一、肝脏对各种缝线反应的动物实验研究（论文文献综述）
陈训如,吴孟超,陈汉[1]（1983）在《肝脏对各种缝线反应的动物实验研究》文中提出本实验共用大鼠96只,动态观察术后5～90天期间肝脏组织对涤纶线、丝线、尼龙线和肠线的反应。实验结果表明:各种缝线在植入后5天均引起明显的炎症反应,以后反应则极不相同。肝组织对各种缝线反应的顺序为肠线>丝线>涤纶线>尼龙线。涤纶线持结性能类似丝线,而反应较经,故作者认为,缝合清洁肝伤口时首先选涤纶线。
张秦[2]（2016）在《包虫病所致过敏反应中免疫耐受机制的实验研究》文中研究说明目的:包虫病是全球人畜共患性疾病。包虫病所致的过敏性休克是其严重并发症,占包虫病患者突然死亡原因的20%。包虫病患者存在免疫耐受已被证实,但是这种状态在包虫囊液外溢时发生转变,过敏性休克发生,具体机制尚待阐明。为此,本研究在完善囊型包虫病所致过敏反应动物模型、优化小鼠过敏反应评价体系的基础上,探讨以Treg细胞为核心的“免疫耐受调节网络”中相关重要因子在囊型包虫病所致过敏反应中的变化及特点,以及地塞米松预处理对囊型包虫病所致过敏反应的影响及机制,为制定针对囊型包虫病所致过敏反应的有效防治策略奠定理论基础。方法:1)羊源细粒棘球蚴原头节及囊液均采自包虫感染羊肝脏。包虫感染组,每只小鼠通过腹腔接种粒棘球蚴原头节2000个,建立囊型包虫感染模型,再应用羊源细粒棘球蚴粗制囊液0.1ml/10g攻击发敏建立囊型包虫病所致过敏反应模型。通过观察过敏症状、肛温变化、肺组织HE染色病理切片,测定肺泡灌洗液中白细胞分类计数、过敏介质组胺及PAF-AH水平,测量血清抗体水平等一系列指标,全面优化过敏评价体系,完善过敏模型建立;2)BALB/c小鼠随机分成健康对照组、包虫感染组、囊液致敏组。使用全面的过敏评价体系评价过敏模型。FCM检测小鼠淋巴结来源PBMCs中DCs、Treg细胞水平,ELISA检测血清IgE、IgG、IgG1、IL-10、TGF-β1、IL-13、IL-17A水平;3)C57BL/6小鼠随机分成健康对照组、单纯囊液致敏组,地塞米松预处理组。在包虫囊液致敏前30min腹腔注射地塞米松建立地塞米松预处理模型。使用全面的过敏评价体系评价过敏模型。FCM检测小鼠淋巴结来源PBMCs中Treg细胞水平,ELISA检测血清IgE、IgG、IgG1、IL-10、TGF-β1、IL-13水平。结果:1)BALB/c小鼠包虫接种成功率为75%,C57BL/6小鼠包虫接种成功率为65%,囊型包虫病所致过敏模型成功率为分别为93.33%和85.62%。发生过敏反应小鼠出现了不同程度的过敏症状、肛温下降、肺组织HE病理切片及BALF中炎性细胞增加、组胺表达量增加、血清抗体IgE、IgG、IgG1水平增加。上述指标均表明BALB/c和C57BL/6小鼠囊型包虫病所致过敏反应模型建立成功;2)与健康对照组相比,包虫感染组及囊液致敏组小鼠血清IgE水平均明显增加（P<0.01）。囊液致敏组小鼠血清IgE水平明显高于包虫感染组（P<0.05）。囊液致敏后,肺组织病理及BALF中炎性细胞增加、组胺表达水平增加、血清IL-13、IL-17A水平增加（P<0.05）。与健康对照组相比,小鼠血清IL-10、TGF-β1水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+细胞比例在包虫感染组增加,在囊液致敏组下降（P<0.001）,呈现先升后降的双向变化。但是其他T细胞群,如CD4+CD25+Foxp3-细胞比例、CD4+Foxp3+CD25-细胞比例,各组间比较无明显差异。CD11c+IA/IE+CD86+细胞比例、CD11c+IA/IE+CD80+细胞比例以及CD4/CD8比例,各组间比较无明显差异;3)小鼠严重过敏反应发生率在地塞米松预处理组是12.5%,单纯囊液致敏组是37.5%。与单纯囊液致敏组相比,地塞米松预处理组小鼠肺组织及BALF中炎性细胞降低、组胺表达水平减少、IgE水平降低、血清IL-13水平降低（P<0.001）。血清IL-10及TGF-β1水平与CD4+CD25+Foxp3+Treg/CD4+细胞比例变化趋势相同,均在单纯囊液致敏组下降,在地塞米松预处理组增加。结论:1)全面的小鼠过敏评价体系优化了囊型包虫病所致过敏反应小鼠动物模型,为探讨包虫病所致过敏反应中免疫耐受机制奠定基础;2)以Treg细胞为核心的“免疫耐受调节网络”维持了包虫感染后的免疫耐受状态,细粒棘球蚴囊液致敏后,网络失衡,诱发过敏反应;3)包虫感染后以Treg细胞为核心的“免疫耐受调节网络”通过CD25、Foxp3高表达,IL-10、TGF-β1高分泌水平,维持免疫耐受功能。囊液致敏后,免疫耐受状态发生转变,Treg细胞比例下降,IL-10、TGF-β1水平降低,IL-17A、IL-13水平升高,发生过敏反应;4)在包虫病所致的过敏反应中,地塞米松可通过降低IgE水平,减少肺组织及BALF中炎性细胞渗出,减少靶器官过敏介质组胺释放,减轻过敏反应;5)地塞米松通过上调Treg细胞比例及功能维持“免疫耐受调节网络”功能。其具体机制是上调IL-10和TGF-β1水平,抑制Th2细胞因子IL-13水平。
管文贤[3]（1999）在《1. XJ-1器官保存液的研制及TLSFJM对大鼠肝、心移植急性排斥反应防治作用的实验研究 2. 我国首例血缘关系活体肝移植患者的临床观察》文中指出无论是肝脏移植还是心脏移植，目前都已成为治疗中末期肝病和心脏器质性病变的唯一有效手段，至今临床肝脏或心脏移植全球累计总例数都已逾6万例，并且移植疗效良好。而我国在肝、心移植领域与国外还存在巨大的差异，因此加强这一领域的研究是极其必要的。本研究的选题正是基于这样的出发点，围绕大鼠肝脏和心脏移植的模型进行了有关器官保存和免疫抑制治疗的研究；还对1例临床活体肝移植患者作了长期的随访观察，并就免疫监测与免疫抑制治疗的方法作了初步的探讨。 第一部分 有关大鼠肝脏和心脏移植模型的建立 研究一：“三袖套”法大鼠原位肝移植模型的建立 目的：在国内现有条件下探讨“三袖套”法大鼠原位肝移植的可行性。方法：以SD大鼠为对象，通过自制血管袖套、手术牵开器，按Miyata法复制大鼠原位肝移植模型。结果：经60余次预试验后行正式试验18次，术中死亡5例，术后4h内死亡4例，24h存活率50％，1周存活率11.1％。术后早期死亡原因主要为气胸、血管套接失败、出血。结论：现有实验条件下“三袖套”法原位肝移植模型难以获得稳定的长期生存率，不适合慢性实验研究。
余泽前[4]（2018）在《胰腺癌来源的外泌体在肝转移中的作用及其机制研究》文中研究说明目的提取并纯化具有同一亲本不同转移潜能胰腺癌细胞来源的外泌体,探讨高转移潜能胰腺癌细胞来源的外泌体在体外促进低转移潜能胰腺癌细胞侵袭与转移的影响;建立小鼠胰腺癌肝脏预转移小生境（Pre-Metastatic Niche,PMN）及原位移植瘤动物模型,探讨胰腺癌细胞来源的外泌体诱导肝脏预转移小生境及在体内促进肝转移过程中的细胞及分子机制;筛选胰腺癌肝转移相关蛋白,为胰腺癌的侵袭与转移提供理论基础以及为将来胰腺癌的诊断与治疗提供新的靶标。方法采用超高速离心法联合密度梯度离心法提取并纯化胰腺癌细胞来源的外泌体,采用投射电镜及Western Blot实验对外泌体的形态及结构蛋白进行鉴定,并应用BCA法测定两种细胞来源外泌体的蛋白质浓度;在体外应用MTT粘附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验及以及Western Blot实验观察高转移潜能胰腺癌细胞来源的外泌体促进低转移潜能胰腺癌细胞侵袭与转移的影响;C57BL/6小鼠尾静脉注射两种细胞来源的外泌体,采用共聚焦显微镜、免疫荧光、Western Blot实验以及流式细胞实验比较两种细胞外泌体在小鼠体内的分布情况及诱导肝脏预转移小生境的影响;对Panc02细胞C57BL/6小鼠胰腺癌原位移植瘤模型进行尾静脉注射两种细胞来源的外泌体,采用H&E染色、免疫组化以及Masson染色观察外泌体在体内促进胰腺癌肝转移的细胞及分子机制;提取两种不同转移潜能细胞来源外泌体的蛋白质,采用iTRAQ定量蛋白质组学技术,鉴定胰腺癌细胞来源外泌体的蛋白质成分,筛选出肝转移相关差异蛋白进行Western Blot实验验证,并对差异蛋白进行生物信息学分析。结果超高速离心法联合密度梯度离心法成功从胰腺癌细胞培养液上清中提取并纯化外泌体,透射电镜观察到两种细胞来源的外泌体呈圆形或杯托形的囊泡状结构,直径集中在50150nm之间,Western Blot实验验证了两种外泌体均表达外泌体结构蛋白CD9,MHC-I,TSG101,Panc02-H7 EXO蛋白浓度高于Panc02 EXO;体外实验结果表明Panc02-H7 EXO容易被Panc02细胞所摄取,并能显着降低Panc02细胞的粘附特性,增加其迁移和侵袭能力,Panc02-H7 EXO可以增加Panc02细胞MMP-9,CXCR4的表达;尾静脉注射24 h后外泌体主要积聚在肺脏、肝脏以及脾脏,较少的分布在脑组织和骨髓中,Panc02-H7 EXO与Panc02 EXO相比更多积聚在肺脏、肝脏和骨髓;Panc02-H7EXO与Panc02 EXO可以动员并募集CD11b+和CD45+造血前体细胞至肝脏微环境,激活α-SMA+的肝星状细胞,诱导肝脏组织Fibronection,S100A8和S100A9表达上调产生肝脏预转移小生境,其中Panc02-H7 EXO效应强于Panc02 EXO;Panc02-H7 EXO与Panc02 EXO在体内促进Panc02细胞的侵袭与转移,募集F4/80+的巨噬细胞、α-SMA+的肝星状细胞以及中细粒细胞积聚在肝脏微环境,并诱导炎症因子Fibronection,S100A8和S100A9在肝脏表达上调及胶原纤维在肝脏组织中沉积,其中Panc02-H7 EXO效应强于Panc02 EXO;通过iTRAQ定量蛋白质组学分析我们共鉴定出4517个外泌体蛋白质,筛选出79个差异蛋白,其中33个蛋白表达上调,46的蛋白表达下调。生物信息学分析显示大多差异蛋白涉及胰腺癌的侵袭与转移,涉及到的主要信号通路为代谢相关的信号通路。结论联合超高速离心法和密度梯度离心法分离并纯化了胰腺癌细胞来源的外泌体简单、有效;高转移潜能胰腺癌来源的外泌体容易被受体细胞摄取,并能显着降低受体细胞的粘附特性,增加了其迁移和侵袭能力;胰腺癌细胞来源的外泌体具有亲器官分布的特征,并且可有效的诱导肝脏炎症和纤维转移微环境的形成;高转移潜能胰腺癌来源的外泌体在体内促进了胰腺癌原位移植瘤的生长、侵袭和转移的发生;采用iTRAQ定量蛋白质组学方法筛选出的转移相关差异蛋白,这些差异蛋白所涉及的分子功能和信号通路可能在胰腺癌的侵袭与转移过程中发挥重要作用,其具体机制及临床价值有待进一步研究。
