一、大肠杆菌多价油剂灭活苗免疫效果观察（论文文献综述）
黄立[1]（2017）在《豫南地区鸡大肠杆菌病病原学调查与防控研究》文中进行了进一步梳理目前,鸡大肠杆菌病作为一种重要的细菌性传染病,对我国养鸡业造成了严重危害。根据信阳市疫病检测工程中心（信阳农林学院市级工程中心）对豫南地区主要养鸡集中区的调查,在规模化养鸡场细菌性疾病当中,大肠杆菌发病率一直居于首位。鸡大肠杆菌血清型众多,耐药菌株也在不断增多,给防治本病增加了难度。因此,开展豫南地区鸡大肠杆菌病病原学调查与分析,对于有效防治鸡大肠杆菌病,具有重要的理论和实践意义。本研究涉及到豫南地区鸡致病性大肠杆菌分离与鉴定、对常用抗菌药物耐药性分析、中药活性成分与氨基糖苷类药物体外联合抗菌作用、利用优势致病菌株研制多价灭活苗等方面。通过系列研究,进一步弄清楚豫南地区鸡大肠杆菌病的流行状况,必将为豫南地区乃至河南的鸡大肠杆菌病科学防治工作,提供重要的理论依据和临床价值。1豫南地区鸡致病性大肠杆菌分离与鉴定对于豫南地区送检的164份病鸡样品,经过常规方法培养、纯化及镜检,并进行生理生化鉴定和PCR鉴定,共分离到鸡大肠杆菌121株,鉴定出88株分离菌株血清型,包括17种血清型;主要血清型是02、078、01、018、026、022,共72株,占总分离株的59.50%。给供试雏鸡接种121株分离菌株后,可见发病症状及剖检病变都与本病特征相符;在121株分离菌株中,有64株高致病性菌株、31株中度致病性菌株、26株低致病性菌株,分别占总试验菌株的52.9%、25.6%、21.5%。2对常用抗菌药物耐药性分析采用标准微量稀释法,测定62株鸡大肠杆菌对18种药物的体外最小抑菌浓度（MIC）,并通过PCR方法扩增I型整合酶基因。结果显示,全部菌株呈现多重耐药,耐药谱型达12种之多;对β-内酰胺类、酚胺醇类、氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类、四环素类等抗菌药物,均表现出不同程度的耐药性;对土霉素、复方新诺明、磺胺嘧啶、强力霉素四种药物,耐药率分别为95.2%、87.1%、80.6%、72.6%;I型整合酶基因检出率为87.1%。由此表明,鸡大肠杆菌临床分离株,对常用抗菌药物都产生了不同程度的耐药性。3中药活性成分与氨基糖苷类药物体外联合抗菌作用采用棋盘稀释法,了解中药活性成分与氨基糖苷类药物体外联合抗菌作用,进而筛选出具有协同抗菌效果的药物组合,为体内试验提供理论基础。结果表明,穿心莲内酯与氨基糖苷类药物联用,主要表现为协同作用;黄芩苷和小檗碱分别与氨基糖苷类药物联用,主要表现为相加作用;蒲公英提取物与氨基糖苷类药物联用,主要表现为无关作用。由此表明,穿心莲内酯与氨基糖苷类药物联合使用,可提高抗菌药物对耐药大肠杆菌的抗菌效果。4鸡大肠杆菌多价灭活苗制备与评价利用毒力强、免疫原性好、具有地方代表性的O1、O2、O78、O22、O26、O18六种优势血清型菌株,研制鸡大肠杆菌氢氧化铝胶多价灭活苗。免疫攻毒试验结果显示,疫苗对各日龄鸡的安全性较好,采用大肠杆菌菌株攻毒,免疫组可获得完全保护,说明该疫苗对大肠杆菌病免疫效果显着。这些研究成果,对于有效防治豫南地区鸡大肠杆菌病,提高豫南地区整体养鸡水平,具有重要指导意义。
邵启文[2]（2019）在《鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗佐剂的筛选及免疫持续期的初步研究》文中研究指明禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）常引起家禽发生多种肠道外疾病如心包炎、气囊炎、肝周炎、蜂窝织炎及败血症,具有较高的感染率和死亡率,给养禽业带来严重损失。以本实验室构建的禽致病性大肠杆菌脂多糖缺失株E516△lpxL△lpxM（O1）、E058△lpxL△lpxM（O2）、E522△lpxL△lpxM（078）株作为制苗菌株等比例混合,分别辅以白油佐剂道达尔170、白油佐剂Marc52和铝胶佐剂研制了相应三价灭活疫苗,并对三种佐剂疫苗进行了安全性和免疫效力比较试验,以确定合适的疫苗佐剂。疫苗佐剂确定后,对该三价疫苗的免疫持续期进行研究。现将研究结果报告如下:1、三种不同佐剂疫苗的安全性比较利用制备的三种不同佐剂灭活疫苗,分别以单剂量0.5 mL/羽和双倍剂量1.0 mL/羽接种14日龄SPF鸡进行安全性试验。试验结果表明,注射白油佐剂灭活疫苗组的鸡,以单剂量0.5 mL/羽免疫,接种疫苗后12-24 h,部分鸡出现短时精神沉郁,之后无任何不良反应:以双倍剂量1 mL/羽免疫时,接种疫苗后5-8 h试验鸡出现精神不佳,24 h内恢复正常,由于双倍剂量组免疫剂量较大,部分试验鸡注射部位出现0.1-1.2 cm大小不等的结节,但未出现全身不良反应,免疫一周注射部位结节逐渐消失,生长状况良好。注射铝胶佐剂灭活疫苗组的鸡,在整个观察期内饮食和精神状态均正常,注射部位亦未见异常。以上结果说明我们所研制的油佐剂疫苗具有良好的安全性。2、三种不同佐剂疫苗的免疫效力试验以三种不同佐剂疫苗对14日龄SPF鸡进行免疫,42日龄时分别以亲本株E516（O1）、E058（02）和E522（078）攻毒,进行免疫保护试验。试验结果表明,白油佐剂道达尔170疫苗组攻毒后保护比均为7/10,白油佐剂Marc52疫苗组攻毒后保护比分别为5/10、5/10和7/10,铝胶佐剂疫苗组攻毒后保护比分别为3/10、3/10和5/10,攻毒对照组攻毒后死亡比均为10/10。以上试验结果表明,铝胶佐剂疫苗对同源野生株攻毒鸡的免疫保护效果差,白油佐剂道达尔170和白油佐剂Marc52疫苗尤其是前者对同源野生株攻毒鸡可以提供良好的免疫保护。综合安全性试验和免疫保护试验,我们确定白油佐剂道达尔170佐剂作为研制疫苗的佐剂。3、鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗的免疫持续期试验以鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗对14日龄SPF鸡进行免疫,分别在免疫后第30 d、第60 d和第90 d进行亲本株攻毒试验,对保护效力、特异性抗体水平及组织病理变化进行评价。试验结果表明,免疫后第30 d、第60 d和第90 d攻毒,试验鸡均得到不同程度较好保护。由于成年鸡对致病性大肠杆菌的敏感性降低,90日龄试验鸡攻毒对照组死亡比减少属于正常现象。白羽肉鸡的生长周期一般在9周以内,该疫苗应用在白羽肉鸡上,一次性免疫即可得到有效的保护。综合多因素考虑,我们暂定鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗的免疫持续期为3个月。
薛俊龙,张李俊,王采先,詹丽娥,田林君,李红丽,张国权[3]（2009）在《鸡大肠杆菌多价复合佐剂灭活苗的研制》文中提出鸡大肠杆菌多价复合佐剂灭活苗是采用山西省优势鸡致病性大肠杆菌的菌体碎片作为抗原物质,矿物油和黄芪多糖组成复合免疫增效佐剂研制而成的。通过免疫效果试验、免疫保护期试验及疫苗保存期试验等,结果表明,免疫后7 d,该疫苗即可产生坚强的免疫力,而常规疫苗（对照Ⅱ组）则需14 d;血清抗体滴度于接种后约6周时,O78达到1∶32（最高可达1∶53）,并且维持6周以上,而常规疫苗的最高值为1∶18;该疫苗的免疫保护期为5个多月,常规疫苗为4个月;4～8℃贮藏,保存期不低于14个月。实验室和区域试验结果说明该疫苗具有产生循环抗体时间早、安全、免疫保护率高等特点。
张恒慧,尤建嵩,徐永平,王晓丽,李晓宇[4]（2015）在《抗仔猪腹泻产肠毒素大肠杆菌疫苗的研究进展》文中认为仔猪腹泻（piglet diarrhea）是国内外养猪业面临的一大难题,每年因此造成的经济损失十分巨大。导致仔猪腹泻的主要致病菌是产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）,其致病过程依赖黏附素和肠毒素的共同作用。随着研究手段的创新,国内外学者在研制ETEC疫苗方面已取得了突破性进展。作者介绍了ETEC的致病特点,并对各类ETEC疫苗的研究进展作一综述。
