一、ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES ON THE ENUCLEATION AND THE REPLICATION OF SEVERAL VIRUSES IN ENUCLESTED CELLS（论文文献综述）
郭仁[1]（1980）在《体外培养细胞的去核技术及其在病毒学研究中的应用(综述)》文中研究说明 真核细胞有两个主要的组成部分:细胞核和细胞质。细胞学家和细胞生物学家一直在努力探讨这两个组成部分的独立活性及其相互作用。最初应用显微操作将细胞核从完整的甲细胞取出,再移植到已去核的乙细胞中,或者研究去核细胞质的行为和特性[1]。但是这种方法观察的细胞数少,容易给细胞造成不可弥补的损伤。1967年Carter发现细胞松弛素B（Cytochalasin B,简称CB）,可使少数培养的L细胞自发地脱核[2]。此项工作已为许多研究者证实[3～7]。1972年Prescott等人应用CB处理细胞,并辅以高速离心,可使95％以上的体外培养细胞脱去细胞核[4]。从而形成一种新的体外培养细胞的去核技术。此种无核细胞可做为一种工具,用以研究无核条件下细胞质大分子的稳定性,核,质相互作用关系,以及特定细胞功能的控制和表达等。这种技术也可研究病毒在细胞中的复制过程、病毒与细胞相互作用关系等问题。
赵庆贺[2]（2006）在《层状结构生物相容微胶囊的制备及其药物传输性能》文中研究指明1991年，Decher等提出基于静电相互作用的层层自组装概念；1998年，M（o|¨）hwald等人将此技术应用于可去除的胶体颗粒，得到一种具有全新结构的微胶囊。本文通过层层自组装技术将聚电解质组装到胶体微粒上，去除胶体微粒模板后得到中空微胶囊，并探索了其在药物传输体系中的应用。首先利用无机沉淀法合成聚苯乙烯磺酸钠（PSS）掺杂的碳酸钙胶体微粒（CaCO3（PSS）），在其表面层层组装PSS和聚烯丙基胺盐酸盐（PAH）。用乙二胺四乙酸二钠（EDTA）溶去碳酸钙后，得到内部填充PSS的微胶囊。这种微胶囊对带正电荷的小分子药物、荧光探针和大分子多糖具有强烈的自沉积效应，而排斥带负电荷的分子。以PSS／PAH微胶囊为药物载体，研究了抗癌药物柔红霉素（DNR）和阿霉素（DOX）的药物投料浓度、离子强度和温度等条件对药物在微胶囊内沉积的影响。定量分析结果表明，在更高的药物初始浓度、更高的盐浓度下可将更多的药物包埋到微胶囊中（在药物投料浓度为1mg／mL时，DNR和DOX在微胶囊内的浓度分别达到29.6mg／mL和32.0mg／mL。）。由于微胶囊中预先包埋的PSS会释放出来，去核后在微胶囊表面额外组装聚电解质则导致药物包埋效率的降低。研究了不同层数的微胶囊对DNR和DOX的控释性能，药物自微胶囊中的释放在最初四小时内遵循扩散控制的释放机理。为制备生物相容性更好的微胶囊，采用天然多糖在碳酸钙微粒表面层层自组装，然后去核。碳酸钙模板的合成是在羧甲基纤维素钠（CMC）存在下通过硝酸钙与碳酸钠反应得到。通过热失重分析得出CMC在CaCO3（CMC）中的含量为5.3％。将两种生物相容性多糖壳聚糖和海藻酸钠依次组装在CaCO3（CMC）模板表面。Zeta-电位分析揭示了壳聚糖和海藻酸钠在碳酸钙表面的层层增长。将囊壁用戊二醛交联之后，微胶囊的稳定性显着提高。这样制备的壳聚糖／海藻酸钠微胶囊可自发包埋带正电荷的小分子物质如罗丹明6G。微胶囊的体外细胞培养显示出其具有良好的生物相容性。采用包埋DOX的微胶囊进行体外细胞培养和体内动物试验。完全由多糖制备的微胶囊通过在CMC掺杂的CaCO3微粒表面层层组装带相反电荷的壳聚糖和海藻酸钠，采用戊二醛交联囊壁，然后用EDTA去核。如此得到的微胶囊含有带负电的CMC，其在微胶囊中可能呈自由状态，或与第一层过量的壳聚糖形成络合物。这种微胶囊对带正电的DNR和DOX显示出强烈的富集效应，在药物投料浓度为1mg／mL时，两种药物在微胶囊内的浓度分别达到83.7mg/mL和88.6mg/mL。激光共聚焦显微镜（CLSM）和透射电镜（TEM）揭示了药物在微胶囊内均匀分布。被包埋的药物可以重新释放出来，并在起始阶段遵循扩散控制释放机理。采用包埋DOX的微胶囊进行动物试验，通过相差显微镜、CLSM和TEM等显微技术和吖啶橙、Hoechst33342和四氧化锇等染色方法证明载药微胶囊能够有效诱导HepG2肝癌细胞的凋亡。将HepG2肝癌细胞种植到BALB／c／nu裸鼠右前肢腋下产生肿瘤，采用载药微胶囊进行治疗。经4周体内培养，结果显示包埋的DOX（抑制率40.3％）比游离的DOX（抑制率30.6％）具有更好的治疗效果。本文进一步合成了两端带有氨基的PEG，以其作为间隔基，将叶酸接枝到聚电解质微胶囊表面，利用叶酸和细胞表面的叶酸受体的特异识别作用，实现叶酸修饰微胶囊对肝癌细胞的特异性黏附，并初步评价了叶酸修饰微胶囊包埋阿霉素后对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用。
孙洪亮[3]（2014）在《Scriptaid对水牛体细胞克隆效率的影响及其相关分子机理的研究》文中进行了进一步梳理体细胞克隆技术是一种具有广阔应用前景的家畜遗传改良技术,故而成为当今生物技术的研究热点。然而,目前体细胞克隆的效率还很低,主要表现在克隆胚胎发育率低,移植后妊娠率低、流产率高、胎盘异常或出生儿体重过大等问题,使得体细胞克隆技术在实际生产应用中受到限制。有研究表明,异常的表观遗传修饰是克隆胚胎效率低的主要原因,而组蛋白乙酰化和DNA甲基化修饰是表观遗传修饰的两个重要方面。因此,本研究系统探讨了组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对水牛体细胞核移植重构胚发育潜能及胚胎表观遗传修饰的影响及其对克隆胚胎合子基因激活的影响,同时研究了Scriptaid对水牛转基因效果的影响,以期进一步提高水牛体细胞克隆和转基因克隆的效率。具体的研究结果如下。1.本研究首先采用醋酸地衣红染色法确定了水牛卵母细胞不同成熟培养时间的核相分布情况,然后利用细胞免疫组化技术和定量PCR技术分别分析水牛卵母细胞组蛋白乙酰化修饰的情况,并探讨Scriptaid对卵母细胞组蛋白乙酰化修饰的影响,从而建立一种检测水牛卵母细胞组蛋白乙酰化修饰相关蛋白和基因表达的技术方法。结果显示：体外成熟培养0h时大约91.8%的卵母细胞处于GV期,培养9h时,有83.3%的卵母细胞发生GVBD;随着成熟培养时间延长,到达15 h时,卵母细胞处在MⅠ期的比率达到72.5%,培养至22 h时,有59.6%的卵母细胞进入M Ⅱ期。水牛卵母细胞体外成熟过程中组蛋白H3K18乙酰化水平从GV期到GVBD期开始升高,MⅠ期突然消失,MⅡ期重新升高,在第一极体上也观察到荧光信号,经500 nmol/L Scriptaid处理水牛卵母细胞24 h,MⅠ期的卵母细胞组蛋白H3K18乙酰化水平显着增强（P<0.05）,呈现出从GV期到GVBD期开始升高,到MⅠ时期下降,而后到M Ⅱ期乙酰化水平重新升高的趋势。而CBP, p300和HAT1基因在水牛卵母细胞成熟过程各个时期（GV, GVBD, M I,M Ⅱ）的表达水平呈现出升高的趋势,HDAC1和HDAC2基因的表达水平从GV到MⅡ期显示出先升高后下降的波浪线趋势；而经500 nmol/L Scriptaid处理水牛卵母细胞24 h后,CBP, p300和HAT1基因在各个时期的表达水平显着提高（P<0.05）,仍表现出上升的趋势；HDAC2基因的表达水平在MⅡ期显着地降低（P<0.05）,从GV到MⅡ期表现出先升高后下降的波浪线趋势,而HDAC1基因在各个时期的表达呈现出从GV期到MⅠ期先下降,而后到MⅡ期升高的趋势。2.研究了Scriptaid处理水牛SCNT胚胎后对其发育能力及组蛋白乙酰化修饰的影响。水牛SCNT胚胎经不同浓度Scriptaid （0,250,500,750 nmol/L）处理12 h后,500 nmol/L Scriptaid处理组的囊胚发育率显着高于未处理组（19.2% vs 10.3%,P<0.05）。当水牛SCNT胚胎用500 nmol/L Scriptaid处理不同时间（Oh,6h,12h,18h,24h,30h和36 h）时,24 h组的囊胚发育率（28.2%）显着高于对照组（13.6%）,6h组（15.5%）和12 h组（17.4%）。不同类型胚胎组蛋白H3K18乙酰化修饰和整体DNA甲基化修饰的细胞免疫组化分析发现,SCNT组胚胎各个时期（2-细胞,8-细胞,桑椹胚和囊胚）的H3K18乙酰化水平显着低于IVF组（P<0.05）,而DNA甲基化的水平显着高于IVF组和PA组的胚胎（P<0.05）,但SCNT胚胎500 nmol/L Scriptaid处理组的各个时期组蛋白H3K18乙酰化水平显着地高于SCNT组（P<0.05）,除8-细胞时期外,其它三个时期胚胎乙酰化水平均接近于IVF组的水平（P>0.05）,而胚胎整体DNA甲基化修饰水平显着地降低（P<0.05）,且其囊胚时期胚胎DNA甲基化水平接近于IVF组（P>0.05）。组蛋白乙酰化（CBP, p300, HAT1, HDAC1和HDAC2）、DNA甲基化（Dnmtl, Dnmt3a和Dnmt3b）和胚胎发育（Oct-4, Nanog, Cx43和Cdx2）相关基因表达水平的荧光定量PCR分析结果显示：Scriptaid处理SCNT胚胎组在8-细胞期的CBP,HDAC1和HDAC2基因表达水平接近于IVF组,Dnmt1, Dnmt3a和Dnmt3b基因的表达水平显着降低（P<0.05）, Dnmtl基因表达水平接近IVF组（P>0.05）；在桑椹期的Dnmtl, Dnmt3a和Dnmt3b基因表达水平显着地提高（P<0.05）, Dnmtl基因和CBP基因的表达水平接近IVF组（P>0.05）；在囊胚期的Dnmt3a基因表达水平显着降低,Dnmt3a基因和HAT1基因的表达水平接近IVF组（P>0.05）。PA组各个时期胚胎的CBP,p300, HAT1和HDAC1基因表达量处于较高水平。此外,Scriptaid处理SCNT胚胎组的各个时期胚胎的Oct-4基因表达水平显着提高,8-细胞期和囊胚期的Nanog基因、桑椹期的Cx43基因,以及囊胚期的Cdx2基因的表达水平亦显着高于SCNT组（P<0.05）,接近于IVF组的表达水平。3.探讨了Scriptaid处理水牛SCNT胚胎对其合子基因激活的影响。采用转录抑制剂25μg/mla-amanition可将水牛胚胎阻滞于8-16细胞时期。透射电子显微镜技术观察各个时期（4-细胞,8-细胞和桑椹期）胚胎细胞核核仁变化情况的结果显示：IVF组胚胎在4-细胞时期核仁呈现出核仁前体（Nucleolus precursor body,NPB）形式,8-细胞时期NPB周围出现网状结构,到桑椹期NPB消失,形成具有转录功能的网状结构；而8-细胞时期的SCNT组胚胎NPB周围没有形成网状结构；但经500nmol/L Scriptaid处理水牛核移植重构胚胎24 h,可观察到8-细胞时期核移植胚胎细胞核中的NPB周围出现低电子密度的网状结构,开始行使转录功能。各个发育时期（2-细胞,4-细胞,8-细胞和桑椹期）胚胎的RNA Pol II蛋白和核纤蛋白Fibrillarin表达细胞免疫组化技术检测结果发现,IVF胚胎在2-细胞和4-细胞时期未检测到RNA Pol II蛋白和核纤蛋白Fibrillarin荧光信号,8-细胞阶段开始发现荧光信号,而SCNT胚胎在桑椹期才开始检测到这两个蛋白的荧光信号,经Scriptaid处理的SCNT胚胎在8-细胞阶段开始检测到RNA Pol II蛋白和核纤蛋白Fibrillarin微弱的荧光信号。胚胎合子基因激活标志基因（eIF-3a和TRC）表达的荧光定量PCR检测结果显示：IVF胚胎的eIF-3a和TRC基因从2-细胞到8-细胞期先升高,从8-细胞到桑椹期开始急剧地降低,而SCNT胚胎的eIF-3a基因从2-细胞到桑椹期呈现一直降低的趋势；经Scriptaid处理的SCNT胚胎,除桑椹期外,其他三个时期的eIF-3a和TRC基因表达水平显着高于IVF组和SCNT组（P<0.05）,呈现出波浪形表达趋势,在8-细胞时期表达水平最高；SCNT组以及Scriptaid处理组胚胎的TRC基因表达水平均低于IVF组。4.探讨了Scriptaid对水牛转基因克隆效率的影响。水牛转基因胎儿成纤维细胞用各种浓度（0,250,500,750 nmol/L）的Scriptaid处理不同时间（0,24h,48h,72h）后,经250 nmol/L或500 nmol/L Scriptaid处理72 h的转基因细胞在荧光显微镜下观察到的GFP荧光更强。荧光定量PCR的分析结果亦显示,250 nmol/L Scriptaid处理72 h的转基因细胞,其GFP基因的表达水平显着地高于其它各组的表达水平（P<0.05）。流式细胞仪检测发现,250 nmol/L处理72 h组、500 nmol/L处理48 h或72 h组,以及750nmol/L处理48 h组的GFP-阳性细胞比例显着高于250 nmol/L处理48h组、500 nmol/L和750 nmol/L处理24 h组（79.8%,80.9%,80.1%,80.8%vs 73.2%,73.1%,68.5%,P<0.05）,但与对照组和其他处理组之间差异不显着。转基因细胞外源基因EF-1A启动子区的甲基化程度重亚硫酸氢盐—测序检测结果显示：Scriptaid处理显着降低转基因细胞的EF-1A启动子区甲基化水平（P<.05）,各处理组之间差异不显着（P>0.05）。用经250 nmol/L Scriptaid处理72 h的水牛转PRL基因胎儿成纤维细胞作为供体细胞构建SCNT胚胎,再用500 nmol/L Scriptaid处理SCNT胚胎24 h,其囊胚发育率显着高于对照组（31.3% vs 20.4%,P<0.05）,且其移植后的妊娠率显着提高（22.9% vs 11.1%）,并有1头已顺利出生。