高洪娇[5]（2019）在《穴位埋线对感觉神经肽SP与MC的影响及对OVA致敏原耐受能力影响的动物实验研究》文中研究指明目的:本次研究以穴位埋线具有较好的临床疗效且对神经源性炎症调控为前期基础,以穴位埋线对感觉神经肽SP与MC的影响以及穴位埋线对OVA致敏原浓度耐受能力和时间耐受能力的影响为研究方向,深入探讨穴位埋线对MPI/AR的作用机理。为穴位埋线对MPI/AR及AR的临床治疗提供更加可靠的理论依据。方法:1.以OVA致敏原建立SD大鼠AR模型和MPI/AR模型。将SD大鼠随机分为空白对照组、AR模型组、MPI/AR模型组、穴位埋线组、辣椒素组,每组各6只。穴位埋线组和辣椒素组以MPI/AR模型为基础分别进行穴位埋线和辣椒素滴鼻干预。干预2周后进行行为学观察、采血清（Elisa检测）、取鼻粘膜组织（He染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化检测、Western blot检测）。2.以OVA致敏原建立MPI/AR模型。将SD大鼠随机分为MPI/AR模型组、穴位埋线组、假埋线组,每组各16只。穴位埋线组和假埋线组以MPI/AR模型为基础分别进行穴位埋线和假埋线治疗。治疗2周后进行行为学观察、统计。然后将三组模型各分为A/B两组,各A组进行OVA致敏原浓度耐受实验,各B组进行OVA致敏原时间耐受实验。结果:1.穴位埋线对神经肽SP与MC的影响结果（1）各组SD大鼠的各项检测结果进行统计分析得出差异均有统计学意义（P<0.001）。且AR组各项检测结果均高于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。（2）行为学总评分统计结果表示:MPI/AR组与空白组差异有统计学意义（P<0.001）,与辣椒素组差异有统计学意义（P=0.024）,与穴位埋线组差异无统计学意义（P=0.375）,但是穴位埋线组行为学总评分具有下降的趋势。穴位埋线组与空白组差异有统计学意义（P=0.03）,与辣椒素组间差异无统计学意义（P=0.145）,但是辣椒素组行为学总评分具有下降的趋势。辣椒素组与空白组差异无统计学意义（P=0.083）,但是空白组行为学总评分具有下降的趋势。（3）He染色结果表示:AR组炎症情况最重,MPI/AR组次之;穴位埋线组、辣椒素组炎症情况较MPI/AR组轻,空白组最轻。（4）甲苯胺蓝染色结果表示:AR组与空白组差异有统计学意义（P=0.005）;与MPI/AR组差异有统计学意义（P=0.019）;与穴位埋线组差异有统计学意义（P=0.003）;与辣椒素组差异有统计学意义（P=0.003）。MPI/AR组与空白组之间的差异具有统计学意义（P=0.02）;与穴位埋线组差异有统计学意义（P=0.016）;与辣椒素组差异有统计学意义（P=0.006）。穴位埋线组与空白组间无统计学意义（P=0.993）;穴位埋线组与辣椒素组间无统计学意义（P=1.00）;辣椒素组与空白组间无统计学意义（P=0.878）。（5）SP免疫组化结果表示:AR组与MPI/AR组差异有统计学意义（P=0.009）。MPI/AR组与空白对照组、穴位埋线组差异均有统计学意义（P<0.001）;与辣椒素组差异也有统计学意义（P=0.001）。穴位埋线组与空白组间差异无统计学意义（P=0.956）;穴位埋线组与辣椒素组间差异无统计学意义（P=0.912）;辣椒素组与空白组间差异无统计学意义（P=0.956）。（6）Western blot检测结果表示:MPI/AR组与空白组间差异有统计学意义（P=0.004）;与穴位埋线组间差异有统计学意义（P=0.008）;与辣椒素组间差异有统计学意义（P=0.007）。穴位埋线组与空白组间差异无统计学意义（P=0.785）;穴位埋线组与辣椒素组间差异无统计学意义（P=0.975）;辣椒素组与空白组间差异无统计学意义（P=0.809）。（7）Elisa检测结果表示:MPI/AR组血清β-类胰蛋白酶浓度高于空白对照组、穴位埋线组与辣椒素组,且差异均有统计学意义（P<0.001）;穴位埋线组与空白组间差异无统计学意义（P=0.547）;穴位埋线组与辣椒素组间差异无统计学意义（P=0.733）;辣椒素组与空白组间差异无统计学意义（P=0.793）。2.穴位埋线对OVA致敏剂耐受能力的影响结果（1）行为学总评分统计结果表示:MPI/AR组行为学总评分最高,假埋线组次之,穴位埋线组最低。秩和检验得出各组差异具有统计学意义（P=0.012）。非参数检验两两比较,得出MPI/AR组与穴位埋线组差异具有统计学意义（P=0.009）。MPI/AR组与假埋线组差异没有统计学意义（P=0.265）;穴位埋线组与假埋线组差异没有统计学意义（P=0.634）。（2）耐受浓度及时间结果表示:穴位埋线组耐受平均浓度比假埋线组、MPI/AR组高。穴位埋线组平均耐受时间比假埋线组、MPI/AR组长。时间耐受统计结果得出各组间差异具有统计学意义（P=0.031）。其中MPI/AR B组与穴位埋线B组差异具有统计学意义（P=0.012）;MPI/AR B组与假埋线B组差异无统计学意义（P=0.497）;穴位埋线B组与假埋线B组差异无统计学意义（P=0.051）。结论:穴位埋线能改善SD大鼠MPI/AR相关行为学症状;减轻SD大鼠鼻粘膜MPI/AR炎症;降低鼻粘膜组织中肥大细胞数量、SP含量;降低鼻粘膜组织与血清中β—类胰蛋白酶水平。穴位埋线可增强MPI/AR模型SD大鼠对OVA致敏原浓度耐受能力和时间耐受能力。
胡永浩[6]（2020）在《CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究》文中研究表明背景:目前在临床实践中,对于那些患有终末期疾病或者患有先天性器官缺陷的患者,器官移植的实施已经成为了一种行之有效的治疗手段。免疫抑制剂的研发和应用在器官移植的发展过程中起到了不可或缺的作用,虽然现有的免疫抑制方案也在朝着个体化和联合用药的方向不断地进行优化,但是其长期应用仍然会带来许多免疫抑制剂相关的并发症,比如:感染、肿瘤和器官损伤等。此时,间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）的发现和应用,为抑制移植排斥反应带来了新的选择。MSC是一种多能干细胞,能够分化多种谱系包括脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。研究表明MSC能够抑制机体的免疫功能,而且在器官移植中应用能够使移植受体获益。与常用的免疫抑制剂相比,MSC更安全,也能避免免疫抑制剂相关的副作用。但是,若将MSC的应用于临床治疗,其也存在自身的局限性（有创的获取方式以及相关的并发症,有限的增殖能力以及来源短缺等）。然而,一种新发现的类间充质干细胞:子宫内膜再生细胞（Endometrial regenerative cell,ERC）,其不仅拥有与MSC相似的免疫调节功能,并且具有高增殖率、低免疫原性、广泛扩增等特点,最重要的是ERC能够无创的从无限来源的月经血中提取出来。不仅如此,相关的研究也已经发现ERC在器官移植中具有诱导免疫耐受和保护器官移植物的作用。然而,ERC发挥免疫抑制的机制尚不清楚,仍需要进一步的研究。与此同时,我们发现ERC表面能够表达5’-核苷酸外切酶（Ecto-5’-nucleotidase,CD73）。CD73是细胞外腺苷（Adenosine,ADO）生成过程中的限速酶,而ADO又可以与其下游的受体结合,发挥相应的生物学功能。因此,阐明ERC表达CD73对其在免疫调节过程中发挥作用的机制将会对ERC的应用具有极大的指导意义。所以,本课题聚焦于CD73表达对ERC在体内和体外调节免疫细胞过程中的影响和机理。课题的成功实施将会为ERC的临床转化和规范化应用提供坚实的理论和实践依据。目的:分离提纯ERC并验证其表面能够稳定表达CD73。探究ERC表面所表达的CD73的体外催化功能及其在体外培养中对树突状细胞、巨噬细胞和调节T细胞的调控作用。探讨CD73表达对ERC延长同种异体心脏移植物生存时间及抑制免疫排斥反应发生的作用机制。方法:本研究主要由三个部分构成:第一部分,从健康女性志愿者的月经血中提取ERC并进行体外培养;通过流式细胞术鉴定ERC的细胞表型;通过细胞的免疫荧光实验再次验证ERC表面CD73的表达。第二部分,使用Pi Color Lock TM磷酸检测试剂盒检测ERC表面的CD73在体外催化单磷酸腺苷（Adenosine monophosphate,AMP）分解为ADO的能力;通过体外培养研究CD73表达对ERC体外调控树突状细胞（Dendritic cell,DC）,巨噬细胞和调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）分化增殖能力的影响,并通过流式细胞术检测细胞群数量的变化。