一、Expression of Resistin mRNA in Adipose Tissue of Rat Model with Polycystic Ovarian Syndrome and Its Implication（论文文献综述）
林青[1]（2021）在《归术益坤方通过PI3K/AKT通路及LPS治疗多囊卵巢综合征大鼠的实验研究》文中研究表明[研究背景]多囊卵巢综合征（polycysticovarysyndrome,PCOS）在我国育龄期妇女中发病率逐步攀升,严重影响患者身心健康,但关于PCOS的发病机制却众说纷纭,也无针对性特效治疗药物。近年来,PCOS的诊治和研究范畴逐渐扩大,肠道内环境被认为是PCOS发病机制关键一环。调节肠道内环境对PCOS有着重要的治疗作用,但调控肠道内环境的作用靶点仍待研究。对于PCOS的治疗方法各有利弊,中医药在本病的临床治疗疗效可靠,安全性高。导师外祖母国医大师柴嵩岩经验方“归术益坤方”已被临床试验证实治疗PCOS患者有效,但其治疗机制及作用靶点亟待研究。[研究目的]本实验通过来曲唑建立与临床PCOS病人症状相似的脾肾两虚、湿浊结聚PCOS大鼠模型,验证归术益坤方对于脾肾两虚、湿浊结聚PCOS大鼠的疗效。仿照其他研究者成功经验,建立伪无菌大鼠模型,通过粪菌移植实验探索归术益坤方作用于肠道内环境的靶点。通过对于大鼠血清、卵巢组织相关基因、蛋白、炎症因子等指标的检测,研究归术益坤方治疗脾肾两虚、湿浊结聚PCOS大鼠机制。[研究方法]20只6周龄大鼠,随机分为空白组6只、模型组6只,中药组8只;20只3周龄大鼠,随机分为粪菌移植模型组10只,粪菌移植对照组10只。按实验方案对40只大鼠进行干预。干预过程中监测大鼠体重、身长、动情周期变化。干预结束后,腹主动脉取血,放射免疫法检测血清雄激素（T）水平,生化法检测血清血糖,ELISA检测血清IL-18、TNF-α、LPS水平。取卵巢测量卵巢重量、体积,HE染色观察大鼠卵巢病理学变化,Q-PCR检测卵巢组织中PI3K、AKT、GSK3-β、miRNA-29基因水平的相对表达,Western blot检测卵巢组织中TLR-4蛋白水平的相对表达。[研究结果]1.大鼠形态:模型组大鼠较空白组体重、Lee’s指数均有明显升高（P<0.01）,中药组大鼠体重较模型组显着下降（P<0.01）,模型组与空白组差异（P<0.01）较中药组与空白组差异（P<0.05）更为显着。两组粪菌移植大鼠相比较,移植后体重、Lee’s指数均无明显差异（P>0.05）。2.动情周期:空白组大鼠均观察到完整动情周期,模型组大鼠未见规律动情周期,中药组大鼠与造模期后5天动情周期相比,可观察到完整动情周期。粪菌移植对照组大鼠均观察到规律动情周期,部分粪菌移植模型组大鼠未见规律动情周期,出现动情周期紊乱。3.血清学指标:模型组大鼠T水平较空白组显着增加（P<0.01）,模型组与空白组大鼠之间T水平差异（P<0.01）较中药组与空白组大鼠之间T水平差异（P<0.05）更为显着。与空白组相比,模型组大鼠FPG水平有所增加,但差异无统计学意义（P>0.05）;中药组大鼠FPG水平较模型组明显降低（P<0.01）,同时低于空白组大鼠（P<0.05）。两组粪菌移植大鼠雄激素水平未见具有统计学意义差异（P>0.05）,但粪菌移植模型组大鼠雄激素水平较粪菌移植对照组可见上升。4.卵巢形态:模型组大鼠右卵巢形态学变化更接近PCOS卵巢变化,左卵巢在体积方面也在向PCOS卵巢形态转化。中药组大鼠在中药治疗后卵巢形态在一定程度上向正常大鼠卵巢形态转化。粪菌移植模型组双卵巢重量、体积较粪菌移植对照组均有不同程度上升,但只有右卵巢重量差异有统计学意义（P<0.05）。5.卵巢病理切片:空白组大鼠卵巢可见优势卵泡和黄体;模型组大鼠出现多卵泡改变;中药组大鼠可见优势卵泡和黄体。粪菌移植两组大鼠卵巢形态未见明显病理学差异,均可见优势卵泡与黄体,粪菌移植模型组大鼠卵巢卵泡数稍多与移植对照组。6.卵巢组织中PI3K、AKT、GSK3-β、miRNA-29基因表达水平:模型组大鼠PI3K基因表达较空白组显着上调（P<0.01）,与模型组大鼠相比,中药组大鼠PI3K基因表达水平显着下调（P<0.01）,中药组大鼠AKT基因表达水平较模型组显着上调（P<0.01）;GSK3-β基因水平在中药组大鼠卵巢组织中较空白组可见显着上调（P<0.01）。与空白组大鼠相比,模型组大鼠miR-29a-3p基因表达水平上调（P<0.05）。7.血清LPS及相关炎症因子水平、TLR-4蛋白表达水平:与空白组大鼠相比,模型组大鼠血清LPS水平显着上升（P<0.01）,伴随血清炎症因子IL-18、TNF-α水平显着上升（P<0.01）。中药组大鼠血清LPS水平较模型组有所下调（P<0.05）。卵巢组织中TLR-4蛋白表达水平模型组、中药组大鼠较空白组大鼠均明显上调,中药组卵巢组织中TLR-4蛋白表达水平与模型组比较,有所下调。[研究结论]1.来曲唑可以成功介导脾肾两虚、湿浊结聚证PCOS大鼠模型2.来曲唑介导的PCOS大鼠肠道菌群,可能导致PCOS的发生,此过程中,LPS可能是其中一种诱发因素。3.归术益坤方可以降低PCOS大鼠体重,促进其恢复卵巢功能,帮助其规律排卵,降低雄激素水平及空腹血糖水平,对于PCOS大鼠治疗效果良好。4.来曲唑介导的PCOS大鼠卵巢组织中存在PI3K/AKT信号通路的过度激活,归术益坤方通过抑制PCOS大鼠卵巢组织中PI3K/AKT信号通路的过度激活,调控颗粒细胞的增殖和凋亡,促进卵泡的发育,恢复卵巢排卵功能。5.来曲唑介导的大鼠模型体内存在代谢性内毒素血症,归术益坤方可以祛除体内浊热,降低PCOS大鼠血清内LPS水平,改善PCOS大鼠机体内环境。
杜静[2]（2020）在《Apelin在多囊卵巢综合征患者中表达及作用分子机制的研究》文中指出第一部分 血清Apelin在多囊卵巢综合征患者中的特点目的:探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者中血清Apelin特点,及其与性激素、代谢指标的相关性。方法:选取2015年9月至2017年9月于中山市博爱医院生殖中心就诊的不孕患者共60例,按照是否诊断PCOS,设为PCOS组30例,对照组30例。采用ELISA检测血清Apelin水平,同时检测空腹血清葡萄糖（FPG）、空腹胰岛素（FIns）及性激素水平,计算体质量指数（BMI）及胰岛素抵抗指数稳态模型（HOMA-IR）,并分析患者血清Apelin水平与性激素、代谢指标的相关性。结果:PCOS组患者的血清Apelin水平较对照组显着升高[（3.35±1.22）vs（1.95±0.83）μg/L,P<0.05],PCOS 组的 HOMA-IR 也显着高于对照组[（3.87±1.41）vs（2.12±0.91）μg/L,P<0.05],Pearson 相关分析表明,PCOS 组血清Apelin 水平与 BMI 及 HOMA-IR 正相关（P<0.01）。结论:血清Apelin在PCOS组显着升高,并且其升高与BMI及HOMA-IR存在密切联系。第二部分miR-424靶向调节Apelin和APJ表达调控人卵巢颗粒细胞瘤KGN的增殖与凋亡目的:本研究旨在探讨miR-424在调节Apelin表达和人类卵巢颗粒细胞瘤KGN功能中的作用。方法:选取2017年10月至2018年12月就诊中山市博爱医院生殖中心,行IVF-ET治疗的69例不孕患者,按照是否确诊PCOS,设为PCOS组32例,对照组37例,收集血清、卵泡液和颗粒细胞样本。另从瑞肯生物来源中心（Ricken,日本）获取人卵巢颗粒细胞瘤KGN,通过特定的模拟物和抑制剂的转染改变miRNAs在KGN中的表达。用ELISA测定Apelin浓度,用qRT-PCR法分析基因和miR-424的表达,Western blot法测定蛋白质含量,双萤光素酶测定验证miR-424 与基因序列的相关性。Apelin 基因 的过表达是由 LV-003 质粒介导细胞转染促进的,采用MTS方法对KGN细胞增殖进行分析,流式细胞术测定细胞周期和凋亡。结果:1、Apelin在PCOS患者血清和卵泡液中的浓度显着升高（P<0.05）,伴随着APJ（Apelin受体）表达的上调和miR-424表达的抑制。2、miR-424模拟物通过靶向针对Apelin和APJ3’-UTR区域,抑制了 KGN细胞中的Apelin和APJ表达,miR-424抑制剂又将其作用逆转。3、miR-424通过下调Cyclin-D/E表达来抑制KGN细胞增殖和细胞周期进程,miR-424通过诱导Caspase-3活化,促进KGN细胞凋亡。4、miR-424通过直接抑制apelin基因表达,调节KGN细胞增殖和凋亡,但不抑制Apelin肽活性。结论:Apelin和APJ的表达受到miR-424靶向调控,抑制KGN细胞的增殖,促进其凋亡。
张宇龙[3]（2020）在《基于IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路探讨肌醇治疗PCOS-IR的机制》文中研究说明1、研究背景:多囊卵巢综合征（PCOS）是最常见的女性内分泌和代谢紊乱疾病之一,而且经常伴有胰岛素抵抗（IR）和肥胖症。在过去的十年中,肌醇被引入到PCOS的治疗中。肌醇是一种糖醇和一种葡萄糖异构体,存在于许多食品中,包括谷物和水果。肌醇是众多继发性信使的前体,曾经被认为是B族维生素之一,它可以降低PCOS妇女的胰岛素抵抗状态并改善卵巢功能和降低雄激素水平。肌醇在改善脂代谢异常方面也获得了很好的疗效,已有大量研究发现肌醇可以用于治疗多囊卵巢综合征,并可以改善胰岛素抵抗,提高PCOS患者卵母细胞质量,改善妊娠结局。然而肌醇改善胰岛素抵抗促进良好结局的机制尚不明确。大量研究证明高脂饲料可以诱导胰岛素抵抗的动物模型,在高脂饲料所诱导的非酒精性脂肪肝和PCOS胰岛素抵抗模型中都发现了游离脂肪酸和IL-6的升高,游离脂肪酸可以促进IL-6的表达,说明高脂饲料所导致的游离脂肪酸和IL-6升高在胰岛素抵抗发病机制中起到了重要作用。慢性低度炎症在PCOS发病机理中起着至关重要的作用。与没有患该病的女性相比,患有PCOS的女性的血清炎症因子（包括IL-6）水平显着增加。IL-6是慢性炎症中的主要促炎细胞因子,与慢性炎症密切相关。因此,炎症相关代谢疾病可能具有相同或相似的信号通路,而IL-6可能是PCOS中早期的低度慢性炎症标记的关键分子,IL-6激活转录活化因子3（STAT-3）在PCOS中起着重要作用。STAT-3活化后刺激miR-155表达,抑制STAT-3的磷酸化,将会抑制miR-155的表达,转录活化因子-3（STAT-3）的活化将会导致其下游分子miR-155表达的增加。关于胞外囊泡参与糖尿病的研究发现miR-155可以通过靶向作用PPAR-γ而参与胰岛素抵抗及糖尿病的发病机制。在PCOS患者中发现了 IL-6和miR-155的表达增加,其他实验也证明了 PCOS中IL-6促进STAT-3活化,而STAT-3下游分子miR-155靶向作用的PPAR-γ在PCOS中表达降低参与了胰岛素抵抗,鉴于高脂饲料可以增加PCOS血中游离脂肪酸（FFA）的浓度,而FFA又可以增加IL-6的表达,同时也有研究证实FFA和IL-6可以协同激活STAT-3,因此可以猜测,脂代谢异常所导致的胰岛素抵抗可能是由增高的游离脂肪酸（FFA）通过影响IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路实现的。此外,在PCOS大鼠模型及患者中都发现了卵巢自噬和卵巢血管异常生成明显增加,卵巢自噬和卵巢血管异常生成对卵泡发育及卵巢排卵作用重大。在多项研究自噬和血管生成的研究中都发现miR-155/PPAR-γ通路发挥了重要作用,此通路可以通过影响mTORC1、mTORC2和VEGF的表达影响自噬和血管生成。IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路可能同时调控PCOS胰岛素抵抗、卵巢自噬和异常血管生成。肌醇被发现可以降低IL-6表达,因此我们猜测,肌醇可能通过IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路发挥改善胰岛素抵抗的作用,同时影响卵巢自噬和卵巢血管生成。