一、脾虚证模型小白鼠血清对细胞免疫调节的实验研究（论文文献综述）
柳辰玥[1]（2021）在《基于Homer1-mGluR5及mTOR通路探讨逍遥散对抑郁症肝郁脾虚证大鼠神经保护作用机理》文中研究说明目的大鼠暴露于慢性应激环境中会产生肝郁脾虚证候特点,同时也表现出抑郁样行为。逍遥散已被证明抗抑郁作用显着,临床中常用来治疗抑郁症。基础研究也表明,逍遥散可改善慢性应激引起抑郁样行为。神经损伤是抑郁症发病最重要的原因之一。研究表明,Homer1b/c被报道在慢性应激大鼠海马CA1区显着升高,并通过mGluR5影响下游mTOR通路,进而导致与突触生成相关蛋白PSD95和SYP表达降低,产生神经损伤。因此,本实验旨在通过观察逍遥散对慢性温和不可预知应激（CUMS）复制的抑郁症肝郁脾虚证模型、谷氨酸诱导的HT-22海马神经元细胞损伤模型的抗抑郁作用是否与Homer1-mGluR5 及 mTOR 通路有关。方法1.体内实验:将大鼠分为正常对照（NC）组和造模组,连续6周CUMS法复制抑郁症肝郁脾虚证病证结合大鼠模型。CUMS第3周时,用糖水实验评价模型,筛选造模组大鼠糖水饮用量与NC组大鼠无统计学差异的,不纳入后续实验。其余大鼠随机分为3组,保证每组12只:模型组（CUMS）、氟西汀组（FLU）、逍遥散组（XYS）。第4～第6周边造模边灌胃逍遥散,氟西汀作为阳性对照药。6周后,通过大鼠的一般状态以及糖水偏好、强迫游泳、旷场实验等行为学实验评价大鼠的“肝郁”表现,用体重、进食量等方法评价“脾虚”表现。同时通过以方测证,观察逍遥散对抑郁症肝郁脾虚证模型大鼠的药效。用液质联用技术（UPLC-MS）指认逍遥散的有效成分,为逍遥散提供药效物质基础依据。化学比色法检测海马CA1区匀浆中谷氨酸（Glu）含量;Western Blot、免疫组化技术检测海马 CA1 区 Homer1b/c,mGluR5,p-mTOR,mTOR,p70S6k,p-p70S6k,p-4EBP1,4EBP1,PSD95 和 SYP 蛋白表达水平,PCR 检测 Homer1,mGluR5,PSD95和SYP的基因水平。2.体外实验:将海马神经元HT-22细胞分为4组:对照组（NC）,谷氨酸组（Glu）,慢病毒沉默组（Lv）,逍遥散组（XYS）。慢病毒沉默组采用慢病毒沉默Homer1转染的HT-22细胞株;NC组、Glu组、XYS组用正常HT-22细胞株。Glu组、XYS组、Lv组用5mM谷氨酸诱导产生神经毒性的HT-22 Homer1沉默细胞株,XYS组用不同浓度XYS含药血清干预。分别用CCK8法观察XYS含药血清对HT-22细胞活性的影响,LDH检测逍遥散含药血清对HT-22细胞的毒性,用Western blot测定逍遥散含药血清对神经元细胞 Homer1b/c,mGluR5,p-mTOR,mTOR,p70S6k,p-p70S6k,p-4EBP1,4EBP1,PSD95和SYP蛋白表达水平的影响,用RT-qPCR检测Homer1,mGluR5,PSD95,SYP的基因水平。结果1.体内实验（1）采用6周CUMS复制了抑郁症肝郁脾虚证大鼠模型。逍遥散治疗后,可让CUMS大鼠毛色恢复光泽,大鼠的大便恢复正常形态,活跃度提高;可增加抑郁症肝郁脾虚证大鼠体重和摄食量。连续6周逍遥散治疗后,大鼠的抑郁样行为明显缓解,强迫游泳实验（Forcedswimmingtest,FST）中的不动时间减少,旷场实验（Openfieldtest,OFT）中的总运动距离增加,中央区的停留时间增加,糖水饮用量增加,这些都说明用逍遥散以方测证,显示出了对抑郁症肝郁脾虚证大鼠的疗效;（2）UPLC-MS结果显示,逍遥散的有效成分有:芍药苷,甘草苷,异甘草素,甘草素,柴胡皂苷a,姜黄素,阿魏酸;（3）逍遥散可降低CUMS诱导的大鼠海马CA1区谷氨酸含量;（4）逍遥散能降低CUMS大鼠海马CA1区Homer1 mRNA相对含量,升高mGluR5,PSD95和SYP mRNA相对含量;（4）逍遥散能降低CUMS大鼠海马CA1区Homer1b/c的表达,促进mGluR5,p-mTOR/mTOR,p-p70S6k/p70S6k,p-4EBP1/4EBP1 的表达,从而促进突触标记蛋白PSD95和SYP蛋白表达。2.体外实验（1）CCK8细胞活性实验结果表明,逍遥散含药血清对HT-22细胞活性无影响,逍遥散含药血清的最佳给药浓度为10%,谷氨酸最佳造模浓度为5mM,嘌呤霉素筛选未转染细胞的浓度为1.5ug/ml。（2）慢病毒转染HT-22细胞后可沉默Homer1,对Homer1基因沉默效率达到正常组的22.15%,翻译成Homer1b/c蛋白后,沉默水平达到35.94%。与正常组有显着差异,可以进行后续研究。（3）谷氨酸诱导HT-22细胞后产生显着毒性,逍遥散含药血清可起到保护作用,使HT-22细胞活力增加,毒性降低。（4）逍遥散干预谷氨酸诱导的HT-22细胞后,可以恢复正常的梭形纤维状形态。（5）逍遥散含药血清干预谷氨酸诱导的HT-22细胞后,能降低Homer1的mRNA相对含量,升高mGluR5,PSD95和SYP mRNA相对含量;可显着降低Homer1b/c的表达,促进mG1uR5,p-mTOR/mTOR,p-p70S6k/p70S6k,p-4EBP1/4EBP1 的表达,从而促进了突触标记蛋白PSD95和SYP表达,与Homer1沉默后的结果一致,说明Homer1可能是XYS的作用靶点,但还需进一步实验验证。结论（1）本实验的病证结合大鼠模型—抑郁症肝郁脾虚证,是通过连续不断的对大鼠施行六周温和不可预测的慢性压力而复制的,逍遥散以方测证药效显着;（2）逍遥散可改善抑郁样行为,增加摄食量和体重;减少在强迫游泳实验中的不动时间,增加旷场实验中的运动距离,增加在中央区的停留时间,增加糖水消耗量;（3）逍遥散可降低谷氨酸含量,减轻谷氨酸的神经毒性,其作用机理可能是通过降低CUMS大鼠海马CA1区Homer1b/c表达,增加mGluR5表达,从而激活下游mTOR通路,促进与转录蛋白相关的p70S6k、4EBP1活化,从而使突触标记蛋白PSD95和SYP表达增加,发挥神经保护作用的;总之,本研究为揭示逍遥散发挥神经保护作用治疗抑郁症肝郁脾虚证提供了实验依据,其作用机制可能与Homer1-mGluR5及下游mTOR通路相关。
钱梦[2]（2021）在《补中益气汤（方）与脾虚肌无力（证）方证关联的生物学基础》文中提出研究背景:中医证候具有跨系统的病理生理学内涵,中医复方成分复杂且具有多系统、多靶点的作用特点,这使得单一角度研究证候或方药具有很大的不确定性。而辨证论治中的“方-证相关”的经验及原理则要求在研究方药或证候时有必要将二个方面结合起来。目前,探查方证关联的现代生物学基础正在成为方证相关领域的重要研究热点。“脾主肌肉”是中医脾脏的重要生理属性之一,补中益气汤是健脾益气的代表方之一,临床和实验研究显示该方用于脾虚肌无力显示一定的健脾强肌效用,但目前有关脾主肌肉的现代病理生理学内涵和补中益气汤作用的分子机制尚不清楚。因此探查补中益气汤（方）与脾虚肌肉无力（证）关联的生物学基础对于揭示脾主肌肉的现代内涵和补中益气汤的分子机制具有重要的科学意义。肌肉减少症临床表现以肌肉无力或/和萎缩为特征,与中医脾虚肌肉无力证甚为接近。研究表明,蛋白质代谢失衡是肌肉减少症的重要的病理生理学基础,涉及系统-器官-细胞分子不同层面的调控失常。本学科前期的研究显示,饮食不节+游泳力竭法复制的脾虚证大鼠模型涉及多系统的异常变化并伴有骨骼肌肌力下降及病理损伤,涉及能量代谢障碍、神经-肌肉接头功能异常及炎性损伤等机制。健脾类方的比较研究显示,补中益气汤对该模型肌肉损伤有更好的改善作用,并涉及对其多个病理生理学环节的调节。基于上述背景,我们推测中医脾虚肌无力证是之前探查到的炎性激活、能量代谢异常、内分泌失调等多个环节共同参与导致肌肉蛋白质代谢失调为特点的一种病证,并有其独特分子调控机制。研究目的:应用“饮食失节+过度疲劳”法建立并评价脾虚肌无力证小鼠模型,在此基础上观察补中益气汤对该模型的健脾强肌效用,并以肌肉蛋白质代谢失衡为切入,在整体、器官及分子不同维度上,探查脾虚肌无力证模型的病理生理变化特点与补中益气汤的作用靶标及二者关联的生物学基础。研究一脾虚肌无力模型小鼠的建立与评价方法:昆明小鼠随机分为正常组与模型组（每组各30只）,模型组采用“饮食不节+过度疲劳”法建立脾虚证肌无力小鼠模型,正常组正常饲养。各组小鼠:（1）每周观测并记录各组小鼠的外观行为评分、体重及饮食量;（2）实验第2、4周末进行负重游泳力竭实验,测定小鼠负重游泳力竭时间;（3）实验第1、2、3、4周末使用抓握力仪测定小鼠抓握力;（4）第15 d和29 d分两批次,酶联免疫（ELISA）法测定小鼠血清D-木糖、胃泌素（GAS）、胃动素（MTL）、血管活性肠肽（VIP）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）;称量法测定计算胸腺与脾脏指数、肌湿重与肌重/体重比;制作腓肠肌HE切片,观察病理改变,利用Image J软件计算肌纤维直径与横截面面积。结果:与正常组比较,模型组小鼠:（1）实验第2-4周活动状态、皮肤毛发、大便状态积分均明显增高（P<0.01）;第1-4周体重明显降低（P<0.01）;第1周饮食量明显增加（P<0.01）,第3-4周饮食量明显降低（P<0.01）;（2）第2-4周游泳力竭时间明显缩短（P<0.01或P<0.05）;（3）第1-4周抓握力呈递进性明显降低（P<0.01）;（4）第2-4周血清D-木糖、GAS、MTL含量明显降低,VIP明显增加（P<0.01或P<0.05）;胸腺与脾脏指数明显降低,血清IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.01 或P<0.05）,IL-6 明显升高（P<0.01 或P<0.05）;腓肠肌湿重和湿重/体重比明显降低（P<0.05）,光镜下的腓肠肌纤维排列松散,边缘变钝,肌纤维间隙与肌束间隙明显变宽,肌纤维直径与横截面面积明显减少（P<0.01 或 P<0.05）。结论:“饮食失节+疲劳过度”法建立的模型小鼠在呈现中医脾虚证候相关的外观行为和实验室指标改变的同时,伴有骨骼肌肌力的下降与肌纤维的萎缩,表明“饮食失节+疲劳过度”法可成功建立小鼠脾虚肌无力证模型。研究二脾虚肌无力小鼠肌肉蛋白质失衡的分子机制及补中益气汤的干预作用方法:昆明小鼠随机分为正常组、模型组、补中益气汤高剂量组与低剂量组（每组各15只）。除正常组外,其余各组小鼠均采用“饮食不节+过度疲劳”法建立脾虚证肌无力模型,连续4周;其中中药高、低剂量组自第15d开始分别按3.8 g/kg·d和1.9g/kg-d灌服补中益气汤（颗粒溶液）。各组小鼠按研究一时间与方法观测:（1）观测不同时间点的外观行为积分、体重、饮食量、游泳力竭时间与抓握力;（2）实验第29 d的血清D-木糖、GAS、MTL、VIP、IL-1β、IL-6、TNF-α,促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）、生长激素（GH）、睾酮（T）,下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）与促性腺激素释放激素（GnRH）;胸腺与脾脏指数及肌湿重与肌重/体重比,腓肠肌的病理改变和肌纤维直径与横截面面积;ELISA法测定腓肠肌糖皮质激素受体α（GRα）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）、胰岛素（INS）、胰岛素受体（INSR）、GH、T、IL-1β、IL-6、TNF-α、肌肉抑制素（myostatin）、激活素受体ⅡB（ACTR2B）;Western Blot法检测腓肠肌磷脂酰肌醇3-激酶（pi3k）、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶（p-akt）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、磷酸化核糖体蛋白S6激酶（p-s6k1）、磷酸化真核翻译起始因子4B（p-eIF4B）、胰岛素受体低物1（IRS1）、磷酸化苏氨酸激酶3（p-Smad3）、磷酸化叉头蛋白O3A（p-Foxo3a）蛋白的相对表达量;免疫组化法检测肌萎缩蛋白1（Atrogin-1）和肌肉特异性环指蛋白1（MuRF-1）的阳性表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠:（1）实验第1-4周活动状态积分明显增高（P<0.05）,第2-4周皮肤毛发和大便状态积分明显增高（P<0.01）;第1周饮食量明显增加（P<0.01）,第3-4周饮食量明显降低（P<0.01）;第1-4周体重明显降低（P<0.01）,游泳力竭时间明显缩短（P<0.05）。