张翠翠[5]（2016）在《禽致病性大肠杆菌的分离鉴定与O1、O2、O78菌株lpxL、lpxM基因缺失灭活疫苗的初步研究》文中研究说明禽致病性大肠杆菌主要引起禽类的心包炎、肝周炎、气囊炎、输卵管炎、腹膜炎等,并导致不同程度死亡率,给养殖业造成严重的经济损失。本研究采集江苏地区疑似大肠杆菌病的病鸡的组织进行大肠杆菌的分离鉴定,探究其致病性、耐药性；随后进行基因缺失多价灭活疫苗免疫保护效果的研究。为禽大肠杆菌病的防治提供理论依据,同时为多价灭活疫苗的研发奠定基础。一禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及致病性研究本研究对江苏省部分地区疑似大肠杆菌病的病死鸡进行大肠杆菌的分离与鉴定,共分离鉴定了162株大肠杆菌。通过玻板凝集和试管凝集试验对大肠杆菌分离株进行O血清型鉴定,其中定型菌株130株,未定型菌株32株,定型率为80.25%。在130株定型菌株中鉴定出34种O血清型,其中主要血清型有O78、O88、O65、O161、O1、O24、O13,占定型菌株的66.92%。通过PCR方法对分离到的162株大肠杆菌进行iss、iroN、tsh、cvaC、 iutA及irp26个与禽致病性大肠杆菌致病力密切相关的毒力基因的检测,其检出率分别为83.33%、80.86%、45.06%、48.76%、75.92%、58.02%,同时携带6个毒力基因的菌株有37株,占总分离菌株的22.83%。选取本研究分离鉴定的菌株64株（主要血清型45株）进行1日龄易感鸡的致病性试验,结果64个分离株中有55株属于高中致病性菌株,占85.94%。其中,高致病性菌株40株（主要血清型33株）,中度致病性菌株15株（主要血清型8株）,低致病性菌株9株。通过1日龄致病性试验并结合6个与禽致病性大肠杆菌致病力密切相关的毒力基因的检测,可以判定本研究分离菌中至少有80%的分离菌具有中高致病力。二禽致病性大肠杆菌耐药性研究本研究选取了16种抗生素（氨苄青霉素、四环素、强力霉素、先锋霉素V、磺胺异恶唑、链霉素、庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素、左旋氧氟沙星、氟苯尼考、新霉素、阿奇霉素、诺氟沙星、多粘菌素B、环丙沙星）对60个分离株进行药物敏感性的筛选。60个分离株对强力霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺异嗯唑及环丙沙星的耐药率在80%及以上；对阿奇霉素、庆大霉素及多粘菌素B的耐药率在50%以下；对多粘菌素B的敏感性最高。60个分离株均出现不同程度的多重耐药情况。其中,受检菌株中耐13种药物的菌株最多,占总受检菌株的25.0%（15/60）；有63.33%（38/60）的受检菌株对9种及以上药物耐药。由此可知目前禽致病性大肠杆菌的耐药性严重且耐药谱比较广。三禽致病性大肠杆菌01、02、078菌株lpxL、lpxM基因缺失灭活疫苗的初步研究本研究利用本实验室保存的01、02、078血清型的野生株及其lpxL、lpxM突变株制备油佐剂多价灭活疫苗,免疫后对其特异性抗体反应水平、对野生株的攻毒保护率及免疫鸡内脏组织的病理变化进行研究。研究数据显示,本研究制备的疫苗的血清特异性抗体水平与攻毒保护率均优于商品疫苗组,突变株疫苗的安全性和免疫应激性优于野生株疫苗。不同佐剂对疫苗免疫保护效果的影响：突变株Montanide TSA 71VG佐剂疫苗组的特异性抗体水平与保护率优于白油佐剂疫苗；对01、02、078毒株的保护率：突变株Montanide TSA 71VG佐剂疫苗分别为86.67%、93.33%及100%,白油佐剂疫苗分别为对80%、86.67及86.67。不同免疫次数对免疫保护效果的影响：将突变株Montanide TSA 71VG佐剂疫苗对鸡进行一次免疫后攻毒,其免疫保护率要优于商品疫苗的二次免疫的免疫保护率,与突变株Montanide TSA 71VG佐剂疫苗二次免疫组相比保护率相当,对血清型01、02、078毒株的免疫保护率分别为80%、93.33%、93.33%。因此,本研究制备的突变株Montanide TSA71VG佐剂疫苗免疫一次就足够抵抗大肠杆菌01、02、078的感染,其保护率远远高于商品疫苗免疫组。
马逊[6]（2010）在《鸭传染性浆膜炎油乳剂灭活疫苗与不同佐剂二联灭活疫苗的免疫原性比较研究》文中指出本研究选取我国养鸭生产中广泛流行的血清1型鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer, RA）和O78型大肠杆菌（Escherichia Coli, E.coli）为菌种研制了RA油佐剂灭活苗、RA-E.coli二联油佐剂灭活苗和RA-E.coli二联蜂胶佐剂灭活苗,并对这3种疫苗进行了临床试验比较研究,获得如下结果：1.疫苗安全性：3种疫苗分别以0.5ml/只、1ml/只、2ml/只和3ml/只的剂量免疫试验鸭。结果表明,RA油佐剂灭活苗和RA-E.coli二联油佐剂灭活苗免疫组在6倍于正常免疫剂量（0.5ml/只）免疫时,少数试验鸭出现5-8 h的精神稍差,之后迅速恢复,其他组均无异常反应,健康生长。剖杀检查,注射RA油佐剂灭活苗和RA-E.coli二联油佐剂灭活苗的试验组在注射部位有小的炎性结节,但该结节随着雏鸭的生长逐渐变小、消失。因此,所研制的3种疫苗均具有良好的安全性。2.疫苗最佳免疫剂量：分别以0.25ml/只、0.50ml/只、1.00ml/只和2.00ml/只免疫试验鸭,然后分别以109CFU/mL 1型RA强毒株和2.00×108CFU/mL O78型E.coli强毒株进行攻毒保护试验。结果表明,免疫剂量为0.25ml/只时即能获得良好保护效果,而当免疫剂量为0.5ml/只时可获得100%保护。因此,所研制疫苗的最佳免疫剂量为0.5ml/只。3.疫苗免疫效力：3种疫苗经过无菌及安全检查合格后,对8日龄樱桃谷鸭颈背部皮下注射0.5ml/只。于免疫后7d、14d、21d进行攻毒保护试验,1型RA的攻毒菌量为5.20×109CFU,O78型E.coli的攻毒菌量为1.00×109CFU。结果表明,对同源RA的攻击,RA油佐剂灭活苗表现出50%、80%和100%免疫保护;RA-E.coli二联油佐剂灭活苗表现出50%、70%和100%免疫保护；RA-E.coli二联蜂胶佐剂灭活苗表现出60%、80%和100%免疫保护。对同源E.coli的攻击,RA-E.coli二联油佐剂灭活苗表现出60%、80%和100%免疫保护；RA-E.coli二联蜂胶佐剂灭活苗表现出70%、100%和100%免疫保护。所研制的3种疫苗中,RA-E.coli二联蜂胶佐剂灭活苗具有保护力产生速度快,对同源菌攻毒的免疫保护率高的特点,特别适合商品肉鸭的免疫接种。RA油佐剂灭活苗和RA-E.coli二联油佐剂灭活苗,免疫保护力产生速度较慢,对同源菌攻毒的免疫保护率,相对蜂胶苗低。4.抗体消长规律：3种疫苗经过无菌及安全检查合格后,对8日龄樱桃谷鸭颈背部皮下注射0.5ml/只。于免疫后7d、14d、21d、35d、49d、63d、77d、91d测定血清凝集抗体效价。结果表明,所研制的3种疫苗中,RA-E.coli二联蜂胶佐剂灭活苗抗体产生速度最快,于免疫后21d最先达到高峰；RA油佐剂灭活苗和RA-E.coli二联油佐剂灭活苗于免疫后35d达到抗体水平高峰,时间比蜂胶苗要晚7d。至免疫后91d仍能检测出抗体存在。抗体水平达到高峰后,随即开始逐渐下降,此后油佐剂苗的抗体水平要高于蜂胶苗,特别适合种鸭免疫接种,以为下一代雏鸭提供长时间较高水平的母源抗体。3种疫苗均能长时间维持较高的抗体水平。这3种疫苗按免疫原性优良等级的顺序依次为RA-E.coli二联蜂胶佐剂灭活苗、RA油佐剂灭活苗、RA-E.coli二联油佐剂灭活苗。