肌醇改善胰岛素抵抗的同时是否影响卵巢自噬和卵巢血管生成,IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路及其下游分子是否参与了 PCOS的胰岛素抵抗、卵巢自噬和异常血管生成的发病机制,肌醇的作用机制是否与该通路相关,回答这些问题,不仅可以进一步阐明肌醇改善PCOS胰岛素抵抗、影响卵巢自噬和异常血管生成的作用机制,而且可以对多囊卵巢综合征胰岛素抵抗以及其他的胰岛素抵抗相关疾病的治疗提供新的思路和理论依据。2、研究目的本研究构建了多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的大鼠模型,并予肌醇干预,从大鼠的卵巢、脂肪以及肝脏三种组织探讨药物肌醇改善多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的作用,并基于IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路探讨肌醇改善胰岛素抵抗的机制,此外还探讨了肌醇改善胰岛素抵抗的同时对多囊卵巢综合征卵巢自噬和卵巢血管的影响及作用机制。3、研究方法20只Sprague-Dawley雌性鼠（3-4周龄）,用于检验PCOS大鼠模型构建。随机分为2组(每组n=10,PCOS组用于制造多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗大鼠模型,Control组正常饮食作为空白对照组。PCOS-IR大鼠模型喂食高脂饲料（HFD）8周,在喂食方案的最后4周予以来曲唑。采用HE染色检测两组大鼠卵巢的形态结构,应用试剂盒检测游离脂肪酸,应用ELISA法检测了性激素、胰岛素和IL-6的表达,应用电子显微镜检测了胞外囊泡。应用RT-PCR检测胞外囊泡内miR155和miR-21的表达以及卵巢组织中PPAR-γ mRNA和GLUT4 mRNA的表达。为了探索肌醇改善胰岛素抵抗的作用及机制,我们将45只Sprague-Dawley雌性鼠（3-4周龄）,随机分为3组（每组n=15,各组大鼠饲养在同一环境中的两个笼子中）,阴性对照组（正常饮食,生理盐水干预）,PCOS组（高脂饲料和来曲唑造模,生理盐水干预）和肌醇组（高脂饲料和来曲唑造模,造模成功后肌醇干预4周）。采用HE染色检测卵巢的形态结构,应用试剂盒检测甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的水平,应用ELISA法检测了性激素、胰岛素、IL-6及血管内皮生长因子的表达,应用电子显微镜检测了自噬小体和胞外囊泡。应用CD31标记卵巢血管,显微镜观察卵巢血管的变化。应用免疫组化检测了 IL-6、STAT-3、p-STAT-3的表达,应用免疫荧光染色法检测了 LC3、PPAR-γ和GLUT4的表达,应用 RT-PCR检测 miR155、miR-21,PPAR-γ mRNA 和 GLUT4 mRNA 的表达,并使用 Western blot 检测了 IL-6、STAT-3、p-STAT-3、PPAR-γ、GLUT4、LC3、mTORC1 和 mTORC2 的表达。4、研究结果1.予高脂饲料和来曲唑造模后,卵巢HE染色结果提示PCOS模型组大鼠卵巢成多囊改变,对照组的HOMA-IR指数为2.09±0.64,而PCOS模型组的HOMA-IR指数为4.55±0.49,两组具有明显差异（P<0.01）。两组之间的卵泡刺激素（FSH）浓度没有显着差异（P=0.213）,血清黄体生成素（LH）、雄激素（T）、LH/FSH比值、游离脂肪酸和IL-6浓度在PCOS模型组明显增加。免疫荧光法检测结果提示PPAR-γ及GLUT4在PCOS模型组表达明显增多,PCOS模型组大鼠卵巢组织中PPAR-γ mRNA及GLUT4 mRNA的表达显着低于空白对照组（P<0.01）。2.予肌醇干预PCOS-IR模型大鼠的实验发现:在食物摄入量和体重方面,PCOS组大鼠明显高于肌醇组和空白对照组（P<0.01）。PCOS组大鼠的血清黄体生成素（LH）、雄激素（T）和LH/FSH 比值明显高于空白对照组和肌醇组（P<0.01）。PCOS组大鼠的血清E2浓度明显低于空白对照组和肌醇组的E2水平（P<0.01）。而三组之间的卵泡刺激素（FSH）水平没有显着差异（P=0.157）。阴性对照组和肌醇组大鼠HOMA-IR指数分别为2.15±0.59和2.27±0.79,而PCOS模型组的 HOMA-IR 指数为 4.22±0.77（P<0.01）。3.在PCOS组的大鼠卵巢组织中观察到多囊性改变。相反,肌醇组和空白对照组卵巢结构未见明显的多囊性改变。PCOS组的甘油三酯、VEGF和IL-6血清浓度显着高于阴性对照组和肌醇组（P<0.01）,而三组间并未观察到胆固醇血清水平的显着差异。4.RT-PCR检测PCOS-IR大鼠卵巢中miR-155,miR-21,IL-6和PPARmRNA的表达,与PCOS组相比,空白对照组和肌醇组大鼠卵巢组织中PPAR-γ mRNA的表达明显高于PCOS组,而大鼠卵巢组织中miR-155,miR-21和IL-6 mRNA表达明显低于PCOS组（P<0.01）。5.免疫组织化学法、免疫荧光法及western blot检测卵巢组织中的蛋白表达结果提示:PCOS组中IL-6和p-STAT-3的表达明显高于肌醇和空白对照组（P<0.01）,而补充肌醇后不影响STAT-3的表达。但是,PCOS组大鼠卵巢组织中PPAR-γ和GLUT4的表达明显低于肌醇组和空白对照组（P<0.01）。6.通过免疫荧光显微镜检测了卵巢组织细胞内LC-3的表达情况发现:在PCOS组,卵巢颗粒细胞LC-3的表达的荧光信号明显强于肌醇组和空白对照。Western blot检测LC3结果提示卵巢组织中LC3-II/LC3-I的比值在PCOS组明显高于肌醇组和空白对照组（P<0.01）。相比于空白对照组和肌醇组,PCOS组卵巢组织中mTORC1和mTORC2的表达明显减少（P<0.01）。7.应用CD31标记卵巢血管后观察卵巢血管生成情况,结果提示PCOS组卵巢间质中血管丰富,而在肌醇组和空白对照组,卵巢间质血管少于PCOS组。8.Western blot 检测脂肪组织中 IL-6、STAT-3、p-STAT-3 和 PPAR-γ 的蛋白表达情况,结果提示,PCOS组大鼠脂肪组织中IL-6和p-STAT-3的表达明显高于肌醇组和空白对照组,此外三组大鼠的脂肪组织中STAT-3的表达水平无明显差异,PPAR-γ在PCOS-IR组大鼠脂肪组织中的表达明显少于肌醇组和空白对照组（P<0.01）。9.PCOS组大鼠脂肪组织及血清胞外囊泡中miR-155和miR-21表达明显高于肌醇组和空白对照组（P<0.01）。检测大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）和游离脂肪酸（FFA）浓度结果提示PCOS组大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）和游离脂肪酸（FFA）浓度显着高于肌醇组和空白对照组（P<0.01）。10.HE染色检测肝脏的结果发现:在PCOS组大鼠的肝脏组织内见到大量的脂肪液滴堆积,而且肌醇组大鼠肝脏细胞周围的脂肪液滴明显减少,空白对照组大鼠肝脏组织中则未见明显脂肪液滴。在PCOS组大鼠肝脏组织中PPAR-γ mRNA和GLUT4 mRNA表达明显低于肌醇组和空白对照（P<0.01）。5、研究结论1.高脂饲料和来曲唑可以成功诱导多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）大鼠模型,血中游离脂肪酸（FFA）浓度、IL-6浓度和胞外囊泡中miR-155表达的升高在PCOS大鼠胰岛素抵抗中起到了重要作用,卵巢组织中PPAR-γ和GLUT4的表达降低参与了 PCOS-IR模型大鼠卵巢组织的局部胰岛素抵抗。2.补充肌醇可以改善多囊卵巢综合征胰岛素抵抗,高脂饲料和来曲唑干预诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗大鼠模型中卵巢组织存在局部胰岛素抵抗,补充肌醇可以改善卵巢组织的局部胰岛素,肌醇改善卵巢组织胰岛素抵抗的作用机制与 IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ 通路中 IL-6、磷酸化 STAT-3、miR-155 的表达降低和PPAR-γ表达增加相关。3.高脂饲料和来曲唑诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）大鼠模型中卵巢自噬明显增加,其机制与卵巢组织mTORC1和mTORC2表达降低相关,而补充肌醇可以通过增加mTORC1和mTORC2的表达减少卵巢自噬。4.高脂饲料和来曲唑诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗（PCOS-IR）大鼠模型卵巢间质血管明显增多,而补充肌醇后卵巢间质血管减少,肌醇的该作用机制与卵巢组织内mTORC1表达增加和血中VEGF浓度降低相关。5.高脂饲料和来曲唑干预诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗大鼠模型中脂肪组织存在局部胰岛素抵抗,补充肌醇可以改善脂肪组织的局部胰岛素,肌醇改善脂肪胰岛素抵抗的作用机制与FFA/IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路中FFA浓度降低,脂肪组织中IL-6、磷酸化STAT-3、miR-155的表达降低和脂肪组织中PPAR-γ表达增加相关。6.高脂饲料和来曲唑干预诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗大鼠模型中肝脏组织存在局部胰岛素抵抗,补充肌醇可以改善肝脏组织的局部胰岛素抵抗,肌醇改善肝脏胰岛素抵抗的作用机制与胞外囊泡内miR-155表达降低和肝脏组织内PPAR-γ和GLUT4的表达增加相关。
张萍[4]（2020）在《从线粒体介导的细胞凋亡途径探讨多囊卵巢综合征痰证的生物学基础》文中研究说明目的:本研究采用脱氢表雄酮（DHEA）复制多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome,PCOS）大鼠模型,同时给予化痰方二陈汤干预,观察各组大鼠血清性激素水平、卵巢形态学变化、卵巢颗粒细胞凋亡指数及线粒体介导的细胞凋亡途径相关基因的表达。从线粒体介导的细胞凋亡途径分析痰证与PCOS卵巢颗粒细胞凋亡的关系以及PCOS痰证的物质基础,丰富PCOS痰证的生物学内涵,初步明确化痰法治疗PCOS的作用靶点。方法:21日龄SPF级SD雌性大鼠36只,采用随机数字表法分为正常组（10只）,造模组（26只）。造模组每日颈背部皮下注射DHEA,正常组同部位注射等量大豆油剂,连续20 d。根据阴道脱落细胞、卵巢组织形态学及血清性激素水平观察大鼠是否成模。将成模大鼠随机分为模型组、二陈汤组和二甲双胍组,并以正常组作为对照。二陈汤组(4.35g·kg-1·d-1)和二甲双胍组(0.3g·kg-1·d-1)予相应剂量药物干预,模型组和正常组予等体积的灭菌饮用水,连续4周。酶联免疫吸附法（ELISA）检测睾酮（T）、促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）和雌二醇（E2）的含量;苏木素-伊红染色法（HE）观察卵巢组织形态学;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测卵巢颗粒细胞凋亡;实时荧光定量PCR（q-PCR）、免疫组化ABC法、蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测线粒体介导的细胞凋亡途径相关基因的表达。结果:1.造模第21天发现,与正常组比较,造模组大鼠体质量及血清T、LH、E2水平显着升高（P<0.01）。FSH两组间无明显差异（P>0.05）。造模组大鼠失去规律动情周期。