（2）血清D-木糖含量、GAS、MTL含量明显降低,VIP明显增加（P<0.01或P<0.05）;胸腺与脾脏指数均明显降低（P<0.01）;腓肠肌湿重和肌重/体重比均明显降低（P<0.01或P<0.05）,镜下腓肠肌纤维排列松散,边缘变钝,肌纤维间隙与肌束间隙明显变宽;肌纤维直径与横截面面积均明显减少（P<0.01）;第2和第4周抓握力明显下降（P<0.01）;腓肠肌总蛋白明显降低（P<0.05）,INS、INSR、IGF-1和IGF-1R 含量明显减少（P<0.01）,pi3k、p-akt、mTOR、p-s6k1 以及 p-eIF4B 的表达量降低（P<0.05）,Myostatin、ACTR2B 含量和 Atrogin-1、MuRF-1、p-Smad3、p-Foxo3a表达量均明显增加（P<0.01或P<0.05）;下丘脑CRH/GnRH明显增加/降低（P<0.01 或P<0.05）,血清 ACTH、CORT、IL-6 明显升高,GH、T、IL-1β、TNF-α 明显降低（P<0.01 或P<0.05）,腓肠肌 GR-α、IL-1β、IL-6、TNF-α明显升高（P<0.01或P<0.05）,GH和T明显降低（P<0.01或P<0.05）。与模型组比较,中药高、低剂量组小鼠:（1）实验第3-4周活动状态、皮肤毛发、大便状态积分均明显降低（P<0.01或P<0.05）,体重明显增加（P<0.01）;第4周饮食量明显增加（P<0.01）,游泳力竭时间明显延长（P<0.05）。（2）第4周,高剂量组D-木糖含量明显增加、VIP含量明显降低（P<0.01或P<0.05）,高、低剂量组的血清GAS、MTL含量均明显增加（P<0.01或P<0.05）;胸腺与脾脏指数均明显升高（P<0.01或P<0.05）;二个剂量组的抓握力呈不同程度地增加（P<0.01）;高剂量组肌纤维形态与正常组接近,肌纤维直径与横截面面积均明显增加（P<0.01或P<0.05）;高、低剂量组腓肠肌总蛋白均明显增高（P<0.05）,腓肠肌内 INS、INSR、IGF-1 和 IGF-1R含量明显增加（P<0.01 或P<0.05）,pi3k、p-akt与mTOR蛋白表达量均明显升高（P<0.01或P<0.05）,Myostatin和ACTR2B含量、Atrogin-1和MuRF-1表达量明显降低（P<0.01或P<0.05）,高剂量组p-s6k1蛋白表达量明显升高（P<0.05）;高、低剂量组下丘脑CRH与血清ACTH、CORT、IL-6和腓肠肌内GR-α、IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均明显降低（P<0.01或P<0.05）,下丘脑GnRH、血清T、L-1β、TNF-α和腓肠肌GH、T均明显升高（P<0.01或P<0.05）,高剂量组血清GH明显升高（P<0.05）。结论:脾虚肌无力小鼠的肌肉萎缩机制涉及整体、器官组织与分子不同层面。整体水平上,HPA轴功能的过度激活促进了蛋白质的降解,而内分泌系统相关激素的分泌减少又不利于蛋白质的合成;器官组织层面上,肌肉组织内炎性因子的高表达进一步促进了蛋白质降解;分子层面上,肌肉蛋白质代谢失衡则涉及mTOR/INS与UPS/myostatin信号通路之间的平衡失调。补中益气汤对脾虚肌无力模型小鼠具有明显的健脾强肌效用,其作用机制涉及对神经-内分泌-免疫多系统、肌肉蛋白质的合成与分解平衡及mTOR/INS与UPS/myostatin信号通路的调节。上述研究结果,为补中益气汤益气健脾强肌作用的临床运用提供了一定的药理学依据,对于揭示中医脾主肌肉的现代内涵、补益气汤健脾强肌作用的分子机制及补中益气汤-脾虚肌肉无力证关联的生物学基础具有重要意义。
朱昊如[3]（2020）在《基于衰老分子机制探讨脾虚证-补中益气汤相关的生物学基础》文中提出基于“方证相关”理论剖析复杂方证关系是目前方剂学界面临的主要问题之一,而网络药理学为研究方证关系的现代内涵提供了新方法。中医学认为衰老与脾虚证关系密切,但目前脾虚与衰老关系的分子生物学研究几未有见,脾虚-衰老的分子机制尚不清楚。因此本研究基于方证相关理论,以补中益气汤与脾气虚证高度关联为逻辑依据,从衰老相立论,利用现代网络药理学方法探查补中益气汤分子药理网络;进一步根据该方的作用预测,在整体-系统-分子水平上,动态观察脾虚证模型演变过程中衰老相关病理生理及生物分子变化,以及补中益气汤的相关效用机制。论文分为文献综述和实验研究两部分。文献综述主要涉及近年“方证相关”的研究进展、脾虚证-衰老相关研究进展及补中益气汤现代研究进展三方面内容;实验研究主要包括脾虚证分子内涵与补中益气汤作用相关的网络药理学研究、脾虚证演变与衰老相关的探讨、以及从衰老探察脾虚证现代内涵及补中益气汤效用机制三部分。研究一脾虚证分子内涵与补中益气汤作用相关的网络药理学研究方法:利用TCMSP平台,分别检索补中益气汤组方药味（黄芪、白术、升麻、陈皮、柴胡、人参、甘草、当归、生姜、大枣）活性成分及其关联靶点,利用STRING平台建立靶点PPI网络并导入cytoscape,利用MCODE插件对PPI网络进行聚类来提取核心靶点簇后,使用ClueGO插件对核心靶点进行GO及KEGG富集,提取主要病/生理功能及生物分子信号通路。结果:①筛选得到补中益气汤活性成分143种,关联靶点162个,其中155个靶点之间存在PPI关系,聚类得到核心簇9个。②富集得到GO条目13组,包括NO生物合成、促进平滑肌细胞增殖等;富集得到KEGG条目12组,包括AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路、松弛素信号通路等。结论:脾虚证-补中益气汤的关联机制内涵可能涉及由AGE-RAGE通路、IL-17通路及松弛素通路主导的,通过介导核转录因子NF-kB来调节促炎细胞因子分泌的炎性调节过程。研究二脾虚证演变与衰老相关的探讨方法:Wistar大鼠随机分为对照组与模型组,每组各18只。对照组常规饲养,模型组采用“游泳力竭+饥饱失常”法复制脾虚模型。各组大鼠:①隔日观察外观行为评分,每日称量摄食量,每周末观测体质量及粪便含水率。②于实验第2-4周末进行强迫负重游泳实验,测定负重游泳时长;实验第3、4周进行Morris水迷宫实验,测定定位航行实验逃避潜伏期和空间探索实验的游泳速度、潜伏期、平台穿梭次数、目标象限路程比及探索路线。③于实验第14、21、28d灌服D-木糖溶液后收集尿液,ELISA法测定尿D-木糖含量,计算D-木糖排泄率。于实验第15、22、29d随机分三批麻醉处杀:取脾脏、胸腺称重计算脏器指数;取血清,利用ELISA法测定GAS、MTL、AGEs、BDNF、VIP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,利用生化法测定CRP水平;取海马,利用ELISA法测定AGEs、Aβ1-40、Aβ1-42、glu、GABA、IL-1β、IL-6、TNF-α 水平。结果:较之于对照组,模型组大鼠:①a.实验第2-4周皮肤毛发、行为状态、活跃程度、睡眠状态积分显着升高（P<0.01）;第1-4周体质量、摄食量显着降低（P<0.01）;第3、4周粪便含水率升高（P<0.05）。b.实验第4周负重游泳时间显着降低（P<0.01）。c.实验第4周脾脏指数与胸腺指数显着降低（P<0.01）;第2-4周尿D-木糖排泄率显着降低（P<0.01）,血清VIP水平降低;第3、4周血清GAS水平降低;第4周血清MTL水平降低（P<0.05或0.01）。②a.实验第3、4周空间探索潜伏期升高、穿越平台次数减少、目标象限路程比降低（P<0.05）,探索路线呈随机策略。b.实验第2-4周海马GABA水平降低;第3、4周海马IL-1β水平显着升高;第4周海马Aβ140、血清BDNF水平降低（P<0.05 或 0.01）,海马 AGEs、Aβ1-42/Aβ1-40、glu、IL-6、TNF-α 水平升高（P<0.05或0.01）。c.实验第2周血清IL-6、TNF-α水平升高（P<0.05或0.01）;第4周血清IL-1β、TNF-α水平显着降低（P<0.01）。结论:脾虚大鼠模型演化过程逐渐出现学习记忆能力下降的脑衰老表现,其分子特征体现为海马毒性蛋白累积、炎性水平升高与递质稳态兴奋性失衡。研究三从衰老探察脾虚证现代内涵及补中益气汤效用机制方法:Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量给药组与高剂量给药组,每组各8只。对照组常规饲养,模型组及各给药组按研究二方法持续造模4周,低、高剂量给药组自第15d至第28d起分别按5.85g/kg/d、17.55g/kg/d灌服补中益气汤水煎液。各组大鼠:①按研究二时间及方法观测外观行为评分、摄食量、体质量及粪便含水率。②按研究二方法,于实验第4周末进行强迫负重游泳实验;第4周进行Morris水迷宫实验。③实验第28d按研究二方法测定尿D-木糖排泄率。于实验第29d麻醉处杀后:取脾脏、胸腺计算脏器指数;取血清,ELISA法测定GAS、MTL、BDNF、VIP、IL-1β、IL-6、TNF-α 水平;取海马,ELISA 法测定 AGEs、Aβ1-40、Aβ1-42、glu、GABA、IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1 水平,免疫组化法测定 p65NF-kB,Western-blot 测定 p65NF-kB、p-p65NF-kB、RAGE、Iba-1,免疫荧光双标法测定NeuN+cleavedcaspase-3、Iba-1+TNF-α、Iba-1+TGF-β1共表达;取下丘脑,免疫组化法测定p65 NF-kB,Western-blot测定p65 NF-kB、p-p65 NF-kB、Iba-1。结果:①较之于对照组,模型组大鼠:a.皮肤毛发、行为状态、活跃程度、睡眠状态积分升高（P<0.05或0.01）,体质量、摄食量显着降低（P<0.01）;粪便含水率升高（P<0.05）。b.负重游泳时间显着降低（P<0.01）;尿D-木糖排泄率,血清GAS、MTL水平显着降低（P<0.01）;血清VIP水平显着升高（P<0.01）。c.空间探索潜伏期显着增加（P<0.01）,穿梭平台次数与目标象限路程比均降低（P<0.05）,空间探索路线呈随机式策略。d.血清BDNF水平降低（P<0.05）;海马AGEs、Aβ1-42、Aβ1-42/Aβ1-40、RAGE、glu、Iba-1、IL-1β、IL-6、TNF-α 水平上升（P<0.05 或 0.01）;p65NF-kB 表达量及活化程度上升（P<0.05或0.01）,GABA、TGF-β1水平降低（P<0.05或0.01）,NeuN 与 cleaved caspase3、Iba-1 与 TNF-α 共表达数增加（P<0.05 或 0.01）。e.下丘脑Iba-1表达量、p65NF-kB表达量及其活化程度显着上升（P<0.01）,GnRH表达量显着降低（P<0.01）。f.脾脏及胸腺指数显着降低（P<0.01）,血清IL-1β、TNF-α及TGF-β1水平显着降低（P<0.01）。②较之于模型组,各给药组大鼠:a.一般表征行为积分、体质量、摄食量、粪便含水率均有不同程度改善（P<0.05或0.01）。b.负重游泳时间显着增加（P<0.01）;尿D-木糖排泄率,血清GAS、MTL水平均升高（P<0.05或0.01）;血清VIP水平均显着降低（P<0.01）。c.空间探索潜伏期显着缩短（P<0.01）,空间探索路线呈趋向式策略;高剂量组大鼠穿梭平台次数增加（P<0.05）。d.血清BDNF水平升高（P<0.05）;海马NeuN与cleaved caspase3、Iba-1与TNF-α共表达数均降低（P<0.05）,Iba-1与TGF-β1共表达数均增加（P<0.05或0.01）;p65NF-kB表达量及活化程度均下调（P<0.05 或 0.01）;AGEs、Aβ1-42、RAGE、glu、Iba-1、IL-1β 水平均降低（P<0.05或0.01）,其中低剂量组大鼠海马IL-6与TNF-α水平显着降低（P<0.01）;TGF-β1水平显着升高（P<0.01）。e.下丘脑Iba-1表达量、p65NF-kB表达量及其活化程度降低（P<0.05或0.01）,GnRH表达量均升高（P<0.05）。f.高剂量组大鼠胸腺指数、血清IL-1β及TNF-α水平均升高（P<0.05或0.01）;各给药组大鼠血清TGF-β1水平均升高（P<0.05 或 0.01）,IL-6 水平显着降低（P<0.01）。结论:脾虚大鼠同时存在海马炎性衰老与外循环免疫衰老,AGEs/RAGE/NF-kB通路介导的小胶质细胞M1型激活与神经元凋亡可能是脾虚大鼠出现脑衰老表现的潜在机制。补中益气汤具有良好的健脾抗衰效用,其机制可能涉及抑制海马AGEs/RAGE/NF-kB信号通路过度激活及诱导小胶质细胞向M2型转化来保护神经元。本研究将方证相关理论与网络药理学分析手段相结合,以衰老为切入点,从整体-器官-细胞-分子层面系统探察了补中益气汤-脾虚证关联的机制,为探索中医方-证关联的生物学基础提供了新思路。
