猪水疱病病毒的化学灭活

猪水疱病病毒的化学灭活

一、猪水泡病病毒的化学灭活(论文文献综述)

J.H.Blackwell,况乾惕[1](1977)在《猪水泡病病毒的化学灭活》文中研究表明观察了猪水泡病病毒香港毒株对已知浓度的不同化学药品和消毒剂的杀病毒活力的抵抗力。实验的13种化合物中仅有5种,在25℃ 30分钟条件下可将病毒完全灭活。该5种中仅有氢氧化钠、次氯酸钠和甲醛,在实验情况下2分钟内可使病毒灭活。

李娇阳[2](2018)在《两种猪重要病毒性传染病病原主要结构蛋白的可溶性表达与鉴定》文中研究指明猪伪狂犬病(PR)发病率逐年升高,已成为除蓝耳病以外严重危害母猪繁殖性能、严重影响猪场的经济效益的最主要传染病之一;口蹄疫(FMD)由于传播迅速、流行面广、难于防治、补救措施少,被称为畜牧业的“头号杀手”。当前,控制这两种严重威胁我国规模化养猪业的健康发展的病毒性传染病的主要措施是疫苗接种,监测PR及FMDV抗体水平、制定合理的免疫程序,接种安全、高效的疫苗已成为规模化养猪场PR及FMD防控的关键。因此建立快速、有效的抗体检测技术,开发新型疫苗对控制和消灭PR及FMD具有重要的意义。本研究采用经小泛素化修饰蛋白促进基因(SUMO)以及组氨酸(His)标签组合的pSMK原核表达系统,对猪伪狂犬病病毒(PRV)的gB全长基因及口蹄疫病毒(FMDV)的结构蛋白(VP1、突变的VP2及VP4)进行了原核表达及鉴定,并进行了FMDV病毒样颗粒的制备。结果显示,PRV的gB基因及FMDV的结构蛋白基因可在SUMO及His标签组合的pSMK原核表达系统进行可溶性表达,表达的可溶性gB蛋白具有较好的反应原性;表达的可溶性FMDV的突变型VP2蛋白与其它结构蛋白可在体外高效组装出反应原性良好的病毒样颗粒[O型FMDV(S2093C)VLPs]。该研究结果表明SUMO基因及His标签基因组合的pSMK原核表达载体对外源性抗原的可溶性表达具有促进作用,且利用此原核表达系统表达的两种病毒的结构蛋白均具有良好的反应原性,研究结果为进一步建立检测PRV及FMDV抗体的ELISA检测方法及新型疫苗的研制提供了技术资料。

陆明哲[3](2006)在《口蹄疫病毒非结构蛋白竞争ELISA检测试剂盒的研制》文中提出目的为提高口蹄疫诊断试剂的敏感性和特异性,拓宽试剂的使用范围,用非结构蛋白研制重组抗原和高免血清,建立鉴别口蹄疫免疫动物与感染动物的竞争ELISA方法。材料与方法1、口蹄疫病毒非结构蛋白的质粒构建与表达结果鉴定:以口蹄疫病毒RNA为模板,扩增3ABC蛋白基因片段,一方面以扩增片段构建A-3ABC重组质粒,另一方面将扩增产物标记,构建B-3ABC重组质粒。对表达产物分别进行运用SDS-PAGE、ELISA试验,并对结果进行鉴定。2、竞争ELISA条件的建立:通过棋盘滴定试验确定抗原包被浓度、阴性与阳性血清、高免血清、酶标二抗的稀释度;研究确定的相应的温度、时间,从而建立竞争ELISA条件;并根据临床样品数据分析,确定判断标准。3、运用已知阴性血清、阳性血清、人工感染血清、临床血清和相关疫病阳性血清进行竞争ELISA测定,分别计算阴性样品检出率、阳性样品检出率,以及批内、批间重复试验的变异系数,进行试剂盒特异性、敏感性、制备工艺的可重复性研究;4、试剂保存条件研究:针对抗原包被板等不同试剂盒组份分别置于2~8℃、37℃保存,定期检测相关指标或检验活性,研究确定不同试剂的保存条件及有效期。结果表达蛋白显示特异的免疫学活性,并能区分感染动物和免疫动物。抗原包被最佳浓度为1:320,临床血清的稀释度为1:40,高免血清最大稀释度为1:5000,酶标二抗稀释度为1:4000;确定试验判断标准为抑制率(pI)>50%为阳性,PI<40%为阴性,40%<PI<50%为可疑。试剂盒最早能于动物感染后第7天测出抗体,特异性达98.15%,敏感性达90.67%。试剂盒与美国UBI试剂盒作比较,符合率达91.2%。试剂盒在2~8℃可保存一年。结论研究结果提示利用非结构蛋白(3ABC)作抗原建立的竞争ELISA方法能够区分感染抗体与免疫抗体,研制的检测试剂具有较高的特异性、敏感性,与国际商业化诊断试剂盒相比有较高的符合率,具有较好的推广应用价值。

