一、甜瓜蒂对5/6肾切除大鼠残留肾组织中转化生长因子βmRNA表达的影响（论文文献综述）
丁昕宇[1]（2020）在《糖肾方抗氧化损伤改善肾间质纤维化的机制研究》文中认为肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）以成纤维细胞和肌成纤维细胞（myofibroblast,MF）大量增生、细胞外基质（extracellular matrix,ECM）蓄积为主要特征。RIF是几乎所有慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）患者肾损害进行性加重,最终发展至终末期肾脏病（end-stage renal disease,ESRD）的共同病理基础。RIF的发病机制非常复杂,氧化应激反应是其中的重要因素之一。中医药在抗氧化、抗纤维化治疗方面具有很大潜力。糖肾方以益气养阴、活血通络、泄浊解毒为立法依据,组方包括黄芪、生地黄、山茱萸、三七、鬼箭羽、熟大黄、枳壳七味中药。前期研究证实,糖肾方在2型糖尿病模型db/db小鼠中具有明确的肾脏保护作用,减轻氧化应激是其可能的机制之一。在单侧肾切合并链脲佐菌素注射诱导的大鼠模型和单侧输尿管梗阻（Unilateral Ureteral Obstruction,UUO）的小鼠模型中,糖肾方均显示出良好的改善肾间质纤维化的作用。本研究利用UUO小鼠动物模型,探讨糖肾方通过下调NADPH氧化酶的表达,改善肾脏氧化损伤,从而发挥肾保护作用的机制。并通过体外实验验证糖肾方含药血清对过氧化氢（H2O2）诱导的人肾脏近曲小管上皮细胞株（HK-2）氧化损伤的保护作用。以期为糖肾方治疗肾间质纤维化的抗氧化机制提供实验依据。目的研究糖肾方通过降低NADPH氧化酶的表达,减轻肾脏的氧化应激水平,从而改善肾间质纤维化的机制。方法1.糖肾方对UUO小鼠肾脏保护作用及机制研究采用7周龄的雄性C57BL/6N小鼠56只,随机分为假手术组（仅将左侧输尿管游离,不结扎,不切断）8只、模型组（UUO组）16只、糖肾方组（UUO+糖肾方治疗）16只、福辛普利组（UUO+福辛普利治疗）16只。适应性喂养3天,预给药5天。糖肾方组给予糖肾方3.6g/kg/d,福辛普利组给予福辛普利1.5mg/kg/d,假手术组和模型组给予相同体积的生理盐水。5天后进行左侧输尿管梗阻手术。术后继续灌胃给药7天或14天。模型组、糖肾方组、福辛普利组小鼠分别在术后7天、14天分两次取材,假手术组小鼠全部在术后14天处死。采集血清检测血肌酐（serum creatinine,Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。摘取梗阻侧肾脏,TBA法检测肾组织匀浆中MDA含量,WST-1法检测SOD活性。制作肾脏石蜡切片,HE染色观察细胞浸润情况,MASSON染色及半定量分析观察肾间质纤维化程度,天狼星红染色观察肾脏胶原纤维增生的类型。应用免疫组化方法检测肾组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1（transforming growthfactor β1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine,3-NT）的蛋白表达情况,应用 Western blotting方法检测肾组织中NADPH氧化酶亚基、Nrf2通路的蛋白表达情况,应用quantitative real-time PCR的方法检测肾组织中TGF-β1、CTGF、NADPH氧化酶亚基、Nrf2通路的基因表达。2.糖肾方含药血清对HK-2细胞氧化损伤的干预作用研究采用雄性SD大鼠（体重200±10g）,随机分为空白组和糖肾方组,每组10只。糖肾方组给予糖肾方2.4g/kg/d,空白组给予相同体积生理盐水,连续灌胃给药7天。第7天早晨空腹,给药2h后,麻醉,采血,冷冻离心取上清,合并同组血清,56℃、30min灭活,-20℃保存。对体外培养的HK-2细胞系,用不同浓度的H2O2分别造成氧化损伤细胞模型,用CCK8法检测细胞存活率,从而筛选出制备HK-2细胞氧化损伤模型所需要的H2O2浓度和时间。然后进一步应用CCK8法检测不同浓度含药血清对H2O2诱导HK-2细胞存活率的影响,筛选出恢复受损细胞增殖作用最强的含药血清浓度。将HK-2细胞分为对照组（培养基+空白血清）、模型组（培养基+H2O2+空白血清）、糖肾方组（培养基+H2O2+含药血清）。采用TBA法检测各组细胞培养上清液MDA含量,WST-1法检测SOD活性,quantitative real-time PCR的方法检测细胞内TGF-β1的基因表达。结果1.糖肾方可以改善UUO小鼠的肾组织损伤,机制与抗氧化应激有关。（1）肾保护作用:HE染色提示,糖肾方可以明显减轻UUO小鼠肾小管上皮细胞的变性、坏死,减少肾间质炎性细胞浸润。Masson染色提示,糖肾方可以减少肾间质胶原纤维的增生;半定量分析结果也提示,无论造模第7天还是14天,糖肾方均可以显着降低胶原纤维面积百分比,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.001）。免疫组化结果显示,造模7天时,糖肾方可以显着降低I型胶原的表达,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.001）;造模14天时,糖肾方可以显着降低I型、III型胶原的表达,统计学分析结果均为P<0.001。免疫组化和quantitative real-time PCR的结果显示,造模7天时,糖肾方可以显着降低TGF-β1的蛋白质和mRNA相对表达量,统计学结果分别为P<0.05、P<0.001,显着降低CTGF的mRNA相对表达量,统计学分析结果为P<0.001;造模14天时,糖肾方同样可以显着降低TGF-β1的蛋白质和mRNA相对表达量,统计学结果分别为P<0.01、P<0.001,显着降低CTGF的蛋白质和mRNA相对表达量,统计学结果分别为P<0.05、P<0.001。从肾功能来看,造模14天时,糖肾方可以显着降低UUO小鼠的Scr水平,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.01）,但对BUN没有明显影响。（2）抗氧化应激机制:无论造模7天还是14天,UUO小鼠的肾组织和血清MDA含量均显着升高,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.001）,肾组织和血清SOD活性均显着降低,统计学分析结果分别是P<0.001、P<0.05。造模7天时,糖肾方可以显着降低肾组织和血清MDA含量,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.001）,并显着升高肾组织和血清SOD活性,统计学分析结果分别是P<0.001、P<0.05;造模14天时,糖肾方可以显着降低肾组织和血清MDA含量,统计学结果均为P<0.001,显着升高肾组织SOD活性,统计学结果为P<0.001。免疫组化结果显示,造模14天时,糖肾方可显着降低3-NT的蛋白质相对表达量,统计学结果是P<0.01。对于NADPH氧化酶亚基的影响,通过Western blotting和quantitative real-time PCR的结果提示,无论造模7天和14天,与模型组比较,糖肾方干预均能显着降低Nox4的蛋白质（统计学结果分别是P<0.001、P<0.01）和mRNA（统计学结果均为P<0.001）的相对表达量,同样也能显着降低磷酸化p47phox的蛋白质和mRNA相对表达量,统计学结果均为P<0.001。对于Nrf2通路的影响,通过Western blotting和quantitative real-time PCR的结果提示,与模型组比较,无论造模7天和14天,糖肾方均能显着降低Nrf2的蛋白质和mRNA相对表达量,统计学分析两组均具有显着性差异（P<0.001）,同样也能显着降低NQO1的蛋白质（统计学分析结果分别是P<0.01、P<0.05）和mRNA（统计学结果为P<0.001）相对表达量。2.糖肾方含药血清可以减轻H2O2诱导HK-2细胞系的氧化损伤。（1）筛选200 μmol/L浓度的H2O2作用48h,制备HK-2细胞系氧化损伤模型。并筛选恢复受损细胞增殖作用最强的糖肾方含药血清浓度为10%含药血清。（2）H2O2诱导HK-2细胞培养上清液的MDA含量显着升高,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.01）,SOD活性显着下降,统计学分析两组具有显着性差异（P<0.01）;10%含药血清干预可以显着降低MDA含量,统计学分析结果为P<0.01,显着升高SOD活性,统计学结果是P<0.01。quantitative real-time PCR结果提示,与模型组比较,10%含药血清干预可以显着降低TGF-β1的mRNA相对表达量,统计学结果为P<0.01。结论1.糖肾方可以改善UUO小鼠肾组织病理损伤,降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达。糖肾方改善肾间质纤维化的作用可能与其下调NADPH氧化酶的表达,从而显着降低UUO小鼠血清和肾组织的氧化应激水平有关。2.糖肾方含药血清可以降低H2O2诱导HK-2细胞氧化损伤模型的氧化应激水平,下调TGF-β1的基因表达。
林祥发[2]（2019）在《桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠肾组织中Axin调控机制的研究》文中提出目的:通过观察桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠血常规、肾功能、肾脏病理学形态、Wnt/β-catenin信号通路中的Axin影响,探讨该方延缓慢性肾衰竭的作用机理,从而为临床上治疗慢性肾衰竭提供思路和客观的实验依据。方法:采用5/6肾切除大鼠慢性肾衰动物模型作为研究对象,将125只7周龄成年雄性Wistar大鼠喂养1周后,随机分为空白组、假手术组、模型组、尿毒清组、桃核承气汤组。其中模型组、尿毒清组、桃核承气汤这三组大鼠运用5/6肾切除法复制慢性肾衰竭的模型,在腹腔水合氯醛注射麻醉后,切除大鼠左肾2/3肾组织并在一周以后切除大鼠右侧肾脏;假手术组大鼠仅用镊子剥除两肾被膜。术后1-3天连续使用青霉素腹腔注射预防感染。这5组均在造模完成后,每天上午9点对每组大鼠分别给予不同药物:空白、假手术和模型这三组大鼠使用等量的生理盐水灌胃;尿毒清组大鼠运用尿毒清颗粒混悬液进行灌胃;桃核承气汤组用桃核承气汤饮片煎熬浓缩后进行灌胃,连续灌胃56天后麻醉后处死,其间使用采血针在腹主动脉取血用于大鼠红细胞、血红蛋白、血肌酐、尿素氮检测;并取左肾组织的一部分放置于冻存管中,进行Western Blot法检测左肾组织Wnt1、Axin、β-catenin的蛋白含量;实时荧光定量PCR检测Wnt1、Axin、β-catenin的mRNA表达情况;另一部分存放于多聚甲醛中,经HE染色后用光镜观察五组肾组织病理变化。结果:（1）桃核承气汤组与模型组对比,RBC、Hb的含量均有不同程度的升高（P<0.05）。（2）血清Scr、BUN较模型组和尿毒清组降低（P<0.05）,其结果具有统计学意义。（3）Western Blot结果显示,桃核承气汤组相比模型组,左肾组织Wnt1、β-catenin的蛋白表达下降（P<0.05）,Axin表达水平上调（P<0.05）。（4）实时荧光定量qPCR示桃核承气汤组相比模型组与尿毒清组,Wnt1、β-catenin表达下调（P<0.05）,Axin表达水平上调（P<0.05）。（5）肾组织HE染色显示:空白组与假手术组左肾组织结构正常;模型组左肾组织结构紊乱,肾小球固缩,基膜增厚、肾间质纤维增生,可见炎性细胞浸润;桃核承气汤较尿毒清组与模型组肾纤维化程度有明显改善。结论:（1）桃核承气汤通过运用化瘀泻浊的治法可以明显改善慢性肾衰竭大鼠贫血状态和肾功能,能减轻大鼠肾脏病理损伤。（2）桃核承气汤能通过抑制5/6肾切除大鼠模型中Wnt/β-catenin信号,下调Wnt1、β-catenin和上调Axin表达,减慢肾纤维化的发展,从而延缓慢性肾衰竭进程。