桑小普[4]（2020）在《慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究》文中认为脾虚证本质的研究是中医现代化研究的重要内容之一。随着研究的深入,人们发现脾虚证的致病机理涉及消化系统、免疫系统、内分泌系统、神经系统、血液系统、肠道菌群和能量代谢等多个方面。近年来,系统生物学的方法开始应用于脾虚证本质研究,但尚处于初步阶段。目前已有学者分别使用iTRAQ技术、16S rDNA测序技术和基因芯片技术对脾虚证的蛋白组学、微生物组学和转录组学进行了探索,但是,应用RNA-seq或Small RNA-seq技术进行脾虚证研究的相关报道较少。本论文共分为两部分。由于气虚体质是脾虚证的前驱状态,研究健康人气虚体质的生物学机制将有助于理解脾虚证的早期发生状态。论文的第一部分研究了健康人气虚体质相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控。论文第二部分研究了慢性胃炎脾虚证相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控,从病证结合的角度,研究脾虚证的病理机制。目的:在本次研究中我们以健康人气虚体质、慢性浅表性胃炎（Chronic Superficial Gastritis,CSG）脾虚证和慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis,CAG）脾虚证人群为研究对象,应用最前沿的RNA-seq技术和ceRNA理论,从转录组学水平上进行了脾虚证内在生物学机制的研究。综合两部分的研究结果,我们试图从体质、证候、疾病的自然进展方向,研究健康人气虚体质、CSG脾虚证和CAG脾虚证内在转录调控机制的相互关联,找到“气虚体质—脾虚证”相关的生物标志物或标志网络,以期阐释脾虚证的生物学基础。本研究也有助于预测疾病的发生与发展,从而为明确脾虚证自身特点及与其他因素（如体质、证候、疾病等）的关系提供了可能。方法:2016年6月～2018年12月期间,在北京中医药大学附属东方医院通过广告或电话进行健康受试者招募,包括健康人平和体质、气虚体质和湿热体质。同期进行慢性胃炎患者招募,包括慢性浅表性胃炎（脾虚证、湿热证）,慢性萎缩性胃炎（脾虚证、湿热证）患者。采集临床研究受试者外周血,分离白细胞后提取总RNA,分别进行RNA-seq和Small RNA-seq分析。获得的测序数据用生物信息学方法进行分析,筛选出差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA,对差异表达基因进行生物功能与信号通路富集分析。对差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA进行ceRNA网络构建,获得脾虚证相关的ceRNA调控网络关系。本研究经北京中医药大学东方医院临床研究伦理委员会审查,伦理审批号:JDF-IRB-2016031002临床研究注册号:NCT02915393。结果:第一部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例25例,分别为健康人平和体质13例、气虚体质7例、湿热体质5例。随机选择了健康人平和体质5例、气虚体质5例、湿热体质4例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq分析。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了健康人气虚体质相关的差异表达mRNA60个、lncRNA76个、miRNA42个。功能分析发现,细胞质膜组成成分和细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO富集中出现。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性在差异表达lncRNA和miRNA的GO富集中出现。在对健康人气虚体质相关差异基因的通路分析中发现,赖氨酸降解在差异表达lncRNA和miRNA的KEGG富集中出现。3、通过对健康人气虚体质的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得3182个miRNA-lncRNA对,955个miRNA-mRNA对,最终筛选到9514对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 36个GO功能和31个KEGG信号通路。4、从健康人气虚体质差异表达的mRNA中筛选出99个免疫相关的基因,涉及了11个GO功能和8个KEGG信号通路。第二部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例70例,分别为CSG脾虚证28例、湿热证21例;CAG脾虚证7例、湿热证14例。随机选择了CSG脾虚证6例、CSG湿热证5例、CAG脾虚证5例,CAG湿热证5例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq建库和测序。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了CSG脾虚证患者相关的差异表达mRNA7个、lncRNA 103个、miRNA4个。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,胰岛素分泌以及胰岛素信号通路分别在差异表达mRNA和miRNA的KEGG分析中显着富集。通过对CSG脾虚证的差异表达 miRNA、mRNA 和 lncRNA 进行 ceRNA 分析,共获得 433 个 miRNA-lncRNA 对,226个miRNA-mRNA对,最终筛选到548对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了10个GO功能和11个KEGG信号通路。从CSG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出89个免疫相关的基因,涉及了 66个GO功能和15个KEGG信号通路。3、我们获得了 CAG脾虚证患者相关的差异表达mRNA 20个、lncRNA 79个、miRNA 29个。在对CAG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜和细胞质膜的组成成分在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得1028个miRNA-lncRNA对,1123个miRNA-mRNA对,最终筛选到3625对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 59个GO功能和34个KEGG信号通路。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出139个免疫相关的基因,涉及了 20个GO功能和28个KEGG信号通路。4、从上述测序结果中进一步挖掘,获得脾虚证相关的差异表达mRNA 570个、lncRNA2009个、miRNA 303个,这些差异基因涉及了 9个GO功能和4个KEGG信号通路。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得6个miRNA-lncRNA对,9个miRNA-mRNA对,最终筛选到4对ceRNA,其中的关键基因CD300H的mRNA水平在气虚体质和脾虚证中显着降低（P=0.03）。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出84个免疫相关的基因,涉及了 9个GO功能和18个KEGG信号通路。结论:健康人气虚体质与慢性胃炎脾虚证存在特异的转录组表达谱,且气虚体质与脾虚证的差异基因表达谱具有一定的相似性,尤其体现在免疫相关的基因表达方面。功能分析提示“气虚体质—脾虚证”涉及多种免疫相关功能异常,此外在激素分泌、细胞质膜、信号转导、物质代谢等多种生命活动中存在差异。转录组学的联合分析揭示了CD300H基因的ceRNA参与“气虚体质—脾虚证”相关的转录调控网络。本研究的结果为挖掘脾虚证潜在的生物学基础提供了重要参考。
惠华英[5]（2020）在《葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠疗效的微生态学机理研究》文中进行了进一步梳理目的:建立肠道湿热证泄泻小鼠模型并运用葛根芩连汤进行治疗,研究肠道湿热证泄泻造模及葛根芩连汤干预对模型小鼠肠道微生态的影响,以期从微生态角度揭示肠道湿热证泄泻的发生机理,探明葛根芩连汤疗效与肠道微生态的相关性,为中医泄泻证型的诊治研究及方剂疗效机理的探析提供参考。方法:采用“高糖高脂+高温高湿+白酒+冰水”法模拟肠道湿热证泄泻病因,建立肠道湿热证泄泻小鼠模型,并运用葛根芩连汤治疗。分别在造模及治疗成功后,采集眼球血进行血常规、血生化及P物质含量测定,摘取动物内脏称重;采用平板计数法测定小鼠肠道内容物中细菌、大肠杆菌、乳酸菌和双歧杆菌数;采集小鼠小肠内容物和黏膜,运用荧光素二乙酸法测定肠道内容物和黏膜中微生物活度,运用酶活分析技术测定肠道中所含乳糖酶、蔗糖酶、淀粉酶和蛋白酶活性;无菌提取实验动物肠道内容物中细菌总DNA,进行16S r RNA基因序列扩增,基于Pac Bio平台进行高通量测序,分析小鼠肠道细菌特征。结果:（Ⅰ）模型小鼠表现为懒动、体重增长缓慢、黄褐色稀便、肛门污秽、肛温升高等,血清中所含P物质浓度显着高于正常组（P=0.001）;血生化检测结果显示,模型组血清中甘油三脂（TG）含量显着降低（P=0.038）,总胆固醇含量（TC）和血糖水平（GLU）增加,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量下降,但与正常组相比无显着性差异;采用葛根芩连汤治疗后,模型小鼠一般状态恢复,血清P物质浓度回归接近于正常组,TG和GLU含量明显回归。（Ⅱ）血常规测定结果显示,肠道湿热证泄泻小鼠血中所含白细胞数（WBC）、中性粒细胞数（GRA）和嗜酸细胞数（EOS）增加,平均红细胞体积（MCV）降低。使用葛根芩连汤治疗后的小鼠血中WBC、EOS与自愈组相比降低,而GRA和MCV恢复至正常组水平（P>0.05）,且治疗组胸腺指数增加。（Ⅲ）肠道湿热证泄泻造模引起小鼠肠道细菌和双歧杆菌数显着减少（P=0.000或P=0.049）,微生物活度显着升高（P=0.000）。模型小鼠肠道内容物中乳糖酶、蔗糖酶和淀粉酶活性升高而蛋白酶活性降低,肠黏膜中乳糖酶、蔗糖酶和淀粉酶活性显着降低（P<0.01或P<0.05）而蛋白酶活性升高。葛根芩连汤治疗后的小鼠肠道乳酸菌数持续升高（P<0.01）,微生物活度与自愈组相比显着降低（P=0.000）。治疗组肠道内容物中所含乳糖酶、蔗糖酶、淀粉酶和蛋白酶活性高于正常组而低于自愈组,肠黏膜中所含乳糖酶、蔗糖酶和淀粉酶活性高于正常组和自愈组。（Ⅳ）对细菌16S r RNA测序分析结果表明,造模引起小鼠肠道细菌Alpha多样性升高,但与正常组比较无统计学差异;样本层次聚类树和主坐标分析（PCo A）显示,模型组和正常组样本间有一定的距离,组间基本可以分开,说明组间存在微生物菌群结构上的差异性。在门水平上,模型组肠道拟杆菌门、变形菌门和放线菌门的相对丰度增加,而蓝藻菌门和厚壁菌门相对丰度减少,且放线菌门含量与正常组相比差异显着（P=0.0325）。在属水平上,模型组肠道所含梭菌属和乳杆菌属丰度降低,Muribaculum、链球菌属、Parasutterella、普雷沃氏菌属和Enterorhabdus含量明显升高。在种水平上,模型组格氏乳杆菌、肠乳杆菌、罗氏乳杆菌、阴道乳杆菌及Curvibacter lanceolatus丰度减少,而Muribaculum intestinale、卷曲乳杆菌、胃瘤乳杆菌、Staphylococcus epeidermidis、牙龈卟啉单胞菌、Parasutterella excrementihominis、Enterorhabdus muris、少酸链球菌和Enterorhabdus mucosicola的含量升高。Lefse分析结果表明,格氏乳杆菌是正常组与模型组间具有显着性差异的关键物种。（Ⅴ）采用葛根芩连汤干预后,治疗组Alpha多样性指数回归（P>0.05）;PCo A显示正常组和治疗组样本间存在一定距离;在细菌门水平上,与正常组相比,治疗组小鼠肠道内容物所含拟杆菌门丰度升高,厚壁菌门丰度恢复,变形菌门和蓝藻菌门丰度下降;在属水平上,治疗组肠道乳杆菌属含量恢复至正常组水平而Muribaculum和梭菌属含量高于正常组,且链球菌属和奈瑟菌属含量接近自愈组水平;在细菌种水平上,治疗组肠道卷曲乳杆菌丰度恢复,罗氏杆菌丰度低于而Muribaculum intestinale高于正常组,但两组间比较无统计学差异。结论:（1）采用“高糖高脂+高温高湿+白酒+冰水”法成功建立了肠道湿热证泄泻小鼠模型,葛根芩连汤对模型小鼠疗效显着。（2）肠道湿热证泄泻造模引起小鼠血常规指标异常,葛根芩连汤可调节模型小鼠血液中WBC、GRA、EOS和MCV等指标回归,提高胸腺指数,调节机体免疫力。（3）肠道湿热证泄泻造模引起小鼠肠道内容物中微生物种类和数目发生异常变化,微生物活度增加,肠道消化酶活性改变,葛根芩连汤通过调节肠道微生物种数、降低肠道微生物活度、调控肠道消化酶活性发挥疗效。（4）肠道湿热证泄泻小鼠肠道内容物菌群结构发生变化,造成菌群失调,格氏乳杆菌是模型组与正常组间存在显着差异的物种,其含量的改变可能与泄泻相关。（5）葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌物种多样性具有恢复作用,调节了细菌物种相对含量,其疗效的发挥可能与该方调控肠道微生态平衡相关。
