碍模型大鼠学习记忆能力的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二: 补脾醒神益智方对Aβ诱导的脾虚认知功能障碍大鼠形态学及血清IL-1β、IL-6以及TNF-α表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验三: 补脾醒神益智方对脾虚认知功能障碍大鼠脑组织的TREM2/NF-κB信号通路的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 中医药防治认知功能障碍研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（6）牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 上篇文献综述 |
| 综述一 缺血性中风背景下的神经血管单元 |
| 1. 缺血性中风的研究现状 |
| 2. 神经血管单元的组成 |
| 3. 在正常和低氧条件下的生理学 |
| 4. 缺血性脑卒中的实验模型 |
| 5. 基于神经血管单元的治疗策略 |
| 6. 参考文献 |
| 综述二 中药抗缺血性脑卒中的研究进展 |
| 一. 植物药 |
| 1.1 人参 |
| 1.2 栀子 |
| 1.3 姜黄 |
| 1.4 丹参 |
| 1.5 黄芪 |
| 1.6 川芎 |
| 1.7 地黄 |
| 1.8 黄连 |
| 二. 动物药 |
| 2.1 牛黄 |
| 2.2 麝香 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 下篇 实验研究 |
| 实验一 “神经血管单元”体外模型的建立以及缺氧/复氧模型的建立 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 实验二 牛黄及其有效成分对单独培养的神经元、星形胶质细胞、内皮细胞的细胞毒性 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 牛黄及其有效成分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 不同配伍组分对脑神经血管单元的保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 牛磺酸和熊去氧胆酸对神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 牛磺酸和牛磺熊去氧胆酸对脑神经血管单元的作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 试验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）丹参多酚酸盐通过调控小胶质细胞对神经元损伤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第一章 前言 |
| 参考文献 |
| 第二章 丹参多酚酸盐对体外神经元细胞损伤的保护及机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 常用溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 缺氧缺糖模型建立 |
| 2.2.3 药物细胞毒测定实验 |
| 2.2.4 药物活力测定实验 |
| 2.2.5 细胞膜染色实验 |
| 2.2.6 NO,MDA,LDH测定实验 |
| 2.2.7 活性氧(ROS)测定实验 |
| 2.2.8 Hoechst 33342染色实验 |
| 2.2.9 细胞凋亡测定实验 |
| 2.2.10 mRNA提取实验 |
| 2.2.11 RT-qPCR实验 |
| 2.2.12 细胞蛋白提取实验 |
| 2.2.13 Western blotting实验 |
| 2.2.14 数据统计 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 细胞缺氧缺糖模型的条件筛选 |
| 2.3.2 丹参多酚酸盐对PC12细胞毒测定 |
| 2.3.3 丹参多酚酸盐对OGD-PC12细胞的保护作用 |
| 2.3.4 丹参多酚酸盐抑制OGD-PC12细胞ROS的表达 |
| 2.3.5 丹参多酚酸盐影响OGD-PC12细胞的LDH,NO,MDA表达 |
| 2.3.6 丹参多份酸盐对OGD-PC12细胞的抗凋亡作用 |
| 2.3.7 丹参多酚酸盐影响OGD-PC12细胞Caspase-3凋亡通路蛋白表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 丹参多酚酸盐对体外小胶质细胞极化的作用及机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验细胞株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 常用溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 缺氧缺糖模型建立 |
| 3.2.3 药物细胞毒测定实验 |
| 3.2.4 细胞膜染色实验 |
| 3.2.5 LDH及NO测定实验 |
| 3.2.6 细胞表型荧光染色实验 |
| 3.2.7 ROS免疫荧光染色实验 |
| 3.2.8 Hoechst 33342染色实验 |
| 3.2.9 条件培养基制备实验 |
| 3.2.10 细胞凋亡测定实验 |
| 3.2.11 ROS流式测定实验 |
| 3.2.12 mRNA提取实验 |
| 3.2.13 RT-qPCR实验 |
| 3.2.14 ELISA测定实验 |
| 3.2.15 SOD,GSH,CAT酶活力测定实验 |
| 3.2.16 细胞蛋白提取实验 |
| 3.2.17 Western Blotting实验 |
| 3.2.18 数据统计 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 小胶质细胞株免疫荧光鉴定结果 |
| 3.3.2 小胶质细胞缺氧缺糖模型的条件筛选 |
| 3.3.3 丹参多酚酸盐对小胶质细胞活力测定 |
| 3.3.4 丹参多酚酸盐抑制小胶质细胞内ROS表达 |
| 3.3.5 丹参多酚酸盐影响小胶质细胞内抗氧化酶表达 |
| 3.3.6 丹参多酚酸盐影响小胶质细胞的炎症表型变化 |