李玉婷[3]（2019）在《大黄不同炮制品抗肾脏纤维化疗效的比较研究》文中指出目的一直以来广大医家都热衷于用中药大黄治疗CRF,但大黄的炮制品种繁多,且各种炮制品在临床治疗CRF时都有应用,另外生大黄随着煎煮时间的变化其水煎剂的成分含量亦发生改变,而大黄的煎煮时间无明确规定,故本研究旨在利用细胞模型筛选出每种大黄炮制品的煎煮时间,再将筛选出的药物用于动物模型,并从抗氧化应激、抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路、抑制肾小管EMT和抑制炎症反应等方面比较大黄不同炮制品抗肾脏纤维化的疗效,以确定治疗CRF疗效最好的大黄炮制品及和该炮制品相应的煎煮时间,为大黄治疗CRF提供理论依据,并进一步指导临床用药。方法一、第一部分体外实验:1、将145只雄性SD大鼠采用随机数表法分为29组,每组5只,药物组用相应的大黄煎剂（每种大黄炮制品分别煎煮5、7、9、10、15、20、30min）灌胃6日,对照组用0.9%氯化钠液灌胃,水合氯醛腹腔麻醉后腹主动脉无菌取血,制备含药血清。用含药血清干预经TGF-β1诱导后异常增殖的HRMC 24h及48h,检测细胞增殖率,在每种大黄炮制品中选出细胞增殖率最低的煎煮时间点。2、用TGF-β1诱导HK-2使其发生EMT,免疫荧光检测TGF-β1诱导前后HK-2中α-SMA和E-Cadherin的表达,证明细胞纤维化模型成功。用含药血清干预经TGF-β1诱导的HK-2 24h,ELISA检测各组细胞中α-SMA和E-Cadherin的浓度,在每种大黄炮制品中选出抑制EMT效果最好的煎煮时间点。二、第二部分体内实验:1、在60只雄性SD大鼠采用随机数表法选取10只为对照组,剩下50只用腺嘌呤灌胃4周造成肾衰模型,再次采用随机数表法将造模的50只大鼠分为模型组、生大黄组、熟大黄组、酒大黄组和大黄炭组,每组10只。药物组用体外实验筛选出的药物煎剂进行灌胃（每种炮制品一个）,对照组用0.9%氯化钠液灌胃,治疗8周比较大鼠体重的变化,留取血清和肾组织,用试剂盒检测大鼠的SCr、BUN、UA,比较四种大黄炮制品改善肾脏纤维化大鼠肾功能的作用。2、试剂盒检测大鼠肾组织中T-SOD和MDA的浓度,Wertern Blot检测NOX4的表达,ELISA检测8-OHdG的浓度,比较四种大黄炮制品抗氧化应激的作用。3、Wertern Blot检测大鼠肾组织中TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测TGF-β1 mRNA、p38MAPK mRNA的表达,比较四种大黄炮制品抑制肾脏纤维化大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的作用。4、ELISA检测大鼠肾组织中TNF-α和IL-1β的浓度,比较四种大黄炮制品抑制肾脏纤维化大鼠TNF-α和IL-1β表达的作用。5、Western Blot检测大鼠肾组织中α-SMA、E-cadherin的表达,比较四种大黄炮制品抑制肾脏纤维化大鼠EMT的作用。6、通过免疫组化染色检测肾脏纤维化大鼠α-SMA、FN的表达,比较四种大黄炮制品抑制肾脏纤维化标志物生成的作用。7、通过光镜观察大鼠肾组织（PAS染色、Masson染色、HE染色）形态的改变（肾小球、肾小管、肾间质）,电镜观察超微结构的改变,比较四种大黄炮制品治疗CRF的疗效。结果一、第一部分体外实验:1、随着煎煮时间的延长,四种大黄炮制品不同煎煮时间的含药血清培养经TGF-β1诱导的HRMC 24h和48h的细胞增值率均呈先下降后上升的趋势,24h的细胞增殖率最低分别为71.4%（生大黄组10min）、63.3%（熟大黄组10min）、70.2%（酒大黄组9min）、90.2%（大黄炭组9min）。48h的细胞增殖率最低的分别为78.1%（生大黄组10min）、67.1%（熟大黄组10min）、76.7%（酒大黄组9min）、91.5%（大黄炭组9min）。2、随着煎煮时间的延长,四种大黄炮制品不同煎煮时间的含药血清培养经TGF-β1诱导的HK-2 24h后α-SMA的浓度均呈先下降后上升的趋势,每种炮制品中α-SMA的浓度最低的分别为52.086ng/ml（生大黄组10min）、44.596ng/ml（熟大黄组10min）、49.768ng/ml（酒大黄组9min）、58.470ng/ml（大黄炭组9min）。而E-cadherin的浓度则呈先上升后下降的趋势,每种炮制品中浓度最高的分别为1.017ng/ml（生大黄组10min）、1.325ng/ml（熟大黄组10min）、1.163ng/ml（酒大黄组9min）、0.787ng/ml（大黄炭组9min）。四种大黄炮制品组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。二、第二部分体内实验:1、模型组大鼠的SCr、BUN、UA都较对照组明显上升（P<0.01）,四种药物组的SCr、BUN、UA都较模型组分别有不同程度的下降（P<0.01）,其中以熟大黄组下降幅度最大,大黄炭组下降幅度最小,酒大黄组下降幅度大于生大黄组。四种药物组之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。2、模型组大鼠肾组织中NOX4的表达、MDA和8-OHdG的浓度均较对照组明显上升（P<0.01）,四种药物组中以熟大黄组上升幅度最大,大黄炭组上升幅度最小,酒大黄组上升幅度大于生大黄组,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。模型组大鼠肾组织中T-SOD的浓度较对照组明显下降（P<0.01）,四种药物组中以熟大黄组下降幅度最大,大黄炭组下降幅度最小,酒大黄组下降幅度大于生大黄组,组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。3、模型组大鼠肾组织中TGF-β1、p38、p-p38蛋白的表达较对照组明显上升（P<0.05）,四种药物组的TGF-β1的表达与模型组比较均有不同程度的下降（P<0.05）,以熟大黄组下降幅度最为明显,其次是酒大黄组、生大黄组,大黄炭组下降幅度最小。药物组组间比较,各组间TGF-β1表达的差异均具有显着性（P<0.01）,熟大黄组与其他三种药物组p38和p-p38蛋白表达的差异具有显着性（P<0.01）,酒大黄组与大黄炭组比较差异亦具有显着性（P<0.01）,而其与生大黄组比较无统计学差异。模型组大鼠肾组织中TGF-β1 mRNA和p38MAPK mRNA的表达较对照组明显上升（P<0.01）,四种药物组的TGF-β1 mRNA和p38MAPK mRNA的表达与模型组比较均有不同程度的下降（P<0.05）,以熟大黄组下降幅度最为明显,其次是酒大黄组、生大黄组,大黄炭组下降幅度最小。熟大黄组TGF-β1 mRNA、p38MAPK mRNA的表达与其他三种药物组比较差异均有显着性（P<0.01）,酒大黄组TGF-β1 mRNA的表达与其他三种药物组比较差异均有显着性（P<0.01）,酒大黄组p38MAPK mRNA的表达与熟大黄组、大黄炭组比较差异均具有显着性（P<0.01）,而与生大黄组比较无统计学意义。4、模型组大鼠肾组织中TNF-α、IL-1β的浓度均较对照组明显上升（P<0.01）,而四种药物组的TNF-α、IL-1β的浓度较模型组有不同程度的下降（P<0.01）。在四种药物组中,下降幅度由多到少的排列顺序为熟大黄组、生大黄组、酒大黄组、大黄炭组,熟大黄组与大黄炭组比较差异具有显着性（P<0.01）,与酒大黄组和生大黄组比较无统计学意义。5、模型组与对照组比较,大鼠肾组织中α-SMA的表达明显升高、E-cadherin的表达明显减少（P<0.01）。四种药物组分别与模型组比较,α-SMA的表达均有不同程度的下调、E-cadherin的表达均有不同程度的上调（P<0.01）。四种药物组抑制EMT的作用效果由强到弱分别为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组,组间比较有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。6、与对照组相比,模型组肾组织中满视野可见α-SMA的表达,FN的表达也明显增多,而四种药物组与模型组比较,α-SMA和FN的表达均有不同程度的下降,四种药物组α-SMA和FN的表达由强到弱依次为大黄炭组、生大黄组、酒大黄组和熟大黄组。7、光镜观察肾组织病理切片,模型组的肾小球系膜区基质增多,局部可见玻璃样变,个别肾小球已硬化废弃,肾小囊腔明显增大,大部分肾小管萎缩消失,亦有少部分肾小管代偿性扩张,肾小管上皮细胞空泡状变性,小动脉壁增厚有玻璃样变趋势,肾间质炎细胞浸润增多,纤维组织增生明显。四种药物组与模型组比较,肾小球、肾小管、肾间质的病理改变均有不同程度的改善,其中以熟大黄组的病理改变最为轻微,大黄炭组的病理改变最为严重,酒大黄组和生大黄组的病理改变介于熟大黄组和大黄炭组之间。电镜观察大鼠肾组织微观结构,模型组中可见GBM厚薄不均,局部增厚明显,部分轮廓不清晰,足突弥漫性融合,系膜基质重度增生,系膜区可见电子致密物沉积。四种药物组肾脏病理改变由轻到重依次为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组。结论一、第一部分体外实验:1、四种大黄炮制品均能抑制经TGF-β1诱导的HRMC的增殖,其中以熟大黄组的整体效果最为理想,大黄炭组的整体效果最差,酒大黄组的整体效果优于生大黄组。筛选出的大黄炮制品抑制经TGF-β1诱导的HRMC增殖的作用强度由强到弱依次为熟大黄煎煮10min组、酒大黄煎煮9min组、生大黄煎煮10min组、大黄炭煎煮9min组。2、四种大黄炮制品均能抑制经TGF-β1诱导的HK-2的EMT,其中以熟大黄组的整体效果最为理想,大黄炭组的整体效果最差,酒大黄组的整体效果优于生大黄组。筛选出的大黄炮制品抑制经TGF-β1诱导的HK-2 EMT的作用强度由强到弱依次为熟大黄煎煮10min组、酒大黄煎煮9min组、生大黄煎煮10min组、大黄炭煎煮9min组。二、第二部分体内实验:1、四种大黄炮制品均能有效改善肾脏纤维化大鼠的肾功能,其作用效果由强到弱分别为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组。2、四种大黄炮制品均有抗OS的作用,其作用效果由强到弱分别为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组。3、四种大黄炮制品均对TGF-β1/p38MAPK信号通路有抑制作用,其中熟大黄的抑制效果最好,大黄炭的抑制效果最差,酒大黄和生大黄的抑制效果介于熟大黄和大黄炭之间,且它们的抑制效果没有差别。4、四种大黄炮制品均能有效抑制肾脏纤维化大鼠TNF-α和IL-1β的分泌,而生大黄组、熟大黄组、酒大黄组在作用效果上无明显差异,但都强于大黄炭组。5、四种大黄炮制品均能有效抑制肾脏纤维化大鼠肾小管EMT,其作用效果由强到弱分别为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组。6、四种大黄炮制品均能有效抑制α-SMA和FN的表达,其作用效果由强到弱分别为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组。7、四种大黄炮制品均能有效改善肾脏纤维化大鼠的肾组织形态和超微结构,其作用效果由强到弱分别为熟大黄组、酒大黄组、生大黄组、大黄炭组。