戴宁[6]（2020）在《功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究》文中指出目的功能性消化不良是以餐后饱胀不适、早饱感不适、上腹痛、上腹部烧灼感为主要临床表现的一种功能性胃肠病。本病的患病率较高,缺乏特效药物。虽然功能性消化不良的发病机制尚不清楚,但是有研究表明与脑肠肽密切相关。在辨证论治和病证结合思想的指导下,中医治疗本病具有较好疗效。因此,本研究将探讨功能性消化不良脾虚证的中医证候及香砂六君子加减方干预作用的机理,为功能性消化不良的机制和新药开发提供参考,丰富中医辨证论治和整体观的内涵。方法理论研究:通过检索中国知网和“北京中医药大学古籍及民国图书数字化平台”,整理功能性消化不良相关的中医名词术语,运用比较分析法探讨功能性消化不良这一西医疾病对应的中医病名;同时,分析功能性消化不良的中医病因病机。应用文献计量的方法,分析功能性消化不良的主要中医证型;同时,在辨证论治思想的指导下,分析中医方剂治疗功能性消化不良这一证型的理论依据。文献研究:对香砂六君子汤治疗功能性消化不良的综合疗效（症状改善情况、有效率、不良事件发生率等）进行系统评价和meta分析,为临床应用提供依据,为实验研究阳性药物和疗程的选择奠定基础。实验研究:首先,采用碘乙酰胺复合水环境小平台站立法复制功能性消化不良脾虚证大鼠模型,通过观察大鼠的一般情况及胃肠动力情况来评价模型。此后,给予香砂六君子加减方和多潘立酮进行药物干预,通过上述指标评价药物疗效,反证模型成功。同时,建立功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞的分离培养方法,筛选香砂六君子加减方药物血清的最佳干预条件,评价其对胃窦平滑肌细胞的影响。在此基础上,从整体水平和离体细胞水平两个方面,采用分子生物学实验技术检测血清、组织和胃窦平滑肌细胞中脑肠肽（SP,SS,Ghrelin,VIP,GAS,CCK,CGRP）。结果理论研究:（1）中医理论中“痞满”、“嘈杂”、“胃脘痛”与功能性消化不良最为接近。功能性消化不良的中医病因包括先天禀赋不足、外感邪气、饮食、痰湿、气郁、瘀血等,核心病机为脾气虚弱、中焦气机阻滞,病位在脾,但与心、肝、肺、肾具有一定的关系。（2）功能性消化不良的中医证型主要为脾气虚证、肝胃不和证、肝脾不和证、脾胃湿热证和寒热错杂证,其中脾气虚证的比例最高。在中医病证结合观念的指导下,从脾论治功能性消化不良脾虚证既符合病机特点,也满足辨证论治的要求。因此,具有补脾理脾作用的香砂六君子加减方治疗功能性消化不良脾虚证在理论层面是可行的、科学的。文献研究:对香砂六君子汤治疗功能性消化不良的随机对照试验的研究进行系统评价和meta分析,发现香砂六君子汤可以改善功能性消化不良患者的症状、提高其生活质量,同时降低复发率和不良事件发生率。不论是单独使用香砂六君子汤,还是将香砂六君子汤与常规治疗药物合用,有效率均显着高于常规治疗。在纳入的27项研究中,有26项研究比较了有效率。在这26项研究中,不论疗程是14天、28天,还是30天,试验组的有效率均显着高于对照组。此外,这26项研究中,有16项研究仅使用多潘立酮作为对照药,针对这16项研究进行了亚组分析,结果显示不论单独使用香砂六君子汤,还是将香砂六君子汤与多潘立酮联合使用,有效率均高于多潘立酮对照组。这为实验研究的药物选择和疗程提供参考。实验研究:（1）采用碘乙酰胺复合水环境小平台站立法成功制备了功能性消化不良脾虚证大鼠模型。与对照组相比,模型组大鼠大鼠的毛发疏松不泽、神疲乏力、倦卧怠动,进食量和饮水量增长缓慢,体重显着降低,胃肠动力下降。胃部病理结果显示两组大鼠胃部均未出现病理改变。（2）给予药物干预后,与模型组大鼠相比,给药组大鼠的一般情况、进食量、饮水量、体重有所改善,胃肠动力有所恢复,且各组大鼠胃部和下丘脑均未出现病理改变。（3）大鼠整体水平的生物学基础研究:与对照组相比,模型组大鼠血清和胃中SP、GAS、Ghrelin含量均显着降低,SS、VIP、CCK、CGRP含量显着增加。与模型组相比,多潘立酮和中、高剂量的香砂六君子加减方显着增加了大鼠血清和中SP、GAS、Ghrelin含量,多潘立酮和中剂量的香砂六君子加减方显着降低了大鼠血清中SS、VIP和CGRP含量,同时多潘立酮还降低了大鼠胃中VIP、CCK和CGRP的含量,低剂量的香砂六君子加减方降低了大鼠胃中SS、VIP和CCK的含量,中剂量的香砂六君子加减方降低了大鼠胃中CGRP的含量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠血清中SP含量显着降低,血清中的CCK和CGRP含量显着升高,三个剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃中VIP含量均显着高于多潘立酮组。与对照组相比,模型组大鼠胃和下丘脑中 SP mRNA、GAS mRNA、Ghrelin mRNA 表达量显着降低,SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量显着增加。与模型组相比,多潘立酮显着增加了大鼠胃和下丘脑中SP mRNA、GAS mRNA、Ghrelin mRNA表达量,降低了大鼠胃和下丘脑中SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量。与模型组相比,中剂量的香砂六君子加减方显着上调了胃中SP mRNA表达量,上调了胃和下丘脑中GAS mRNA、Ghrelin mRNA表达量,同时下调了胃和下丘脑中SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA、CGRP mRNA表达量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃和下丘脑中GAS mRNA和Ghrelin mRNA表达量显着降低,SS mRNA、VIP mRNA、CCK mRNA表达量显着升高。与对照组相比,模型组大鼠胃和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin蛋白表达量显着降低,SS蛋白表达量显着增加。与模型组相比,多潘立酮和中剂量的香砂六君子加减方显着上调了胃和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin蛋白表达量,同时下调了胃和下丘脑中SS蛋白表达量。与多潘立酮组相比,低剂量的香砂六君子加减方组大鼠胃和下丘脑中SP蛋白表达量和Ghrelin蛋白表达量显着降低。（4）采用酶消化法成功分离培养功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞,用CCK-8法筛选药物血清干预胃窦平滑肌细胞的最佳条件,发现10%浓度药物血清、干预24h为最佳条件,与模型组相比,阳性药组和高剂量的香砂六君子加减方均可以显着促进细胞增殖。（5）细胞水平的生物学基础研究:与对照组相比,模型组大鼠胃窦平滑肌细胞上清中SP、GAS、Ghrelin含量显着降低、SS含量显着升高。与模型组相比,多潘立酮、中、高剂量的的香砂六君子加减方均可以增加胃窦平滑肌细胞上清中SP含量、GAS含量和Ghrelin含量,降低SS含量。与对照组相比,模型组大鼠胃窦平滑肌细胞的SP mRNA含量显着下降,SS mRNA含量显着升高。与模型组相比,多潘立酮、中、高剂量的香砂六君子加减方均上调胃窦平滑肌细胞SP mRNA表达量,中剂量的的香砂六君子加减方下调胃窦平滑肌细胞SS mRNA表达量。结论（1）《中医内科学》仅依据功能性消化不良的主要症状将其归属于痞满、嘈杂、胃脘痛的范畴,但并没有分析FD的中医病因病机。此外,笔者在阅读文献的过程中,发现研究者们不仅将FD归属于痞满、嘈杂、胃脘痛,还将其归属于反胃、厌食、纳呆等范畴,由此可见中医对FD的认识尚不明确。因此,本研究通过系统地查阅现代文献和工具书,同时梳理古代文献,对FD的定义和临床表现进行分析,发现中医理论中“痞满”、“嘈杂”、“胃脘痛”与FD较为对应,FD的主要中医病因为外邪侵袭、饮食不节、情志不畅、思虑过度等,病机以脾气虚弱、中焦气机阻滞为核心,病位主要在脾,与肝、心、肺、肾具有一定的关系。在功能性消化不良的辨证分型中,脾气虚证位居首位。香砂六君子加减方治疗功能性消化不良具有理论可行性。（2）临床中,可以使用香砂六君子汤治疗功能性消化不良,改善症状,提高有效率。（3）功能性消化不良脾虚证大鼠出现胃肠动力下降,且大鼠血清、胃窦和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin表达下降,SS、VIP、CCK、CGRP上升,表明脑肠肽表达异常可能是功能性消化不良脾虚证的重要发病机制之一。给予香砂六君子加减方干预后,发现功能性消化不良脾虚证大鼠的症状体征有所改善,胃动力增强,其药物血清可以促进胃窦平滑肌细胞的增殖,香砂六君子加减方可以上调大鼠血清、胃窦和下丘脑中SP、GAS、Ghrelin的表达,下调大鼠血清、胃窦和下丘脑中SS、VIP、CCK、CGRP的表达,表明调节脑肠肽异常、恢复胃动力可能是香砂六君子加减方的药效作用机制之一。
朱惠彬[7]（2020）在《人参多糖对IEC-6细胞迁移钙离子调控相关指标影响的研究》文中进行了进一步梳理研究背景胃肠粘膜损伤是胃肠道疾病的病理基础之一;胃肠粘膜损伤修复包括早期快速修复和后续修复阶段,细胞迁移环节贯穿此两阶段。多胺在大鼠小肠隐窝上皮细胞（IEC-6）迁移的调控中发挥了重要作用,而细胞内游离钙离子（[Ca2+]cyt）是多胺调节细胞迁移的关键因素。[Ca2+].yt升高能促进细胞迁移,下调[Ca2+]cyt则抑制细胞迁移。[Ca2+]cyt来源于胞内钙库（内质网、肌质网）的释放和胞外Ca2+内流。磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）能催化水解磷脂磷酰肌醇-（4,5）二磷酸盐（PIP2）,产生肌醇（1,4,5）-三磷酸（IP3）和二酰甘油（DAG）,IP3通过与胞内钙库上的IP3R受体结合,释放钙库内Ca2+,提高[Ca2+]cyt;钙库Ca2+耗竭还能诱导由钙池-操纵性钙通道（SOC）介导的容量性Ca2+内流（CCE）。Rac1能与PLC-γ1相互作用形成Racl/PLC-γ1蛋白复合体,参与调节CCE和[Ca2+]cyt。瞬时受体电位通道1（TRPC1）是SOC的重要组成元件,参与了胞外Ca2+内流调控;RhoA、Cav-1能与TRPC1相互作用,形成RhoA/TRPC1和Cav-1/TRPC1蛋白复合体,促进TRPC1介导的胞外Ca2+内流。脾虚证患者可见胃肠粘膜损伤的病理改变,益气健脾中药能防治胃肠粘膜损伤。课题组前期研究发现四君子汤（君药为人参）多糖能防治吲哚美辛诱导的大鼠小肠粘膜损伤,机制研究提示其作用与影响小肠粘膜多胺和Ca2+含量有关;细胞实验则发现四君子汤、黄芪、白术的多糖提取物能促进细胞迁移,作用机制与影响细胞迁移多胺信号通路Ca2+调控有关;多糖是益气健脾中药的药效物质基础之一。研究目的观察人参多糖对吲哚美辛致小肠粘膜损伤的防治作用,细胞实验则观察人参多糖对IEC-6细胞迁移过程Ca2+调控相关机制的影响,以探讨人参促进小肠粘膜损伤修复的作用机制,为其治疗胃肠粘膜损伤的疗效机制提供参考。研究方法1.人参多糖的提取、分离和纯化:人参经水提醇沉、Sevag法去蛋白和DEAE-52纤维素层析纯化,分别得到人参多糖1、2、3样品;苯酚-硫酸法检测人参多糖三种样品的多糖含量;Folin-酚法检测“人参多糖2”样品的蛋白含量;高效液相凝胶色谱法对“人参多糖3”样品进行纯度分析。2.细胞迁移实验与受试药筛选:在划痕法细胞迁移模型,观察人参多糖三种样品对细胞迁移的影响,并筛选出促进细胞迁移药效最佳的样品作为后续实验的受试药。3.人参多糖防治大鼠小肠粘膜损伤的实验:吲哚美辛5mg/kg/d皮下注射,造模4d,每日造模前1h予人参多糖（5g/kg、15g/kg）灌胃治疗;5d时处死动物,大体观察小肠粘膜损伤情况,并刮取小肠粘膜用于Ca2+含量检测。4.比色法测定大鼠小肠粘膜Ca2+含量。5.Ca2+相关调控指标检测:①Western-blot 检测 RhoA、Cav-1、TRPC1、Rac1和PLC-γ1蛋白表达;②免疫共沉淀法检测RhoA/TRPC1、Cav-1/TRPC1和Racl/PLC-γ1蛋白复合体表达;③观察Rac1活性抑制剂NSC-23766对细胞迁移的影响,并以Western-blot或免疫共沉淀法观察人参多糖对NSC-23766负荷下Rac1、PLC-γ1及其蛋白复合体表达的影响。研究结果1.人参多糖提取、分离和纯化:①人参多糖1、2、3样品得率分别为6.50%、5.06%和2.70%。②人参多糖1、2、3样品多糖含量分别为65.25%、77.38%和97.21%,其中以“人参多糖3”多糖含量最高。2.细胞迁移实验与受试药筛选:人参多糖三种样品均能促进细胞迁移,在动物实验中,选择“人参多糖2”样品作为受试药,设置5g/kg和15g/kg（按照生药量计算）两个剂量组。在后续细胞实验中,选择“人参多糖3”样品作为受试药,设置20、40、80和160mg/L四个剂量组,部分实验设置80mg/L和160mg/L两个剂量组。3.人参多糖对吲哚美辛所致大鼠小肠粘膜损伤的影响:①能减轻大鼠小肠粘膜溃疡损伤;②提高造模大鼠小肠粘膜Ca2+含量。提示人参多糖对小肠粘膜损伤的防治作用,可能与提高粘膜Ca2+含量有关,也为从细胞水平探讨其小肠粘膜保护作用提供了研究基础。4.人参多糖对细胞迁移过程Ca2+调控相关指标的影响:①能促进细胞迁移过程RhoA、TRPC1蛋白表达,提高RhoA/TRPC1复合体表达。②能促进细胞迁移过程Cav-1蛋白表达,提高Cav-1/TRPC1复合体表达。③能促进细胞迁移过程Rac1、PLC-γ1蛋白表达,提高Rac1/PLC-γ1复合体表达。④NSC-23766能抑制细胞迁移并降低Rac1/PLC-γ1复合体表达,人参多糖能逆转NSC-23766对细胞迁移的抑制,提高Rac1、PLC-γ1蛋白和Racl/PLC-γ1复合体表达。提示人参多糖可能通过提高Ca2+调控相关蛋白及其复合体表达,增加Ca2+内流而促进细胞迁移。研究结论人参多糖能促进IEC-6细胞迁移,作用机制与其影响多胺信号通路Ca2+调控有关;人参多糖能防治吲哚美辛所致的大鼠小肠粘膜损伤,并提高小肠粘膜Ca2+含量;提示人参多糖是人参小肠粘膜损伤修复作用的药效成分之一。研究结果为探讨益气健脾中药人参胃肠粘膜保护机制提供了参考。