| 3.3.7 丹参多酚酸盐抑制小胶质细胞TLR4信号通路蛋白表达 |
| 3.3.8 丹参多酚酸盐抑制小胶质细胞炎症因子的表达 |
| 3.3.9 丹参多酚酸盐抑制小胶质细胞极化提高神经元细胞活力 |
| 3.3.10 丹参多酚酸盐抑制小胶质细胞极化减少神经元细胞的凋亡 |
| 3.3.11 丹参多酚酸盐抑制小胶质细胞极化减少神经元细胞Caspase-3通路激活 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 常用溶液配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 MCAO模型构建 |
| 4.2.2 药物浓度筛选实验 |
| 4.2.3 Longa神经功能评价 |
| 4.2.4 TTC染色实验 |
| 4.2.5 激光散斑血流成像实验 |
| 4.2.6 血脑屏障完整性实验 |
| 4.2.7 脑水肿测定实验 |
| 4.2.8 HE染色实验 |
| 4.2.9 Nissl染色实验 |
| 4.2.10 免疫荧光染色实验 |
| 4.2.11 TUNEL荧光染色实验 |
| 4.2.12 组织蛋白提取实验 |
| 4.2.13 Western Blotting实验 |
| 4.2.14 水迷宫实验 |
| 4.2.15 转棒仪实验 |
| 4.2.16 数据统计 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的药物浓度结果 |
| 4.3.2 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的血流成像结果 |
| 4.3.3 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的HE染色结果 |
| 4.3.4 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的Nissl染色结果 |
| 4.3.5 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的NeuN染色结果 |
| 4.3.6 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤的血脑屏障的影响 |
| 4.3.7 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注的组织TUNEL染色实验 |
| 4.3.8 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤神经元凋亡蛋白表达影响 |
| 4.3.9 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤后小胶质细胞染色结果 |
| 4.3.10 丹参多酚酸盐对急性脑缺血再灌注损伤后小胶质细胞表型转化结果 |
| 4.3.11 丹参多酚酸盐对脑缺血再灌注损伤的长期给药实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（8）左卡尼汀和甘露糖醛酸寡糖对高糖诱导视网膜神经节细胞凋亡的保护作用（论文提纲范文）
| 缩略语 中文摘要 Abstract 第一章 前言 |
| 一、糖尿病及糖尿病视网膜病变 |
| 1. 概述 |
| 3. DR早期与RGCs凋亡 |
| 4. RGCs凋亡与氧化应激 |
| 5. DR早期神经保护治疗 |
| 二、LC在糖尿病及其并发症中的变化以及神经保护作用 |
| 1. 概述 |
| 2. LC与糖尿病及其并发症 |
| 3. LC对神经细胞的保护作用及机制 |
| 三、海藻酸多糖和寡糖的生物学作用 |
| 四、研究思路 |
| 参考文献 第二章 糖尿病及其并发症患者血浆中LC ALC PLC的含量测定 |
| 一. 引言 |
| 二. 试验部分 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 试验仪器与试剂 |
| 1.2 试验设计 |
| 1.3 糖尿病及其并发症的诊断标准 |
| 1.4 入选标准 |
| 1.5 排除标准 |
| 1.6 检测指标 |
| 1.7 数据分析与统计 |
| 2. 结果 |
| 2.1 人口统计学资料和临床特征 |
| 2.2 专属性实验 |
| 2.3 标准曲线 |
| 2.4 精密度试验 |
| 2.5 回收率试验 |
| 2.6 稳定性试验 |
| 2.7 各实验组的血浆LC、ALC、PLC的浓度 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 第三章 左卡尼汀对高糖状态下RGCS凋亡的保护及机制研究 |
| —、前言 |
| 二、实验部分 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要实验仪器和器械 |
| 1.2 主要实验试剂及试剂配制 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 试验方法 |
| 1.4.1 试剂配制 |
| 1.4.2 RGCs的原代混合培养与纯化 |
| 1.4.3 视网膜神经节细胞高糖损伤模型的筛选(台盼蓝拒染实验) |
| 1.4.4 LC有效剂量筛选 |
| 1.4.5 高糖模型的建立及实验分组 |
| 1.4.6 Hoechst33342染色检测计算细胞凋亡率 |
| 1.4.7 ROS、MDA及抗氧化指标的测定 |
| 1.4.7.1 流式细胞仪检测细胞内ROS水平 |
| 1.4.7.2 酶生化法测定细胞内MDA含量 |
| 1.4.7.3 酶生化法测定细胞内抗氧化指标 |
| 1.4.8 细胞培养液中LC及其代谢产物的代谢研究(HPLC-FL法) |
| 1.4.9 细胞总蛋白和细胞核内蛋白的提取与定量 |
| 1.4.10 Western blot细胞蛋白表达 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2. 试验结果 |
| 2.1 RGCs形态学观察及鉴定结果 |
| 2.2 高糖损伤模型的确立 |
| 2.3 LC对高糖诱导的RGCs凋亡有效剂量筛选 |
| 2.4 LC对高糖损伤RGCs凋亡的影响 |
| 2.5 LC对RGCs内ROS、MDA水平和抗氧化指标的影响 |
| 2.6 LC对RGCs核内Nrf2蛋白表达的影响 |
| 2.7 LC对RGCs的Keap1蛋白表达的影响 |
| 2.8 LC对RGCs的HO-1和γ-GCS蛋白表达的影响 |