赛务加甫[4]（2007）在《提高绵羊体细胞核移植效率的研究》文中认为本研究对绵羊卵母细胞体外成熟、卵母细胞冷冻保存、卵母细胞孤雌激活、绵羊同种和异种体细胞核移植及重构胚胎体外培养等关键技术进行了试验分析,以期提高绵羊体细胞核移植的效率,建立完善的核移植技术体系,为进一步获得体细胞克隆绵羊和异种克隆个体提供技术支撑。本研究内容包括以下几个方面:（1）在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加孕酮等某些影响体外成熟的成份,确定绵羊卵母细胞的最佳成熟方案。（2）并通过对比不同冷冻保护剂对卵母细胞的冷冻保存效果,为核移植操作批量提供成熟的卵母细胞。（3）采用胞质注射法,建立精子提取物激活卵母细胞的方法,并且与离子霉素结合6-DMAP激活法和电激活法进行了比较,筛选出适宜激活方法。（4）体外分离培养得到道赛特绵羊和莎能奶山羊的耳皮肤成纤维样细胞,对绵羊皮肤成纤维细胞的生物学特性和不同细胞因子对其生长增殖的影响进行了研究,并对绵羊成纤维细胞和山羊成纤维细胞分别进行体外传代及冻存,为绵羊体细胞核移植和绵羊-山羊种间核移植试验提供了供体细胞。（5）绵羊孤雌激活胚、绵羊重构胚和绵羊-山羊种间重构胚分别置于不同的培养系统中培养,优化绵羊胚胎体外体系,增加胚胎的体外发育潜力。主要研究结果如下:1.绵羊卵母细胞体外成熟基础液中分别添加5μg/mL FSH+1.0 IU/mL LH+10%发情牛血清（OCS）、5μg/mL FSH+1.0 IU/mL LH+10%胎牛血清（FBS）、0.075 IU/mL HMG+OCS和0.075 IU/mL HMG+10% FBS,结果表明成熟液中添加OCS更有利于卵母细胞的成熟;添加5%～10%的BFF能够提高卵母细胞的成熟率,但20%BFF卵母细胞的体外成熟率下降;培养液中分别添加0.1μg/mL、0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL和2.0μg/mL孕酮,结果表明孕酮的最适添加剂量为0.5μg/mL。结果表明绵羊卵母细胞的体外成熟培养液组成为M199+10 mmol/L Hepes+0.38 mmol/L丙酮酸钠+ 25 mmol/L谷氨酰胺+1μg/mL 17β雌二醇（17β-E2）+5μg/mL FSH+1.0 IU/mL LH+10%OCS+0.5μg/mL孕酮时其体外成熟培养效果最好。2.采用程序冷冻法对处于不同发育时期的绵羊卵母细胞进行冷冻保存,冷冻液Ⅰ～冷冻液Ⅳ对同一时期卵母细胞冷冻解冻后的形态正常率、卵裂率和桑囊胚发育率均无显着影响,而冷冻液Ⅳ体外成熟24 h冷冻解冻后的卵母细胞发育率显着高于GV期和体外成熟10 h的卵母细胞,说明用乙二醇（EG）作为冷冻保护剂,添加0.1 mol/L海藻糖较合适对成熟培养24 h的绵羊卵母细胞进行冷冻保存;-6.5℃植冰时冷冻卵母细胞囊胚发育率显着高于其他组。采用玻璃化冷冻方法对绵羊GV期到体外成熟培养24 h卵母细胞进行冷冻保存试验证实,以玻璃化冷冻液Ⅱ作为冷冻剂,体外成熟培养24 h卵母细胞的卵裂率和囊胚发育率最好,不经过成熟培养的卵母细胞玻璃化冷冻效果最差,认为添加0.1 mol/ L海藻糖来进行卵母细胞的玻璃化冷冻可以起到保护作用,卵母细胞冷冻解冻后可以用作受体胞质进行核移植,重构胚的发育能力受冷冻处理的影响不显着。3.对绵羊卵母细胞以连续3次120 v/mm的直流脉冲进行电激活获得最佳激活效果,囊胚发育率显着高于脉冲1次和2次（P<0.05）;用分别注射不同剂量的精子提取物,对绵羊卵母细胞进行孤雌激活,结果表明最佳注射剂量为向每个卵母细胞注入精子提取物3 pL;分别用电激活法,离子霉素联合6-DMAP法和精子提取物胞质内注射法对绵羊卵母细胞进行激活,结果表明电脉冲的激活效果显着低于后二者的效果,且差异显着,精子提取物和离子霉素联合6-DMAP法的囊胚率差异不显着,均可以用于绵羊卵母细胞的激活。4.高糖DMEM较适宜于绵羊皮肤成纤维细胞的原代培养和继代培养。以DMEM+50% NCS（new - born calf serum）,添加10% DMSO为冻存保护剂,进行冷冻保存的无角道赛特绵羊皮肤成纤维细胞,解冻细胞经体外56次传代培养,细胞形态维持在初始状况,保持了良好的遗传特性;添加EGF和胰岛素对绵羊皮肤成纤维细胞的生长均有促生长作用。5.卵母细胞体外成熟培养时间分别为1517 h、1921 h与2325 h时,随着培养时间的增加成熟率也增加,卵母细胞去核成功率随着成熟时间的延长而下降,试验认为卵母细胞体外成熟1921 h,既可以保证高的去核成功率,又可以保证卵母细胞较高的成功率,有利于提供充足的卵源;不经血清饥饿处理的供体细胞采用胞质注射法构建克隆胚,其胚胎发育率略高于血清饥饿处理组,但差异不显着。试验认为体外成熟培养1921 h的卵母细胞可以作为核移植受体细胞,未经血清饥饿处理的成纤维细胞作为供体细胞进行核移植,可以获得较高的重构胚胎发育率。6.采用胞质内注射法构建绵羊皮肤纤维细胞重组胚,胚胎经离子霉素联合6-DMAP激活后,其细胞融合率、卵裂率和囊胚发育率均高于电融合法,同时结果表明重构胚用离子霉素联合6-DMAP或精子提取物激活后,卵裂率和囊胚发育率相近,其中精子提取物的激活效果优于离子霉素激活法;激活间隔时间研究结果证实,卵母细胞注核后经体外培养3～4 h后再激活,可以获得较高的激活率。7.用冷冻的山羊成纤维细胞可以成功构建山羊-绵羊异种体细胞核移植胚,种间体细胞核移植胚能够进行正常的早期发育,种间重构胚经离子霉素联合6-DMAP或者胞质注射精子提取物激活后,卵裂率和囊胚发育率差异不显着（P>0.05）;用电脉冲融合法构建异种核移植胚胎时,其融合率、卵裂率和囊胚发育率均低于胞质注射法;不同山羊供体细胞进行山羊-绵羊异种核移植胚胎构建时,血清饥饿处理与否对种间核移植囊胚率无显着影响,表明山羊皮肤成纤维细胞可以不经过血清饥饿处理直接进行核移植。8.联合使用培养液能改善绵羊同种和异种重构胚的发育。即使用CR1aa+BSA培养重构胚3 d,再用SOFaa+5%FBS继续培养,获得的重构胚囊胚发育率较高。在胚胎培养液中添加孕酮可在一定程度上提高重构胚的卵裂率和囊胚率。其中以2.0和4.0μg/mL孕酮组的囊胚率最高,与对照组和其他孕酮浓度组差异显着。发现共培养体系对绵羊同种核移植重构胚的发育有显着的影响,而且在3 d更换1次新的饲养细胞单层对重构胚的发育有明显的促进作用。
宋丽爽[5]（2020）在《小鼠、牛及羊克隆胚胎端粒重编程机制研究》文中研究说明体细胞核移植（Somatic cell nuclear transfer,SCNT）,又称体细胞克隆,作为动物细胞工程的重要技术手段之一,其开发和利用对于动物育种及再生医学都有重要的意义。端粒位于染色体的末端,由高度重复的TTAGGG序列组成,能够维持染色体的稳定性。端粒在细胞生长、发育分化以及细胞重编程方面起重要作用。然而,端粒在SCNT胚胎发育中的作用过程及其机制未见详细报道。为了探究SCNT动物中可能发生的端粒重编程事件,我们设计了三部分试验:首先,以卵胞质内单精子注射（Intracytoplasmic sperm injection,ICSI）胚胎为对照,检测小鼠SCNT胚胎中端粒长度的动态变化以及端粒长度对胚胎发育的影响,并且在牛和羊SCNT胚胎中进行验证;其次,筛选小分子化合物,希望寻找到促进SCNT胚胎端粒延伸的方法;最后,将经小分子处理过的SCNT胚胎进行胚胎移植,检测其对克隆小鼠出生效率的影响。主要结果如下:（1）SCNT胚胎与ICSI胚胎中端粒的延伸主要发生在合子基因组激活（Zygotic genome activation,ZGA）时期,但SCNT胚胎中端粒的长度显着低于ICSI胚胎。通过胚胎活检和端粒长度检测,我们发现SCNT胚胎中端粒的长度直接决定胚胎的发育质量。（2）分别向胚胎培养液中添加小分子化合物曲古抑菌素A（Trichostatin A,TSA）、氮胞苷（Azacitidine,Aza）、褪黑素（Melatonin）、维生素C（Vitamin C,Vc）、丁酸钠（Sodium butyrate,NaB）、MEK抑制剂（Mirdametinib,PD0325901）以及低氧（5%O2）的培养环境,我们发现曲古抑菌素A、褪黑素、丁酸钠、PD0325901以及低氧培养环境（5%O2）均能使SCNT胚胎的端粒相对长度显着延伸,其中褪黑素的作用最为显着。经端粒qPCR和Q-FISH检测发现,褪黑素能使SCNT胚胎的端粒长度延伸至对照组的2倍,并将SCNT囊胚的发育率由10.89%提升至58.12%。（3）进一步通过单细胞转录组测序（Single-cell RNA sequencing,scRNA-seq）发现,褪黑素处理的SCNT胚胎的转录组接近于ICSI胚胎,且褪黑素能够促进SCNT胚胎中ZGA事件的发生。对差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs）进行分析,我们发现褪黑素能够显着激活SCNT胚胎中端粒相关基因Zscan4和Tcstv3的表达。（4）为进一步验证褪黑素在SCNT胚胎中的作用,我们构建了Zscan4的体外转录载体,当SCNT胚胎中直接注射Zscan4的mRNA时,SCNT胚胎中的端粒长度得到显着延伸。但注射Zscan4的SCNT胚胎发育能力不如褪黑素处理组高,其原因是褪黑素除促进端粒延伸外,还能够降低SCNT胚胎中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的水平。（5）免疫荧光（Immunofluorescence,IF）及免疫印迹（Western blot,WB）结果显示,褪黑素处理后,SCNT胚胎中转录抑制性组蛋白H3K9me3修饰和DNA甲基化程度都有所下降,而抑制性组蛋白H3K27me3修饰没有显着性的变化。此外,我们还发现DNA去甲基化酶Tet3的表达在褪黑素处理组中显着上调。并且,我们在牛和羊的克隆胚胎中得到了一致的结果。（6）褪黑素能使尾尖成纤维（Tail-tip fibroblasts,TTFs）细胞产生的克隆小鼠出生率从0.3%提升至0.8%。此外,我们还发现向受体假孕母鼠注射褪黑素,可以进一步提高克隆小鼠的出生率（0.3%vs.1.5%）。与对照组相比,褪黑素使卵丘（Cumulus）细胞产生的克隆小鼠的出生率提高7倍（7.1%vs.1.0%）。综上,本研究成功揭示了SCNT植入前胚胎中端粒的重编程过程及作用机制,并发现褪黑素能够促进端粒延伸,修复重编程过程中异常的表观遗传修饰和ROS水平,最终提高克隆小鼠的出生率。