王长江[4]（2019）在《培元固本健脑法对元气亏虚大鼠肾、脑的影响及机制研究》文中认为目的:参考中医古籍关于元气的论述,通过手术切除右肾作为元气亏虚模型,并以切除左肾作为对照组,使用培元固本健脑法进行干预,观察klotho（kl）蛋白及相关蛋白在肾和海马的表达和培元固本健脑法的干预效果,探讨元气亏虚对肾功能、记忆功能的影响,培元固本健脑法对肾和海马的干预作用及机制。方法:1.理论探讨:通过整理中医古籍文献和研究进展,分析中医学元气的作用,现代疾病与元气的关系,其他虚证动物模型对元气亏虚动物模型的借鉴意义,为元气亏虚动物模型的建立提供理论基础。2.实验研究:以空白组作为对照组,以单侧肾切除大鼠作为元气亏虚动物模型,使用培元固本健脑法进行干预,随机分为模型组、左肾组、固本健脑方高剂量组（固高组）、固本健脑方中剂量组（固中组）和固本健脑方低剂量组（固低组）。以kl蛋白为切入点,探索单侧肾切除作为元气亏虚动物模型的可行性;以左侧、右侧分别肾切除,探索命门与肾的关系;观察单侧肾切除肾功能、血常规;通过自发活动、Morris水迷宫,探讨元气亏虚动物模型的学习、记忆能力;使用ELISA方法检测kl蛋白、TNF-α、IL-6和8-OHDG的变化;使用Real-time PCR和western blot方法,检测肾脏、海马kl、NF-κB和MAPK1 mRNA和蛋白表达;观察元气亏虚大鼠肾脏和海马的病理改变。结果:1.（1）一般情况单侧肾切除大鼠普遍出现毛发枯黄、活动减少,部分出现躁动、大便稀溏、喘息;左肾切除与右肾切除两者之间一般情况没有明显差别。（2）各组不同时间点体重和处死后肾重的比较:术前各组体重比较,无明显差异（p>0.05）;术后1周,固高组低于固低组（p<0.05）;术后2周、4周、6周、8周体各组间体重没有明显改变（p>0.05）。8周处死后,肾重比较,模型组、左肾组、固高组、固中组和固低组均大于空白组（p<0.05）。（3）各组大鼠肾功能、血常规检测与模型组比较:尿素氮比较,各组之间没有明显差异（p>0.05）。血肌酐比较,模型组、左肾组、固低组高于空白组（p<0.05）;左肾组、固低组低于模型组（p<0.05）;固中组、固高组低于模型组、左肾组和固低组（p<0.05）。各组血WBC、RBC没有差异（p>0.05）;Hb比较,模型组、左肾组低于空白组（p<0.05）;固高组、固中组高于模型组、左肾组（p<0.05）。2.元气亏虚大鼠行为学研究及培元固本健脑法的干预作用:（1）自发活动检测结果:自发活动总路程比较,模型组、左肾组低于空白组（p<0.01）,固高组、固中组和固低组低于空白组（p<0.05）,固高组、固中组高于模型组和左肾组（p<0.05）;平均速度比较,模型组、左肾组低于空白组（p<0.01）,固高组、固中组和固低组低于空白组,高于模型组和左肾组（p<0.05）;休息时间比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）,固高组、固中组和固低组高于空白组,少于模型组和左肾组（p<0.05）;中央时间,模型组、左肾组少于空白组（p<0.01）,固高组、固中组和固低组少于空白组,多与模型组和左肾组（p<0.05）。（2）大鼠Morris水迷宫定位航行和空间探查实验结果:90s游泳找到平台总路程比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）,固高组、固中组和固低组高于空白组,低于模型组和左肾组（p<0.05）;平均速度比较,模型组和左肾组比空白组慢（p<0.01）,固高组、固中组、固低组比空白组慢（p<0.05）,固高组比模型组和左肾组快（p<0.05）;第一次抵原平台时间,模型组、左肾组多与空白组（p<0.01）,固高组、固中组、固低组比空白组慢（p<0.05）,比模型组和左肾组快（p<0.05）;穿越平台次数,模型组、左肾组少于空白组（p<0.01）,固高组、固中组、固低组少于空白组（p<0.05）,固高组、固中组多于模型组和左肾组（p<0.05）。3.元气亏虚大鼠炎症因子及氧化应激反应及培元固本健脑法的干预作用:ELISA法检测血清结果:各组血清kl蛋白浓度比较,模型组、左肾组低于空白组（p<0.01）;固高组、固中组、固低组低于空白组,高于模型组和左肾组（p<0.05）。血清TNF-α浓度比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）,固高组、固中组和固低组低于模型组和左肾组（p<0.05）。血清IL-6浓度比较,模型组、左肾组分别高于空白组（p<0.01,0.05）;固高组、固中组、固低组高于空白组和模型组（p<0.05）;固高组低于左肾组（p<0.05）。血清8-OHDG浓度比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）;固高组低于模型组和左肾组、固低组（p<0.05）;固中组、固低组高于空白组、低于模型组和左肾组（p<0.05）。4.元气亏虚大鼠肾脏、海马kl、MAPK1、NF-κB的表达及培元固本健脑法的干预作用Real-time PCR检测肾脏组织结果:（1）kl mRNA比较,模型组、左肾组、固低组低于空白组（p<0.01）,固中组和固高组低于空白组（p<0.05）;固中组和固高组高于模型组和左肾组（p<0.05）。（2）NF-κB mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）,固高组、固中组、固低组高于空白组（p<0.05）,低于模型组和左肾组（p<0.05）。（3）MAPK1 mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）,固高组、固中组、固低组高于空白组（p<0.05）,固中组、固高组低于模型组和左肾组（p<0.05）。Real-time PCR检测海马组织结果:（1）Kl mRNA比较,模型组、左肾组、固低组、固中组低于空白组（p<0.01）,固高组低于空白组（p<0.05）;固低组、固中组和固高组高于模型组（p<0.05）,固中组、固高组高于左肾组（p<0.05）。（2）NF-κB mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）;固高组、固中组、固低组高于空白组,低于左肾组（p<0.05）。（3）MAPK1 mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.05）,固低组、固中组和固高组低于模型组（p<0.05）。western blot检测肾脏组织结果:（1）Kl比较,模型组、左肾组低于空白组（p<0.01）,固低组、固中组和固高组低于空白组（p<0.05）;固中组、固高组高于模型组和左肾组（p<0.05）。（2）NF-κB P65比较,模型组、左肾组高于空白组（p<0.01）,固低组、固中组、固高组高于空白组（p<0.05）,低于模型组和左肾组（p<0.05）。（3）MAPK1比较,模型组、空白组高于空白组（p<0.05）;固低组、固中组和固高组低于模型组、左肾组（p<0.05）。western blot检测海马组织结果:（1）Kl比较,模型组、左肾组低于空白组（p<0.01）、固低组、固中组低于空白组（p<0.05）;固低组、固中组、固高组高于模型组和左肾组（p<0.05）。（2）NF-κB比较,模型组和左肾组高于空白组（p<0.01）,固低组高于空白组（p<0.05）;固低组、固中组、固高组低于模型组和左肾组（p<0.05）。（3）MAPK1比较,模型组、左肾组、固低组、固中组和固高组均高于空白组（p<0.05）。5.元气亏虚大鼠肾和海马病理改变及培元固本健脑法的干预作用光镜下观察肾脏组织:空白组大鼠肾小球形态正常,肾小管形态正常。模型组肾小球增生,系膜基质增生,细胞增生,胞浆可见红染颗粒,近曲小管上皮细胞坏死、肿胀。左肾组肾小球肥大,细胞增多,鲍曼氏腔狭窄,肾小管形态基本正常,刷状缘清晰。固低组肾小球肥大,红细胞增多,毛细血管内内皮细胞增生,毛细血管扩张,肾间质无明显改变。固中组肾小球肥大,系膜基质增生,肾间质无明显改变。固高组肾小球肥大,系膜增生,毛细血管内皮细胞增生明显,肾间质充血。光镜下观察海马组织:空白组锥体细胞层次排列整齐,无明显病理改变;模型组局部可见锥体细胞层次排列欠整齐,可见锥体细胞变性（细胞肿胀,胞浆淡染）,坏死（核固缩）;左肾组锥体细胞排列层次尚可,变性、坏死程度比模型组轻;固低组锥体细胞层次尚可,变性、坏死程度较模型组、左肾组轻;固中组锥体细胞层次尚可,变性、坏死程度较固低组轻;固高组锥体细胞排列层次尚可,变性坏死程度较轻。结论:（1）单侧肾切除大鼠表现出与元气亏虚相似的症状,可以作为元气亏虚动物模型的其中一种。（2）培元固本健脑法可以改善元气亏虚大鼠肾脏、脑的功能,其机制可能与促进kl蛋白表达,从而抑制炎症和氧化应激有关。（3）Kl蛋白或可作为反映元气盛衰的参考指标之一,而炎症和氧化可能是损害元气的主要因素之一。（4）左肾和右肾在肾功能、kl蛋白表达、对学习记忆的影响等方面无明显的差别,因此左肾为肾,右肾为命门的说法仍需要进一步研究来证实。