王莉娟,徐天刚,赵云玲,陆明哲,陈义平,曹洪敬,蔡丽娟[4](2005)在《口蹄疫诊断技术研究进展》文中研究指明口蹄疫是偶蹄动物的一种重要的烈性传染病 ,可使世界范围内的畜牧业遭受严重的经济损失 ,作者综述了目前的口蹄疫诊断技术研究进展 ,其中包括了传统的病毒分离技术 ,实验室的血清学检测技术以及分子生物学诊断技术等 ,着重对目前在全世界应用广泛的 EL ISA技术进行了重点介绍 ,并对口蹄疫诊断技术进行了展望。

刘耀方[5](2007)在《口蹄疫病毒RT-PCR检测与分型方法的建立及在新疆的应用》文中指出口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病,传染力极强性,一旦发生,常呈流行性,病情急,传播快,蔓延广。由于其传染性质,疾病暴发经常导致严重地经济损失,而且,对家畜方面的国内和国际贸易产生相当大的冲击。由于口蹄疫的特殊性质,寻求快速、准确的检测及分型方法,对于疾病的控制与研究具有重要意义。1 RT-PCR检测口蹄疫病毒根据已经发表的口蹄疫病毒(FMDV)全基因序列,设计了一对引物,建立RT-PCR方法,检测口蹄疫病毒。引物位置在4011-4030与4413-4432左右。在O、A、AsiaⅠ三个血清型之间基本一致。试验结果表明该方法就有良好的特异性和敏感性。用上述方法同时扩增FMDV以及PRRSV、RV、VSV、TGEV、PEDV六种病毒RNA模板,结果仅FMDV可以得到明显的条带,其他5种对照病毒未见明显杂条带,PCR产物酶切得到了预期大小的条带。方法可以检测到100.67TCID50的病毒量。病料检测结果与国家参考实验室检测结果一致,表明方法可以用来检测FMDV。2多重RT-PCR对口蹄疫病毒分型根据已经发表的口蹄疫病毒(FMDV)全基因序列,设计了一套引物,建立多重RT-PCR方法,区分A型、AsiaⅠ型、O型三种血清型的病毒。方法对O型病毒的敏感性为101.00LD50,对AsiaⅠ型的敏感性为101.25LD50,对A型病毒敏感性为101.00LD50。而且具有良好的特异性,PCR产物测序表明得到了正确的扩增产物。方法能够区分保存适当的病料,结果与国家参考实验室检测结果一致,表明方法可以用于病毒的分型。3新疆样品FMDV持续性感染调查FMDV可以在动物体内建立持续性感染。动物不表现临床症状,但病毒存在于体内。本实验利用两种RT-PCR检测方法对采自新疆的样品进行检测,方法一为兰州兽医研究所检测方法,方法二为论文第一章中的RT-PCR检测方法。采集新疆14地州奶牛场牛O/P液1043份,屠宰羊淋巴结347份,共1390份。检测结果为1390份样品全是阴性。结果表明采自新疆的样品不存在FMDV持续性感染。