吴晓忠[6]（2014）在《核壳型抗EV71免疫球蛋白（IgY）微胶囊的制备及性能研究》文中研究指明肠道病毒71型（Enterovirus type71, EV71）是小型RNA病毒科肠道病毒属成员,其感染性强、致病率高,是导致手足口病的主要病原,同时能引起多种与神经系统相关的疾病。目前针对肠道病毒71型感染多采用抗生素进行治疗,导致病毒耐药性不断增加。口服特异性卵黄免疫球蛋白（Egg yolk immunoglobulin, IgY）可治疗由细菌或病毒引起的肠道疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、服用简便等优点,是一种具有广阔应用前景的抗生素替代品。但IgY在高强度的胃酸环境中易被胃蛋白酶降解,失去抗体活性。因此,如何避免IgY在胃中失活,而在小肠中稳定地发挥作用,是一个亟待解决的问题。针对这一问题,本论文采用层层自组装微囊化技术包埋IgY。以IgY为晶体生长调控剂制备含IgY的碳酸钙微球,并以此作为模板核,在其表面层层组装聚赖氨酸（PLL）和聚谷氨酸（PGA）。用乙二胺四乙酸二钠（EDTA）溶去碳酸钙后,得到内部填充IgY的微胶囊。本论文以IgY为晶体生长调控剂合成CaCO3（IgY）粒子,考察了IgY浓度对微粒的形貌和包裹率的影响,同时考察了沉积反应时间对CaCO3粒子形貌的影响,实验表明在IgY浓度为1.0mg/mL、沉积反应时间为30min的实验条件下可得到表面光滑粒径均一的碳酸钙微球。然后,采用扫描电子显微镜、荧光显微镜、粒度分析仪、热重分析仪对合成的碳酸钙微球的掺杂形式及形貌、粒径分布、IgY含量进行了表征。实验结果表明,合成的碳酸钙微球为表面光滑无突起,粒径分布均匀,主要在5-8μm之间,单分散性好,可作为层层自组装微胶囊制备过程中的模板核心。为制备核壳结构微球,以碳酸钙微球为核心,以聚阳离子电解质PLL和聚阴离子电解质PGA为壁材,利用层层自组装法得到了核壳结构微球。采用扫描电子显微镜、荧光显微镜和zeta电位分析仪对核壳结构粒子形貌进行表征,证实了该粒子的核壳结构。通过EDTA-Na将碳酸钙模板去除后,得到内含IgY的聚多肽微胶囊。进一步探讨了微胶囊对IgY的释放行为的影响。其结果表明中空微胶囊对IgY的释放有一定的延缓作用,随着微胶囊包裹的层数增加,延缓释放效果更佳。在体外实验中,IgY和IgY微胶囊都能抑制病毒,表明IgY经微胶囊包裹后,生物免疫活性没受影响。在体内动物实验中,口服IgY微胶囊治疗后病情很快得到控制。通过组织切片和组织病毒检测结果可知,IgY微胶囊对小鼠的治疗效果明显好与IgY治疗效果。由此可见,IgY经聚多肽微囊包埋后,经胃酸和胃蛋白酶环境其抗体活性受到保护,并且可于小肠中定点释放,能有效治愈EV71感染鼠。综上,本研究制备的IgY微囊,作为一种新型的口服防治病菌产品,将具有良好的产业化前景,也为其他口服生物活性物质的控释制剂开发奠定了基础。
胡雯峰[7]（2014）在《αA和αB-晶体蛋白通过与Caspase-3和Bax相互作用调节老鼠晶状体发育》文中认为小分子热休克蛋白（small heat shock proteins, sHSPs）是热休克蛋白的重要组成部分。在各种应激状态的刺激下,它们在组织中表达迅速增加,参与对组织的保护作用从而防止组织损伤。小分子热休克蛋白,α-晶体蛋白,是晶状体中的结构蛋白,存在两种不同的亚基,即αA-和αB-晶体蛋白。晶状体上皮细胞的凋亡已被揭示为非遗传性白内障病理机制之一,研究表明氧化应激压力是晶状体上皮广泛应对的一种环境压力并证明是白内障形成的重要因素。α-晶体蛋白在对抗外界刺激所引起的细胞凋亡中有着重要的作用。基于对α-晶体蛋白生物功能的认识,我们实验室以及其他研究实验室的工作都表明α-晶体蛋白可以通过调节细胞凋亡途径中两个重要的家族：Caspase和Bcl-2家族来抑制细胞凋亡,而且还有研究表明aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白在特定的应激状态下表现了不同的抗凋亡机制。比如。在由紫外线和氧化应激压力导致的细胞凋亡过程中,aA-晶体蛋白是通过调节激活AKT信号通路来抑制细胞凋亡,而aB-晶体蛋白则是通过负性调节MAPK信号通路来抑制细胞凋亡。虽然已有研究表明aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白能够调节Caspase和Bcl-2家族的成员,但是其具体的分子机制,尤其体内调节机制并未被详细阐述。本实验的首要目的就是研究α-晶体蛋白与Caspase-3和Bax之间的相互作用对小鼠眼睛发育的影响。其主要研究方法和结果如下：（1）首先本实验小组首先通过表面等离子共振技术分析得知aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白能够和Caspase-3蛋白相互作用并显示出不同程度的作用强度；（2）运用免疫组织化学染色技术,通过对小鼠不同胚胎时期的眼睛组织切片进行荧光染色,可得知aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白与Caspase-3在小鼠不同胚胎时期都有表达,并且aA-晶体蛋白和Caspase-3以及aB-晶体蛋白与Caspase-3都存在共定位表达,但是两者共定位的胚胎时期不同,而且表达量均有显着差异；（3）通过酵母双杂交系统,初步确定aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白能够与Bax在体外结合,并且显示了对Bax结合的不同的亲和性；（4）运用免疫组织化学染色技术,通过对小鼠不同胚胎时期的眼睛组织切片进行荧光染色,可得知aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白与Bax在小鼠不同胚胎时期都有表达,并且aA-晶体蛋白和Bax以及aB-晶体蛋白与Bax都有共定位表达,但两者在小鼠不同胚胎时期的表达量不同；（5）以新生小鼠的晶状体为材料,通过免疫共沉淀以及Western Blot技术分析进一步证实了在小鼠的晶状体中aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白均可与Caspase-3和Bax在小鼠晶状体内形成相互作用的蛋白复合物。本研究首次提供体内和体外证据表明aA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白能够直接与Caspase-3和Bax结合形成相互作用的蛋白复合物,并通过对Caspase-3和Bax活性的调节,保护小鼠眼睛晶状体的正常发育。
王怡[8]（2006）在《小鼠体细胞核移植中不同去核方法及融合和培养条件对重构胚胎发育的影响》文中进行了进一步梳理小鼠体细胞核移植技术不仅可以为研究动物胚胎发育、细胞和组织分化、基因表达调控、核质相互作用提供技术平台，而且在建立人类疾病动物模型方面也有着重要的作用和意义。本实验以B6D2F1品系小鼠的胎儿成纤维细胞和卵母细胞作为核、质供体，通过不同去核方法、融合方案、体外培养条件以及PEG／DMSO和TSA等试剂的应用，对小鼠体细胞核移植重构卵去移核后的存活情况、电融合情况和激活后重构胚的着床前发育情况进行比较，筛选合适的实验条件，为本实验室小鼠体细胞核移植技术的建立和应用打下基础。结果如下：一、持卵方法、去核针口径对小鼠卵母细胞去移核效果的影响：（1）以改进的双持卵针法去移核后重构卵的存活率（82.05％）极显着高于传统的单持卵针法（22.35％）（P＜0.01）；（2）以14～16μm内径组去核针去移核后重构卵存活率为80.77％，显着高于10～12μm组和20～22μm组（P＜0.05）。二、PEG／DMSO对供核细胞的处理、不同的融合液、融合电参数和细胞代次对融合率的影响：（1）以PEG／DMSO对供核细胞预处理5分钟后所得融合率显着高于同条件下未处理组（51.11％vs 25.64％）（P＜0.05）；（2）融合液中含0.1 g／L PVA的各组融合率均高于无PVA组；重构卵在甘露醇浓度为0.32mol／L的融合液中的融合率（48.21％）高于其他甘露醇浓度组的融合率（27.78％，41.67％和30.11％）；（3）针状电极融合槽的融合率（42.31％，43.13％）高于其他参数条件相同时平行丝状电极融合槽组（30.43％，33.33％），其中又以在2000V／cm，20μs，2个脉冲时，交流电预处理30秒组最高（43.13％）；（4）供核细胞传代一次后融合率随着传代次数的增加而下降。三、TSA和培养系统对重构胚体外发育率的影响：（1）组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin A能够提高重构胚的发育率；（2）不同的体外培养系统（CZBG，KSOM，KSOM+Vero饲养层细胞）中，以KSOM体系培养重构胚时卵裂率（39.06％）高于其它组（34.14％，35.90％），而KSOM+Vero饲养层培养体系中桑葚胚发育率（15.38％）高于其它组（8.54％，12.50％）。实验结果表明，本实验室采用双持卵针法，内径14～16μm去核针可以获得较高的去移核后重构卵存活率；使用针状电极融合槽，当融合液中甘露醇浓度为0.32mol／L，并添加PVA时，在2000V／cm，20μs，2个脉冲，交流电预处理30s条件下可以得到相对较高的重构卵融合率；PEG／DMSO对供核细胞的预处理显着提高了融合率；TSA和vero饲养层细胞可以促进重构胚的桑葚期／囊胚期发育率。
张馥[9]（2009）在《肝靶向性药物微胶囊LbL自组装及其性能研究》文中进行了进一步梳理LbL自组装多层微胶囊的性质和功能可通过改变囊壁厚度、囊壁通透性及引入外界响应而加以调控,因此作为药物传输控释载体的研究颇多。但目前绝大部分聚电解质微胶囊的药物载体并不能实现定位给药功能。因此设计制备靶向功能与控释功能兼备的聚电解质层层自组装微胶囊具有重要的意义。本论文基于半乳糖基团与肝实质细胞表面的去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）之间的特异性识别作用,建立了以半乳糖为靶向基团（靶基）的多层膜微胶囊对多种药物的捕获和控释方式。论文构建了半乳糖为靶基的聚阳离子PGEDMC与聚苯乙烯磺酸钠（PSS）基于静电引力的肝靶向性LbL自组装微胶囊。紫外可见光谱（UV-vis）和原子力显微镜（AFM）均显示出多层膜结构的均匀有序增长,通过改变聚电解质浓度、离子强度、有机溶剂比例可有效调控膜的相应性质,组装量和膜表面粗糙度与添加的抗衡阴离子关系基本符合Hofmeister序列的排序,对于卤族的离子序列,按F-<Cl-<Br-<I-递增。电镜技术表明可用聚苯乙烯和碳酸钙微球作可去除模板交替自组装PGEDMC和PSS构建完整的微胶囊用作药物靶向性载体。论文构建了半乳糖为靶基的聚阴离子PGESS与壳聚糖（CHI）、聚乙烯基亚胺（PEI）和聚烯丙基胺盐酸盐（PAH）等聚阳离子基于静电引力的肝靶向性LbL自组装微胶囊。椭圆偏振显示出CHI/PGESS组装膜厚与层数呈指数增长关系。UV-vis表明相同条件下组装采用的PGESS中半乳糖残基摩尔比越高,所制备的多层膜上靶基含量也相应越大。论文通过对CHI/PGESS多层膜进行交联反应,构筑了具半乳糖、叶酸双靶基的多层膜和微胶囊,通过改变交联剂浓度、靶基培养浓度、交联时间、组装膜层数可有效调控叶酸的接枝量。论文基于PGEDMC与血红蛋白（Hb）之间的静电引力构筑了具生物降解性的肝靶向性LbL自组装微胶囊。在无蛋白酶存在下,PGEDMC/Hb多层膜在4℃和37℃的PBS中十分稳定。在蛋白酶作用下,PGEDMC/Hb多层膜发生降解,膜上组装量随降解时间而减少,膜表面粗糙度随降解时间先明显增加后逐渐减小。降解过程近似指数衰减,降解动力学常数k和组装层数n符合幂指数方程。降解12h后,组装有2个双层的膜上Hb量剩余不到10%,而8个双层的膜上剩余50%左右。使用戊二醛等交联剂对PGEDMC/Hb微胶囊囊壁进行交联加强后,可增大对蛋白酶降解的抵抗性。论文构建了水溶性或脂溶性小分子药物及大分子蛋白质药物的肝靶向LbL自组装微胶囊。利用内部掺杂PSS的PGEDMC/PSS多层微胶囊高效装载普萘洛尔盐酸盐和阿霉素盐酸盐,捕获的药物由囊壁控制了释放速率。通过扫描电镜（SEM）表征发现了以PGEDMC或PSS为最外层的微胶囊的热收缩性能,利用这一性质,在室温下将药物装载到微胶囊中,通过进一步的热处理,极大提高了药物装载量,同时有效调控了药物的释放速率。论文还以药物微粒为模板,构建了阿昔洛韦药物的靶向LbL自组装微胶囊,发现包覆层数越多,药物的扩散系数越小,药物的快速释放得到更明显抑制。对药物微胶囊进行真空干燥处理后,囊壁对药物的缓释作用更加明显。而将蛋白质药物通过先沉积到模板表面后进行LbL自组装的方式捕获在PGEDMC/Hb微胶囊中以后,在蛋白酶作用下,微胶囊囊壁发生降解,药物逐渐从体系中释放出来,7.2 h左右累积释放率达到50%,经过18h左右释放达到平衡。论文研究了构筑的多类肝靶向LbL自组装膜和微胶囊的靶向活性。噻唑蓝（MTT）法显示出PGEDMC/PSS、PGEDMC/Hb多层膜具有良好的细胞相容性；研究发现以PGEDMC或PGESS为最外层的LbL自组装膜和微胶囊能跟特异性结合半乳糖的花生凝集素和HepG2肝癌细胞专一性结合,结合程度可由表面靶基含量调控；而与非半乳糖特异性结合的伴刀豆球蛋白和A549肺腺癌细胞结合非常弱,验证了以半乳糖残基为肝靶向基团的LbL自组装多层膜的体外肝靶向性能。