何益锋[5]（2019）在《兰坪虫草菌粉及其提取物对慢性肾功能衰竭小鼠的改善作用研究》文中提出慢性肾衰竭（Chronic renal failure,CRF）是指各种原发性或继发性慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）导致的进行性肾功能损害。慢性肾功能衰竭终末期在临床上多采用肾脏移植手术和透析治疗,但由于费用昂贵、肾源不足、患者认知和依从性差以及各种严重并发症问题,难以广泛推广,并且此类解决方法不适合早、中期的CRF患者。近年来,中医药广泛应用于慢性肾功能衰竭患者,特别是针对早、中期的CRF,表现出良好的效果。因此,研究和开发中药治疗CRF,具有重要的理论研究价值和实际应用潜力。兰坪虫草（Ophiocordyceps lanpingensis）属于线虫草属真菌,与冬虫夏草（Ophiocordyceps sinensis）亲缘关系较近,是近几年在我国滇西北地区发现的线虫草属新种,其所含活性成分与野生冬虫夏草相似,且易于人工培养。在云南省的兰坪虫草产区,当地少数民族长期使用兰坪虫草治疗呼吸系统、泌尿系统疾病,用法与冬虫夏草相同。兰坪虫草与冬虫夏草相比具有更好的可人工培育特性,容易实现规模化培养。因此,兰坪虫草具有作为冬虫夏草代用品入药的潜力。本研究旨在探讨人工培养的兰坪虫草菌粉及其水提物对慢性肾功能衰竭小鼠的改善作用,为将来人工培养的兰坪虫草作为冬虫夏草代用品入药,提供理论依据和技术参考,同时也为临床上慢性肾衰竭的防治提供思路。本论文的研究内容包括以下两个方面:1.兰坪虫草水提物对小鼠慢性肾功能衰竭的治疗效果准备C57BL/6雄性小鼠70只,分为空白对照组（Normal组）;模型组（腺嘌呤组）;氯沙坦阳性对照组（Losartan组）;兰坪虫草菌粉水取物低、中、高剂量组（OLEL、OLEM、OLEH组）和兰坪虫草菌粉组（OL组）;共7组,每组10只。实验组小鼠灌胃腺嘌呤溶液造模（Adenine）;Normal组小鼠灌胃等体积的蒸馏水。造模30天后,分别给阳性对照组灌服氯沙坦溶液（10 mg/kg/d）;OLEL、OLEM、OLEH组灌服不同剂量的兰坪虫草菌粉水提物（0.5 g/kg/d、1.0 g/kg/d、2.0 g/kg/d）和OL组灌服兰坪虫草菌粉溶液（2.0 g/kg/d）,空白对照组和模型组小鼠分别给予20 mL/kg/d蒸馏水。各组小鼠于造模成功后第7、14和28天称量小鼠体重,在给药后的第30天处死小鼠并摘眼球取血,分离血清,检测血清尿素氮、血肌酐、还原型谷胱甘肽、血磷含量、丙二醛、血浆钙含量和超氧化物歧化酶活力,同时取肾脏组织进行HE染色、Masson染色,观察肾组织病理变化。兰坪虫草菌粉及其水提物可提高小鼠体重、血清中还原型谷胱甘肽含量、SOD活力和血浆钙含量;同时可降低小鼠血清尿素氮、血肌酐、血磷和MDA含量。此外,兰坪虫草菌粉及其水提物可以显着改善慢性肾衰小鼠肾组织损伤及肾间质纤维化。高、中、低剂量的兰坪虫草菌粉水提物对小鼠慢性肾衰竭均有改善作用,其中高剂量组（2.0 g/kg/d）对小鼠慢性肾衰竭的改善作用最好,中剂量组（1.0 g/kg/d）与菌粉组（2.0 g/kg/d）的效果相当,而2.0 g兰坪虫草菌粉约可提取1.0 g兰坪虫草菌粉水提物。以上研究结果表明,兰坪虫草菌粉及其水提物对腺嘌呤诱导的小鼠慢性肾功能衰竭具有较好的改善作用,且兰坪虫草菌粉水提物中可能存在改善慢性肾衰的主要有效药用物质。2.兰坪虫草水提物对慢性肾衰竭小鼠的改善机制研究采用实时荧光定量PCR检测肾组织促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及MCP-1 mRNA的表达水平,以及免疫调节因子IL-10和TGF-β的mRNA表达水平。用蛋白免疫印迹（Western blot）的方法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Active-Caspase 3、Caspase 9蛋白表达量,以及炎症相关蛋白IL-6、P-65、P50的蛋白表达量,明确兰坪虫草菌粉水提物对肾组织相关蛋白表达量的影响。将肾组织制成石蜡切片,用TUNEL荧光染色法观察其细胞凋亡情况,再利用免疫组化法检测组织中巨噬细胞分布情况,观察其数量的变化。结果表明,兰坪虫草菌粉及其水提物可显着降低TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β以及MCP-1 mRNA表达水平,提高了IL-10的mRNA表达水平。同时,兰坪虫草菌粉及其水提物可以降低Bax、Caspase 3、Active-Caspase 3、Caspase 9、P50、IL-6、P-65蛋白表达量,提高Bcl-2蛋白表达量。此外,研究证明兰坪虫草菌粉及其水提物可以缓解肾细胞凋亡,并可一定程度减少肾组织巨噬细胞数量。以上研究说明兰坪虫草菌粉及其水提物改善小鼠慢性肾衰竭的作用机制与炎症和细胞凋亡有关,并可以通过调控巨噬细胞数量,改善小鼠的免疫功能,最终达到改善慢性肾衰的效果。
童潘[6]（2019）在《复肾功方对慢性肾衰竭大鼠p38MAPK信号通路的影响》文中研究表明目的本课题从炎症反应角度研究复肾功方对CRF大鼠p38MAPK信号通路及相关炎症因子表达的影响,结合前期实验成果进一步探究复肾功方治疗慢性肾衰竭可能的作用机制,以期为后续开发一个作用机制明确、安全有效的治疗慢性肾衰竭的中成药提供可靠实验依据。方法将55只SD大鼠随机选取11只作为正常组,余下大鼠用0.5%腺嘌呤饲料制备CRF模型,连续3周后,随机抽取4只造模大鼠和1只正常大鼠,尾部静脉采血检测造模是否成功;造模成功后随机分为复肾功低、中、高剂量组和模型组,每组11只,并改为常规饲养;模型组和正常组给予0.9%NaCL（20ml/kg.d）灌胃,复肾功方各组按照原生药材4、8、16g/kg体重比例灌胃水煎剂,1天1次,连续30d。干预治疗结束后,腹腔麻醉、心脏采血,分离腹腔组织,暴露双侧肾脏,剥离肾脏筋膜,止血钳固定出入肾动静脉及输尿管,分离出肾脏,4%多聚甲醛和液氮速冻保存备用。分别采用HE、Masson染色观察组织形态、胶原蛋白等变化;免疫组化观察MCP-1和巨噬细胞（CD68）表达;Western blot检测p-p38MAPK、p38MAPK、TGF-β1蛋白表达,RT-PCR检测TNF-αmRNA、IL-6 mRNA等的表达。结果与正常组比较,模型组MCP-1和CD68巨噬细胞阳性计数明显增加（p<0.05）,p-p38MAPK、TGF-β1蛋白及TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达明显增高（p<0.05）;与模型组比较,复肾功方各组MCP-1和CD68巨噬细胞阳性计数依次减少（p<0.05）,p-p38MAPK、TGF-β1蛋白及TNF-α、IL-6mRNA表达明显降低（p<0.05）。结论复肾功方能有效改善慢性肾衰竭大鼠肾间质炎性细胞浸润和相关炎症因子的表达,从而减轻肾组织炎症反应,延缓CRF进展,其干预机制可能与抑制p38MAPK信号转导通路的激活、减少下游相关细胞因子MCP-1、TGF-β1等的表达有关。
郝媌[7]（2018）在《基于和络泄浊，培土宁风法探讨和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制》文中指出目的提出慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱“肾络瘀滞,脾虚风动”的中医病机理论假说,探讨以“和络泄浊,培土宁风”法为治则的和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的干预机制及效验机理。方法采用5/6肾切除及高磷饮食制备慢性肾衰钙磷代谢紊乱大鼠模型。65只SPF级雄性Wistar大鼠按抽签法随机分为正常组（n=8只）、假手术组（n=8只）和模型组（n=49只）。将造模4周后存活大鼠60只随机分为如下7组进行药物干预:A.正常组（n=8）;B.假手术组（n=8）;C.模型组（n=10）;D.骨化三醇西药组（n=8）;E.中药低剂量组（n=8）;F.中药中剂量组（n=9）;G.中药高剂量组（n=9）,持续给药8周。动态观察大鼠一般情况,记录精神状态、摄食、活动度、毛色、尿量、粪质与体重的动态变化。HE和PAS染色观察肾组织形态学改变。检测各组血清肌酐（Creatinine,Scr）、尿素氮（Blood urea nitrogen,BUN）、24h尿蛋白定量、血钙(Ca2+)、血磷(P3+)、血清甲状旁腺激素（Parathyroid hormone,PTH）血清碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）等。酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清Ⅰ型前胶原N端前肽（N-terminal propeptide of type 1 precollagen,PINP）水平。取各组大鼠肾组织通过光镜观察其病理组织学变化。免疫组化法分别检测大鼠肾脏Klotho蛋白、骨形态发生蛋白-7（Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7）、Wnt4、β-catenin及骨钙素（Osteocalcin,OC）、PINP蛋白表达水平;实时定量PCR检测大鼠肾脏Klotho、BMP-7、Wnt4、β-catenin基因表达情况;Western blot检测大鼠肾脏Klotho蛋白、BMP-7及骨组织成纤维细胞生长因子23（Fibroblast Growth Factor-23,FGF23）、OC的蛋白表达水平。结果1.模型组大鼠肾小球结构紊乱、系膜细胞增生,基质增多,部分肾小球硬化,肾小管代偿性扩张或灶状萎缩,肾间质内有大量炎性细胞浸润及局灶性纤维组织增生,而和肾络宁风颗粒中药中、高剂量组肾小球增生硬化程度及肾间质内炎性细胞浸润情况较模型组有改善。2.与模型组相比,和肾络宁风颗粒中高剂量组血Scr、BUN等水平明显降低,血Ca2+水平明显上升,体重增加,血PTH、ALP及PINP水平均有下降（P<0.01）;与西药组比较,和肾络宁风颗粒中高剂量组在降低血Scr、BUN和P3+水平有统计学差异（P<0.05）,在提高血Ca2+、降低血PTH、ALP及PINP水平方面二者具有同等疗效（P>0.05）。3.和肾络宁风颗粒中剂量组Wnt、β-catenin蛋白表达明显下降,基因表达下调,较模型组有差异（P<0.01）,与西药组亦有统计学意义（P<0.05）。4.和肾络宁风颗粒中高剂量组Klotho蛋白及BMP-7基因表达上调,蛋白表达增加,FGF23蛋白和OC和PINP蛋白表达均明显降低,与模型组比较有统计意义（P<0.05）;与西药组对比,和肾络宁风颗粒在降低FGF23蛋白表达方面差异显着（P<0.01）,上调BMP-7蛋白与基因表达（P<0.05）,在调控Klotho蛋白及基因表达的上调和对OC、PINP蛋白表达的抑制作用方面两者疗效相当（P>0.05）。结论和肾络宁风颗粒能够减轻慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱大鼠肾小球硬化等病理损害,改善体质状况;能够有效降低血肌酐、尿素氮,提升血钙水平,控制血磷、PTH及ALP,提高肾功能、改善矿物质代谢紊乱,且与中药浓度剂量呈一定正相关性。和肾络宁风颗粒能够抑制FGF23高表达,上调Klotho蛋白及基因表达,以调控Klotho/FGF23轴的动态平衡。并通过降低血P3+、PTH及SHPT水平,及协同促进BMP-7蛋白及基因表达等多种途径影响Wnt/β-catenin信号转导通路的活性,下调β-catenin,有效阻断β-catenin的靶基因转录,影响Wnt/β-catenin信号转导通路的激活。以进一步控制ALP的活性,降低OC、PINP异常表达和血清PINP浓度,从而抑制成骨细胞的异常分化和骨重建,调节骨代谢,发挥生物学效应。和肾络宁风颗粒发挥以调控Klotho/FGF23轴为主的综合作用改善慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱及继发骨性营养不良,在一定程度上延缓病情进展。