潘廷云[7]（2018）在《鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活苗安全性、最适抗原含量、免疫持续期及交叉免疫保护研究》文中认为禽致病性大肠杆菌病（AvianColibacillosis,AC）是由禽致病性大肠杆菌（APEC）引起的禽类传染性疾病,是养禽业重要的细菌病之一。由于抗生素治疗存在菌株抗药性和药物残留的缺陷,有效的疫苗防治禽致病性大肠杆菌病至关重要。本研究分别以鸡致病性大肠杆菌常见血清型O1（E516）、02（E058）、078（E522）三个菌株及由本实验室构建的脂多糖缺失E516△lpxL△lpxM、E058△lpxL△lpxM、E522△lpxL△lpxM株为抗原,与MontanideTS△71 VG油佐剂制成多价灭活苗。探讨脂多糖缺失灭活疫苗的安全性、最适抗原含量、免疫持续期和疫苗侯选株与流行株的交叉免疫保护。一鸡大肠杆菌病亲本株和脂多糖缺失多价灭活疫苗的安全性比较研究选取本实验室保存鸡致病性大肠杆菌E516（01）、E058（02）、E522（078）和构建的脂多糖缺失株 E516△lpxL△lpxM、E058△lpxL△lpxM、E522AlpxL△lpxM分别制成抗原含量为2.0 × 109 CFU/mL、2.0 × 1010 CFU/mL的多价灭活疫苗,以两倍正常剂量免疫进行安全性试验。结果显示,无论是亲本株还是脂多糖缺失多价灭活疫苗,抗原含量为2.0 × 109 CFU/mL免疫组的安全性优于2.0 × 1010 CFU/mL免疫组;在2.0 × 109 CFU/mL免疫组中,脂多糖缺失多价疫苗的安全性优于亲本株多价灭活疫苗。二鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗最适免疫抗原含量研究本研究制备抗原含量分别为2.0 × 108.5CFU/mL、2.0 × 109 CFU/mL和2.0 × 109.5 CFU/mL的01、02、078血清型亲本株及脂多糖缺失株油佐剂多价灭活疫苗。免疫后对其特异性抗体水平、亲本株攻毒保护率及免疫鸡攻毒后内脏组织病理变化进行研究。研究数据显示,抗原含量为2.0 ×108 5 CFU/mL免疫,亲本株疫苗对01、02、078亲本株保护率分别为50.0%、55.6%、55.6%,脂多糖缺失疫苗对01、02、078亲本株保护率分别为50.0%、55.6%、66.7%;抗原含量为 2.0 ×109 CFU/mL 免疫,亲本株疫苗对 01、02、078亲本株保护率分别为80.0%、88.9%、88.9%;脂多糖缺失株疫苗对01、02、078亲本株保护率分别为90.0%、88.9%、100.0%;抗原含量为2.0 ×109.5 CFU/mL免疫,亲本株疫苗对01、02、078亲本株保护率分别为70.0%、77.8%、77.8%;脂多糖缺失株疫苗对01、02、078亲本株保护率分别为80.0%、88.9%。、100.0%。因此,本实验室制备的脂多糖缺失多价灭活疫苗不同抗原含量免疫组的保护率均高于相同抗原含量亲本株疫苗组,该疫苗的最适抗原含量2.0 × 109 CFU/mL。三鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期研究本研究以鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗进行免疫,分别在免疫后30 d、60 d、90 d和120 d进行亲本株攻毒,根据特异性抗体水平、亲本株攻毒保护率及鸡内脏组织病理变化进行研究。结果表明,在30 d攻毒,疫苗对01、02、078亲本株的保护率分别为88.9%、87.5%、87.5%;在60 d攻毒,疫苗对01、02、078亲本株的保护率均为66.7%;在90 d攻毒,疫苗对01、02、078亲本株的保护率分别为50.0%、50.0%、66.7%;在120 d攻毒,免疫组和攻毒对照组均未出现病死鸡。因此,免疫后30 d、60 d、90 d攻毒,鸡均得到不同程度保护。但由于成年鸡对致病性大肠杆菌的敏感性降低,免疫后120 d攻毒免疫组和对照组均未出现病死鸡,所以本研究暂定该疫苗的免疫持续期为3个月。四鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗交叉免疫保护研究本研究以鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗进行免疫,免疫后检测特异性抗体水平,对01、02、078亲本株和近年流行的菌株O1（Y12,T12）、02（E172,E899）、078（Y14,Y48）进行攻毒和免疫鸡内脏组织的病理变化进行研究。研究结果显示,对01血清型E516、Y12、T12菌株的免疫保护率分别为88.9%、80.0%、87.5%;对02血清型E058、E172、E899菌株的免疫保护率分别为87.5%、88.9%、80.0%;对078血清型E522、Y14、Y48菌株的免疫保护率分别为88.9%、80.0%、80.0%。本研究得出此鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗对疫苗候选株和流行株均提供不低于80.0%的保护。
胡欣[8]（2018）在《鸭源沙门氏菌与鸭源大肠杆菌融合菌株SD5免疫原性研究与转录组分析》文中认为鸭沙门菌病和鸭大肠杆菌病是已成为威胁养鸭业的两个重要细菌病。由于抗生素的不合理使用导致耐药性严重,药物治疗效果不理想,研制有效的疫苗预防越来越受到重视。本研究在原有鸭沙门菌和鸭大肠杆菌融合菌基础上,制备融合菌株SD5蜂胶灭活疫苗和亲本沙门菌S7、大肠杆菌D2二联蜂胶灭活疫苗,免疫雏鸭后,测定其免疫保护率、血清抗体效价、IL-4和IFN-γ水平、淋巴细胞增殖活性和白细胞吞噬活性,并对两者结果进行比较,综合评价SD5苗的免疫效果。对SD5、S7和D2进行转录组测序,筛选出差异表达基因,分析SD5基因表达特点。研究结果如下:SD5苗对S7和D2保护率分别为70%、90%,二联苗保护率分别为80%、70%;SD5苗能诱导机体产生抗S7和抗D2的两种抗体,效价消长规律与二联苗基本相同,免疫3 d后便能检测到抗体,7 d抗体水平与对照组有明显差异（P<0.01）,二免血清效价升高更为显着。淋巴细胞增殖活性、白细胞吞噬活性和IL-4、IFN-γ水平均显着高于对照组（P<0.01）,与二联苗相比无明显组间差异。完成对SD5、S7和D2的转录组测序,发现SD5和S7存在1200个DEGs,其中上调基因431个,下调基因769个,SD5和D2存在952个DEGs,其中364个上调,588个下调。差异基因GO富集分析发现,SD5和S7差异基因中有964个注释到GO数据库,涉及2070个GO功能条目,其中有20条GO功能条目显着富集;SD5和D2差异基因中有751个注释到GO数据库,共涉及2053个GO功能条目,显着富集的GO功能条目为生物质量的调节。差异基因KEGG富集分析发现,SD5和S7差异基因分布在92条KEGG通路中,显着富集的通路包括鞭毛组装、核糖体、丁酸代谢、丙酸代谢、碳代谢;SD5和D2差异基因分布在93条KEGG通路中,未出现显着富集的通路。随机选取四个差异表达基因进行qRT-PCR验证,结果与RNA-seq的数据相似,证明了后者的可靠性。