第三部分为体内实验,建立小鼠同种异体异位心脏移植模型;体内探究ERC表面表达CD73在其抑制小鼠同种异体异位心脏移植排斥反应中的作用以及相应的作用机制。结果:第一部分:成功的从志愿者的月经血中提取出ERC,并且实现了体外扩增;流式细胞术结果显示ERC可以稳定表达CD90、CD105、CD73,低表达CD39;ERC免疫荧光的结果也显示CD73表达在ERC的细胞膜上。第二部分:ERC表面的CD73在体外可以催化AMP水解为ADO,并且CD73的功能可以被抗CD73单克隆抗体阻滞;ERC表面的CD73被阻滞后其体外抑制成熟DC增殖的能力会下降,促进2型巨噬细胞（Macrophages type 2,M2）和Treg增殖的能力也会被抑制。第三部分:成功制备了小鼠同种异体异位心脏移植模型;ERC表面的CD73功能被阻滞后其延长移植物生存时间,减轻移植物病理改变,减轻CD4+和CD8+细胞浸润,上调耐受性树突状细胞（Tolerogenic dendritic cells,Tol-DC）、M2、Treg的比例,减少促炎因子IFN-γ和TNF-α分泌,增加抗炎因子IL-10分泌以及促进心肌组织A2B受体表达等功能均受到抑制。结论:通过三部分的实验研究,可以得出以下结论:1)可以从健康适龄女性志愿者的月经血中提取出表型稳定的ERC,并且ERC的表面可以稳定表达CD73。2)ERC表面表达的CD73体外具有催化AMP脱磷酸分解为ADO的能力,并且CD73的功能可以被抗CD73单克隆抗体阻滞,同时表达CD73对ERC发挥抑制DC细胞成熟、促进M2和Treg增殖的作用极其重要。3)表达CD73的ERC可以抑制小鼠同种异体心脏移植排斥反应,延长移心脏移植物的生存期。因此,课题的成功实施为ERC的临床转化和规范化应提供了理论和实践依据。
姚基伟[7]（2019）在《PMC神经元集群活动的排尿控制作用及初步机制研究》文中研究指明机体通过排尿活动将代谢废物排出体外,从而达到维持正常生命活动和体液平衡的目的。膀胱正常的生理功能是存储尿液和排空尿液,其神经调控机制极其复杂,需要在大脑、脊髓及外周神经系统的共同精细调控下完成。上述任意层面的损伤或病变,均可能引起神经源性膀胱功能障碍（neurogenic bladder dysfunction,NGB）。许多患有神经系统疾病的病人,如多发性硬化症、帕金森病、脊髓损伤和脊柱裂等,都伴有神经源性膀胱功能障碍。NGB常见的临床症状主要表现为尿频、尿急、尿失禁,有些患者甚至无法排尿以及伴有上尿路的感染。然而,我们现阶段对神经源性膀胱功能障碍的认识仍十分有限,其发病机理和病理生理过程亟待进一步研究。故深入解析调控膀胱的神经网络、探究生理性排尿行为的神经编码模式,将为神经源性膀胱功能障碍的诊断和治疗提供新的策略。全面解析大脑与膀胱间的神经环路结构,是研究大脑调控膀胱功能及相关病理生理机制的基石。近年来神经解剖示踪技术发展迅速,一种名为伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）的疱疹病毒横空出世,该病毒可以逆行跨越多级突触结构,使解析外周脏器与大脑之间的神经传导通路成为可能。此外,探究调控膀胱或排尿活动相关脑区的神经编码模式,是解析大脑调控膀胱和排尿活动神经机制的最佳策略。随着基因编码钙离子指标剂(genetically encoded Ca2+indicators,GECIs)和基因靶向技术的发展,基于光纤的神经钙活动探测技术（又称为光纤光度法）成为了当下最流行的解析神经活动模式的研究技术。该方法可以在自由活动且清醒小鼠任意脑区进行神经元集群活动的监测。光纤光度法主要通过检测神经元集群的钙活动（钙信号）,来反映这群神经元的平均簇状放电活动和动作电位发放水平。与传统的电生理技术相比,它具有易于上手、实验成本低和数据分析便捷等优势。通过运用上述两项技术,本课题旨在解析中枢神经系统与膀胱之间的神经环路连接结构,并揭示脑桥排尿中枢（pontine micturition center,PMC）神经元集群在排尿活动和膀胱不同状态下的活动特征和机制。我们主要开展了以下实验:（1）为了明确参与支配膀胱逼尿肌的神经元在脊髓和外周神经的分布情况,雄性小鼠膀胱注射PRV-EGFP4.5-5天后,我们对其脊髓和膀胱组织进行切片和免疫组化处理,再使用共聚焦显微成像技术观测PRV-EGFP标记的细胞在切片中的分布;或者运用荧光显微切片断层成像（Fluorescence Micro-Optical Sectioning Tomography,fMOST）技术直接对小鼠脊髓组织进行连续切片和荧光图片采集。（2）为了明确参与支配膀胱逼尿肌的脑区分布,雄性小鼠膀胱注射PRV-EGFP4.5-5天后,我们对其脑组织进行切片和免疫组化处理,再使用共聚焦显微成像技术观测PRV-EGFP标记的细胞在切片中的分布,或者运用fMOST技术直接对脑组织进行连续切片和荧光图片采集。为了明确雌性和雄性小鼠参与支配膀胱逼尿肌的脑区分布是否有差别,我们分别对雌性和雄性小鼠的膀胱进行了PRV-EGFP注射。为了明确膀胱感染PRV不同时间点对PRV脑内标记的影响,我们分别获取了膀胱感染PRV-EGFP3天、4天和4.5至5天的小鼠脑组织。为了明确参与支配膀胱逼尿肌不同部位的脑区是否存在差异,我们分别将PRV-EGFP和PRV-RFP注射入膀胱左右侧壁内。（3）为了明确参与支配膀胱逼尿肌的大脑皮层区域的具体定位,我们运用fMOST技术对PRV-EGFP标记的皮层区域进行连续切片和数据采集,并观测PRV-EGFP标记的皮层区域的具体位置;或者使用共聚焦显微成像技术观测PRV-EGFP标记的皮层区域的具体位置。（4）为了明确参与支配膀胱逼尿肌的PMC区的精准坐标,我们将共聚焦采集到的PMC形态学结果与经典小鼠脑图谱进行对比。为了明确PMC的上游脑区,我们通过脑内病毒注射技术将腺相关病毒（AAV-Retro-hSyn-EYFP）注射入小鼠的PMC脑区内,病毒表达一个月后,我们对小鼠脑组织进行切片,并使用共聚焦显微成像技术观测PRV-EGFP标记的细胞在脑内的分布。（5）为了明确PMC神经元集群的活动是否与清醒自由运动小鼠的排尿活动相关联,我们运用基于光纤的神经钙活动记录技术来探测PMC神经元集群的活动,并同步记录小鼠的排尿行为。（6）为了明确PMC神经元集群的活动是诱发小鼠排尿活动所必须的条件,我们通过将GABA受体的激动剂（muscimol）注入双侧PMC来阻断PMC神经元集群的活动,再评估小鼠排尿活动的变化情况。（7）为了明确PMC神经元集群的活动是否与膀胱逼尿肌的收缩相关联,我们运用基于光纤的神经钙活动记录技术来探测PMC神经元集群的钙活动,并同步记录小鼠（麻醉状态下或清醒自由活动状态下）的膀胱压力。（8）为了进一步验证PMC神经元集群的活动是否是膀胱逼尿肌收缩所必须的条件,我们运用基于光纤的神经钙活动记录技术来探测PMC神经元集群的钙活动,并同步记录不同麻醉方式下小鼠的膀胱压力（异氟烷和乌拉坦）。通过深度气体麻醉（2.5%异氟烷）的方式来阻断PMC的神经活动,再评估其对膀胱测压过程中逼尿肌周期性收缩的影响。主要研究结果:（1）PRV标记的神经元在小鼠脊髓和外周神经中的分布PRV-EGFP标记膀胱内的神经纤维,这些神经纤维来自于外周神经节内的神经元。在脊髓中,我们发现在腰骶髓中间外侧柱区域（the intermediolateral area,IML）、背侧灰质后连合（the dorsal gray commissure,DGC）和脊髓背角浅层（the superficial dorsal horn,SDH）均有PRV-EGFP标记的神经元;位于IML中的骶髓副交感神经元（the sacral parasympathetic preganglionic neurons,SPN）也感染了PRV-EGFP;在L1-L2中PRV-EGFP感染的神经元主要分布在这些脊髓层面的中间外侧柱区域（IML）和背侧灰质后连合（DGC）,而颈段脊髓鲜有PRV-EGFP感染的神经元。（n=5只雄性小鼠）（2）PRV标记的神经元在小鼠大脑内的分布PRV-EGFP标记的神经元主要分布在:脑桥排尿中枢（PMC）、网状核（gigantocellular reticular nucleus,Gi）、髓中缝核（Raphe nuclei）、蓝斑核（locus coeruleus,LC）、脑干A5细胞群组、中脑导水管灰质区（periaqueductal gray,PAG）、红核（Red nucleus）、下丘脑的内侧视前区（medial preoptic area,MPA）、下丘脑室旁核（paraventricular nucleus,PVN）、外侧下丘脑（lateral hypothalamic area,LH）和部分大脑皮层区域（n=5只雄性小鼠）。在对照组（PRV-EGFP注射入下腹壁）中,上述脑区均未发现PRV标记的神经元（n=3只雄性小鼠）。我们运用fMOST技术和三维重建法,率先绘制出了支配雄性小鼠膀胱逼尿肌相关脑内神经元的三维脑图谱。同一只雄性小鼠的膀胱左右侧壁分别注射PRV-EGFP和PRV-RFP病毒后,两种PRV感染的主要脑区相同;雌鼠膀胱注射PRV后,PRV感染的脑区与雄鼠的结果相同（n=3只小鼠/组）。PRV-EGFP注射3天后,大脑内仅在PMC和Gi区发现少量PRV-EGFP标记的神经元;PRV-EGFP注射4天后,上述主要脑区均出现PRV-EGFP标记的神经元（n=3只雄小鼠/组）。（3）PRV标记的神经元在大脑皮层的分布PRV-EGFP标记的小鼠大脑皮层区域为初级运动（primary motor cortex,M1）和感觉皮层（primary somatosensory cortex,S1）,这些神经元主要位于它们的第五层,从形态学上判断它们都是椎体神经元;通过fMOST技术和三维重建,我们明确了整个PRV-EGFP标记的皮层区域的范围（前后跨度约为960μm）和PRV-EGFP标记的皮层神经元总数目（约为970个,n=3只雄性小鼠）,PRV感染膀胱4天后皮层才出现PRV-EGFP标记的神经元（n=3只雄性小鼠）。