黄立[8]（2020）在《HAPS干预脾气虚证小鼠的药效评价及对肠道免疫功能的影响》文中提出中医理论认为临床常用中药黄芪蜜炙（honey-processed Astragalus,HPA）可增强黄芪（Astragalus membranaceus,AM）“补中益气”的作用,从而用于脾肺气虚、中气下陷之证。课题组前期药效学研究表明HPA水提液较AM水提液有更好的补气作用。而多糖是HPA水提液中一类重要的活性成分,本研究进一步考察蜜炙黄芪多糖（honey-processed Astragalus polysaccharides,HAPS）干预利血平致小鼠脾气虚证的药效作用,并结合微生物组学技术和代谢组学技术,从肠道菌群和肠道代谢生物标记物的角度探讨HAPS影响脾气虚证小鼠肠道免疫功能的作用机制。方法:腹腔注射利血平（0.2 mg/kg）15天建立脾气虚证小鼠模型,同时灌胃HAPS（60 mg/kg）和HPA水提液（8.4 g/kg）,考察其对小鼠体重,体征（眼睛,粪便,毛发和神态）计算的脾气虚症状得分,免疫器官脏器指数,血清细胞因子（TNF-α和IL-1β）,脾T淋巴细胞增殖能力,小肠长度和肠黏膜分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A,SIgA）等生理生化指标的影响;利用16S rRNA高通量测序技术分析HAPS对脾气虚证小鼠肠道菌群结构的影响;应用UPLC/Q-TOF MS技术进行盲肠内容物和粪便代谢组学分析,筛选HAPS干预脾气虚证小鼠的肠道相关生物标记物。结果:（1）与正常小鼠相比,脾气虚证小鼠体重增长缓慢,症状得分升高,脾脏和胸腺指数降低,血清TNF-α和IL-1β表达量减少,脾T淋巴细胞增殖能力下降,小肠长度减短和肠黏膜SIgA分泌量减少。HAPS和HPA水提液干预后脾气虚证小鼠体重增长恢复正常,症状得分减少,脾脏和胸腺指数,血清TNF-α和IL-1β表达量升高,脾T淋巴细胞增殖能力提高,小肠长度恢复,肠黏膜SIgA表达量升高。（2）脾气虚证小鼠肠道菌群结构失衡,物种丰富度和均匀度减少,致病菌增多引起物种多样性升高。从门水平上发现脾气虚证小鼠拟杆菌门相对丰度减少,厚壁菌门、放线菌门,变形菌门和ε-变形菌门相对丰度升高;属水平上发现多种菌属发生变化,例如乳酸杆菌属和另枝菌属相对丰度降低,拟普雷沃菌属、拟杆菌属和螺杆菌属相对丰度升高。HAPS能够增加脾气虚证小鼠菌群丰富度和均匀度,降低菌群多样性;能够调节拟杆菌门及其拟杆菌属,变形菌门及其螺杆菌属的相对丰度。HPA水提液对菌群丰富度、菌群度和多样性的调节能力较HAPS弱;其通过调节变形菌门和放线菌门,乳酸杆菌属、拟杆菌属、拟普雷沃菌属和螺杆菌属相对丰度调节菌群结构。（3）盲肠内容物和粪便代谢组学研究分别发现11和10个生物标记物,包括脂肪酸类,甘油磷脂类,甘油脂类,鞘脂类和和胆汁酸类物质。HAPS和HPA水提液可调节棕榈酸和鞘氨醇,亚油酸及其代谢产物（壬二酸和13-羟基十八碳二烯酸）和多种甘油磷脂和7-Ketodeoxycholic acid水平。HPA水提液还能调节牛磺胆酸,脱氧胆酸等胆汁酸类物质水平。HAPS和HPA水提液干预脾气虚证小鼠肠道代谢与甘油磷脂代谢,甘油脂代谢,亚油酸代谢和不饱和脂肪酸合成和脂肪酸降解等途径密切相关。此外,HAPS还对脂肪酸降解有显着影响。结论:HAPS能够作为HPA水提液发挥药效的重要基础物质,可显着改善脾气虚证小鼠的气虚症状,提高细胞免疫和肠道黏膜免疫功能。HAPS通过调节脾气虚证小鼠的肠道拟杆菌门及其拟杆菌属变形菌门及其螺杆菌属的相对丰度,促进宿主-肠道菌群对棕榈酸和鞘氨醇的代谢及促进肠黏膜SIgA的表达,并通过调节亚油酸及其代谢物和多种甘油磷脂水平,改善脾气虚证小鼠肠道免疫功能。
徐静汶[9]（2020）在《补中益气汤中用红芪替换黄芪的免疫调节作用比较及红芪多糖的抗免疫老化机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:红芪是豆科植物多序岩黄芪的干燥根,有野生和栽培品种,主产于甘肃。在红芪所含的多种活性物质研究中,红芪多糖的抗衰老作用的深入研究为我们应对中国老龄化带来的挑战打开了一扇窗。在中医众多延缓衰老方中,补中益气汤以黄芪为君药,重在补益中气,调节机体的后天之本,而红芪和黄芪都具有“补气升阳、固表止汗……”等多方面功效。红芪主销广东、福建等地并出口,常被认为是黄芪的优质品种。本论文希望通过研究红芪/黄芪为君药的补中益气汤对免疫衰老的免疫调节作用差异;通过对红芪中具有抗衰老作用的红芪多糖对免疫衰老的影响研究,为合理开发甘肃道地药材红芪以及红芪的临床科学使用提供依据。目的:比较红芪/黄芪为君药的补中益气汤对SAMP8小鼠免疫功能的调节作用,寻找红芪调节免疫功能的作用机制。研究红芪提取物红芪多糖-3（Hedysari polysaccharide 3,HPS-3）对SAMP8小鼠免疫功能的调节机制,为红芪的合理使用提供理论依据。方法:1.以等量红芪替代补中益气汤中的君药黄芪,分别制备红芪补中益气汤和黄芪补中益气汤。取10只昆明小鼠做为青龄模型组,40只SAMP8小鼠随机分成衰老模型组、胸腺肽阳性对照组、红补组、黄补组。各组连续灌胃给药14d后,HE染色观察小鼠脾脏结构变化;ELISA检测小鼠血清中细胞因子的含量;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的变化;实时荧光定量PCR检测脾淋巴细胞中p38MAPK mRNA的表达;Western Blot检测脾淋巴细胞中p38MAPK蛋白表达;免疫组化法检测小鼠脾脏组织p38MAPK蛋白表达。2.制备昆明小鼠脾淋巴细胞悬液,经不同浓度HPS-3干预72h后,MTT法测定HPS-3对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的最佳给药浓度。在此基础上,ELISA检测淋巴细胞培养上清中细胞因子的变化;流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的变化;透射电镜观察脾淋巴细胞超微结构的改变。3.制备SAMP8小鼠脾淋巴细胞悬液,经HPS-3干预72h后,提取出淋巴细胞中的总蛋白,Label free无标记定量质谱方法采集蛋白质质谱数据,经DAVID生物信息数据库分析,GO注释,KEGG Pathway通路分析,STRING平台,Reactome Pathways通路分析,查找差异蛋白可能参与的生物信号通路,分析差异蛋白的相互作用网络。Western Blot验证质谱分析结果的准确性。结果:1.与青龄模型组相比,衰老模型组小鼠的脾脏白髓占比减少,红髓与白髓之间的界限模糊;血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量低于青龄模型组（P<0.05）;脾脏T淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞亚群比例升高,CD8+T淋巴细胞亚群比例降低,CD28+T淋巴细胞亚群比例降低,CD28+CD152+T淋巴细胞亚群比例升高（P<0.05）;p38MAPK mRNA和蛋白的表达量下调（P<0.05）。与衰老模型组比较,红补组和黄补组的SAMP8小鼠脾脏结构改善,白髓占比增加;血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量均增高（P<0.05）,且红补组血清中IL-2含量高于黄补组（P<0.05）。红补组和黄补组的脾脏T淋巴细胞中CD8+T淋巴细胞亚群比例均升高（P<0.05）,CD4+T淋巴细胞亚群比例均降低,CD28+T淋巴细胞亚群比例均升高,CD28+CD152+T淋巴细胞亚群比例均降低（P<0.05）;红补组与黄补组均能上调p38MAPK mRNA和蛋白的表达,且红补组脾脏的p38MAPK mRNA的表达高于黄补组（P<0.05）。2.不同浓度的HPS-3与小鼠脾淋巴细胞共培养72 h,计算RGR,确定了100μg/mL是HPS-3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的最佳实验浓度。与空白对照组比较,HPS-3和ConA干预的小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-4降低（P<0.05）;IL-2、IFN-γ、TNF-α都升高（P<0.05）;CD3+T淋巴细胞亚群含量升高（P<0.05）;CD3+CD8+T淋巴细胞亚群的比例增加（P<0.05）;经HPS-3和ConA干预的脾淋巴细胞内呈现有更多的细胞器,淋巴细胞结构更加清晰,线粒体数量增加,线粒体嵴结构清晰。HPS-3组与ConA组比较,HPS-3组中IFN-γ、TNF-α的含量升高（P<0.05）;HPS-3组的CD3+CD8+T淋巴细胞亚群含量高于ConA组（P<0.05）。3.Label free无标记定量质谱检测结果显示,经HPS-3培养72h后,SAMP8小鼠的脾淋巴细胞中有194个蛋白丰度呈现显着变化（CON组和HPS组的表达量差异比率R值1.5倍以上:R值<0.7或>1.5,且P<0.05视为差异蛋白）,其中有172个蛋白显着上调,22个蛋白显着下调。DAVID生物信息数据库分析,GO注释和KEGG通路富集结果显示,这些差异蛋白被富集到12条主要通路,主要与淋巴细胞的泛素-蛋白酶体途径、代谢途径等相关。对差异蛋白间的相互作用结果分析显示HPS-3能上调“泛素-蛋白酶体途径”活性;能上调NF-kappa B信号通路活性。结论:1.红芪补中益气汤和黄芪补中益气汤都能够改善由衰老导致的免疫功能失衡问题,并且红芪补中益气汤升高SAMP8小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量,上调p38MAPK mRNA表达量高黄芪补中益气汤。2.HPS-3能够促进小鼠脾淋巴细胞增殖,使Th1细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α增加,Th2细胞因子IL-4减少,CD3+T和CD3+CD8+T淋巴细胞比例升高,淋巴细胞内细胞器增多。HPS-3能够促进细胞免疫应答。3.HPS-3能够上调SAMP8小鼠脾淋巴细胞中的“泛素-蛋白酶体”活性,上调NF-kappa B信号通路活性,促进细胞增殖与分化。