丛小钧[9]（2021）在《山东省貂源大肠杆菌生物学特性及灭活苗的初步研究》文中认为近几年,随着山东水貂养殖业迅速发展,山东的养貂数量已经超过其他省份总和。但是随着水貂养殖业集约化程度的提高,水貂的发病率继续上升成为制约水貂业发展的重要因素。目前水貂大肠杆菌病已成为水貂养殖业一大难题。抗菌药物普遍滥用,使得抗生素治疗大肠杆菌病效果越来越差。因此研制出有效的大肠杆菌疫苗来预防水貂大肠杆菌病变得尤其重要。本研究使用山东省动物疫病预防与控制中心实验室保存菌株经平板划线、菌落形态观察、显微镜观察、全自动生化鉴定仪鉴定了56株大肠杆菌。然后通过16S r RNA测序筛选出11种O型抗原血清,并进行玻璃板凝集试验确定其血清型。对主导血清型菌株进行药敏实验、致病力实验,筛选出两株强毒株进行疫苗研究。对主导血清型O91和O103的强毒株分别进行半数致死量(LD50)测定,得出最终疫苗效力试验所用的攻毒剂量。血清型结果显示,56株大肠杆菌分属11种血清型,包括O103、O113、O91、O121、O8、O26、O39、O80、O16、O111、O45。其中O91和O103为主导血清型,共占定型血清的44.6%。药敏实验结果显示主导血清型大肠杆菌对青霉素类抗生素高度耐药,耐药率在88%以上,对头孢类药物耐药率达到了52%,对氨曲南耐药率为44%,对庆大霉素和妥布霉素耐药率分别为32%和40%,对环丙沙星和左氧氟沙星耐药率分别为64%和56%,对复方新诺明耐药率为52%,对培南类药物敏感。根据致病力初筛结果,挑选出H1807021a、H200113Fd进行疫苗研究。H1807021a、H200113Fd半数致死量测定结果分别为5.82×107CFU、5.14×107CFU,与之前报道的相比,本研究貂源大肠杆菌致病力较强。本研究对候选菌株进行体外培养,发现37℃培养12h抗原浓度达到最高;用0.4%甲醛溶液进行灭活24h,灭活完全。比较不同的免疫剂量的免疫,发现以4×108CFU免疫小鼠的效果最佳;通过一次免疫和两次免疫的免疫效果对比,最终得出最佳免疫次数为两次。采用4×108CFU的接种剂量,免疫两次进行免疫效力试验。与对照组相比,疫苗组保护率达到了100%,证明水貂大肠杆菌二价灭活苗制备初步取得成功。本研究初步了解了山东省貂源大肠杆菌的血清型、耐药性、致病力,并制备了水貂大肠杆菌二价灭活疫苗,为水貂大肠杆菌病的防治提供重要的理论依据和技术支撑。
杨德鸿[10]（2018）在《苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）流行病学调查及灭活疫苗初步研究》文中研究表明产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是导致猪场仔猪发生腹泻的一种重要致泻性致病菌,感染后引起初生到保育期间仔猪腹泻和黄白痢,也是目前规模化猪场难以根除的一种肠道致病菌。发病仔猪主要临床表现为腹泻、脱水、消瘦、拉黄痢或白痢,严重可引起死亡,且具有传染性,是一种十分重要的猪大肠杆菌病。经临床调查发现仔猪黄白痢是发生频率最高的猪大肠杆菌病,其病原ETEC存在普遍高耐药性和高致病性,严重危害养猪业健康发展。本研究通过调查苏北地区规模化猪场ETEC流行情况,分析其血清型、耐药性和致病力等生物学特性,研制具有广谱免疫保护效果的O抗原灭活疫苗,对苏北地区规模化猪场ETEC进行监测及有效防控。1苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌分离鉴定从苏北地区21个规模化猪场采集初生到30日龄仔猪的新鲜粪样、直肠棉拭子及小肠样共562份,经平板划线、菌落形态观察,其中528份病料分离出792株疑似大肠杆菌。通过显微形态观察、PCR鉴定菌株特异性致病型、16S rRNA测序鉴定确定为ETEC菌株有141株,占总病料数的25.1%。使用PCR方法结合37种标准O抗原血清进行玻板凝集试验鉴定141株ETEC菌株的血清型;用14种常见抗生素标准药敏纸片,分析分离菌株耐药性和敏感性,并做整体耐药性分析;小鼠攻毒试验鉴定分离菌株致病力;研制灭活苗,并进行小鼠免疫保护试验分析灭活疫苗免疫保护效果。使用常规血清型鉴定玻板凝集试验结合PCR分子生物学鉴定方法,使用7种多价O抗原血清和37种单因子ETEC常见O抗原血清,对分离出的141株ETEC菌株进行血清型鉴定。试验结果表明,所分离的141株ETEC菌株具有较多的O抗原血清型,定型85株,占ETEC菌株总数的60.3%,1株自凝,2株出现多价凝集而单价不凝;其中08、0101和0128为优势血清型,分别占定型菌株数的29.4%、20%和占11.8%,占ETEC菌株总数的17.7%、12.1%、7.1%;三个优势血清型占定型菌株数的61.2%,占ETEC菌株总数的36.9%。其他血清型包括09、03、020、0148、0149、0111、0138、0139、0141、025、0115、0119、0153、045、089 等 15 种。2苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌生物学特性分析对所分离141株ETEC菌株肠毒素和毒力岛等相关毒力因子进行鉴定,试验结果表明所有ETEC分离菌株均含有ST基因,有25%的菌株含有LT基因,有25%的菌株含有Ler基因,含有Irp2、fyuA、eaeA基因的菌株占10%。药敏试验对141株ETEC进行14种药敏片的耐药性分析,得出所分离的ETEC对新霉素、红霉素、四环素、庆大霉素、强力霉素、阿莫西林、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑高度耐药,分别为 95%（134/141）、100%（141/141）、99.3%（140/141）、80.9%（114/141）、100%（141/141）、92%（130/141）、96.5%（136/141）,耐药菌株比例均在 80%以上;有 50.4%的ETEC对恩诺沙星敏感（71/141）,中等敏感的为多粘菌素B占66%（93/141）、头孢噻肟占51.8%（73/141）;多重耐药主要集中在8耐、9耐、10耐、11耐,占总ETEC的68%（96/141）,分别为 17%（24/141）、16.3%（23/141）、19%（27/141）、15.6%（22/141）,拥有10重耐药性的菌株占比最大。动物实验使用常规的ICR小鼠,小鼠攻毒试验通过初筛141株ETEC致病力,得到9株高致病力菌株,均能以1×107CFU致死小鼠。然后分别筛选优势血清型08和0101强毒株,以5×107CFU攻毒小鼠,发现08血清型中有8株为强毒株,占08血清型菌株总数的38.1%,0101血清型中有5株为强毒株,占0101血清型菌株总数的27.8%;综合初筛和单因子O抗原血清型强毒株筛选结果,测定08血清型一强毒株的半数致死量（LD50）为1.4×107CFU;最低致死量（MLD）为3×107CFU。3苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌灭活疫苗的初步研究优势血清型单价灭活疫苗小鼠免疫效果结果显示,单价灭活疫苗对同种血清型的强毒株具有完全的保护,保护率为100%;用优势血清型的2株强毒株经灭活制成二价灭活ETEC疫苗,免疫小鼠能形成有效的保护效果,对两种优势血清型所有强毒株的保护率均在83%以上,对高浓度感染也具有较高保护率,且免疫无应激死亡,对其他血清型强毒株也有部分保护效果。比较免疫前后小鼠血清抗体效价,发现二免后血清抗体效价上升较快,但一免后攻毒小鼠也能形成有效保护;比较不同免疫剂量的免疫效果发现,以2×108CFU免疫小鼠的效果最佳;比较不同致病力菌株灭活疫苗的免疫保护效果发现,三种不同致病力菌株制备的灭活疫苗均能对小鼠形成有效保护。本研究通过对苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌的流行病学调查,发现其优势血清型,整体耐药性,并初步研制出可用于防控分离株中大部分致病性ETEC的二价灭活疫苗,给养殖生产业提供了可行的监测和防控参考。