赖昱宇[8]（2018）在《桃核承气汤抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用机制的研究》文中研究表明目的:研究桃核承气汤对肾纤维化模型大鼠肾组织功能与形态学的影响,并运用免疫组化的方法探讨肾间质纤维化的致病机制以及桃核承气汤抗肾纤维化的疗效。方法:本研究选用清洁级健康雄性Wistar大鼠共1 50只,将其随机分成两组,即假手术组2 1只和手术造模组1 29只;而造模组大鼠在进行UUO后再随机分为五组,即模型组2 1只,尿毒清组、桃核承气汤低剂量组、桃核承气汤中剂量组和桃核承气汤高剂量组各27只。本实验采集标本品分为第2、3、4周末三个时间点进行,收集大鼠血清、24小时尿液及梗阻侧肾组织。用于血清肌酐、尿素氮等生化指标的测定、24h尿蛋白的测定,肾组织一部分用于肾脏病理切片的观察,另一部分用于免疫组化检测。结果:1.桃核承气汤各剂量药物组大鼠在各个时间点血清肌酐、尿素氮均显着低于模型组大鼠（P<0.01）。2.桃核承气汤各剂量药物组大鼠在各个时间点肾脏组织病理改变均较模型组大鼠轻。3.桃核承气汤各剂量药物组大鼠血清中Ang-Ⅱ的含量均较低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;且中剂量组Ang-Ⅱ的含量最低。4.桃核承气汤各剂量药物组大鼠血清中MCP-1蛋白的含量均较高,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.0 1）;且中剂量组MCP-1蛋白的含量最高。5.桃核承气汤各剂量药物组大鼠FN蛋白的表达均低于模型组,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;且中剂量组肾脏组织中FN蛋白的表达最弱。6.桃核承气汤各剂量药物组大鼠中TNF-α的表达量均较模型组低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;且中剂量组肾组织TNF-α的表达最弱。7.桃核承气汤各剂量药物组大鼠的Col Ⅳ的表达均低于模型组,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;且中剂量组ColⅣV的表达最弱。结论:1.桃核承气汤能够保护单侧输尿管梗阻造成的肾脏损伤,能够降低血肌酐与血尿素氮。2.桃核承气汤能够减轻UUO大鼠的肾脏形态学损害。3.桃核承气汤促进UUO大鼠血清中MCP-1蛋白的表达,抑制了血清中Ang-Ⅱ及肾组织中FN和MMP-9蛋白的表达。4.桃核承气汤通过下调Ang-Ⅱ的表达,上调MCP-1蛋白的表达,从而抑制TNF-α的表达,继而降低FN和Col Ⅳ的含量,从而减少了 ECM的合成和积聚,减缓肾间质纤维化的发展。5.桃核承气汤低、中、高剂量组和尿毒清均能在一定程度上保护肾功能,降低肾小管损害程度和肾间质纤维化程度,桃核承气汤中剂量效果最佳,可为临床治疗慢性肾衰竭提供依据。
林佳如[9]（2017）在《基于中医肾痿理论创建肾痿方及其含药血清对TGF-β1诱导的肾脏细胞损伤的作用机制研究》文中研究表明目的:基于中医古籍理论,建立“肾痿”及肾痿治疗的科学证据。在前期临床和动物实验基础上,研究肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的成纤维细胞及足细胞的作用及机制,进一步证明肾痿方干预肾纤维化的细胞分子作用机制,为开发中药防治慢性肾脏疾病,延缓疾病的进展,减少终末期肾脏疾病发生提供科学依据。方法:1.循证古籍及文献,建立“肾痿”以及肾痿方的理论依据。2.含药血清制备:SD大鼠随机分为空白对照组、肾痿方组、缬沙坦组,肾痿方组大鼠按人体剂量的5、10、20倍剂量给予灌胃;缬沙坦组大鼠按人体剂量的10倍剂量给予灌胃;空白对照组给予同等体积生理盐水灌胃。3.肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞的作用及机制研究:体外培养的NRK-49F细胞,以0100 ng/ml的TGF-β1作用12h、24h、48h、72h,在倒置显微镜下观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞增殖状况,确定TGF-β1刺激的最佳剂量和时间。将体外培养的NRK-49F分为正常对照组（10%胎牛血清）、TGF-β1刺激组（TGF-β1 10ng+10%正常大鼠血清）、肾痿方低剂量组（TGF-β110ng+10%成人剂量5倍灌胃后大鼠含药血清）、肾痿方中剂量组（TGF-β1 10ng+10%成人剂量10倍灌胃后大鼠含药血清）、肾痿方高剂量组（TGF-β1 10ng+10%成人剂量20倍灌胃后大鼠含药血清）、缬沙坦含药血清组（TGF-β1 10ng+10%成人剂量10倍灌胃后大鼠含药血清）。倒置相差显微镜观察细胞生长状态,CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测细胞周期变化;免疫荧光、Real-time PCR、Western Blot检测PCNA的变化;通过免疫荧光、Real-time PCR、Western Blot检测细胞表型（ɑ-SMA）及细胞外基质（Fibronectin、Collagen I）的变化。4.肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的MPC5细胞的保护作用研究:用10ng/ml的TGF-β1以及各浓度的含药血清刺激MPC5细胞24H、48H、72H后CCK-8法检测各组细胞活性选择合适的刺激时间;免疫荧光检测MPC5细胞ɑ-SMA及上皮细胞标志E-cadherin蛋白的表达情况;Western Blot定量检测细胞表型分子NEPH1、P-cadherin以及ɑ-SMA蛋白的含量。结果:1.文献研究发现,“肾痿”可以定义为肾组织枯萎、萎缩或功能上衰退,甚至废弃不用的一个疾病;可用“肾痿”命名CKD,能够中医药角度反映CKD的动态发展过程。根据病因病机为肾络症瘕,建立理法中药治疗原则。2.肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞的作用及机制研究:（1）肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞增殖的作用:倒置相差显微镜下观察,TGF-β1刺激后细胞呈短梭或多角形铺路石样改变,在肾痿方作用后,NRK-49F细胞逐渐变为长梭形;CCK-8细胞活力检测发现,不同浓度肾痿方含药血清及缬沙坦含药血清均能不同程度的降低TGF-β1诱导NRK-49F细胞的增殖,肾痿方含药血清高剂量组具有统计学意义（P?0.05）;流式细胞术细胞周期显示,不同浓度的肾痿复方含药血清以及缬沙坦含药血清能明显增加G0/G1期及G2/M期细胞,并减少TGF-β1刺激引起的增多的S期细胞,具有统计学意义（P?0.05）;（2）肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞表型的作用:TGF-β1刺激后,免疫组化发现α-SMA、Fibronectin、PCNA蛋白的表达明显增加。在不同浓度的肾痿方含药血清及缬沙坦含药血清作用后,抑制α-SMA、Fibronectin、PCNA蛋白表达;Real-time PCR及Western Blot结果显示TGF-β1刺激后α-SMA、Fibronectin、PCNA、Collagen I mRNA及蛋白的表达明显增加,加入不同浓度的肾痿方含药血清及缬沙坦含药血清干预后,呈剂量依赖性地不同程度抑制α-SMA、Fibronectin、PCNA、Collagen I mRNA及蛋白的表达,与TGF-β1比较,具有统计学意义（P<0.05）。（3）肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞表型转化的机制研究:Real time RT-PCR结果显示,TGF-β1刺激后,细胞smad3、MAPK10 mRNA的表达明显增加,在不同浓度的肾痿方含药血清及缬沙坦含药血清干预后,呈剂量依赖性抑制smad3、MAPK10 mRNA的表达,与TGF-β1刺激的细胞比较,有统计学意义（P<0.05）。Western Blot结果显示,TGF-β1刺激的细胞p-smad3、JNK-3蛋白表达明显增高,当加入不同浓度的肾痿方含药血清及缬沙坦含药血清干预后,p-smad3、JNK-3蛋白的表达均有不同程度的降低,同缬沙坦含药血清的表达一致,与TGF-β1刺激组比较,有统计学意义（P<0.05）且呈剂量依赖性的变化。3.肾痿方含药血清对TGF-β1诱导的足细胞损伤的作用:（1）将TGF-β1刺激MPC5细胞24H、48H、72H后,细胞的活力较弱,加入不同浓度的含药血清均增加足细胞活力,且在48H时最为明显（P<0.01）。（2）免疫荧光结果显示,TGF-β1刺激MPC5细胞后ɑ-SMA表达明显增加,E-cadherin表达明显降低,加入不同浓度的肾痿方含药血清干预,与缬沙坦含药血清干预一样,ɑ-SMA的表达逐渐减低,E-cadherin的表达增加,抑制细胞表型转化。（3）Western Blot结果也显示,TGF-β1刺激刺激MPC5细胞后P-cadherin、NEPH1蛋白的表达明显降低;ɑ-SMA蛋白表达明显增高,当加入低、中、高不同浓度的肾痿方含药血清后,与缬沙坦含药血清干预一样,P-cadherin、NEPH1蛋白的表达均不同程度的升高;ɑ-SMA蛋白的表达均有不同程度的降低（P<0.01）,且呈肾痿方含药血清剂量剂量相关性改变。结论:1.“肾痿”可命名慢性肾脏疾病,能够反映出CKD的动态发展的过程,具有中医理论的证据,肾痿方抗肾纤维化具有中医药理法依据。2.肾痿方能抑制TGF-β1诱导的NRK-49F细胞的增殖作用。肾痿复方能抑制TGF-β1诱导的细胞表型变化和细胞外基质分泌。3.肾痿方通过抑制TGF-β/samd信号通路中磷酸化的smad3和MAPK/JNK通路中的JNK-3,抑制肾间质纤维化,延缓肾纤维化的发生。4.肾痿方能保护TGF-β1诱导的MPC5细胞的活力,抑制MPC5细胞表型的改变。