光镜下可见正常组大鼠卵巢组织多个黄体及各级卵泡,颗粒细胞呈多层排列,多为89层,排列紧密有序,近成熟卵泡结构完整,有卵丘、卵母细胞、放射冠;造模组不同发育阶段的卵泡及黄体较少,颗粒层减少至13层,排列稀疏,卵泡呈囊状性扩张,中无卵母细胞。2.化痰后各项指标比较:（1）体质量及卵巢指数:与正常组比较,模型组体质量及卵巢指数高于正常组,差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,二陈汤组、二甲双胍组大鼠体质量及卵巢指数降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）血清T、LH、FSH、E2水平:与正常组比较,模型组血清T、LH水平显着升高（P<0.01）,血清E2、FSH水平显着下降（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤组血清T、LH水平显着下降（P<0.01）,血清E2、FSH水平显着升高（P<0.01）;二甲双胍组FSH水平显着升高（P<0.01）,LH水平下降（P<0.01）。（3）卵巢形态结构变化:正常组大鼠卵巢组织可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡,颗粒细胞呈多层排列,形态完整。模型组大鼠卵巢组织黄体及各级卵泡少见,颗粒细胞层变薄,排列较疏松,可见大量囊状扩张卵泡,囊状卵泡内卵母细胞或放射冠消失。二陈汤组、二甲双胍组有所改善。（4）卵巢颗粒细胞凋亡指数:与正常组比较,模型组卵巢颗粒细胞凋亡指数升高,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,二陈汤组、二甲双胍组卵巢颗粒细胞凋亡指数有降低趋势,差异无统计学意义（P>0.05）。（5）卵巢组织Bax、Bcl-2、Cyt-C、Caspase-9 mRNA相对表达量:各组Cyt-C mRNA相对表达量差异无统计学意义;与正常组比较,模型组Bcl-2/Bax、Caspase-9 mRNA表达水平下降（P<0.05）;与模型组比较,二陈汤组及二甲双胍组Bcl-2/Bax、Caspase-9mRNA表达水平上升（P<0.05）。（6）卵巢组织Bax、Bcl-2蛋白相对表达量:与正常组比较,模型组Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达水平上升（P<0.01）;与模型组比较,二陈汤组及二甲双胍组Bcl-2表达水平上升,Bax蛋白表达水平下降（P<0.05）。（7）卵巢组织Cyt-C、Procaspase-9、Cleavedcaspase-9蛋白相对表达量:与正常组比较,模型组线粒体Cyt-C表达水平下降,胞质Cyt-C、Procaspase-9蛋白表达水平上升（P<0.05）,Cleavedcaspase-9蛋白表达水平呈上升趋势,差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,二陈汤组及二甲双胍组胞质Cyt-C、Procaspase-9蛋白表达水平下降（P<0.05）,粒体Cyt-C表达水平有上升趋势,差异无统计学意义（P>0.05）,Cleavedcaspase-9蛋白表达水平呈下降趋势,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.通过化痰可以改善PCOS大鼠的卵巢形态结构以及调节性激素水平。2.化痰治疗PCOS所产生的效应可能是通过促进卵巢组织Bcl-2的表达,下调Bax、胞质内Cyt-C、Caspase-9的表达实现的。3.卵巢颗粒细胞中线粒体介导的细胞凋亡途径发生异常,导致细胞凋亡增加可能是PCOS痰证的生物学基础之一。
王维斌[5]（2020）在《基于PI3k/Akt信号通路的多囊卵巢综合征痰证的生物学基础研究》文中进行了进一步梳理目的:本研究采用脱氢表雄酮（DHEA）诱导多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型,通过观察二陈汤化痰治疗对PCOS大鼠PI3K/AKT信号通路和胰岛素抵抗的影响,并结合PI3K/AKT信号通路阻滞剂的运用,从血清性激素水平、卵巢形态学变化、胰岛素抵抗、PI3K/AKT信号通路探讨痰证在PCOS发生的生物学基础,初步明确二陈汤化痰治疗PCOS的作用靶点。方法:21日龄SPF级SD雌性大鼠52只,采用随机数字表法分为2组,空白组（10只）,造模组（42只）。造模组大鼠于颈背部每日皮下注射脱氢表雄酮（DHEA,6mg/100g/d+0.2mL注射用大豆油剂,连续注射20d）,空白组每日同部位皮下注射0.2mL的注射用大豆油剂,连续20d。根据阴道脱落细胞、卵巢组织形态学、血清性激素水平及胰岛素抵抗情况观察大鼠是否成模。将成模大鼠随机分为模型组、二陈汤组(4.35g·kg-1·d-1)、二甲双胍组(0.3g·kg-1·d-1)、LY294002组（LY组）、二陈汤+LY294002组（二陈汤+LY组）,并以空白组作为对照,予相应剂量药物干预,模型组、空白组予等体积的灭菌饮用水,连续4周。采用酶联免疫吸附法（ELISA）,检测血清中促卵泡激素（FSH）、促黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、胰岛素（INS）的含量。计算大鼠HOMA胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）情况。苏木素-伊红（HE）染色并观察卵巢组织形态学。实时荧光定量PCR（q-PCR）和Western Blot法检测大鼠卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3β的mRNA及蛋白表达水平。结果:1.模型评价结果:造模结束后,与空白组比较,造模组大鼠体重显着升高（P<0.01）,阴道脱落细胞涂片提示造模组失去规律的动情周期。造模组大鼠血清T、E2、LH水平显着升高（P<0.01）,FSH两组间无明显差异（P>0.05）,INS和HOMA-IR显着增高（P<0.01）。造模组体视镜下可见卵巢表面色泽苍白,光镜下可见卵泡呈囊状性扩张,无卵母细胞,颗粒层减少至13层,排列稀疏,少见不同发育阶段的卵泡及黄体。证明PCOS伴IR（PCOR-IR）模型大鼠建立成功。2.用药后各项指标比较:（1）血清性激素水平比较:与空白组比较,模型组T、LH水平显着升高（P<0.01）,血清E2、FSH水平显着下降（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤组、二陈汤+LY组T水平显着下降（P<0.01或P<0.05）,E2、FSH水平显着升高（P<0.01）;二甲双胍组T、E2水平无明显差异（P>0.05）,FSH水平显着升高（P<0.01）,LH水平显着下降（P<0.01）;LY组T、E2、LH水平无明显差异（P>0.05）,FSH水平显着升高（P<0.01）。与二陈汤组比较,二甲双胍组T、FSH水平显着升高（P<0.01或P<0.05）,E2水平显着下降（P<0.01）,LH水平无明显差异（P>0.05）;LY组T、LH水平显着升高,E2水平显着下降（P<0.01）,FSH水平无明显差异（P>0.05）。（2）卵巢形态学比较:空白组大鼠卵巢组织外观色泽鲜红,镜下可见多个黄体及不同发育阶段的卵泡,颗粒细胞呈多层排列,多为89层,形态完整。模型组大鼠卵巢组织外观色泽苍白,镜下可见黄体及各级卵泡少见,颗粒细胞层数减少,多为13层,排列较疏松,可见大量囊状扩张卵泡,囊状卵泡内卵母细胞或放射冠消失。二陈汤组、二甲双胍组及二陈汤+LY组有所改善,LY组表现与模型组无明显差别。（3）胰岛素抵抗情况比较:各组大鼠FPG水平无明显差异（P>0.05）。与空白组比较,模型组大鼠血清INS、HOMA-IR水平显着升高（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤组、二甲双胍组INS、HOMA-IR水平显着下降（P<0.01）;LY组、二陈汤+LY组INS、HOMA-IR水平无明显差异（P>0.05）。与二陈汤组比较,LY组、二陈汤+LY组INS和HOMA-IR水平显着上升（P<0.01）。（4）PI3K、AKT、GSK-3βmRNA表达水平比较:与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3βmRNA表达水平显着下降（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤组、二甲双胍组大鼠卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3βmRNA表达水平显着升高（P<0.01）;LY组、二陈汤+LY组大鼠卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3βmRNA表达水平与模型组比较无明显差异（P>0.05）。与二陈汤组比较,LY组、二陈汤+LY组卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3βmRNA表达水平显着下降（P<0.01）。（5）PI3K、AKT、GSK-3β蛋白表达水平比较:与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织PI3K、AKT蛋白表达水平显着下降（P<0.01）,GSK-3β蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,二陈汤组、二甲双胍组大鼠卵巢组织PI3K、AKT蛋白表达水平显着升高（P<0.01）,二甲双胍组GSK-3β蛋白表达水平显着下降（P<0.01）,二陈汤组GSK-3β蛋白表达水平有下降趋势,无统计学意义（P>0.05）;LY组、二陈汤+LY组大鼠卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3β蛋白表达水平与模型组比较无明显差异。与二陈汤组比较,LY组、二陈汤+LY组卵巢组织PI3K、AKT水平显着下降（P<0.01或P<0.05）,二陈汤+LY组GSK-3β蛋白表达水平显着升高（P<0.01）,LY组GSK-3β蛋白表达水平有升高趋势,无统计学意义（P>0.05）。结论:1.化痰法能改善PCOS大鼠的性激素水平和卵巢形态学结构。2.化痰法通过调控PI3K、AKT、GSK-3βmRNA和蛋白的表达从而改善PCOS的IR情况。3.痰证通过PI3K/AKT信号通路影响PCOS大鼠IR的发生。