李叙颖[10]（2019）在《基于TLRs/MyD88/NF-κB通路探讨消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚大鼠的影响及作用机制》文中研究指明目的:通过观察消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚证大鼠甲状腺自身抗体、形态结构和甲功的干预作用,阐述桥本甲状腺炎肝郁脾虚证的病机实质;探讨消瘿颗粒通过调控甲状腺TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的活化及Treg/Th17细胞平衡,发挥对EAT肝郁脾虚证大鼠的抗炎、抗凋亡作用机制。材料与方法:首先,采用动物实验的方式,观察消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚证大鼠的干预作用,并探讨部分作用机制。SPF级雌性SD大鼠48只,适应性喂养一周后,采用随机数字法将大鼠分为两组:正常组（12只）、造模组（36只）。然后对造模组36只大鼠,采用高碘水联合甲状腺球蛋白皮下注射的方法诱导桥本甲状腺炎大鼠模型。至实验第5周,造模组大鼠增加慢性束缚应激,过度疲劳,饮食失节等复合干预因素,以此方法复制肝郁脾虚证型。至实验第8周末,通过检测血清中甲状腺自身抗体TGAb、TPOAb含量,评价桥本甲状腺炎模型。造模前后称取大鼠体重,比较各组间体重增长率;实验第8周末,进行大鼠糖水偏嗜实验,观察大鼠抑郁表现,评价肝郁脾虚证模型。将模型评价成功的大鼠再次随机分为三组:模型组（12只）、雷公藤组（11只）、消瘿颗粒组（11只）。并分别给予不同药物干预,给药周期为8周。大鼠给药剂量根据人与大鼠的体表面积等效剂量换算方法计算。正常组与模型组大鼠经口灌胃2ml蒸馏水,每日两次,连续8周;雷公藤组大鼠按照9.45mg/kg·d-1的剂量给予雷公藤多苷片经口灌胃,连续8周;消瘿颗粒组大鼠按照16.17g/kg·d-1的生药量给予消瘿颗粒经口灌胃,连续8周。治疗8周后,取大鼠腹主动脉血和甲状腺组织检测相关指标。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组大鼠血清中TGAb、TPOAb、FT3、FT4、TSH、IL-10、IL-17、IL-23水平;采用HE染色法检测甲状腺组织病理形态改变;电镜观察甲状腺超微结构;TUNEL法检测甲状腺组织细胞凋亡情况;Western blot法检测甲状腺组织Foxp3、RORγt、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平。然后,通过对中医“瘿病”的古代文献挖掘和近代文献检索,探讨桥本甲状腺炎肝郁脾虚证的中医学及现代医学发病机制,为疏肝健脾法治疗桥本甲状腺炎提供科学的中医学及现代医学理论支持。结果:1.模型评价:与正常组比较,造模组大鼠血清甲状腺抗体TGAb、TPOAb水平均显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常组比较,造模组大鼠糖水消耗率、体重增长率明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。2.一般状态:正常组大鼠外观行为等未见异常。造模组大鼠造模前期表现为易怒,束缚时强烈反抗、挣扎,解除束缚后迅速躲避、背毛竖立。造模后期,造模组大鼠从易怒逐渐出现抑郁表现,活动减少、喜扎堆拱背、对束缚反应减弱、背毛粗糙蓬松易脱落、暗黄乏泽,嗜睡,倦怠,食少,时有稀便。治疗后,雷公藤组和消瘿颗粒组大鼠上述一般情况明显改善。剔除2只未成模大鼠,故成模率为94.44%。治疗后每组取一只大鼠,检测指标前进行预实验,模型组有1只大鼠灌胃操作不当而死亡,正常组1只大鼠血标本溶血,故每组剩下10只大鼠完整标本做相应指标的检测。3.各组大鼠血清TGAb、TPOAb水平:与正常组比较,模型组、雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠血清TGAb、TPOAb水平均升高,除消瘿颗粒组大鼠血清TPOAb水平以外,差异有统计学意义（P<0.01或0.05）;与模型组比较,雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠血清TGAb、TPOAb水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与雷公藤组比较,消瘿颗粒组大鼠血清TGAb、TPOAb水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）。4.各组大鼠血清FT3、FT4、TSH水平:与正常组比较,模型组、雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠血清FT3、FT4水平均降低（P<0.01或0.05）,TSH水平升高（P<0.01）,差异有统计学意义;与模型组比较,雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠血清FT3、FT4水平升高,TSH水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与雷公藤组比较,消瘿颗粒组大鼠血清FT3、FT4水平升高,TSH水平降降低,差异有统计学意义（P<0.01）。5.各组大鼠甲状腺组织病理形态变化:正常组甲状腺结构完整,形态规则,滤泡大小及形态较均匀一致,间质无明显淋巴细胞浸润;模型组甲状腺组织结构破坏,部分滤泡扩大,部分滤泡萎缩,滤泡腔内及间质组织中可见大量淋巴细胞浸润,伴随间质纤维化;雷公藤组甲状腺部分滤泡扩大,部分滤泡萎缩,滤泡腔内及间质组织中淋巴细胞浸润减少,纤维化程度减轻;消瘿颗粒组甲状腺病理形态特点与雷公藤组类似,滤泡腔内及间质中淋巴细胞浸润数量减少,无明显纤维化形成。6.电镜下甲状腺超微结构改变:正常组细胞大小适中,胞膜规整,游离面微绒毛稀疏,细胞核呈圆形,核膜清晰完整,胞质呈匀质状,内有丰富的细胞器,粗面内质网清晰可辨,未见凋亡小体;模型组胞体皱缩,胞膜不规则,游离面微绒毛增多、不整齐,细胞核固缩、核膜不规则或破裂,胞质内细胞器减少,内质网高度扩张水肿,线粒体明显减少,部分线粒体嵴消失,可见有凋亡小体形成;雷公藤组胞体肿胀,胞膜较规整,游离面微绒毛较规则,胞核呈椭圆形,核膜较厚、完整清晰,胞质内出现大小不等的空泡,部分细胞器溶解,内质网明显肿胀,未见凋亡小体;消瘿颗粒组胞体略肿胀,胞膜较规整,游离面微绒毛少而规则,细胞核呈圆形或椭圆形,核膜完整,胞质内细胞器略减少,见少量空泡,内质网轻度扩张,与模型组相比,形态结构趋于正常,未见凋亡小体。7.各组大鼠甲状腺组织细胞凋亡数:与正常组比较,模型组、雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织细胞凋亡数升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织细胞凋亡数降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与雷公藤组比较,消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织细胞凋亡数略升高,而两组比较无统计学意义。8.各组大鼠甲状腺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平:与正常组比较,模型组、雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与雷公藤组比较,消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织TLR2、TLR4、MyD88、NF-κBp65蛋白表达水平升高,但无统计学意义。9.各组大鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平:与正常组比较,模型组、雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠血清IL-10水平均降低,IL-17、IL-23水平均显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠血清IL-10水平升高（P<0.01或0.05）,IL-17、IL-23水平降低（P<0.01）,差异有统计学意义;与雷公藤组比较,消瘿颗粒组大鼠血清IL-10水平升高（P<0.01）,IL-17、IL-23水平降低（P<0.01）,差异有统计学意义。10.各组大鼠甲状腺组织Foxp3、RORγt蛋白表达:与正常组比较,模型组、雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织Foxp3蛋白表达降低,RORγt蛋白表达升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,雷公藤组、消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织Foxp3蛋白表达升高,RORγt蛋白表达降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与雷公藤组比较,消瘿颗粒组大鼠甲状腺组织Foxp3蛋白表达升高,RORγt蛋白表达降低,但无统计学意义。结论:1.高碘水联合甲状腺球蛋白皮下注射诱导桥本甲状腺炎大鼠模型后,附加慢性束缚、过度疲劳、饮食失节等复合干预因素,能够成功建立EAT肝郁脾虚病证结合大鼠模型,能够较好地模拟临床桥本甲状腺炎肝郁脾虚证的病症特点。2.消瘿颗粒通过降低甲状腺自身抗体、减轻甲状腺组织病理及超微结构损伤、减轻甲减,对EAT肝郁脾虚模型大鼠起到了治疗作用。3.消瘿颗粒通过抑制TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的异常活化,从而减轻了EAT肝郁脾虚模型大鼠的甲状腺细胞凋亡;升高血清IL-10水平,降低血清IL-17、IL-23水平,起到抗炎作用。4.消瘿颗粒亦通过调节Treg/Th17平衡紊乱,从而发挥抑制桥本甲状腺炎模型大鼠的炎症反应作用。
二、脾虚证模型小白鼠血清对细胞免疫调节的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脾虚证模型小白鼠血清对细胞免疫调节的实验研究（论文提纲范文）
（1）基于Homer1-mGluR5及mTOR通路探讨逍遥散对抑郁症肝郁脾虚证大鼠神经保护作用机理（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 综述 |
| 综述一: 中医药治疗抑郁症肝郁脾虚证作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二: 逍遥散治疗抑郁症肝郁脾虚证药效物质基础研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 体内实验 |
| 实验一 CUMS复制抑郁症肝郁脾虚证病证结合大鼠模型及逍遥散药效物质基础研究 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 统计学分析 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二: 逍遥散通过调节Homer1/mGluR5及mTOR通路防治抑郁症肝郁脾虚证 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 统计学分析 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 体外实验 |
| 实验一: Homer1基因沉默慢病毒载体设计构建 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 逍遥散通过Homer1-mGluR5及下游mTOR通路对谷氨酸诱导的HT-22细胞的神经保护作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 统计学分析 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）补中益气汤（方）与脾虚肌无力（证）方证关联的生物学基础（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医脾虚证的研究现状 |
| 1. 脾虚证的现代内涵 |
| 2. 脾虚肌无力模型的研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 “补中益气汤”防治肌肉疾病的研究概况 |
| 1. 临床研究 |
| 2. 实验研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 肌肉减少症的分子机制 |
| 1. 蛋白质合成与分解失衡 |
| 2. 激素水平 |
| 3. 炎性因子 |
| 4. 神经-肌肉功能衰退 |
| 5. 氧化应激与线粒体损伤 |
| 6. 其他 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 研究一 脾虚肌无力小鼠模型的建立与评价 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 脾虚肌无力小鼠肌肉蛋白质失衡的分子机制及补中益气汤的干预作用 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1. 立论背景与研究思路 |
| 2. 脾虚肌无力证模型小鼠的建立与评价 |
| 3. 脾主肌肉及脾虚肌无力的现代病生理学内涵 |
| 4. 补中益气汤健脾强肌功效的现代作用机制 |
| 5. 补中益气汤(方)-脾虚肌无力(证)关联的生物学基础 |
| 6. 本研究的创新点及局限性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）基于衰老分子机制探讨脾虚证-补中益气汤相关的生物学基础（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 “方证相关”研究进展 |