田露[10]（2015）在《新型纳米稀土时间分辨荧光探针的制备与应用》文中认为稀土荧光探针具有荧光寿命长、Stokes位移大、发射峰尖锐等优点,结合时间分辨荧光测定技术可有效去除背景荧光的干扰,在复杂生物及环境样品的测定中具有重要的应用价值。近年,时间分辨荧光生物显微成像技术的快速发展又为稀土荧光生物探针的发展与应用提供了新的机遇。在本博士学位论文的研究中,利用稀土荧光配合物作为发光基团,制备了数种新型的纳米稀土荧光生物探针,并考察了其在时间分辨荧光生化分析中的应用性能。将β-二酮-铕（Ⅲ）荧光配合物2,6-BHHD-Eu3+-BPT与硅烷化试剂IPTES共价偶联,利用反相微乳液聚合法制备了一种新型的可见光激发纳米硅胶-铕荧光微粒。这种纳米微粒呈现规则的球形,具有均一的尺寸（42±3 nm）和较长的荧光寿命（346 μs）,其激发波长能够从紫外光区延伸到475 nm。将其用于链霉亲和素标记后,成功实现了复杂水样品中鼠隐孢子虫和小隐孢子虫卵囊的时间分辨荧光免疫成像测定。合成了一种可见光激发的铕（Ⅲ）荧光配合物BHHBB-Eu3+-BPT,并利用去核铁蛋白的解离-重组结构特性制备了一种去核铁蛋白包裹铕（Ⅲ）配合物的荧光蛋白Eu@AFt。该蛋白激发峰波长达420 nm,且具有长的荧光寿命（365μs）和优良的生物亲和性,可直接用于活体细胞的时间分辨荧光成像。将该蛋白用线粒体靶向定位基团SPTPP修饰后制备了一种具有线粒体靶向定位作用的荧光蛋白Eu@AFt-SPTPP,并实现了HeLa细胞中线粒体的共聚焦荧光显微镜靶向定位成像。利用去核铁蛋白的结构特性,通过在该蛋白内包裹铽（Ⅲ）荧光配合物PTTA-Tb3+,并在其表面修饰对NO具有特异性响应的罗丹明衍生物分子,制备了一种基于铽（Ⅲ）配合物-罗丹明荧光共振能量转移机理的对NO具有特异性响应的比率型纳米荧光探针Tb@AFt-Rh。该探针具有荧光寿命长、Stokes位移大、选择性和灵敏度高、生物相容性好及可用于比率型荧光检测等优点,被成功用于HepG2细胞及大型蚤内NO的时间分辨荧光成像测定。将铕（Ⅲ）荧光配合物PTTA-Eu3+与超顺磁性钴铁氧化物纳米粒子及叶酸相结合,制备了一种具有荧光-磁性-癌细胞靶向的多功能纳米粒子PTTA-Eu3+-CoFeO-FA,将其用于癌细胞时间分辨荧光成像及昆明鼠磁共振成像测定的结果表明,这种纳米粒子在癌症的荧光-磁共振双模式成像测定方面具有潜在的应用价值。
二、ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES ON THE ENUCLEATION AND THE REPLICATION OF SEVERAL VIRUSES IN ENUCLESTED CELLS（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES ON THE ENUCLEATION AND THE REPLICATION OF SEVERAL VIRUSES IN ENUCLESTED CELLS（论文提纲范文）
（2）层状结构生物相容微胶囊的制备及其药物传输性能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 聚电解质微胶囊制备技术 |
| 1.2.1 层层自组装技术 |
| 1.2.2 聚电解质在胶体粒子表面的组装 |
| 1.2.3 模板 |
| 1.2.4 囊壁材料 |
| 1.3 微胶囊的基本物理性能 |
| 1.3.1 微胶囊的热稳定性能 |
| 1.3.2 微胶囊的电性能 |
| 1.3.3 微胶囊的渗透性能 |
| 1.3.3.1 离子强度对渗透性能的影响 |
| 1.3.3.2 膜厚对渗透性能的影响 |
| 1.3.3.3 pH值对渗透性能的影响 |
| 1.3.3.4 囊壁材料对渗透性能的影响 |
| 1.3.3.5 溶剂对渗透性能的影响 |
| 1.3.4 微胶囊的机械性能 |
| 1.3.4.1 外加渗透压 |
| 1.3.4.2 内部渗透压 |
| 1.3.4.3 原子力探针技术 |
| 1.3.4.4 退火对囊壁结构的影响 |
| 1.4 微胶囊对物质的包埋 |
| 1.4.1 在晶体表面进行LbL组装 |
| 1.4.2 内层分解包埋 |
| 1.4.3 囊内聚合 |
| 1.4.4 利用囊壁开关性质包埋 |
| 1.4.5 自沉积包埋 |
| 1.4.6 生物分子的包埋 |
| 1.5 课题的提出 |
| 第二章 抗癌药物在聚电解质微胶囊中的自发沉积与释放 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.1.1 主要原材料和试剂 |
| 2.1.2 含PSS碳酸钙微粒的制备 |
| 2.1.3 CaCO_3粒子内PSS含量的测定 |
| 2.1.4 聚电解质微胶囊的制备 |
| 2.1.5 DNR和DOX在微胶囊中的定量包埋 |
| 2.1.6 DNR和DOX自微胶囊中的释放 |
| 2.1.7 测试与表征 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 CaCO_3(PSS)微粒的制备 |
| 2.2.2 水溶性物质在微胶囊中的自沉积包埋 |
| 2.2.3 药物在微胶囊中的定量包埋 |
| 2.2.4 DNR和DOX的释放 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 壳聚糖/海藻酸钠层状微胶囊的制备及药物包埋释放 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 主要原材料和试剂 |
| 3.1.2 含CMC碳酸钙微粒的制备 |
| 3.1.3 壳聚糖和海藻酸钠在CaCO_3(CMC)微粒上的层层自组装 |
| 3.1.4 戊二醛交联多层膜以及模板的去除 |
| 3.1.5 壳聚糖/海藻酸钠微胶囊的细胞相容性评价 |
| 3.1.6 DNR和DOX在微胶囊中的定量包埋 |
| 3.1.7 DNR和DOX自微胶囊中的释放 |
| 3.1.8 载药微胶囊的体外抑制癌细胞生长实验 |
| 3.1.9 测试与表征 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 含CMC碳酸钙微粒的制备 |
| 3.2.2 壳聚糖/海藻酸钠层状微胶囊的制备 |
| 3.2.3 DNR和DOX在壳聚糖/海藻酸钠层状微胶囊中的自沉积 |
| 3.2.4 DNR和DOX在壳聚糖/海藻酸钠微胶囊中的定量包埋 |
| 3.2.5 DNR和DOX自微胶囊中的释放 |
| 3.2.6 载药微胶囊抑制癌细胞生长实验 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 阿霉素和包埋阿霉素微胶囊的体内生物学评价 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 主要原材料和试剂 |
| 4.1.2 主要实验设备 |
| 4.1.3 壳聚糖/海藻酸钠微胶囊的制备和药物的包埋 |
| 4.1.4 包埋阿霉素微胶囊诱导HepG2凋亡的形态学 |
| 4.1.4.1 HepG2的贴壁培养 |
| 4.1.4.2 游离阿霉素对HepG2增殖活性的影响—XTT法 |
| 4.1.4.3 HepG2细胞凋亡的形态学观察 |
| 4.1.4.4 包埋DOX微胶囊作用下HepG2的凋亡(吖啶橙染色) |
| 4.1.4.5 包埋DOX的微胶囊作用下HepG2的凋亡(Hoechst 33342染色) |
| 4.1.4.6 包埋DOX的微胶囊作用下HepG2的凋亡(TEM观测) |
| 4.1.5 包埋DOX微胶囊对肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的药效学评价 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 DOX对HepG2增殖活性的影响——XTT法 |
| 4.2.2 包埋DOX微胶囊对人肝癌细胞HepG2诱导凋亡的形态学 |
| 4.2.3 DOX和包埋DOX微胶囊对HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤抑制作用 |
| 4.3 本章小结 |
| 第五章 叶酸修饰的微胶囊对癌细胞的靶向识别作用 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 主要原材料和试剂 |
| 5.1.2 碳酸钙微粒的制备 |
| 5.1.3 双端氨基PEG的合成 |
| 5.1.4 叶酸修饰聚电解质微胶囊的制备及抗癌药物包埋 |
| 5.1.5 叶酸标准曲线的绘制 |
| 5.1.6 叶酸修饰微胶囊与肝癌细胞的特异识别作用 |
| 5.1.7 包埋阿霉素的叶酸修饰微胶囊体外抑制HepG2细胞生长实验—CCK-8法 |
| 5.1.8 测试与表征 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 双端氨基PEG的合成 |
| 5.2.2 叶酸修饰聚电解质微胶囊的制备 |
| 5.2.3 叶酸修饰聚电解质微胶囊在肝癌细胞表面的特异性黏附 |
| 5.2.4 包埋阿霉素的叶酸修饰微胶囊对人肝癌细胞HepG2的生长抑制 |
| 5.3 本章小结 |
| 结论 |
| 建议与展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（3）Scriptaid对水牛体细胞克隆效率的影响及其相关分子机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 表观遗传修饰在哺乳动物卵母细胞和核移植胚胎中的研究进展 |
| 1 核移植技术的研究进展 |
| 1.1 影响动物核移植效率的因素 |
| 1.2 影响核移植效率的分子机制 |
| 2 组蛋白修饰和DNA甲基化的研究进展 |
| 2.1 组蛋白修饰(histone modifications) |
| 2.2 DNA甲基化(DNA methylation) |
| 3 提高核移植重编程的方法 |
| 3.1 改变组蛋白乙酰化水平 |
| 3.2 改变DNA甲基化水平 |
| 3.3 母源向合子型转换 |
| 3.4 蛋白交换 |
| 3.5 蛋白酶体的抑制 |
| 4 组蛋白乙酰化修饰在哺乳动物卵母细胞成熟过程中的研究 |
| 4.1 组蛋白乙酰化修饰在卵母细胞成熟过程中的变化规律 |
| 4.2 组蛋白乙酰化修饰在哺乳动物卵母细胞中的功能调节 |
| 5 转基因动物的生产方法 |
| 5.1 原核注射法 |
| 5.2 体细胞克隆法 |
| 5.3 胚胎干细胞介导法 |