肖幸[10]（2017）在《从CPN1在5/6肾切除大鼠中的表达变化探讨升清降浊胶囊的药物作用机制》文中提出目的:近年来,慢性肾脏疾病（CKD）的发病率呈现出稳步上升之势,CKD因早期临床症状及生化指标改变不明显,患者不重视,待发展到中后期时就诊,延误治疗,增加家庭和社会负担。因此,CKD疾病的早诊断早治疗对于降低其危害性具有极为重要的意义。本课题组前期研究利用蛋白质组学方法对原发病为慢性肾小球肾炎的CKD患者的尿液进行了全面的蛋白质谱分析,观察到随着CKD病情的进展,CPN1蛋白在CKD患者尿液中的水平具有明显的变化趋势。然而,目前还缺乏相关实验研究判断CPN1是否可成为提示CKD疾病发生发展的相关指标。现代医学中的CKD疾病多与中医学中“癃闭”、“关格”、“水肿”等概念相对应。广东省名医洪钦国教授根据中医学对于CKD脾肾亏损,浊毒瘀阻,本虚标实病机的判断,创立了治疗CKD的有效制剂升清降浊胶囊,现已在临床应用30余年。升清降浊胶囊主要药物组成包括黄芪、大黄、丹参、法夏、枳壳、土茯苓等,针对CKD病机攻补兼施,疗效卓着。前期临床研究及动物实验均表明升清降浊胶囊具有保护肾功能、延缓CKD进展的作用,通过对比慢性肾小球肾炎CKD患者在升清降浊胶囊治疗前后的尿液蛋白质谱发现,升清降浊胶囊可以影响CKD患者尿CPN1的水平,但CPN1在升清降浊胶囊延缓CKD进展中的作用还未阐明。故本研究的目的主要包括:（1）通过观察CPN1在5/6肾切除大鼠尿液及肾组织中的表达水平变化,初步探讨其成为CKD诊断生物标志物的可能性以及在CKD发生发展过程中的作用。（2）研究升清降浊胶囊与5/6肾切除大鼠CPN1的关系及作用机制。方法:（1）大鼠模型的建立及实验分组正常对照组:正常饲养的SD大鼠;手术组:采用5/6肾切除法建立CKD大鼠模型;假手术对照组:麻醉、消毒等措施与手术组相同,分离皮下组织及肌肉,剥离肾脏包膜及肾上腺等肾周组织,暴露左肾,不行手术切除,逐层缝合肌层和皮肤,一周后行右肾暴露,方法步骤同上;给药大鼠分组:5/6肾切除大鼠术后随机分为升清降浊胶囊低浓度组、升清降浊胶囊中浓度组和升清降浊胶囊高浓度组;（2）采集实验标本:于术后第1周末、第2周末、第4周末、第8周末采集实验标本,包括大鼠血液、尿液、残肾组织等;（3）实验室检查肾功能采用全自动生化分析仪测定,尿液分析采用尿液分析仪测定;肾脏病理学检查:采用HE染色、Masson染色;肾组织CPN1 mRNA的表达水平:采用RT-PCR法;尿CPN1和肾组织CPN1蛋白的表达水平:采用Mouse CPN1 ELISA试剂盒测定。结果:（1）升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾功能及尿蛋白影响在升清降浊胶囊干预8周后,低浓度给药组（800 mg/kg）、中浓度给药组（1200 mg/kg）浓度组均较手术组显着降低血清肌酐、血清尿素氮和24 h尿蛋白水平,其中中浓度组降低幅度较大。高浓度给药组（1600 mg/kg）显着降低尿素氮水平、但无明显降低血肌酐和24 h尿蛋白的作用。因此,综合血肌酐、尿素氮和24 h尿蛋白三个指标来说,中浓度给药组效果最优,低浓度给药组效果次之,高浓度给药组相对较差。（2）升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾脏病理形态的影响在升清降浊胶囊干预8周后,与手术组大鼠相比,中浓度给药组（1200 mg/kg）肾脏发生的病理改变程度最轻,低浓度给药组（800mg/kg）次之,均可见肾小球基底膜增厚及系膜增生,少数肾小管萎缩、坏死,间质炎症细胞浸润及纤维结缔组织增生。高浓度给药组（1600 mg/kg）肾小球系膜增生、基底膜增厚较为明显,部分肾小管坏死,肾间质可见大量炎症细胞浸润及纤维结缔组织增生,与手术组大鼠肾脏病理改变相似。故在延缓5/6肾切除大鼠肾脏纤维化方面,以升清降浊胶囊中浓度组干预效果最优。（3）升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾组织CPN1表达的影响mRNA水平:在升清降浊胶囊干预8周后,肾组织中CPN1 mRNA表达量较手术组均有上升,上升趋势为:低浓度给药组（800mg/kg）<高浓度给药组（1600mg/kg）<中浓度给药组（1200mg/kg）。因此,从上调大鼠CPN1 mRNA表达量方面来说,中浓度给药组效果最优。蛋白水平:在升清降浊胶囊干预8周后,各给药组尿液及肾组织中CPN1蛋白表达量均较手术组显着上升,且随药物浓度增高而呈现梯次上升趋势,但各给药组组间数据并无统计学差异,因此,从提高CPN1蛋白在尿液及肾组织中的表达量来说,药物浓度越高其效果越好。结论:升清降浊胶囊中浓度给药组（1200mg/kg）干预8周后,能够较好的降低5/6肾切除大鼠血清肌酐、尿素氮及24h尿蛋白水平,在一定程度上恢复大鼠的肾脏功能;减轻5/6肾切除大鼠肾小球和肾小管病理改变,延缓肾脏纤维化进展;同时提高5/6肾切除大鼠CPN1 mRNA和蛋白表达水平,提示升清降浊胶囊通过调节CPN1的表达,从而起到肾脏保护功能。尿液CPN1水平指标基本符合CKD潜在生物标志物选定原则,但其特异性、重复性等方面仍有待进一步探索研究。
二、甜瓜蒂对5/6肾切除大鼠残留肾组织中转化生长因子βmRNA表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、甜瓜蒂对5/6肾切除大鼠残留肾组织中转化生长因子βmRNA表达的影响（论文提纲范文）
（1）糖肾方抗氧化损伤改善肾间质纤维化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 肾间质纤维化与氧化应激 |
| 1 慢性肾脏病、肾间质纤维化与氧化应激之间的关系 |
| 2 活性氧促进肾间质纤维化的作用 |
| 3 NOX家族源性活性氧在肾间质纤维化中的作用 |
| 4 Nrf2/ARE信号通路及其调控的抗氧化蛋白 |
| 5 抗纤维化、抗氧化治疗现状 |
| 6 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药复方抗氧化治疗减轻肾间质纤维化的研究进展 |
| 1 中医对肾间质纤维化的认识 |
| 2 中医对肾间质纤维化的辨证论治 |
| 3 中药复方抗氧化、抗肾间质纤维化治疗的组方规律 |
| 4 中药复方抗氧化、抗肾间质纤维化治疗的机制研究 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖肾方抗氧化应激改善UUO小鼠肾间质纤维化的机制研究 |
| 前言 |
| 一 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 1 各组小鼠一般情况和体重的比较 |
| 2 各组小鼠肾脏外形和梗阻侧肾脏重量的比较 |
| 3 糖肾方对UUO小鼠肾功能的影响 |
| 4 各组小鼠梗阻侧肾脏的病理改变 |
| 5 糖肾方对UUO小鼠肾间质纤维化相关指标的影响 |
| 6 糖肾方对UUO小鼠氧化应激相关指标的影响 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 糖肾方对H_2O_2诱导HK-2细胞氧化损伤模型的干预作用研究 |
| 前言 |
| 一 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 1 不同浓度H_2O_2对HK-2细胞增殖率的影响 |
| 2 不同浓度含药血清对H_2O_2诱导HK-2氧化损伤模型的干预作用 |
| 3 10%含药血清对H_2O_2诱导的HK-2细胞氧化损伤指标的影响 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（2）桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠肾组织中Axin调控机制的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词中英文对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 实验部分 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与造模 |
| 2.2 药物配制与灌胃给药 |
| 2.3 观察内容 |
| 2.4 标本采集 |
| 2.5 检测方法 |
| 2.6 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 一般情况观察 |
| 3.2 肾脏的肉眼观察 |
| 3.3 实验室检测指标 |
| 3.4 Western blot检测结果 |
| 3.5 实时荧光定量PCR结果 |
| 3.6 左肾组织HE染色观察结果 |
| 第二部分 理论部分 |
| 1 现代医学对CRF的认识 |
| 1.1 CRF发生的病理机制 |
| 1.2 CRF与肾纤维化 |
| 1.3 Wnt/β-catenin信号通路与肾纤维化关系 |
| 1.4 慢性肾衰竭分期 |
| 1.5 慢性肾衰竭西医治疗措施 |
| 2 从中医角度探讨慢性肾衰竭 |
| 2.1 CRF的中医病名 |
| 2.2 CRF的基本病因 |
| 2.3 CRF的基本病机 |
| 2.4 桃核承气汤方药分析 |
| 2.5 临证加减 |
| 2.6 桃核承气汤治疗慢性肾衰竭机理 |
| 第三部分 分析与讨论 |
| 1 桃核承气汤治疗CRF的立法依据 |
| 2 CRF大鼠常见造模方法的优缺点比较 |
| 3 实验对照组的选择 |
| 4 实验结果分析及意义 |
| 5 实验的不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）大黄不同炮制品抗肾脏纤维化疗效的比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照及缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 体外实验 |
| 引言 |
| 实验一 ：大黄不同炮制品及不同煎煮时间对经TGF-β1诱导的HRMC增殖的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验二 ：大黄不同炮制品及不同煎煮时间对经TGF-β1诱导的HK-2 EMT的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 体内实验：大黄不同炮制品抗肾脏纤维化疗效的比较研究 |