上述结果提示皮层是PMC的上游脑区。（4）PRV标记的神经元在PMC的精确定位和PMC上游脑区的分布小鼠核心PMC区的坐标:AP为-5.45 mm,ML为±0.7 mm,DV为-3.15 mm。PMC的上游脑区,主要包括PAG、M1、S1、PVN、LH和前额叶皮层在内的多个脑区,这些区域内的神经元可以直接投射至PMC（n=3只雄性小鼠）。（5）PMC神经元集群的钙信号（神经活动）与清醒自由运动小鼠的排尿活动密切相关小鼠自主排尿活动时,实验组（PMC神经元表达GCaMP6f）小鼠可以稳定地记录到与排尿活动高度相关的钙信号,而对照组（PMC神经元表达EGFP）小鼠则未记录到与排尿活动高度相关的钙信号。定量对比显示实验组小鼠排尿过程中PMC神经元集群荧光强度变化的幅值明显高于对照组（PMC神经元表达GCaMP6f组,maxΔf/f=36.73%±4.90%;PMC神经元表达EGFP组,maxΔf/f=2.24%±0.66%;P<0.001;n=7只小鼠/组）。由于对照组小鼠未记录到明显的PMC神经元集群荧光强度变化,进一步证实了我们所记录到的小鼠排尿相关的钙活动,代表PMC神经元的激活反应,而不是小鼠运动引起的运动噪音或者是“伪信号”。进一步对实验组小鼠所记录到的自主排尿活动相关PMC神经元集群钙信号进行深入分析,我们发现排尿相关的PMC神经元集群的活动（钙信号）有以下几个特点:1.PMC区神经元集群钙信号的起始早于小鼠排尿活动的起始,提前的时间约为402±21 ms;2.实验组小鼠每次排尿活动都能记录到对应的PMC区神经元集群的钙信号,而对照组动物每次排尿活动都不能记录到PMC区神经元集群的钙活动,;3.对实验组动物排尿活动相对应的钙信号进行随机采样处理后（shuffled处理）,未发现与排尿活动相对应的钙活动;PMC区神经元集群钙信号的半高宽与小鼠排尿活动的持续时间,呈线性正相关的关系。（6）药理学阻断PMC神经元集群的活动后损伤小鼠的排尿活动先在腹腔注射2 ml生理盐水,增加小鼠单位时间内自主排尿活动的次数。在4小时实验过程中,与两种对照组小鼠（muscimol失效组,n=6只小鼠;PMC注射ACSF组,n=6只小鼠）相比,实验组小鼠（PMC注射muscimol组,n=9只小鼠）的排尿次数明显减少（P<0.01）,排尿的时间间隔和第一次排尿的潜伏期明显延长（P<0.01）,总排尿量减少（P<0.01）,但单次排尿的量显着增加（P<0.01）。部分实验组小鼠表现为急性充盈性尿失禁,另一部分实验组小鼠没有出现排尿活动。（7）PMC神经元集群的钙活动与小鼠膀胱逼尿肌的收缩功能密切相关在麻醉小鼠（乌拉坦）不同的膀胱灌注速度下,每次膀胱排尿性收缩过程中（尿液排空过程）,均会记录到与之相对应的PMC神经元集群的活动;而储尿过程中未见明显PMC神经元集群的钙信号。在自由活动的小鼠中,每次膀胱排尿性收缩过程中（尿液排空过程）,均会记录到与之相对应的PMC神经元集群的钙信号;而储尿过程中未见明显的PMC神经元集群的活动。相关性分析显示每次膀胱逼尿肌的收缩与PMC神经元集群的钙活动密切相关（data,0.51±0.08;shuffled,0.09±0.03;P<0.01;n=8只小鼠）。（8）抑制PMC神经元集群的钙活动损伤小鼠膀胱逼尿肌的收缩功能实验组（深度气体麻醉）PMC的神经活动被阻断后,无法记录到PMC神经元集群的钙活动,也不能记录到膀胱周期性的收缩活动;而对照组（乌拉坦麻醉）PMC的神经活动没有被阻断,可以记录到膀胱周期性的收缩活动（n=4只小鼠/组）。总结上述实验结果,本研究主要的结论有:大脑、脊髓和外周围神经构成了支配膀胱逼尿肌的多层次神经网络结构;整个膀胱逼尿肌接受相同脑区的神经支配;支配膀胱逼尿肌的脑神经网络不存在性别差异;位于M1和S1区第五层的椎体神经元参与支配膀胱逼尿肌;PMC有多个上游脑区,如皮层、PAG和LH等;PMC神经元集群的活动与排尿活动和膀胱逼尿肌的收缩功能密切相关;PMC神经元集群的激活是启动正常排尿活动和膀胱逼尿肌收缩的最基本条件。
何宁[8]（2018）在《肝移植供肝保护策略优化及机制研究》文中研究表明背景:由Starzl等进行的肝移植的成功,为肝衰竭由终末期疾病转变为可长期有效生存带来希望,同时也造成了器官供应无法满足肝移植要求的新困境。因此急需更好的器官保护策略方法,以通过使用边缘移植物来满足不断增长的器官需求。材料与方法:250-300g雄性SD大鼠及血红素加氧酶（heme oxygenase,HO）-1杂合子（HO-1+/-）和野生型（HO-1+/+）的大鼠用于本研究。本研究对远端缺血效应（remote ischemic conditioning,RIC）与传统的缺血后适应（ischemic postconditioning,IPostC）进行比较、对机器灌注（machine perfusion,MP）的流速、温度、氧合参数进行优化,并在此基础上研究MP与肝脏增生的相关性,以找到减少肝移植供肝损伤的最佳策略。结果:远端缺血间效应（remote ischemic preconditioning,RIPerC）通过抑制氧化应激和上调 PI3K/Akt/内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）/一氧化氮（nitricoxide,NO）通路,对肝移植缺血再灌注（ischemia reperfusion,I/R）损伤起到保护作用,而且这种保护作用效果与IPostC相似抑或更好;50%门静脉生理流速相比于150%生理流速减少剪切力损伤且避免了 12.5%生理流速灌注不足问题;在灌流液不携氧的前提下,低温保存效果优于亚常温及常温机器灌注（subnormothermic and normothermic machine perfusion,SMP and NMP）;灌流液中额外补充携氧可以进一步改善供肝保存效果。有关低温机器灌注（hypothermic machine perfusion,HMP）机制研究表明,HO-1低表达通过抑制增殖而不是细胞凋亡来降低HMP诱导的肝功能恢复,至少部分原因是下调肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）-Akt 轴而不是白介素（interleukin,IL）-6 和转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路。结论:RIC是减轻肝移植I/R损伤理想的干预方式;MP供肝保存优于SCS,保护机制与促进肝脏再生相关;低温携氧灌注仍是相对简单有效的方法,门静脉流速以50%生理流速为佳,仍需进一步研发理想携氧灌流液。第一部分 远端缺血间效应可预防大鼠肝脏移植后缺血/再灌注损伤:ROS/RNS和eNOS的作用研究背景:我们以前的研究成功建立了大鼠肝移植RIC的新型模型,并已证明其对I/R损伤的保护作用。本文我们将进一步研究其潜在的机制。材料方法:随机将Sprague-Dawley大鼠分为4组:假手术组,原位标准肝移植（orthotopic liver transplantation,OLT）组,IPostC 组和 RIPerC 组。再灌注 3h 后,取血样用于测定 ALT,AST,肌酐（creatinine,Cr）和肌酸激酶同工酶（creatinine kinase-myocardial band,CK-MB）。取肝叶组织分别使用 ROS/过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）,JC-1和总NOx测定试剂盒用于以下指标测量:ROS,H202,线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,ΔΨm）和总NOx。这些测量分别使用通过逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）和蛋白质印迹法分析eNOS含量,并通过蛋白质印迹法测定三硝基酪氨酸半定量过氧亚硝酸盐。结果:与OLT组相比,RIPerC组肝脏移植物和远隔器官功能明显改善（P<0.05）。与假手术组相比,OLT组的ROS（P<0.001）包括H2O2（P<0.05）明显升高,RIPerC（P<0.05）逆转了这一趋势。OLT组I/R损伤引起的ΔΨm的降低在RIPerC组中明显减弱（P<0.001）。与OLT组相比,RIPerC组肝脏移植物中NO和磷酸丝氨酸eNOS的蛋白质和mRNA水平的均明显增加（P<0.05）。与OLT组相比,RIPerC组I/R诱导的3-硝基酪氨酸含量显着降低（P<0.05）。除了 Cr之外,RIPerC和IPostC组之间的所有结果没有显着差异。RIPerC组的Cr水平低于IPostC组（P<0.01）。结论:RIPerC通过抑制氧化应激和上调PI3K/Akt/eNOS/NO通路,对肝移植I/R损伤起到保护作用,而且这种保护作用效果与IPostC相似抑或更好。第二部分 优化离体供肝机器灌注的关键参数背景:肝移植被认为是终末肝衰竭患者治疗的黄金标准。许多研究表明MP优于SCS,特别是随着ECD以及DCD等边缘供肝的使用越来越多后研究更加深入。但是,对MP的关键参数如流速、温度和氧合没有共识。方法:实验基于我们以前研发的机器灌注系统进行。