| 5.4 胞质注射法 |
| 6 核移植技术的应用前景 |
| 6.1 拯救濒危动物 |
| 6.2 胚胎移植前优良胚胎选择成为可能 |
| 6.3 生产转基因动物 |
| 6.4 研究生殖细胞表观修饰的机制 |
| 7 展望 |
| 第二章 水牛卵母细胞组蛋白乙酰化修饰相关蛋白与基因表达水平的分析 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 数据统计与分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 水牛卵母细胞在体外成熟过程中核相分布的情况 |
| 2.2 水牛卵母细胞体外成熟过程中各个时期组蛋白(H3K18)乙酰化修饰的变化规律 |
| 2.3 水牛卵母细胞体外成熟过程中各个时期组蛋白乙酰化修饰相关基因表达水平的变化情况 |
| 3 分析与讨论 |
| 4. 结论 |
| 第三章 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对其发育能力及组蛋白乙酰化修饰的影响 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 试验材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 数据统计与分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 不同浓度的Scriptaid对水牛核移植胚胎发育能力的影响 |
| 2.2 Scriptaid处理不同的时间对水牛核移植胚胎发育能力的影响 |
| 2.3 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对其组蛋白H3K18乙酰化修饰的影响 |
| 2.4 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎整体DNA甲基化修饰的影响 |
| 2.5 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎组蛋白乙酰化修饰相关基因表达的影响 |
| 2.6 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎整体DNA甲基化修饰相关基因表达的影响 |
| 2.7 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对胚胎发育相关基因表达的影响 |
| 3. 分析与讨论 |
| 4 结论 |
| 第四章 Scriptaid对水牛核移植胚胎合子基因激活的影响 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 试验材料和方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 数据统计与分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 水牛体外受精胚胎发育阻滞时期的确定 |
| 2.2 Scriptaid处理对水牛核移植胚胎核仁超微结构的影响 |
| 2.3 Scriptaid处理水牛核移植胚胎对核蛋白RNA Pol Ⅱ表达的影响 |
| 2.4 Scriptaid处理水牛核移植重构胚对胚胎核仁纤维蛋白表达的影响 |
| 2.5 Scriptaid对水牛核移植胚胎合子基因启动的标志基因表达的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 4 结论 |
| 第五章 Scriptaid处理水牛转基因供体细胞及核移植胚胎对其转基因效率的影响 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 1 试验材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 试验设计 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞形态和GFP蛋白表达的影响 |
| 2.2 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞GFP基因表达水平的影响 |
| 2.3 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞中GFP-阳性细胞数的影响 |
| 2.4 Scriptaid处理对转PRL基因水牛胎儿成纤维细胞中EF-1A启动子区的甲基化状态的影响 |
| 2.5 Scriptaid处理对水牛转基因核移植胚胎发育能力的影响 |
| 2.6 Scriptaid处理对水牛转基因核移植胚胎移植效果的影响 |
| 3 分析与讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附图 |
| 英文缩写-中文对照表 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表文章 |
（4）提高绵羊体细胞核移植效率的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 哺乳类动物卵母细胞的体外利用开发 |
| 1.1 卵泡卵母细胞体外成熟 |
| 1.1.1 卵母细胞成熟概论 |
| 1.1.2 卵母细胞成熟的特征 |
| 1.1.3 卵母细胞成熟的判断 |
| 1.1.4 卵母细胞的获取与分级 |
| 1.1.5 影响卵母细胞体外成熟的因素 |
| 1.2 卵母细胞冷冻保存的研究进展 |
| 1.2.1 卵母细胞冷冻保存原理 |
| 1.2.2 冷冻保护剂的种类 |
| 1.2.3 卵母细胞的冷冻方法 |
| 1.2.4 影响卵母细胞冷冻的因素 |
| 第二章 哺乳类动物核移植的研究进展 |
| 2.1 哺乳类动物胚胎细胞及干细胞核移植研究进展 |
| 2.2 哺乳类动物同种体细胞核移植研究进展 |
| 2.2.1 国外哺乳类动物同种体细胞核移植研究概况 |
| 2.2.2 国内哺乳类动物同种体细胞核移植研究概况 |
| 2.3 异种动物细胞核移植研究进展 |
| 2.3.1 国外异种动物细胞核移植研究历史概况 |
| 2.3.2 国内异种动物细胞核移植研究历史概况 |
| 2.3.3 异种动物细胞核移植相关问题的研究概况 |
| 2.3.4 提高动物细胞异种核移植尚待解决的问题 |
| 2.4 哺乳动物核移植相关机制的研究进展 |
| 2.4.1 MPF 与核移植的关系 |
| 2.4.2 卵母细胞激活 |
| 2.4.3 核的重编程 |
| 2.4.4 端粒及端粒酶问题 |
| 2.4.5 基因印迹问题 |
| 2.5 影响哺乳动物核移植的因素 |
| 2.5.1 核受体胞质的准备及其对核移植的影响 |
| 2.5.2 核供体的准备及其对核移植的影响 |
| 2.5.3 卵母细胞去核方法对核移植的影响 |
| 2.5.4 融合-激活方案对核移植的影响 |
| 2.6 体细胞核移植技术的应用前景和存在问题 |
| 2.6.1 体细胞核移植技术的应用前景 |
| 2.6.2 体细胞核移植存在的问题 |
| 前言 |
| 第三章 绵羊卵母细胞的体外成熟培养 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试验材料及仪器 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同类型血清和促性腺激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2.2 添加不同浓度BFF 对绵羊母细胞体外成熟的影响 |
| 3.2.3 不同浓度的孕酮添加对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 不同类型血清对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.2 不同来源促性腺激素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.3 添加不同浓度BFF 对绵羊母细胞体外成熟的影响 |
| 3.3.4 不同浓度的孕酮对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 绵羊卵母细胞的冷冻保存试验研究 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 试验材料及仪器设备 |
| 4.1.2 冷冻液的配制及试验设计 |
| 4.1.3 绵羊卵母细胞的采集 |
| 4.1.4 卵母细胞的体外成熟 |
| 4.1.5 卵母细胞的程序化冷冻 |
| 4.1.6 卵母细胞的玻璃化冷冻 |
| 4.1.7 卵母细胞的孤雌激活 |
| 4.1.8 卵母细胞冷冻效果的评定与数据的统计分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 在程序冷冻中不同冷冻液对绵羊卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.2.2 不同植冰温度对绵羊卵母细胞程序化冷冻的效果 |
| 4.2.3 不同玻璃化冷冻液对绵羊卵母细胞的冷冻效果分析 |
| 4.2.4 不同发育时期卵母细胞玻璃化冷冻解冻后的发育能力 |
| 4.2.5 不同浓度海藻糖对卵母细胞的冷冻效果的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 卵母细胞冷冻效果的评判标准 |
| 4.3.2 不同冷冻方法对卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.3.3 不同发育时期对卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.3.4 非渗透性保护剂与渗透性保护剂配合使用对卵母细胞冷冻效果的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 不同激活方法对卵母细胞的孤雌激活效果 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 方法 |
| 5.1.3 数据统计方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 不同参数的电激活对卵母细胞孤雌激活的效果 |
| 5.2.2 绵羊精子提取物对卵母细胞的激活效果 |
| 5.2.3 不同激活方法对绵羊卵母细胞的激活效果的比较 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 不同参数的电激活对卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 5.3.2 精子提取物对卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 5.3.3 离子霉素的对卵母细胞孤雌激活的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 绵羊体细胞核移植的研究 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 材料 |
| 6.1.2 绵羊皮肤成纤维细胞的体外分离培养 |
| 6.1.3 绵羊同种体细胞核移植 |
| 6.1.4 统计方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 培养液对原代成纤维细胞培养结果的影响 |
| 6.2.2 消化传代对细胞纯化及生长的影响 |
| 6.2.3 培养液对传代细胞培养结果的影响 |
| 6.2.4 EGF 和胰岛素对细胞生长的影响 |
| 6.2.5 冻存对皮肤成纤维细胞形态及生物学特性的影响 |