王会[6](2006)在《检测口蹄疫抗体间接ELISA方法的建立和应用以及新型佐剂对口蹄疫疫苗的免疫增强作用》文中研究表明1 FMDV vp1基因的克隆及表达 参照GenBank中的O型FMDV(foor-and-mouth disease virus,FMDV)的vp1基因序列设计了一对特异性引物,用PCR方法扩增得到一969bp的DNA片段,测序后以该片段为模板,用特异性表达引物扩增得到目的基因vp1(652bp)。然后克隆到pMD18-T载体中,从T-载体中切下目的片段,定向克隆到pGEX-4T-2中,转化BL21(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE实验,目的基因获得高效表达,免疫转印鉴定呈阳性,vp1基因体外获得成功表达。 2 FMDV 3abc基因的克隆及表达 将O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白基因3ABC首先克隆入pMD18-T Vector,然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,成功构建重组表达质粒pGEX/3ABC。将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达,表达产物经SDS-PAGE可检测到分子量约为71kD的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白约占菌体总蛋白的15%。Western blotting分析证明表达产物能被FMDV阳性血清所识别。 3 表达蛋白VP1和3ABC的间接ELISA的建立及应用 FMDV的两种表达产物(VP1,3ABC)经GST.Bind Resin纯化后,作为抗原建立了间接ELISA(VP1-ELISA,3ABC-ELISA),VP1、3ABC抗原包被浓度分别为58.25μg/ml,7.84μg/ml,血清检测稀释度均为1∶40,抗原与抗体的最佳反应时间为120min。 应用VP1-ELISA和液相阻断ELISA诊断试剂盒同时检测400份临床样品,试剂盒的检出率为88.25%,VP1-ELISA的检出率为86.25%,二者的符合率达98%。 应用3ABC-ELISA和兰州兽医研究所的NSP-ELISA诊断试剂盒同时检测400份临床样品,试剂盒的检出率为3%,VP1-ELISA的检出率为4%,二者的符合率达99%。

黄银君,戈银生,张文智,赵允中[7](1995)在《口蹄疫检测技术研究进展》文中提出本文综述了发展到目前为止的口蹄疫(FMD)检测技术,包括了病毒分离、抗原抗体检测、亚型鉴定、单克隆抗体技术、疫苗检测技术和分子生物学技术等内容,并展望了未来的发展方向。

陈小云[8](2004)在《猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株感染性分子克隆的构建》文中认为猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病,给养猪业带来了巨大的经济损失。本研究利用反向遗传学操作技术,构建了PRRSV BJ-4株的全长cDNA克隆,并对全长cDNA克隆中存在的23个突变位点进行了回复突变,继而对突变后的全长cDNA克隆体外转录体的感染性进行了研究。为将来实现在DNA水平上对PRRSV基因组的人工操作,从而在分子水平上研究PRRSV的复制和致病机理、基因产物的功能等提供技术手段,并为构建新型的病毒载体和发展安全有效的活病毒疫苗奠定基础。 依据PRRSV BJ-4株全基因组序列,分6段设计引物,覆盖PRRSV基因组的cDNA重叠片段A1、A2、B1、B2、C和D的预期大小分别为1,294bp、3,452bp、3,376bp、1,823bp、3,484bp和2,887bp。通过优化RT-PCR反应条件,最终扩增出其全基因组cDNA片段。并将它们分别克隆入pGEM-T Easy载体或pBluescript SK+载体。然后将获得的6个克隆依次连接并克隆到低拷贝质粒载体pWSK29中,获得该毒株全长cDNA克隆pWSK DCBA。在全长cDNA克隆的两端和中间引入了病毒序列中不存在的单酶切位点,并在序列的5′端引入了SP6 RNA聚合酶启动子序列以及一个外源的“G”,在3′端引入了poly(T)83序列。 对扩增出的覆盖PRRSV全基因组cDNA的6个片段分别进行序列测定,并与其原始病毒BJ-4株以及其它GenBank中已有的PRRSV序列进行比对,发现其中存在23个碱基的变异。用定向点突变方法,对这些碱基进行了回复突变,得到包含PRRSV各cDNA重叠片段的6个克隆,经序列测定证实,这6个克隆在成功恢复23个变异碱基的同时,未引入新的突变。将它们依次连接并克隆到低拷贝质粒载体pWSK29中,获得了该毒株定点突变后的全长cDNA克隆P1P2mP3P4-63。 将病毒的全长cDNA克隆P1P2mP3P4-63大量培养后,按低拷贝质粒提取方法提取质粒,用限制性内切酶Sph Ⅰ酶切线性化后,作为体外转录模板。转录出的RNA用DNase Ⅰ消化模板质粒DNA,再经脂质体DMRIE-C转染BHK-21细胞,转染后24h的培养上清接种Marc-145细胞后,连续培养3代,在传至第2代时能产生典型的细胞病变。经RT-PCR和间接免疫荧光鉴定,证实获得了有感染性的恢复病毒,表明成功地构建出了具有感染性的PRRSV全长cDNA克隆。

二、猪水泡病病毒的化学灭活(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、猪水泡病病毒的化学灭活(论文提纲范文)

(2)两种猪重要病毒性传染病病原主要结构蛋白的可溶性表达与鉴定(论文提纲范文)