李艳[6]（2020）在《颗粒细胞miR-142、miR-33b和miR-423靶向调节TGFBR1和SMAD7参与PCOS发生机制的研究》文中研究指明目的多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）是一种在育龄妇女中常见的生殖内分泌疾病,其重要的临床特征之一是卵泡发育不良及排卵障碍,部分PCOS患者伴有胰岛素抵抗且未来发展成为2型糖尿病风险较高,因此PCOS严重影响了育龄妇女的生育及健康。PCOS的病因至今尚不明确。卵巢颗粒细胞（Granulosa cells,GCs）与PCOS患者异常的卵泡发育和多种病变有着紧密的关系,对卵泡的生长发育起着至关重要的作用。了解PCOS患者卵巢颗粒细胞功能异常的发病机制可能为识别新的诊断和治疗生物标志物提供线索。在卵巢组织和卵泡液中丰度较高的microRNA（miRNA）是一种特殊的单链小分子RNA,其过度表达或表达的下调通过调节基因的表达参与细胞增殖、分化和凋亡等重要生命活动,提示miRNA可能与PCOS的发生有关。对PCOS患者卵巢颗粒细胞中miRNAs的异常表达及miRNAs调节PCOS的发病的机制仍有待进一步研究。本研究拟通过对颗粒细胞中表达异常的miRNAs在颗粒细胞中生物学功能的研究,进一步阐明PCOS的发病机制,并为PCOS的诊断和治疗提供理论基础。方法1.PCOS颗粒细胞中异常表达miRNAs的检测及靶点预测验证从2015年11月至2018年2月在郑州大学第二附属医院生殖中心收集46名PCOS患者和32名健康女性的卵泡液,提取卵泡液中颗粒细胞。应用RT-qPCR检测颗粒细胞中 6 种候选 miRNAs（miR-33b,miR-34c,miR-106,miR-142,miR-193和miR-423）的表达差异。应用在线靶点预测软件预测PCOS组中异常表达miRNAs的作用靶点,然后构建靶基因报告质粒,并通过荧光素酶分析和蛋白免疫印迹进一步验证已预测靶点。我们通过ELISA检测PCOS患者和健康对照组颗粒细胞培养液中TGF-β1的表达,并利用RT-qPCR检测TGF-β1对颗粒细胞中miR-142、miR-33b和miR-423以及TGFBR1和SMAD7表达的影响。通过蛋白免疫印迹检测差异表达的miRNAs混合物对TGF-β信号通路相关蛋白（TGFBR1、SMAD2,SMAD3 和 SMAD7,CDKN1A 和 CDKN2B）表达的影响。最后,为了进一步了解PCOS患者的病理生理学,使用免疫印迹检测了 PCOS患者和健康对照的颗粒细胞中SMAD7和TGFBR1的蛋白质水平。2.颗粒细胞中miR-142、miR-33b和miR-423生物学功能的研究用 miR-142 mimics、miR-33b mimics 和 miR-423 inhibitor 混合物转染人原代颗粒细胞48h,再用TGF-β1处理48h,然后用MTT检测细胞活力、Annexin V-APC/PI双染法检测细胞凋亡、流式细胞术检测细胞周期。结果1.PCOS颗粒细胞中异常表达miRNAs的检测及靶点预测验证PCOS组患者的GCs中miR-142和miR-33b表达上调（p<0.05）,而miR-423表达下调（p<0.05）,其余三种miRNAs的表达在两组间没有显着差异。靶基因软件预测这三种miRNAs均和TGF-β信号通路相关,miR-142和miR-33b靶点是TGFBR1,miR-423靶点是SMAD7,并经双荧光素酶报告基因检测和蛋白免疫印迹验证。和健康对照相比,PCOS组GCs中TGF-β1的表达显着降低。TGF-β1能够显着降低miR-142和miR-33b的表达水平,升高miR-423的表达水平,且具有时间和剂量依赖性。另外,TGF-β1处理颗粒细胞后TGFBR1的表达水平显着升高,而SMAD7的表达水平显着降低。用miRNAs混合物处理的原代GCs中TGFBR1的水平降低,SMAD7水平升高。当用TGF-β1处理时,miRNAs混合物处理的细胞中p-SMAD2和p-SMAD3的水平较低。用miRNAs混合物处理的细胞中CDKN1A和CDKN2B mRNA的表达水平显着降低（p<0.01）,而c-Myc的表达水平显着升高（p<0.01）。与对照相比,PCOS患者的颗粒细胞中SMAD7蛋白水平升高,而TGFBR1蛋白水平降低。2.颗粒细胞中miR-142、miR-33b和miR-423生物学功能的研究miR-142 mimic,miR-33b mimic 和 miR-423 inhibitor 混合物组的相对细胞活力显着高于转染错配对照组（Scramble control）的细胞活力（p<0.01）;混合物组的细胞凋亡率显着低于转染错配对照组（p<0.05）;混合物组的G0/G1期细胞显着减少（p<0.05）,S期细胞显着增加（p<0.01）,而处于G2/M期细胞百分比在两组间无显着差异。结论1.PCOS颗粒细胞中异常表达miRNAs的检测及靶点预测验证与对照组相比PCOS患者的GCs中miR-142和miR-33b表达上调,而miR-423表达下调。三种miRNAs的靶点均涉及TGF-β信号通路:miR-142和miR-33b的靶点是TGFBR1;miR-423的靶点是SMAD7。PCOS患者颗粒细胞中TGF-β1表达显着降低,且TGF-β1对miR-142、miR-33b和miR-423具有负反馈调节的作用。miR-142 mimics、miR-33b mimics 和 miR-423 inhibitor 能够阻断颗粒细胞中TGF-β信号通路。PCOS患者颗粒细胞中SMAD7蛋白增加,TGFBR1蛋白减少。2.颗粒细胞中miR-142、miR-33b和miR-423生物学功能的研究miR-142 mimic,miR-33b mimic 和 miR-423 inhibitor 具有促进颗粒细胞增殖、抑制颗粒细胞凋亡的能力。全文结论:1.PCOS患者颗粒细胞中miR-142、miR-33b和miR-423表达异常。2.PCOS患者颗粒细胞异常表达的miRNAs通过靶向调节TGFBR1和SMAD7影响颗粒细胞增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能,可能参与PCOS的发生。
杨洁[7]（2019）在《miR-133b在多囊卵巢综合征发病中的作用》文中认为多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）主要特点是稀发排卵或无排卵、高雄激素血症及超声下卵巢呈多囊样改变。作为育龄妇女最常见的内分泌紊乱性疾病之一（发病率高达5%11%）,该疾病已严重影响到女性的生殖与健康,其发病机制现被认为与胰岛素抵抗、高胰岛素血症、高雄激素血症、免疫因子失衡、环境及心理因素改变等有关,但尚不明确。在卵泡发育成熟过程中,由于卵丘颗粒细胞起了重要作用,因此颗粒细胞在多囊卵巢综合征患者卵泡发育和成熟障碍过程中扮演了重要角色。而多囊卵巢综合征因卵泡发育障碍导致无排卵,是多囊卵巢综合征患者不孕的重要原因之一。目前发现miRNAs参与生殖调控的研究大多集中于卵巢癌细胞中,有关miRNAs参与卵巢细胞增殖、凋亡和激素分泌调控的报道非常有限。研究发现,多囊卵巢综合征患者血清中miR-133b表达下降,而本课题组此前研究也发现,miR-133b与卵泡发育密切相关。在此前期研究基础上,本课题进一步研究了miR-133b对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响,探讨miR-133b对多囊卵巢综合征发生发展的影响及作用机制,为干预多囊卵巢综合征提供新的靶点与思路。第一部分 miR-133b对人卵丘颗粒细胞增殖和凋亡的影响一、研究目的研究miR-133b对人卵丘颗粒细胞增殖、凋亡的影响,探索miR-133b对人卵丘颗粒细胞增殖、凋亡的作用机制。二、研究方法收集输卵管性不孕或男性因素导致不孕的女性患者的卵丘颗粒细胞,分为5组进行培养,分别为空白对照组及转染miR-133b类似物组、miR-133b类似物阴性对照组、miR-133b抑制剂组、miR-133b抑制剂阴性对照组,采用细胞增殖检测试剂盒检测人卵丘颗粒细胞增殖情况,分析miR-133b对人卵丘颗粒细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR法检测各组细胞TAGLN2、caspase-3 mRNA表达水平,免疫印迹法检测各组细胞TAGLN2、caspase-3前体及caspase-3剪切体蛋白表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况和细胞周期变化。三、实验结果1.人卵丘颗粒细胞培养第2天至第3天过程中,细胞增殖迅速,增殖幅度最高,随后增殖缓慢。从第4天开始,细胞开始退化死亡,至第8天,细胞完全退化死亡。在体外培养人卵丘颗粒细胞的第2天至第4天,与第2天相比,miR-133b的表达量升高（P<0.01）,caspase-3和TAGLN2的表达量降低（P<0.01）;人卵丘颗粒细胞体外培养第4天至第8天,与第4天相比,miR-133b的表达量降低（P<0.01）,而TAGLN2（P<0.01）和caspase-3（P<0.05）的表达量升高。2.CCK-8结果显示,与相应的阴性对照组相比,miR-133b mimic组人卵丘颗粒细胞增殖水平极显着性升高（P<0.01）。3.qRT-PCR和免疫印迹结果显示,与相应的阴性对照组相比,miR-133b mimic能显着下调人卵丘颗粒细胞TAGLN2（P<0.05）和cleaved caspase-3（P<0.01）的mRNA和蛋白表达水平;miR-133b inhibitor显着上调人卵丘颗粒细胞TAGLN2（P<0.05）和cleaved caspase-3（P<0.05）的mRNA和蛋白表达水平。4.流式细胞术结果显示,与相应的阴性对照组相比,miR-133b mimic组的颗粒细胞凋亡率显着性降低（P<0.01）;miR-133b mimic组G0/G1期细胞进入S和G2期的数量明显增多（P<0.01）。第二部分 miR-133b对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞增殖的影响一、研究目的研究miR-133b对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞增殖的影响,探讨miR-133b在多囊卵巢综合征发病机制中的作用。二、研究方法收集男性因素不孕和PCOS不孕症患者的卵泡液,分离提取其中的颗粒细胞,行体外培养后,进行如下研究:CCK-8法检测人卵丘颗粒细胞体外培养过程中的增殖情况;实时荧光定量PCR法检测颗粒细胞miR-133b、caspase-3 mRNA表达;免疫印迹检测miR-133b对人卵巢颗粒细胞株cleaved caspase-3表达的影响以及检测miR-133b对人颗粒细胞系TAGLN2表达的影响。三、研究结果1、卵丘颗粒细胞体外培养至第72小时细胞增殖达最高峰,直至培养第192小时细胞彻底凋亡（P<0.05）;2、荧光定量PCR法、免疫印迹法显示,多囊卵巢综合征患者、男性因素不孕的患者的miR-133b与caspase-3表达,呈相反趋势;miR-133b类似物下调人卵巢颗粒细胞株cleaved caspase-3的表达;miR-133b抑制剂上调人卵巢颗粒细胞株cleaved caspase-3的表达;miR-133b类似物显着下调人卵巢颗粒细胞株TAGLN2的表达,而miR-133b抑制剂则上调TAGLN2的表达。第三部分 miR-133b对于多囊卵巢综合征大鼠妊娠率的影响一、研究目的研究miR-133b对多囊卵巢综合征大鼠生育能力的影响,从而探讨miR-133b在多囊卵巢综合征发病中的相关机制。二、研究方法我们采用来曲唑构建多囊卵巢综合征大鼠动物模型。用miR-133b激动剂和miR-133b拮抗剂,分别对多囊卵巢综合征大鼠进行卵巢注射,观察在多囊卵巢综合征疾病状态下,干预前后外周血激素水平与卵巢组织的病理改变、靶基因TAGLN2表达水平;将正常对照组、多囊卵巢综合征大鼠模型组、PCOS大鼠组（miR-133b激动剂处理）、PCOS大鼠组（miR-133b拮抗剂处理）的雌性大鼠与雄鼠合笼后,记录每组大鼠的妊娠情况并且计算妊娠率。三、研究结果1、光学显微镜下观察可见多囊卵巢综合征模型组大鼠卵巢卵泡多呈囊性扩张,颗粒细胞层数减少以及卵巢正常结构破坏。miR-133b激动剂组大鼠卵巢内,可见不同发育时期的卵泡及黄体,多数卵泡为初级卵泡,颗粒细胞层排列整齐,卵巢结构趋于正常。miR-133b拮抗剂组大鼠卵巢内,卵泡多呈囊性扩张,颗粒细胞层数减少;2、与其他三组相比,多囊卵巢综合征模型组大鼠血清雄激素水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比,miR-133b激动剂组大鼠血清雄激素水平降低;与对照组相比,多囊卵巢综合征组大鼠血清黄体生成素水平、黄体生成素/卵泡刺激素水平显着升高;与模型组相比,miR-133b激动剂组黄体生成素水平、黄体生成素/卵泡刺激素水平降低;3、多囊卵巢综合征模型组大鼠中,TAGLN2水平表达增加;miR-133b激动剂注射组中,TAGLN2的表达水平降低;miR-133b拮抗剂注射组中,TAGLN2的表达水平恢复至对照组水平;4、四组大鼠妊娠率分别为:100%（对照组）、33.33%（PCOS组）、66.67%（miR-133b激动剂处理PCOS大鼠组）、33.33%（miR-133b拮抗剂处理的PCOS大鼠组）。全文结论1.miR-133b调节卵丘颗粒细胞中TAGLN2及caspase-3的表达水平,促进人卵丘颗粒细胞增殖;2.miR-133b可改善PCOS症状和提高妊娠率,其机制可能与靶向TAGLN2有关。