根据不同速度,分为6组:静态冷保存组,12.5%流速组,25%流速组,50%流速组,100%流速组和150%流速组;根据不同温度,分3组:0-4℃组,20℃组,37℃组;根据是否加氧,分为两组:空气组和95%O2+5%CO2组,灌注离体供肝6-24h后,收集灌注液用于肝功能检测,收集肝组织用于HE染色,及髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、丙二醛（malonaldehyde,MDA）和腺苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）检测,同时监测门静脉压力和速度。结果:50%门静脉生理流速相比于150%生理流速减少剪切力损伤且避免了 12.5%生理流速灌注不足问题;在灌流液不携氧的前提下,低温保存效果优于常温及亚常温;灌流液中额外补充携氧可以进一步改善供肝保存效果,UW与HTK液携氧效果仍不理想。结论:低温携氧灌注仍是相对简单有效的方法,门静脉流速以50%生理流速为佳。第三部分 HO-1的低表达抑制HMP诱导的肝增生从而减弱了对大鼠肝损伤保护作用背景:我们前期研究发现与SCS相比,HMP能够通过促进肝脏增生起到保护肝脏移植物的作用,但具体的机制不清楚。据报道,HO-1在促进肝细胞增殖中起关键作用。在此我们研究了 HO-1 在 HMP 对半肝移植（half-size liver transplantation,HSLT）移植物保护中的作用。方法和材料:本实验用HO-1（HO-1+/-）杂合子和野生型（HO-1+/+）的大鼠,进行体内(减体积供肝在体外进行3h SCS或HMP后移入体内和体外试验（供肝在体外进行6h SCS或HMP）。体外组0,1,3和6 h和体内组HSLT后1,3和7d,收集灌注液和血浆样品用于肝功能分析。体外保存6h,体内HSLT7d后获得肝脏用于确定再生率（regeneration ratio,RR）,并将部分肝组织于10%中性福尔马林中固定,用于组织学和免疫组织化学分析。结果:我们发现HSLT诱导再生肝中HO-1蛋白水平显着升高,HO-1单倍体缺失导致HSLT后增殖减少。HMP诱导HO-1蛋白水平显着升高,且体内外实验肝功能恢复优于SCS,HO-1单倍体缺失则抑制了这种趋势。HO-1单倍体诱导的增殖减少,而不是细胞凋亡导致体内外实验中HMP再生能力的减弱。这种现象可能是由于抑制HO-1表达导致HGF/Akt通路活性的降低所致。结论:我们的研究结果表明,HO-1低表达通过抑制增殖而不是细胞凋亡来降低HMP诱导的HSLT肝功能恢复,至少部分原因是下调HGF/Akt轴而不是IL-6和TGF-β信号通路。
贾方[9]（2020）在《NOD1受体激动剂保护LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的作用及机制研究》文中研究指明背景:急性肝衰竭（Acute liver failure,ALF）也称为爆发性肝衰竭或爆发性肝炎,是一种罕见但高致死率的疾病。ALF是一个复杂的累及多器官功能的过程,随着病程的发展,可出现脑水肿、肾功能衰竭、呼吸功能衰竭、血流动力学障碍及凝血障碍。当发生严重的肝功能障碍时,除了对相关并发症的支持治疗及护理,肝移植仍是治疗急性肝衰竭的最终手段,但是因为移植条件的限制,只有不到10%的肝移植患者因为急性肝衰竭得到移植治疗。因此迫切需要探寻治疗急性肝衰竭的新方法。肝脏是机体最大的实质器官,其中富含免疫细胞,肝脏局部的免疫状态需要进行非常精细的调节来达到自身的免疫稳态,而急性肝衰竭形成的一个重要条件就是免疫细胞过渡活化,形成炎症风暴,攻击肝细胞而导致其凋亡、坏死,最终导致肝功能衰竭。小鼠LPS（lipopolysaccharide）/D-GalN（D-galactosamine hydrochloride）模型目前被广泛用于急性肝衰竭的机制和药物开发当中。LPS与LBP（LPS-binding protein）结合后进一步与肝脏枯否细胞（Kupffer cells）上的Toll样受体4（TLR4）结合激活免疫反应,进而产生大量的炎症因子,这其中在早期分泌的TNF-α起主导作用,其可与肝细胞表面的TNFR1结合而诱发细胞毒性作用,通过上调凋亡相关蛋白的表达而导致肝细胞凋亡异常增加。NOD1受体是模式识别受体NLRs（NOD-like receptors）家族的重要成员,其可通过感应病原菌或肠道共生菌的细胞壁成分肽降解产物二氨基庚二酸（Diaminopimelic acid,DAP）来激活免疫细胞。NOD1蛋白在机体中表达非常广泛,除免疫细胞外,在各组织细胞中如上皮细胞、基质细胞、内皮细胞中均可表达。不仅肝脏免疫细胞可以表达NOD1受体,占肝脏细胞总量70%的肝实质细胞也可表达NOD1受体,并且在肝脏的免疫防御中也充当着重要的作用。因此,NOD1受体的活动与肝脏的免疫状态息息相关。由于既往尚未报道过NOD1受体在急性肝衰竭中的作用,其在急性肝衰竭中的作用机制尚不清楚。因此,探讨NOD1受体在急性肝衰竭中的调控作用及潜在机制对急性肝衰竭的防治具有重要的意义。第一部分NOD1受体激动剂预干预可减轻LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭目的:本课题主要为探索NOD1受体的预先激活对LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的可能影响;预先干预NOD1受体激动剂是否可以拮抗LPS/D-GalN诱导的肝细胞死亡,同时尝试阐明其中的可能机制,从而探讨NOD1受体在肝脏中的功能及在急性肝衰竭的临床防治提供新的思路。方法:1.使用不同剂量的NOD1受体激动剂——C14-Tri-LAN-Gly,（5μg/只、10μg/只）腹腔注射预先干预小鼠6h后,LPS（7.5μg/kg）/D-GalN（500mg/kg）联合腹腔注射诱导ALF,对照组注射等体积的PBS,连续观察36小时,制作生存曲线,了解NOD1受体激动剂预干预对小鼠生存率的影响。2.使用C14-Tri-LAN-Gly腹腔注射预先干预小鼠6h后,LPS/DGalN联合腹腔注射诱导ALF,对照组注射等体积的PBS,检测血清ALT水平,肝组织H&E染色,了解NOD1预干预对LPS/D-GalN诱导的肝损伤的影响。3.对比NOD1激动剂预干预后小鼠的肝组织TUNEL染色结果,另外提取小鼠肝组织的总蛋白,通过Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,以确定NOD1激动剂预干预对肝细胞凋亡的影响。4.C14-Tri-LAN-Gly预干预后6小时,再LPS/D-GalN联合注射后2小时后收集小鼠血清及肝组织,Elisa检测血清及肝组织匀浆中的TNF-α水平。分离小鼠肝脏的单个核细胞,流式细胞术检测肝脏中免疫细胞频数及其表面CD69的表达情况,使用流式细胞术检测F4/80阳性细胞上TLR4的表达是否存在差异。结果:1.两种剂量的C14-Tri-LAN-Gly预干预后,小鼠对LPS/D-GalN诱导ALF后的36小时生存曲线与对照组相比存在明显差异,提示NOD1激动剂预干预可明显改善LPS/D-GalN导致的小鼠死亡。2.LPS/D-GalN联合诱导急性肝衰竭后,C14-Tri-LAN-Gly预干预的小鼠血清ALT水平明显降低,肝组织H&E染色提示肝脏组织坏死及炎症减少。3.C14-Tri-LAN-Gly预干预的小鼠其肝组织TUNEL染色提示肝细胞凋亡减少,Western blot结果显示凋亡蛋白cleaved caspase-3表达下调。4.C14-Tri-LAN-Gly预干预的小鼠外周血及肝组织内TNF-α水平未见明显变化,流式细胞检测到肝组织内NK、NKT、T细胞频数及其表面CD69的表达也未变化。Kupffer细胞表面的TLR4水平并未下调。结论:NOD1受体激动剂预干预可改善LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭,并且NOD1激动剂干预后不影响TNF-α的分泌及Kupffer细胞表面TLR4的表达。第二部分NOD1受体激动剂通过上调抗凋亡分子A20的表达拮抗LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭目的:1.通过NOD1激动剂干预TNF-α/D-GalN诱导的急性肝衰竭来进一步探索其保护机制。2.检测NOD1激动剂干预后肝脏抗凋亡分子的表达来探索其抗凋亡作用机制。3.进一步阐述NOD1激动剂保护LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的机制。方法:1.使用C14-Tri-LAN-Gly预干预小鼠后,观察其对TNF-α/D-GalN诱导的ALF的36小时生存曲线,检测TNF-α/D-GalN注射后6小时血清ALT水平、肝组织H&E染色、肝组织TUNEL染色和肝组织凋亡蛋白的表达。2.C14-Tri-LAN-Gly及LPS/D-GalN干预后,分离小鼠肝实质细胞,使用anti-TNFR1流式抗体标记细胞,流式细胞术检测肝实质细胞表面的TNFR1的表达情况。3.Western blot及RT-qPCR检测诱导小鼠肝组织内抗凋亡分子的表达情况。4.单独使用C14-Tri-LAN-Gly干预小鼠,Western blot及RT-qPCR检测抗凋亡分子A20的表达。5.shRNA尾静脉水动力高压注射干扰小鼠肝脏A20表达,检测干扰A20表达后肝组织损伤及细胞凋亡情况。6.提取小鼠原代肝实质细胞,使用C14-Tri-LAN-Gly体外刺激小鼠原代肝实质细胞,检测体外直接刺激肝实质细胞后A20的mRNA及蛋白水平表达变化。7.使用clodronate-liposomes尾静脉注射清除小鼠Kupffer细胞,之后注射C14-Tri-LAN-Gly诱导A20表达上调,检测清除Kupffer细胞对A20表达的影响。结果:1.C14-Tri-LAN-Gly预干预可改善TNF-α/D-GalN诱导的急性肝衰竭的小鼠生存率,可降低血清ALT水平,减少肝脏损伤,降低肝细胞的凋亡。2.小鼠肝实质细胞表面的TNFR1的表达并未因为C14-Tri-LANGly受到明显影响。3.C14-Tri-LAN-Gly预干预后小鼠肝组织抗凋亡分子A20的mRNA及蛋白水平表达均明显上调。4.使用C14-Tri-LAN-Gly单独干预小鼠,同样发现A20的蛋白及mRNA水平明显上调。5.shRNA干扰小鼠肝脏A20表达后,C14-Tri-LAN-Gly对LPS/DGalN的保护作用被废除。6.体外C14-Tri-LAN-Gly刺激原代肝实质细胞,未发现A20的mRNA或蛋白表达上调。7.Kupffer细胞清除后废除了C14-Tri-LAN-Gly诱导的小鼠肝脏A20的mRNA及蛋白表达上调。结论:NOD1受体激动剂通过上调肝细胞抗凋亡分子A20的表达拮抗LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭,而这种作用是通过肝内Kupffer细胞介导的。