摘要
SUMMRY
第一章 文献综述
    1 养猪场传染病的流行状况
        1.1 猪伪狂犬病概述
        1.1.1 PRV病原学概述
        1.1.2 流行病学
        1.1.3 致病机理
        1.1.4 临床症状及病理变化
        1.1.5 PRV的诊断方法
        1.2 口蹄疫概述
        1.2.1 口蹄疫的流行状况
        1.2.2 病原学
        1.2.3 致病机理
        1.2.4 临床症状及病理变化
        1.2.5 诊断方法
        1.2.6 疫苗研究进展
        1.2.7 口蹄疫病毒样颗粒疫苗的研究进展
    2 His-SUMO融合表达系统的研究进展
    3 研究目的
第二章 猪伪狂犬病病毒gB蛋白原核表达及鉴定
    1 材料及方法
        1.1 材料
        1.1.1 菌种、载体及试剂
        1.1.2 主要设备
        1.2 方法
        1.2.1 gB基因合成
        1.2.2 质粒提取及鉴定
        1.2.3 pUC57-gB质粒以及pSMK空载体的双酶切
        1.2.4 gB基因片段及pSMK载体片段的回收
        1.2.5 gB片段及pSMK载体片段的连接
        1.2.6 转化
        1.2.7 重组表达质粒的筛选及鉴定
        1.2.8 gB蛋白的表达
        1.2.9 蛋白表达条件的优化
        1.2.10 gB蛋白的纯化
        1.2.11 gB蛋白的Western-blot鉴定
    2 结果与分析
        2.1 提取质粒的鉴定结果
        2.2 pSMK-gB表达载体的构建
        2.3 pSMK-gB表达载体的鉴定
        2.4 pSMK-gB重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达
        2.5 gB蛋白表达条件的优化
        2.6 gB蛋白Westernblot分析结果
        2.7 gB蛋白纯化
    3 结论与讨论
第三章 O型口蹄疫病毒结构蛋白的可溶性表达及病毒样颗粒的构建
    1 材料及方法
        1.1 材料
        1.1.1 质粒、载体及抗体
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要实验仪器及设备
        1.2 方法
        1.2.1 PCR引物设计与合成
        1.2.2 突变原核表达质粒pSMK-VP0VP1(S2093C)的构建及鉴定
        1.2.3 O型FMDV突变结构蛋白的原核表达
        1.2.4 O型FMDV突变结构蛋白的纯化
        1.2.5 O型FMDV突变结构蛋白病毒样颗粒的组装及组装条件的优化
        1.2.6 O型FMDV(S2093C)VLPs及FMDVVLPs蛋白的鉴定
    2 结果
        2.1 突变原核表达质粒PSMK-VP0VP1S2093C的构建与鉴定
        2.1.1 pSMK-VP0VP1S2093C质粒的PCR扩增
        2.1.2 突变原核表达质粒pSMK-VP0VP1S2093C的鉴定
        2.2 O型FMDV突变结构蛋白的小剂量诱导表达
        2.3 O型FMDV突变结构蛋白与FMDV结构蛋白的纯化
        2.4 O型FMDV(S2093C)VLPS与FMDVVLPS组装条件的优化
        2.5 O型FMDV(S2093C)VLPS及O型FMDVVLPS排阻色谱分析
    3 讨论
第四章 结论
参考文献
致谢
作者简介
导师简介

(3)口蹄疫病毒非结构蛋白竞争ELISA检测试剂盒的研制(论文提纲范文)

摘要
Abstract
前言
第一部分 口蹄疫非结构蛋白的质粒构建与表达结果鉴定
    1 材料
    2 主要仪器
    3 方法
    4 结果
第二部分 口蹄疫非结构蛋白竞争ELISA方法的建立及试剂盒制备工艺探索
    1 材料
    2 主要仪器语念
    3 方法
    4 结果
第三部分 试剂盒敏感性研究
    1 材料
    2 方法
    3 结果
第四部分 试剂盒特异性研究
    1 材料
    2 方法
    3 结果
第五部分 试剂盒批内批间重复性研究
    1 材料
    2 方法
    3 结果
第六部分 试剂盒保存条件及有效期研究
    1 材料及仪器设备
    2 方法
    3 结果
讨论
小结
参考文献
文献综述
致谢

(4)口蹄疫诊断技术研究进展(论文提纲范文)