| 6.2.6 去核时间与去核率对体细胞核移植结果的影响 |
| 6.2.7 不同核移植重构胚构建方法对体细胞核移植结果的影响 |
| 6.2.8 不同供体细胞的处理方法对体细胞核移植结果的影响 |
| 6.2.9 不同激活方法对体细胞核移植效果的影响 |
| 6.2.10 成纤维细胞注核后不同间隔时间激活对移植胚发育的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 绵羊皮肤成纤维细胞的生长特性 |
| 6.3.2 核移植重构胚的构建方法对体细胞核移植效率的影响 |
| 6.3.3 不同激活方法对体细胞核移植胚胎发育的影响 |
| 6.3.4 注核后激活间隔时间对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 山羊－绵羊异种体细胞核移植的研究 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 材料 |
| 7.1.2 山羊皮肤成纤维细胞的体外分离培养及颗粒细胞的准备 |
| 7.1.3 山羊-绵羊种间体细胞核移植 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 组织块的保存和细胞培养 |
| 7.2.2 莎能山羊皮肤细胞冻存 |
| 7.2.3 不同激活方法对山羊-绵羊异种核移植胚胎发育的影响 |
| 7.2.4 不同核移植胚构建方法对山羊-绵羊异种体细胞核移植的影响 |
| 7.2.5 供体细胞不同处理方法对核移植结果的影响 |
| 7.2.6 受体细胞冷冻对异种体细胞核移植结果的影响 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 培养液对皮肤成纤维细胞生长的影响 |
| 7.3.2 成纤维细胞的不同处理方法对异种体细胞核移植结果的影响 |
| 7.3.3 不同类型供体细胞对异种体细胞核移植胚效率的影响 |
| 7.5 小结 |
| 第八章 提高体细胞核移植胚体外发育能力的研究 |
| 8.1 材料和方法 |
| 8.1.1 试验材料及仪器设备 |
| 8.1.2 培养液 |
| 8.1.3 绵羊卵母细胞的采集与体外成熟 |
| 8.1.4 共培养单层细胞的制备 |
| 8.1.5 体细胞核移植胚胎的获得 |
| 8.1.6 核移植胚激活 |
| 8.1.7 胚胎的体外培养 |
| 8.1.8 试验设计及统计分析 |
| 8.2 结果 |
| 8.2.1 不同培养液组合对重构胚发育的影响 |
| 8.2.2 添加孕酮对胚胎发育的影响 |
| 8.2.3 不同共培养体细胞对绵羊核移植胚胎早期发育的影响 |
| 8.2.4 不同蛋白质添加物对颗粒细胞与核移植胚共培养的影响 |
| 8.3 讨论 |
| 8.3.1 不同培养液组合对重构胚发育的影响 |
| 8.3.2 孕酮对重构胚发育的影响 |
| 8.3.3 共培养体系对重构胚发育的影响 |
| 8.3.4 蛋白添加物对胚胎发育的影响 |
| 8.4 小结 |
| 论文总结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）小鼠、牛及羊克隆胚胎端粒重编程机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第1章 综述:体细胞核移植重编程与端粒研究进展 |
| 1 哺乳动物体细胞核移植重编程研究进展 |
| 1.1 体细胞重编程 |
| 1.2 体细胞核移植技术的发展历程 |
| 1.3 体细胞核移植中的重编程事件 |
| 1.3.1 DNA甲基化重编程 |
| 1.3.2 组蛋白修饰重编程 |
| 2 端粒的研究进展 |
| 2.1 端粒的结构 |
| 2.2 端粒缩短 |
| 2.3 端粒长度的调控机制 |
| 2.3.1 端粒酶依赖的延长 |
| 2.3.2 端粒酶非依赖延长机制(ALT机制) |
| 2.4 端粒在诱导多能干细胞中的重编程 |
| 2.5 端粒在体细胞核移植中的重编程 |
| 第2章 小鼠、牛及羊克隆胚胎端粒重编程机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 仪器和设备 |
| 2.2 耗材和试验动物 |
| 2.2.1 耗材 |
| 2.2.2 试验动物 |
| 2.3 相关试剂及配制 |
| 2.3.1 细胞培养相关试剂 |
| 2.3.2 胚胎培养相关试剂及配制 |
| 2.3.3 超数排卵激素 |
| 2.3.4 免疫荧光相关试剂 |
| 2.3.5 HE染色相关试剂 |
| 2.3.6 免疫印迹相关试剂 |
| 2.3.7 免疫荧光及免疫印迹所需抗体 |
| 2.3.8 Q-FISH和 ROS测定相关试剂 |
| 2.3.9 其他分子试验相关试剂 |
| 2.4 试验方法 |
| 2.4.1 小鼠单精注射和体细胞核移植胚胎的制备 |
| 2.4.2 胚胎移植 |
| 2.4.3 牛和羊体细胞核移植胚胎的制备 |
| 2.4.4 胚胎RNA提取和反转录反应 |
| 2.4.5 实时荧光定量PCR |
| 2.4.6 蛋白免疫印迹 |
| 2.4.7 免疫荧光染色 |
| 2.4.8 石蜡切片与HE染色 |
| 2.4.9 胚胎活检技术 |
| 2.4.10 定量荧光原位杂交(Q-FISH) |
| 2.4.11 单胚胎端粒相对长度的测量(T/S法) |
| 2.4.12 核移植胚胎多能性基因的甲基化 |
| 2.4.13 ROS检测 |
| 2.4.14 单细胞RNA-seq |
| 2.4.15 T7体外转录载体的构建 |
| 2.4.16 mRNA体外转录及注射 |
| 2.4.17 数据处理与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SCNT小鼠的发育和出生情况 |
| 3.2 SCNT胎儿端粒的相对长度 |
| 3.3 SCNT植入前胚胎中端粒的动态变化 |
| 3.4 端粒的长度对SCNT胚胎发育的影响 |
| 3.5 小分子化合物对端粒长度和胚胎发育的影响 |
| 3.6 褪黑素处理后SCNT胚胎端粒长度的变化 |
| 3.7 褪黑素处理后SCNT胚胎的发育能力 |
| 3.8 褪黑素处理与未处理的SCNT胚胎差异基因表达分析 |
| 3.9 差异表达基因功能分析 |
| 3.10 褪黑素对端粒相关基因表达水平的作用 |
| 3.11 Zscan4 的过表达对端粒长度及SCNT胚胎发育的影响 |
| 3.12 褪黑素对SCNT重编程过程中组蛋白修饰的变化 |
| 3.13 褪黑素对DNA甲基化及相关基因表达的影响 |
| 3.14 褪黑素能够保护SCNT胚胎免受氧化损伤 |
| 3.15 褪黑素处理对克隆小鼠出生率的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 SCNT重编程效率 |
| 4.2 SCNT胚胎中端粒的重编程 |
| 4.3 褪黑素对端粒的调控 |
| 4.4 褪黑素对SCNT小鼠出生效率的影响 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 1.Zscan4基因序列 |
| 2.RNA-seq数据总结 |
| 3.小分子调控物处理后SCNT胚胎的发育率 |
| 4.Zscan4 mRNA注射后SCNT胚胎的发育率 |
| 5.ICSI和 SCNT植入后胚胎的发育 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）核壳型抗EV71免疫球蛋白（IgY）微胶囊的制备及性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肠道病毒71型的概述 |
| 1.1.1 病原学 |
| 1.1.2 流行病学 |
| 1.1.3 预防与治疗 |
| 1.2 卵黄免疫球蛋白的概述 |
| 1.2.1 IgY的研究进展 |
| 1.2.2 IgY的结构及性质 |
| 1.2.3 IgY在疾病防治和治疗方面的应用 |
| 1.2.4 保护IgY口服活性的研究进展 |
| 1.3 层层自组装微胶囊 |
| 1.3.1 微胶囊概述 |
| 1.3.2 层层自组装微胶囊技术 |
| 1.3.3 概念与发展 |
| 1.3.4 结构和原理 |
| 1.4 本课题研究意义 |
| 1.5 本课题研究思路及内容 |
| 1.5.1 研究思路 |
| 1.5.2 研究主要内容 |
| 1.6 课题创新点 |
| 1.7 课题来源 |
| 第二章 碳酸钙核心的合成条件优化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料和仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 2.2.3 溶液的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 碳酸钙微球的制备 |
| 2.3.2 IgY浓度对碳酸钙晶型形貌的影响 |
| 2.3.3 IgY浓度对碳酸钙加载能力的影响 |
| 2.3.4 沉积反应时间优化 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 IgY浓度对碳酸钙晶型形貌的影响 |
| 2.4.2 IgY浓度对碳酸钙加载能力的影响 |
| 2.4.3 沉积反应时间对CaCO_3粒子形貌的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 含IgY的碳酸钙微球的制备及表征 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料和仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 含IgY的碳酸钙微球的制备 |
| 3.3.2 IgY掺杂碳酸钙核心微球的测试和表征 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 碳酸钙微球的形貌 |
| 3.4.2 碳酸钙微球的粒径分布 |
| 3.4.3 碳酸钙微球中IgY含量 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 PLL/PGA层层自组装微胶囊的制备及性能表征 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验设备 |
| 4.2.3 溶液的配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 碳酸钙微球模板核心的制备 |
| 4.3.2 核壳结构的制备 |
| 4.3.3 核心的去除 |
| 4.3.4 IgY微胶囊的形态研究 |
| 4.3.5 IgY自微胶囊中的释放 |
| 4.4 结果与分析 |
| 4.4.1 核壳结构碳酸钙粒子的制备 |
| 4.4.2 层层自组装核壳结构粒子的形貌 |
| 4.4.4 层层自组装核壳结构粒子的核心去除 |
| 4.4.5 IgY微胶囊的尺寸形貌 |
| 4.4.6 IgY微胶囊的释放研究 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 IgY微胶囊的体外体内效果 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料及设备 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验设备 |
| 5.2.3 溶液配制 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 微胶囊的制备 |
| 5.3.2 体外活病毒中和实验 |
| 5.3.3 小鼠的感染及治疗 |
| 5.3.4 小鼠小肠组织EV71病毒核酸的测定 |
| 5.4 结果与讨论 |
| 5.4.1 IgY微胶囊体外中和病毒 |