| 前言 |
| 1 方证相关的文献研究与数据挖掘 |
| 2 方证相关的临床应用 |
| 3 方证相关的实验探索 |
| 4 方证相关的生物信息学研究 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 脾虚证与衰老相关的研究进展 |
| 1 脾虚与衰老关系的中医学认识 |
| 2 脾虚与衰老相关性的临床研究进展 |
| 3 脾虚与衰老相关性的实验研究进展 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 补中益气汤现代研究进展 |
| 1 补中益气汤的临床应用 |
| 2 补中益气汤药理研究 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 研究一 脾虚证分子内涵与补中益气汤作用相关的网络药理学研究 |
| 1 数据库及软件 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究二 脾虚证演变与衰老相关的探讨 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 从衰老探察脾虚证现代内涵及补中益气汤的作用机制 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 立论背景及研究思路 |
| 2 脾虚模型大鼠的衰老样变及其生物学表征 |
| 3 脾虚证脑衰老样变的炎性损伤机制 |
| 4 补中益气汤的抗衰作用及其分子机制 |
| 5 研究创新点与局限性 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（4）慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 脾虚证内涵源流及现代研究进展 |
| 一、前言 |
| 二、脾虚证的中医概念形成源流 |
| 三、脾虚证的现代研究进展 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 综述二 转录组学在中医证候研究中的应用 |
| 一、前言 |
| 二、转录组学及其检测技术概况 |
| 三、转录组学与中医证候 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 健康人气虚体质相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二部分 慢性胃炎脾虚证相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 结语和展望 |
| 一、脾虚证的潜在生物学机制 |
| 二、本研究的局限性 |
| 三、对中医学现代化研究的思考与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠疗效的微生态学机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词(Abbreviations) |
| 细菌名词英--中对照 |
| 前言 |
| 第一章 肠道湿热证泄泻小鼠模型的建立及葛根芩连汤疗效 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果与分析 |
| 2.1 肠道湿热证泄泻模型的建立 |
| 2.2 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠的疗效 |
| 3.讨论 |
| 第二章 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠血常规和脏器指数的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 肠道湿热证泄泻造模对小鼠血常规的影响 |
| 2.2 肠道湿热证泄泻造模对小鼠脏器指数的影响 |
| 2.3 葛根芩连汤治疗对肠道湿热证泄泻小鼠血常规的影响 |
| 2.4 葛根芩连汤治疗对肠道湿热证泄泻模型小鼠脏器指数的影响 |
| 3.讨论 |
| 第三章 葛根莲芩汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道可培养微生物、微生物活度和酶活性的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道可培养微生物的影响 |
| 2.2 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道微生物活度的影响 |
| 2.3 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道内容物酶活性的影响 |
| 2.4 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道黏膜酶活性的影响 |
| 2.5 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠可培养微生物的影响 |
| 2.6 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道微生物活度的影响 |
| 2.7 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道内容物酶活性影响 |
| 2.8 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道黏膜酶活性的影响 |
| 3.讨论 |
| 第四章 肠道湿热证泄泻小鼠肠道微生物特征 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 有效序列的分析评估 |
| 2.2 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道OTU 数目的影响 |
| 2.3 肠道湿热证泄泻造模对小鼠肠道微生物多样性的影响 |
| 2.4 肠道湿热证泄泻造模对模型小鼠肠道内容物细菌在门水平上的影响 |
| 2.5 肠道湿热证泄泻造模对模型小鼠肠道内容物细菌在属水平上的影响 |
| 2.6 肠道湿热证泄泻造模对模型小鼠肠道内容物细菌种水平上影响 |
| 2.7 物种Lefse 差异分析 |
| 3.讨论 |
| 第五章 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌特征的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 有效序列分析评估 |
| 2.2 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道 OTU 数目的影响 |
| 2.3 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌多样性的影响 |
| 2.4 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌门水平上的影响 |
| 2.5 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌属水平上的影响 |
| 2.6 葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道细菌种水平上的影响 |
| 2.7 物种显着性差异分析-Lefse分析 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 作者简介 |
| 综述 泄泻中医证型研究进展 |
| 参考文献 |
（6）功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 功能性消化不良的研究进展 |
| 1. 功能性消化不良的发病机制 |
| 2. 功能性消化不良的现代医学治疗方法 |
| 3. 功能性消化不良的中医治疗 |
| 4. 功能性消化不良动物模型研究 |
| 5. 小结 |
| 综述二 脑肠肽的研究进展 |
| 1. 脑肠肽的概念 |
| 2. 相关脑肠肽的研究 |
| 3. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 理论研究 |
| 理论研究一 功能性消化不良的中医理论研究 |
| 1. 功能性消化不良的中医病名 |
| 2. 中医对功能性消化不良症状的认识 |
| 3. 中医对功能性消化不良病因病机的认识 |
| 4. 结论 |
| 理论研究二 香砂六君子加减方治疗功能性消化不良脾虚证的理论研究 |
| 1. 功能性消化不良中医证型的分布情况 |
| 2. 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证的理论与文献依据 |
| 3. 结论 |
| 文献研究 香砂六君子汤治疗功能性消化不良的系统评价 |
| 1 资料和方法 |
| 2 研究结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 结论 |
| 实验研究 |
| 实验研究一 功能性消化不良脾虚证大鼠模型的复制与评价 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究二 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证大鼠的疗效 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究三 香砂六君子加减方干预功能性消化不良脾虚证大鼠的生物学基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究四 功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞的制备与培养 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究五 香砂六君子加减方药物血清干预功能性消化不良脾虚证大鼠胃窦平滑肌细胞条件的筛选 |
| 1. 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 实验研究六 香砂六君子加减方药物血清干预功能性消化不良脾虚证大鼠离体胃窦平滑肌细胞的生物学基础研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）人参多糖对IEC-6细胞迁移钙离子调控相关指标影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一章 胃肠粘膜损伤及修复的研究 |
| 第一节 胃肠粘膜损伤研究概况 |
| 第二节 胃肠粘膜损伤修复的研究概况 |
| 第三节 脾虚与胃肠粘膜损伤 |
| 第二章 多胺对胃肠粘膜损伤修复的影响 |
| 第一节 多胺对细胞迁移的影响 |
| 第二节 多胺对细胞增殖的影响 |
| 第三节 多胺对细胞凋亡的影响 |
| 第三章 益气健脾方药胃肠粘膜损伤修复的研究概况 |
| 第一节 益气健脾方药的临床研究概况 |
| 第二节 益气健脾方药的基础研究概况 |
| 第三节 益气健脾中药人参的研究概况 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 人参多糖提取、分离纯化及对IEC-6细胞迁移的影响 |
| 第一节 人参多糖的提取和分离纯化 |
| 第二节 “人参多糖1、2、3”促进IEC-6细胞迁移的药效筛选 |
| 第二章 人参多糖对吲哚美辛诱导小肠粘膜损伤的防治作用 |
| 第一节 人参多糖对模型大鼠小肠粘膜溃疡损伤大体评分的影响 |
| 第二节 人参多糖对模型大鼠小肠粘膜Ca~(2+)含量的影响 |
| 第三章 人参多糖对细胞迁移Ca~(2+)调控相关指标的影响 |
| 第一节 人参多糖对RhoA、TRPC1蛋白及其复合体表达的影响 |
| 第二节 人参多糖对Cav-1、TRPC1蛋白及其复合体表达的影响 |
| 第三节 人参多糖对Rac1、PLC-Y1蛋白及其复合体表达的影响 |
| 第四节 人参多糖对NSC-23766负荷下Rac1、PLC-Y1及复合体表达影响 |
| 结语 |
| 一、讨论 |
| 二、结论 |
| 三、创新性 |
| 四、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（8）HAPS干预脾气虚证小鼠的药效评价及对肠道免疫功能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 蜜炙黄芪 |
| 1.2 蜜炙黄芪多糖 |