李俊波[8]（2018）在《PCOS的临床特征与证型的相关性及加减龙胆泻肝汤治疗PCOS的作用机制研究》文中研究表明背景:多囊卵巢综合征（Polycystic Ovary Syndrome,PCOS）常见于育龄期妇女,是一种常见的、以内分泌紊乱为表现的妇科疾病,其大致归属于中医学的“月经后期”、“闭经”、“崩漏”、“不孕”等病证范畴。PCOS不仅影响到了患者的生殖健康和生存质量,紊乱的内分泌状态及代谢环境使此类患者的远期并发症风险增加,现医学领域研究的热点。中医药在治疗本病的远期效果优于西医治疗,目前中医药治疗多囊卵巢综合征主要根据中医辨证与辨病两者相结合的方式分型论治,目前已取得了较好的疗效。加减龙胆泻肝汤为广州中医药大学第一附属医院的中医妇科专家张玉珍教授多年经验总结的临床良方,是治疗肝经郁火型多囊卵巢综合征的有效方剂。故本研究以加减龙胆泻肝汤治疗PCOS为基础,围绕激素水平、炎症水平的改变以及初步探讨信号通路分子机制,开展本次研究,有利于揭示中医药方剂和诊疗方法对治疗多囊卵巢综合征的价值优势,以及促进加减龙胆泻肝汤的现代药理作用和深层机制研究。目的:1.临床研究:从临床上收集PCOS患者的一般资料,分析PCOS患者中医证型分布情况、西医表型的分布规律及证型与表型之间的相关性,检测患者性激素水平、糖代谢指标和慢性炎性因子;并分析患者性激素水平、糖代谢指标和慢性炎性因子与PCOS中医证型、西医表型之间的关联性,初步明确该疾病分型异同的关键点、治疗的主要和次要参考指标、患者特异性分析等。为临床治疗PCOS方案、疾病的分型分析、病症起因与生理症状等提供依据,加深临床工作者对该疾病的认知程度,以期指导临床辨证用药。2.实验研究:通过poresky法复制PCOS模型大鼠,观察加减龙胆泻肝汤对PCOS模型大鼠的药效作用及其作用影响下的机理。通过研究明确加减龙胆泻肝汤治疗PCOS的效果,及其在证实炎症学说基础上的炎症水平下降,糖代谢异常的恢复和激素水平的调节作用,以及对相关炎症JAK2/STAT3信号通路的调控作用。本研究有利于促进龙胆泻肝汤在“肝经郁火型”疾病应用和开发经典名方剂的现代药物价值。方法:1.临床资料采集和分析方法:采集对象:本研究共纳入2组人群共计136例,其中PCOS组102例,对照组为34例身体健康月经规律的女性。病例观察:一般情况:姓名、联系方式、年龄、婚育史、月经史、孕产史、家族史等及患者就诊的情况。体格检查:身高、体重、腰围、臀围;计算BMI=体重（kg）/身高2（m2）和腰臀比（WHR）。结合舌脉,确定其中医证型。性激素水平:化学发光法检测血清中促卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）、睾酮（T）的水平,ELASA法检测血清Leptin、kisspeptin含量。血清生化测:自动生化仪测定空腹血糖（FPG）、放射免疫法测定空腹胰岛素（FINS）的水平。炎症因子水平:ELASA法检测血清IL-4、IL-6、IL-8、IL-10的测定。运用数理统计方法,对PCOS患者进行表型归类,辨证分析,观察PCOS的性激素水平、糖代谢及血清IL-4、IL-6、IL-8、IL-10,并进行相关性分析。2.采用胰岛素（INS）联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）法复制大鼠PCOS模型;实验设对照、模型、达英-35（0.21 g/kg）及龙胆泻肝汤高（29.6 g/kg）/低剂量组（7.4 g/kg）,连续灌胃给药14d;分析加减龙胆泻肝汤治疗的卵巢重量、体积大小及动物体重变化;比较各组LH、FSH、睾酮的性激素水平、空腹血糖、空腹胰岛素及IL-2、IL-4、IL-6、IL-10 炎症因子差异;WB 分析各组卵巢 JAK2、STAT3、p-STAT3和IL-6的表达量。结果:1.临床研究结果分析:（1）分布特点:本研究共纳入102例PCOS患者,表型分布规律:经典型31例（占30%）,高雄无排卵型12例（12%）,高雄有排卵型8例（占8%）,非高雄型有51例（占50%）。证型分布规律:肾虚型27例（占26.5%）,肝经郁火型38例（占37.3%）,痰湿阻滞型18例（占17.6%）,气滞血瘀型19例（占18.6%）。（2）性激素水平:各表型相比:经典型患者的LH、T水平值及LH/FSH比值最高,与非高雄型差异有统计学意义（P<0.05）,T水平由大到小依次为经典型>高雄有排型>高雄无排型>非高雄型,且经典型T水平与非高雄型、高雄无排型差异有统计学意义（P<0.05）。各证型相比:肝经郁火型的LH、T水平值及LH/FSH 比值最高,T水平由高到低依次为:肝经郁火型>脾虚痰湿型>气滞血瘀型>肾虚型,且肝经郁火型T水平与其余证型均有统计学差异（P<0.05）。（3）糖代谢特点:各表型相比:所有PCOS患者的空腹胰岛素均比正常组高（P<0.05）,其患者组间差异无统计意义（P>0.05）。所有PCOS患者的HOMA-IR均较正常组高（P<0.05）,但患者组间比无明显差异（P>0.05）。各证型相比:HOMA-IR高到低依次为:脾虚痰湿型>肝经郁火型>气滞血瘀型>肾虚型,且与肾虚型比较,脾虚痰湿型的HOMA-IR差异有统计学意义（P<0.05）。（4）血清Leptin、kisspeptin水平:各表型相比:PCOS患者血清Leptin、kisspeptin水平均高于正常组,非高雄型和对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,各证型比较:脾虚痰湿型的Leptin最大,均高于其余三个证型,Leptin高到低依次为:脾虚痰湿型>肝经郁火型>肾虚型>气滞血瘀型。（5）炎性因子IL-4、IL-6、IL-8、IL-10的特点:各表型相比:PCOS患者中的IL-6、IL-8炎症因子水平高于对照组女性,且差异均有统计学意义（P<0.05）。其中非高雄型患者IL-6水平最高。IL-4、IL-10水平低于对照组女性,其中非高雄型的PCOS患者的IL-4、IL-10水平差异有统计学意义（P<0.05）。各证型相比:IL-6水平高到低依次为:肝经郁火型>脾虚痰湿型>肾虚型>气滞血瘀型;IL-4高到低依次为:肝经郁火型>气滞血瘀型>肾虚型>脾虚痰湿型。2.实验研究结果:（1）PCOS大鼠模型评价:胰岛素（INS）联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）法复制大鼠PCOS模型的大鼠阴道脱落细胞涂片无动情周期改变提示无排卵并显示体重增加、HE病理切片提示卵巢多囊样改变、模型组血清睾酮（T）升高与正常对照组血清水平有显着差异（P<0.05）,提示造模成功且符合PCOS的诊断标准。（2）药物干预后各项指标:①体质量比较:加减龙胆泻肝汤药物干预14天后,对PCOS模型大鼠具有明显治疗效果,能降低模型动物体重、卵巢重量及卵巢体积大小（P<0.05）和改善卵巢组织病理形态。②性激素水平:模型组大鼠血清T、LH水平高于正常对照组,与模型组相比,加减龙胆泻肝汤治疗后显着降低PCOS大鼠血清促黄体生成素（LH）、睾酮（T）及胰岛素（INS）水平（P<0.05/P<0.01）。③炎性因子水平:模型组大鼠血清IL-2、IL-6水平高于正常对照组,IL-4、IL-10低于正常对照组,与模型组相比,加减龙胆泻肝汤治疗后升高抑炎因子IL-4、IL-10（P<0.05）和抑制促炎因子IL-2、IL-6水平（P<0.05）;WB分析卵巢组织,与正常对照组相比,模型组JAK2和STAT3蛋白表达均升高,加减龙胆泻肝汤各剂量组p-STAT3、IL-6蛋白表达均降低,证实加减龙胆泻肝汤可提高JAK2、STAT3和降低p-STAT3、IL-6的表达量。④血清Leptin、kisspeptin水平:模型组大鼠血清Leptin、kisspeptin水平均高于正常对照组,与模型组相比,加减龙胆泻肝汤各剂量组干预后Leptin、kisspeptin水平降低,高剂量组下降最明显,但和阳性药物组无统计学差异。结论:1.临床研究:①PCOS患者中50%的患者表现出高雄激素血症,其经典型患者的T水平偏高,西医表型中以非高雄型患者居多,其次是经典型患者。中医辨证中肝经郁火型和肾虚型患者常见,其次是痰湿阻滞型和气滞血瘀型。经典型PCOS患者中肝经郁火证的患者较多,非高雄型PCOS患者中肾虚证较多。②不同西医表型和中医证型的PCOS患者的血清炎性因子高于对照组,且促炎因子IL-6水平显着增高,IL-10水平低于对照组。提示了 PCOS患者是一种慢性炎症状态。PCOS患者性激素与其特征性临床表型有直接相关性,其中高T水平与肝经郁火证表型相关,高糖与脾虚痰湿型表型相关,高Leptin与脾虚痰湿证表型相关,而炎症因子则与中医各种表型均相关,它们可能在疾病的发病机制中发挥关键作用。2.实验研究:①胰岛素（INS）联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）法复制大鼠PCOS模型,其卵巢病理形态学改变及内分泌改变与临床PCOS患者相似,是理想的PCOS动物模型。②加减龙胆泻肝汤能降低PCOS模型大鼠的体重、卵巢重量及卵巢体积,显着降低PCOS大鼠血清LH、T及胰岛素水平,降低血清Leptin、kisspeptin水平。③加减龙胆泻肝汤治疗后升高抑炎因子IL-4、IL-10（P<0.05）和抑制促炎因子IL-2、IL-6水平,其机制可能与活化JAK2/STAT3通路参与的效应相关。
杨意[9]（2018）在《miRNA-320通过PI3K/AKT信号通路调控多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的实验研究》文中认为目的:在育龄期妇女群体中,多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）属于一种常见的内分泌紊乱综合征,多数患者随着病程的进展会出现高胰岛素血症和胰岛素抵抗。有研究发现miR-320参与脂肪组织中胰岛素敏感性的调节,过表达可降低胰岛素敏感性而导致IR的发生。由此可知miR-320表达异常和功能失调在PCOS患者IR的发生、发展中起着重要作用。此外研究证实PI3K/AKT信号通路在PCOS胰岛素抵抗中发挥十分重要的作用。因此本研究拟探讨miRNA-320通过PI3K/Akt信号通路调控多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用。方法:（1）采用来曲唑灌胃构建PCOS大鼠模型,同时设对照组,连续检测对照组模型组大鼠阴道涂片,根据检测结果判断大鼠处于何种动情周期,并分别绘制两组大鼠动情周期变化曲线图比较,采用HE染色检测和比较大鼠卵巢组织形态学特征,采用酶联免疫吸附法检测两组大鼠血清性激素（LH、FSH、T、E2）表达水平。（2）提取与培养大鼠卵巢颗粒细胞,将miR-320 mimic、miR-320 inhibitor分别转染卵巢颗粒细胞,同时设对照组,采用RT-PCR法检测和比较各组卵巢颗粒细胞转染后miR-320 mRNA表达水平,采用western blot法检测和比较各组卵巢颗粒细胞转染后PI3K/Akt信号通路蛋白（PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27）表达。（3）将24只Wistar大鼠根据数字表法随机分为三组,miR-320 mimic组、miR-320 inhibitor组和对照组,每组各8只,均PCOS造模,同时miR-320 mimic 组 Wistar 大鼠尾静脉注射 miR-320 mimic（浓度为 2mg/kg）,miR-320 inhibitor组Wistar大鼠尾静脉注射miR-320 inhibitor（浓度为2mg/kg）,对照组则注射同体积生理盐水溶液,共注射30d。采用HE染色检测和比较各组卵巢组织,采用放射免疫法检测和比较各组FINS、TG、FPG血清指标及HOMA-IR,采用western blot法检测和比较各组卵巢组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达水平。