唐波[10]（2018）在《树鼩肝移植急性排斥反应中CXCL12/CXCR4作用的实验研究》文中研究指明第一部分树鼩原位肝移植模型的建立[目的]首次尝试用树鼩建立同种异体原位肝移植动物模型,为肝移植的临床及科学研究提供一种新型的,与人类基因型及免疫系统同源性更高,且更为经济实用的肝移植动物模型。[方法]在Kamada报道的“二袖套”法肝移植模型基础上加以改进,通过对总共60只树鼩进行随机分组为供体组和受体组进行同种异体原位肝移植实验,观察手术成功率,术后树鼩存活率,并行肝脏组织病理学检查,建立稳定的树鼩原位肝移植模型。[结果]定型手术成功率为90.00%（27/30）,树鼩24h存活率为76.67%（23/30）,3 天存活率为 60.00%（18/30）,1 周存活率为 30.00%（9/30）,最长存活时间为11天。3例手术失败原因为:肝上下腔静脉吻合口出血,麻醉过深,气胸死亡各1例。24h内死亡4例,其中1例因吻合口出血,1例吻合口血栓形成,2例死亡原因不明。术后存活超24h死亡23例,原因分别为急性排斥反应15例,占65.22%,其它为:胆道梗阻1例,腹腔感染2例,肝叶坏死1例,不明原因4例。[结论]1树鼩原位肝移植模型建立的难度及操作复杂性比大鼠肝移植更大,综合影响因素更多。合理的围手术期处理及娴熟的显微镜操作是影响肝原位移植模型手术成功的关键。2树鼩肝移植模型成功建立为本研究的创新点,目前未见报道,首次成功用树鼩建立了同种异体原位肝移植模型,作为一种新型动物肝移植模型的建立——改良“二袖套”法在树鼩原位肝移植模型的建立,模型稳定可靠,为今后将树鼩原位肝移植模型运用于肝移植的临床及基础研究奠定了基础。第二部分树鼩淋巴细胞CXCL12/CXCR4基因表达和迁移的体外实验研究[目的]研究雷帕霉素对树鼩外周血淋巴细胞趋化因子CXCL12（SDF-1）趋化功能及其受体CXCR4表达的影响,为移植排斥体内研究提供实验依据。[方法]实验分组:Rapacymin药物组、DMSO对照组和空白组。采用MTS细胞增殖实验,观察雷帕霉素对树鼩淋巴细胞存活及状态的影响;用细胞迁移运动实验检测雷帕霉素对人源性重组CXCL12所诱导树鼩淋巴细胞迁移能力的影响:使用Real-time PCR法检测雷帕霉素对树鼩淋巴细胞CXCR4基因的表达情况。[结果]雷帕霉素对树鼩淋巴细胞活力无显着影响,但对树鼩的淋巴细胞的迁移有抑制作用。同时雷帕霉素可下调树鼩淋巴细胞的CXCR4基因表达。[结论]趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达水平可影响淋巴细胞迁移,为树鼩肝移植急性排斥反应体内实验研究提供依据。第三部分树鼩肝移植急性排斥反应中CXCL12/CXCR4表达的作用及机制研究[目的]在肝移植模型建立的基础上加用免疫抑制剂及趋化因子受体阻止剂对趋化因子及其受体的作用进行实验研究。通过表达的差异性,阐明肝移植急性排斥中趋化因子/趋化因子受体（CXCL12/CXCR4）轴调控淋巴细胞迁移发挥的作用和机理等系列问题。为肝移植急性排斥反应发生机制提供重要依据,同时为临床有效的治疗和控制急性排斥反应,促进移植物存活提供实验数据和理论支持。[方法]1树鼩肝移植急性排斥反应模型建立,方法同第一部分。2实验分组;（1）对照组,A组（n=25）:正常树鼩作为对照;（2）排斥组,B组（n=25）:树鼩同种异基因肝移植组;（3）AMD3100组,C组（n=25）:树鼩同种异基因肝移植静脉注射AMD3100,1mg/kg/day;（4）雷帕霉素（Rapacymin,RAPA）抑制组,D组（n=25）。术后1、3、5、7d随机处死5只,收集血液、肝脏、脾脏标本。留下5只观察生存期,绘制生存曲线。3 实验室常规指标测定:收集各组肝移植术后1d,3d,5d,7d的血清,使用血液全自动生化分析仪测定TP,ALT,AST,TB水平。4流式细胞仪检测淋巴细胞CXCR4:分别在肝移植术后1d,3d,5d,7d,收集脾脏淋巴细胞,进行分离、培养,流式细胞检测。5移植物组织形态及病理学检测:免疫组织化学染色（IHC）检测并分析CXCL12的表达情况。肝组织HE染色病理学检查,根据Banff评分系统判断排斥反应程度。6酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中CXCL12（SDF-1）蛋白量。7组织蛋白印迹（Western blot）分析与检测各组移植肝的CXCR4蛋白表达情况。[结果]1 C、D组树鼩移植后中位生存时间明显长于B组,差异有显着意义（P<0.05）,各组与 A 组比较,（P<0.05）。2树鼩肝移植术后实验室常规检查指标:对比各组树鼩肝移植术后1d,3d,5d,7d的相关指标。血清TP同时间点各组之间相比较,B、C、D组明显低于A组,差异有显着性（P<0.05）。而1d时,B、C、D,TP开始下降,但三组间比较,无显着性差异（P>0.05）。B组呈持续性下降,而C、D组术后5d、7d随着时间延长,开始恢复,呈上升趋势,C、D组5d,7d时点与B组比较,差异有显着性（P<0.05）。D组3d后,TP上升略高于C组,但两组统计无差异（P>0.05）。B组,C组,D组术后血清TB,ALT,AST,急剧上升,与A组在1d,3d,5d,7d同期比较,明显高于A组,差异有显着性（P<0.05）。B组持续性升高,而C、D组术后5d、7d随着时间延长,肝功能开始恢复,略有上升趋势,但较平缓,C、D组5d,7d时点与B组比较,差异有显着性（P<0.05）。而1d时,B、C、D三组间比较,无显着性差异（P>0.05）。3外周脾淋巴细胞流式细胞检测:术后1d、3d,B、C、D组间脾脏淋巴CXCR4表达无明显差异（p>0.05）,与A组有显着性差异（P<0.05）。术后5d、7d各时间点,C、D组明显低于B组,差异有显着性（P<0.05）。4移植肝脏形态学检测:采用Banff分级对移植肝脏AR的程度进行分级,A组术后各时间点,移植肝脏组织结构正常;B、C、D组1d肝小叶结构基本完好,肝细胞基本无变性、坏死,汇管区仅有少许炎性细胞浸润,未发生排斥;B组移植术后Id排斥不明确,在术后第3、5、7 d分别发生了轻度（Ⅰ级）、中度（Ⅱ级）、重度（Ⅲ级）排斥;C、D组术后3天到10天内,有少数发生了轻度AR。B组与C,D组同期比较排斥反应更为严重（P<0.05）。B组,术后3d可有明确的急性排斥反应发生。5免疫组化检测肝脏CXCL12表达:术后第7d B组CXCL12在肝脏细胞表达最高,C组、D组肝细胞CXCL12表达少,C组、D组与B组比较有显着性差异（P<0.05）。A组正常组织也有较少量的CXCL12表达,但与B组、C组、D组比较有显着性差异（P<0.05）。6酶联免疫吸附法检测树鼩外周血浆中CXCL12蛋白的表达:肝移植后`d,B组,C组,D组血清CXCL12表达相互比较均无明显差异（P>0.05）,与A组相比有显着差异（P<0.01）。移植术后3d,B组血清中CXCL12快速上升,与术前`d的表达水平相比较,有显着差别（P<0.05）,并随时间上调。C组、D组表达水平在术后5d,7d天上升缓慢,与B组同时间点比较表达水平低（P<0.05）。CXCL12蛋白的表达变化与RAI呈正相关,相关系数（r）为0.880。7 Western蛋白印迹分析检测:术后第1d各组树鼩移植肝内CXCR4蛋白表达无明显差异（P>0.05）。而术后第3d、5d、7d各时段A组、C组、D组树鼩淋巴细胞表达CXCR4蛋白明显低于B组（P<0.05）。C组、D组术后CXCR4蛋白表达高于A组（P<0.05）,而C组、D组两组之间第3d、5d、7d 比较CXCR4蛋白表达差异不明显（P>0.05）。[结论]1树鼩与人同源性较好,可用人的相关试剂应用在树鼩实验研究上,本实验研究结果的可靠性,进一步证实树鼩肝移植模型可应用于肝移植的系列实验研究中,并具有物种的优越性和价值。2树鼩肝移植模型急性排斥反应研究证实,正常肝组织有CXCL12表达,急性排斥时,可与CXCR4协同发生淋巴细胞、炎性细胞迁移至移植物,引起移植肝功能不全或受损。3趋化因子受体抑制剂AMD3100可阻断CXCL12/CXCR4轴在肝移植排斥中的作用,抑制T淋巴细胞向移植物浸润,减轻急性排斥反应。4雷帕霉素可抑制CXCL12人重组蛋白诱导的树鼩淋巴细胞迁移。其相关可能的机制为:雷帕霉素可下调CXCL12的激活与表达,并影响CXCR4受体的表达,以调控CXCL12/CXCR4信号通路所介导的淋巴细胞的运动能力,发挥其免疫抑制作用。5肝移植后CXCL12/CXCR4的表达水平与急性排斥反应的程度密切相关,表达水平与排斥反应强度有关,可评估免疫排斥反应状态。6 CXCL12血清中持续高表达可较敏感地预示肝移植急性排斥发生。检测血清CXCL12表达可作为一种无创的、敏感的早期诊断肝移植急性排斥反应的方法,为临床监测和诊断提供参考依据。并且可通过CXCL12的表达水平在一定程度上预测排斥反应的严重程度和判断抗排斥反应的治疗效果。