| 5.4.2 IgY微胶囊口服保护病毒感染幼鼠 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 学位论文独创性声明 |
| 学位论文版权使用授权声明 |
| 致谢 |
（7）αA和αB-晶体蛋白通过与Caspase-3和Bax相互作用调节老鼠晶状体发育（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1. 晶状体的发育 |
| 1.1 眼睛的发育简介 |
| 1.2 晶状体的发育 |
| 2. 细胞凋亡 |
| 2.1 细胞凋亡的概念及特征 |
| 2.2 细胞凋亡的过程及机制 |
| 3 晶状体发育中的细胞凋亡 |
| 3.1 晶状体中细胞凋亡的发现及研究 |
| 3.2 Bcl-2家族在晶状体发育过程中的研究 |
| 3.3 Caspase家族在晶状体发育过程中的研究 |
| 4. A-晶体蛋白的发现和生物学功能 |
| 第二章 αA-晶体蛋白和αB-晶体蛋白在体外与Caspase-3的相互作用 |
| 1 实验材料、实验仪器及化学试剂 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 化学试剂 |
| 1.4 数据分析 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第三章 αA-晶体蛋白和αB-晶体蛋白在体内与Caspase-3的相互作用 |
| 1 实验材料、实验仪器及化学试剂 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 化学试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 免疫组织化学 |
| 2.2 免疫共沉淀 |
| 2.3 蛋白质印记(Western Blot) |
| 3 实验结果 |
| 3.1 αA-晶体蛋白和αB-晶体蛋白与Caspase-3在小鼠不同的胚胎时期存在差异性地共定位表达 |
| 3.2 α A-晶体蛋白和aB-晶体蛋白与Caspase-3在体内能够形成相互作用的蛋白复合物 |
| 第四章 αA-晶体蛋白和αB-晶体蛋白与Bax的相互作用 |
| 1 实验材料、实验仪器及化学试剂 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 化学试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 重组载体的构建 |
| 2.2 酵母双杂交系统中蛋白质之间相互作用的验证 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 构建的重组质粒分析 |
| 3.2 酵母双杂交系统中蛋白质相互作用的验证结果分析 |
| 第五章 oA-晶体蛋白和aB-晶体蛋白在体内与Bax的相互作用 |
| 1 实验材料、实验仪器及化学试剂 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 化学试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 免疫组织化学 |
| 2.2 免疫共沉淀 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 α A-晶体蛋白和αB-晶体蛋白与Bax在小鼠不同的胚胎时期存在差异性地共定位表达 |
| 3.2 αA-晶体蛋白和αB-晶体蛋白与Bax形成相互作用的蛋白复合物 |
| 第六章 总结、讨论与研究展望 |
| 1. α-晶体蛋白体内调节Caspase-3和Bax |
| 2. α-晶体蛋白在晶状体发育过程中起着重要的作用 |
| 3. α-晶体蛋白与p53和T-Antigen相互作用 |
| 参考文献 |
| 博士学习期间撰写、发表的主要论文及获奖情况 |
| 致谢 |
（8）小鼠体细胞核移植中不同去核方法及融合和培养条件对重构胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述:小鼠体细胞核移植研究进展概述 |
| 1.细胞核移植技术的发展 |
| 2.小鼠体细胞核移植技术的发展 |
| 2.1 小鼠体细胞核移植简史 |
| 2.2 体细胞克隆小鼠的主要方法 |
| 2.3 小鼠体细胞克隆效率的影响因素 |
| 3.影响核移植效率的分子机制 |
| 第二部分 实验 |
| 实验一 持卵方法和去移核针口径对小鼠卵母细胞去移核效率的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 显微操作针的制备 |
| 1.2 实验动物来源 |
| 1.3 小鼠胎儿成纤维细胞的分离培养 |
| 1.4 供核细胞的传代和周期调控 |
| 1.5 卵母细胞的收集 |
| 1.6 卵母细胞的去核 |
| 1.7 卵母细胞去核情况的检查 |
| 1.8 统计分析 |
| 2.结果与讨论 |
| 实验二 PEG/DMSO对供核细胞的预处理及融合条件对小鼠体细胞核移植重构卵融合率的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 供核细胞的PEG/DMSO处理 |
| 1.2 供质卵母细胞的准备 |
| 1.3 核移植 |
| 1.4 电融合 |
| 1.5 统计分析 |
| 2.结果与讨论 |
| 实验三 TSA对重构胚的处理及培养体系差异对小鼠体细胞核移植重构胚体外发育的影响 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 重构胚的激活 |
| 1.2 实验动物来源 |
| 1.3 假孕母鼠的准备 |
| 1.4 TSA处理和重构胚的培养 |
| 1.5 统计分析 |
| 2.结果与讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（9）肝靶向性药物微胶囊LbL自组装及其性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 文献综述 |
| 2.1 层层自组装技术与多层膜构筑概述 |
| 2.1.1 层层自组装技术发展历程 |
| 2.1.2 层层自组装涉及的材料 |
| 2.1.3 层层自组装过程的驱动力 |
| 2.1.4 层层自组装多层膜的优缺点 |
| 2.2 层层自组装常用的表征技术 |
| 2.2.1 多层膜组装量的表征技术 |
| 2.2.2 多层膜膜厚度的表征技术 |
| 2.2.3 多层膜组装交替吸附过程的表征技术 |
| 2.2.4 多层膜微胶囊形貌的表征技术 |
| 2.2.5 其它表征技术 |
| 2.3 层层自组装多层膜主要性质的调控方法 |
| 2.3.1 多层膜膜厚与组装量的调控方法 |
| 2.3.2 多层膜通透性的调控方法 |
| 2.3.3 多层膜热响应性的调控方法 |
| 2.3.4 多层膜降解性的调控方法 |
| 2.4 自组装微胶囊对功能性物质的捕获和缓释 |
| 2.4.1 功能性物质作为模板进行自组装 |
| 2.4.2 功能性物质作为囊壁材料进行自组装 |
| 2.4.3 预制备的中空微胶囊对功能性物质进行捕获和缓释 |
| 2.5 靶向性自组装微胶囊的构筑 |
| 2.5.1 光敏性纳米粒子靶向 |
| 2.5.2 磁性纳米粒子靶向 |
| 2.5.3 基于生物识别作用的靶向 |
| 第三章 半乳糖为靶基的肝靶向微胶囊构筑 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.1.1 药品与试剂 |
| 3.1.2 含糖聚阳离子合成实验原理 |
| 3.1.3 己二酸二乙烯酯合成 |
| 3.1.4 6-O-乙烯己二酰-D-半乳糖合成 |
| 3.1.5 PGEDMC合成 |
| 3.1.6 聚苯乙烯微球模板的制备 |
| 3.1.7 碳酸钙微粒模板的制备 |
| 3.1.8 合成化合物表征 |
| 3.1.9 石英片及硅片预处理 |
| 3.1.10 PET膜片预处理 |
| 3.1.11 PGEDMC/PSS在平面基材上的层层自组装 |
| 3.1.12 不同浓度聚电解质溶液的影响 |
| 3.1.13 不同盐度聚电解质溶液的影响 |
| 3.1.14 不同抗衡离子聚电解质溶液的影响 |
| 3.1.15 不同乙醇浓度聚电解质溶液的影响 |
| 3.1.16 以PS为模板的PGEDMC/PSS微胶囊制备 |
| 3.1.17 以CaCO_3为模板的PGEDMC/PSS微胶囊制备 |
| 3.1.18 自组装多层膜表征 |
| 3.2 合成化合物结构表征 |
| 3.3 肝靶向的PGEDMC/PSS平面多层膜构筑 |
| 3.3.1 PGEDMC/PSS层层自组装 |
| 3.3.2 组装时间对PGEDMC/PSS体系自组装行为的影响 |
| 3.3.3 聚电解质浓度对PGEDMC/PSS体系自组装行为的影响 |
| 3.3.4 离子强度对PGEDMC/PSS体系自组装行为的影响 |
| 3.3.5 抗衡阴离子种类对PGEDMC/PSS体系自组装行为的影响 |
| 3.3.6 有机溶剂对PGEDMC/PSS体系自组装行为的影响 |
| 3.4 肝靶向的PGEDMC/PSS微胶囊构筑 |
| 3.4.1 PS作为PGEDMC/PSS组装模板 |
| 3.4.2 CaCO_3作为PGEDMC/PSS组装模板 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 半乳糖、叶酸为双靶基的肝靶向微胶囊构筑 |
| 4.1 实验部分 |
| 4.1.1 药品与试剂 |
| 4.1.2 PGESS合成 |
| 4.1.3 聚阳离子/PGESS在平面基材上的层层自组装 |
| 4.1.4 CHI/PGESS多层膜的溶剂稳定性 |
| 4.1.5 叶酸在CHI/PGESS多层膜表面的接枝 |
| 4.1.6 球型碳酸钙微粒的制备 |
| 4.1.7 CHI/PGESS微胶囊层层自组装 |
| 4.1.8 CHI/PGESS微胶囊的FA接枝 |
| 4.1.9 表征 |
| 4.2 PGESS结构表征 |
| 4.3 聚阳离子/PGESS肝靶向平面多层膜自组装 |
| 4.3.1 CHI/PGESS在平面基材上的层层自组装 |
| 4.3.2 PAH/PGESS和PEI/PGESS在平面基材上的层层自组装 |
| 4.4 半乳糖、叶酸双靶基平面多层膜构筑 |
| 4.4.1 CHI/PGESS多层膜在交联体系中的稳定性 |
| 4.4.2 EDC浓度对FA交联量的影响 |
| 4.4.3 FA浓度对FA交联量的影响 |
| 4.4.4 交联时间对FA交联量的影响 |
| 4.4.5 CHI层数对FA交联量的影响 |
| 4.4.6 CHI/PGESS多层膜FA交联前后SEM表征 |
| 4.5 半乳糖、叶酸双靶基微胶囊的构筑 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 酶降解性的肝靶向微胶囊构筑 |
| 5.1 实验部分 |
| 5.1.1 药品与试剂 |
| 5.1.2 荧光标记血红蛋白(FITC-Hb)制备 |
| 5.1.3 PGEDMC/Hb平面多层膜和微胶囊自组装 |
| 5.1.4 PGEDMC/Hb多层膜蛋白活性测定 |
| 5.1.5 PGEDMC/Hb多层膜和微胶囊的酶降解 |
| 5.1.6 表征 |
| 5.2 酶降解性肝靶向多层膜的层层自组装 |
| 5.3 酶降解性肝靶向多层膜的酶降解 |
| 5.4 酶降解性肝靶向微胶囊的酶降解 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 肝靶向微胶囊药物捕获与缓释 |
| 6.1 实验部分 |
| 6.1.1 药品与试剂 |
| 6.1.2 药物结构式 |
| 6.1.3 含PSS碳酸钙模板的制备 |
| 6.1.4 CaCO_3模板内PSS含量的测定 |
| 6.1.5 PGEDMC/PSS中空靶向微胶囊的制备 |