结果:（1）对照组大鼠动情周期变化具有明显的规律性特点,而模型组大鼠始终处于动情周期,无明显的规律性特点,通过光学显微镜观察,对照组大鼠卵巢组织切片中可见黄体和处于不同发育阶段的卵泡组织;模型组大鼠卵巢组织的解剖结构呈病理性改变,卵巢内囊状扩张卵泡明显增多,而黄体、处于发育阶段的卵泡组织数量则明显减少,模型组大鼠血清LH、FSH、T表达水平均明显高于对照组（P<0.05）,而血清E2表达水平明显低于对照组（P<0.05）。（2）miR-320 mimic组卵巢颗粒细胞miR-320 mRNA表达水平明显高于对照组（P<0.05）,而miR-320 inhibitor 组 miR-320 mRNA 表达水平明显低于对照组（P<0.05）,miR-320 mimic 组 PI3K/Akt 信号通路蛋白（PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27）表达水平明显低于对照组（P<0.05）,而miR-320 inhibitor组PI3K/Akt信号通路蛋白表达水平明显高于对照组（P<0.05）;（3）对照组可见较多处于早期发育的小卵泡及闭锁卵泡,囊状扩张表现较为显着,颗粒细胞层减少,甚至消失,黄体较少,卵巢呈典型多囊样改变;miR-320 mimic组小卵泡及闭锁卵泡较对照组明显增多,未见明显颗粒细胞层及黄体;miR-320 inhibitor组小卵泡及闭锁卵泡较对照组明显减少,可见明显颗粒细胞层及黄体,部分卵巢呈典型多囊样改变。各组TG、FPG血清指标表达水平比较无显着差异性（P>0.05）,miR-320 mimic组血清FINS表达水平及HOMA-IR明显高于对照组（P<0.05）,而miR-320 inhibitor组血清FINS表达水平及HOMA-IR明显低于对照组（P<0.05）。miR-320 mimic组卵巢组织PI3K/Akt信号通路蛋白（PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27）表达水平明显低于对照组（P<0.05）,而miR-320 inhibitor组卵巢组织PI3K/Akt信号通路蛋白表达水平明显高于对照组（P<0.05）。结论:来曲唑成功构建了 PCOS大鼠模型,将大鼠卵巢颗粒细胞原代培养,miR-320 mimic和miR-320 inhibitor分别转染大鼠卵巢颗粒细胞后可明显升高和抑制miR-320 mRNA的表达水平,miR-320过表达可明显降低卵巢颗粒细胞及PCOS大鼠卵巢组织中PI3K/Akt信号通路蛋白（PI3K、AKT、GLUT4、Foxo3a、P27）表达水平,使血清FINS及HOMA-IR的表达水平升高。即miR-320过表达可起到抑制PI3K/Akt信号通路的作用,最终导致PCOS大鼠IR加重。
吴雏燕[10]（2017）在《5α还原酶协同运动激活PCOS大鼠PI3K-AKT转导机制的研究》文中进行了进一步梳理第一部分PCOS大鼠骨骼肌中5α-R1基因蛋白的表达以及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平的研究目的通过丙酸睾酮和高脂饮食共同诱导多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型,并探讨PCOS大鼠骨骼肌中1型5α还原酶（5α-R1）蛋白表达以及PI3K、AKT蛋白磷酸化水平。方法35只21日龄Wistar大鼠随机分为PCOS运动组（n=35）以及对照组（n=10）。PCOS模型制作采用课题组前期成熟的模型制作方案,即每天一次皮下注射丙酸睾酮注射液,连续注射28天,同时配合以高脂饲料喂养,最后经阴道涂片（美兰染色）显示大鼠无动情周期变化、无排卵;血清激素检测显示高胰岛素、高雌激素和高睾酮血症,表明成功建立PCOS大鼠模型。对照组大鼠同期注射相应容积的注射用茶油（n=10）,同时采用常规饲料喂养。实验结束后随机取PCOS组以及对照组各5只测量大鼠体重、体长、计算Lee指数;口服葡萄糖耐量实验（OGTT）测定0、30min、60min、120min葡萄糖、取血采用Elisa法测定空腹胰岛素、睾酮浓度;卵巢病理切片运用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0进行形态学分析,采用Real-Time PCR测定PCOS组以及对照组骨骼肌中5α-R1以及PI3K、AKT基因表达,并采用Western blot法测定5α-R1蛋白表达以及PI3K、AKT蛋白磷酸化水平。结果PCOS大鼠表现出肥胖、雄激素水平升高、空腹胰岛素水平显着升高、HOMA-IR值（空腹血糖×空腹胰岛素/22.5）显着升高等典型PCOS的激素变化特征。卵巢形态呈现显着的颗粒层细胞减少,膜层增多,窦前卵泡大量聚集,闭锁卵泡增多等多囊卵巢特点。动情周期观察实验组大鼠始终处于动情间期。Real-Time PCR测定结果显示骨骼肌中5α-R1mRNA表达水平显着升高。Westernblot印迹检测蛋白测定结果同样显示实验组PCOS大鼠骨骼肌5α-R1蛋白表达显着高于对照组,而PI3K以及AKT蛋白磷酸化水平均显着低于对照组。结论连续28天丙酸睾酮注射联合高脂饲料喂养诱导的PCOS大鼠模型具有高胰岛素血症、性激素异常的内分泌特征和卵巢多囊改变的形态学特点,并且PCOS大鼠模型骨骼肌5α还原酶基因蛋白表达显着升高同时与对照组相比表现为PI3K/AKT信号通路的激活异常。第二部分5α-R1在运动激活PCOS大鼠骨骼肌PI3K/Akt信号通路中的作用机制目的通过建立多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型,采用运动和两种还原酶抑制剂非那雄胺（2型还原酶抑制剂,5α-R2I）和度他雄胺（1型和2型还原酶抑制剂,5α-RI）来对PCOS大鼠模型进行干预,并探讨5α-R1在运动激活PCOS大鼠骨骼肌PI3K/Akt信号通路中的作用。方法大鼠随机分为PCOS运动组（n=15）,PCOS非运动组（n=15）和对照组（n=5）,PCOS运动组（n=15）分为:单纯运动组（n=5）、5α-RI运动组（度他雄胺运动组）（n=5）和5α-R2I运动组（非那雄胺运动组）（n=5）;PCOS非运动组（n=15）分为:静止组（n=5）、5α-RI组（度他雄胺组）（n=5）和5α-R2I组（非那雄胺组）（n=5）。运动组采用游泳训练方案。度他雄胺组（1mg/kg/day）每天灌胃,非那雄胺组（5mg/kg/day）每天开始光照后的第3小时灌胃。实验结束后测量大鼠体重、体长、卵巢重量、计算Lee指数;口服葡萄糖耐量实验（OGTT）测定0、30min、60min、120min葡萄糖、取血采用Elisa法测定空腹胰岛素、睾酮浓度;采用Real-Time PCR测定PCOS组以及对照组骨骼肌中5α-R1 mRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA,采用Western blot法测定5α-R1蛋白表达以及PI3K、AKT蛋白磷酸化水平。结果与PCOS静止各组相比,PCOS单纯运动组以及5α-R2I运动组胰岛素和HOMA-IR均显着降低。在PCOS单纯运动组和5α-R2I运动组,5α-R1mRNA以及蛋白表达降低。PCOS单纯运动组以及PCOS5α-R2I运动组骨骼肌中Akt磷酸化水平在运动后显着升高,与PI3K p85表达水平与之相一致。结论运动通过抑制1型5α还原酶增加了 PI3K p85表达水平以及Akt（Ser473）和Akt（Thr 308）磷酸化水平,促通了 PCOS大鼠骨骼肌PI3K/AKT信号通路。
二、Expression of Resistin mRNA in Adipose Tissue of Rat Model with Polycystic Ovarian Syndrome and Its Implication（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Expression of Resistin mRNA in Adipose Tissue of Rat Model with Polycystic Ovarian Syndrome and Its Implication（论文提纲范文）
（1）归术益坤方通过PI3K/AKT通路及LPS治疗多囊卵巢综合征大鼠的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 现代医学基于LPS、PI3K/AKT通路研究PCOS发病及治疗进展 |
| 1. PCOS与PI3K/AKT信号通路 |
| 2. LPS与PCOS |
| 3. 现代医学基于LPS、PI3K/AKT信号通路治疗PCOS进展 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 传统医学基于LPS、PI3K/AKT通路治疗PCOS相关研究进展 |
| 1. 中医药研究PCOS病因病机概述 |
| 2. 中医医家对于高雄激素血症的认识 |
| 3. 中医医家对于女性排卵障碍的认识 |
| 4. 中医医家对于胰岛素抵抗的认识 |
| 5. 中医药基于LPS及炎症因子对于PCOS治疗进展 |
| 6. 中医药基于PI3K/AKT信号通路于PCOS治疗进展 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究对象与研究方法 |
| 1. 课题来源 |
| 2. 技术路线 |
| 3. 实验材料 |
| 4. 实验方法 |
| 5. 统计学方法 |
| 研究结果 |
| 1. 造模前后,空白组与PCOS组(模型组+中药组)大鼠比较 |
| 2. 归术益坤方药效相关指标比较 |
| 3. 与PCOS发病机制及归术益坤方作用机制相关基因、蛋白表达结果 |
| 4. 粪菌移植对照组和粪菌移植模型组大鼠移植前后结果比较 |
| 讨论 |
| 1. PCOS大鼠模型的建立 |
| 2. 粪菌移植实验评价 |
| 3. 本研究中呈现出的PCOS发病机制 |
| 4. 归术益坤方立法方药及作用机制 |
| 5. 结论 |
| 6. 不足与展望 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（2）Apelin在多囊卵巢综合征患者中表达及作用分子机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 一、PCOS的排卵障碍和卵泡发育异常 |
| 二、PCOS胰岛素抵抗 |
| 三、Apelin与PCOS、卵泡发育的研究概况 |
| 四、miR-424及其家族 |
| 五、论文内容概述 |
| 第二章 血清Apelin在多囊卵巢综合征患者中的特点 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验标本 |
| 2.3 实验所需仪器及材料 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 研究对象 |
| 2.4.2 实验分组 |
| 2.4.3 纳入标准 |
| 2.4.4 排除标准 |
| 2.4.5 剔除标准 |
| 2.4.6 标本采集与检测 |
| 2.4.7 样本含量估计 |
| 2.4.8 实施方案 |
| 2.4.9 观察指标 |
| 2.4.10 ELISA检测Apelin |
| 2.4.11 技术路线图 |
| 2.4.12 统计分析 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 二组患者一般情况的比较 |
| 2.5.2 二组患者Apelin水平及HOMA-IR比较 |
| 2.5.3 血清Apelin与各因素的相关性分析 |
| 2.6 讨论 |
| 第三章 miR-424靶向调节Apelin和APJ表达调控人卵巢颗粒细胞瘤KGN的增殖与凋亡 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验标本 |