二、肝脏对各种缝线反应的动物实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝脏对各种缝线反应的动物实验研究（论文提纲范文）
（2）包虫病所致过敏反应中免疫耐受机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 包虫病所致过敏反应小鼠动物模型的建立与评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 免疫耐受在包虫病所致过敏反应中的作用 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 地塞米松对包虫病所致过敏反应免疫耐受的影响及机制 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 免疫耐受在蠕虫感染及过敏反应中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（3）1. XJ-1器官保存液的研制及TLSFJM对大鼠肝、心移植急性排斥反应防治作用的实验研究 2. 我国首例血缘关系活体肝移植患者的临床观察（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 大鼠肝脏和心脏移植模型的建立 |
| 前言 |
| 第一节 文献回顾 |
| 一、大动物肝脏移植模型 |
| 二、大鼠肝移植模型 |
| 三、大鼠肝移植急性排斥反应模型 |
| 四、大鼠异位心脏移植模型 |
| 第二节 “三袖套”法大鼠原位肝移植模型的建立 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 “双袖套”法大鼠原位肝移植模型的建立 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第五节 大鼠异位心脏移植模型的建立 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第六节 大鼠异位心脏移植急性排斥反应模型的建立 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第一部分小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 XJ-1器官保存液对大鼠供肝、供心的保护作用 |
| 前言 |
| 第一节 文献回顾 |
| 一、肝脏保存的历史 |
| 二、心脏保存的历史 |
| 三、器官保存损伤的机制 |
| 四、提高器官保存质量的对策 |
| 第二节 XJ-1保存液对大鼠供肝的保护作用 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 XJ-1保存液对大鼠供心的保护作用 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二部分小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TLSF_(JM)在防治大鼠肝、心移植急性排斥反应中的作用及机制 |
| 前言 |
| 第一节 文献回顾 |
| 一、免疫抑制剂的发展史 |
| 二、免疫排斥反应的发生过程 |
| 三、常用免疫抑制剂的分类及作用机制 |
| 四、免疫抑制剂抗排斥作用机制的研究方法 |
| 五、免疫抑制因子的研究进展 |
| 六、有关TLSF_(JM)的研究现状 |
| 第二节 TLSF_(JM)在防治大鼠肝移植急性排斥反应中的作用 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 TLSF_(JM)在防治大鼠心移植急性排斥反应中的作用 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 TLSF_(JM)在防治器官移植急性排斥反应中的作用机制 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三部分小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 我国首例血缘关系活体肝移植患者的临床观察 |
| 前言 |
| 第一节 文献回顾 |
| 一、世界肝移植的历史 |
| 二、我国肝移植的历史 |
| 第二节 活体肝部分移植术的发展及现状 |
| 一、活体肝部分移植的产生和发展 |
| 二、活体肝部分移植的现状 |
| 三、活体肝部分移植术存在的问题 |
| 四、活体肝部分移植术的发展趋势 |
| 第三节 病例介绍 |
| 一、受体情况 |
| 二、供体情况 |
| 三、供体手术 |
| 四、受体手术 |
| 五、术后治疗和结果 |
| 第四节 观察方法 |
| 一、资料来源 |
| 二、有关免疫学指标和检测方法 |
| 第五节 观察结果 |
| 一、术后早期外周血细胞分析及出凝血功能的变化 |
| 二、术后肝功能的动态变化 |
| 三、术后肾功能的动态变化 |
| 四、术后早期能量代谢的变化及营养管理 |
| 五、术后免疫抑制治疗方法 |
| 六、术后免疫功能的监测结果 |
| 七、术后生长发育状况的变化 |
| 八、术后主要并发症 |
| 第六节 讨论 |
| 一、活体肝部分移植适应证和手术时机的选择 |
| 二、供肝切取的手术技巧 |
| 三、供肝的处理 |
| 四、受体手术技巧 |
| 五、引流管的设置和处理 |
| 六、术后早期管理 |
| 七、术后出凝血功能的调控 |
| 八、围手术期的输血治疗 |
| 九、术后腹腔内出血原因及防治对策 |
| 十、围手术期感染的防治 |
| 十一、呼吸感染的防治对策 |
| 十二、术后口腔粘膜病变的诊治 |
| 十三、围手术期的营养管理 |
| 十四、免疫抑制治疗 |
| 十五、免疫监测 |
| 十六、术后中、长期管理 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（4）胰腺癌来源的外泌体在肝转移中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 胰腺癌细胞来源外泌体的提取及在体内外促进肝转移的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 第二部分 胰腺癌来源的外泌体iTRAQ定量蛋白组学分析 |
| 1 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 在读博士研究生期间科研成果如下 |
| 致谢 |
（5）穴位埋线对感觉神经肽SP与MC的影响及对OVA致敏原耐受能力影响的动物实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 一、选题背景 |
| 1 变应性鼻炎临床现状 |
| 1.1 变应性鼻炎患者人数日益增加 |
| 1.2 复发变应性鼻炎患者人数日益增加 |
| 1.3 变应性鼻炎的治疗 |
| 2 变应性鼻炎科研现状 |
| 2.1 变应性鼻炎机制的探索 |
| 2.2 中医传统疗法对变应性鼻炎机制的探索 |
| 二、所选课题的目的和意义 |
| 三、研究内容 |
| 第一部分 穴位埋线对感觉神经肽SP与 MC的影响 |
| 一、研究方法 |
| 1 实验使用材料 |
| 1.1 实验使用动物 |
| 1.2 实验使用试剂 |
| 1.3 实验使用耗材 |
| 1.4 实验使用仪器 |
| 2 实验使用方法 |
| 2.1 实验试剂配制方法 |
| 2.2 实验分组及造模方法 |
| 3 实验检测 |
| 3.1 动物模型行为学指标评分 |
| 3.2 实验样本采集与处理 |
| 4 统计学分析 |
| 二、实验结果 |
| 1 各组SD大鼠的行为学观察与评分 |
| 1.1 各组SD大鼠的鼻部症状 |
| 1.2 各组SD大鼠的行为学评分结果 |
| 2 各组SD大鼠鼻粘膜组织检测结果 |
| 2.1 各组SD大鼠鼻粘膜组织HE染色病检结果 |
| 2.2 各组SD大鼠鼻粘膜组织甲苯胺蓝染色病检结果 |
| 2.3 免疫组织化学法检测鼻粘膜P物质(SP)表达情况 |
| 2.4 Western blot 检测鼻粘膜β-类胰蛋白酶结果 |
| 2.5 血清ELISA检测β-类胰蛋白酶结果 |
| 三、讨论 |
| 1 SD大鼠最轻持续性炎症模型(MPI/AR模型)的建立 |
| 1.1 变应性鼻炎的认识 |
| 1.2 变应性鼻炎最轻持续性炎症反应的认识 |
| 1.3 MPI/AR模型的建立 |
| 1.4 造模过程中的症状表现 |
| 1.5 造模过程对肺组织的影响 |
| 2 干预方式的选择 |
| 2.1 穴位埋线 |
| 2.2 辣椒素 |
| 3 实验检测指标的选择 |
| 3.1 肥大细胞与MPI/AR的关系 |
| 3.2 SP与 MPI/AR的关系 |
| 3.3 MC与 SP的关系 |
| 四、结论 |
| 五、展望与不足 |
| 第二部分 穴位埋线对OVA致敏原耐受能力的影响 |
| 一、研究方法 |
| 1 实验使用材料 |
| 1.1 实验使用动物 |
| 1.2 实验使用试剂 |
| 1.3 实验使用耗材 |
| 1.4 实验使用仪器 |
| 2 实验使用方法 |
| 2.1 实验试剂配制方法 |
| 2.2 实验分组及造模方法 |
| 2.3 动物模型AR症状复发的验证过程 |
| 3 动物模型行为学指标评分 |
| 4 统计学分析 |