| 6.1.6 PGEDMC/PSS靶向微胶囊对PRH的捕获与缓释 |
| 6.1.7 CHI/PGESS靶向微胶囊对DOX的捕获与缓释 |
| 6.1.8 PGEDMC/PSS靶向微胶囊对ACV的捕获与缓释 |
| 6.1.9 PGEDMC/Hb靶向微胶囊对蛋白质药物的捕获与酶响应性缓释 |
| 6.1.10 微胶囊表征 |
| 6.2 肝靶向微胶囊对水溶性小分子药物的捕获与缓释 |
| 6.2.1 CaCO_3模板内PSS含量的测定 |
| 6.2.2 PGEDMC/PSS在CaCO_3上组装的FI-IR跟踪 |
| 6.2.3 PGEDMC/PSS肝靶向微胶囊的热响应行为 |
| 6.2.4 PGEDMC/PSS肝靶向微胶囊对PRH的捕获 |
| 6.2.5 PRH在PGEDMC/PSS肝靶向微胶囊中的缓释 |
| 6.2.6 DOX在CHI/PGESS肝靶向微胶囊中的捕获与缓释 |
| 6.3 肝靶向微胶囊对脂溶性小分子药物的捕获与缓释 |
| 6.3.1 PGEDMC/PSS肝靶向ACV微胶囊的表征 |
| 6.3.2 ACV在PGEDMC/PSS肝靶向微胶囊中的缓释 |
| 6.4 肝靶向微胶囊对蛋白质药物的捕获与酶响应性缓释 |
| 6.5 本章小结 |
| 第七章 肝靶向微胶囊的靶向性能研究 |
| 7.1 实验部分 |
| 7.1.1 药品与试剂 |
| 7.1.2 多层膜与微胶囊的凝集素识别 |
| 7.1.3 荧光标记PAH(FITC-PAH)的制备 |
| 7.1.4 细胞贴壁培养 |
| 7.1.5 细胞的吖啶橙染色 |
| 7.1.6 聚电解质细胞毒性(MTT法)考察 |
| 7.1.7 多层膜浸取液细胞毒性实验 |
| 7.1.8 PGEDMC/PSS平面多层膜的肝癌细胞靶向性考察 |
| 7.1.9 PGEDMC/PSS微胶囊的肝癌细胞靶向性考察 |
| 7.1.10 表征 |
| 7.2 肝靶向平面多层膜和微胶囊的凝集素识别 |
| 7.2.1 PGEDMC/PSS平面多层膜及微胶囊凝集素识别 |
| 7.2.2 CHI/PGESS平面多层膜凝集素识别 |
| 7.2.3 PGEDMC/PSS阿昔洛韦药物微胶囊凝集素识别 |
| 7.2.4 热响应性靶向微胶囊的凝集素识别 |
| 7.2.5 PGEDMC/Hb酶降解多层膜和微胶囊的凝集素识别 |
| 7.3 肝靶向微胶囊组成材料的细胞毒性(MTT法) |
| 7.4 含半乳糖聚电解质多层膜肝靶向性考察 |
| 7.4.1 PGEDMC/PSS平面多层膜的肝癌细胞靶向性考察 |
| 7.4.2 PGEDMC/PSS微胶囊的肝癌细胞靶向性考察 |
| 7.5 本章小结 |
| 第八章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 作者攻读博士学位期间发表的科研成果 |
| 致谢 |
（10）新型纳米稀土时间分辨荧光探针的制备与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 生化分析中的纳米荧光材料简介 |
| 1.2 稀土荧光配合物概述 |
| 1.2.1 稀土离子的光谱性质 |
| 1.2.2 稀土荧光配合物的发展 |
| 1.2.3 稀土荧光配合物在时间分辨荧光生化分析中的应用 |
| 1.3 纳米材料在生化分析中的应用 |
| 1.4 本论文的主要研究思路 |
| 2 硅胶基质可见光激发纳米铕荧光粒子的制备及时间分辨荧光生物成像应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 配位体的合成 |
| 2.2.1 实验仪器与试剂 |
| 2.2.2 配位体BHHD的合成 |
| 2.2.3 配位体BPT及MPBT的合成 |
| 2.3 三种铕(Ⅲ)配合物的合成与荧光激发光谱表征 |
| 2.3.1 实验仪器与试剂 |
| 2.3.2 三种铕(Ⅲ)配合物的合成 |
| 2.3.3 三种铕(Ⅲ)配合物在不同有机溶剂中的荧光激发光谱 |
| 2.4 硅胶基质可见光激发纳米铕荧光粒子的制备与表征 |
| 2.4.1 实验仪器与试剂 |
| 2.4.2 长波长激发铕荧光纳米颗粒的制备 |
| 2.4.3 硅胶基质纳米铕荧光粒子的性质表征 |
| 2.5 纳米铕荧光粒子在病原微生物时间分辨荧光成像测定中的应用 |
| 2.5.1 实验仪器与试剂 |
| 2.5.2 纳米铕荧光粒子标记SA的制备 |
| 2.5.3 病原微生物的免疫荧光染色及荧光成像测定 |
| 2.5.4 结果与讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 3 内包可见光激发铕配合物去核铁蛋白的制备及细胞成像应用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 可见光激发铕配合物BHHBB-Eu~(3+)-BPT的合成与表征 |
| 3.2.1 实验仪器与试剂 |
| 3.2.2 铕(Ⅲ)配合物BHHBB-Eu~(3+)-BPT的合成 |
| 3.2.3 铕(Ⅲ)配合物BHHBB-Eu~(3+)-BPT的组成及性质表征 |
| 3.3 内包铕配合物BHHBB-Eu~(3+)-BPT去核铁蛋白的制备、线粒体靶向定位功能化及表征 |
| 3.3.1 实验仪器与试剂 |
| 3.3.2 内包BHHBB-Eu~(3+)-BPT去核铁蛋白的制备及线粒体靶向定位功能化 |
| 3.3.3 Eu@AFt及Eu@AFt-SPTPP的表征 |
| 3.4 Eu@AFt及Eu@AFt-SPTPP在活细胞荧光成像中的应用 |
| 3.4.1 实验仪器与试剂 |
| 3.4.2 Eu@AFt用于活细胞的可见光激发荧光成像 |
| 3.4.3 Eu@AFt-SPTPP用于活细胞内线粒体的靶向定位荧光成像 |
| 3.5 本章小结 |
| 4 一种基于铽配合物-罗丹明修饰去核铁蛋白的荧光共振能量转移型一氧化氮荧光探针的制备及应用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 铽配合物-罗丹明修饰去核铁蛋白的制备 |
| 4.2.1 实验仪器与试剂 |
| 4.2.2 罗丹明衍生物Rh-NO的合成 |
| 4.2.3 铽配合物-罗丹明修饰去核铁蛋白的制备 |
| 4.3 探针PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO的性质表征 |
| 4.3.1 实验仪器与试剂 |
| 4.3.2 PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO与NO反应前后的荧光性质表征 |
| 4.3.3 PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO用于水溶液中NO的时间分辨荧光测定 |
| 4.3.4 PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO对NO荧光响应的特异性考察 |
| 4.3.5 PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO对NO荧光响应的pH值影响 |
| 4.4 探针PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO在生物成像中的应用 |
| 4.4.1 实验仪器与试剂 |
| 4.4.2 PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO用于HepG2细胞内NO的荧光成像 |
| 4.4.3 PTTA-Tb~(3+)@AFt-Rh-NO用于大型蚤体内NO的荧光成像 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 一种荧光-磁性-癌细胞靶向多功能纳米粒子的制备及其在生物成像中的应用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA的制备 |
| 5.2.1 实验仪器与试剂 |
| 5.2.2 超顺磁性Co_(0.9)Fe_(2.1)O_4纳米粒子的制备 |
| 5.2.3 纳米粒子Co_(0.9)Fe_(2.1)O_4的表面巯基修饰 |
| 5.2.4 含有二硫键的PTTA及FA衍生物合成 |
| 5.2.5 多功能纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA的制备 |
| 5.3 多功能纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA的表征 |
| 5.3.1 实验仪器 |
| 5.3.2 纳米粒子Co)_(0.9)Fe_(2.1)O_4的形态表征 |
| 5.3.3 纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA的光谱表征 |
| 5.3.4 纳米粒子Co_(0.9)Fe_(2.1)O_4与Co_(0.9)Fe_(2.1)O_4-DMSA的X射线衍射表征 |
| 5.3.5 纳米粒子Co_(0.9)Fe_(2.1)O_4-DMSA的磁性质表征 |
| 5.3.6 纳米粒子Co_(0.9)Fe_(2.1)O_4-DMSA与PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA的核磁共振弛豫性质 |
| 5.4 多功能纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA在生物成像中的应用 |
| 5.4.1 实验仪器与试剂 |
| 5.4.2 纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA用于Raw264.7细胞的染色及荧光成像测定 |
| 5.4.3 纳米粒子PTTA-Eu~(3+)CoFeO-FA用于Raw264.7细胞荧光成像的阴性对照实验 |
| 5.4.4 纳米粒子PTTA-Eu~(3+)-CoFeO-FA用于昆明鼠的磁共振成像测定 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 本论文的创新点 |
| 6.3 对今后的展望 |
| 参考文献 |
| 附录A 典型化合物核磁谱图 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 |
四、ELECTRON MICROSCOPIC STUDIES ON THE ENUCLEATION AND THE REPLICATION OF SEVERAL VIRUSES IN ENUCLESTED CELLS（论文参考文献）
- [1]体外培养细胞的去核技术及其在病毒学研究中的应用(综述)[J]. 郭仁. 中国医学科学院学报, 1980(01)
- [2]层状结构生物相容微胶囊的制备及其药物传输性能[D]. 赵庆贺. 浙江大学, 2006(02)
- [3]Scriptaid对水牛体细胞克隆效率的影响及其相关分子机理的研究[D]. 孙洪亮. 广西大学, 2014(01)
- [4]提高绵羊体细胞核移植效率的研究[D]. 赛务加甫. 西北农林科技大学, 2007(01)
- [5]小鼠、牛及羊克隆胚胎端粒重编程机制研究[D]. 宋丽爽. 内蒙古大学, 2020(01)
- [6]核壳型抗EV71免疫球蛋白（IgY）微胶囊的制备及性能研究[D]. 吴晓忠. 广东工业大学, 2014(10)
- [7]αA和αB-晶体蛋白通过与Caspase-3和Bax相互作用调节老鼠晶状体发育[D]. 胡雯峰. 湖南师范大学, 2014(09)
- [8]小鼠体细胞核移植中不同去核方法及融合和培养条件对重构胚胎发育的影响[D]. 王怡. 扬州大学, 2006(02)
- [9]肝靶向性药物微胶囊LbL自组装及其性能研究[D]. 张馥. 浙江大学, 2009(01)
- [10]新型纳米稀土时间分辨荧光探针的制备与应用[D]. 田露. 大连理工大学, 2015(03)