| 实验一 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠肾功能的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验二 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠氧化应激的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验三 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验四 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠炎症反应的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验五 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠肾小管EMT的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验六 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠α-SMA、FN表达的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验七 ：大黄不同炮制品对肾脏纤维化大鼠肾脏病理的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录一 图 |
| 附录二 文献综述 |
| 综述1：大黄及其炮制品治疗慢性肾衰竭的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述2：肾脏纤维化机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录三 攻读博士学位期间参编论着、发表论文及课题参与情况 |
| 致谢 |
（4）培元固本健脑法对元气亏虚大鼠肾、脑的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 中医学对元气的认识 |
| 1.1 古代先贤对元气的认识 |
| 1.2 肾、肾精、肾气、元气之间的关系 |
| 1.3 元气的功能 |
| 1.4 元气与脏腑的关系 |
| 1.5 元气的损伤因素 |
| 1.6 保养元气的方法 |
| 1.7 命门的研究 |
| 1.7.1 命门的位置 |
| 1.7.2 命门的作用 |
| 2 现代疾病与元气的关系 |
| 2.1 元气亏虚可见于脑病 |
| 2.2 元气亏虚可见于慢性肾脏病 |
| 2.3 手术可以造成元气亏虚 |
| 2.4 元气亏虚可见于其他多种疾病 |
| 3 元气亏虚动物模型的现状 |
| 3.1 元气亏虚动物模型的意义 |
| 3.2 其他动物模型对元气亏虚模型的借鉴 |
| 4 培元固本健脑法的含义及方药配伍意义 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 元气亏虚大鼠的一般状况、肾功能和血常规及培元固本健脑法的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学处理 |
| 4 结果 |
| 实验二 元气亏虚大鼠行为学研究及培元固本健脑法的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学处理 |
| 4 结果 |
| 实验三 元气亏虚大鼠炎症、氧化指标的变化培元固本健脑法的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学处理 |
| 4 结果 |
| 实验四 元气亏虚大鼠肾脏、海马kl、MAPK1、NF-κB mRNA及蛋白表达和培元固本健脑法的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计学处理 |
| 4 结果 |
| 实验五 元气亏虚大鼠肾脏、海马病理改变及培元固本健脑法的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 单侧肾切除与元气亏虚的关系 |
| 2 固本健脑方复方和单味药在脑和肾的研究进展 |
| 3 培元固本健脑法对元气亏虚大鼠体重、血常规、肾功能的影响. |
| 4 培元固本健脑法对元气亏虚大鼠行为学的作用 |
| 5 培元固本健脑法对元气亏虚大鼠抗炎、抗氧化的作用 |
| 6 培元固本健脑法对元气亏虚大鼠留存肾、海马kl、MAPK、NF-κB的作用 |
| 7 培元固本健脑法对元气亏虚大鼠留存肾、海马病理的作用 |
| 8 kl蛋白或可作为衡量元气盛衰的参考指标之一 |
| 第四部分 结语 |
| 1 结论 |
| 2 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 Klotho基因及相关信号通路在肾脏病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在校期间公开发表的学术论文及获奖 |
| 致谢 |
（5）兰坪虫草菌粉及其提取物对慢性肾功能衰竭小鼠的改善作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 慢性肾衰竭的研究概况 |
| 1.1.1 慢性肾功能衰竭的发病机制 |
| 1.1.2 慢性肾功能衰竭的治疗现状 |
| 1.2 虫草的药用研究 |
| 1.3 本课题研究的目的和意义 |
| 1.4 技术路线 |
| 第2章 兰坪虫草菌粉及其水提物对慢性肾衰竭小鼠的改善作用 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 动物材料 |
| 2.2.2 实验药物 |
| 2.2.3 试剂 |
| 2.2.4 实验样本制备 |
| 2.2.5 实验主要试剂的配制 |
| 2.2.6 小鼠慢性肾衰竭模型制备方法 |
| 2.2.7 实验动物的分组和给药方法 |
| 2.2.8 实验动物的处理和标本的收集 |
| 2.3 检测指标 |
| 2.3.1 小鼠生活状况 |
| 2.3.2 肾脏组织病理学检查 |
| 2.3.3 小鼠血清尿素氮含量测定(脲酶法) |
| 2.3.4 小鼠血肌酐的含量测定(苦味酸比色法) |
| 2.3.5 小鼠血磷的含量测定 |
| 2.3.6 小鼠血钙的含量测定 |
| 2.3.7 小鼠血清超氧化物歧化酶活力测定 |
| 2.3.8 小鼠血清丙二醛含量测定(TBA法) |
| 2.3.9 小鼠血清谷胱甘肽的含量测定 |
| 2.4 统计分析 |
| 2.5 结果与分析 |
| 2.5.1 兰坪虫草影响小鼠的生活状态 |
| 2.5.2 兰坪虫草对小鼠肾脏组织病理学变化的影响 |
| 2.5.3 兰坪虫草影响小鼠血清尿素氮的含量 |
| 2.5.4 兰坪虫草影响小鼠血肌酐的含量 |
| 2.5.5 兰坪虫草影响小鼠血磷的含量 |
| 2.5.6 兰坪虫草影响小鼠血钙的含量 |
| 2.5.7 兰坪虫草影响小鼠血清超氧化物歧化酶活力 |
| 2.5.8 兰坪虫草影响小鼠血清丙二醛的含量 |
| 2.5.9 兰坪虫草影响小鼠血清谷胱甘肽的含量 |
| 2.6 小节 |
| 2.7 讨论 |
| 第3章 兰坪虫草菌粉及其水提物对慢性肾衰竭小鼠的改善作用机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 动物材料 |
| 3.2.2 实验药物 |
| 3.2.3 试剂 |
| 3.2.4 实验主要试剂的配制 |
| 3.2.5 实验动物组织的的收集和处理 |
| 3.2.6 制备肾小管上皮细胞悬液 |
| 3.2.7 炎症相关细胞因子qRT-PCR引物的设计 |
| 3.2.8 小鼠肾脏蛋白的提取及浓度检测(BCA法) |
| 3.3 检测指标 |
| 3.3.1 ROS(活性氧)含量检测 |
| 3.3.2 炎症相关细胞因子的基因相对表达水平检测 |
| 3.3.3 炎症相关细胞因子蛋白表达量检测 |
| 3.3.4 凋亡相关细胞因子蛋白表达量检测 |
| 3.3.5 肾脏组织细胞凋亡检测 |
| 3.3.6 肾脏组织巨噬细胞数量检测 |
| 3.4 统计分析 |
| 3.5 结果与分析 |
| 3.5.1 兰坪虫草影响肾脏组织中ROS(活性氧)含量 |
| 3.5.2 兰坪虫草影响炎症相关细胞因子的基因相对表达水平 |
| 3.5.3 兰坪虫草影响炎症相关细胞因子的蛋白表达量 |
| 3.5.4 兰坪虫草对小鼠肾脏组织细胞凋亡的影响 |
| 3.5.5 兰坪虫草影响小鼠肾脏组织中巨噬细胞的数量 |
| 3.6 小节 |
| 3.7 讨论 |
| 第4章 结论及展望 |
| 4.1 研究结论 |
| 4.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 |
（6）复肾功方对慢性肾衰竭大鼠p38MAPK信号通路的影响（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 复肾功方对慢性肾衰竭大鼠肾脏相关炎症因子表达的影响 |
| 1 材料与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 复肾功方对慢性肾衰竭大鼠肾脏p38MAPK信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
| 攻读硕士学位期间参与的课题 |
（7）基于和络泄浊，培土宁风法探讨和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱“肾络瘀滞，脾虚风动” 病机假说的构建与论治 |
| 1.慢性肾衰钙磷代谢紊乱以“肾络瘀滞,脾虚风动”为主要病机 |
| 1.1 肾络瘀滞是致病的内在因素 |
| 1.2 脾虚风动为发病的重要条件 |
| 2.慢性肾衰钙磷代谢紊乱从“和络泄浊,培土宁风”法论治 |
| 2.1 “培土宁风”法内涵发微 |
| 2.2 脾气亏虚与风邪辨治关系的文献梳理 |
| 2.3 对“和络泄浊,培土宁风”法治则探讨 |
| 2.4 和肾络宁风颗粒组方依据及药物组成分析 |
| 和肾络宁风颗粒对 CRF 钙磷代谢紊乱干预机制的实验研究 |
| 实验一 和肾络宁风颗粒对CRF钙磷代谢紊乱大鼠肾功能、矿骨代谢血清学指标及形态结构的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.观察指标 |
| 4.统计学处理 |
| 5.结果 |
| 实验二 和肾络宁风颗粒对CRF钙磷代谢紊乱大鼠Wnt/β-catenin信号转导通路的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.检测指标 |
| 4.统计学处理 |
| 5.结果 |
| 实验三 和肾络宁风颗粒对CRF钙磷代谢紊乱大鼠Klotho、BMP-7、FGF23、OC、PINP蛋白表达的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.检测指标 |
| 4.统计学处理 |
| 5.结果 |
| 讨论 |
| 1.慢性肾衰钙磷代谢紊乱大鼠造模方法的选择及评价 |
| 1.1 慢性肾衰动物模型方法学研究及比较 |