二、大肠杆菌多价油剂灭活苗免疫效果观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大肠杆菌多价油剂灭活苗免疫效果观察（论文提纲范文）
（1）豫南地区鸡大肠杆菌病病原学调查与防控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一章 鸡大肠杆菌病研究进展 |
| 1 研究背景 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 鸡大肠杆菌病病原学 |
| 2.2 大肠杆菌耐药性 |
| 2.3 中药抑菌作用及机制 |
| 2.4 鸡大肠杆菌疫苗 |
| 2.5 鸡大肠杆菌病防治 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 豫南地区鸡大肠杆菌发病状况分析 |
| 3.2 分离菌株药物敏感性测定 |
| 3.3 中药活性成分联合抗菌药物增效作用研究 |
| 3.4 鸡大肠杆菌分离菌株致病性和免疫原性分析 |
| 3.5 鸡大肠杆菌氢氧化铝多价灭活苗研究 |
| 第二章 豫南地区鸡致病性大肠杆菌分离与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 细菌分离 |
| 2.2 分离培养 |
| 2.3 生化鉴定 |
| 2.4 PCR鉴定 |
| 2.5 血清型鉴定 |
| 2.6 致病性试验 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 鸡致病性大肠杆菌对常用抗菌药物耐药性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 细菌的最佳生长时期 |
| 2.2 β-内酰胺类药物体外抑菌活性 |
| 2.3 氨基糖苷类药物体外抑菌活性 |
| 2.4 酚胺醇类药物体外抑菌活性 |
| 2.5 喹诺酮类药物体外抑菌活性 |
| 2.6 其他药物体外抑菌活性 |
| 2.7 鸡大肠杆菌耐药谱分析 |
| 2.8 大肠杆菌中I型整合酶基因扩增 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 中药活性成分与氨基糖苷类药物体外联合抗菌作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 穿心莲内酯联合抗菌药物体外联合抑菌活性 |
| 2.2 黄芩苷联合抗菌药物体外联合抑菌活性 |
| 2.3 小檗碱联合抗菌药物体外联合抑菌活性 |
| 2.4 蒲公英提取物联合抗菌药物体外联合抑菌活性 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 鸡大肠杆菌多价灭活苗优势菌株筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 毒力试验 |
| 2.2 免疫原性试验 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第六章 鸡大肠杆菌多价灭活苗制备与评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 无菌检验 |
| 2.2 安全检验 |
| 2.3 效力检验 |
| 2.4 免疫持续期试验 |
| 2.5 免疫反应 |
| 2.6 免疫效果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读博士学位期间研究成果 |
（2）鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗佐剂的筛选及免疫持续期的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一篇 文献综述 |
| 综述一禽致病性大肠杆菌的研究进展 |
| 1 病原学 |
| 2 毒力因子 |
| 3 流行病学 |
| 4 临床症状及病理变化 |
| 5 防治 |
| 综述二 禽致病性大肠杆菌疫苗的研究进展 |
| 1 灭活疫苗 |
| 2 亚单位疫苗 |
| 3 弱毒疫苗 |
| 4 小结 |
| 第二篇 实验研究 |
| 第一章 鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗佐剂的筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗的免疫持续期 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（3）鸡大肠杆菌多价复合佐剂灭活苗的研制（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 致病力试验 |
| 1.2.2 攻毒菌液制备 |
| 1.2.3 菌体抗原制备 |
| 1.2.4 菌液制备 |
| 1.2.4. 1 菌种增殖 |
| 1.2.4. 2 细菌计数 |
| 1.2.4. 3 菌体破碎 |
| 1.2.4. 4 细菌灭活 |
| 1.2.5 灭活苗的制备 |
| 1.2.5. 1 油相制备 |
| 1.2.5. 3 制苗 |
| 1.2.6 灭活苗的物理性状检验 |
| 1.2.6. 1 眼观检验 |
| 1.2.6. 2 黏度检验 |
| 1.2.6. 3 乳化情况检验 |
| 1.2.7 试验组灭活苗安全试验 |
| 1.2.8 试验组灭活苗免疫剂量试验 |
| 1.2.9 试验组灭活苗免疫期及比较试验 |
| 1.2.1 0 攻毒试验 |
| 1.2.1 1 试验组灭活苗保存期试验 |
| 1.2.1 2 平板凝集试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 分离菌株的致病性试验 |
| 2.2 灭活苗物理性状检验 |
| 2.3 灭活苗安全检验 |
| 2.4 试验组灭活苗免疫剂量试验 |
| 2.5 试验组灭活苗免疫期及效果比较试验 |
| 2.6 攻毒结果 |
| 2.7 试验组灭活苗保存期试验 |
| 2.8 扩大试验 |
| 3 小结与讨论 |
（4）抗仔猪腹泻产肠毒素大肠杆菌疫苗的研究进展（论文提纲范文）
| 1 ETEC |
| 2ETEC疫苗的研究进展 |
| 2.1全菌苗 |
| 2.2黏附素疫苗 |
| 2.3肠毒素疫苗 |
| 2.4基因工程疫苗 |
| 3小结 |
（5）禽致病性大肠杆菌的分离鉴定与O1、O2、O78菌株lpxL、lpxM基因缺失灭活疫苗的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 禽致病性大肠杆菌的研究进展 |
| 1 病原学 |
| 2 流行病学 |
| 3 禽致病性大肠杆菌毒力因子的研究 |
| 4 发病机理 |
| 5 临床症状及病理变化 |
| 6 防治 |
| 综述二 鸡大肠杆菌疫苗的研究进展 |
| 1 灭活疫苗 |
| 2 亚单位疫苗 |
| 3 弱毒菌苗 |
| 参考文献 |
| 第二章 禽致病性大肠杆菌的分离鉴定、抗药性及致病性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 病料来源 |
| 1.2 培养基及其配制方法 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 1.4 试剂 |
| 1.5 实验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 细菌的分离培养 |