| 3.3 实验所需仪器及试剂 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 收集卵巢颗粒细胞和卵泡液进行检测 |
| 3.4.2 人卵巢颗粒细胞瘤KGN细胞培养及检测 |
| 3.4.3 ELISA检测Apelin水平 |
| 3.4.4 细胞转染 |
| 3.4.5 qRT-PCR测定 |
| 3.4.6 Western blot实验 |
| 3.4.7 双荧光素酶实验 |
| 3.4.8 流式细胞术检测细胞周期 |
| 3.4.9 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 3.4.10 MTS检测细胞增殖 |
| 3.4.11 观察指标 |
| 3.4.12 统计分析 |
| 3.5 结果 |
| 3.5.1 Apelin和miR-424在PCOS患者中的差异表达 |
| 3.5.2 KGN细胞中APJ的表达 |
| 3.5.3 KGN细胞培养上清中Apelin的表达 |
| 3.5.4 KGN细胞中miR-424,miR-503和miR-199b的表达 |
| 3.5.5 miR-424抑制KGN细胞中的Apelin和APJ表达及miRNA筛选 |
| 3.5.6 Apelin和APJ基因的3'-UTR区域与miR-424直接关联 |
| 3.5.7 miR-424通过抑制APJ下游周期蛋白D/E,抑制KGN细胞周期和增殖 |
| 3.5.8 miR-424通过活化Caspase-3促进KGN细胞凋亡 |
| 3.5.9 miR-424通过抑制Apelin表达来抑制KGN细胞增殖,促进凋亡 |
| 3.6 讨论 |
| 总结与展望 |
| 总结 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 Apdin与多囊卵巢综合征患者相关的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录缩略语索引 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（3）基于IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路探讨肌醇治疗PCOS-IR的机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分:FFA、IL-6和miR-155在PCOS-IR大鼠模型中的表达变化 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料及方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 2.1 构建多囊卵巢综合征胰岛素抵抗大鼠模型 |
| 2.2 样品采集和生化测量 |
| 2.3 HE染色 |
| 2.4 性激素和胰岛素检测 |
| 2.5 胞外囊泡提取及电镜检测 |
| 2.6 实时荧光定量PCR分析 |
| 2.7 免疫荧光检测 |
| 2.8 蛋白质印迹分析 |
| 2.9 统计学方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 大鼠进食、体重变化及卵巢HE染色结果 |
| 3.2 大鼠性激素检测结果及胰岛素抵抗指数 |
| 3.3 大鼠血中IL-6及脂代谢指标的检测结果 |
| 3.4 胞外囊泡及胞外囊泡中miR-155和miR-21的表达 |
| 3.5 大鼠卵巢组织中PPAR-γmRNA、GLUT4 mRNA的表达 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第二部分:肌醇降低多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的作用与IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路变化有关 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 2.1 分组和干预 |
| 2.2 大鼠阴道脱落细胞学检测 |
| 2.3 HE染色 |
| 2.4 样品采集和生化测量 |
| 2.5 性激素、胰岛素检测 |
| 2.6 使用实时荧光定量PCR进行RNA分析 |
| 2.7 免疫组织化学测定 |
| 2.8 免疫荧光测定 |
| 2.9 蛋白质印迹分析 |
| 2.10 电子显微镜检查 |
| 2.11 统计学方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 补充肌醇对大鼠食物摄入,体重和发情周期的影响 |
| 3.2 补充肌醇对PCOS-IR大鼠模型血清FSH,LH,E2和T以及HOMA-IR指数的影响 |
| 3.3 补充肌醇对PCOS-IR模型大鼠的卵巢结构和血清胆固醇,甘油三酯、IL-6和VEGF的影响 |
| 3.4 根据免疫组织化学检测评估,补充肌醇对PCOS-IR大鼠卵巢IL-6,STAT-3和p-STAT-3表达的影响 |
| 3.5 RT-PCR评估补充肌醇对PCOS-IR大鼠卵巢中miR-155,miR-21,IL-6 mRNA和PPAR-γmRNA表达的影响 |
| 3.6 补充肌醇对PCOS大鼠卵巢IL-6,p-STAT-3和PPAR-γ表达的影响 |
| 3.7 免疫荧光检测卵巢组织的LC-3的表达 |
| 3.8 卵巢自噬的检测结果 |
| 3.9 卵巢血管检测结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第三部分:肌醇改善PCOS大鼠脂肪组织及肝脏胰岛素抵抗的研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料和方法 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 2.1 分组和干预 |
| 2.2 样品采集和生化测量 |
| 2.3 HE染色 |
| 2.4 RT-PCR进行RNA分析 |
| 2.5 胞外囊泡提取及电镜检测 |
| 2.6 蛋白质印迹分析 |
| 2.7 统计学方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 脂肪组织中IL-6、STAT-3、p-STAT-3和PPAR-γ的表达变化 |
| 3.2 大鼠脂肪组织中miR-155、miR-21表达以及大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)和游离脂肪酸(FFA)的检测结果 |
| 3.3 血清胞外囊泡中miR-155和miR-21的表达检测结果 |
| 3.4 肝脏组织HE染色及PPAR-γ和GLUT4的检测结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 第四部分 课题创新性、问题及展望 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附表 |
| 综述 多囊卵巢综合症胰岛素抵抗与自噬及异常血管生成的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 附 外文论文 |
| 外文论文1 Decreased insulin resistance by myo-inositol is associated with suppressed IL-6/p-STAT-3 signaling in a rat polycystic ovary syndrome model |
| 外文论文2 The Effect of Myo-inositol Supplementation on Insulin Resistance, Ovarian Autophagy and Abnormal Angiogenesis in a Rat Polycystic Ovary Syndrome Model |
（4）从线粒体介导的细胞凋亡途径探讨多囊卵巢综合征痰证的生物学基础（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 药品制备 |
| 1.6 试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 多囊卵巢综合征模型的复制 |
| 2.3 动物分组及干预 |
| 2.4 标本采集及处理 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.6 数据统计学处理 |
| 结果 |
| 1 多囊卵巢综合征模型评价 |
| 1.1 两组大鼠体质量比较 |
| 1.2 两组大鼠阴道脱落细胞涂片观察 |
| 1.3 两组大鼠血清性激素水平比较 |
| 1.4 两组大鼠卵巢外观观察 |
| 1.5 两组大鼠卵巢组织形态学观察 |
| 2 二陈汤化痰治疗后的实验结果 |
| 2.1 各组大鼠体质量比较 |
| 2.2 各组大鼠卵巢指数比较 |
| 2.3 各组大鼠血清性激素水平比较 |
| 2.4 各组卵巢外观观察 |
| 2.5 各组大鼠卵巢组织形态学比较 |
| 2.6 各组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡指数比较 |
| 2.7 各组大鼠卵巢组织Bcl-2/Bax、Cyt-C、Caspase-9 mRNA相对表达量比较 |
| 2.8 各组大鼠卵巢组织Bcl-2、Bax蛋白相对表达量比较 |
| 2.9 各组大鼠卵巢组织线粒体及胞质Cyt-C、Procaspase-9、Cleavedcaspase-9 蛋白相对表达量比较 |
| 讨论 |
| 1 中医对多囊卵巢综合征的认识 |
| 2 现代医学对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞凋亡的认识 |
| 2.1 多囊卵巢综合征与卵巢颗粒细胞凋亡 |
| 2.2 线粒体介导的细胞凋亡途径 |
| 3 化痰法治疗多囊卵巢综合征的研究 |
| 4 多囊卵巢综合征痰证的生物学基础 |
| 4.1 模型评价 |
| 4.2 化痰对多囊卵巢综合征大鼠体质量与卵巢指数的影响 |
| 4.3 化痰对多囊卵巢综合征大鼠血清性激素的影响 |
| 4.4 化痰对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织形态结构的影响 |
| 4.5 化痰对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织颗粒细胞凋亡指数的影响 |
| 4.6 化痰对线粒体介导的细胞凋亡途径相关基因表达的影响 |
| 5 小结 |
| 创新与不足 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（5）基于PI3k/Akt信号通路的多囊卵巢综合征痰证的生物学基础研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 药品制备 |
| 1.6 试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 多囊卵巢综合征模型 |
| 2.2 多囊卵巢综合征模型评价 |
| 2.3 动物分组及干预方法 |
| 2.4 标本采集及处理 |
| 2.5 指标观察及检测 |
| 2.6 采用实时荧光定量PCR检测卵巢组织相关基因mRNA表达水平 |
| 2.7 Western Blot法检测PI3K、AKT、GSK-3β蛋白相对表达量 |
| 2.8 数据统计学处理 |
| 结果 |
| 1 多囊卵巢综合征模型建立相关指标观察 |
| 1.1 造模后两组大鼠体质量比较 |
| 1.2 大鼠动情周期变化情况 |
| 1.3 大鼠血清激素水平比较 |
| 1.4 大鼠胰岛素抵抗情况比较 |