| 1.2 高磷饮食对慢性肾衰动物大鼠肾性骨病模型影响的研究 |
| 2.现代医学对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的认识及探讨 |
| 2.1 对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的基本认识 |
| 2.2 参与诱导慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱相关标志蛋白的研究与探讨 |
| 2.3 参与介导慢性肾衰钙磷代谢紊乱的Wnt/β-catenin信号转导通路研究 |
| 3.和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预作用探讨 |
| 3.1 和肾络宁风颗粒的辨治特色及现代药理学分析 |
| 3.2 和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制探讨 |
| 3.3 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱西医治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱中医药治疗研究现状 |
| 参考文献 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
| 科研课题 |
（8）桃核承气汤抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用机制的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1、中医学对肾纤维化的研究进展 |
| 1.1 病名 |
| 1.2 中医学对肾纤维化病因病机的认识 |
| 1.3 辨证论治 |
| 1.4 治疗 |
| 2、现代医学对肾纤维化的研究进展 |
| 2.1 肾间质纤维化的发病机制 |
| 2.2 肾间质纤维化治疗进展 |
| 2.3 抑制ECM合成 |
| 2.4 刺激ECM降解 |
| 2.5 抗凋亡药物 |
| 2.6 抗EMT药物 |
| 2.7 抗氧化应激在肾纤维化治疗中的作用 |
| 实验部分 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物和试剂 |
| 1.3 主要设备仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 单侧输尿管梗阻大鼠模型的制备 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 桃核承气汤水煎液及尿毒清颗粒水溶剂的制备 |
| 2.4 给药方法 |
| 2.5 标本收集方法 |
| 2.6 桃核承气汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾功能保护作用的实验研究 |
| 2.7 桃核承气汤对UUO大鼠血清MCP-1和Ang-Ⅱ表达的实验研究 |
| 2.8 桃核承气汤对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织形态及肾组织中FN/ColⅣ/TNF-α表达的实验研究 |
| 3 统计学处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 桃核承气汤对各组大鼠24h尿蛋白含量的影响 |
| 4.2 桃核承气汤对各组大鼠肾功能的保护作用 |
| 4.3 桃核承气汤对大鼠血清中Ang- Ⅱ表达的影响 |
| 4.4 桃核承气汤对大鼠血清中MCP-1蛋白表达的影响 |
| 4.5 肾脏组织病理改变 |
| 4.6 桃核承气汤对肾脏组织FN蛋白表达的影响 |
| 4.7 桃核承气汤对肾脏组织TNF-α表达的影响 |
| 4.8 桃核承气汤对肾脏组织ColⅣ表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 肾纤维化动物模型的选择 |
| 1.1 常用的慢性肾衰实验动物模型 |
| 1.2 单侧输尿管梗大鼠动物模型的选择 |
| 2 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾脏的保护作用 |
| 2.1 桃核承气汤对UUO模型大鼠24h尿蛋白定量的影响 |
| 2.2 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾功能的影响 |
| 3 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾脏形态的影响 |
| 4 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾组织细胞外基质表达影响 |
| 4.1 桃核承气汤对UUO模型大鼠血清中Ang-Ⅱ表达的影响 |
| 4.2 桃核承气汤对UUO模型大鼠血清中MCP-1蛋白表达的影响 |
| 4.3 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾组织FN蛋白表达的影响 |
| 4.4 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾组织Col-Ⅳ蛋白表达的影响 |
| 4.5 桃核承气汤对UUO模型大鼠肾组织中TNF-α表达的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附图 |
| 个人简历 |
（9）基于中医肾痿理论创建肾痿方及其含药血清对TGF-β1诱导的肾脏细胞损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第三部分 问题与展望 |
| 第四部分 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果（示例） |
（10）从CPN1在5/6肾切除大鼠中的表达变化探讨升清降浊胶囊的药物作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 CKD的现代医学研究进展 |
| 一、CKD的流行病学研究 |
| 二、CKD的定义与分期 |
| 三、CKD的发病机制 |
| 四、CKD的防治 |
| 第二节 CKD的中医研究进展 |
| 一、古代医家对CKD病因病机的认识 |
| 二、近现代医家对CKD病因病机的认识 |
| 三、近现代中医对CKD辨治方药的认识 |
| 第三节 升清降浊胶囊治疗CKD的研究进展 |
| 一、升清降浊胶囊药物组成分析 |
| 二、升清降浊胶囊治疗CKD的研究 |
| 第四节 CPN1相关研究进展 |
| 一、羧肽酶N (Carboxypeptidase N,CPN)的发现 |
| 二、CPN1相关生理功能的研究 |
| 三、CPN1与CKD的研究 |
| 第五节 CKD动物模型构建的研究进展 |
| 一、5/6肾切除肾病动物模型 |
| 二、腺嘌呤肾病动物模型 |
| 三、阿霉素肾病动物模型 |
| 第二章 动物实验部分 |
| 实验一 升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾功能及尿蛋白影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计分析 |
| 四、实验结果 |
| 实验二 升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾脏病理形态的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、切片观察 |
| 实验三 升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾组织CPN1 mRNA表达的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 实验四 升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠尿液、肾组织CPN1蛋白表达的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 第三章 讨论部分 |
| 第一节 5/6肾切除动物肾病模型的探讨 |
| 第二节 升清降浊胶囊药物作用机制的探讨 |
| 一、升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾功能及尿蛋白影响 |
| 二、升清降浊胶囊对5/6肾切除大鼠肾脏病理形态的影响 |
| 三、对CPN1在5/6肾切除大鼠中表达量改变情况的分析 |
| 四、升清降浊胶囊上调CPN1水平在CKD进展中的作用机制探讨 |
| 五、对实验结果中出现问题的分析 |
| 结语 |
| 一、全文小结 |
| 二、创新点 |
| 三、不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 研究生在学期间发表论文情况 |
| 致谢 |
四、甜瓜蒂对5/6肾切除大鼠残留肾组织中转化生长因子βmRNA表达的影响（论文参考文献）
- [1]糖肾方抗氧化损伤改善肾间质纤维化的机制研究[D]. 丁昕宇. 北京中医药大学, 2020(04)
- [2]桃核承气汤对慢性肾衰竭大鼠肾组织中Axin调控机制的研究[D]. 林祥发. 福建中医药大学, 2019(08)
- [3]大黄不同炮制品抗肾脏纤维化疗效的比较研究[D]. 李玉婷. 湖北中医药大学, 2019(08)
- [4]培元固本健脑法对元气亏虚大鼠肾、脑的影响及机制研究[D]. 王长江. 湖北中医药大学, 2019(08)
- [5]兰坪虫草菌粉及其提取物对慢性肾功能衰竭小鼠的改善作用研究[D]. 何益锋. 昆明理工大学, 2019(04)
- [6]复肾功方对慢性肾衰竭大鼠p38MAPK信号通路的影响[D]. 童潘. 重庆医科大学, 2019(12)
- [7]基于和络泄浊，培土宁风法探讨和肾络宁风颗粒对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱的干预机制[D]. 郝媌. 山东中医药大学, 2018(01)
- [8]桃核承气汤抗单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化作用机制的研究[D]. 赖昱宇. 黑龙江中医药大学, 2018(12)
- [9]基于中医肾痿理论创建肾痿方及其含药血清对TGF-β1诱导的肾脏细胞损伤的作用机制研究[D]. 林佳如. 成都中医药大学, 2017(12)
- [10]从CPN1在5/6肾切除大鼠中的表达变化探讨升清降浊胶囊的药物作用机制[D]. 肖幸. 广州中医药大学, 2017(05)