| 2.2 细菌的纯化与保存 |
| 2.3 细菌的实验室鉴定 |
| 2.4 分离株O血清型的鉴定 |
| 2.5 分离株毒力基因的检测 |
| 2.6 分离株致病性试验 |
| 2.7 药敏试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 细菌的分离培养 |
| 3.2 细菌的形态学观察 |
| 3.3 生化试验结果 |
| 3.4 分离株O血清型鉴定 |
| 3.5 分离株毒力基因的PCR检测结果 |
| 3.6 分离株的致病性试验 |
| 3.7 分离株药物敏感性试验结果 |
| 3.8 大肠杆菌的多重耐药性 |
| 4 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 大肠杆菌多价灭活疫苗的初步研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 制苗菌株 |
| 1.2 常用培养基及其配制方法 |
| 1.3 主要仪器和设备 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 实验动物 |
| 1.6 商品疫苗 |
| 2 方法 |
| 2.1 灭活疫苗抗原的制备 |
| 2.2 油佐剂灭活苗的制备 |
| 2.3 疫苗质量检查 |
| 2.4 疫苗的接种与攻毒保护试验 |
| 2.5 间接ELISA方法检测血清中特异性抗体水平 |
| 2.6 病理切片的制备 |
| 3 结果 |
| 3.1 突变株与野生株高剂量疫苗对免疫鸡的影响 |
| 3.2 Montanide TSA 71VG佐剂疫苗两次免疫的保护效果 |
| 3.3 两种不同佐剂突变株疫苗两次免疫的免疫效果比较 |
| 3.4 突变株Montanide TSA 71VG佐剂疫苗与商品疫苗的免疫比较 |
| 3.5 病理切片 |
| 4 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（6）鸭传染性浆膜炎油乳剂灭活疫苗与不同佐剂二联灭活疫苗的免疫原性比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 目录 |
| 第一章 鸭传染性浆膜炎的研究概况 |
| 1 RA血清型的研究 |
| 2 RA分子生物学的研究 |
| 3 RA检测方法的研究 |
| 4 鸭传染性浆膜炎疫苗的研究 |
| 5 展望 |
| 第二章 禽大肠杆菌病的研究概况 |
| 1 E.coli血清型的研究 |
| 2 E.coli外膜蛋白的研究 |
| 3 禽大肠杆菌病疫苗的研究 |
| 4 展望 |
| 第三章 疫苗安全性研究与最佳免疫剂量筛选 |
| 1 材料 |
| 1.1 菌种 |
| 1.2 供试疫苗及试剂 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要仪器设备及试验器材 |
| 2 方法 |
| 2.1 疫苗制备 |
| 2.2 培养基的配制 |
| 2.3 攻毒用抗原的制备 |
| 2.4 动物试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 疫苗安全性试验 |
| 3.2 疫苗最佳免疫剂量筛选 |
| 4 讨论 |
| 4.1 疫苗安全性 |
| 4.2 疫苗最佳免疫剂量 |
| 第四章 疫苗免疫效力检测 |
| 1 材料 |
| 1.1 供试疫苗 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 攻毒用菌株 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 培养基的配制 |
| 2.2 攻毒用菌种的制备 |
| 2.3 攻毒菌量测定 |
| 2.4 攻毒保护试验 |
| 2.5 细菌再分离 |
| 3 结果 |
| 3.1 攻毒菌量测定结果 |
| 3.2 攻毒保护结果 |
| 3.3 死亡鸭的临床症状及剖检结果 |
| 3.4 细菌再分离结果 |
| 4 讨论 |
| 第五章 抗体消长规律检测 |
| 1 材料 |
| 1.1 供试疫苗 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 攻毒用菌株 |
| 1.4 试验动物 |
| 1.5 主要仪器设备及器材 |
| 2 方法 |
| 2.1 培养基的配制 |
| 2.2 凝集抗原的制备 |
| 2.3 兔抗RA阳性血清的制备 |
| 2.4 抗体消长规律检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 血清RA凝集抗体效价 |
| 3.2 血清E.coli凝集抗体效价 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附图 |
（7）鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活苗安全性、最适抗原含量、免疫持续期及交叉免疫保护研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 综述一 禽致病性大肠杆菌的研究进展 |
| 1 病原学 |
| 2 流行病学 |
| 3 临床症状和病理变化 |
| 4 防治 |
| 综述二 禽致病性大肠杆菌疫苗研究进展 |
| 1 弱毒疫苗 |
| 2 灭活疫苗 |
| 3 亚单位疫苗 |
| 4 菌影疫苗 |
| 参考文献 |
| 第一章 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗的免疫安全性和最适抗原含量研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 疫苗菌株 |
| 1.2 检验菌株 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 培养基的配方和配制 |
| 1.5 主要仪器和设备 |
| 1.6 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 灭活疫苗抗原制备 |
| 2.2 疫苗的制备 |
| 2.3 成品疫苗疫苗质量检查 |
| 2.4 鸡大肠杆菌病亲本株和脂多糖缺失多价灭活疫苗的安全性试验 |
| 2.5 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗最适抗原含量免疫保护试验 |
| 2.6 间接血凝试验测定血清抗体水平 |
| 2.7 病理切片的制备 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡大肠杆菌病亲本株和脂多糖缺失多价灭活疫苗的安全性比较 |
| 3.2 鸡致病性大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗最适抗原含量确定 |
| 4 讨论 |
| 第二章 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期、疫苗候选株与流行株交叉免疫保护研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 疫苗 |
| 1.2 检验菌株 |
| 1.3 试验动物 |
| 1.4 主要仪器和设备 |
| 1.5 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期试验 |