| 2.9 细胞培养液中LC及其代谢产物ALC、PLC的代谢 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 第四章 甘露糖醛酸寡糖对高糖诱导RGCS凋亡的保护及与LC的协同增效作用 |
| 一、前言 |
| 二、实验部分 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 主要实验仪器和器械 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 试验方法 |
| 1.4.1 甘露糖醛酸寡糖对RGCs凋亡保护的有效剂量筛选(MTT) |
| 1.4.2 高糖模型的建立及实验分组 |
| 1.4.3 甘露糖醛酸寡糖对高糖诱导的RGCs凋亡的保护 |
| 1.4.4 不同分子量甘露糖醛酸寡糖对RGCs凋亡的保护作用比较 |
| 1.4.5 左卡尼汀与甘露糖醛酸寡糖对RGCs凋亡的协同保护作用 |
| 1.4.6 ROS、MDA、抗氧化指标检测 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2. 试验结果 |
| 2.1 甘露糖醛酸寡糖对RGCs凋亡的保护剂量筛选 |
| 2.3 甘露糖醛酸寡糖对RGCs的ROS水平的影响 |
| 2.4 甘露糖醛酸寡糖对RGCs的LPO的影响 |
| 2.5 甘露糖醛酸寡糖对RGCs其他抗氧化指标的影响 |
| 2.6 不同分子量甘露糖醛酸寡糖对RGCs的保护作用比较 |
| 2.7 左卡尼汀与甘露糖醛酸寡糖对RGCs凋亡的协同保护作用比较 |
| 三. 讨论 |
| 四、小结 |
| 参考文献 结论与创新 展望 致谢 个人简历 科研成果 |
（9）十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 皮肤成纤维细胞与创面愈合的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药抗氧化作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 原代培养大鼠真皮成纤维细胞及建立细胞氧化应激模型 |
| 实验二 十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞增殖的影响 |
| 实验三 十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞凋亡的影响 |
| 实验四 十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞内活性氧水平的影响 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、叶酸对缺氧神经干细胞抗氧化作用的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 NSCs形态学观察、鉴定 |
| 1.2.2 叶酸对缺氧后NSCs增殖能力的影响 |
| 1.2.3 叶酸对缺氧NSCs培养液中Hcy水平的影响 |
| 1.2.4 叶酸对缺氧NSCs ROS水平的影响 |
| 1.2.5 叶酸对缺氧NSCs抗氧化能力的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 NSCs的培养和鉴定 |
| 1.3.2 叶酸对缺氧后NSCs增殖能力的影响 |
| 1.3.3 叶酸对缺氧NSCs培养液中Hcy水平的影响 |
| 1.3.4 叶酸对缺氧NSCs抗氧化能力的影响 |
| 1.4 小结 |
| 二、叶酸对缺氧神经干细胞凋亡的影响及其机制的探讨 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 叶酸对缺氧NSCs凋亡率的影响 |
| 2.2.2 叶酸对缺氧NSCs线粒体跨膜电位的影响 |
| 2.2.3 叶酸对缺氧NSCs凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响 |
| 2.2.4 叶酸对缺氧NSCs线粒体通路凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 叶酸对缺氧NSCs凋亡率的影响 |
| 2.3.2 叶酸对缺氧NSCs线粒体跨膜电位的影响 |
| 2.3.3 叶酸对线粒体通路凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 2.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
四、木瓜粉对体外缺氧损伤神经细胞抗氧化能力及凋亡的影响（论文参考文献）
- [1]基于PI3K/AKT信号通路探讨鹿茸多肽改善轻度认知功能障碍的作用机制研究[D]. 刘玥欣. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]星蒌承气汤治疗急性缺血性卒中痰热腑实证机制研究[D]. 高强. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]壳寡糖对新生大鼠酒精性神经损伤的缓解作用研究[D]. 陈逸伦. 江南大学, 2021(01)
- [4]血塞通对MCAO大鼠和OGD/R损伤SH-SY5Y细胞LINGO-1，EGFR，PI3K/AKT通路以及PTEN和GSK-3β的研究[D]. 周东蕊. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]补脾醒神益智法对脾虚认知功能障碍大鼠TREM2/NF-κb信号通路作用机制的研究[D]. 程越. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [6]牛黄及其有效成分对神经血管单元的保护作用研究[D]. 杜欣. 北京中医药大学, 2021(02)
- [7]丹参多酚酸盐通过调控小胶质细胞对神经元损伤保护作用的研究[D]. 栾朋伟. 郑州大学, 2020(02)
- [8]左卡尼汀和甘露糖醛酸寡糖对高糖诱导视网膜神经节细胞凋亡的保护作用[D]. 曹玉. 中国海洋大学, 2014(12)
- [9]十全大补汤配伍不同剂量肉桂对氧化损伤大鼠真皮成纤维细胞的影响[D]. 唐莹. 北京中医药大学, 2012(09)
- [10]叶酸对体外缺氧新生大鼠神经干细胞保护作用的研究[D]. 刘佳杰. 天津医科大学, 2011(03)