| 1.5 体视镜下大鼠卵巢外观比较 |
| 1.6 两组大鼠卵巢组织苏木素-伊红染色情况比较 |
| 2 用药干预后各组大鼠指标变化 |
| 2.1 各组大鼠体质量比较 |
| 2.2 各组大鼠性激素水平比较 |
| 2.3 各组大鼠胰岛素抵抗情况比较 |
| 2.4 各组大鼠卵巢外观变化比较 |
| 2.5 各组大鼠卵巢组织苏木素-伊红染色情况比较 |
| 2.6 各组大鼠卵巢组织PI3K、AKT、GSK-3βmRNA相对表达水平比较 |
| 2.7 各组大鼠卵巢组织的PI3K、AKT、GSK-3β蛋白相对表达水平 |
| 讨论 |
| 1 多囊卵巢综合征动物模型的建立与评价 |
| 1.1 造模方法的选择 |
| 1.2 多囊卵巢综合征大鼠模型评价 |
| 2 化痰治疗多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗的机理研究和探讨 |
| 2.1 中医对多囊卵巢综合征痰证的认识 |
| 2.2 化痰对多囊卵巢综合征大鼠体质量的影响 |
| 2.3 化痰对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平的影响 |
| 2.4 化痰对多囊卵巢综合征大鼠卵巢形态学的影响 |
| 2.5 化痰对多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗和PI3K/AKT信号通路的影响 |
| 3 小结 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）颗粒细胞miR-142、miR-33b和miR-423靶向调节TGFBR1和SMAD7参与PCOS发生机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表(ABBREVIATION) |
| 引言 |
| 第一部分 PCOS颗粒细胞中异常表达MIRNAS的检测及靶点预测验证 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 第二部分 颗粒细胞中MIR-142、MIR-33B和MIR-423生物学功能的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 全文总结 |
| 本文创新点 |
| 不足之处与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 多囊卵巢综合征相关MIRNAS的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（7）miR-133b在多囊卵巢综合征发病中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略语词汇表 |
| 前言 |
| 第一部分 miR-133b对人卵丘颗粒细胞增殖和凋亡的影响 |
| 第1章 研究背景 |
| 第2章 技术路线 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 人卵丘颗粒细胞体外培养 |
| 4.2 人卵丘颗粒细胞微小RNA-133b、TAGLN2、caspase3剪切体的表达 |
| 4.3 miR-133b对人卵丘颗粒细胞中TAGLN2的影响 |
| 4.4 miR-133b对人卵丘颗粒细胞增殖的影响 |
| 4.5 miR-133b对人卵丘颗粒细胞凋亡和周期的影响 |
| 4.6 miR-133b对TAGLN2表达的影响 |
| 第5章 小结 |
| 第二部分 miR-133b对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞增殖的影响 |
| 第1章 研究背景 |
| 第2章 技术路线 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 人卵丘颗粒细胞增殖分析 |
| 4.2 人卵丘颗粒细胞中miRNA-133b和 caspase-3 的表达情况 |
| 4.3 miR-133b对人卵巢颗粒细胞株凋亡的影响 |
| 4.4 miR-133b对人卵巢颗粒细胞株TAGLN2 表达的影响 |
| 第5章 小结 |
| 第三部分 miR-133b对于PCOS大鼠妊娠率的影响 |
| 第1章 研究背景 |
| 第2章 技术路线 |
| 第3章 材料与方法 |
| 3.1 主要仪器 |
| 3.2 主要实验试剂 |
| 3.3 实验分组及配液 |
| 3.4 实验方法 |
| 第4章 实验结果 |
| 4.1 大鼠动情周期的改变 |
| 4.2 大鼠卵巢组织外观形态及组织学改变 |
| 4.3 大鼠血清激素水平的改变 |
| 4.4 HE染色观察各组大鼠卵巢组织病理学改变 |
| 4.5 大鼠卵巢组织miR-133b及 TAGLN2 的表达水平 |
| 4.6 miR-133b对 PCOS大鼠妊娠率的影响 |
| 第5章 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 学术成果目录 |
| 致谢 |
（8）PCOS的临床特征与证型的相关性及加减龙胆泻肝汤治疗PCOS的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 多囊卵巢综合征(PCOS)研究概况 |
| 一、多囊卵巢综合征的流行病学特点 |
| 二、PCOS病因学研究 |
| 三、IL-6/JAK/STAT3信号通路 |
| 四、Leptin/JAK2/STAT3信号通路 |
| 五、Leptin与多囊卵巢综合征 |
| 六、多囊卵巢综合征的诊断及临床表型 |
| 七、现代医学对多囊卵巢综合征的治疗 |
| 八、多囊卵巢综合征的动物模型研究进展 |
| 第二节 祖国医学对多囊卵巢综合征的研究概况 |
| 一、中医典籍对多囊卵巢综合征病因病机的认识 |
| 二、中医对闭经病因病机的认识 |
| 三、现代中医医家对于PCOS的论述 |
| 第三节 加减龙胆泻肝汤及相关研究进展 |
| 一、加减龙胆泻肝汤的来源及主治病证 |
| 二、龙胆泻肝汤对于PCOS的治疗进展 |
| 三、加减龙胆泻肝汤及主要化学成分的机理研究 |
| 第四节 小结 |
| 第二章 临床资料研究 |
| 第一节 PCOS患者表型、证型及慢性炎性因子的临床研究 |
| 一、研究目的 |
| 二、研究对象与分析标准 |
| 三、临床资料采集与分析 |
| 四、主要试验仪器和试剂 |
| 五、数据统计 |
| 六、实验结果 |
| 七、小结 |
| 第三章 实验研究 |
| 第一节 加减龙胆泻肝汤对PCOS大鼠体重及卵巢组织形态学的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结 |
| 第二节 加减龙胆泻肝汤对PCOS大鼠性激素水平、代谢水平及慢性炎性因子的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结 |
| 第三节 加减龙胆泻肝汤对PCOS模型大鼠卵巢JAK2-STAT3信号通路及IL-6蛋白表达的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、小结 |
| 第四章 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（9）miRNA-320通过PI3K/AKT信号通路调控多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 第一部分: 多囊卵巢综合征大鼠模型的构建及病理生理相关特征观察 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分: miRNA-320对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt信号通路的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分: miRNA-320通过PI3K/Akt信号通路调控PCOS大鼠IR的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）5α还原酶协同运动激活PCOS大鼠PI3K-AKT转导机制的研究（论文提纲范文）
| 引言 |
| 第一部分 PCOS大鼠骨骼肌中5α-R1基因蛋白的表达以及PI3K/Akt蛋白磷酸化水平的研究 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 一. 前言 |
| 二. 材料和方法 |
| 三. 结果 |
| 3.1 PCOS组和对照组大鼠Lee指数、雄激素、胰岛素、血糖水平的变化 |
| 3.2 卵巢病理切片(HE染色) |
| 3.3 大鼠动情周期的观察 |
| 3.4 大鼠骨骼肌5α-RlmRNA及其蛋白表达 |
| 3.5 PI3Kp85基因蛋白表达水平以及Akt(Ser473)、Akt(Thr308)磷酸化水平 |
| 四. 讨论 |
| 五. 结论 |
| 第二部分 5α-R1在运动激活PCOS大鼠骨骼肌PI3K/Akt信号通路中的作用机制 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 一. 前言 |
| 二. 材料和方法 |
| 三. 结果 |
| 3.1 运动联合还原酶抑制剂干预后PCOS大鼠和对照组胰岛素以及血糖水平的变化 |
| 3.2 运动以及两种还原酶抑制剂干预后PCOS组和对照组骨骼肌中5α-RlmRNA及其蛋白表达变化 |
| 3.3 运动以及还原酶抑制剂干预后PCOS组和对照组骨骼肌中PI3KmRNA、AktmRNA及其相应蛋白磷酸化水平变化 |
| 3.4 5α-R1蛋白表达与PI3Kp85蛋白表达以及AKT磷酸化水平之间的相关分析 |
| 四. 讨论 |
| 五. 结论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附件 |
| 致谢 |
四、Expression of Resistin mRNA in Adipose Tissue of Rat Model with Polycystic Ovarian Syndrome and Its Implication（论文参考文献）
- [1]归术益坤方通过PI3K/AKT通路及LPS治疗多囊卵巢综合征大鼠的实验研究[D]. 林青. 北京中医药大学, 2021(08)
- [2]Apelin在多囊卵巢综合征患者中表达及作用分子机制的研究[D]. 杜静. 南方医科大学, 2020(06)
- [3]基于IL-6/STAT-3/miR-155/PPAR-γ通路探讨肌醇治疗PCOS-IR的机制[D]. 张宇龙. 山东大学, 2020(01)
- [4]从线粒体介导的细胞凋亡途径探讨多囊卵巢综合征痰证的生物学基础[D]. 张萍. 福建中医药大学, 2020(08)
- [5]基于PI3k/Akt信号通路的多囊卵巢综合征痰证的生物学基础研究[D]. 王维斌. 福建中医药大学, 2020(08)
- [6]颗粒细胞miR-142、miR-33b和miR-423靶向调节TGFBR1和SMAD7参与PCOS发生机制的研究[D]. 李艳. 郑州大学, 2020(02)
- [7]miR-133b在多囊卵巢综合征发病中的作用[D]. 杨洁. 南华大学, 2019(01)
- [8]PCOS的临床特征与证型的相关性及加减龙胆泻肝汤治疗PCOS的作用机制研究[D]. 李俊波. 广州中医药大学, 2018(01)
- [9]miRNA-320通过PI3K/AKT信号通路调控多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的实验研究[D]. 杨意. 武汉大学, 2018(06)
- [10]5α还原酶协同运动激活PCOS大鼠PI3K-AKT转导机制的研究[D]. 吴雏燕. 南京医科大学, 2017(05)