| 2.2 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗交叉保护试验 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期 |
| 3.2 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫保护 |
| 3.3 病理切片 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
（8）鸭源沙门氏菌与鸭源大肠杆菌融合菌株SD5免疫原性研究与转录组分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 沙门菌概述 |
| 1.1 沙门菌的血清分型 |
| 1.2 流行病学 |
| 1.3 疫苗研究概述 |
| 1.3.1 灭活疫苗 |
| 1.3.2 亚单位疫苗 |
| 1.3.3 弱毒疫苗 |
| 2 大肠杆菌概述 |
| 2.1 大肠杆菌分型 |
| 2.2 流行病学 |
| 2.3 疫苗研究概述 |
| 2.3.1 灭活疫苗 |
| 2.3.2 亚单位疫苗 |
| 2.3.3 弱毒疫苗 |
| 3 细菌原生质体融合概述 |
| 3.1 技术及过程 |
| 3.2 细菌原生质体融合在预防兽医学的应用 |
| 4 细菌转录组研究概述 |
| 4.1 研究意义 |
| 4.2 研究方法 |
| 5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 融合菌株SD_5灭活疫苗研制及免疫原性研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验菌株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 相关溶液配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 细菌复苏与纯培养 |
| 2.2 致病性试验 |
| 2.3 亲本菌株S_7、D_2毒力测定 |
| 2.4 灭活疫苗制备 |
| 2.4.1 细菌菌液制备 |
| 2.4.2 疫苗制备 |
| 2.4.3 疫苗无菌、保存期和安全性检验 |
| 2.5 攻毒保护实验 |
| 2.5.1 S_7动物保护性试验 |
| 2.5.2 D_2动物保护性试验 |
| 2.6 动物分组与免疫程序 |
| 2.7 血清抗体水平检测 |
| 2.7.1 S_7、D_2裂解抗原制备 |
| 2.7.2 阳性血清及阴性血清制备 |
| 2.7.3 间接ELISA操作步骤 |
| 2.7.4 间接ELISA参数选择 |
| 2.7.5 临界值判定标准 |
| 2.7.6 特异性试验 |
| 2.7.7 重复性试验 |
| 2.7.8 血清IgG效价测定 |
| 2.8 细胞免疫水平检测 |
| 2.8.1 淋巴细胞增殖能力检测 |
| 2.8.2 外周血清中细胞因子含量检测 |
| 2.9 外周血白细胞吞噬活性检测 |
| 2.9.1 金黄色葡萄球菌菌液制备 |
| 2.9.2 样品采集与检测 |
| 2.10 数据处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 致病性试验结果 |
| 3.2 亲本菌株半数致死量(LD_(50))测定 |
| 3.3 疫苗质量检验 |
| 3.4 攻毒保护试验结果 |
| 3.5 血清抗体水平检测 |
| 3.5.1 间接ELISA参数选择结果 |
| 3.5.2 临界值判定 |
| 3.5.3 特异性试验结果 |
| 3.5.4 重复性试验结果 |
| 3.5.5 血清抗体效价检测结果 |
| 3.6 细胞免疫水平检测结果 |
| 3.6.1 淋巴细胞增殖能力检测结果 |
| 3.7 外周血清中细胞因子含量检测结果 |
| 3.7.1 IL-4含量检测结果 |
| 3.7.2 IFN-γ含量检测结果 |
| 3.8 白细胞吞噬实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 融合菌株SD_5转录组测序与分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验菌株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 细菌生长曲线测定 |
| 2.2 细菌样品制备 |
| 2.3 RNA提取 |
| 2.4 转录组测序 |
| 2.4.1 总RNA质量检测 |
| 2.4.2 文库构建 |
| 2.4.3 文库质量检测 |
| 2.4.4 上机测序 |
| 2.5 生物信息分析 |
| 2.5.1 测序数据质量评估 |
| 2.5.2 测序数据与参考基因组匹配 |
| 2.5.3 基因表达水平分析 |
| 2.5.4 基因表达差异分析 |
| 2.5.5 差异基因GO富集分析 |
| 2.5.6 差异基因KEGG富集分析 |
| 2.6 差异表达基因的荧光定量PCR验证 |
| 3 结果 |
| 3.1 生长曲线测定结果 |
| 3.2 RNA质检结果 |
| 3.3 测序数据质量结果 |
| 3.4 参考序列比对分析结果 |
| 3.5 基因表达水平分析结果 |
| 3.5.1 基因表达水平分析 |
| 3.5.2 基因表达水平对比 |
| 3.6 相关性分析结果 |
| 3.7 基因差异表达分析 |
| 3.7.1 SD_5和S_7基因差异表达分析 |
| 3.7.2 SD_5和D_2基因差异表达分析 |
| 3.7.3 差异基因聚类分析 |
| 3.8 差异基因GO富集分析 |
| 3.8.1 SD_5和S_7差异基因GO富集分析 |
| 3.8.2 SD_5和D_2差异基因GO富集分析 |
| 3.9 差异基因KEGG富集分析 |
| 3.9.1 SD_5和S_7差异基因KEGG富集分析 |
| 3.9.2 SD_5和D_2差异基因KEGG富集分析 |
| 3.10 qRT-PCR验证RNA-Seq试验结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（9）山东省貂源大肠杆菌生物学特性及灭活苗的初步研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 病原学 |
| 1.1.1 形态及染色特征 |
| 1.1.2 培养特性 |
| 1.1.3 生化反应 |
| 1.2 血清型 |
| 1.3 大肠杆菌的耐药性 |
| 1.3.1 大肠杆菌的耐药现状 |
| 1.3.2 大肠杆菌的耐药机制 |
| 1.3.2.1 酶的释放 |
| 1.3.2.2 细菌外排 |
| 1.3.2.3 抗生素靶位改变 |
| 1.3.2.4 细胞膜通透性的改变 |
| 1.3.3 大肠杆菌耐药性检测意义 |
| 1.4 大肠杆菌的检测方法 |
| 1.4.1 传统检测方法 |
| 1.4.2 酶联免疫吸附技术(ELISA) |
| 1.4.3 量子点荧光探针技术 |
| 1.4.4 免疫层析技术 |
| 1.4.5 PCR检测技术 |
| 1.5 大肠杆菌的致病机理 |
| 1.5.1 黏附素 |
| 1.5.2 肠毒素 |
| 1.5.3 外膜蛋白 |
| 1.5.4 内毒素 |
| 1.6 水貂大肠杆菌病的防治 |
| 1.6.1 饲养管理 |
| 1.6.2 药物预防 |
| 1.6.3 免疫预防 |
| 1.7 疫苗佐剂的概括 |
| 1.7.1 化学类免疫佐剂 |
| 1.7.2 微生物类免疫佐剂 |
| 1.7.3 植物类免疫佐剂 |
| 1.7.4 生化类免疫佐剂 |
| 1.8 大肠杆菌灭活苗的研究进展 |
| 1.8.1 禽大肠杆菌灭活苗概括 |