1 病毒分离技术
    1.1 细胞培养
    1.2 动物接种
2 血清学诊断技术
    2.1 补体结合试验
    2.2 病毒中和试验
    2.3 酶联免疫吸附试验
3 分子生物学诊断技术

(5)口蹄疫病毒RT-PCR检测与分型方法的建立及在新疆的应用(论文提纲范文)

前言
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述:口蹄疫病毒的研究展
    1 病原学
    2 流行病学
    3 FMDV基因组结构和功能
    4 遗传与变异
    5 口蹄疫疫苗的研究进展
    6 FMD诊断技术的研究进展
    7 持续性感染及成因初探
    参考文献
第二篇 研究报告
    第一章 RT-PCR检测口蹄疫病毒
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 英文摘要
    第二章 多重RT-PCR对口蹄疫病毒分型
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 英文摘要
    第三章 新疆样品FMDV持续性感染调查
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
        5 英文摘要
全文总结
附录:常用试剂的配制
致谢

(6)检测口蹄疫抗体间接ELISA方法的建立和应用以及新型佐剂对口蹄疫疫苗的免疫增强作用(论文提纲范文)

前言
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述:口蹄疫病毒的研究进展
    1 病原学
    2 流行病学
    3 FMDV基因组结构和功能
    4 遗传与变异
    5 口蹄疫诊断技术的研究进展
    6 免疫动物和自然感染动物的区分
    7 口蹄疫疫苗的研究进展
    8 免疫佐剂在口蹄疫疫苗研究中的应用
    9 参考文献
第二篇 研究报告
    第一章 口蹄疫结构蛋白VP1基因的克隆与表达
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
    第二章 口蹄疫非结构蛋白3ABC基因的克隆与表达
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
    第三章 两种诊断FMDV抗体的间接ELISA方法的建立和初步应用
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 讨论
        4 参考文献
    第四章 LTB基因的原核表达
        1 材料与方法
        2 结果与分析
        3 讨论
        4 参考文献
    第五章 LTB、细菌CpG DNA对口蹄疫疫苗的免疫增强作用
        1 材料与方法
        2 结果
        3 讨论
        4 参考文献
全文总结
附录
致谢

(8)猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株感染性分子克隆的构建(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
插图与附表清单
缩略词表
第一章 引言
    1.1 国内外研究概况
    1.2 研究的目的和意义
    1.3 研究内容与技术路线
    1.4 研究目标
第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株全长CDNA克隆的构建
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
    2.3 结果与分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组的定点突变
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
    3.3 结果与分析
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株恢复病毒的感染性分析
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
    4.3 结果与分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 结论
第六章 文献综述
    6.1 反向遗传学操作技术的涵义
    6.2 全长cDNA的克隆技术
    6.3 感染性转录体制备技术
    6.4 反向遗传学操作技术在动物RNA病毒研究中的应用
    6.5 反向遗传学操作技术在动脉炎病毒科病毒研究中的应用
    6.6 结语
参考文献
致谢
附图
作者简历

四、猪水泡病病毒的化学灭活(论文参考文献)

  • [1]猪水泡病病毒的化学灭活[J]. J.H.Blackwell,况乾惕. 兽医科技资料, 1977(S2)
  • [2]两种猪重要病毒性传染病病原主要结构蛋白的可溶性表达与鉴定[D]. 李娇阳. 甘肃农业大学, 2018(09)
  • [3]口蹄疫病毒非结构蛋白竞争ELISA检测试剂盒的研制[D]. 陆明哲. 青岛大学, 2006(02)
  • [4]口蹄疫诊断技术研究进展[J]. 王莉娟,徐天刚,赵云玲,陆明哲,陈义平,曹洪敬,蔡丽娟. 中国畜牧兽医, 2005(03)
  • [5]口蹄疫病毒RT-PCR检测与分型方法的建立及在新疆的应用[D]. 刘耀方. 南京农业大学, 2007(05)
  • [6]检测口蹄疫抗体间接ELISA方法的建立和应用以及新型佐剂对口蹄疫疫苗的免疫增强作用[D]. 王会. 南京农业大学, 2006(02)
  • [7]口蹄疫检测技术研究进展[J]. 黄银君,戈银生,张文智,赵允中. 中国进出境动植检, 1995(04)
  • [8]猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株感染性分子克隆的构建[D]. 陈小云. 中国农业大学, 2004(03)

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猪水疱病病毒的化学灭活
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