| 1.3 脾气虚证 |
| 1.3.1 脾气虚证免疫功能 |
| 1.3.2 脾气虚证模型 |
| 1.4 肠道菌群 |
| 1.4.1 肠道菌群与肠道免疫功能 |
| 1.4.2 肠道菌群与肠道代谢 |
| 1.4.3 脾气虚证与肠道菌群 |
| 1.5 代谢组学 |
| 1.5.1 样品前处理 |
| 1.5.2 样品检测 |
| 1.5.3 数据处理与分析 |
| 1.5.4 生物标记物生物学意义 |
| 1.6 研究内容与意义 |
| 1.6.1 研究内容 |
| 1.6.2 意义 |
| 第二章 HAPS对利血平所致脾气虚证小鼠的干预作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 仪器与试剂 |
| 2.2.2 实验动物 |
| 2.2.3 试液配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 动物实验 |
| 2.3.2 血清细胞因子和肠黏膜SIgA |
| 2.3.3 小鼠脾淋巴细胞增殖能力 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 小鼠体重百分率和平均食量 |
| 2.4.2 小鼠症状得分,脏器指数,免疫分子和小肠长度 |
| 2.4.3 小鼠脾T淋巴细胞增殖 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第三章 基于16S rRNA测序技术的HAPS干预利血平所致脾气虚证小鼠肠道菌群研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 仪器与试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 小鼠粪便肠道菌群DNA抽提 |
| 3.3.2 PCR扩增 |
| 3.3.3 PCR产物纯化与定量 |
| 3.3.4 Miseq文库构建和Illumina Miseq测序 |
| 3.3.5 数据优化 |
| 3.3.6 物种注释与评估 |
| 3.3.7 物种组成分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 Rank-Abundance曲线 |
| 3.4.2 Alpha多样性分析和稀释曲线 |
| 3.4.3 物种组成分析 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第四章 HAPS干预利血平所致脾气虚证小鼠的盲肠内容物和粪便代谢组学研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 仪器与试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 样品前处理 |
| 4.3.2 UPLC/Q-TOF MS分析 |
| 4.3.3 数据处理 |
| 4.3.4 生物标记物的筛选与鉴定 |
| 4.3.5 代谢通路分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 小鼠盲肠内容物和粪便代谢图谱 |
| 4.4.2 PCA对代谢组学样品测定过程数据质量的评估 |
| 4.4.3 盲肠内容物和粪便代谢组学多元统计分析 |
| 4.4.4 生物标记物的筛选与鉴定 |
| 4.4.5 生物标记物通路分析 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
（9）补中益气汤中用红芪替换黄芪的免疫调节作用比较及红芪多糖的抗免疫老化机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 补中益气汤应用概况 |
| 1.3 红芪与黄芪在种植(种质)、成分、功效方面的比较研究 |
| 1.4 红芪现代研究 |
| 1.4.1 红芪种植研究 |
| 1.4.2 红芪成分研究 |
| 1.4.3 红芪功效研究 |
| 1.5 红芪多糖研究 |
| 1.5.1 红芪多糖提取工艺研究 |
| 1.5.2 红芪多糖含量测定及多糖组分研究 |
| 1.5.3 红芪多糖功效及相关机制研究 |
| 1.6 Label free技术在中药作用机制研究中的作用 |
| 1.7 立题依据 |
| 1.8 技术路线图 |
| 第二章 用红芪替代补中益气汤中的君药黄芪对SAMP8小鼠抗免疫老化作用比较研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 试剂和仪器 |
| 2.1.3 药物 |
| 2.2 实验方法与步骤 |
| 2.2.1 分组及给药 |
| 2.2.2 小鼠脾淋巴细胞悬液制备 |
| 2.2.3 HE染色观察小鼠脾脏病理组织学变化 |
| 2.2.4 ELISA检测血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量 |
| 2.2.5 流式细胞术检测T淋巴细胞亚群 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR检测脾淋巴细胞中p38MAPK mRNA表达量 |
| 2.2.7 Western Blot检测脾淋巴细胞中p38MAPK蛋白的表达 |
| 2.2.8 免疫组化法检测小鼠脾脏p38MAPK蛋白 |
| 2.2.9 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 补中益气汤对SAMP8小鼠生命状态的影响 |
| 2.3.2 补中益气汤对SAMP8小鼠脾脏病理组织学变化的影响 |
| 2.3.3 补中益气汤对SAMP8小鼠血清细胞因子含量的影响 |
| 2.3.4 补中益气汤对SAMP8小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响 |
| 2.3.5 补中益气汤对SAMP8 小鼠脾淋巴细胞中的p38MAPK mRNA的影响 |
| 2.3.6 补中益气汤对SAMP8 小鼠淋巴细胞中的p38MAPK蛋白表达的影响 |
| 2.3.7 补中益气汤对SAMP8 小鼠脾脏p38MAPK蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 红芪多糖促进小鼠脾淋巴细胞增殖的实验研究 |
| 3.1 实验动物 |
| 3.2 试剂与仪器 |
| 3.2.1 试剂 |
| 3.2.2 仪器 |
| 3.3 实验过程 |
| 3.3.1 红芪多糖制备 |
| 3.3.2 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 |
| 3.3.3 MTT法测定HPS-3 对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 |
| 3.3.4 ELISA测定HPS-3 对淋巴细胞培养上清细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和 IL-4 的影响 |
| 3.3.5 FCM测定HPS-3 对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响 |
| 3.3.6 透射电镜观察HPS-3对脾淋巴细胞超微结构的改变 |
| 3.4 统计学方法 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 HPS-3对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响 |
| 3.5.2 HPS-3 对小鼠脾淋巴细胞产生Th1/Th2 细胞因子的影响 |
| 3.5.3 HPS-3对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响 |
| 3.5.4 HPS-3对脾淋巴细胞超微结构的改变 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 结论 |
| 第四章 Label Free蛋白质组学研究红芪多糖对衰老小鼠脾淋巴细胞作用的机制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 动物 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 仪器 |
| 4.1.4 软件工具和相关数据库 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 样本制备 |
| 4.2.2 质谱数据采集 |
| 4.2.3 数据分析 |
| 4.2.4 生物信息分析 |
| 4.2.5 Western Blot验证差异蛋白的表达 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 质谱分析数据总体情况 |
| 4.3.2 组间显着差异表达蛋白解析 |
| 4.3.3 差异蛋白GO分析 |
| 4.3.4 差异蛋白聚类分析 |
| 4.3.5 差异蛋白KEGG通路分析 |
| 4.3.6 STRING分析 |
| 4.3.7 上调差异蛋白Reactome Pathways通路分析 |
| 4.3.8 Western Blot验证上调的免疫调节相关的差异表达蛋白 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 结论 |
| 第五章 结论 |
| 附 质谱信息 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（10）基于TLRs/MyD88/NF-κB通路探讨消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚大鼠的影响及作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚模型大鼠甲状腺形态结构及功能的干预作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚模型大鼠甲状腺组织TLRs/My D88/NF-κB信号通路影响的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚模型大鼠血清IL-10、IL-17、IL-23 水平及甲状腺组织Foxp3、RORγt蛋白表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四 桥本甲状腺炎肝郁脾虚病机理论探析 |
| 桥本甲状腺炎的病名及病因病机溯源 |
| 瘿病肝郁脾虚证病机实质探析 |
| 瘿病肝郁脾虚证与桥本甲状腺炎发病机制的相关性分析 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 桥本甲状腺炎中医诊治进展 |
| 综述二 TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
四、脾虚证模型小白鼠血清对细胞免疫调节的实验研究（论文参考文献）
- [1]基于Homer1-mGluR5及mTOR通路探讨逍遥散对抑郁症肝郁脾虚证大鼠神经保护作用机理[D]. 柳辰玥. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]补中益气汤（方）与脾虚肌无力（证）方证关联的生物学基础[D]. 钱梦. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]基于衰老分子机制探讨脾虚证-补中益气汤相关的生物学基础[D]. 朱昊如. 北京中医药大学, 2020(04)
- [4]慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究[D]. 桑小普. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠疗效的微生态学机理研究[D]. 惠华英. 湖南中医药大学, 2020
- [6]功能性消化不良脾虚证证候及香砂六君子加减方的作用机理研究[D]. 戴宁. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]人参多糖对IEC-6细胞迁移钙离子调控相关指标影响的研究[D]. 朱惠彬. 广州中医药大学, 2020
- [8]HAPS干预脾气虚证小鼠的药效评价及对肠道免疫功能的影响[D]. 黄立. 广东药科大学, 2020(01)
- [9]补中益气汤中用红芪替换黄芪的免疫调节作用比较及红芪多糖的抗免疫老化机制研究[D]. 徐静汶. 兰州大学, 2020(01)
- [10]基于TLRs/MyD88/NF-κB通路探讨消瘿颗粒对EAT肝郁脾虚大鼠的影响及作用机制[D]. 李叙颖. 辽宁中医药大学, 2019(01)