| 1.8.2 猪大肠杆菌灭活苗概括 |
| 1.8.3 水貂大肠杆菌灭活苗的概括 |
| 1.9 本研究的目的及意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 菌株来源 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 细菌的复苏及纯化鉴定 |
| 2.2.2 细菌的生化鉴定 |
| 2.2.3 分子生物学鉴定 |
| 2.2.4 血清学鉴定 |
| 2.2.5 貂源大肠杆菌药敏实验 |
| 2.2.6 致病力测定 |
| 2.2.6.1 主导血清型菌株致病力初筛试验 |
| 2.2.6.2 半数致死量的测定 |
| 2.2.7 病理切片制作 |
| 2.2.8 水貂大肠杆菌灭活苗的初步研究 |
| 2.2.8.1 疫苗的制备方法 |
| 2.2.8.2 最适接种剂量测定 |
| 2.2.8.3 一次免疫保护效果评估 |
| 2.2.8.4 两次免疫保护效果评估 |
| 2.2.8.5 大肠杆菌二价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 纯化鉴定结果 |
| 3.2 生化鉴定结果 |
| 3.3 16S rRNA鉴定结果 |
| 3.4 O血清型鉴定结果 |
| 3.5 大肠杆菌药敏实验鉴定结果 |
| 3.6 致病力测定结果 |
| 3.6.1 致病力初筛结果 |
| 3.6.2 半数致死量的测定结果 |
| 3.6.2.1 生长曲线测定结果 |
| 3.6.2.2 半数致死量结果 |
| 3.6.3 小白鼠的临床症状以及病理变化 |
| 3.7 小白鼠病理切片结果 |
| 3.8 疫苗免疫保护效果评估 |
| 3.8.1 水貂大肠杆菌二价灭活苗的制备 |
| 3.8.1.1 抗原的制备 |
| 3.8.1.2 灭活检验 |
| 3.8.1.3 菌苗制备 |
| 3.8.1.4 无菌检验 |
| 3.8.1.5 安全性实验 |
| 3.8.2 最适接种剂量 |
| 3.8.3 一次免疫的保护效果评估 |
| 3.8.4 两次免疫保护效果评估 |
| 3.8.5 二价灭活疫苗免疫保护效果评估 |
| 4 讨论 |
| 4.1 大肠杆菌的生化特性及同源性分析 |
| 4.2 大肠杆菌的血清型 |
| 4.3 大肠杆菌的耐药性 |
| 4.4 大肠杆菌的致病性 |
| 4.5 水貂大肠杆菌的灭活苗 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）流行病学调查及灭活疫苗初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略符号 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 产肠毒素大肠杆菌概述 |
| 1 仔猪腹泻特征 |
| 2 产肠毒素大肠杆菌的研究进展 |
| 2.1 病原学 |
| 2.2 形态特征及培养特点 |
| 2.3 鉴定方法 |
| 2.4 血清型 |
| 2.5 毒力因子 |
| 2.6 产肠毒素大肠杆菌的致病机制 |
| 3 大肠杆菌耐药性的研究进展 |
| 3.1 大肠杆菌耐药现状 |
| 3.2 大肠杆菌的耐药机制 |
| 3.3 大肠杆菌耐药性检测技术 |
| 4 猪大肠杆菌疫苗的研究进展 |
| 4.1 大肠杆菌灭活疫苗概况 |
| 5 仔猪腹泻的防治措施 |
| 5.1 饲养管理 |
| 5.2 药物防治 |
| 5.3 免疫防控 |
| 6 结语 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 临床采样 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 参考菌株 |
| 1.5 引物 |
| 1.6 病料处理 |
| 1.7 分离鉴定 |
| 1.8 血清型鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 采样与疑似菌株的分离 |
| 2.2 分离鉴定 |
| 2.3 血清型鉴定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 产肠毒素大肠杆菌生物学特性分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株和动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 引物 |
| 1.5 毒力基因的检测 |
| 1.6 药敏试验 |
| 1.7 致病力测定试验 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 毒力基因检测 |
| 2.2 药敏试验 |
| 2.3 致病力测定 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 产肠毒素大肠杆菌灭活疫苗初步研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 菌株和动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 1.4 灭活疫苗的制备方法 |
| 1.5 最适免疫剂量测定 |
| 1.6 单价灭活疫苗的免疫效果评估 |
| 1.7 二价灭活疫苗的免疫效果评估 |
| 1.8 血清抗体效价测定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 最适免疫剂量测定 |
| 2.2 不同致病力菌株免疫效果比较 |
| 2.3 单价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 2.4 二价灭活疫苗免疫效果评估 |
| 2.5 血清抗体效价比较 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 致谢 |
四、大肠杆菌多价油剂灭活苗免疫效果观察（论文参考文献）
- [1]豫南地区鸡大肠杆菌病病原学调查与防控研究[D]. 黄立. 南京农业大学, 2017(07)
- [2]鸡致病性大肠杆菌脂多糖缺失株三价灭活疫苗佐剂的筛选及免疫持续期的初步研究[D]. 邵启文. 扬州大学, 2019(02)
- [3]鸡大肠杆菌多价复合佐剂灭活苗的研制[J]. 薛俊龙,张李俊,王采先,詹丽娥,田林君,李红丽,张国权. 山西农业科学, 2009(11)
- [4]抗仔猪腹泻产肠毒素大肠杆菌疫苗的研究进展[J]. 张恒慧,尤建嵩,徐永平,王晓丽,李晓宇. 中国畜牧兽医, 2015(02)
- [5]禽致病性大肠杆菌的分离鉴定与O1、O2、O78菌株lpxL、lpxM基因缺失灭活疫苗的初步研究[D]. 张翠翠. 扬州大学, 2016(02)
- [6]鸭传染性浆膜炎油乳剂灭活疫苗与不同佐剂二联灭活疫苗的免疫原性比较研究[D]. 马逊. 四川农业大学, 2010(04)
- [7]鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活苗安全性、最适抗原含量、免疫持续期及交叉免疫保护研究[D]. 潘廷云. 扬州大学, 2018(01)
- [8]鸭源沙门氏菌与鸭源大肠杆菌融合菌株SD5免疫原性研究与转录组分析[D]. 胡欣. 四川农业大学, 2018(02)
- [9]山东省貂源大肠杆菌生物学特性及灭活苗的初步研究[D]. 丛小钧. 山东农业大学, 2021(01)
- [10]苏北地区猪产肠毒素大肠杆菌（ETEC）流行病学调查及灭活疫苗初步研究[D]. 杨德鸿. 南京农业大学, 2018(07)