| 二、实验结果 |
| 1 各组SD大鼠的行为学观察与评分 |
| 1.1 各组SD大鼠的二次干预前行为学观察 |
| 1.2 各组SD大鼠的二次干预前行为学评分结果 |
| 2 各A组 SD大鼠的二次干预后平均浓度 |
| 3 各B组 SD大鼠的二次干预后平耐受时间 |
| 三、讨论 |
| 1 假埋线干预方式的选择 |
| 2 穴位埋线对OVA致敏原浓度耐受能力的探索 |
| 3 穴位埋线对OVA致敏原时间耐受能力的探索 |
| 四、结论 |
| 五、展望与不足 |
| 全文总结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（6）CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、ERC的提取、培养、细胞表型鉴定以及CD73表达情况的鉴定 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 ERC的提取和培养 |
| 1.1.2 ERC的形态学观测 |
| 1.1.3 ERC的细胞表型鉴定 |
| 1.1.4 CD73的免疫荧光 |
| 1.1.5 主要仪器、耗材、试剂 |
| 1.1.6 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 ERC的形态 |
| 1.2.2 细胞表型鉴定结果 |
| 1.2.3 ERC表面CD73免疫荧光结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、ERC表面表达的CD73的体外功能研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 ERC细胞悬液的制备 |
| 2.1.2 ERC表面CD73的体外催化功能研究 |
| 2.1.3 小鼠脾脏细胞悬液的制备 |
| 2.1.4 抗CD73抗体预处理的ERC |
| 2.1.5 体外细胞共培养实验 |
| 2.1.6 流式细胞技术 |
| 2.1.7 主要仪器耗材和实验试剂 |
| 2.1.8 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 ERC表达的CD73能够体外催化AMP脱磷酸形成ADO |
| 2.2.2 表达CD73的ERC于体外可以抑制成熟DC的产生 |
| 2.2.3 表达CD73的ERC于体外能够促进M2 的增殖 |
| 2.2.4 表达CD73的ERC于体外能够促进Treg的增殖 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、ERC表达CD73在其抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用及作用机制 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 小鼠同种异体异位心脏移植模型的制备 |
| 3.1.3 实验分组及治疗 |
| 3.1.4 同种异体异位心脏模型移植物生存观察 |
| 3.1.5 模型标本取材 |
| 3.1.6 组织病理检测及评分 |
| 3.1.7 免疫组织化学染色及分析 |
| 3.1.8 流式细胞术 |
| 3.1.9 单向混合淋巴细胞反应 |
| 3.1.10 酶联免疫吸附实验 |
| 3.1.11 实时荧光定量PCR |
| 3.1.12 相关仪器、耗材、试剂 |
| 3.1.13 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 ERC表达CD73能够延长小鼠心脏移植物的生存期 |
| 3.2.2 ERC表达CD73能够改善小鼠心脏移植物的病理改变 |
| 3.2.3 ERC表达CD73能够减轻小鼠心脏移植物急性细胞排斥反应 |
| 3.2.4 ERC表达CD73能够降低成熟DC的比例 |
| 3.2.5 ERC表达CD73能够增强Tol-DC的功能 |
| 3.2.6 ERC表达CD73能够降低总巨噬细胞数量并促进巨噬细胞向M2 极化 |
| 3.2.7 ERC表达CD73能够诱导体内Treg细胞增多 |
| 3.2.8 ERC表达CD73参与调节抗炎细胞因子和促炎因子的平衡 |
| 3.2.9 ERC表达CD73影响移植心脏A_(2A)和A_(2B)受体mRNA的转录水平 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 CD73/ADO/ADOR信号通路在实体器官移植免疫中的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）PMC神经元集群活动的排尿控制作用及初步机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 小鼠膀胱逼尿肌神经支配的解剖学特征研究 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 PMC神经元集群活动在调控小鼠排尿和膀胱功能中的作用及初步机制研究 |
| 3.1 实验材料与方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 中枢和外周神经系统对下尿路调控的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（8）肝移植供肝保护策略优化及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 静态冷保存 |
| 1.2 MP |
| 1.3 外科干预 |
| 1.4 药物干预 |
| 1.5 关键机制研究 |
| 2 第一部分 远端缺血间效应可预防大鼠肝脏移植后缺血/再灌注损伤:ROS/RNS和eNOS的作用研究 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 3 第二部分 优化离体供肝机器灌注的关键参数 |
| 3.1 实验材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 4 第三部分 HO-1的低表达抑制HMP诱导的肝增生从而减弱了对大鼠肝损伤保护作用 |
| 4.1 实验材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 本论文不足之处 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（9）NOD1受体激动剂保护LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 NOD1 受体激动剂预干预可减轻LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 NOD1 受体激动剂通过上调抗凋亡分子A20 的表达拮抗LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述:模式识别受体与肝脏疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
（10）树鼩肝移植急性排斥反应中CXCL12/CXCR4作用的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 树鼩原位肝移植模型的建立 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 树鼩淋巴细胞CXCL12/CXCR4基因迁移和表达的体外实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 树鼩肝移植急性排斥反应中CXCL12/CXCR4表达的作用及机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
四、肝脏对各种缝线反应的动物实验研究（论文参考文献）
- [1]肝脏对各种缝线反应的动物实验研究[J]. 陈训如,吴孟超,陈汉. 第二军医大学学报, 1983(S1)
- [2]包虫病所致过敏反应中免疫耐受机制的实验研究[D]. 张秦. 新疆医科大学, 2016(08)
- [3]1. XJ-1器官保存液的研制及TLSFJM对大鼠肝、心移植急性排斥反应防治作用的实验研究 2. 我国首例血缘关系活体肝移植患者的临床观察[D]. 管文贤. 第四军医大学, 1999(02)
- [4]胰腺癌来源的外泌体在肝转移中的作用及其机制研究[D]. 余泽前. 东南大学, 2018(01)
- [5]穴位埋线对感觉神经肽SP与MC的影响及对OVA致敏原耐受能力影响的动物实验研究[D]. 高洪娇. 成都中医药大学, 2019(04)
- [6]CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究[D]. 胡永浩. 天津医科大学, 2020(06)
- [7]PMC神经元集群活动的排尿控制作用及初步机制研究[D]. 姚基伟. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)
- [8]肝移植供肝保护策略优化及机制研究[D]. 何宁. 浙江大学, 2018(06)
- [9]NOD1受体激动剂保护LPS/D-GalN诱导的急性肝衰竭的作用及机制研究[D]. 贾方. 重庆医科大学, 2020(01)
- [10]树鼩肝移植急性排斥反应中CXCL12/CXCR4作用的实验研究[D]. 唐波. 昆明医科大学, 2018(05)